JPH03181420A

JPH03181420A - 坑ウイルス剤

Info

Publication number: JPH03181420A
Application number: JP32034089A
Authority: JP
Inventors: Hideki Yamamoto; 英樹山元; Munehiko Donpou; 宗彦鈍宝; Hiroshi Nakajima; 宏中島
Original assignee: Unitika Ltd
Current assignee: Unitika Ltd
Priority date: 1989-12-08
Filing date: 1989-12-08
Publication date: 1991-08-07

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、特定のオリゴ糖誘導体及びその塩を有効成分
として含有する抗ウィルス剤に関するものであり、これ
は、ウィルス性疾患の治療や予防等に好適に使用できる
。

（従来の技術）これまで、抗ウイルス効果をもつ化合物が多数報告され
ており、また近年、特に世界的な広がりを見せ始めた後
天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の病原ウィルス（ｌｌ
ｕｍａｎ　Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｖｉｒ
ｕｓ。

ＨＩＶ）に対して抗ウイルス効果を示す化合物の探索が
活発に行われている。それらの例として。

ポリアクリル酸及びデキストランサルフェート等［Ｄｅ
　ＳｏｍｅｒＰ、ら；ジャーナル・オブ・ピロロジー（
Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、）　１９６８．　２．　８７８．同
誌１９６８．　２゜８８６：］、スラミン（Ｄｅ　Ｃ１
ａｒｃｑ　Ｂ、　：カンサー・レター（Ｃａｎｃｅｒ　
Ｌｅｔｔｅｒ）　１９７９．　８．　９　：　Ｍｉｔｓ
ｕｙａＨ，う；サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　（ワシ
ントン・デイ−・シー）１９Ｂ４，２２６．１？２１．
　　エバンス・ブルー（：Ｒａ１ｚａｒｉｎｉ　Ｊ、ら
；インターナショナル−ジャーナル・オブ・カンサー（
Ｉｎｔ、Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ）１９８６．３？、４５１
Ｌ　　アラリンカルボン酸〔Ｂａ１ｚａｒｉｎｉ　Ｊ、
ら；バイオケミカル・アンド・バイオフイジイカル・リ
サーチ・コミュニケーション（Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ、　　Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍｕｎ、）１９８６　、
　１３６゜６４，１．３°−アジド−２′、３”−ジデ
オキシチミジン（ＡＺＴ）　［Ｍｉｔｓｕｙａ　Ｈ，ら
；プロシーディング・ナショナル・アカデミ−・オブ・
サイエンス（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｉ、　Ａｃａｄ、　Ｓ
ｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、）　１９８６．　８３．　１９１１
〕、グリチルリチン（伊藤正彦ら；第３４回日本ライス
ル学会総会講演要旨集１９８６．　Ｐ　７０）。

グルチルリチン硫酸塩（特開昭６３−２４３０９３号公
報）、デキストラン、キシロフラナン及びリボフラナン
の硫酸エステル〔Ｎａｋａｓｈｉｍａ　Ｈ，ら；日本ジ
ャーナル・カンサー・リサーチ（Ｊａｐａｎ　Ｊ。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、）　１９８７．７８．　１１６
４：ｌ　、マンナン硫酸エステル（特開昭６４−５２７
２３号公報）。

単糖及び三糖誘導体（特開平１−１４９７３０号公報）
、天然ムコ多糖類の硫酸エステル（特開昭６３−４５２
２３号公報）等が報告されている。

（発明が解決しようとする課題）しかしながら、これらの抗ウィルス剤は、その抗ウイル
ス効果が十分なものでないという問題があった。

本発明は、上記のような従来技術の問題を克服するもの
で、実用上優れた抗ウィルス剤を提供することを目的と
するものである。

（課題を解決するための手段）本発明者らは、このような課題を解決するために鋭意検
討した結果、特定のオリゴ糖誘導体が従来の抗ウィルス
剤に比べ有効性にすぐれていることを見出し、この知見
に基づいて本発明をなすに至った。

すなわち２本発明は、一般式Ｇａｐ−（Ｇａｌｎ−Ｇｌ
ｃＣただし９式中Ｇａｊ？はガラクトース残基、Ｇｊ２
ｃはグルコース残基、ｎは１〜４の整数をそれぞれ表す
。）で示されるオリゴ糖に、少なくとも１個のスルホ基
（−３○３Ｈ）が、ガラクトース残基あるいはグルコー
ス残基のオキソ基（−〇−）を介して結合されているオ
リゴ糖誘導体又はその塩を有効成分とする抗ウィルス剤
を要旨とするものである。

以下１本発明の詳細な説明する。

本発明で用いられるオリゴ糖としては、上記の一般式中
、ｎが１〜４．すなわち、３〜６糖類であれば、特に限
定されるものでなく、又これらのオリゴ糖のうちどれか
１種類が単独でもあってもあるいは任意の二種以上の組
合せからなるオリゴ糖の混合物であってもよい。

また１本発明で用いられるオリゴ糖における糖残基間の
結合様式としては、特に限定されるものではなく、β−
１，３結合、β−１．４結合、β−■。

６結合等どのようなものでもよい。

本発明の抗ウィルス剤の有効成分であるオリコ糖誘導体
としては、上記したオリゴ糖に、少なくとも■個のスル
ホ基（−３○３Ｈ）が、ガラクトース残基あるいはグル
コース残基のオキソ基（−〇−）を介して結合されてい
ればよく、結合されるスルホ基の個数あるいは結合位置
には特に限定されるものではない。

上記したオリゴ糖誘導体は、必要に応じて薬理的に許容
し得る塩であってもよく１例えばスルホ基がカリウム、
ナトリウム等のアルカリ金属塩あるいはアンモニウム塩
になっていてもよい。これらの塩は常法によって容易に
製造することができる。

本発明の抗ウィルス剤の有効成分であるオリコ糖誘導体
又はその塩を製造するには、まず、上記したようなオリ
ゴ糖を製造し９次いで得られたオリゴ糖をサルフェート
化するという方法が採用できる。

上記したようなオリゴ糖を製造するには、ラクトースに
β−ガラクトシダーゼあるいは乳糖資化能を有する酵母
菌体を作用させるという公知の方法が採用できる。これ
らの方法は、特公昭５８２０２６６号公報、特開昭６３
−１８５３７３号公報及び中村ら；生物化学実験法１９
．澱粉・関連糖質実験法（学会出版センター）Ｐ２Ｓ５
等に記載されている方法に従えばよい。その−例として
は、以下のようにすることができる。

乳糖４０重量％水溶液に、市販酵素β−ガラクトシダー
ゼ（例えば、新日本化学社製Ｓｕｍｙｌａｃｔ■）を３
．３ｍｇ％になるように添加し、ｐＨを約５に調整後、
約４０℃で４時間反応させることにより。

ガラクトシル基の転移生成物であるオリゴ糖を製造する
ことができる。

このようにして得られたオリゴ糖の３〜６糖類の構成比
及び結合様式の構成比は、ラクトース濃度、酵素量１反
応時間９反応温度等の反応条件によって変化し、これら
の反応条件を適当な条件に設定することにより、任意の
種類及び結合様式のオリゴ糖を得ることができる。

例えば、酵素量を増やし反応時間を長くすると。

５及び６糖類の構成比を高くさせるとともに、β−１，
３結合、β−１，６結合の結合様式の割合を木きくさせ
ることができる。

このようにして得られたオリゴ糖を反応液から分離する
には１周知の方法が採用でき２例えば。

活性炭カラムクロマトグラフィーを用いることができる
。

以上のようにして得られたオリゴ糖は、各種類のオリゴ
糖に単離された後、あるいは二種以上混合されたそのま
まで次のサルフェート化反応に用いることができる。

サルフェート化反応としては２周知の方法が採用でき１
例えば、ピリジン中でオリゴ糖に過剰量のクロル硫酸を
加えればよい。また、この条件で反応が激しい場合には
、クロル硫酸を１．２−ジクロロエタンやクロロホルム
といった溶媒に混ぜ。

これに、オリゴ糖と塩基としてのピリジン等が加えられ
ているジメチルスルホキシド（ＤＭＳ○）又は、ジメチ
ルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を滴下するという混合溶
媒系で反応を行うこともできる。ここで用いられる２種
類の溶媒は、１つはその溶媒中でクロル硫酸が安定であ
ればよく、もう１つは、オリゴ糖が溶ける極性溶媒であ
ればよい。

そして、さらにこれら２種類の溶媒は、互いに混ざり合
うものであればよい。また９反応温度としては、室温で
も水浴中での冷却下でもよく、用いる溶媒の沸点と融点
の間であればよい。反応時間としては９反応温度が低く
、温和な条件では長くなるが２通常２時間で十分に反応
は終了する。

上記したクロル硫酸以外のサルフェート化剤としては、
ピペリジン−Ｎ−硫酸〔特開昭６１−１３０３０１号公
報、特開昭６１−１３０３０２号公報及びに、　ｔｌａ
ｔａｎａｋａら；ジャーナル・メディカル・ケミストリ
ー（Ｊ、　Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ）　１９８７．　３０．　
８１０〕あるいはサルファトリオキサイド−ピリジン（
３０３・ＣｓＨｓＮ）　［：ＢａｕｍｇａｌｔｅｎＰ、
　；ベリッヒテ（Ｂｅｒ、）　１９２６．　５９．　１
１６０〕等が挙げられる。

このようにして得られた反応液からオリゴ糖誘導体を単
離するには１通常使用される手段、・例えば、抽出、イ
オン交換クロマトグラフィー、再結晶、薄層クロマトグ
ラフィー等の方法を、単独または組合せて採用すればよ
い。

本発明の抗ウィルス剤の有効成分であるオリゴ糖誘導体
又はその塩は、エイズの原因ウィルスであるＨＩＶを感
染させたＭＴ−４細胞（成人Ｔ細胞白血病の原因ウィル
スであるＨＴＬＶ−１陽性細胞株）の細胞障害に対して
、すぐれた抑制効果を示す。

本発明の抗ウィルス剤は、その使用目的に応じて種々の
投与形態９例えば錠剤、乳剤、カプセル剤、頚粒剤、液
剤、注射剤、シロップ剤、軟膏剤等に製剤化することが
できる。これらの製剤化方法としては９周知の方法が採
用でき１例えば、経口用固形製剤を調製するには、有効
成分に賦形剤及び必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤
２Ｍ色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法により錠
剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤などに作成することがで
きる。また、液状製剤を調製するには、有効成分に矯味
剤、安定化剤等を加えたのち、常法により液剤、注射剤
などに作成することができる。

本発明の抗ウィルス剤の投与形態中に配合される有効成
分の含有量としては、使用目的、症状あるいは剤形等に
より一定ではないが、一般には。

１〜８５（ｌｖ／Ｗ）％カ望マシイ。

本発明の抗ウィルス剤の一日当たりの投与量は使用目的
、症状、病状、投与回数１年齢１体重あるいは剤形等に
より一定ではないが１通常、有効成分が体重ＩＫｇ当た
り０．１〜１０００ｍｇとなるようにするのが望ましい
。

（実施例）以下１本発明を実施例により具体的に説明する。

参考例１下記組成の培地を３０Ａ容ジャーファーメンタ−に入れ
殺菌した。

乳糖　　　　　　　　　　４０００ｇ酵母エキス　　　　　　　　　６０ｇＫＨ２Ｐ０．　　　　　　　　２０　ｇＭ、ＳＯ，・７
Ｈ２０１０ｇビタミンＢ＋　　　　　　　　　　　６０ｍｇビタミン
Ｂｓ　　　　　　　　　　６０ｍｇ水　　　　　　　　
　　　　　　　　　　２ＯＡ次に、同組成の培地で２８
℃で９６時間前培養したスポロボロミセス・シンギュラ
ス（３ｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ　ｓｉｎｇｕｌａｒ
ｉｓ）ＡＴＣＣ２４１９３菌株１１を接種して、ｐＨ３
，５７，温度２８℃１通気量２Ｑ　ｊｉ！　／ｍｉｎ、
　インペラー回転数４０　Ｏｒ、ｐｏｍ、で９６時間培
養を行った。

培養終了後α−ラバル社製遠心機ＬＡＰＸ　２０２型で
遠心分離を行って湿菌体２．３ｋｇを得た。

実施例１（ａ）　　オリゴ糖の製造４００ｇの乳糖に、参考例１で得たスポロボロミセス・
シンギュラスＡＴＣＣ２４１９３菌株の湿菌体３０ｇを
加え、更に水道水を加え１１とした。この液を５５℃に
保温し、ｐＨ４，５で２日間反応を行った。反応終了後
の液の遠心上澄液５０−を１０１容活性炭カラムにかけ
、エタノールを溶出溶媒としてガラクトオリゴ糖３．８
ｇを単離した。このガラクトオリゴ糖を１３Ｃ−ＮＭＲ
により分析したところ、○−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ルー（１→４）−〇−β−Ｄ−ガラクトピラノシルー（
１→４）−Ｄ−グルコースであった。

ら）オリゴ糖誘導体の製造（ａ）で得られたオリゴ糖粉末１．３ｇをジメチルスル
ホキシド（ＤＭＳ○）５０ｍｆに溶解し、さらにピリジ
ンｌｒｄを加えた。このＤＭＳ○溶液を、クロル硫酸５
−を加えた１、２−ジクロロエタン５〇−中に攪拌下、
冷却しながら徐々に滴下した。室温にて一晩攪拌した後
、溶媒を留去し、油状の残留物をシリカゲル・クロマト
　（クロロホルム／メタノール＝５／１）にて精製し、
オリゴ糖誘導体を含む両分にアンモニア水を加えてｐＨ
を８とし。

析出した結晶を凝集後、酢酸エチルで洗浄し、結晶０．
８ｇを得た。

ここで得られたオリゴ糖誘導体を元素分析及び３Ｃ−Ｎ
ＭＲで分析したところ、３糖のオリゴ糖に１１個のスル
ホ基の結合した下記のような構造のものが主成分であっ
た。

〔Ｒはスルホ基（−３○３Ｈ）のアンモニウム塩である
。〕（Ｃ）　　オリゴ糖誘導体の薬理効果試験成人Ｔ細胞白
血病の原因ウィルスの陽性細胞株であるＭＴ−４細胞に
、エイズの原因ウィルスであるＨＩＶを感染させると、
細胞質内にＨＩＶの抗原タンパク質が出現し、細胞のＤ
ＮＡ合或が抑制され、細胞変性効果（ＣＰＥ）により、
感染細胞が死滅していく現象を利用して、抗ＨＩＶ効果
を判定する方法により試験した。

つまり、ＭＴ−４細胞にＨＩＶを感染させた後。

所定の濃度になるようにら）で得られたオリゴ糖誘導体
を添加し、６日間培養した。６日後に生存細胞数を観察
することにより、ＨＩＶ感染による細胞障害がどの程度
抑制されるかを測定した。

この実験は、　Ｈａｒａｄａ　Ｓ、ら；サイエンス（３
ｃｉｅｎｃｅＨ９８５，２２９，５６３〜５６６に記載
された方法に従って行った。

対照薬としては、単糖の硫酸化物であるイノシトール６
硫酸６カリウム塩（米国シグマ社製）を用いた。

得られた結果を第１図に示した。第１図中の■はＨＩＶ
感染のＭＴ−４細胞に対する効果を示し。

また７口はＨＩＶ非感染のＭＴ−４細胞に対する効果を
示す。

第１図より、対照のイノシトール６硫酸塩が２゜５　ｍ
ｇ　／　ｍ１以上でＨＴＶ障害抑制効果が認められたの
に対し、オリゴ糖誘導体では０．５ｍｇ／−以上の濃度
と、イノシトール６硫酸塩の１１５の低濃度でも抑制効
果をもつことがわかる。また、１０ｍｇ／ｍＩ！の濃度
でも細胞毒性を示さず、有効濃度幅が広い。

（ｄ）　　急性毒性試験結果上記オリゴ糖誘導体をマウスについて４００〜２５００
　ｍｇ／Ｋｇの範囲で非経口投与（静注及び復往）した
ところ、中毒例及び致死例は見られなかった。従って、
上記オリゴ糖誘導体は極めて低毒性であった。

（ｅ）　　製剤化上記オリゴ糖誘導体カリウム塩２０ｇ、デンプン３８ｇ
、乳糖４０ｇ及びステアリン酸カルシウム２ｇを十分に
混合した後、これを打錠機にかけ１錠５００ｍｇの錠剤
を成型した。得られた錠剤１錠には上記オリゴ糖誘導体
カリウム塩が１００ｍｇ含有されていた。

（発明の効果）本発明の薬物は、極めて微量でウィルスの増殖を十分に
抑制するので、ウィルス感染症の進行と発症の阻止、治
療および予防を目的とする薬物療法において極めて有効
な手段として使用に供することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＨＩＶ感染による細胞障害に対するオリゴ糖
誘導体の抑制効果をイノシトール６硫酸塩（従来の技術
）と比較した図である。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）下記一般式Ｇａｌ−（Ｇａｌ）＿ｎ−Ｇｌｃ（ただし、式中、Ｇａｌはガラクトース残基、Ｇｌｃはグルコース残基、ｎは１〜４の整数をそれぞれ表す。）で示されるオリゴ糖に、少なくとも１個のスルホ基（−
ＳＯ＿３Ｈ）が、ガラクトース残基あるいはグルコース
残基のオキソ基（−Ｏ−）を介して結合されているオリ
ゴ糖誘導体又はその塩を有効成分とする抗ウィルス剤。