JPH03219884A - 乳酸菌によるジアセチル、アセトイン発酵法 - Google Patents
乳酸菌によるジアセチル、アセトイン発酵法Info
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- JPH03219884A JPH03219884A JP2078626A JP7862690A JPH03219884A JP H03219884 A JPH03219884 A JP H03219884A JP 2078626 A JP2078626 A JP 2078626A JP 7862690 A JP7862690 A JP 7862690A JP H03219884 A JPH03219884 A JP H03219884A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、乳酸菌によるジアセチル、アセトイン発酵法
、さらに詳しくは乳酸菌が利用し得る糖源を含む培養基
質に乳酸菌を接種し、培養する乳酸菌によるジアセチル
、アセトイン発酵法に関する。
、さらに詳しくは乳酸菌が利用し得る糖源を含む培養基
質に乳酸菌を接種し、培養する乳酸菌によるジアセチル
、アセトイン発酵法に関する。
ジアセチル、アセトインは乳酸菌が生産する主要な香気
成分である。
成分である。
ジアセチルおよびアセトインは、クエン酸利用能を有す
る （Ｃｉｔ”） Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ Ｉａｃｔ
ｉｓ ５ｕｂｓｐ。
る （Ｃｉｔ”） Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ Ｉａｃｔ
ｉｓ ５ｕｂｓｐ。
Ｉａｃｔｉｓ （Ｓｔｒｅ ｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃ
ｔｉｓ ５ｕｂｓｐ、 牡赳１■ａｃｔｉｓ）、Ｌｅｕ
ｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓｓｕ
ｂｓｐ、 ｃｒｅｍｏｒｉｓ等の乳酸菌が産生ずる香気
成分であり、クエン酸を基質として生成されることが知
られている。従って、乳酸菌によるジアセチル、アセト
イン生成能は、クエン酸およびその代謝産物の代謝活性
と密接に関連しており、これまでに報告されたジアセチ
ル、アセトイン生成量を高める方法もクエン酸がこれら
香気成分の前駆体であることを前提としたものがほとん
どである。
ｔｉｓ ５ｕｂｓｐ、 牡赳１■ａｃｔｉｓ）、Ｌｅｕ
ｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓｓｕ
ｂｓｐ、 ｃｒｅｍｏｒｉｓ等の乳酸菌が産生ずる香気
成分であり、クエン酸を基質として生成されることが知
られている。従って、乳酸菌によるジアセチル、アセト
イン生成能は、クエン酸およびその代謝産物の代謝活性
と密接に関連しており、これまでに報告されたジアセチ
ル、アセトイン生成量を高める方法もクエン酸がこれら
香気成分の前駆体であることを前提としたものがほとん
どである。
例えば、培地中に金属塩を添加し、乳酸菌のクエン酸代
謝活性を高めること、又は、クエン酸を含む培地で乳酸
菌を一定時間培養後、クエン酸および金属塩を添加し、
引き続き数時間培養する方法（Ａｇｒｉｃ、 Ｂｉｏｌ
、 Ｃｈｅｍ、、 ５Ｌ ２３１５（１９８７）） 、
ジアセチルレダクターゼ活性を低めるために低温又は低
ｐＨで培養する方法（Ｊ、 Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ、、５
１，３３９（１９６８）） 、ならびにジアセチルおよ
びアセトインの前駆体として、クエン酸又はピルビン酸
を培地に添加する方法（Ｄｉｅ Ｎａｈｒｕｎｇ、 ２
６．６１５（１９８２）Ｍｉｌｃｈｗｉｓｓｅｎｓｃｈ
ａｆｔ、３８．２１８（１９７６））等である。これに
対し、乳酸菌はジアセチルレダクターゼを有しており、
本酵素の作用により生成されたジアセチルはアセトイン
に直ちに変換されることが明らかとなっている （Ｊ、
Ｄａｉｒｙ、 Ｓｃｉ、、 ５５．１０２２（１９７
２））。アセトインはジアセチルと類似した香気を呈す
るフレーバー成分であるが、ジアセチルに比較すると香
気が著しく弱い。従って、フレーバー強度を高めるため
には、生成されたジアセチルのアセトインへの変換を防
止することが必要であるが、大量に生成されたアセトイ
ンをジアセチルに酸化変換してもその目的を達成するこ
とができる。
謝活性を高めること、又は、クエン酸を含む培地で乳酸
菌を一定時間培養後、クエン酸および金属塩を添加し、
引き続き数時間培養する方法（Ａｇｒｉｃ、 Ｂｉｏｌ
、 Ｃｈｅｍ、、 ５Ｌ ２３１５（１９８７）） 、
ジアセチルレダクターゼ活性を低めるために低温又は低
ｐＨで培養する方法（Ｊ、 Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ、、５
１，３３９（１９６８）） 、ならびにジアセチルおよ
びアセトインの前駆体として、クエン酸又はピルビン酸
を培地に添加する方法（Ｄｉｅ Ｎａｈｒｕｎｇ、 ２
６．６１５（１９８２）Ｍｉｌｃｈｗｉｓｓｅｎｓｃｈ
ａｆｔ、３８．２１８（１９７６））等である。これに
対し、乳酸菌はジアセチルレダクターゼを有しており、
本酵素の作用により生成されたジアセチルはアセトイン
に直ちに変換されることが明らかとなっている （Ｊ、
Ｄａｉｒｙ、 Ｓｃｉ、、 ５５．１０２２（１９７
２））。アセトインはジアセチルと類似した香気を呈す
るフレーバー成分であるが、ジアセチルに比較すると香
気が著しく弱い。従って、フレーバー強度を高めるため
には、生成されたジアセチルのアセトインへの変換を防
止することが必要であるが、大量に生成されたアセトイ
ンをジアセチルに酸化変換してもその目的を達成するこ
とができる。
一方、ジアセチルレダクターゼは培地中にクエン酸が残
存しているとその合成抑制と活性低下が起こると考えら
れており、クエン酸が全て消費されるとともに、ジアセ
チルのアセトインへの変換が象、速に起こる。
存しているとその合成抑制と活性低下が起こると考えら
れており、クエン酸が全て消費されるとともに、ジアセ
チルのアセトインへの変換が象、速に起こる。
乳酸菌の１菌株である（Ｃｉｔ”） Ｌａｃｔｏｃｏ
ｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ ５ｕｂｓｐ、Ｉａｃｔｉｓ ３
０２２をＭＲ３培地中で３０”Ｃで静置培養すると、８
時間後に培地中のクエン酸がほとんど消費されるととも
に、生成されたジアセチルの低減が直ちに起こり、ジア
セチルの収率が低くなることが知られている （Ａｇｒ
ｉｃ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ１１３皿、 ２６３９（１９８
６））。このように培養時にジアセチルがアセトインに
変換することは、ジアセチルを安定的に生産する上で困
難を伴うことになる。
ｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ ５ｕｂｓｐ、Ｉａｃｔｉｓ ３
０２２をＭＲ３培地中で３０”Ｃで静置培養すると、８
時間後に培地中のクエン酸がほとんど消費されるととも
に、生成されたジアセチルの低減が直ちに起こり、ジア
セチルの収率が低くなることが知られている （Ａｇｒ
ｉｃ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ１１３皿、 ２６３９（１９８
６））。このように培養時にジアセチルがアセトインに
変換することは、ジアセチルを安定的に生産する上で困
難を伴うことになる。
その上、乳酸菌を脱脂粉乳培地等で培養した際に生成さ
れるジアセチル量は２〜１０ｐｐｍ程度と低いのが一般
的である。
れるジアセチル量は２〜１０ｐｐｍ程度と低いのが一般
的である。
すなわち、従来技術においては、ジアセチルのアセトイ
ンへの変換を如何に防止するかが重要な問題点であった
。一方、ジアセチルおよびアセトインの直接の前駆体と
なるピルビン酸は、クエン酸の代謝の他に、グルコース
等の炭水化物の代謝によっても生成される。−船釣にク
エン酸が存在しないと乳酸菌はジアセチルを生成しない
と考えられている （Ａｐｐｌ、Ｅｎｖｉｒｏｎ、Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ、 ３１＋ ４８１（１９７６））が炭
水化物のみの代謝によりジアセチル、アセトイン生産が
可能となればクエン酸の添加が不要となり、生産コスト
が低減することができるので産業上益するところが大き
い。
ンへの変換を如何に防止するかが重要な問題点であった
。一方、ジアセチルおよびアセトインの直接の前駆体と
なるピルビン酸は、クエン酸の代謝の他に、グルコース
等の炭水化物の代謝によっても生成される。−船釣にク
エン酸が存在しないと乳酸菌はジアセチルを生成しない
と考えられている （Ａｐｐｌ、Ｅｎｖｉｒｏｎ、Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ、 ３１＋ ４８１（１９７６））が炭
水化物のみの代謝によりジアセチル、アセトイン生産が
可能となればクエン酸の添加が不要となり、生産コスト
が低減することができるので産業上益するところが大き
い。
［発明が解決しようとする課題］
本発明は、乳酸菌によるジアセチル、アセトイン発酵法
において基質として乳酸菌が利用可能な糖質を用い、ジ
アセチル、アセトインを高濃度で安定的に生産させるジ
アセチル、アセトイン発酵法を提供することを目的とし
てなされたものである。
において基質として乳酸菌が利用可能な糖質を用い、ジ
アセチル、アセトインを高濃度で安定的に生産させるジ
アセチル、アセトイン発酵法を提供することを目的とし
てなされたものである。
本発明者らは、この目的を達成するため、乳酸菌の培養
条件を中心に鋭意研究を重ねた結果、以下のことを見い
出すに至った。すなわち、（Ｃｉｔ”）Ｌａｃｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ ５ｕｂｓｐ、 １ａｃｔｉｓ
３０２２ （ＦＥＲＭＢＰ−２８０５）をＭＲ３培地
を用いて振とう培養すると、静置培養したものに比較し
、 （１） ジアセチル生成（ジアセチルシンターゼ）活
性が約５倍高くなる （第１表）。
条件を中心に鋭意研究を重ねた結果、以下のことを見い
出すに至った。すなわち、（Ｃｉｔ”）Ｌａｃｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ ５ｕｂｓｐ、 １ａｃｔｉｓ
３０２２ （ＦＥＲＭＢＰ−２８０５）をＭＲ３培地
を用いて振とう培養すると、静置培養したものに比較し
、 （１） ジアセチル生成（ジアセチルシンターゼ）活
性が約５倍高くなる （第１表）。
（２） グルコース消費量が多くなるのに対し、乳酸
生成量は逆に低くなる （第２表）。
生成量は逆に低くなる （第２表）。
（３）培地中のクエン酸が全て消費される培養８時間以
降でもジアセチル蓄積量が増加し、ジアセチルの低減が
認められない。従って、安定的にジアセチルを生産する
ことができる （第１図）。
降でもジアセチル蓄積量が増加し、ジアセチルの低減が
認められない。従って、安定的にジアセチルを生産する
ことができる （第１図）。
（４） クエン酸を含まないＭＲ３培地でも、ジアセ
チルおよびアセトインの生成が起こる（第３表）。
チルおよびアセトインの生成が起こる（第３表）。
ことが分ったのである。これらの結果は乳酸菌を振とう
して好気的に培養すると本来のジアセチル生成活性が高
まるので、クエン酸以外のグルコースより生成されたピ
ルビン酸からもジアセチルおよびアセトインが生成し得
ることを示すものである。
して好気的に培養すると本来のジアセチル生成活性が高
まるので、クエン酸以外のグルコースより生成されたピ
ルビン酸からもジアセチルおよびアセトインが生成し得
ることを示すものである。
以上の事実をもとに本発明者らは、さらに研究を進めた
結果、培地に鉄ポルフィリン、ヘム蛋白質、鉄ポルフィ
リンを含む動物組織、血液から選ばれる一種以上、なら
びに金属塩を添加後、乳酸菌を接種し、振とうもしくは
通気して好気下で培養すると、添加した糖源のほとんど
がジアセチルおよびアセトインに代謝されること、すな
わち、ジアセチル、アセトイン発酵が起こることを発見
したのである。
結果、培地に鉄ポルフィリン、ヘム蛋白質、鉄ポルフィ
リンを含む動物組織、血液から選ばれる一種以上、なら
びに金属塩を添加後、乳酸菌を接種し、振とうもしくは
通気して好気下で培養すると、添加した糖源のほとんど
がジアセチルおよびアセトインに代謝されること、すな
わち、ジアセチル、アセトイン発酵が起こることを発見
したのである。
本発明は上述の知見に基づいて完成されたものであって
、その構成は、乳酸菌が利用し得る１！源を含む培養基
質に鉄ポリフィリン、ヘム蛋白質、鉄ポリフィリンを含
む動物組織、血液から選ばれる一種以上と金属塩を添加
後、乳酸菌を接種し、振とうもしくは通気して好気下で
培養することを特徴とする乳酸菌によるジアセチル、ア
セトイン発酵法に在する。
、その構成は、乳酸菌が利用し得る１！源を含む培養基
質に鉄ポリフィリン、ヘム蛋白質、鉄ポリフィリンを含
む動物組織、血液から選ばれる一種以上と金属塩を添加
後、乳酸菌を接種し、振とうもしくは通気して好気下で
培養することを特徴とする乳酸菌によるジアセチル、ア
セトイン発酵法に在する。
本願発明において用いる糖源は、乳酸菌が利用し得るも
のならば特に制限はされないが、グルコース、ラクトー
ス等が好ましい。
のならば特に制限はされないが、グルコース、ラクトー
ス等が好ましい。
添加物としての鉄ポルフィリンは、ヘム蛋白質も含めた
意味で使用するが、鉄ポルフィリンとしては例えばヘム
、ヘミン、ヘマチンがあげられる。
意味で使用するが、鉄ポルフィリンとしては例えばヘム
、ヘミン、ヘマチンがあげられる。
ヘム蛋白質には、チトクロムオキシダーゼ、チトクロム
、カタラーゼ、パーオキシダーゼ、ヘモグロビン等が含
まれる。
、カタラーゼ、パーオキシダーゼ、ヘモグロビン等が含
まれる。
鉄ポルフィリン、ヘム蛋白質、鉄ポルフィリンを含む動
物組織、血液等は鉄ポルフィリンとして０．１〜５００
μ阿、望ましくは０．５〜５μＮ添加すればよい。
物組織、血液等は鉄ポルフィリンとして０．１〜５００
μ阿、望ましくは０．５〜５μＮ添加すればよい。
さらに、金属塩は鉄イオン、銅イオンならびにモリブデ
ンイオンの一種又は二種以上を無機塩類または有機塩類
の形で、これらの合計量が０．０１〜１０ｍＭ添加すれ
ばよい。
ンイオンの一種又は二種以上を無機塩類または有機塩類
の形で、これらの合計量が０．０１〜１０ｍＭ添加すれ
ばよい。
無機塩としては、例えば塩化物、硫化物、有機塩として
は、例えば酢酸塩、乳酸塩である。
は、例えば酢酸塩、乳酸塩である。
クエン酸は培地の必須成分ではないが培地に添加しても
よい。クエン酸塩添加培地ではクエン酸無添加培地に比
較し、ジアセチルおよびアセトイン生成量が若干高くな
る。
よい。クエン酸塩添加培地ではクエン酸無添加培地に比
較し、ジアセチルおよびアセトイン生成量が若干高くな
る。
上記した鉄ポルフィリン又はヘム蛋白質、鉄ポルフィリ
ンを含む動物組織、血液、ならびに金属塩は、あらかし
め培地を加熱滅菌した後に添加してもよいし、他の培地
成分と同時に添加し、加熱滅菌してもよい。特にヘム蛋
白質であるヘモグロビン、チトクロムオキシダーゼ、カ
タラーゼ、パーオキシダーゼは特定の酵素作用等により
乳酸菌のジアセチルおよびアセトイン生産性を高めるの
ではなく、蛋白質の成分である鉄ポルフィリンの存在が
乳酸菌のジアセチルおよびアセトイン生成能を著しく高
めるからである。従って、前記したヘム蛋白質に比較し
、安価な鉄ポルフィリンを含む動物の血液又は組織、例
えば、肝臓、腎臓等又はこれらの抽出液を請求項３で示
したように鉄ポルフィリンとして０．１・μバ以上培地
に添加し、乳酸菌を接種し、振とうもしくは通気して好
気下で培養してもジアセチル、アセトイン発酵を行うこ
とができる。
ンを含む動物組織、血液、ならびに金属塩は、あらかし
め培地を加熱滅菌した後に添加してもよいし、他の培地
成分と同時に添加し、加熱滅菌してもよい。特にヘム蛋
白質であるヘモグロビン、チトクロムオキシダーゼ、カ
タラーゼ、パーオキシダーゼは特定の酵素作用等により
乳酸菌のジアセチルおよびアセトイン生産性を高めるの
ではなく、蛋白質の成分である鉄ポルフィリンの存在が
乳酸菌のジアセチルおよびアセトイン生成能を著しく高
めるからである。従って、前記したヘム蛋白質に比較し
、安価な鉄ポルフィリンを含む動物の血液又は組織、例
えば、肝臓、腎臓等又はこれらの抽出液を請求項３で示
したように鉄ポルフィリンとして０．１・μバ以上培地
に添加し、乳酸菌を接種し、振とうもしくは通気して好
気下で培養してもジアセチル、アセトイン発酵を行うこ
とができる。
一方、本発明における乳酸菌としては、クエン酸資化能
の有無にかかわらず、ジアセチルおよびアセトイン生成
能を有していればどのような乳酸菌を用いてもよいが、
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉ−１１ｕｓ）属、
ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属（旧Ｓｔ
ｒ旦ｌ亙り成立り−ＩＫ）、並びにロイコノストック（
Ｌｅｕｃｏｎｏｓ ｔｏｃ）属に属する微生物を用いる
のが好ましい。これらの属に含まれる微生物を例示すれ
は次のようなものがある。
の有無にかかわらず、ジアセチルおよびアセトイン生成
能を有していればどのような乳酸菌を用いてもよいが、
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉ−１１ｕｓ）属、
ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属（旧Ｓｔ
ｒ旦ｌ亙り成立り−ＩＫ）、並びにロイコノストック（
Ｌｅｕｃｏｎｏｓ ｔｏｃ）属に属する微生物を用いる
のが好ましい。これらの属に含まれる微生物を例示すれ
は次のようなものがある。
５ｔｒｅ ｔｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ ５ｕｂｓｐ
、ｄｉａｃｅｔ １ａｃｔｉｓ ＡＴＣＣ１１００７、
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ＡＴＣＣ３
３４，Ｌｅｕｃｏｎｏ−５ｔｏｃ ｃｒｅｍｏｒｉｓ
ＡＴＣＣ１９２５４，（Ｃｉｔ”） Ｌａｃｔｏ
ｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ ５ｕｂｓｐ、 Ｉａｃｔ
ｉｓ ３０２２ （ＦＥＲＭ ＢＰ−２８０５）＋Ｌ
ａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ２２０６
（ＦＥＲＭ ＢＰ−２８０６）。
、ｄｉａｃｅｔ １ａｃｔｉｓ ＡＴＣＣ１１００７、
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ＡＴＣＣ３
３４，Ｌｅｕｃｏｎｏ−５ｔｏｃ ｃｒｅｍｏｒｉｓ
ＡＴＣＣ１９２５４，（Ｃｉｔ”） Ｌａｃｔｏ
ｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ ５ｕｂｓｐ、 Ｉａｃｔ
ｉｓ ３０２２ （ＦＥＲＭ ＢＰ−２８０５）＋Ｌ
ａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ２２０６
（ＦＥＲＭ ＢＰ−２８０６）。
第１表
（Ｃｉｔ”） Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ
５ｕｂｓｐ、 １ａｃｔｉｓ ３０２２をＭＲ３培地
で振とう培養ならびに静置培養した際のジアセチル生成
（ジアセチルジンダーゼ）活性 一ス、乳酸ならびにクエン酸はいずれも酵素法（ヘーリ
ンガーマンハイム社）により測定した。
５ｕｂｓｐ、 １ａｃｔｉｓ ３０２２をＭＲ３培地
で振とう培養ならびに静置培養した際のジアセチル生成
（ジアセチルジンダーゼ）活性 一ス、乳酸ならびにクエン酸はいずれも酵素法（ヘーリ
ンガーマンハイム社）により測定した。
また、使用したＭＲ３培地の組成は次の通りである。
ペプトン１０ｇ、 ラブレムコ粉末１０ｇ、イースト
エクストラクト５ｇ、グルコース２０ｇ、ツイーン８０
１ｍｊ！、 Ｋ２ＦＩＰ０４２ ｇ 、酢酸ソーダ５ｇ
、トリアンモニウムシトレート ２ ｇ 、 ＭｇＳＯ
４４）１ｚｏ ２００ｍｇＭｎ５Ｏ４＝ ４）１２０
５９ｍｇ、蒸留水１００ｈ＋４！、 ｐＨ６，５゜第１
表、第２表ならびに第３表において、ジアセチル、アセ
トイン生成量ならびにジアセチル生成活性は、本発明者
らの報告（Ａｇｒｉｃ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ。
エクストラクト５ｇ、グルコース２０ｇ、ツイーン８０
１ｍｊ！、 Ｋ２ＦＩＰ０４２ ｇ 、酢酸ソーダ５ｇ
、トリアンモニウムシトレート ２ ｇ 、 ＭｇＳＯ
４４）１ｚｏ ２００ｍｇＭｎ５Ｏ４＝ ４）１２０
５９ｍｇ、蒸留水１００ｈ＋４！、 ｐＨ６，５゜第１
表、第２表ならびに第３表において、ジアセチル、アセ
トイン生成量ならびにジアセチル生成活性は、本発明者
らの報告（Ａｇｒｉｃ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ。
５０、２６３９（１９８６））によりヘッドスペースガ
スクロマトグラフィーを用いて測定した。また、グルコ
第２表 （Ｃｉｔ”） Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ
５ｕｂｓｐ、 １ａｃｔｉｓ ３０２２をＭＲ３培地
で振とう培養ならびに静置培養した際のグルコース消費
量と乳酸生成量（３０°Ｃ３２４時間培養） 第３表 （Ｃｉｔ”） Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ
５ｕｂｓｐ、 Ｉａｃｔｉｓ ３０２２をクエン酸添
加およびクエン酸無添加培地で静置および振とう培養し
た際のジアセチル、アセトイン生成量（３０°Ｃ１２４
時間培養） 本発明を実施する場合、鉄ポルフィリン、ヘム蛋白質、
鉄ポルフィリンを含む動物組織、血液から選ばれる一種
以上、ならびに金属塩を添加しないで振とう培養した際
は、これらの添加物を加えて培養したものに比較し、ジ
アセチル、アセトイン生成量は、いずれも１０分の１以
下となる（第４表参照）。従って、糖を基質とし、ジア
セチル、アセトイン発酵を得るためには、ヘム、ヘム蛋
白質、ヘムを含む動物組織、血液、ならびに金属塩の添
加が必須である。
スクロマトグラフィーを用いて測定した。また、グルコ
第２表 （Ｃｉｔ”） Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ
５ｕｂｓｐ、 １ａｃｔｉｓ ３０２２をＭＲ３培地
で振とう培養ならびに静置培養した際のグルコース消費
量と乳酸生成量（３０°Ｃ３２４時間培養） 第３表 （Ｃｉｔ”） Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ
５ｕｂｓｐ、 Ｉａｃｔｉｓ ３０２２をクエン酸添
加およびクエン酸無添加培地で静置および振とう培養し
た際のジアセチル、アセトイン生成量（３０°Ｃ１２４
時間培養） 本発明を実施する場合、鉄ポルフィリン、ヘム蛋白質、
鉄ポルフィリンを含む動物組織、血液から選ばれる一種
以上、ならびに金属塩を添加しないで振とう培養した際
は、これらの添加物を加えて培養したものに比較し、ジ
アセチル、アセトイン生成量は、いずれも１０分の１以
下となる（第４表参照）。従って、糖を基質とし、ジア
セチル、アセトイン発酵を得るためには、ヘム、ヘム蛋
白質、ヘムを含む動物組織、血液、ならびに金属塩の添
加が必須である。
（実験例〕
１襞方法
クエン酸塩を除く、ＭＲ３Ｒ３培地１所０ヘミン、１
ｍｌのカタラーゼ（シグマ社， ２０８００Ｕ／ｍｇた
んばく質， ３５ｍｇたんばく質／ｍ１ｌ） 、０．
５ ｇの牛血液、０．１ｇの牛肝臓、１ 、 ７ ｍｇ
のＣｕＣ１ｚ・２ＨｚＯそれぞれを加え、１２１°Ｃで
１０分間滅菌後、（Ｃｉｔ“）Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ
１ａｃｔｉｓ ５ｕｂｓｐ． Ｉａｃｔｉｓ ３０２
２の前培養液１ ｍｌを接種し、３０°Ｃにて１２０ｓ
ｔｒｏｋｅｓ／ｍｉｎの条件で４８時間振とう培養し、
ジアセチルおよびアセトイン生成量を測定した結果なら
びにヘミンとＣｕＣｌ２ ・２）１ｚＯ１牛肝臓とＣｕ
Ｃ１−２８２０それぞれの混合物を添加し、同様に培養
した際のジアセチル、アセトイン生成量の結果を第４表
に示す。
ｍｌのカタラーゼ（シグマ社， ２０８００Ｕ／ｍｇた
んばく質， ３５ｍｇたんばく質／ｍ１ｌ） 、０．
５ ｇの牛血液、０．１ｇの牛肝臓、１ 、 ７ ｍｇ
のＣｕＣ１ｚ・２ＨｚＯそれぞれを加え、１２１°Ｃで
１０分間滅菌後、（Ｃｉｔ“）Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ
１ａｃｔｉｓ ５ｕｂｓｐ． Ｉａｃｔｉｓ ３０２
２の前培養液１ ｍｌを接種し、３０°Ｃにて１２０ｓ
ｔｒｏｋｅｓ／ｍｉｎの条件で４８時間振とう培養し、
ジアセチルおよびアセトイン生成量を測定した結果なら
びにヘミンとＣｕＣｌ２ ・２）１ｚＯ１牛肝臓とＣｕ
Ｃ１−２８２０それぞれの混合物を添加し、同様に培養
した際のジアセチル、アセトイン生成量の結果を第４表
に示す。
（装置以下余白）
第４表
（Ｃｉｔ”） Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ
５ｕｂｓｐ、 １ａｃｔｉｓ ３０２２のジアセチル
およびアセトイン生成に及ぼすヘミン、カタラーゼ、牛
血液、牛肝臓ならびに洞イオンの効果 〔実施例］ 以下に本発明を実施例により詳細に説明する。
５ｕｂｓｐ、 １ａｃｔｉｓ ３０２２のジアセチル
およびアセトイン生成に及ぼすヘミン、カタラーゼ、牛
血液、牛肝臓ならびに洞イオンの効果 〔実施例］ 以下に本発明を実施例により詳細に説明する。
実施例１
クエン酸塩を除いたＭＲ３培地１００ｍ１に、０．１ｍ
Ｍ ＣｕＣ１ｚを加え、１２１°Ｃ１１０分間加熱滅菌
する。
Ｍ ＣｕＣ１ｚを加え、１２１°Ｃ１１０分間加熱滅菌
する。
これに０．０５Ｎ ＮａＯＨで溶解したヘミン（濾過除
菌したもの）を５μ門となるように加え、（Ｃｉｔ”）
Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ ５ｕｂｓｐ、
１ａｃｔｉｓ ＯＬＳ ３０２２（微工研条寄第２８
０５号（ＦＥＲＭ ＢＰ−２８０５））スターターを１
％接種し、３０°Ｃにて１２０５ｔｒｏｋｅｓ／ｍｉｎ
の条件で４８時間振とう培養した。得られた培養液中の
ジアセチル量は、２５０ｍｇ／ ｌ、アセトイン量は６
３００ｍｇ／ ｆｆｉであった。
菌したもの）を５μ門となるように加え、（Ｃｉｔ”）
Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ ５ｕｂｓｐ、
１ａｃｔｉｓ ＯＬＳ ３０２２（微工研条寄第２８
０５号（ＦＥＲＭ ＢＰ−２８０５））スターターを１
％接種し、３０°Ｃにて１２０５ｔｒｏｋｅｓ／ｍｉｎ
の条件で４８時間振とう培養した。得られた培養液中の
ジアセチル量は、２５０ｍｇ／ ｌ、アセトイン量は６
３００ｍｇ／ ｆｆｉであった。
実施例２
クエン酸塩を除いたＭＲ３培地１００ ｔｎｌに、０．
１ｍＭ ＦｅＣ１：＋およびスラリー状にした牛肝臓を
１００ｍｇ加え、１２１°Ｃにて１０分間加熱滅菌し、
これに、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ Ａ
ＴＣＣ３３４スターターおよび（Ｃｉｔ”） Ｌａｃｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ ５ｕｂｓｐ、１ａｃｔ
ｉｓ ０ＬＳ３０２２ （微工研条寄第２８０５号（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−２８０５））スターターそれぞれを１％
宛接種し、３０°Ｃにて通気しながら２４時間培養した
。得られた培養液中のジアセチル量は６２０ｍｇ／ ｌ
、アセトイン量は６０００ｍｇ／ ｌであった。
１ｍＭ ＦｅＣ１：＋およびスラリー状にした牛肝臓を
１００ｍｇ加え、１２１°Ｃにて１０分間加熱滅菌し、
これに、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ Ａ
ＴＣＣ３３４スターターおよび（Ｃｉｔ”） Ｌａｃｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ ５ｕｂｓｐ、１ａｃｔ
ｉｓ ０ＬＳ３０２２ （微工研条寄第２８０５号（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−２８０５））スターターそれぞれを１％
宛接種し、３０°Ｃにて通気しながら２４時間培養した
。得られた培養液中のジアセチル量は６２０ｍｇ／ ｌ
、アセトイン量は６０００ｍｇ／ ｌであった。
実施例３
ＭＲ３培地１００ｄに０．１ｍＭ ＣｕＣ１ｚ＋ ０．
１ｍＭ ＦｅＣｌ：＋０．１ｍＭ ＮａｚＭ、Ｏ＝、カ
タラーゼ（シグマ社２０８０００／■たんばく質）を４
００００／ｍ１となるように加え、１２１”Ｃ，１０分
間加熱滅菌し、これにＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｃｒｅ
−ｍｏｒｉｓ ＡＴＣＣ１９２５４スターターおよび（
Ｃｉｔ”） Ｌａｃｔｏ−ｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ
５ｕｂｓｐ、 １ａｃｔｉｓ ＯＬＳ ３Ｑ２２（微
工研条寄第２８０５号（ＦＥＲＭ ＢＰ−２８０５））
スターターそれぞれをＩ％宛接種し、３０°Ｃにて１２
０ｓｔｒｏｋｅｓ／ｍｉｎの条件で４８時間振とう培養
した。得られた培養液中のジアセチル量は２９０ｍｇ／
ｌ、アセトイン量は７５００ｍｇ／２であった。
１ｍＭ ＦｅＣｌ：＋０．１ｍＭ ＮａｚＭ、Ｏ＝、カ
タラーゼ（シグマ社２０８０００／■たんばく質）を４
００００／ｍ１となるように加え、１２１”Ｃ，１０分
間加熱滅菌し、これにＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｃｒｅ
−ｍｏｒｉｓ ＡＴＣＣ１９２５４スターターおよび（
Ｃｉｔ”） Ｌａｃｔｏ−ｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ
５ｕｂｓｐ、 １ａｃｔｉｓ ＯＬＳ ３Ｑ２２（微
工研条寄第２８０５号（ＦＥＲＭ ＢＰ−２８０５））
スターターそれぞれをＩ％宛接種し、３０°Ｃにて１２
０ｓｔｒｏｋｅｓ／ｍｉｎの条件で４８時間振とう培養
した。得られた培養液中のジアセチル量は２９０ｍｇ／
ｌ、アセトイン量は７５００ｍｇ／２であった。
実施例４
１０ｇ脱脂粉乳、０．１ｇ酵母エキス、１．７ｍｇ Ｃ
ｕＣ１ｚ、９０ｄ水ならびにスラリー状にした生腎臓を
５０■加え、９５°Ｃにて１０分間加熱後、（Ｃｉｔ”
） Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ ５ｕｂｓｐ
、 １ａｃｔｉｓ ＯＬＳ ３０２２（微工研条寄第２
８０５号（ＦＥＲＭ ＢＰ−２８０５））スターター
２％を接種し、３０°Ｃにて通気しながら４８時間培養
した。得られた培養液中のジアセチル量は２３０ｍｇ／
ｌ、アセトイン量は５９００ｍｇ／ ｌであった。
ｕＣ１ｚ、９０ｄ水ならびにスラリー状にした生腎臓を
５０■加え、９５°Ｃにて１０分間加熱後、（Ｃｉｔ”
） Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ ５ｕｂｓｐ
、 １ａｃｔｉｓ ＯＬＳ ３０２２（微工研条寄第２
８０５号（ＦＥＲＭ ＢＰ−２８０５））スターター
２％を接種し、３０°Ｃにて通気しながら４８時間培養
した。得られた培養液中のジアセチル量は２３０ｍｇ／
ｌ、アセトイン量は５９００ｍｇ／ ｌであった。
実施例５
クエン酸塩を除いたＭＲ３培地（糖源ラクトース）に０
．１ｍＭ Ｆｅ５０．を加え、１２１’Ｃ，１０分間加
熱滅菌する。これに０．０５Ｎ ＮａＯＨで溶解したヘ
ミン（濾過除菌したもの）を１μＭとなるように加え、
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ２２０６（
微工研条寄第２８０６号（ＦＥＲＮ ＢＰ−２８０６）
）スターターを１％接種し、３５°Ｃにて１２５５ｔｒ
ｏｋｅｓ／ｍｉｎの条件で２４時間振とう培養した。得
られた培養液中のジアセチル量は９００ＩＩ１ｇ／ｌ、
アセトイン量は２０００ｍｇ／ ｌであった。
．１ｍＭ Ｆｅ５０．を加え、１２１’Ｃ，１０分間加
熱滅菌する。これに０．０５Ｎ ＮａＯＨで溶解したヘ
ミン（濾過除菌したもの）を１μＭとなるように加え、
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ２２０６（
微工研条寄第２８０６号（ＦＥＲＮ ＢＰ−２８０６）
）スターターを１％接種し、３５°Ｃにて１２５５ｔｒ
ｏｋｅｓ／ｍｉｎの条件で２４時間振とう培養した。得
られた培養液中のジアセチル量は９００ＩＩ１ｇ／ｌ、
アセトイン量は２０００ｍｇ／ ｌであった。
本発明の方法により乳酸菌を培養すると、添加した糖源
のほとんどがジアセチルおよびアセトインに変換される
。この培養液を蒸留、濃縮等の操作を行うことによりジ
アセチルおよびアセトイン濃度を更に高くすることがで
きる。また、生成したアセトインを酸化することにより
ジアセチルに変換することもできる。
のほとんどがジアセチルおよびアセトインに変換される
。この培養液を蒸留、濃縮等の操作を行うことによりジ
アセチルおよびアセトイン濃度を更に高くすることがで
きる。また、生成したアセトインを酸化することにより
ジアセチルに変換することもできる。
本発明は、クエン酸を培養基質に加えなくとも安価な糖
源を基質として、高濃度のジアセチルおよびアセトイン
を安定的に生産することを可能にしたものである。本培
養液又はそのジアセチル濃縮物は、バター、マーガリン
、チーズ類、ショートニング等の油脂類、菓子類、クリ
ーム類等の食品に対して少量添加することにより風味の
増強もしくは改善を行うことができる。
源を基質として、高濃度のジアセチルおよびアセトイン
を安定的に生産することを可能にしたものである。本培
養液又はそのジアセチル濃縮物は、バター、マーガリン
、チーズ類、ショートニング等の油脂類、菓子類、クリ
ーム類等の食品に対して少量添加することにより風味の
増強もしくは改善を行うことができる。
第１図は、坂ロフラスコ（１００ｍＩｌのＭＲ３培地を
含む）に（Ｃｉｔ”）Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃ
ｔｉｓ ５ｕｂｓｐ、Ｉａｃｔｉｓ３０２２の前培養液
Ｉ Ｉｎｌを接種し、３０’Ｃで静置培養（・）ならび
に１２０５ｔｒｏｋｅｓ／ｍｉｎの条件で振とう培養（
○）した際のジアセチル生成量とクエン酸消費量を示す
図である。図中、実線（−）はジアセチル生成量、破線
（−）はクエン酸消費量を示す。
含む）に（Ｃｉｔ”）Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃ
ｔｉｓ ５ｕｂｓｐ、Ｉａｃｔｉｓ３０２２の前培養液
Ｉ Ｉｎｌを接種し、３０’Ｃで静置培養（・）ならび
に１２０５ｔｒｏｋｅｓ／ｍｉｎの条件で振とう培養（
○）した際のジアセチル生成量とクエン酸消費量を示す
図である。図中、実線（−）はジアセチル生成量、破線
（−）はクエン酸消費量を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、乳酸菌が利用しうる糖源を含む培養基質に鉄ポルフ
ィリン、ヘム蛋白質、鉄ポルフィリンを含む動物組織、
血液から選ばれる一種以上と、金属塩を添加後、乳酸菌
を接種し、振とう、もしくは通気して好気下で培養する
ことを特徴とする乳酸菌によるジアセチル、アセトイン
発酵法。 ２、乳酸菌がジアセチル生成能を有するラクトバチルス
属、ラクトコッカス属、並びにロイコノストック属に属
する微生物であることを特徴とする請求項１記載のジア
セチル、アセトイン発酵法。 ３、培養基質に添加する鉄ポルフィリン、ヘム蛋白質、
鉄ポルフィリンを含む動物組織、血液は、鉄ポルフィリ
ンとして０．１〜５００μＭであることを特徴とする請
求項１記載のジアセチル・アセトイン発酵法。 ４、培養基質に添加する金属塩が鉄、銅、並びにモリブ
デンであり、これらの一種又は二種以上を無機塩類又は
有機塩類の形で合計量が０．０１〜１０ｍＭとなるよう
に添加することを特徴とする請求項１記載の乳酸菌によ
るジアセチル、アセトイン発酵法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2078626A JP2901008B2 (ja) | 1989-11-28 | 1990-03-29 | 乳酸菌によるジアセチル、アセトイン発酵法 |
| US07/581,601 US5075226A (en) | 1989-11-28 | 1990-09-12 | Method for the fermentative production of diacetyl and acetoin using lactic acid bacterium |
| EP90310439A EP0430406B1 (en) | 1989-11-28 | 1990-09-24 | Method for the fermentative production of diacetyl and acetoin using lactic acid bacterium |
| DE69027098T DE69027098D1 (de) | 1989-11-28 | 1990-09-24 | Verfahren zur fermentativen Herstellung von Diacetyl und Acetoin unter Verwendung von Milchsäurebakterien |
| CA002029249A CA2029249A1 (en) | 1989-11-28 | 1990-11-02 | Method for the fermentative production of diacetyl and acetoin using lactic acid bacterium |
| NZ236211A NZ236211A (en) | 1989-11-28 | 1990-11-23 | Production of diacetyl and acetoin using lactic-acid bacterium |
| AU67002/90A AU634603B2 (en) | 1989-11-28 | 1990-11-27 | Method for the fermentative production of diacetyl and acetoin using lactic acid bacterium |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1-306405 | 1989-11-28 | ||
| JP30640589 | 1989-11-28 | ||
| JP2078626A JP2901008B2 (ja) | 1989-11-28 | 1990-03-29 | 乳酸菌によるジアセチル、アセトイン発酵法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03219884A true JPH03219884A (ja) | 1991-09-27 |
| JP2901008B2 JP2901008B2 (ja) | 1999-06-02 |
Family
ID=26419678
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2078626A Expired - Fee Related JP2901008B2 (ja) | 1989-11-28 | 1990-03-29 | 乳酸菌によるジアセチル、アセトイン発酵法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5075226A (ja) |
| EP (1) | EP0430406B1 (ja) |
| JP (1) | JP2901008B2 (ja) |
| AU (1) | AU634603B2 (ja) |
| CA (1) | CA2029249A1 (ja) |
| DE (1) | DE69027098D1 (ja) |
| NZ (1) | NZ236211A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH099955A (ja) * | 1995-06-26 | 1997-01-14 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 乳酸菌の分離同定方法 |
| JP2015135352A (ja) * | 2011-08-29 | 2015-07-27 | 株式会社マンダム | 体臭判定用指標剤 |
| JP2017006097A (ja) * | 2015-06-26 | 2017-01-12 | 雪印メグミルク株式会社 | 発酵物の製造方法 |
| JP2021036898A (ja) * | 2020-11-19 | 2021-03-11 | 雪印メグミルク株式会社 | 発酵物の製造方法 |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5236833A (en) * | 1992-03-17 | 1993-08-17 | Nestec S.A. | Diacetyl production |
| DE4239612A1 (de) * | 1992-11-25 | 1994-05-26 | Cultor Oy | Bioreaktor mit immobilisierten, Milchsäure-produzierenden Bakterien und dessen Verwendung in Fermentationsverfahren |
| DE4442162C1 (de) * | 1994-11-26 | 1996-04-11 | Bio Industry Heidelberg Gmbh B | Fermentatives Verfahren zur Herstellung von Butteraroma und dessen Verwendung in Nahrungsmitteln |
| FR2782093B1 (fr) * | 1998-07-24 | 2002-02-08 | Agronomique Inst Nat Rech | Procede de preparation de cultures de bacteries lactiques |
| DE19838046A1 (de) | 1998-08-21 | 2000-02-24 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von alpha-Diketonen aus Ketolen oder Ketalen von Ketolen |
| DK1248536T3 (da) * | 2000-01-21 | 2007-02-26 | Hansens Lab | Porphyrinholdige mælkesyrebakterieceller og anvendelse deraf |
| WO2002002747A2 (en) * | 2000-07-05 | 2002-01-10 | Danmarks Tekniske Universitet | Method of improving biomass yield of lactic acid bacterial cultures |
| US7021145B2 (en) * | 2003-07-21 | 2006-04-04 | Horiba Instruments, Inc | Acoustic transducer |
| CN100343385C (zh) | 2004-11-19 | 2007-10-17 | 上海爱普香料有限公司 | 一株高产3－羟基丁酮的短小芽孢杆菌 |
| ES2352633B8 (es) * | 2009-08-04 | 2012-02-20 | Fundacion Leia Centro De Desarrollo Tecnologico | Cepa mutante de lactococcus lactis lactis y método para la producción industrial de acetoína. |
| IT1401087B1 (it) | 2010-07-20 | 2013-07-12 | Alderan S A S Di Alderano Mannozzi & C Ora Alderan S A S Di D Ottavi Adele & C | Uso di alfa cheto acidi, o loro derivati, per rendere liscio il capello riccio, crespo od ondulato. |
| RU2593944C2 (ru) * | 2010-12-20 | 2016-08-10 | Нестек С.А. | Модуляция вкуса и аромата посредством биотехнологии с применением бактериальных штаммов, обеспечивающих сливочный вкус и аромат |
| GB201209425D0 (en) | 2012-05-28 | 2012-07-11 | Lucite Int Uk Ltd | Process for production of methyl methacrylate |
| FI20125755A7 (fi) * | 2012-06-29 | 2013-12-30 | Valio Oy | Aromimaitokoostumus |
| CN117491526A (zh) * | 2023-11-08 | 2024-02-02 | 山东哲成生物科技有限公司 | 一种果蔬汁乳酸发酵进程的监控方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4304862A (en) * | 1980-05-19 | 1981-12-08 | The Procter & Gamble Company | Method for increasing the diacetyl production of a diacetyl-producing bacteria |
-
1990
- 1990-03-29 JP JP2078626A patent/JP2901008B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-09-12 US US07/581,601 patent/US5075226A/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-09-24 DE DE69027098T patent/DE69027098D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-09-24 EP EP90310439A patent/EP0430406B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-02 CA CA002029249A patent/CA2029249A1/en not_active Abandoned
- 1990-11-23 NZ NZ236211A patent/NZ236211A/en unknown
- 1990-11-27 AU AU67002/90A patent/AU634603B2/en not_active Ceased
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH099955A (ja) * | 1995-06-26 | 1997-01-14 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 乳酸菌の分離同定方法 |
| JP2015135352A (ja) * | 2011-08-29 | 2015-07-27 | 株式会社マンダム | 体臭判定用指標剤 |
| JP2017006097A (ja) * | 2015-06-26 | 2017-01-12 | 雪印メグミルク株式会社 | 発酵物の製造方法 |
| JP2021036898A (ja) * | 2020-11-19 | 2021-03-11 | 雪印メグミルク株式会社 | 発酵物の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU634603B2 (en) | 1993-02-25 |
| US5075226A (en) | 1991-12-24 |
| AU6700290A (en) | 1991-06-06 |
| JP2901008B2 (ja) | 1999-06-02 |
| NZ236211A (en) | 1992-07-28 |
| EP0430406A2 (en) | 1991-06-05 |
| EP0430406B1 (en) | 1996-05-22 |
| DE69027098D1 (de) | 1996-06-27 |
| EP0430406A3 (en) | 1991-10-16 |
| CA2029249A1 (en) | 1991-05-29 |
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