JPH0319239B2 - - Google Patents
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- JPH0319239B2 JPH0319239B2 JP57055487A JP5548782A JPH0319239B2 JP H0319239 B2 JPH0319239 B2 JP H0319239B2 JP 57055487 A JP57055487 A JP 57055487A JP 5548782 A JP5548782 A JP 5548782A JP H0319239 B2 JPH0319239 B2 JP H0319239B2
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は糖質分解酵素を特異的に阻害する新規
なアミノオリゴ糖誘導体に関し、更に詳しくは下
記一般式〔〕で示されるアミノオリゴ糖誘導体
に関する。 （式中ｍは０〜12の整数を、ｎは１〜13の整数
を表わし、且つｍ＋ｎが１〜13の整数であること
を表わす。） 従来、糖質分解酵素を阻害するアミノオリゴ糖
誘導体としては、アクチノプラネス属に属する菌
株が生産する物質（特公昭54−39474号及び特開
昭52−122342号）、ストレプトマイセス・エス・
ピー・A2396菌株（微工研菌寄第4275号）が生産
する物質（特開昭54−92909号）、アミロスタチン
（特公昭52−21596号、特開昭51−54990号及び特
開昭56−68694号）、ストレプトマイセス・カルブ
ス・バリエタス・TM−521菌株（微工研菌寄第
4283号）が生産する物質（特開昭56−123986号及
び特開昭56−125398号）及びオリゴスタチン
（The Journal of Antibiotics34巻11号1429頁
1981年）等が知られている。本発明はこれらの公
知物質とは化学構造において顕著に相違し、しか
も有用な糖質分解酵素阻害作用を具備する前記一
般式〔〕で示されるアミノオリゴ糖誘導体を提
供するものである。 本発明誘導体〔〕は2.0〜4.0規定希塩酸を用
いて加熱すると、血小板凝集抑制作用を持つ下記
構造式〔〕 で示される化合物（以下NSOと仮称する）及び
グルコース等に加水分解されるという特徴を有す
る。 本発明誘導体〔〕に包含される代表的な化合
物を以下に例示する。各例示化合物の冒頭に付し
た名称は本明細書においてそれら化合物の仮称名
を表わし、ｍ，ｎ及びｍ＋ｎは前記一般式〔〕
で表わしたものを意味する。 NS1；Ｏ−〔４，６−ビスデスオキシ−４−
（２，３−エポキシ−３−ヒドロキシメチル−４，
５，６−トリヒドロキシシクロヘキサン−１−イ
ルアミノ）−α−Ｄ−グルコピラノシル〕−（１→
４）−α−Ｄ−グルコピラノース（ｍが０，ｎが
１の化合物） NS2；Ｏ−〔４，６−ビスデスオキシ−４−
（２，３−エポキシ−３−ヒドロキシメチル−４，
５，６−トリヒドロキシシクロヘキサン−１−イ
ルアミノ）−α−Ｄ−グルコピラノシル〕−（１→
４）−ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）
−α−Ｄ−グルコピラノース（ｍが０、ｎが２の
化合物） NS3；Ｏ−｛４，６−ビスデスオキシ−４−
〔５，６−ジヒドロキシ−２，３−エポキシ−４
−（ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４））−
３−ヒドロキシメチルシクロヘキサン−１−イル
アミノ〕−α−Ｄ−グルコピラノシル｝−（１→４）
−−α−Ｄ−グルコピラノース（ｍが１，ｎが１
の化合物） NS4；Ｏ−〔４，６−ビスデスオキシ−４−
（２，３−エポキシ−３−ヒドロキシメチル−４，
５，６−トリヒドロキシシクロヘキサン−１−イ
ルアミノ）−α−Ｄ−グルコピラノシル〕−（１→
４）−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α
−Ｄ−グルコピラノース（ｍが０，ｎが３の化合
物） NS5；Ｏ−｛４，６−ビスデスオキシ−４−
〔５，６−ジヒドロキシ−２，３−エポキシ−４
−（Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４））−
３−ヒドロキシメチルシクロヘキサン−１−イル
アミノ〕−α−Ｄ−グルコピラノシル｝−（１→４）
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α
−Ｄ−グルコピラノース（ｍが１，ｎが２の化合
物） NS6；Ｏ−〔４，６−ビスデスオキシ−４−
（２，３−エポキシ−３−ヒドロキシメチル−４，
５，６−トリヒドロキシシクロヘキサン−１−イ
ルアミノ）−α−Ｄ−グルコピラノシル〕−（１→
４）−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−Ｏ
−α−Ｄグルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−
グルコピラノース（ｍが０，ｎが４の化合物） NS7；Ｏ−｛４，６−ビスデスオキシ−４−
〔５，６−ジヒドロキシ−２，３−エポキシ−４
−（Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４））−
３−ヒドロキシメチルシクロヘキサン−１−イル
アミノ〕−α−Ｄ−グルコピラノシル｝−（１→４）
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α
−Ｄ−グルコピラノース（ｍが１，ｎが３の化合
物） NS8；Ｏ−〔４，６−ビスデスオキシ−４−
（２，３−エポキシ−３−ヒドロキシメチル−４，
５，６−トリヒドロキシシクロヘキサン−１−イ
ルアミノ）−α−Ｄ−グルコピラノシル〕−（１→
４）−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グ
ルコピラノース（ｍが０，ｎが５の化合物） NS9；Ｏ−｛４，６−ビスデスオキシ−４−
〔５，６−ジヒドロキシ−２，３−エポキシ−４
−（Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４））−
３−ヒドロキシメチルシクロヘキサン−１−イル
アミノ〕−α−Ｄ−グルコピラノシル｝−（１→４）
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グ
ルコピラノース（ｍが１，ｎが４の化合物） NS10；ｍ＋ｎが６の化合物 NS11；ｍ＋ｎが７の化合物 NS12；ｍ＋ｎが８の化合物 NS13；ｍ＋ｎが９の化合物 NS14；ｍ＋ｎが10の化合物 NS15；ｍ＋ｎが11の化合物 NS16；ｍ＋ｎが12の化合物 NS17；ｍ＋ｎが13の化合物 本発明誘導体〔〕の具体的な製造法を以下に
詳述する。 本発明誘導体〔〕を含有する粗粉末の製造
法。 ストレプトマイセス・フラボクロモゲネス種に
属する菌株を培地に接種して２〜５日間種培養
し、ついで得られた培養物を生産用培地に移植し
て３〜８日間本培養する。ストレプトマイセス・
フラボクロモゲネス種に属する代表的な菌株とし
ては特公昭51−11197号公報に記載されているス
トレプトマイセス・フラボクロモゲネスNo.280（微
工研菌寄第934号）があげられる。種培養及び本
培養に使用する培地において、炭素源としてはブ
ドウ糖、シヨ糖、乳糖、麦芽糖、オートミール、
澱粉、糖蜜もしくはグリセリン又はこれらの２種
以上からなる混合物が、窒素源としてはアミノ
酸、コーンステイープリカー、肉エキス、小麦グ
ルテン、ペプトン、カゼイン加水分解物、酵母エ
キス、大豆乳もしくは無機のアンモニウム塩もし
くは硝酸塩又はこれらの２種以上からなる混合物
が適当である。また必要に応じてマグネシウム、
カルシウム、カリウム、ナトリウム、鉄、亜鉛又
はマンガン等のリン酸塩、硫酸塩又は塩酸塩等の
無機塩類を培地に添加してもよい。培養は液体培
養が適当であり、培地の組成は上述の炭素源を
0.1〜10.0％（ｗ／ｖ）に、窒素源を0.1〜5.0
（ｗ／ｖ）に設定するのが適当である。種培養及
び本培養ともに、培養開始時の培地のPH値を6.5
〜8.5に調整し、25〜40℃の温度で好気的条件下
に実施する。培養方法は通気撹拌培養、往復振盪
培養又は回転振盪培養が適当である。 上述の本培養で得られた培養物を遠心分離し、
上澄液を採取する。この遠心分離により菌体及び
不要な固形物を容易に除去できる。 ここで得られた上澄液を塩酸、硫酸又は硝酸等
の鉱酸を用いてPH1.5〜3.0に調整し、これに活性
炭を添加して30分〜２時間撹拌したのち減圧過
又は加圧過し液を得る。添加する活性炭量は
上澄液１に対し１〜10ｇが適当である。ここで
の処理は吸着による不純物の除去及び脱色を目的
とするものである。 つぎに上述の液を中和したのち、これに再度
活性炭を添加して撹拌する。１〜24時間放置後活
性炭を遠心分離により取する。中和は水酸化ナ
トリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム又は
アンモニア等の塩基を用いて行う。活性炭量は
液１に対し20〜50ｇが適当である。本発明誘導
体〔〕の大部分は活性炭に吸着される。 取した活性炭を水洗し、ついで有機溶媒を10
〜60％の割合で含有する含水有機溶媒を用いて吸
着した本発明誘導体〔〕を溶出する。有機溶媒
としてはメタノール、エタノール、イソプロパノ
ール、ノルマルプロパノール又はアセトン等が適
当である。なお、本明細書において、使用する含
水有機溶媒の水と有機溶媒との混合比率は、特に
断わらない限り含水有機溶媒の全容量に対する有
機溶媒容量の百分率で表示する。 つぎに上述の工程で得られた溶出液をそのまま
又は濃縮したのち強酸性陽イオン交換樹脂に接触
させる。接触方法はバツチ法又はカラム法のいず
れも採用できるがカラム法が好適である。強酸性
陽イオン交換樹脂としてはアンバーライトIR−
118、同IR−120B、同CG−120（以上ローム・ア
ンド・ハース社製）又はダウエツクス50W−X2
（ダウ・ケミカル社製）が適当である。ついで樹
脂を水洗し、吸着した本発明誘導体〔〕を鉱
酸、有機酸又は塩基等を、好適には鉱酸を含有す
る水溶液を用いて溶出し、溶出液を採取する。鉱
酸としては塩酸、硫酸又は硝酸等が、有機酸とし
ては酢酸等が、塩基としては水酸化ナトリウム、
水酸化カリウム、炭酸ナトリウム又はアンモニア
水等が適当である。 得られた溶出液を中和し、脱塩したのち減圧乾
固し、残留物を凍結乾燥して粗粉末を得る。脱塩
は活性炭を用いた吸脱着処理により行う。このよ
うにして得られた粗粉末の比旋光度：〔α〕20 Dは＋
150〜＋175゜（Ｃ＝1.0，水）であり、また該粉末
の総重量に対する構成糖含量はフエノール硫酸法
（生化学実験構座４糖質の化学（下）370頁1976年
５月10日東京化学同人発行）では58.3〜81.6％
（Ｗ／Ｗ）であつた。そのほか該粉末の糖質分解
酵素、例えば細菌液化型α−アミラーゼ及びグル
コアミラーゼに対する阻害活性はそれぞれ48〜
438単位／mg及び315〜4500単位／mgであつた。 粗粉末からの本発明誘導体〔〕の単離精製
法。 粗粉末からｍ＋ｎが１〜５の化合物、例えば
NS1〜９の単離精製は、強塩基性陰イオン交換樹
脂カラム又は逆相分配カラムを使用する高速液体
クロマトグラフ法により実施できる（以下液クロ
法と略す）。強塩基性陰イオン交換樹脂カラムと
しては日立ゲル＃3011−Ｎ（日立製作所(株)社製）
を固定相とするカラムが、逆相分配カラムとして
はマイクロボンダパツクCH（ウオーターズ社製）
が適当である。溶出溶媒としてはPH7.0のリン酸
緩衝液１に対してアセトニトリル0.6〜2.5（容量
比）からなる混合液又は65〜80％含水アセトニト
リルが適当である。溶出液の分画は検出器の記録
紙上に抽出される各ピークの保持時間（以下Rt
値と略す）を指標として行うと有利である。 またNS1，２及び４については、粗粉末をゲル
過する方法（以下ゲル過法と略す）又は該粉
末をアセチル化処理したのちシリカゲルカラムク
ロマトグラフ法で分離し、得られる各アセチル化
物を脱アセチル化する方法（以下アセチル化法と
略す）によつても単離精製することができる。ゲ
ル過法で使用するゲルとしてはバイオゲルＰ−
２（バイオラツド社製）が、溶出溶媒としては水
が適当である。アセチル化法において、粗粉末の
アセチル化はピリジン中で無水酢酸又はアセチル
クロライド等のアセチル化剤を用いて行うのが適
当である。シリカゲルに吸着したアセチル化物の
溶出は酢酸エチルエステルとベンゼンとの混合液
で、それらの混合比率を段階的に調整したものを
順次使用して行う。具体的には、まずNS1のアセ
チル化物を酢酸エチルエステルとベンゼンとの混
合比率が１：3.0〜3.5（容量比；以下同様）の混
合液で溶出し、ついでNS2のアセチル化物を混合
比率が１：2.0〜2.2の混合液で、NS4のアセチル
化物を１：1.5〜1.8の混合液でそれぞれ順次溶出
する。分離溶出したアセチル化物の脱アセチル化
はアンモニアを飽和させたメタノール又はエタノ
ール等を用いて行う。脱アセチル化して得られる
各化合物はそれぞれ別個に強酸性陽イオン交換樹
脂を使用するカラムクロマトグラフ法で精製す
る。 そのほか、NS1及び２については、活性炭カラ
ムクロマトグラフ法によつても粗粉末から有利に
単離精製することができる（以下活性炭法と略
す）。活性炭に吸着したNS1及び２の溶出は、含
水ノルマルブタノールを用い、その混合比率が３
％を上限とする直線濃度勾配溶出法（Linear
Gradient Elution Method）により実施する。 なお上述の液クロ法、ゲル過法、アセチル化
法及び活性炭法において、粗粉末を予め0.5〜1.5
規定希塩酸又は1.0〜4.0規定のトリフルオロ酢酸
水溶液で処理し、粗粉末中のｍ＋ｎが６〜13の化
合物をｍ＋ｎが１〜５の化合物及びグルコース又
はマルトース等の中性糖に加水分解し、ついでこ
れを強酸性陽イオン交換樹脂に吸脱着させて精製
し精製粉末としたのち、それらの方法を実施する
と目的化合物の単離精製は更に有利に進行する。 つぎに、ｍ＋ｎが６〜13の化合物、即ちNS10
〜17の単離精製は、粗粉末を活性炭に吸着させ該
活性炭を５〜20％含水エタノールで十分洗浄した
のち、吸着物質を35〜55％含水イソプロパノール
又は40〜60％含水エタノールで溶出し、ついで溶
出された物質を逆相分配カラムを使用する高速液
体クロマトグラフ法で処理することにより実施す
ることができる。活性炭を５〜20％含水エタノー
ルで洗浄することにより、次工程の高速液体クロ
マトグラフ法での処理において不都合な物質、例
えばｍ＋ｎが１〜５の化合物及び若干の夾雑物を
除去することができ、目的物の単離精製が有利に
達成できる。高速液体クロマトグラフ法で使用す
る逆相分配カラムとしてはマイクロボンダパツク
CHカラムが、また溶出溶媒としては55〜70％含
水アセトニトリルが適当である。逆相分配カラム
からの溶出液の分画は各目的化合物のRt値を指
標として行う。 上述の製造法により得られた各化合物の理化学
的性質は第１表に示す通りであつた。各化合物の
分子量、Rt値及び糖質分解酵素阻害活性の測定
並びに各化合物の構造確認試験は以下のようにし
て行つた。 分子量の測定法 各化合物の分子量は以下の(a)〜(c)に示す方法の
いずれか又は２種以上を組合わせ、得られた結果
を総合的に判断して決定した。 (a) 質量スペクトル法 被検化合物又はそのメチル化物のFD又はEIマ
ススペクトルを測定し、検出した分子イオンピー
クから分子量を算出した。被検化合物のメチル化
物は箱守法（Journal of Biochemistry55巻205
頁1967年）を用いて調製した。 (b) 重合度法 原田らの方法（Biochimica et Biophysica
Ac−ta237巻422頁1971年）により被検化合物の
重合度（Average Degree of polymerization）
を測定し、重合度から分子量を求めた。 (c) ガスクロマトグラフ分析法 被検化合物5.0mgを正確に秤量し、これに２規
定希塩酸２mlを添加して1.0〜3.0時間加熱還流
し、被検化合物をNSOとグルコースに加水分解
する。加水分解後の反応液を水で希釈してPH1.5
に調整し、これをダウエツクス50W−X2（H+型）
のカラム（直径0.6×８cm）に通し、NSOは固定
相に吸着させグルコースはそのまま流出させる。
グルコースの流出は水100mlを用いて行う。固定
相に吸着したNSOは３規定アンモニア水溶液で
完全に溶出する。得られる溶出液中のNSOのモ
ル数はガスクロマトグラフ法で定量する。定量は
絶対検量線法で行う。一方、流出液中のグルコー
スのモル数も同様にガスクロマトグラフ法で定量
する。グルコースの定量値は、予め被検化合物に
相応するマルトオリゴ糖を上述の加水分解条件及
びカラム条件で処理した場合における生成グルコ
ースの損失率を同条件のガスクロマトグラフ法で
測定し、その損失率を基に修正を行う。ガスクロ
マトグラフ法での条件は以下のように設定する。 試薬：TMS−PZ（東京化成工業(株)社製；トリメ
チルシリル化剤） カラム：３％SE−30、クロモソルブＷ−HP
（60／80）（直径3.0×1000mm；ガスクロ工業
(株)社製） カラム温度：130〜230℃（10℃／分の昇温法によ
る。） 注入部温度：260℃ キヤリヤーガス：ヘリウム 流速：40ml／分 上述のようにして得られたNSO及びグルコー
スのモル数からそれらのモル比を算出し、このモ
ル比から被検化合物の分子量を求めた。なおここ
で得られたモル比は被検化合物の構造確認のため
のデータ≠の一部として使用した。 Rt値測定法 Rt値は高速液体クロマトグラフ法により以下
の条件Ａ又はＢのうち少なくとも一方を採用して
測定した。高速液体クロマトグラフとしては日立
638−50型（日立製作所(株)社製）を、検出器とし
てはShodex RISE−11型高感度示差屈折計（昭
和電工(株)社製）を用いた。なお、後述の製造例に
おいて単離精製手段として高速液体クロマトグラ
フ法を採用した際の機器もこれらと同一のものを
採用した。 (a) 条件Ａ カラム：日立＃3011−Ｎ（直径2.6×500mm） カラム温度：50℃ 溶出溶媒：アセトニトリル−0.02モルリン酸緩衝
液（PH7.0）混合液（容量比３：２） 流速：1.5ml／分 (b) 条件Ｂ カラム：マイクロボンダパツクCH（直径3.9×300
mm） カラム温度：20℃ 溶出溶媒：65％含水アセトニトリル 流速：20ml／分 構造確認試験法 (a) NS1〜９の構造確認法 メチル化分析法（化学の領域増刊132号29頁
1981年）に従つて、被検化合物を１，２，３，
５，６−ペンタ−Ｏ−メチル−４−モノ−Ｏ−ア
セチルグルシトール，２，３，４，６−テトラ−
Ｏ−メチル−１，５−ジ−Ｏ−アセチルグルシト
ールもしくは２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−
１，４，５−トリ−Ｏ−アセチルグルシトール又
はこれらの混合物に変換し、それらを定量するこ
とにより構造確認を行つた。 (b) NS10〜17の構造確認法 被検化合物30mgを40ミリモル酢酸緩衝液（PH
4.9）１mlに溶解し、これに同種緩衝液２mlに10
mgのβ−アミラーゼ（シグマ社製）を溶解した溶
液を添加し、37℃で６時間反応させる。反応後湯
浴上で５分間煮沸しβ−アミラーゼを失活させ、
ついで反応液を遠心分離して上澄液を採取する。
この上澄液に希塩酸を加えPH1.5に調整し、これ
をダウエツクス50W−X2のカラム（直径1.0×15
cm）に通す。カラムの固定相を十分に水洗したの
ち該固定相に吸着した塩基性物質を２規定アンモ
ニア水溶液で溶出する。得られる溶出液を活性炭
処理により脱塩し、ついで減圧乾固して残留物を
得る。この残留物を２mlの65％含水アセトニトリ
ルに溶解し、これを上述のRt値測定法条件Ｂで
分析し、β−アミラーゼによつて分解生成された
各塩基性物質のRt値及びそれらの物質の相対的
重量比を測定及び定量する。このRt他値及び相
対的重量比から被検化合物の構造確認を行つた。 糖質分解酵素阻害活性測定法 (a) α−アミラーゼ阻害活性の測定法 可溶性澱粉を0.4％（Ｗ／Ｖ）含有する0.2モル
酢酸緩衝液（PH5.5）２mlに、水又は被検化合物
の水溶液１mlを加え37℃で15分間放置した後、細
菌液化型α−アミラーゼ（結晶標品、シグマ社
製）を0.00004％（Ｗ／Ｖ）含有する0.2モル酢酸
緩衝液（PH5.5）１mlを加え、37℃で7.5分間反応
させる。ついで１規定希塩酸５mlを加え室温で10
分間放置する。この反応液より１mlを取出し、
0.0005規定ヨウ素水溶液10mlを加え、660nmにお
ける吸光度を測定する。被検化合物を含まない反
応系において、反応初期の１分間に可溶性澱分の
ヨウ素による発色を10％減少させる酵素量を１単
位として表わし、１単位のα−アミラーゼ活性を
50％阻害する被検化合物の活性を0.5単位（単位
は以下AIUと略す）と定義した。 (b) グルコアミラーゼ阻害活性の測定法 グルコアミラーゼ（リゾープス・ニベウス由来
の結晶標品、生化学工業(株)社製）を0.001％
（Ｗ／Ｖ）含有する0.2モル酢酸緩衝液（PH5.0）
0.4mlに水又は被検化合物の水溶液0.1mlを加え、
40℃で10分間反応させた後、可溶性澱粉2.5％
（Ｗ／Ｖ）を含有する0.2規定酢酸緩衝液（PH5.0）
0.5mlを加え、40℃で15分間反応させる。ついで
これに３，５−ジニトロサリチル酸試薬（W.
Rick＆H.P.Segbauer，Methods of Enzymatic
Analysis 885頁1975年Varlag Chemie，
Weinheim＆Acadmic Press，NewYork，
London）１mlを加えて反応を停止する。該反応
液を10分間沸騰湯浴上で加熱した後、冷却し、10
mlの水を加えて540nmで吸光度を測定する。阻害
物質を含まない反応において、１分間に0.1mgの
グルコースを遊離する酵素量を１単位として表わ
し、１単位のグルコアミラーゼ活性を50％阻害す
る被検化合物の活性を0.5単位（単位は以下GIU
と略す）と定義した。 なお、本発明誘導体〔〕を含有する粗粉末の
糖質分解酵素阻害活性の測定もここで述べた方法
で行つた。
なアミノオリゴ糖誘導体に関し、更に詳しくは下
記一般式〔〕で示されるアミノオリゴ糖誘導体
に関する。 （式中ｍは０〜12の整数を、ｎは１〜13の整数
を表わし、且つｍ＋ｎが１〜13の整数であること
を表わす。） 従来、糖質分解酵素を阻害するアミノオリゴ糖
誘導体としては、アクチノプラネス属に属する菌
株が生産する物質（特公昭54−39474号及び特開
昭52−122342号）、ストレプトマイセス・エス・
ピー・A2396菌株（微工研菌寄第4275号）が生産
する物質（特開昭54−92909号）、アミロスタチン
（特公昭52−21596号、特開昭51−54990号及び特
開昭56−68694号）、ストレプトマイセス・カルブ
ス・バリエタス・TM−521菌株（微工研菌寄第
4283号）が生産する物質（特開昭56−123986号及
び特開昭56−125398号）及びオリゴスタチン
（The Journal of Antibiotics34巻11号1429頁
1981年）等が知られている。本発明はこれらの公
知物質とは化学構造において顕著に相違し、しか
も有用な糖質分解酵素阻害作用を具備する前記一
般式〔〕で示されるアミノオリゴ糖誘導体を提
供するものである。 本発明誘導体〔〕は2.0〜4.0規定希塩酸を用
いて加熱すると、血小板凝集抑制作用を持つ下記
構造式〔〕 で示される化合物（以下NSOと仮称する）及び
グルコース等に加水分解されるという特徴を有す
る。 本発明誘導体〔〕に包含される代表的な化合
物を以下に例示する。各例示化合物の冒頭に付し
た名称は本明細書においてそれら化合物の仮称名
を表わし、ｍ，ｎ及びｍ＋ｎは前記一般式〔〕
で表わしたものを意味する。 NS1；Ｏ−〔４，６−ビスデスオキシ−４−
（２，３−エポキシ−３−ヒドロキシメチル−４，
５，６−トリヒドロキシシクロヘキサン−１−イ
ルアミノ）−α−Ｄ−グルコピラノシル〕−（１→
４）−α−Ｄ−グルコピラノース（ｍが０，ｎが
１の化合物） NS2；Ｏ−〔４，６−ビスデスオキシ−４−
（２，３−エポキシ−３−ヒドロキシメチル−４，
５，６−トリヒドロキシシクロヘキサン−１−イ
ルアミノ）−α−Ｄ−グルコピラノシル〕−（１→
４）−ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）
−α−Ｄ−グルコピラノース（ｍが０、ｎが２の
化合物） NS3；Ｏ−｛４，６−ビスデスオキシ−４−
〔５，６−ジヒドロキシ−２，３−エポキシ−４
−（ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４））−
３−ヒドロキシメチルシクロヘキサン−１−イル
アミノ〕−α−Ｄ−グルコピラノシル｝−（１→４）
−−α−Ｄ−グルコピラノース（ｍが１，ｎが１
の化合物） NS4；Ｏ−〔４，６−ビスデスオキシ−４−
（２，３−エポキシ−３−ヒドロキシメチル−４，
５，６−トリヒドロキシシクロヘキサン−１−イ
ルアミノ）−α−Ｄ−グルコピラノシル〕−（１→
４）−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α
−Ｄ−グルコピラノース（ｍが０，ｎが３の化合
物） NS5；Ｏ−｛４，６−ビスデスオキシ−４−
〔５，６−ジヒドロキシ−２，３−エポキシ−４
−（Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４））−
３−ヒドロキシメチルシクロヘキサン−１−イル
アミノ〕−α−Ｄ−グルコピラノシル｝−（１→４）
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α
−Ｄ−グルコピラノース（ｍが１，ｎが２の化合
物） NS6；Ｏ−〔４，６−ビスデスオキシ−４−
（２，３−エポキシ−３−ヒドロキシメチル−４，
５，６−トリヒドロキシシクロヘキサン−１−イ
ルアミノ）−α−Ｄ−グルコピラノシル〕−（１→
４）−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−Ｏ
−α−Ｄグルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−
グルコピラノース（ｍが０，ｎが４の化合物） NS7；Ｏ−｛４，６−ビスデスオキシ−４−
〔５，６−ジヒドロキシ−２，３−エポキシ−４
−（Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４））−
３−ヒドロキシメチルシクロヘキサン−１−イル
アミノ〕−α−Ｄ−グルコピラノシル｝−（１→４）
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α
−Ｄ−グルコピラノース（ｍが１，ｎが３の化合
物） NS8；Ｏ−〔４，６−ビスデスオキシ−４−
（２，３−エポキシ−３−ヒドロキシメチル−４，
５，６−トリヒドロキシシクロヘキサン−１−イ
ルアミノ）−α−Ｄ−グルコピラノシル〕−（１→
４）−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グ
ルコピラノース（ｍが０，ｎが５の化合物） NS9；Ｏ−｛４，６−ビスデスオキシ−４−
〔５，６−ジヒドロキシ−２，３−エポキシ−４
−（Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４））−
３−ヒドロキシメチルシクロヘキサン−１−イル
アミノ〕−α−Ｄ−グルコピラノシル｝−（１→４）
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グ
ルコピラノース（ｍが１，ｎが４の化合物） NS10；ｍ＋ｎが６の化合物 NS11；ｍ＋ｎが７の化合物 NS12；ｍ＋ｎが８の化合物 NS13；ｍ＋ｎが９の化合物 NS14；ｍ＋ｎが10の化合物 NS15；ｍ＋ｎが11の化合物 NS16；ｍ＋ｎが12の化合物 NS17；ｍ＋ｎが13の化合物 本発明誘導体〔〕の具体的な製造法を以下に
詳述する。 本発明誘導体〔〕を含有する粗粉末の製造
法。 ストレプトマイセス・フラボクロモゲネス種に
属する菌株を培地に接種して２〜５日間種培養
し、ついで得られた培養物を生産用培地に移植し
て３〜８日間本培養する。ストレプトマイセス・
フラボクロモゲネス種に属する代表的な菌株とし
ては特公昭51−11197号公報に記載されているス
トレプトマイセス・フラボクロモゲネスNo.280（微
工研菌寄第934号）があげられる。種培養及び本
培養に使用する培地において、炭素源としてはブ
ドウ糖、シヨ糖、乳糖、麦芽糖、オートミール、
澱粉、糖蜜もしくはグリセリン又はこれらの２種
以上からなる混合物が、窒素源としてはアミノ
酸、コーンステイープリカー、肉エキス、小麦グ
ルテン、ペプトン、カゼイン加水分解物、酵母エ
キス、大豆乳もしくは無機のアンモニウム塩もし
くは硝酸塩又はこれらの２種以上からなる混合物
が適当である。また必要に応じてマグネシウム、
カルシウム、カリウム、ナトリウム、鉄、亜鉛又
はマンガン等のリン酸塩、硫酸塩又は塩酸塩等の
無機塩類を培地に添加してもよい。培養は液体培
養が適当であり、培地の組成は上述の炭素源を
0.1〜10.0％（ｗ／ｖ）に、窒素源を0.1〜5.0
（ｗ／ｖ）に設定するのが適当である。種培養及
び本培養ともに、培養開始時の培地のPH値を6.5
〜8.5に調整し、25〜40℃の温度で好気的条件下
に実施する。培養方法は通気撹拌培養、往復振盪
培養又は回転振盪培養が適当である。 上述の本培養で得られた培養物を遠心分離し、
上澄液を採取する。この遠心分離により菌体及び
不要な固形物を容易に除去できる。 ここで得られた上澄液を塩酸、硫酸又は硝酸等
の鉱酸を用いてPH1.5〜3.0に調整し、これに活性
炭を添加して30分〜２時間撹拌したのち減圧過
又は加圧過し液を得る。添加する活性炭量は
上澄液１に対し１〜10ｇが適当である。ここで
の処理は吸着による不純物の除去及び脱色を目的
とするものである。 つぎに上述の液を中和したのち、これに再度
活性炭を添加して撹拌する。１〜24時間放置後活
性炭を遠心分離により取する。中和は水酸化ナ
トリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム又は
アンモニア等の塩基を用いて行う。活性炭量は
液１に対し20〜50ｇが適当である。本発明誘導
体〔〕の大部分は活性炭に吸着される。 取した活性炭を水洗し、ついで有機溶媒を10
〜60％の割合で含有する含水有機溶媒を用いて吸
着した本発明誘導体〔〕を溶出する。有機溶媒
としてはメタノール、エタノール、イソプロパノ
ール、ノルマルプロパノール又はアセトン等が適
当である。なお、本明細書において、使用する含
水有機溶媒の水と有機溶媒との混合比率は、特に
断わらない限り含水有機溶媒の全容量に対する有
機溶媒容量の百分率で表示する。 つぎに上述の工程で得られた溶出液をそのまま
又は濃縮したのち強酸性陽イオン交換樹脂に接触
させる。接触方法はバツチ法又はカラム法のいず
れも採用できるがカラム法が好適である。強酸性
陽イオン交換樹脂としてはアンバーライトIR−
118、同IR−120B、同CG−120（以上ローム・ア
ンド・ハース社製）又はダウエツクス50W−X2
（ダウ・ケミカル社製）が適当である。ついで樹
脂を水洗し、吸着した本発明誘導体〔〕を鉱
酸、有機酸又は塩基等を、好適には鉱酸を含有す
る水溶液を用いて溶出し、溶出液を採取する。鉱
酸としては塩酸、硫酸又は硝酸等が、有機酸とし
ては酢酸等が、塩基としては水酸化ナトリウム、
水酸化カリウム、炭酸ナトリウム又はアンモニア
水等が適当である。 得られた溶出液を中和し、脱塩したのち減圧乾
固し、残留物を凍結乾燥して粗粉末を得る。脱塩
は活性炭を用いた吸脱着処理により行う。このよ
うにして得られた粗粉末の比旋光度：〔α〕20 Dは＋
150〜＋175゜（Ｃ＝1.0，水）であり、また該粉末
の総重量に対する構成糖含量はフエノール硫酸法
（生化学実験構座４糖質の化学（下）370頁1976年
５月10日東京化学同人発行）では58.3〜81.6％
（Ｗ／Ｗ）であつた。そのほか該粉末の糖質分解
酵素、例えば細菌液化型α−アミラーゼ及びグル
コアミラーゼに対する阻害活性はそれぞれ48〜
438単位／mg及び315〜4500単位／mgであつた。 粗粉末からの本発明誘導体〔〕の単離精製
法。 粗粉末からｍ＋ｎが１〜５の化合物、例えば
NS1〜９の単離精製は、強塩基性陰イオン交換樹
脂カラム又は逆相分配カラムを使用する高速液体
クロマトグラフ法により実施できる（以下液クロ
法と略す）。強塩基性陰イオン交換樹脂カラムと
しては日立ゲル＃3011−Ｎ（日立製作所(株)社製）
を固定相とするカラムが、逆相分配カラムとして
はマイクロボンダパツクCH（ウオーターズ社製）
が適当である。溶出溶媒としてはPH7.0のリン酸
緩衝液１に対してアセトニトリル0.6〜2.5（容量
比）からなる混合液又は65〜80％含水アセトニト
リルが適当である。溶出液の分画は検出器の記録
紙上に抽出される各ピークの保持時間（以下Rt
値と略す）を指標として行うと有利である。 またNS1，２及び４については、粗粉末をゲル
過する方法（以下ゲル過法と略す）又は該粉
末をアセチル化処理したのちシリカゲルカラムク
ロマトグラフ法で分離し、得られる各アセチル化
物を脱アセチル化する方法（以下アセチル化法と
略す）によつても単離精製することができる。ゲ
ル過法で使用するゲルとしてはバイオゲルＰ−
２（バイオラツド社製）が、溶出溶媒としては水
が適当である。アセチル化法において、粗粉末の
アセチル化はピリジン中で無水酢酸又はアセチル
クロライド等のアセチル化剤を用いて行うのが適
当である。シリカゲルに吸着したアセチル化物の
溶出は酢酸エチルエステルとベンゼンとの混合液
で、それらの混合比率を段階的に調整したものを
順次使用して行う。具体的には、まずNS1のアセ
チル化物を酢酸エチルエステルとベンゼンとの混
合比率が１：3.0〜3.5（容量比；以下同様）の混
合液で溶出し、ついでNS2のアセチル化物を混合
比率が１：2.0〜2.2の混合液で、NS4のアセチル
化物を１：1.5〜1.8の混合液でそれぞれ順次溶出
する。分離溶出したアセチル化物の脱アセチル化
はアンモニアを飽和させたメタノール又はエタノ
ール等を用いて行う。脱アセチル化して得られる
各化合物はそれぞれ別個に強酸性陽イオン交換樹
脂を使用するカラムクロマトグラフ法で精製す
る。 そのほか、NS1及び２については、活性炭カラ
ムクロマトグラフ法によつても粗粉末から有利に
単離精製することができる（以下活性炭法と略
す）。活性炭に吸着したNS1及び２の溶出は、含
水ノルマルブタノールを用い、その混合比率が３
％を上限とする直線濃度勾配溶出法（Linear
Gradient Elution Method）により実施する。 なお上述の液クロ法、ゲル過法、アセチル化
法及び活性炭法において、粗粉末を予め0.5〜1.5
規定希塩酸又は1.0〜4.0規定のトリフルオロ酢酸
水溶液で処理し、粗粉末中のｍ＋ｎが６〜13の化
合物をｍ＋ｎが１〜５の化合物及びグルコース又
はマルトース等の中性糖に加水分解し、ついでこ
れを強酸性陽イオン交換樹脂に吸脱着させて精製
し精製粉末としたのち、それらの方法を実施する
と目的化合物の単離精製は更に有利に進行する。 つぎに、ｍ＋ｎが６〜13の化合物、即ちNS10
〜17の単離精製は、粗粉末を活性炭に吸着させ該
活性炭を５〜20％含水エタノールで十分洗浄した
のち、吸着物質を35〜55％含水イソプロパノール
又は40〜60％含水エタノールで溶出し、ついで溶
出された物質を逆相分配カラムを使用する高速液
体クロマトグラフ法で処理することにより実施す
ることができる。活性炭を５〜20％含水エタノー
ルで洗浄することにより、次工程の高速液体クロ
マトグラフ法での処理において不都合な物質、例
えばｍ＋ｎが１〜５の化合物及び若干の夾雑物を
除去することができ、目的物の単離精製が有利に
達成できる。高速液体クロマトグラフ法で使用す
る逆相分配カラムとしてはマイクロボンダパツク
CHカラムが、また溶出溶媒としては55〜70％含
水アセトニトリルが適当である。逆相分配カラム
からの溶出液の分画は各目的化合物のRt値を指
標として行う。 上述の製造法により得られた各化合物の理化学
的性質は第１表に示す通りであつた。各化合物の
分子量、Rt値及び糖質分解酵素阻害活性の測定
並びに各化合物の構造確認試験は以下のようにし
て行つた。 分子量の測定法 各化合物の分子量は以下の(a)〜(c)に示す方法の
いずれか又は２種以上を組合わせ、得られた結果
を総合的に判断して決定した。 (a) 質量スペクトル法 被検化合物又はそのメチル化物のFD又はEIマ
ススペクトルを測定し、検出した分子イオンピー
クから分子量を算出した。被検化合物のメチル化
物は箱守法（Journal of Biochemistry55巻205
頁1967年）を用いて調製した。 (b) 重合度法 原田らの方法（Biochimica et Biophysica
Ac−ta237巻422頁1971年）により被検化合物の
重合度（Average Degree of polymerization）
を測定し、重合度から分子量を求めた。 (c) ガスクロマトグラフ分析法 被検化合物5.0mgを正確に秤量し、これに２規
定希塩酸２mlを添加して1.0〜3.0時間加熱還流
し、被検化合物をNSOとグルコースに加水分解
する。加水分解後の反応液を水で希釈してPH1.5
に調整し、これをダウエツクス50W−X2（H+型）
のカラム（直径0.6×８cm）に通し、NSOは固定
相に吸着させグルコースはそのまま流出させる。
グルコースの流出は水100mlを用いて行う。固定
相に吸着したNSOは３規定アンモニア水溶液で
完全に溶出する。得られる溶出液中のNSOのモ
ル数はガスクロマトグラフ法で定量する。定量は
絶対検量線法で行う。一方、流出液中のグルコー
スのモル数も同様にガスクロマトグラフ法で定量
する。グルコースの定量値は、予め被検化合物に
相応するマルトオリゴ糖を上述の加水分解条件及
びカラム条件で処理した場合における生成グルコ
ースの損失率を同条件のガスクロマトグラフ法で
測定し、その損失率を基に修正を行う。ガスクロ
マトグラフ法での条件は以下のように設定する。 試薬：TMS−PZ（東京化成工業(株)社製；トリメ
チルシリル化剤） カラム：３％SE−30、クロモソルブＷ−HP
（60／80）（直径3.0×1000mm；ガスクロ工業
(株)社製） カラム温度：130〜230℃（10℃／分の昇温法によ
る。） 注入部温度：260℃ キヤリヤーガス：ヘリウム 流速：40ml／分 上述のようにして得られたNSO及びグルコー
スのモル数からそれらのモル比を算出し、このモ
ル比から被検化合物の分子量を求めた。なおここ
で得られたモル比は被検化合物の構造確認のため
のデータ≠の一部として使用した。 Rt値測定法 Rt値は高速液体クロマトグラフ法により以下
の条件Ａ又はＢのうち少なくとも一方を採用して
測定した。高速液体クロマトグラフとしては日立
638−50型（日立製作所(株)社製）を、検出器とし
てはShodex RISE−11型高感度示差屈折計（昭
和電工(株)社製）を用いた。なお、後述の製造例に
おいて単離精製手段として高速液体クロマトグラ
フ法を採用した際の機器もこれらと同一のものを
採用した。 (a) 条件Ａ カラム：日立＃3011−Ｎ（直径2.6×500mm） カラム温度：50℃ 溶出溶媒：アセトニトリル−0.02モルリン酸緩衝
液（PH7.0）混合液（容量比３：２） 流速：1.5ml／分 (b) 条件Ｂ カラム：マイクロボンダパツクCH（直径3.9×300
mm） カラム温度：20℃ 溶出溶媒：65％含水アセトニトリル 流速：20ml／分 構造確認試験法 (a) NS1〜９の構造確認法 メチル化分析法（化学の領域増刊132号29頁
1981年）に従つて、被検化合物を１，２，３，
５，６−ペンタ−Ｏ−メチル−４−モノ−Ｏ−ア
セチルグルシトール，２，３，４，６−テトラ−
Ｏ−メチル−１，５−ジ−Ｏ−アセチルグルシト
ールもしくは２，３，６−トリ−Ｏ−メチル−
１，４，５−トリ−Ｏ−アセチルグルシトール又
はこれらの混合物に変換し、それらを定量するこ
とにより構造確認を行つた。 (b) NS10〜17の構造確認法 被検化合物30mgを40ミリモル酢酸緩衝液（PH
4.9）１mlに溶解し、これに同種緩衝液２mlに10
mgのβ−アミラーゼ（シグマ社製）を溶解した溶
液を添加し、37℃で６時間反応させる。反応後湯
浴上で５分間煮沸しβ−アミラーゼを失活させ、
ついで反応液を遠心分離して上澄液を採取する。
この上澄液に希塩酸を加えPH1.5に調整し、これ
をダウエツクス50W−X2のカラム（直径1.0×15
cm）に通す。カラムの固定相を十分に水洗したの
ち該固定相に吸着した塩基性物質を２規定アンモ
ニア水溶液で溶出する。得られる溶出液を活性炭
処理により脱塩し、ついで減圧乾固して残留物を
得る。この残留物を２mlの65％含水アセトニトリ
ルに溶解し、これを上述のRt値測定法条件Ｂで
分析し、β−アミラーゼによつて分解生成された
各塩基性物質のRt値及びそれらの物質の相対的
重量比を測定及び定量する。このRt他値及び相
対的重量比から被検化合物の構造確認を行つた。 糖質分解酵素阻害活性測定法 (a) α−アミラーゼ阻害活性の測定法 可溶性澱粉を0.4％（Ｗ／Ｖ）含有する0.2モル
酢酸緩衝液（PH5.5）２mlに、水又は被検化合物
の水溶液１mlを加え37℃で15分間放置した後、細
菌液化型α−アミラーゼ（結晶標品、シグマ社
製）を0.00004％（Ｗ／Ｖ）含有する0.2モル酢酸
緩衝液（PH5.5）１mlを加え、37℃で7.5分間反応
させる。ついで１規定希塩酸５mlを加え室温で10
分間放置する。この反応液より１mlを取出し、
0.0005規定ヨウ素水溶液10mlを加え、660nmにお
ける吸光度を測定する。被検化合物を含まない反
応系において、反応初期の１分間に可溶性澱分の
ヨウ素による発色を10％減少させる酵素量を１単
位として表わし、１単位のα−アミラーゼ活性を
50％阻害する被検化合物の活性を0.5単位（単位
は以下AIUと略す）と定義した。 (b) グルコアミラーゼ阻害活性の測定法 グルコアミラーゼ（リゾープス・ニベウス由来
の結晶標品、生化学工業(株)社製）を0.001％
（Ｗ／Ｖ）含有する0.2モル酢酸緩衝液（PH5.0）
0.4mlに水又は被検化合物の水溶液0.1mlを加え、
40℃で10分間反応させた後、可溶性澱粉2.5％
（Ｗ／Ｖ）を含有する0.2規定酢酸緩衝液（PH5.0）
0.5mlを加え、40℃で15分間反応させる。ついで
これに３，５−ジニトロサリチル酸試薬（W.
Rick＆H.P.Segbauer，Methods of Enzymatic
Analysis 885頁1975年Varlag Chemie，
Weinheim＆Acadmic Press，NewYork，
London）１mlを加えて反応を停止する。該反応
液を10分間沸騰湯浴上で加熱した後、冷却し、10
mlの水を加えて540nmで吸光度を測定する。阻害
物質を含まない反応において、１分間に0.1mgの
グルコースを遊離する酵素量を１単位として表わ
し、１単位のグルコアミラーゼ活性を50％阻害す
る被検化合物の活性を0.5単位（単位は以下GIU
と略す）と定義した。 なお、本発明誘導体〔〕を含有する粗粉末の
糖質分解酵素阻害活性の測定もここで述べた方法
で行つた。
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
つぎに本発明誘導体〔〕の糖質分解酵素阻害
活性に基づく薬理効果をNS2の試験例をもつて示
す。 血糖低下作用 24時間絶食させたウイスター系ラツト12匹を用
いて澱粉投与後のラツトの血糖上昇に対するNS2
の抑制作用を試験した。ラツトを６匹ずつ２群に
分け、一方には澱粉２ｇ／Kgを、他方には澱粉２
ｇ／KgとNS250mg／Kgを経口投与し、２時間経過
後に採血して血液中のグルコース量をオルトトル
イジンホウ酸法（臨床病理12巻434頁1964年）に
より測定した。結果は第２表に示す通りであつ
た。
活性に基づく薬理効果をNS2の試験例をもつて示
す。 血糖低下作用 24時間絶食させたウイスター系ラツト12匹を用
いて澱粉投与後のラツトの血糖上昇に対するNS2
の抑制作用を試験した。ラツトを６匹ずつ２群に
分け、一方には澱粉２ｇ／Kgを、他方には澱粉２
ｇ／KgとNS250mg／Kgを経口投与し、２時間経過
後に採血して血液中のグルコース量をオルトトル
イジンホウ酸法（臨床病理12巻434頁1964年）に
より測定した。結果は第２表に示す通りであつ
た。
【表】
脂質低下作用
24時間絶食させたウイスター系ラツト12匹を用
いてNS2の脂質低下作用を試験した。ラツトを６
匹ずつ２群に分け、一方にはトライトンWR−
1339（シグマ社製）400mg／Kgを皮下投与し、他方
にはトライトンWR−1339 400mg／Kgを皮下投与
したのち１時間後にNS2 10mg／Kgを経口投与し、
ついで24時間経過後に同量のNS2を再度経口投与
した。トライトンWR−1339投与後36時間経過し
たのちに採血し、血液中の総コレステロール量を
をザツク・ヘンリー法（Zak−Henly法；
American Jounnal of Clinical Pathology27巻
583頁1957年）に準じた方法で測定した。結果は
第３表に示す通りであつた。
いてNS2の脂質低下作用を試験した。ラツトを６
匹ずつ２群に分け、一方にはトライトンWR−
1339（シグマ社製）400mg／Kgを皮下投与し、他方
にはトライトンWR−1339 400mg／Kgを皮下投与
したのち１時間後にNS2 10mg／Kgを経口投与し、
ついで24時間経過後に同量のNS2を再度経口投与
した。トライトンWR−1339投与後36時間経過し
たのちに採血し、血液中の総コレステロール量を
をザツク・ヘンリー法（Zak−Henly法；
American Jounnal of Clinical Pathology27巻
583頁1957年）に準じた方法で測定した。結果は
第３表に示す通りであつた。
【表】
以上の試験例から明らかなように、本発明誘導
体〔〕は糖尿病、高脂血症又は肥満等の治療薬
又は予防薬として有用な化合物である。 本発明を製造例及び参考例をもつて更に説明す
る。 製造例 １ 粗粉末の製造 オートミール3.0％（Ｗ／Ｖ）、ペプトン1.0％
（Ｗ／Ｖ）及び塩化ナトリウム0.5％（Ｗ／Ｖ）を
含有するPH7.8に調整された無菌の液体培地にス
トレプトマイセス・フラボクロモゲネスNo.280菌
を接種し、約30℃で２日間回転振盪培養し種培養
物1630mlを得た。この種培養物を予め無菌処理さ
れた上述の液体培地と同様な組成を有する生産用
培地150に移植し、300容量のジヤーフアーメ
ンターを用いて約30℃で６日間本培養した。本培
養開始時のPHは7.4、通気量は150／分、回転速
度は250r.p.m.で行つた。 つぎに、本培養して得られた培養物を遠心分離
し、上澄液133を得た。この上澄液を12規定希
硫酸を用いてPH2.5に調整し、これに670ｇの活性
炭を添加して１時間撹拌したのち加圧過し、
液131を得た。 この液を10規定水酸化ナトリウム水溶液で中
和し、これに4600ｇの活性炭を添加して撹拌し、
12時間放置した。放置後活性炭を遠心分離により
取した。 取した活性炭を水洗し、ついで吸着物質を50
％含水イソプロパノールで溶出し、溶出液104
を採取した。この溶出液をダウエツクス50W−
X2（H+型）のカラム（直径8.0×100cm）に通し、
固定相を十分水洗いしたのち吸着した物質を２規
定希塩酸で溶出し、溶出液21を採取した。 この溶出液を10規定水酸化ナトリウム水溶液を
用いて中和し、活性炭処理して脱塩したのち減圧
乾固し、ついで凍結乾燥して本発明化合物〔〕
を含有する淡黄色の粗粉末148ｇを得た。粗粉末
の理化学的性質は以下の通りであつた。 比旋光度；〔α〕20 D＝＋163゜（Ｃ＝1.0，水） 総重量に対する構成糖含量；72.6％ 糖質分解酵素阻害活性；309AIU・mg 1412GIU／mg NS1〜９の単離精製（液クロ法） 上述の粗粉末20.0ｇを１規定希塩酸200mlに溶
解し、約128℃で10分間撹拌し加水分解を行つた。
得られた反応液を水で希釈し、PH1.5に調整し、
これをダウエツクス50W−X2（H+型）のカラム
（直径4.0×25cm）に通したのち十分に水洗いし
た。カラムの固定相に吸着した物質を１規定アン
モニア水溶液で溶出し、これを減圧乾固したとこ
ろ精製粉末7.2ｇを得た。この精製粉末を約200ml
の水に溶解し、これを活性炭カラム（直径6.0×
50cm）に通した。固定相を５％含水エタノールで
洗浄し、ついで固定相に吸着した物質を40％含水
エタノールで溶出した。得られた溶出液を減圧乾
固し、白色粉末3.8ｇを得た。この粉末を70％含
水アセトニトリル55mlに溶解し、これをマイクロ
ボンダパツクCHカラム（直径3.9×300mm）を使
用する高速液体クロマトグラフ法（流速2.0ml／
分、溶出溶媒70％含水アセトニトリル）により
Rt値を指標として分画した。指標としたRt値は
それぞれ4.8分、5.9分、6.9分、7.7分、8.9分、9.9
分、11.2分、12.2分及び14.5分であつた。得られ
た各分画液を各々約５ml容量になるまで減圧濃縮
し、ついで遠心分離して上澄液を採取した。この
各上澄液を減圧乾固し、得られた残留物をそれぞ
れ一昼夜真空乾燥したところ、450mgのNS1，275
mgのNS2、140mgのNS3、360mgのNS4、216mgの
NS5、204mgのNS6、128mgのNS7、150mgのNS8
及び66mgのNS9をそれぞれ白色粉末として得た。 製造例 ２ NS1，２及び４の単離精製（ゲル過法） 製造例１のの工程で得られた粗粉末700mgを
２規定トリフルオロ酢酸水溶液７mlに溶解し、約
120℃で20分間撹拌下に加水分解した。得られた
反応液を水で希釈しPH７に調整した。この調整液
をダウエツクス50W−X2（H+型）のカラム（直
径2.0×10cm）に通し、固定相を十分水で洗浄し
たのち、該固定相に吸着した物質を１規定アンモ
ニア水溶液で溶出した。得られた溶出液を減圧乾
固したところ精製粉末360mgを得た。この精製粉
末を２mlの水に溶解し、これをバイオゲルＰ−２
（400メツシユ）のカラム（直径1.6×100cm）を用
いてゲル過を行つた。溶出溶媒は水を使用し、
流速は2.0ml／時、カラム温度は55℃になるよう
に設定した。ついで前述のRt値測定法条件Ｂで
測定したRt値がそれぞれ3.3分、3.9分及び4.6分で
あつた分画液を採集した。採集した各分画液を減
圧乾固し、一昼夜真空下で乾燥したところ40mgの
NS1，19mgのNS2及び10mgのNS4をそれぞれ白色
粉末として得た。 製造例 ３ NS1，２及び４の単離精製（アセチル化法） 製造例１のの工程で得られた粗粉末2.0ｇを
２規定のトリフルオロ酢酸水溶液40ml中で２時
間、約95℃に加熱して加水分解した。得られた反
応液を水でPH1.1まで希釈し、これをアンバーラ
イトIR−118のカラム（直径2.0×20cm）に付し、
十分水洗後、固定相に吸着した物質を１規定のア
ンモニア水溶液で溶出した。この溶出液を減圧乾
固したところ精製粉末0.8ｇを得た。この粉末を
40mlの無水酢酸−ピリジン混合液（容量比１：
１）に溶解し、室温で一昼夜放置してアセチル化
した。この反応液に氷水400mlを注入し30分間撹
拌したのち、これにクロロホルム150mlを添加し
た。ついでクロロホルム層を分取し、該層を水
300ml、0.05規定希塩酸300ml及び水300mlで順次
洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。このよ
うにして得られたクロロホルム溶液を減圧乾固し
たところ、精製粉末のアセチル化物1.4ｇを得た。
このアセチル化物をベンゼン10mlに溶解し、これ
を固定相として100ｇのシリカゲル（230〜400メ
ツシユ）を用いたカラムに通した。固定相に吸着
した物質を酢酸エチルエステル−ベンゼン混合液
（容量比１：3.0）で溶出し、得られた溶出液を減
圧乾固したところNS1のアセチル化物310mgを得
た。ついで同様にして該固定相に残存する吸着物
質を順次、混合溶量比を１：2.0及び１：1.8に調
製した酢酸エチルエステル−ベンゼン混合液で溶
出し、NS2及び４のアセチル化物をそれぞれ113
mg及び73mg得た。各化合物のアセチル化物をそれ
ぞれ過剰量のアンモニア飽和メタノール溶液中
で、室温下12時間撹拌することにより脱アセチル
化した。この反応液を減圧乾固し、得られた各残
留物を0.05規定希塩酸３mlにそれぞれ溶解した。
得られた各溶液を別個にダウエツクス50W−X2
（H+型）のカラム（直径2.0×20cm）に通し、固
定相を十分に水洗したのち吸着物質を１規定アン
モニア水溶液で溶出した。各溶出液を減圧乾固
し、真空下で一昼夜乾燥したところ、165mgの
NS1、60mgのNS2及び38mgのNS4をそれぞれ白色
粉末として得た。 製造例 ４ NS1及び２の単離精製（活性炭法） 製造例１のの工程で得られた粗粉末10.0ｇを
２規定のトリフルオロ酢酸水溶液500mlに溶解し、
撹拌下に2.5時間約95℃に加熱して加水分解した。
得られた反応液を水でPH2.0になるよう希釈し、
これをアンバーライトIR−118のカラム（直径4.0
×25cm）に通し、固定相を十分に水洗したのち吸
着物質を１規定アンモニア水溶液で溶出した。こ
の溶出液を減圧乾固し、得られた精製粉末を水
200mlに溶解し、ついでこれを活性炭カラム（直
径4.5×45cm）に通した。このカラム固定相に吸
着した物質を、混合比率３％を上限とする含水ノ
ルマルブタノールで直線濃度勾配溶出法により溶
出した。ついで前述のRt値測定法条件ＢでのRt
値が3.3分及び3.9分を示した分画液を各々採集し
た。採集した両分画液を別個に減圧乾固し、真空
下に一昼夜乾燥したところ、510mgのNS1及び320
mgのNS2の白色粉末を得た。 製造例 ５ NS10〜17の単離精製 製造例１のの工程で得られた粗粉末5.0ｇを
水70mlに溶解し、これを活性炭カラム（直径4.0
×60cm）に通した。固定相を10％含水エタノール
で十分に洗浄し、該相に吸着した物質を50％含水
イソプロパノールで溶出し、これを減圧乾降固し
たところ白色粉末4.1ｇを得た。この粉末を65％
含水アセトニトリル82mlに溶解し、これをマイク
ロボンダパツクCHカラム（直径3.9×300mm）を
使用する高速液体クロマトグラフ法（流速2.0
ml／分、溶出溶媒65％含水アセトニトリル）によ
りRt値を指標として分画した。指標としたRt値
はそれぞれ7.5〜8.8分、9.2〜10.6分、10.9〜12.6
分、13.0〜15.1分、15.7〜18.0分、18.6〜21.3分、
21.7〜25.5分及び26.2〜30.6分であつた。得られ
た各分画液を各々約５ml容量になるまで濃縮し、
ついで遠心分離して各上澄液を採取した。この各
上澄液を減圧乾固し、真空下に一昼夜乾燥したと
ころ、245mgのNS10、271mgのNS11、282mgの
NS12、310mgのNS13、174mgのNS14、69ｇの
NS15、42mgのNS16及び21mgのNS17をそれぞれ
白色粉末として得た。 参考例 NSOの製造 製造例１のの工程で得られた粗粉末5.0ｇを
2.5規定希塩酸35ml中で1.5時間加熱還流し加水分
解した。この反応液を水で希釈しPH1.5に調整し、
これをダウエツクス50W−X2（H+型）のカラム
（直径3.0×30cm）に通した。カラムの固定相を十
分に水洗したのち吸着した物質を３規定アンモニ
ア水溶液で溶出した。この溶出液を減圧乾固し、
得られた残留物を水50mlに溶解した。この溶液を
ダウエツクス１−X2（OH-型；ダウ・ケミカル社
製）のカラム（直径3.0×20cm）に通し、流出液
を採取した。カラムの固定相を水800mlで洗浄し、
洗浄液と該流出液とを一つにまとめて減圧乾固
し、白色粉末0.6ｇを得た。この粉末を40mlの無
水酢酸−ピリジン混合液（容量比１：１）に溶解
し、室温で12時間撹拌した。この反応液を氷水
400mlに注入し30分間撹拌したのちこれにクロロ
ホルム150mlを添加した。ついでクロロホルム層
を分取し、該層を水900ml、0.05規定希塩酸900ml
及び水900mlで順次洗浄したのち、無水硫酸ナト
リウムで乾燥した。得られたクロロホルム溶液を
減圧乾固したところ残留物1.1ｇを得た。この残
留物をトルエン10mlに溶解し、これを固定相とし
て120ｇのシリカゲル（70〜230メツシユ）を用い
たカラムに通し、固定相に吸着した物質をトルエ
ン−酢酸エチルエステル混合液（容量比２：１）
で溶出した。得られた溶出液を減圧乾固し、
NSOのヘキサアセテート490mgを得た。この化合
物を過剰量のアンモニア飽和メタノール溶液に溶
解し、30分間撹拌することにより脱アセチル化し
た。この反応液を減圧乾固し、得られた残留物を
0.05規定希塩酸10mlに溶解し、これをダウエツク
ス50W−X2（H+型）のカラム（直径2.0×20cm）
に通し、固定相を十分水洗したのち吸着物質を１
規定アンモニア水溶液で溶出した。この溶出液を
減圧乾固し、真空下で一昼夜乾燥したところ250
mgのNSOを白色粉末として得た。 元素分析（C13H21NO8として）； 理論値（％） Ｃ，48.90 Ｈ，6.63 Ｎ，4.39 実測値（％） 48.88 6.78
4.38 分子量；319 EIマススペクトル ｍ／ｚ 319 M+ FDマススペクトル ｍ／ｚ 320（Ｍ＋Ｈ）+ Rt値（Rt値測定法条件Ｂ）；2.6分 比旋光度；〔α〕20 D＝＋62゜（Ｃ＝0.5，水） 紫外線吸収スペクトル（水溶液）； 末端吸収を示す。 赤外線吸収スペクトル（KBr錠、νnaxcm-1）； 3400，2930，1080 溶剤に対する溶解性 水、メタノールに易溶、エタノール、ジメチ
ルスルホキシドに可溶、ベンゼン、ノルマルヘ
キサンに不溶 塩基性、酸性、中性の区別 塩基性 NSOのヘキサアセテートの融点； 204.5〜206℃ NSOのヘキサアセテートの核磁気共鳴スペク
トル（200MHz、CDCl3、ppm）； 1.39 3H，ｄ Ｊ＝6.34 2.03〜2.10 18H 3.33 1H，ｄ，ｄ J1＝8.30，J2＝4.64 3.50 1H，ｄ Ｊ＝2.44 3.74 1H，ｄ，ｄ J1＝8.05，J2＝2.44 3.84 1H，ｄ Ｊ＝11.96 4.33 1H，ｄ，ｄ J1＝8.05，J2＝7.32 4.43 1H，ｄ Ｊ＝11.96 4.94 1H，ｄ，ｄ J1＝6.34，J2＝4.64 5.02 1H，ｄ Ｊ＝3.91 5.30 1H，ｄ，ｄ J1＝6.84，J2＝3.91 5.32 1H，ｄ，ｄ J1＝9.77，J2＝7.32 5.57 1H，ｄ，ｄ J1＝8.30，J2＝6.84
体〔〕は糖尿病、高脂血症又は肥満等の治療薬
又は予防薬として有用な化合物である。 本発明を製造例及び参考例をもつて更に説明す
る。 製造例 １ 粗粉末の製造 オートミール3.0％（Ｗ／Ｖ）、ペプトン1.0％
（Ｗ／Ｖ）及び塩化ナトリウム0.5％（Ｗ／Ｖ）を
含有するPH7.8に調整された無菌の液体培地にス
トレプトマイセス・フラボクロモゲネスNo.280菌
を接種し、約30℃で２日間回転振盪培養し種培養
物1630mlを得た。この種培養物を予め無菌処理さ
れた上述の液体培地と同様な組成を有する生産用
培地150に移植し、300容量のジヤーフアーメ
ンターを用いて約30℃で６日間本培養した。本培
養開始時のPHは7.4、通気量は150／分、回転速
度は250r.p.m.で行つた。 つぎに、本培養して得られた培養物を遠心分離
し、上澄液133を得た。この上澄液を12規定希
硫酸を用いてPH2.5に調整し、これに670ｇの活性
炭を添加して１時間撹拌したのち加圧過し、
液131を得た。 この液を10規定水酸化ナトリウム水溶液で中
和し、これに4600ｇの活性炭を添加して撹拌し、
12時間放置した。放置後活性炭を遠心分離により
取した。 取した活性炭を水洗し、ついで吸着物質を50
％含水イソプロパノールで溶出し、溶出液104
を採取した。この溶出液をダウエツクス50W−
X2（H+型）のカラム（直径8.0×100cm）に通し、
固定相を十分水洗いしたのち吸着した物質を２規
定希塩酸で溶出し、溶出液21を採取した。 この溶出液を10規定水酸化ナトリウム水溶液を
用いて中和し、活性炭処理して脱塩したのち減圧
乾固し、ついで凍結乾燥して本発明化合物〔〕
を含有する淡黄色の粗粉末148ｇを得た。粗粉末
の理化学的性質は以下の通りであつた。 比旋光度；〔α〕20 D＝＋163゜（Ｃ＝1.0，水） 総重量に対する構成糖含量；72.6％ 糖質分解酵素阻害活性；309AIU・mg 1412GIU／mg NS1〜９の単離精製（液クロ法） 上述の粗粉末20.0ｇを１規定希塩酸200mlに溶
解し、約128℃で10分間撹拌し加水分解を行つた。
得られた反応液を水で希釈し、PH1.5に調整し、
これをダウエツクス50W−X2（H+型）のカラム
（直径4.0×25cm）に通したのち十分に水洗いし
た。カラムの固定相に吸着した物質を１規定アン
モニア水溶液で溶出し、これを減圧乾固したとこ
ろ精製粉末7.2ｇを得た。この精製粉末を約200ml
の水に溶解し、これを活性炭カラム（直径6.0×
50cm）に通した。固定相を５％含水エタノールで
洗浄し、ついで固定相に吸着した物質を40％含水
エタノールで溶出した。得られた溶出液を減圧乾
固し、白色粉末3.8ｇを得た。この粉末を70％含
水アセトニトリル55mlに溶解し、これをマイクロ
ボンダパツクCHカラム（直径3.9×300mm）を使
用する高速液体クロマトグラフ法（流速2.0ml／
分、溶出溶媒70％含水アセトニトリル）により
Rt値を指標として分画した。指標としたRt値は
それぞれ4.8分、5.9分、6.9分、7.7分、8.9分、9.9
分、11.2分、12.2分及び14.5分であつた。得られ
た各分画液を各々約５ml容量になるまで減圧濃縮
し、ついで遠心分離して上澄液を採取した。この
各上澄液を減圧乾固し、得られた残留物をそれぞ
れ一昼夜真空乾燥したところ、450mgのNS1，275
mgのNS2、140mgのNS3、360mgのNS4、216mgの
NS5、204mgのNS6、128mgのNS7、150mgのNS8
及び66mgのNS9をそれぞれ白色粉末として得た。 製造例 ２ NS1，２及び４の単離精製（ゲル過法） 製造例１のの工程で得られた粗粉末700mgを
２規定トリフルオロ酢酸水溶液７mlに溶解し、約
120℃で20分間撹拌下に加水分解した。得られた
反応液を水で希釈しPH７に調整した。この調整液
をダウエツクス50W−X2（H+型）のカラム（直
径2.0×10cm）に通し、固定相を十分水で洗浄し
たのち、該固定相に吸着した物質を１規定アンモ
ニア水溶液で溶出した。得られた溶出液を減圧乾
固したところ精製粉末360mgを得た。この精製粉
末を２mlの水に溶解し、これをバイオゲルＰ−２
（400メツシユ）のカラム（直径1.6×100cm）を用
いてゲル過を行つた。溶出溶媒は水を使用し、
流速は2.0ml／時、カラム温度は55℃になるよう
に設定した。ついで前述のRt値測定法条件Ｂで
測定したRt値がそれぞれ3.3分、3.9分及び4.6分で
あつた分画液を採集した。採集した各分画液を減
圧乾固し、一昼夜真空下で乾燥したところ40mgの
NS1，19mgのNS2及び10mgのNS4をそれぞれ白色
粉末として得た。 製造例 ３ NS1，２及び４の単離精製（アセチル化法） 製造例１のの工程で得られた粗粉末2.0ｇを
２規定のトリフルオロ酢酸水溶液40ml中で２時
間、約95℃に加熱して加水分解した。得られた反
応液を水でPH1.1まで希釈し、これをアンバーラ
イトIR−118のカラム（直径2.0×20cm）に付し、
十分水洗後、固定相に吸着した物質を１規定のア
ンモニア水溶液で溶出した。この溶出液を減圧乾
固したところ精製粉末0.8ｇを得た。この粉末を
40mlの無水酢酸−ピリジン混合液（容量比１：
１）に溶解し、室温で一昼夜放置してアセチル化
した。この反応液に氷水400mlを注入し30分間撹
拌したのち、これにクロロホルム150mlを添加し
た。ついでクロロホルム層を分取し、該層を水
300ml、0.05規定希塩酸300ml及び水300mlで順次
洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。このよ
うにして得られたクロロホルム溶液を減圧乾固し
たところ、精製粉末のアセチル化物1.4ｇを得た。
このアセチル化物をベンゼン10mlに溶解し、これ
を固定相として100ｇのシリカゲル（230〜400メ
ツシユ）を用いたカラムに通した。固定相に吸着
した物質を酢酸エチルエステル−ベンゼン混合液
（容量比１：3.0）で溶出し、得られた溶出液を減
圧乾固したところNS1のアセチル化物310mgを得
た。ついで同様にして該固定相に残存する吸着物
質を順次、混合溶量比を１：2.0及び１：1.8に調
製した酢酸エチルエステル−ベンゼン混合液で溶
出し、NS2及び４のアセチル化物をそれぞれ113
mg及び73mg得た。各化合物のアセチル化物をそれ
ぞれ過剰量のアンモニア飽和メタノール溶液中
で、室温下12時間撹拌することにより脱アセチル
化した。この反応液を減圧乾固し、得られた各残
留物を0.05規定希塩酸３mlにそれぞれ溶解した。
得られた各溶液を別個にダウエツクス50W−X2
（H+型）のカラム（直径2.0×20cm）に通し、固
定相を十分に水洗したのち吸着物質を１規定アン
モニア水溶液で溶出した。各溶出液を減圧乾固
し、真空下で一昼夜乾燥したところ、165mgの
NS1、60mgのNS2及び38mgのNS4をそれぞれ白色
粉末として得た。 製造例 ４ NS1及び２の単離精製（活性炭法） 製造例１のの工程で得られた粗粉末10.0ｇを
２規定のトリフルオロ酢酸水溶液500mlに溶解し、
撹拌下に2.5時間約95℃に加熱して加水分解した。
得られた反応液を水でPH2.0になるよう希釈し、
これをアンバーライトIR−118のカラム（直径4.0
×25cm）に通し、固定相を十分に水洗したのち吸
着物質を１規定アンモニア水溶液で溶出した。こ
の溶出液を減圧乾固し、得られた精製粉末を水
200mlに溶解し、ついでこれを活性炭カラム（直
径4.5×45cm）に通した。このカラム固定相に吸
着した物質を、混合比率３％を上限とする含水ノ
ルマルブタノールで直線濃度勾配溶出法により溶
出した。ついで前述のRt値測定法条件ＢでのRt
値が3.3分及び3.9分を示した分画液を各々採集し
た。採集した両分画液を別個に減圧乾固し、真空
下に一昼夜乾燥したところ、510mgのNS1及び320
mgのNS2の白色粉末を得た。 製造例 ５ NS10〜17の単離精製 製造例１のの工程で得られた粗粉末5.0ｇを
水70mlに溶解し、これを活性炭カラム（直径4.0
×60cm）に通した。固定相を10％含水エタノール
で十分に洗浄し、該相に吸着した物質を50％含水
イソプロパノールで溶出し、これを減圧乾降固し
たところ白色粉末4.1ｇを得た。この粉末を65％
含水アセトニトリル82mlに溶解し、これをマイク
ロボンダパツクCHカラム（直径3.9×300mm）を
使用する高速液体クロマトグラフ法（流速2.0
ml／分、溶出溶媒65％含水アセトニトリル）によ
りRt値を指標として分画した。指標としたRt値
はそれぞれ7.5〜8.8分、9.2〜10.6分、10.9〜12.6
分、13.0〜15.1分、15.7〜18.0分、18.6〜21.3分、
21.7〜25.5分及び26.2〜30.6分であつた。得られ
た各分画液を各々約５ml容量になるまで濃縮し、
ついで遠心分離して各上澄液を採取した。この各
上澄液を減圧乾固し、真空下に一昼夜乾燥したと
ころ、245mgのNS10、271mgのNS11、282mgの
NS12、310mgのNS13、174mgのNS14、69ｇの
NS15、42mgのNS16及び21mgのNS17をそれぞれ
白色粉末として得た。 参考例 NSOの製造 製造例１のの工程で得られた粗粉末5.0ｇを
2.5規定希塩酸35ml中で1.5時間加熱還流し加水分
解した。この反応液を水で希釈しPH1.5に調整し、
これをダウエツクス50W−X2（H+型）のカラム
（直径3.0×30cm）に通した。カラムの固定相を十
分に水洗したのち吸着した物質を３規定アンモニ
ア水溶液で溶出した。この溶出液を減圧乾固し、
得られた残留物を水50mlに溶解した。この溶液を
ダウエツクス１−X2（OH-型；ダウ・ケミカル社
製）のカラム（直径3.0×20cm）に通し、流出液
を採取した。カラムの固定相を水800mlで洗浄し、
洗浄液と該流出液とを一つにまとめて減圧乾固
し、白色粉末0.6ｇを得た。この粉末を40mlの無
水酢酸−ピリジン混合液（容量比１：１）に溶解
し、室温で12時間撹拌した。この反応液を氷水
400mlに注入し30分間撹拌したのちこれにクロロ
ホルム150mlを添加した。ついでクロロホルム層
を分取し、該層を水900ml、0.05規定希塩酸900ml
及び水900mlで順次洗浄したのち、無水硫酸ナト
リウムで乾燥した。得られたクロロホルム溶液を
減圧乾固したところ残留物1.1ｇを得た。この残
留物をトルエン10mlに溶解し、これを固定相とし
て120ｇのシリカゲル（70〜230メツシユ）を用い
たカラムに通し、固定相に吸着した物質をトルエ
ン−酢酸エチルエステル混合液（容量比２：１）
で溶出した。得られた溶出液を減圧乾固し、
NSOのヘキサアセテート490mgを得た。この化合
物を過剰量のアンモニア飽和メタノール溶液に溶
解し、30分間撹拌することにより脱アセチル化し
た。この反応液を減圧乾固し、得られた残留物を
0.05規定希塩酸10mlに溶解し、これをダウエツク
ス50W−X2（H+型）のカラム（直径2.0×20cm）
に通し、固定相を十分水洗したのち吸着物質を１
規定アンモニア水溶液で溶出した。この溶出液を
減圧乾固し、真空下で一昼夜乾燥したところ250
mgのNSOを白色粉末として得た。 元素分析（C13H21NO8として）； 理論値（％） Ｃ，48.90 Ｈ，6.63 Ｎ，4.39 実測値（％） 48.88 6.78
4.38 分子量；319 EIマススペクトル ｍ／ｚ 319 M+ FDマススペクトル ｍ／ｚ 320（Ｍ＋Ｈ）+ Rt値（Rt値測定法条件Ｂ）；2.6分 比旋光度；〔α〕20 D＝＋62゜（Ｃ＝0.5，水） 紫外線吸収スペクトル（水溶液）； 末端吸収を示す。 赤外線吸収スペクトル（KBr錠、νnaxcm-1）； 3400，2930，1080 溶剤に対する溶解性 水、メタノールに易溶、エタノール、ジメチ
ルスルホキシドに可溶、ベンゼン、ノルマルヘ
キサンに不溶 塩基性、酸性、中性の区別 塩基性 NSOのヘキサアセテートの融点； 204.5〜206℃ NSOのヘキサアセテートの核磁気共鳴スペク
トル（200MHz、CDCl3、ppm）； 1.39 3H，ｄ Ｊ＝6.34 2.03〜2.10 18H 3.33 1H，ｄ，ｄ J1＝8.30，J2＝4.64 3.50 1H，ｄ Ｊ＝2.44 3.74 1H，ｄ，ｄ J1＝8.05，J2＝2.44 3.84 1H，ｄ Ｊ＝11.96 4.33 1H，ｄ，ｄ J1＝8.05，J2＝7.32 4.43 1H，ｄ Ｊ＝11.96 4.94 1H，ｄ，ｄ J1＝6.34，J2＝4.64 5.02 1H，ｄ Ｊ＝3.91 5.30 1H，ｄ，ｄ J1＝6.84，J2＝3.91 5.32 1H，ｄ，ｄ J1＝9.77，J2＝7.32 5.57 1H，ｄ，ｄ J1＝8.30，J2＝6.84
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 一般式 （式中ｍは０〜12の整数を、ｎは１〜13の整数
を表わし、且つｍ＋ｎが１〜13の整数であること
を表わす。）で示されるアミノオリゴ糖誘導体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57055487A JPS58172400A (ja) | 1982-04-05 | 1982-04-05 | 新規なアミノオリゴ糖誘導体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57055487A JPS58172400A (ja) | 1982-04-05 | 1982-04-05 | 新規なアミノオリゴ糖誘導体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58172400A JPS58172400A (ja) | 1983-10-11 |
| JPH0319239B2 true JPH0319239B2 (ja) | 1991-03-14 |
Family
ID=12999980
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57055487A Granted JPS58172400A (ja) | 1982-04-05 | 1982-04-05 | 新規なアミノオリゴ糖誘導体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58172400A (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2056801T3 (es) * | 1986-08-13 | 1994-10-16 | Hoechst Ag | Oxirano-seudooligosacaridos, procedimiento para su preparacion, su utilizacion y preparados farmaceuticos. |
| KR960022566A (ko) * | 1994-12-30 | 1996-07-18 | 김충환 | 신규한 아미노올리고당 유도체 및 그의 제조방법 |
| CN104082320B (zh) * | 2014-07-18 | 2016-06-22 | 江苏省绿盾植保农药实验有限公司 | 一种含有氨基寡糖素和苯噻菌胺复配的杀菌组合物及其应用 |
-
1982
- 1982-04-05 JP JP57055487A patent/JPS58172400A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58172400A (ja) | 1983-10-11 |
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