JPH03200763A - 薬物の検出用試剤 - Google Patents

薬物の検出用試剤

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JPH03200763A
JPH03200763A JP2056817A JP5681790A JPH03200763A JP H03200763 A JPH03200763 A JP H03200763A JP 2056817 A JP2056817 A JP 2056817A JP 5681790 A JP5681790 A JP 5681790A JP H03200763 A JPH03200763 A JP H03200763A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、体液のイムノアッセイ試験による薬物の検出
の分野に関する。さらに詳しくは、本発明ハ、微粒子ベ
ースのイムノアッセイフォーマットに一連して、感度が
よく、特異的で、再現性のある成果を与える試剤の探究
に関する。楽、ｗＩ乱用と治僚桑剤の両者を検出するた
めのこのような検定における改良の必要性は広く認めら
れている。
薬物検出のイムノアッセイ的なアプローチでは、様々な
母体薬物、薬物代謝物ならびに合成薬＠誘導体が、様々
な検定システムにおける１ｍまたは２１に以上の試剤の
開発のためにハプテンの起点として検討されてきた。こ
れらの株々な化合物は、それ０坏ハシテンとして使用さ
れた場合、または特定のイムノアッセイフォーマットに
用いられるかもしくはそれに用いるためにさらに改変さ
れた場合、それぞれに利点および欠点がある。
このような化合物を、微粒子ベースのイムノアッセイに
おけるハプテン性すガ／ドとして、様々なシステムにお
ける微粒子基質に結合させて使用することも検討されて
きた。通常、これらのシステムは、速度、峙異性、およ
びとくにｆＬ喪な点として、サンプル中に存在する抗体
または薬物と微粒子に結合したりガントの最終的な相互
作用または競合の増進を０懺とするものである。
本発明は、体液サンプルについての抗体を介する診断試
験により薬物の使用を検出するための新規な試剤に胸す
る。本発明の試剤は、式％式％） で表される。式中、 Ｄは、標的果物または標的果物代謝物の存在を定量する
ために過当に、抗原的に選択された薬物誘導体であり、 Ａは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドまたはインチオシ
アネート誘導連結残基を有する活性化リンカー−スペー
サー基であり、 Ｐは、ムと共有結合できるポリ（アミノ酸）またはポリ
マーであり、 ｎは１未満である。
上述の接合体々らびに、本発明に使用するために構築さ
れた数種の活性化薬物誘導体Ａ−Ｄから組立てられた微
粒子試剤は、さらに本発明の新規な態様である。
第１−は、ラテックス微粒子試剤をベースとした凝集度
検定に用いた場合の、本発明の接合体ｐ（Ａ−Ｄ、）、
の製造に使用されるＡ−ＤとＰ反応体の化学量論比に対
する反応感度の鋤体をプロットしたものである。反応性
は、０〜４の相対尺度による凝集度としてプロットした
。グラフは、ＰｃＰ（フェンサイクリジン）活性化誘導
体Ｎ−（１−（４−イソチオシアネート）エチル］−４
−［１−（１−ピペリジニル）−１−シクロヘキシル〕
安息香酸アミドおよびペンゾイルエクゴニン誘導体［Ｉ
Ｒ−（エキン、エキン、アンチ）〕−８−メチル−３−
〔（４−［〔（〔（（〔（２，５−ジオキソ−ピロリジ
ン−１−イル）オキソ〕カルボニル〕フェニル〕アミノ
〕（テオキンメチルン〕アミノ〕メチル〕ベンゾイル〕
オキシ〕ビシクロ［３，２，１）オクタン−２−カルボ
ン飯について様々の比で、いずれへもウシ血清アルブミ
ン−ラテックス微粒子試剤として用いた場合の結果であ
る。
本発明は、抗体を介する体液の試験で薬物使用を検出す
るのに有用かつ新規々試剤を提供するものである。本発
明の試剤は、ポリ（アミノ酸）またはポリマー接合体か
らなり、これが一方では微粒子マ）ＩＪラックス結合さ
せるための介在試剤として有用であって、ラテックス凝
集のような微粒子ベース試験用のとくに迅速に作用し、
感度のよい、正確な試剤を提供する。本発明の試剤は、
式％式％） （式中、 Ｄは、標的薬物または標的薬物代ＩＷ物の存在を定量す
るために適当に、抗原的に選択された薬物誘導体であり
、 Ａは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイ□ドまたはインチオシ
アネート誘導連結残基を有する活性化リンカー−スペー
サー基であり、 Ｐは、Ａと共有結合できるポリ（アミノＭ）またはポリ
マーであり、 ｎは１未満である） に相当する。
本試剤に使用できる接合体としては、ポリ（アミノ酸）
構造の一部であるアミノ基への接合体がとくに有利であ
る。ポリ（アミノ酸）としては、天然または合成のポリ
ペプチドおよびタンパク負の両者が包含される。ポリ（
アミノ酸）またはアミノ基含有ポリマーに対する活性化
エステルの接合は、過当な割合の活性化エステルを穏和
な条件下、通常は約６〜９の一範囲の有機／緩衝水溶液
中、ポリ（アミノ酸）またはアミノポリマーと混合する
ことによって行われる。本＝ｂ＋の試剤の製造に通常有
用７ｊポリ（アミノ＃Ｒ）はウシ血清アルブミン（ＢＳ
Ａ　）である。
活性化薬物誘導体Ａ−Ｄとポリ（アミノ酸）またはポリ
マーの比は、本発明の試剤ならびにそれによる診断試験
における薬物検出の高度な感度および伯槌性に必須の特
徴である。その優れた抗原反応性により、本発明の活性
化楽ａｐｌ）誘導体では、Ａ−ＤとＰの比ｎは１未満、
通常は０．５未満でなげればならないことが明らかにさ
れた。すなわち、Ａ−ＤとＰの接合反応から期待できる
通常１００％未満の収率から（本発明の活性化薬物とた
とえばウシ血清アルブミンの収率は通常５０〜７５％の
範囲である）、この反応のム−ＤとＰ（ＱｉＩ！初の化
学ｉ論比はこのように選択されなければならない。
本発明による与えられた活性化薬ＩｋＪ１１！導体につ
いての至適な比ｎは、所望のアッセイフォーマットにお
ける反応感度を反応体すなわちＡ−Ｄ／Ｐの化学量論比
に対してプロットすると容易に決定できる。第１図には
、ＰＣＰ（７エンサイクリジン）およびコカイン（ペン
ゾイルエクゴニン）試剤について、ラテックス凝集アッ
セイフォーマットでこのようなプロットを行った場合の
典型的な結果である。標準的な実務では、これらのアッ
セイは、最小臨床有効カットオフ１１１度、すなわち１
Ｊａｔｉｏｎａｌ工ｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｏｎ　Ｄｒｕｇ
　Ａｂｕｓｅ　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＨｅａｌ
ｔｈ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　Ｅｌｅｒｖｉｃｅａ　）に
よって規定されているたとえば７エンサイクリジンでは
２５　ｎＪＩ、〆ｕ１コカインでは３００　ｎ＃／−に
対して行われる。
活性化リンカー−スペーサー基ムは、式（式中、Ｘは任
意のスペーサー基で、ベンゼン、アミド、チオ尿素もし
くは尿素基、または直鎖状もしくは分岐状の０１−１０
の脂肪族鎖あるいはこれらの組合せからなる）で示され
る基とすることができる。
薬物誘導体りは、標的薬物自体、その代謝物、または体
液に験サンプルたとえば尿中の標的薬物もしくは薬物代
謝物の存在を指示するような十分に抗原的に選択性の他
の任意の誘導体とすることができる。
活性化基Ａは、選ばれた薬物、薬物代ＰＭ物または薬物
誘導体と、立体性および反応性の点で適当な部位に共有
結合で連結される。薬物濫用の場合の試剤は以下のもの
が好ましｂｏ アンフェタミンおよびメタンフェタミンの場合：ベンゼ
ン環のオルト、メタまたはパラ位、好ましくはパラ位の
炭素に、 ＴＥＣｆ）場合：Δ１ＩＴＨＣ誘導体の９位の炭素に、
バルビッール酸の場合：５−置換バルビツールｉ１１！
誘導体の５位の炭素に、 フェンサイクリジンの場合：ベンゼン環のオルト、メタ
またはパラ位、好ましくはパラ位に、モルフインの場合
：３−ヒドロキシルに、ベンゾイルエクゴニンの場合：
ベンゼン環のメタまたはパラ位、好ましくはパラ位に、
１．４−ベンゾジアゼピンの場合：１−窒素に。
Ｐの反応性アミノ基はアミド（Ｎ−ヒドロキシスクシン
イミドエステルの場合）または尿素もしくはチオ尿素（
インチオシアネートの場合）結合によってＡに結合する
。
ついで精製したタンパク質接合体を、薬物の検出のため
の特異的診断試験において抗原性試薬として用いられる
微粒子に共有結合的にまたは疎水的に、通常は共有結合
的に付着させる。
活性化薬物誘導体−タンパク質接合体の共有結合的付着
に適当な微粒子としては、カルボキシル化スチレンブタ
ジェン、カルボキシル化ポリスチレン、アクリル酸ポリ
マー等がある。タンパク質接合体の疎水性付着に適当々
微粒子はポリスチレン、ポリビニルトルエン、ポリビニ
ルベンゼン、ポリ塩化ビニル、ポリ三級ブチルスチレン
等である。活性化エステルの直接の共有結合付着に適当
な微粒子は、アミノポリスチレン、アミノポリビニルト
ルエン等である。タンパク質接合体の付着に過当な磁性
微粒子は、磁性金属たとえば酸化第一または第二鉄を含
浸させた各ポリマーである。
微粒子のサイズは通常、約０．０１から約１．０ミクロ
ンの範囲である。磁性ｎｍ子のサイズは約０．１から約
２０ミクロンの範囲とする。
特定の微粒子結合生成物が形成されたならば、それは生
物学的液体中の薬物検出用の特異的診断試験に利用する
ことができる。それは、特定の試製、結果の読み取り様
式、また測定されるサンプルの種類に応じて、任意の有
利なｌＩｌ＆で使用できる。肉眼で見えるようにした尿
ラテックスアッセイでは、ラテックス固体の重量濃度を
約０．１から約５．０％とする。濁度な３４０〜７２０
　ｎｍにおいて測定するための装置を用いた尿ラテック
スアッセイでは、ラテックス固体の重量濃度を約０．０
０１から約１．０％とする。典型的な可視ラテックス試
験は、米国特許第４，１０１，５４９号に記載されてい
る。
バルビッール酸の場合、好ましい活性化薬物誘導体は、
式 で示されるＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル誘導
体である。
上記誘導体は、本発明による他の有用な誘導体とともに
、米国特許第４．１０１，５４９号に開示されたよ５７
’、Ｃ適当なバルビッール酸誘導体をカルボジイミドの
存在下にＮ−ヒドロキシスクシンイミドと反応させるこ
とによって製造できる。一方、好ましい接合体試剤は、
活性化薬物誘導体をポリ（アミノ酸）またはポリマーに
、一般的にはアミド結合を介して結合させることにより
形成させることができる。
モルフインの場合、好ましい活性化薬物誘導体は、式 （式中、Ｒ１は水素、メチルまたはアセチル、好ましく
は水素であり、ａは２〜１８、好ましくは５であり、イ
ンチオシアネート残基はメタまたはパラ位にある）で示
されるインチオシアネート誘導体である。
これらのイソチオシアネートは、適当に保護されたアミ
ノ安息香酸を、たとえば米国特許第３，８８８．８６４
号に開示されたような所望のアルキルア□ノオビエート
誘導体と反応させることにより製造できる。ついでアミ
ノ基を脱保護し、穏和な条件でチオホスデンを用い、イ
ンチオシアネートに誘導する。一方、接合体試剤は、活
性化薬物誘導体をポリ（アミノ酸）またはポリマーに、
一般的にはチオ尿素結合を介して結合させることにより
形成される。
アンフェタミンおよびメタン７エタミンの場合（とくに
指示のない限り、本Ｅ！Ａｍ書において光学異性型をも
つことが知られている栗Ｗｔたは果物誘導体に言及する
場合、光学的対掌体およびラセミ体を包含して述べてい
るものと埋鱗すべきである）、好ましい活性化薬物誘導
体は、式（式中、Ｒ２はアンフェタミンの場合には水素
、メタンフェタミンの場合にはメチルであり、ｂは１〜
９、好ましくはろであり、アルキル鎖はメタまたはパラ
、好ましくはパラにある）で示されるＮ−？−ドロキシ
スクシンイミドエステル誘導体である。
活性化エステルは、ｄ−アンフェタミン（またはメタン
フェタミン）を無水トリフルオロ酢酸と反応させること
によって製造される。得られたＮ−保護アン７エタミン
を塩化アルミニウムの存在下に無水コハク酸と反応させ
ると、酸およびケトンを含有する置換保護アンフェタミ
ンが生成する。
このケトンを水素気相中パラジウム黒で還元し、ついで
酸をカルボジイミドの存在下にＮ−ヒドロキシスクシン
イミドで活性化エステルに変換する。
保護基、この場合トリフルオロアセチルは、抗体を介す
るアッセイに使用する前に、たとえば微粒子（たとえば
ラテックス）試剤を製造したのちに除去される。
テトラヒドロカンナピノイドの場合、好ましい活性化薬
物誘導体は、式 で示されるＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル誘導
体である。
このような誘導体は、たとえばＪ、Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ
。
（１９８６）５１　：５４６３〜５４６５に開示されて
いるような適当なカンナピノイド誘導体をカルボジイミ
ドの存在下にＮ−ヒドロキシスクシンイミドと反応させ
ることによって製造できる。
フェンサイクリジン（ｐｃｐ　）の場合、好ましｂ活性
化薬物誘導体は、式 で示されるイソチオシアネート、ならびに式ことによっ
て製造できる。ニトロ基をラネーニッケル（Ｈ２、エタ
ノール）で還元し、生成したアミノ基を以下の例１に記
載したと同じ方法でインチオシ７ネートに変換する。
ＰＣＰＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル誘導体は
、米国特許第４，１９６．１８５号に開示されているよ
うなｐｃｐ酸を以下の例７に記載したと同じ方法で反応
させて扱造できる。
ペンゾイルエクゴニンの場合、好ましい活性化薬物誘導
体は、式 で示されるＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル誘導
体である。
ＰＣＰインチオシアネート誘導体は、米国特許第４，１
９６．１８５号に開示されているＰＣＰ酸を塩化チオニ
ルと反応させ、ついでＲ−（＋）Ｐ−ニトロ−α−メチ
ルベンジルアミン塩酸塩と反応させる（式中　１〕は水
素またはメチル、好ましくは水素である）で示されるＮ
−ヒドロキシスクシンイミドエステル誘導体である。
これらのエステル誘導体は、メチルエクゴニンをｐ−シ
アノ安息香酸の酸クロリドと反応させることによって製
造できる。ニトリルをラネーニッケル（５５ｐｓｉ　１
（２、メタノール）で還元し、ついでメチルエステルを
沸騰水中で除去する。アミノ基をついでｐ−７ミノ安息
香酸のインチオシアネートと反応させ、活性化エステル
は以下の例７に記載したと同様にして製造される。
ベンゾジアゼピンの場合、好ましい活性化薬物で示され
るインチオシアネートである。
このインチオシアネートは、Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ
。
（１９６８）、１１　ニア７４〜７７７に開示されてｈ
る１−（２−ア□ノエチル）−７−クロロ−１，３−ジ
ヒドロ−５−（２−フルオロフェニル）−２Ｈ−１，４
−ベンゾジアゼピン−２−オンを以下の例１に記載した
と同様に反応させ、アミノ基を保Ｎｐ−アミノ安息香酸
と反応させイソチオシアネートに変換することによって
製造できる。
上述の活性化薬物誘導体中、以下の化合物が最も好まし
い。
モルフインの場合：Ｎ−（３−（７，８−ジヒドロ−４
，５−エポキシ−６−ヒドロキシ−１７−メチルモルフ
ィナン−３−イル）オキシ〕プロポキン〕−４−イソチ
オシアネート安息香酸アミド バルビッール酸の場合：５−（３−（２，５−ジオキソ
−１−ピロリジニル）オキシ〕−１−メチルー３−オキ
ソゾロビル〕−５〜（２−プロペニル）２，４．６（１
Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）ピリミジントリオン アンフェタミンの場合：ＣＢ）−Ｈ−Ｃ２−（４−［４
−［（２，５−ジオキソ−１−ビロリゾニル）−オキシ
）−４−オキソ−ブチル〕７エ二ル）ｌ−メチル−エチ
ル）−２−）！ｊフルオロ安息香酸アミド メタン７エタミンの場合：（Ｓ）−Ｎ−メチル−Ｎ−〔
２−〔４−（４−〔（２，５−ジオキソ−１−ピロリジ
ニル）−オキシフ−４−オキソーフチル〕フエニル〕−
１−メチル−エチル）−２−トリフルオロ酢酸アミド テトラヒドロカンナピノイドの場合：　１−（〔（６ａ
、７，１０．ＩＤａ−テトラヒドロ−１−ヒドロキシ−
６，６−シメチルー３−ペンテルー６Ｈ−ジベンゾ）オ
キシ］（ｂｌｄ〕ビ２ン−１−イル（カルボニル）オキ
シ：］−２，５−ピロリジンジオン ７エンサイクリジンの場合：Ｎ−（１−（４−インチオ
シアノフェニル）エチル〕−４〜（１−（１−ピペリジ
ニル）−１−シクロヘキシル〕安息香酸アミド ベンゾジアゼピンの場合：Ｎ−（２−（７−クロロ−５
−（２−フルオロフェニル）−２，３−ジヒドロ−２−
オキソ−ＩＨｉ、４−ベンゾジアゼピン−１−イル〕エ
チル〕−４−イソチオシアネート安息香酸アミド ペンゾイルエクゴニンの場合：（ＩＲ−（エキソ、エキ
ソ、アンチ）〕−〕８−メチルー３−〔４−〔（［〔（
〔（（２，５−ジオキソピロリジｙ−１−イル）オキシ
〕カルボニル〕フェニル〕アミノ〕（チオキソメチル）
〕アミノ〕メチル〕ベンゾイル〕オキシ〕ビシクロ［３
，２，１）オクタン−２−カルボン酸 上記活性化薬物誘導体の好ましいポリ（アミノ酸）接合
体はクシ血清アルブミン（ＢＳＡ　）接合体であり、好
ましい微粒子試剤の態様はカルボキシル化ラテックス微
粒子の表面にこれらの接合体を共有アミド結合で含有す
る。
本発明をさらに以下の実施例により説明し、例示する。
温度はすべて摂氏である。
例１ Ｎ−（３−［（７，８−ジデヒドロ−４，５−エポキシ
−６−ヒドロキシ−１７−メチルモルフィナン−３−イ
ル）オキシフプロポキシ）−４−Ｎ−（ブチルカルバモ
イル）安息香酸アミドの製造 ３−Ｏ−アミノプロピルモルフイン０．５　、？（１−
４６ｍｍｏｌ）とｐ−（１−ｔ−ブトキシホルムアミド
）安息香酸（ｐ−アミノ安息香酸を１ＮＮａＯＨの存在
下にジーｔ−プチルジカルポネートで処理して生成）　
０．５　ｇ　（２−１ｍｍｏｌ　）のメチレンクロリド
２Ｑｒｎｌおよび乾燥ジメチルホルムアミド５′ＩＬｔ
中溶液を攪拌しながら、１−（３−ジメチルアミノプロ
ピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩０−５９　（
２，６ｍｍｏｌ）で処理し、室温で一夜攪拌した。反応
混合物を水（３ｘ２５ａｕ）で洗浄し、無水硫酸す）　
ＩＪウム上で乾燥し、真空中で濃縮した。残留物をシリ
カゲル１００１１上、溶出液として１５％メタノールー
クロロホルムヲ用いてクロマトグラフィーに付すと、Ｎ
−（３−〔（７，８−ジデヒドロ−４，５−エポキシ−
６−ヒドロキシ−１７−メチルモルフィナン−６−イル
）オキシフプロポキシ）−４−（Ｎ−ｔ−ブチル−カル
バモイル）安息香酸アミド０．７７　Ｉｌ（１，３７ｍ
ｍｏｚ　）が得られる。
ＮＭＲ（ＣＤＣ１〕）δ１．６４（ｓ、９Ｈ２ｔ−ブチ
ル）＋　２．５６　（ａｔ　３Ｈｔ　Ｎ−ＣＨ３）＄　
４．９８　Ｃ１９：ｒ　＋−６Ｈｚ、　　Ｉ　Ｈ，Ａｒ
０ＣＨＬ　　７．５２　（Ａｔ　　Ｊ　−９”２　ｓ　
　２　”ｚｔ　　ムｒ）　ｔ　　７Ｊ　８　（ｄｖ　　
Ｊ−９Ｈｚｔ２Ｈ，Ａｒ） Ｎ−（３−〔（７，８−ジデヒドロ−４，５−エポキシ
−６−ヒドロキシ−１７−メチルモルフィナン−３−イ
ル）オキシフプロポキシ）−４−アミノ安息香酸アミド
の製造： Ｎ−（３−〔（７，８−ジデヒドロ−４，５−エポキシ
−６−ヒドロキシ−１７−メチルモルフィナン−３−イ
ル）オキシフプロポキシ）−４−Ｎ−（ブチルカルバモ
イル）安息香酸アミド０．７　ｇ（１，２４ｍｍｏｌ　
）のメチレンクロリド２５１７中溶液を攪拌しながら、
トリフルオロ酢酸５−を加え、室温で３０分間攪拌した
。溶媒を真空中で除去し、残留物をメチレンクロリドに
溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水
硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で濃縮するとＨ−（３
−〔（７，８−ジデヒドロ−４，５−エポキシ−６−ヒ
ドロキシ−１７−メチルモルフィナン−３−イル）オキ
シ〕プロポキシー４−７ミノ安息香酸アミド０．５１が
得られた。
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３　）δ２．５５　（１１，３Ｈ，Ｎ
−ＣＨ３）ｐ４．８５（ａ、　　；ｒ−６Ｈｚ、　　Ｉ
　Ｈ，Ａｒ０ＣＨ）、　５．２２（ｄ、　　Ｊ＝１０Ｈ
Ｍ、　　Ｉ　Ｈｌ　　Ｖｉｎ７）　）、　　５．６９（
ａ　＊　　Ｊ−１０Ｈｚ　ｔ　　Ｉ　Ｈｚ　　ｖｉｎｙ
ｌ　）　ｔ　　６−４５−６．６６　（ｍｔ　　４　Ｈ
ｚ　　Ａｒ）　＊　　７．６１　（４Ｊ−８Ｈｚ。
２ａｔ　　ムｒ）。
Ｎ−（３−〔（７，８−ジデヒドロ−４，５−エポキシ
−６−ヒドロキシ−１７−メチルモルフィナン−３−イ
ル）オキシ〕ゾロボキシ）−４−イソチオシアネート安
息香酸アミドの製造二Ｎ−（３−〔（７，８−ジデヒド
ロ−４，５−エポキシ−６−ヒドロキシ−１７−メチル
モルフィナン−６−イル）オキシ〕ゾロボキシ）−４−
アミノ安息香酸アミド０．５１　（１，１ｍｍｏｌ　）
のメチレンクロリド１０１Ｉｔ中溶液を攪拌しながら、
固体無水炭酸水素す）　ＩＪウム０．５１ついでチオホ
ス？’７）５０　ｐｉ　（１，９ｍｍｏｌ　）を加え、
室温で６０分間攪拌した。溶媒を真空中で除去し、残留
物をシリカデル１５０θ上、１５％メタノール−クロロ
ホルムを用いてクロマトグラフィーに付すと、Ｎ−（３
−〔（７，８−ジデヒドロ−４，５−エポキシ−６−ヒ
ドロキシ−１７−メチルモルフィナン−３−イル）オキ
シ〕プロポキシ〕−４−イソチオシアネート安息香酸ア
ミド２３０ｇが無定形の固体として得られた。
工Ｒ（ＣＨＣ１〕）３４ｓｓ（Ｎｌｔ　　２１　Ｄｏ（
ｎｃｓ）ｔ１６５２（ムｍ１ｄｏ　）　、　　ＮＭＲ（
ＣＤＣｌ３　ＤＭＳＯ−δ６）δ１．９２（ｓｔ　　１
ｓ　　ＣＨＯｆＣＨ２）ｔ　　２−０７（ｔｔＪ−５Ｈ
ｚ、２Ｈｔ　　ＣＨ２Ｌ　　３−０８（ａｔ　　；ｒ−
１９Ｈｚ、　　１．　　ｃｎｏｒｃｎ、　Ｌ　　３．５
３（ｂｓ、　　ｌ、　０Ｈ）１４．８８　（ｄ、　　Ｊ
＝６Ｈｚ、　　Ｉ　Ｈ，Ａｒ０ＣＨ）、　５．２８（ｃ
Ｌ＃　　Ｊ−Ｉ　ＱＨｚ、　　Ｉ　Ｈ，Ｖｉｎ７）　）
？　　５．７２（ａ、　　、Ｔ−Ｉ　Ｑｎｇ、　　Ｉ　
Ｈｌ　　ｖｉｎｙｌ）、　　６．５７（６ｅ　　Ｊ　〜
６１１ｇ、　　２　Ｈｚ　　Ａｒ　）ｔ　　６−６９　
（”。
Ｊ−６Ｈｇｔ　　２Ｈ９Ａｒ　）、　　７．２８　（ｄ
ｔ　　Ｊ−９Ｈｚ。
２Ｈ，Ａｒ　Ｌ　　７．９１　　（ｄ、　　Ｊ−９Ｈｚ
、　　２Ｈ。
Ａｒ）９　７．５５（ｂａｔ　　Ｉ　Ｈ，ＭＥ）。ＭＳ
　、　（＋ＦＡＢ　）ｒＶ′ｅ　５０４　（Ｍ＋Ｈ） Ｎ−（３−［７，８−ジデヒドロ−４，５−エポキシ−
６−ヒドロキシ−１７−メチルモルフィナン−３−イル
）オキシ〕プロポキシ〕−４−イソチオシアネート安息
書酸アミド（オピエート）のウシ血清アルブミン（ＢＳ
Ａ　）への接合：炭酸水素ナトリウム（０，０５Ｍ）、
１０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）およびＢＡＡ
　（５−０１）を含有する溶液にｐ）１８．０．２５°
でインテオシアネ−ト（０，００４ｇ、ＤＭＳＯ１４紅
甲）を滴下した。
反応液を４°で１５分間攪拌したのち直ちに透析チュー
ブに移し、最初は水性炭酸水素す）　＋７クムＤＭ８０
　（１０％）溶液（０，０５Ｍ、　ｐ）１８．４×１０
容量）に、ついで炭酸水素ナトリウム緩衝液（０，０５
Ｍ、　ｐＨ８，７×１０容ｆｆ１）に透析した。
透析後、タンパク５！［濃度を測定し、０．００５．９
／ｄに調整した。
例２ オピエート−ＢＡＡ接合体含有感作ラテックスの製造−
一般操作 ラテックス（８ｅｒａｄｙｎカルボキシ修飾ポリスチレ
ン、０．８８８ミクロン）ａ濁液（１８０１１７，１０
％固体）を攪拌しながら、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール（ＮＩＢ　）　（０，６＆、含水ジメチルホルム
ア□ド２４継中）および１−シクロヘキシル−３−（２
−モルホリノエチル）カルボジイミドメソｐ−トルエン
スルホネート（ＣＭＣ）（２，０＃、水３２ｊｌＪ中）
を加えた。この懸濁液を６時間４°で攪拌したのち、２
％ラテックスに希釈し、接線液流濾過によって完全に水
洗した。洗浄した２％ラテックスに例１からのオピエー
ト−Ｂ８ム溶液９００−を加えた。反応液を４°で一夜
攪拌し、再び接線液流濾過で完全に水洗した。ついで洗
浄ラテックスをラテックス固体濃度３重量％に調整した
。
例６ 試験用反応緩衝液の製造： この希釈液は以下の組成のｐＨ７，５の水溶液である。
１、　　Ｐ１ｐｅ８　（０，２０Ｍ％　１　、　４−ピ
ペラジンビス（エタンスルホン酸）〕 ２、　　ｐｖｐ　（０，５０％、ポリビニルピロリドン
〕乙、ｐＥｏ８０００［１，５０％、ポリ（エチレング
リコール）〕 ４、食塩〔１０％〕 ５、ナトリウムアジド〔０，１％〕 試販用抗血清緩衝液の製造： オピエートに対する精製マウスモノクローナル抗体を適
当な緩衝系で希釈する。この希釈液は以下の組成の−７
，０の水浴液である。
１、　　Ｐｉｐｅｓ　（Ｑ−０５Ｍ　）２、　　ＢＳＡ
　（０，２５％） ３、食塩（０，１５％） ４、ナトリウムアジド（０，１５％） 試駆方法： オピエートを含まない尿１０μｌを毛細管アグルチノグ
ラフイースライドのミキシングウェルに分配し、ついで
抗血清緩衝液、反応緩衝液およびラテックス（例２）各
５０μｌを加える。添加した液体を３秒間借拌し、この
溶液を毛細管と接触するように動かす。液体は毛細管を
通過し、３〜６分で毛細管の末端の観察領域を満たす。
観察領域その液体は微細な毛状（凝集）または乳状にみ
える。陰性サンプルでは凝集はきわめて強く、はとんど
白濁は認められない。
試験に選ばれる特定の抗血清の希釈は、観察領域になお
強す凝集が生じる最高希釈が含まれるように行う。試験
系においてオピエートを含まない尿に様々な量のオピエ
ートを溶鱗すると、凝集は起こらない。＃集を阻止する
のに必要なオピエートの量は、使用する抗血清の濃度お
よび生成する抗血清の強度に応じて１１００ｎ／ＩＩＬ
ｔからそれ以上に変動する。すなわち、上述の糸では、
オピエー）　３００１１９７”を含む尿は凝集の部分的
ｍ害に十分であり、オピエート６００　ｎ、！ｉｌ／Ｆ
ＩＬＥを含有する尿は凝集の完全に阻害に十分である。
以下の表は、上述の系で認められる交差反応性のタイプ
を示すものである。
コデイン ジヒドロコデインニ酒石酸煽 ジヒドロモルフイン エチルモルフイン塩酸塩 ヒドロコドンニ酒石酸塩 ヒドロモル７オン塩酸塩 メペリジン モルフイン３−グルクロニド Ｎ−ノルコデイン塩酸塩 オキ／コドン テバイン ５０ ５０口 ００ ００ ００ ００ ５０．０００ ００ ｉｏｏ、ｏｏ。
５０．０００ １．６００ ２０ ０ ５ ５ ８ ８ ＜０．６ ８ ＜０．６ ＜０．６ ９ 以下の表は、オピエート陽性サンプルを用いた場合、上
述のアッセイで認められる特異性および正確度のタイプ
を示すものである。
ガスクロマトグラフィー− マススペクトル ＋ 凝集＋　　５４ 試験−〇 例４ バルビッール酸試剤の製造 ５−［３−［（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）
オキシフ−１−メチル−３−オ＋フプ。
ピル）−５−（２−ゾロベニル）−２，４，６（ＩＨ，
３）１，５Ｈ）ピリミジントリオンの製造：５−アリル
−５−（１−カルボキシイソプロピル）バルビッール酸
（５Ｊ、　１９．６　ｍｍｏｌ　）のメチレンクロリド
（１５０１１１およびジメチルホルムアミド（２５Ｎ）
中溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２，５ｇ、
２１．７　ｍｍｏｌ　）および１−（３−ジメチルアミ
ノプロピル）−３−エテルカルボシイ□ド塩酸塩（４，
５＆　％　２３．４　ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室
温で一夜攪拌し、ついで真空中で＃縮した。ｍｗ物をメ
チレンクロリドに浴解し、塩酸（０，２Ｎ、２００縦）
で３回、水で１回、炭酸水素ナトリウムで１回洗浄した
。洗浄時に沈殿が生成し、これを濾過すると生成物２．
４ｇが得られた。水相を酢酸エチルで抽出し、有機層を
すべて合せて、乾燥しくＮａ２５Ｏ４）、濾過し、溶媒
を蒸発させると、さらに生成物１．０Ｉが得られた。
工Ｒ（ＫＢｒ）、　　３２４５（ＢｒｏａｄＮＨ）、　
　１８１０１　６８５　（Ｃ＝Ｏ）　ｃＩｒＬ−’　、
　　ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）。
δ０−９７（ｄｔ　　Ｉ＝６Ｈｔ　　３Ｈ＋　　ＣＨ３
Ｌ　　２．５５２．７８　（ｍ＋　　４Ｈｓ　　ＣＨ２
Ｌ　　２．８２　（’？　　４ＬＣＨ２）１　５．１　
１　　（ｔ＋　　２　Ｈ？　　”Ｈ２１ｖｌ”７）Ｌ５
．５２　（ｍ、　　Ｉ　　Ｈ，Ｃ１（、Ｖｉｎｙｌ　）
、　　１　１．６８（ｂｓ　、　　２Ｈ，ＮＨ）　ＭＳ
、　　（＋）ＦＡＢ、　　ｍ／ｅ　３５２（Ｍ＋Ｈ）元
素分析：計算値　ｃ、５１．２８；Ｈ，４，８７＃Ｎｔ
１１．９６； 分析値　Ｃ，５１，０６；　Ｈ，４，９１；Ｎ、１１．
９４゜ ５−（３−〔（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）
オキシ〕−１−メチル−３−オキンプロピル）−５−（
２−プロペニル）−２，４，６（１Ｈ、　　５Ｈｅ　　
５Ｈ）ピリミジントリオン（バルビッール酸）のウシ血
清アルブミン（ＢＡＡ　）への接合： 炭酸水素ナトリウム（０，０５Ｍ）、１０％ジメチルス
ルホキシド（ＤＭＳＯ）およびＢＳＡ　（６，０１）を
含む溶液（４００１１７）にｐ）１８．５．２５°で、
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（０，００８，
９゜ＤＭＳＯ６，６−中）を滴下した。反応液を４°で
１５時間攪拌したのち直ちに透析チューブに移し、最初
は水性炭酸水素す）　ＩＪウムーＤＭ８０　（１０％）
溶液（０，０５ＭＸｐ）１８．４×１０容量）に、つい
でリン酸ナトリウム緩衝液（０，０５Ｍ、　ｐｉ−１７
，７×１０容１ｉｔ）に透析した。透析後、タンパク質
濃度を測定し、０．０５．９／−に調整した。
例５ バルビッール酸−Ｂ８Ａ接合体を含有する感作ラテツク
スの製造−一般操作 ラテックス（５ｅｒａｄｙｎ　、カルボキシ修飾ポリス
ｆＶ７．０．８８８−Ｓ　／　Ｏ−／　）　Ｉｕｋｌ液
（１８０Ｍ、１０％固体）を撹拌しながら、Ｎ−ヒドロ
キシベンゾトリアゾール（ＮＩＢ　）　（０−６１％含
水ジメチルホルムアミド２４１１ｇ中）および１−シク
ロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルホシイ
ミドメソｐ−トルエンスルｆネ−）（ＣＭＣ）（２，０
，９，水３２＋１１７中）を加えた。この懸濁液を４°
で６時間攪拌したのち２％２テツクスに希釈し、接線液
流濾過によって完全に水洗した。洗浄２％ラテックスに
例４からのバルビッール酸−ＢＡＡ溶液９００ａを加え
た。反応液を４°で一夜攪拌し、再び接線液流濾過によ
って完全に水洗した。洗浄ラテックスをついでラテック
ス固体濃度５重量％に軸整した。
例６ バルビッール！！試験 試験用反応緩衝液の製造： この希釈液は以下の組成のｐＨ７，５の水溶液である。
１、　　Ｈｅｐｅｓ［０，２０Ｍ５４−（２−ヒドロキ
シエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸〕２、　
　ＰＶＰ　Ｃ０，５０％、ポリヒニルピロリトン〕３、
ｐｍｅ８０００（１，００％、ポリ（エチレングリコー
ル）〕 ４、食塩〔１，５％〕 ５、ナトリウムアジド〔０，１％〕 試験用抗血清の製造： バルビッール酸に対するウサギ抗血清を適当な緩衝系で
希釈する。この希釈液は以下の組成の−８，０の水溶液
である。
１、　　Ｈｏｐｅｓ　（０，０５Ｍ　）２、　　Ｂ８ム
（０，２５％） ３、食塩（［１，１５％） ４、ナトリウムアジド（０，１５％） 試験方法： バルビッール酸を含まない尿１０μｌを毛＃ｉｆＩ管ア
グルチノグラフイースライドのミキシングウェルに分配
し、ついで抗血清緩衝液、反応緩衝液およびラテックス
（例５）各５０μｌを加える。添加した液体を３秒間攪
拌し、この溶液を毛細管と接触するように動かす。液体
は毛細管を通過し、３〜６分で毛細管の末端の観察領域
を満たす。観察領域での液体は微細に毛状（凝集）また
は乳状にみえる。陰性サンプルでは凝集はきわめて強く
、はとんど白濁は認められない。
試験に選ばれる特定の抗血清の希釈は、観ｗ！領域にな
お強いｌｋ集が生じる最高希釈が含まれるように行う。
試験系においてバルビッール酸ヲ含まｙｚい尿に様々な
童のバルビッール酸を浴鱗すると、凝集は起こらない。
凝集を阻止するのに必要なバルビッール酸の量は、使用
する抗血清の濃度および生成する抗血清の強度に依存し
て１００　ｎ＆／ＩＬｔからそれ以上に変動する。すな
わち、上述の系では、バルビッール酸２００　ｒｘｊ／
／Ｉｌｌを含む尿は凝集の部分的阻害に十分であり、バ
ルビッール酸４００ｎθ／紅を含有する尿は凝集の先金
な阻害に十分である。
以下の表は、上述の系で認められる交差反応性のタイプ
を示すものである。
アロノ々ルビタール アリルシクロペンチルバルビッール酸 アモ／ぐルビタール アプロ／−？ルビタール ７ぐルビタール ブタノぐルビタール ｐ−ヒドロキシフエノバルビタール メト７々ルビタール ペント／々ルビタール フェノノ寸ルビタール バルビッール酸 交差 Ｃｎｌ／１１！１） ００ ５ ００ ００ ００ ５０ ００ ２５．０００ ００ ００ ００ ００ ００ ００ ００ ０ ９ ０．９ ０ ９ 以下の表は、バルビッール＆陽性サンプルを用いた場合
、上述のアッセイで認められる特異性および正確度のタ
イプを示すものである。
＋ ＃ｌ：　　粂　　十 試験 ８ 例７ （Ｓ）−Ｎ−（１−メチル−２−フェニルエチル）フル
オロ酢酸アミド（１）の製造 ｄ−ア７７　、ｌｒ−タミン硫酸塩（２０，０ｇ、０．
１０８ｍｍｏｌ）のトリエチルアミン（７５ｄ）中温合
物をアルゴンで浄化し、水浴中で冷却し、これに無水ト
リフルオロ酢酸（３１１１１７）を１５分を要して滴下
した。
反応液を室温で一夜攪拌した。ついで溶媒を真空中で蒸
発させ、残留物をメチレンクロリド（２００紅）に溶解
し、５％歯石酸（３Ｘ２５０ｄ）で洗浄し、乾燥しく　
Ｎａ２ＳＯ４）　、濾過し、真空中でｂａｈすると黄色
油状物が得られた。この物賀をヘキサン−エーテル況合
物中で結晶化すると、生成物１４ｇが得られた。
ＩＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３　）δ１．１７　（ｄＪ＝１５
Ｈｚ、　３Ｈ。
Ｃ１（３Ｌ　　２．７８（ｔ、　　Ｊ−５Ｈｚ、　　２
Ｈ，ＣＭ、　）。
４．２２　（ｍ　、　　Ｊ−６Ｈｚｔ　　Ｉ　Ｈ＋　　
ＣＨ）　ｖ　　６−００（ｂｓ、　　１　）（＃　　Ｍ
Ｅ　）９　７．０６　（ｄ、　　Ｊ−６Ｈｚ。
２Ｌ　　Ａｒ）、７．２２（ｍ、３Ｈ＋　　ムｒ）（ｓ
）−４−Ｃ２−メチル−２−〔（）リフルオロアセチル
）ア□ノ〕エチル〕−ｐ−オキソベンゼンブタン酸（２
）の公造： （１）　　（１２，０、！ｉ’、　０．０５　ｍｏｌ　
）のメチレンクロリド（２１０１１７）中溶液をアルゴ
ン下に攪拌しながら、無水コハク酸（８，Ｄ　Ｉ、　０
．［］　８　ｍｏｌ　）を加えた。反応液を水浴中で冷
却し、塩化アルミニラＡ　（２８，０１１％　０．２１
　ｍｏｌ）を５分間を要して少量ずつ加えた。反応液を
０〜５°で２時間、つｂで室温で一夜攪拌した。次に塩
酸（３Ｎ、１２０１１４）を徐々に加え、ついで溶液を
さらに１時間攪拌した。メチレンクロリドを真空中で除
去し、木場を酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥しく
　Ｎａ２ｊ３０４　）、濾過し、溶媒を蒸発させると、
黄褐色の残留物が生成し、これをエーテルと膿砕すると
生成物１０．５．９が得られた。
工ＲＣＣＨＣ１〕）３５００ＣＮＨ）ｅ　　１７００（
ａｃｉａ＋Ａｍ１ｄｅ　）、　　１５５５　（Ａｍ１ｄ
ｅ　）ｃＩＬ−１１ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１，＋　ＤＭ８０
−δ６　）δ１−２１　（＋１．　　Ｊ−７Ｈｚ。
３Ｅ、ＣＢ、）、２．７３（ｔｔ　　Ｊ−６Ｈｚｔ　　
２ＨｊＣＨ２）、　２．８２（ｍ、　１　Ｈｌ　Ｈｏｆ
０１１２）、２．９５（ｍ、　　Ｉ　Ｈ，Ｈｏｒ　ＣＨ
２Ｌ　　３．２７　（ｔ、Ｊｓ−（５Ｈｇ。
２ＨＩ　　ＣＨ２Ｌ　　４−２５（Ｉ　Ｈｅ　　ＣＭ）
＊　　７−２７〔（１，Ｊ−８Ｈｇ、２Ｈ＊　　ム２−
　）ｔ　　７．９２　〔（１゜Ｊ８Ｈｚ、２Ｈ，Ａｒ　
Ｌ　　７．５７（ｂｅ、　　１Ｈ，ＮＨ）。
Ｍｅ、　　ｍ／ｅ　　３　３　１　　（”　　）（８）
−４−（２−メチル−２−〔（）リフルオロアセチル）
アミノ〕エチル〕ベンゼンブタン酸（３）の製造： （２１（９−２１，０，０２７ｍｏｌ　）および１０％
パラジウム黒（４，０，９）の酢ｉ！１（４００１１１
４）中温合物を５０　ｐｓｉで２４時間水素化した。触
媒を濾去し、濾液を真空中で濃縮し、残留物をエーテル
と磨砕すると、白色の生成物７．０ｇが得られた。
工Ｒ（ＯＨＣ１〕）３４２５（ＭＨ）ｓ　　１７）８（
ムａｉｌ　）ｔｌ　５３２　（Ａｍ１ｄｅ　Ｌ　　１１
７０　（Ｃ’ｌ’ｓ　）（：Ｉｋ−ｘ＊ＩＨＮＭＲ（Ｃ
ＤＣ１〕）δ１−１６（ｄｔ　　Ｊ冨７　Ｈｔｘ　ｔ　
　３　ＨｔＣＨｓ）＊　　１−１−９２（２Ｈ＊　　Ｃ
Ｈｚ）ｓ　　２−３４（ｂａｔ２１１　ＡＲｃｎ、、　
）ｐ　　２−６３　（”Ｉ　　２Ｅｔ　　ｃｎ、　Ｃ２
，７９（ｍ、２Ｈ２ＣＨ２）、４．２８（ｍ、１Ｈ２Ｃ
Ｈ）、　５．９４（′ｂＩｌ、１　Ｈ２ＮＢ）、６．９
７（ｄ。
Ｊ−８Ｈｇ、　　２Ｂ、ＡＲ）、　　７．Ｑ３　（ｄ、
Ｊｍ８Ｈｇ。
２　Ｈｅ　　ＡＲ）　ｏ　　Ｍｅ−！ｌ！／＠　２９９
　（Ｍ　ＨｔｘＯ）（８）−Ｎ−（２−（４−（４−〔
（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）−オキシ）−
４−オキソブチル〕フェニル〕−１−メチル−エチル〕
−２−）’Ｊフルオロ酢酸アミド（４）の製造＝（３）
　　（５，４１，０，０１９ｍｏｌ　）のメチレンクロ
リド（１５０１１ｊ）、テトラヒドロ７ラン（１５０１
１７）およびジメチルホルムアミド（５０１ｎ）中溶液
を攪拌しながら、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２，
７），Ｏ−０２３ｍｏｚ　）および１−（３−ジメチル
アミノゾロビル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（
６，０１，０，０３１ｍｏｌ）を加えた。反応液を室温
で一夜攪拌し、ついで真空中で濃縮した。生成した残留
物をメチレンクロリドに溶解し、濾過し、シリカゲルク
ロマトグラフィー（溶出液ニア％エーテルーメチレンク
ロリド）で精製すると黄色の油状物が生成し、これをエ
ーテルから結晶化すると白色の生ｆｆ１４１！１〕．７
＃が得られた。
工Ｒ（ｃＨｃｘ３）、　　３４２５　（ＮＨ）ｔ　　１
８１２　１７４１（工ｗｉｄｅ）ｔ１７２５（ム””　
）　ｅ　　１１７０　（Ｃ’：ｓ）ｃ！ＩＬ−”、　”
ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１４）δ１．２１　（ｄ、　　Ｊ−７
Ｈｚ。
３Ｈｔ　　”Ｈｓ　）　＊　　２−０７　（ｍｅ　　２
　Ｈｅ　　ＣＨ２）＊　　２−６０（ｔ、　　Ｊ＝　７
　ｎｉｓ、　　２Ｈｐ　　ＣＨ２Ｌ　　２．７２　（ｔ
＊Ｊ−７Ｈｇ、　　２ＨＩ　　ＣＨ２）９　２．８０−
２．９０　（！ｌｌｌ６Ｈ，ＣＨ２Ｌ　　４−２７　（
”ｔ　　Ｉ　Ｈ，ＣＢ）ｅ　　６−１０（ｂｓｓ　　Ｉ
　Ｈｅ　　ＮＨ）ｅ　　７−０９　（ｄｔ　　Ｊ＝８Ｈ
ｚ。
２Ｈ，Ａｒ）、　　７．１　５（ａｔ　　Ｊ−８Ｈｚ、
２Ｈ，ムｒ）。
Ｍｅ、　　（＋）ＦＡＢ、　ｍ／ｅ　４１　５　（Ｍ＋
Ｈ）、　ｍ／ｅ　４３７　（Ｍ＋Ｎａ　　）。
元素分析二計算値　〔１　　５５．０７；Ｈｅ　　５．
１１　；１Ｊ１６．７６ 分析値　ｃ、５４．９４；ｎ、５．２２；Ｈ，６，７６ （８）−Ｎ−［２−（４−（４−〔（２，５−ジオキソ
−１−ピロリジニル）オキシ〕−４−オキンプチル〕フ
ェニル）−１−メチル−エチルツー２−トリフルオロ酢
酸アミド（アンフェタミン）のウシ血清アルブミン（Ｈ
ｅム）への接合：炭酸水素ナトリウム（０，０５Ｍ）、
１０％ジメチルスルホキシド（ＤＭ８０　）およびＢ８
ム（６，０、ＳＦ　）を含有する溶液にｐ）１８．０．
２５°でＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（４）
　（０，０３５，９、ＤＭ８０中）を滴下した。反応液
を４°で１５時間攪拌し、例４のように透析した。透析
後、タンパク質鎖度を測定し、０．０００５ＪＩ／−に
調整した。
例８ ７ン７工タミンーＢ８ム接合体を含有する感作ラテック
スの製造−一般操作 ラテックス（８ｅｒａｄｙｎ　、カルボキシ修飾ポリス
チレン、０．８８８ξクロン）ＩＩｌ濁液（１８０ｍ、
１０％固体）を攪拌しながら、Ｎ−ヒドロキシベンゾト
リアゾール（ＮＩＢ　）　（０，６Ｉｓ含水ジメチルホ
ルムアミド２４−中）および１−シクロヘキシル−３−
（２−モルホリノエチル）カルボキシイミドメソｐ−）
ルエンスルホ＄−）（ＣＭＣ）（２，０，？、水３２−
中）を加えた。この懸濁液を４°で３時間攪拌したのち
２％ラテックスに希釈し、接線液流濾過によって完全に
水洗した。洗浄２％ラテックスに例７からのアン７エタ
ミンーＢＳＡ溶液９００Ｍを加えた。反応液を４°で一
夜攪拌し、再び接線液流濾過によって完全に水洗した。
洗浄ラテックスをついで濾過装置から取り出し、遠心分
離によってペレット化した。ペレットを炭酸ナトリウム
（ｐ）１１１．４．０．１０Ｍ）３０００１ＬｔＫ再懸
濁し、室温で２４時間攪拌した。混合物を再び遠心分離
でペレット化し、リン酸緩衝液（ｐＨ６，０，０５Ｍ）
２０００１１７に再懸濁シ、接Ｈ液ｆｉｒｅ、　Ｍ　４
Ｃ逆して、水で完全に洗浄した。洗浄したラテックスを
次にラテックス固体＃度３．０重量％に駒整した。
例９ 試験用反応液の製造： この希釈液は以下の組成のｐＨ７，５の水溶液である。
１、　　Ｐｅｐｅｓ　（０，２０Ｍ、　　１　、　４−
ピペラジンビス（エタンスルホン酸〕 ２、　　ＰＶＰ　［０，８０％、ポリビニ７ｔ、ピロリ
ドン〕３、　　ＰＫＧ８０００（１，５０％、ポリ（エ
チレングリコール）〕 ４、食塩〔２０％〕 ５、　ナトリウムアジド〔０，１％〕 試験用抗血清緩衝液の製造： アンフェタミンに対するヒツジ抗血清を適当な緩衝系に
希釈する。この希釈液は以１の組成の−７，２の水溶液
である。
１、　　Ｈｅｐｅｓ（Ｑ、３５Ｍ、　４−（２−ヒドロ
キシエチル）−ピペラジン−エタンスルホン酸〕２、Ｂ
ＳＡ　（０，２５％） ３、食塩（０，１５％） ４、　ナトリウムアジド（０，１５％）試験方法 ７ン７エタミンを含まない尿１０μｌを毛細管アグルチ
ノグラフイースライドのミキシングウェルに分配し、つ
いで抗血清緩衝液、反応緩衝液およびラテックス（例８
）各５０μｌを加える。添加した液体を３秒間攪拌し、
この溶液を毛細管と接触するように動かす。液体は毛細
管を通過し、３〜６分で毛細管の末端の観察領域を＃た
す。観察領域での液体は微細な毛状（凝集）または乳状
にみえる。陰性サンプルでは凝集はきわめて強く、はと
んど白濁は認められない。
試験に選ばれる峙定の抗血清の希釈は、観察領域になお
強い凝集が生じる最高希釈が含まれるように行う。試験
系におりてアンフェタミンを含まない尿に様々な量のア
ンフェタミンを溶解すると、凝集は起こらない。凝集を
阻止するのに必要なアンフェタミンの量は、使用する抗
血清の濃度および生成する抗血清の強度に依存して２５
　Ｏｎ、９　／ｗｌからそれ以上に変動する。すなわち
、上述の系では、アンフェタミン１．０００　Ｉｌｌ！
／’ｌｉｔを含む尿は凝集の部分的阻害に十分であり、
アンフェタミン１．５００　ｎθ／ｄを含有する尿は凝
集の完全な阻害に十分である。
以下の表は、上述の糸で認められる交差反応性のタイプ
を示すものである。
モルフイン 交差 ｐ−ヒドロキシアンフェタミン チラミン塩酸塩 ５　、０００ ｉ　ｏｏ　、　ｏｏ。
０ ０．０１ 以下の表はアンフェタミン陽性サンプルを用いた場合、
上述のアッセイで認められる峙異性および正確度のタイ
プを示すものである。
ガスクロマトグラフィ− マススペクトル ＋ 凝集　＋　　　　　　４５ 試験　−１” 憂結果の異なる１個のサンプルはアッセイのカットオフ
　（１，０００ｎ＆／＋１７　）に近接した濃度の薬物
を含むことがわかった。
例１０ １−〔（（６ＳＬ、７，１０．１０ａ−テトラヒドロー
１−ヒドロキシ−６，６−ジメテルー３−フェニル−６
Ｈ−ジベンゾ〔ｂｔａ）ピラン−１−イル（カルボニル
）オキシ）−２，５−ピロリジンジオンの製造： １１−ツルーΔ８−　ＴＨＣ−９−カルボンｔＲ１１，
２６、ｌｉ’　（３，６７ｍｍｏｌ）の１＝１酢酸エチ
ル／メチレンクロリド５Ｑｄ中溶液に、Ｎ−ヒドロキシ
−スクシンイミド１．６８　＆　（１４，７ｍｍｏｌ　
）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エ
チルカルボジイミド塩酸塩２．１０　、Ｓ＋（１１，０
ｍｍ０１）を加えた。反応液を室温で１６時間攪拌した
。反応混合物を１Ｎ塩酸（３ｘ１００ｍ）、水（３×１
００１１７）および飽和食塩水（１００１１７）で洗浄
した。有機相をＮａ２８０４上で乾燥し、減圧下に濃縮
し、シリカデル上りロマトグラフィーに付した。
ヘキサン中４０％酢酸エチルで溶出すると、所望のＮ−
ヒドロキシスクシンイミドエステル１．４１ｇ（８７％
）が得られた。ＮＭＲ、工ＲおよびＭＳは満足できる値
が得られた。
工Ｒ（ＫＢｒ）３４１５（ＯＲ）ｔ　　１８０２ｊ　　
１７６０゜１　７３８　（ｃ−０）　（＠−１ｌＨＮＭ
Ｒ（ＣＤＣｌ２）　δ０．８８（ｔ、　　Ｊ”６Ｈｇｊ
　　３ＨＰ　　ＣＨ３）ｔ　　１−１　３　（ａｔ３１
１、　　ＣＨ３）ｔ　　１−４０　（ａ、　　３Ｈ，Ｃ
Ｈｓ　Ｌ２．８６（ｂａｔ　　４Ｈ，ＣＢＩ　　）ｔ　
　６．１　１　　（ｓ、　　Ｉ　　Ｈ。
ムｒ　Ｌ　　６．２．７　（ａ、Ｉ　　Ｈ，ムｒ）ｅ　
　７．３２〔（１゜Ｊ　−４Ｈｔｘ、　　ｌ　　Ｈ，ｖ
ｉｎｙ’ｌ　）ｏ　　ＭＳ、　　ｍ／ｅ　４４１（Ｍ＋
）１−〔（（６ａ、７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−
１−ヒドロキシ−６，６−ジメテルー３−フェニル−６
Ｈ−ジベンゾ）オキシ）（ｂ＃ｃＬ）ピラン−１−イル
（カルボニル）オキシ）−２゜５−ピロリジンジオン（
カンナピノイド）のウシＩＩ）Ｉｆｆアルブミン（ＢＳ
Ａ）への接合炭酸水素ナトリウム（０，０５ＭＬ１０％
ジメチルスルホキシド（ＤＭ８０　）、およびＢＡＡ　
（４，５１りを含有する溶液（３００７）に、ｐＨ８，
５，２５°で、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル
（０，００６，９゜ＤＭ８０６．２１１ｔ中）を滴下し
た。反応液を４°で１５時間攪拌し、例４と同様に透析
した。透析後、タンパク質濃度を測定し、０．００５９
／ｄＫ１１１！Ｉした。
例１１ カンナピノイド−Ｂ８ム接合体を含む感作ラテツクスの
製造−一般操作 ラテックス（５ｅｒａｄｙｎ　、　カルボキシ修飾ポリ
スチレン、０．８８８ミクロン）Ｉ’ｌ！濁液（１８Ｑ
ｍ、１０％固体）を攪拌しながら、Ｎ−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール（ＮＨＢ　）　（０，６＋Ｌ含水ジメチ
ルスルホキシド２４ｍ１中）および１−シクロヘキシル
−３−（２−モルホリノエチル）カルボキシイミドメソ
ｐ−）ルエンスルホネート（ＣＭＣ）（２，０＆、水３
２１１７中）を加えた。この懸濁液を４°で３時間撹拌
したのち、２％ラテックスに希釈し、接融液流濾過によ
って完全に水洗した。洗浄２％ラテックスに例１０から
のオビエー）　−ＢＯＡ溶液９００ａを加えた。反応液
を４°で一夜攪拌し、再び接線液流ＩＩｉ過によって完
全に水洗した。洗浄ラテックスをついでラテックス固体
濃度２．２１１ｆｉ％に調整した。
例１２ ＴＨＣ試験 試験用反応緩衝液の製造： この希釈液は以下の組成＋Ｄｐ８６．５の水溶液である
。
１、　　Ｈｅｐｅｓ　（０，０５Ｍ、　　４−（２−ヒ
ドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸〕
２、ＰＶＰ（０，５０％、ポリビニルピロリドン〕３、
　　ＰＫＧ８０００（１，００％、ポリ（エチレングリ
コール）〕 ４、食塩〔０，５％〕 ５、　ナトリウムアジド〔０，１％〕 試験用抗血清緩衝液の製造： カンナピノイドに対する精製マウスモノクローナル抗体
を適当な緩衝系に希釈する。この希釈液は、以下の組成
のｐ）１７．０の水溶液である。
１、Ｈｅｐｅａ　（０，０５Ｍ　） ２、ＢＳＡ　（０−２５％） ３、食塩（０，１５％） ４、　ナトリウムアジド（０，１５％）試験方法： カンナピノイドを含まない尿１０μｌを毛細管アグルチ
ノグラフイースライドのミキシングウェルに分配し、つ
いで抗血清緩衝液、反応緩衝液およびラテックス（例１
１）各５０μｌを加える。
添加した液体を６秒間攪拌し、この溶液を毛細管と接触
するように動かす。液体は毛細管を通過し、３〜６分で
毛細管の末端の！＋！祭領域を満たす。観察領域では液
体は微細な毛状（＃集）または乳状にみえる。陰性サン
プルでは凝集はきわめて強く、はとんど白濁は認められ
ない。
試験に選ばれる特定の抗血清の希釈は、観１１領域にな
お強い凝集が生じる最高希釈が含まれるように行う。試
験系においてカンナピノイドを含まない尿に様々な量の
カンナピノイドを溶解すると、凝集は起こらない。凝集
を阻止するのに必要なカンナピノイドの量は使用する抗
血清のｍ度および生成する抗血清の強度に依存して５０
１１９／−からそれ以上に変動する。すなわち、上述の
系では、カンナピノイド１００　ｎｌ／’ｌｉｔを含む
尿は凝集の部分的阻害に十分であり、カンナピノイド６
０Ｏｎ、９／Ｍを含有する尿は凝集の完全な阻害に十分
である。
以上の表は、上述の系で認められる交差反応性のタイプ
を示すものである。
１１−ヒドロキシ−カンナビノール カンナビノール Δ９−ＴＨＣ １１−ヒドロキシ−Δ９−ＴＨＣ ８β−１１−ジヒドロキシ−Δ９−ＴＨＣ８β−ヒドロ
キシーΔ９−ＴＨＣ Ｃｎｌ／／紅） （％） ２　、０００ ００ １０．０００ ２．０００ ４．０００ ４．０００ ５．０ １２．５ １．０ ５．０ ２．５ ２．５ 以下の表はカンナピノイド陽性サンプルを用いた場合、
上述のアッセイで認められる特異性および正確度のタイ
プを示すものである。
ガスクロマトグラフィー− マススペクトル ＋ 凝集　＋　　　　　　４３ 試験　−２” ４′２個の矛盾したサンプルはアッセイのカット オフ（１００ｎｌ／Ｉｌｊ　）に近い薬物を含むことが
明らかにされた。
【図面の簡単な説明】
第１図はラテックス微粒子試剤をベースとする凝集度検
定に用いる場合に、本発明の接合体ｐ−（ｈ−Ｄ）ｎの
製造に使用されるＡ−ＤとＰ反応体の化学論量比と反応
感度の関保を示すグラフである。 第 図

Claims (11)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）式 Ｐ−〔Ａ−Ｄ〕＿ｎ 〔式中、 Ｄは、標的薬物または標的薬物代謝物の存在の決定のた
    めに抗原的に選択される薬物誘導体であり、 Ａは、式 ▲数式、化学式、表等があります▼または▲数式、化学
    式、表等があります▼ （式中、Ｘは必要に応じて用いられる、ＡをＤに連結す
    るためのスペーシング基であつて、ベンゼン基、アミド
    基、チオ尿素基、尿素基、直鎖状もしくは分岐状のＣ＿
    １＿〜＿１＿０脂肪族基、または上述の基の組合せから
    なる）で表される活性化リンカー−スペーサー基であり
    、 ＰはＡと共有結合できるポリ（アミノ酸）またはポリマ
    ーであり、 ｎは１未満である〕 で示される試剤。
  2. （２）Ａ−Ｄは、Ａが９位の炭素における置換基である
    Δ＾８ＴＨＣ誘導体、Ａが５位の炭素における第二の置
    換基である５−置換バルビツール酸誘導体、Ａがベンゼ
    ン環上の置換基であるフエンサイクリジン誘導体、Ａが
    ３−ヒドロキシルにおける置換基であるモルフイン誘導
    体、Ａがベンゼン環上の置換基であるベンゾイルエクゴ
    ニン誘導体、Ａが１の窒素における置換基である１，４
    ベンゾジアゼピン誘導体、およびＡがベンゼン環上の置
    換基であるアンフエタミン誘導体からなる群より選ばれ
    る活性化薬物誘導体である請求項（１）記載の試剤。
  3. （３）Ａ−Ｄは、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、イソチオシアネートはメタまたはパラである）
    で示される化合物である請求項（２）記載の試剤。
  4. （４）Ａ−Ｄは、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１は水素、メチルまたはアセチルであり、
    ａは２〜１８であり、イソチオシアネートはメタまたは
    パラである）で示される化合物である請求項（２）記載
    の試剤。
  5. （５）Ａ−Ｄは、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿２は水素またはメチルであり、ｂは１から
    ９までであり、アルキル基はベンゼン環のメタまたはパ
    ラ位置に結合している）で示される化合物である請求項
    （２）記載の試剤。
  6. （６）Ａ−Ｄは、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿３は水素またはメチルである）で示される
    化合物である請求項（２）記載の試剤。
  7. （７）Ａ−Ｄは、 Ｎ−〔３−〔７，８−ジデヒドロ−４，５−エポキシ−
    ６−ヒドロキシ−１７−メチルモルフィナン−３−イル
    ）オキシ〕プロポキシ〕−４−イソチオシアネート安息
    香酸アミド、 〔５−〔３−〔２，５−ジオキシ−１−ピロリジニル）
    オキシ〕−１−メチル−３−オキソ−プロピル〕−５−
    （２−プロペニル）２，４，６（１Ｈ、３Ｈ、５Ｈ）ピ
    リミジメトリオン、（Ｓ）−Ｎ−〔２−〔４−〔４−〔
    （２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）オキシ〕−４
    −オキソ−ブチル〕フェニル〕−１−メチル−エチル〕
    −２−トリフルオロ酢酸アミド、 （Ｓ）−Ｎ−メチル−Ｎ−〔２−〔４−〔（２，５−ジ
    オキソ−１−ピロリジニル）オキシ〕−４−オキソ−ブ
    チル〕フェニル〕−１−メチル−エチル〕−２−トリフ
    ルオロ酢酸アミド、 Ｎ−〔１−（４−イソチオシアノフェニル）エチル〕−
    ４−〔１−（１−ピペリジニル）−１−シクロヘキシル
    〕安息香酸アミド、 Ｎ−〔２−〔７−クロロ−５−（２−フルオロフェニル
    ）−２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−１，４−ベ
    ンゾジアゼピン−１−イル〕エテル〕−４−イソチオシ
    アネート安息香酸アミド、〔１Ｒ−（エキソ、エキソ、
    アンチ）〕−８−メチル−３−〔〔４−〔〔〔〔〔〔〔
    （２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ〕カ
    ルボニル〕フェニル〕アミノ〕（チオキソメチル）〕ア
    ミノ〕メチル〕ベンゾイル〕オキシ〕ビシクロ〔３，２
    ，１〕オクタン−２−カルボン酸、１−〔４−〔１−（
    １−ピペリジニル）−１−シクロヘキシル〕ベンゾイル
    オキシ〕−２，５−ピロリジンジオン、および １−〔〔（６ａ、７、１０、１０ａ−テトラヒドロ−１
    −ヒドロキシ−６，６−ジメチル−３−ペンチル−６Ｈ
    −ジベンゾ）オキシ〕〔ｂ，ｄ〕ピラン−１−イル（カ
    ルボニル）オキシ〕−２，５−ピロリジンジオンからな
    る群より選ばれる化合物である請求項（２）記載の試剤
    。
  8. （８）微粒子の表面へのポリ（アミノ酸）またはポリマ
    ー、Ｐの疎水性または共有結合によつて請求項（１）、
    （２）または（７）の試剤が微粒子に結合してなる微粒
    子イムノアツセイ試剤。
  9. （９）Ｐはラテックス微粒子に共有結合している請求項
    （８）記載の微粒子試剤。
  10. （１０）Ｐはウシ血清アルブミンである請求項（８）記
    載の試剤。
  11. （１１）Ｎ−〔３−〔７，８−ジデヒドロ−４，５−エ
    ポキシ−６−ヒドロキシ−１７−メチルモルフイナン−
    ３−イル）オキシ〕プロポキシ〕−４−イソチオシアネ
    ート安息香酸アミド、 ５−〔３−〔２，５−ジオキシ−１−ピロリジニル）オ
    キシ〕−１−メチル−３−オキソ−プロピル〕−５−（
    ２−プロペニル）２，４，６（１Ｈ、３Ｈ、５Ｈ）ピリ
    ミジメトリオン、 （Ｓ）−Ｎ−〔２−〔４−〔４−〔（２，５−ジオキソ
    −１−ピロリジニル）−オキシ〕−４−オキソ−ブチル
    〕フェニル〕−１−メチル−エチル〕−２−トリフルオ
    ロ酢酸アミド、 （Ｓ）−Ｎ−メチル−Ｎ−〔２−〔４−〔４−〔（２，
    ５−ジオキソ−１−ピロリジニル）オキシ〕−４−オキ
    ソ−ブチル〕フェニル〕−１−メチル−エチル〕−２−
    トリフルオロ酢酸アミド、Ｎ−〔１−（４−イソチオシ
    アノフェニル）エチル〕−４−〔１−（１−ピペリジリ
    ル）−１−シクロヘキシル〕安息香酸アミド、 Ｎ−〔２−〔７−クロロ−５−（２−フルオロフェニル
    ）−２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−１，４−ベ
    ンゾジアゼピン−１−イル〕エチル〕−４−イソチオシ
    アネート安息香酸アミド、〔１Ｒ−（エキソ、エキソ、
    アンチ）〕−８−メチル−３−〔〔４−〔〔〔〔〔〔〔
    （２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ〕カ
    ルボニル〕フェニル〕アミノ〕（チオキソメチル）〕ア
    ミノ〕メチル〕ベンゾイル〕オキシ〕ビシクロ〔３，２
    ，１〕オクタン−２−カルボン酸、および １−〔４−〔１−（１−ピペリジニル）−１−シクロヘ
    キシル〕ベンゾイルオキシ〕−２，５−ピロリジンジオ
    ン からなる群より選ばれる化合物。
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