JPH032199A - 競合蛋白結合分析法で使用される抗原ポリアミノ酸―アニリド化合物結合体 - Google Patents
競合蛋白結合分析法で使用される抗原ポリアミノ酸―アニリド化合物結合体Info
- Publication number
- JPH032199A JPH032199A JP2088991A JP8899190A JPH032199A JP H032199 A JPH032199 A JP H032199A JP 2088991 A JP2088991 A JP 2088991A JP 8899190 A JP8899190 A JP 8899190A JP H032199 A JPH032199 A JP H032199A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- general formula
- compound according
- formula
- antigen
- ant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/44—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/961—Chemistry: molecular biology and microbiology including a step of forming, releasing, or exposing the antigen or forming the hapten-immunogenic carrier complex or the antigen per se
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/964—Chemistry: molecular biology and microbiology including enzyme-ligand conjugate production, e.g. reducing rate of nonproductive linkage
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
- Y10S436/816—Alkaloids, amphetamines, and barbiturates
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Polyamides (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、競合蛋白結合分析法で使用される化合物に関
し、更に詳細には、抗原抗体反応を利用した競自蛋白結
き分析法で使用される抗原−アニリド化合物結合体に関
する。
し、更に詳細には、抗原抗体反応を利用した競自蛋白結
き分析法で使用される抗原−アニリド化合物結合体に関
する。
薬物投与方法に関する関心が高まりつつある。
多くの場合において、薬物の有効性は血流中の濃度と直
接関係するので、薬物の投与方法と投与量の両者が長期
間の血中薬物量に影響する。所望血中量が達成される速
度は、薬物の性質、投与方法、用量及び代謝速度に依存
する。静注以外の方法で投与された時に薬物が血流中に
入る速度と薬物代謝速度とには大きな個人差がある。更
に、有効度にも大きな個人差がある。
接関係するので、薬物の投与方法と投与量の両者が長期
間の血中薬物量に影響する。所望血中量が達成される速
度は、薬物の性質、投与方法、用量及び代謝速度に依存
する。静注以外の方法で投与された時に薬物が血流中に
入る速度と薬物代謝速度とには大きな個人差がある。更
に、有効度にも大きな個人差がある。
それゆえ、薬物を投与する時には、各個人の有効量、こ
の有効量が個々の用量で得られる速度、該量が維持され
る時間を確保することが望ましい。
の有効量が個々の用量で得られる速度、該量が維持され
る時間を確保することが望ましい。
ついで薬物投与量を注意深くモニターして所望血中量を
維持する。この方法で有効性が確保され、副作用が最小
化される。
維持する。この方法で有効性が確保され、副作用が最小
化される。
生理学的液体中の薬物をモニターするためには、その薬
物を効果のない代謝産物と異なるものとして迅速に測定
できる高感度テストが必要である。
物を効果のない代謝産物と異なるものとして迅速に測定
できる高感度テストが必要である。
即ち、そのテストは対象薬物と、それに非常に似た構造
を持つ化合物とを明白に区別するものでなければならな
い０Ｍ合蛋白結合分析法で゛は、対象薬物の誘導体と抗
原との結合体により生成される抗体を用いる。この抗体
を有効とするためには、それは高力僅で生成され、対象
薬物に対して強いＷｔき定数を持ち、又類似構造を持つ
化合物に弱く結合するものでなければならない。
を持つ化合物とを明白に区別するものでなければならな
い０Ｍ合蛋白結合分析法で゛は、対象薬物の誘導体と抗
原との結合体により生成される抗体を用いる。この抗体
を有効とするためには、それは高力僅で生成され、対象
薬物に対して強いＷｔき定数を持ち、又類似構造を持つ
化合物に弱く結合するものでなければならない。
被分析媒体中に存在する薬物量と相関した測定可能なシ
グナルを与える試薬の必要性も存在する。
グナルを与える試薬の必要性も存在する。
抗体が存在する場合には、この試薬は反復可能な方法で
抗体との結合に向けて薬物と有効に競合し、又対象濃度
範囲における薬物濃度の小さな変化に応じてシグナルを
有意にかえるものでなければならない。
抗体との結合に向けて薬物と有効に競合し、又対象濃度
範囲における薬物濃度の小さな変化に応じてシグナルを
有意にかえるものでなければならない。
該試薬の他の考慮すべき点は、被分析未知サンプル中に
存在する物質の影響を受けないか妨害物質を除去できる
こと、容易に検出できるシグナルが得られること、試薬
が分析条件下で安定でありかつ良好な貯蔵寿命を持ち、
又薬物の抗体により容易に認識できることである。
存在する物質の影響を受けないか妨害物質を除去できる
こと、容易に検出できるシグナルが得られること、試薬
が分析条件下で安定でありかつ良好な貯蔵寿命を持ち、
又薬物の抗体により容易に認識できることである。
ｆａ合蛋白結合分析法はアメリカ特許第３，８１７゜８
３７号明細書、同第３．８５０．７５２号明細書、同−
第３゜６９０．８３４号明細書、マルフィ（Ｍｕｒｐｈ
ｙ）氏の論文［ジェー・タリノ・エンドクル（Ｊ 、
ＣＩｉｎ。
３７号明細書、同第３．８５０．７５２号明細書、同−
第３゜６９０．８３４号明細書、マルフィ（Ｍｕｒｐｈ
ｙ）氏の論文［ジェー・タリノ・エンドクル（Ｊ 、
ＣＩｉｎ。
Ｅｎｄｏｃｒ、 ）第２７巻、９７３頁（１９６７年）
］に記載されている。多数の様々な薬物に対する抗原結
合体と抗体の製造はアメリカ特許第３，８８８，８６６
号明ａｔ書、同第３，７６６．１６２号明細書、同第３
，８４３，６９６号明細書、同第３，８７８，１８７号
明細書に記載されている。アメリカ特許第３，８７５，
０１１号明細書には均質酵素免疫分析法で使用されるグ
ルコース−６−ホスフェート デヒドロゲナーゼ結合体
が開示されている。ダールボーン（Ｄａｈｌｂｏｒｎ）
氏等はアクタ・ゲミ・スカンド（Ａｃｔａ Ｃｈｅｗ
、 ５ｃａｎｄ、 ）第１３巻、１１４５頁（１９５９
年）に４−アミノ−２，６ジメチルーγ−ジメチルアミ
ノアセトアニリドの製造を教示している。
］に記載されている。多数の様々な薬物に対する抗原結
合体と抗体の製造はアメリカ特許第３，８８８，８６６
号明ａｔ書、同第３，７６６．１６２号明細書、同第３
，８４３，６９６号明細書、同第３，８７８，１８７号
明細書に記載されている。アメリカ特許第３，８７５，
０１１号明細書には均質酵素免疫分析法で使用されるグ
ルコース−６−ホスフェート デヒドロゲナーゼ結合体
が開示されている。ダールボーン（Ｄａｈｌｂｏｒｎ）
氏等はアクタ・ゲミ・スカンド（Ａｃｔａ Ｃｈｅｗ
、 ５ｃａｎｄ、 ）第１３巻、１１４５頁（１９５９
年）に４−アミノ−２，６ジメチルーγ−ジメチルアミ
ノアセトアニリドの製造を教示している。
本発明により、アニリド官能基を持つ薬物がその環炭素
原子にアミノ基を結合させることにより化学修飾され、
ついでこのアミノ基を通じて抗原・か 化合物（通常はポリアミノ酸が酵素）に結合基により結
合される。特に、アミノ基と段階的に反応できる三官能
結合基が用いられる。明記すれば、環に１寸いたアミノ
基を持つリドカインを提供し、二塩基カルボン酸と反応
させてアミド酸を提供し、これをポリペプチドの有効ア
ミン官能基と反応させる。
原子にアミノ基を結合させることにより化学修飾され、
ついでこのアミノ基を通じて抗原・か 化合物（通常はポリアミノ酸が酵素）に結合基により結
合される。特に、アミノ基と段階的に反応できる三官能
結合基が用いられる。明記すれば、環に１寸いたアミノ
基を持つリドカインを提供し、二塩基カルボン酸と反応
させてアミド酸を提供し、これをポリペプチドの有効ア
ミン官能基と反応させる。
アニリド官能基３持つ薬物を環に付いたアミン基を通じ
て抗原に結合させて、対象薬物の抗体を生成するための
抗原結合体を提供する。対象薬物はＮ−Ｗ換グリシンア
ニリド［グリシンの窒素原子は、炭素数が１〜４（９通
には１〜２）の２個のアルキル基か、１個のアルキレン
鎖と１個のアルキル基とで二置換されており、アニリド
環は０〜２個（普通には１〜２個）の低級アルキル基で
置換されている］である、この、結合基が修飾された薬
物は通常は１２〜３０個の炭素原子を有し、ポリアミノ
酸その他の抗原化合物に結きするための一一又はｐ−ア
ミン基を持つ。
て抗原に結合させて、対象薬物の抗体を生成するための
抗原結合体を提供する。対象薬物はＮ−Ｗ換グリシンア
ニリド［グリシンの窒素原子は、炭素数が１〜４（９通
には１〜２）の２個のアルキル基か、１個のアルキレン
鎖と１個のアルキル基とで二置換されており、アニリド
環は０〜２個（普通には１〜２個）の低級アルキル基で
置換されている］である、この、結合基が修飾された薬
物は通常は１２〜３０個の炭素原子を有し、ポリアミノ
酸その他の抗原化合物に結きするための一一又はｐ−ア
ミン基を持つ。
“ポリアミノ酸”はポリペプチドと蛋白質とを意味し、
これらは配合群その他の高分子物質、例えば多糖類と核
酸、を包含してもよい。多糖類も抗原性ではあるが、大
部分は、ハプテンに対する抗体の形成を誘発するために
はポリアミノ酸を用いる。
これらは配合群その他の高分子物質、例えば多糖類と核
酸、を包含してもよい。多糖類も抗原性ではあるが、大
部分は、ハプテンに対する抗体の形成を誘発するために
はポリアミノ酸を用いる。
大部分の場合、本発明の化合物は次の一般式Ｉで示され
る化合物のうちでＡ（ポリアミノ酸）が抗原である場合
の化合物である。
る化合物のうちでＡ（ポリアミノ酸）が抗原である場合
の化合物である。
［式中、ＸとＸ′とはメチル基であり；ａとｂとはＯ又
は１であり、ａとｂとの和は少なくとも１であり； Ｙは水素原子がメチル基であるが、ＹとＺがそれぞれ結
合している炭素原子と窒素原子及びＺと共に６員環を形
成してもよく； ＺとＺｌとは同一でも異なってもよく、ｃ１〜。
は１であり、ａとｂとの和は少なくとも１であり； Ｙは水素原子がメチル基であるが、ＹとＺがそれぞれ結
合している炭素原子と窒素原子及びＺと共に６員環を形
成してもよく； ＺとＺｌとは同一でも異なってもよく、ｃ１〜。
アルキル基、特にメチル基、エチル基、ｎ−ブチル基、
好ましくはエチル基であり、ＺとＺｌとが同一である時
には、Ｚは前記の如くＹと共に６Ｒ環を形成してもよく
； 芳香環に結きしたアミノ基は３〜４個の炭素原子により
分断されており： Ｅは直接結合手又はＣ５〜Ｓアルキレン基であり； Ｄと［）Ｉは酸素原子又は硫黄原子であり（この場合に
酸素はオキシ又は非オキソカルボニル、特に後者の形で
存在し、硫黄はチオエーテル又はチオノとして存在する
）； ｐとｑは０又は１であり、ｐとｑとの和は少なくとも１
であり； Ａは分子量が少なくとも５，０００の、但し通常は１千
万以下の、更に普通には約６０万以下のポリアミノ酸で
あり、この分子量は普通、酵素と抗原のいずれが存在す
るかにより異なり、酵素の場合で約１０，０００〜６０
０，０００、更に普通には１０，０００〜３００゜００
０であり、抗原の場合には５，０００〜１０７、普通に
は２０．０００〜６００，０００、更に普通には２５，
０００〜２５０，０００であり； ｎは少なくとも１であり、かつＡ中に存在する有効アミ
ノ基の数より多くはなく、−船釣には平均して約１〜Ａ
′）分“量／ であり、酵素１．５００ の場合にｎは普通には１〜３０の、更に普通には２〜３
０の、好ましくは２〜１２の範囲内にあり、抗原の場き
にその範囲は一般には約１〜５００、普通には２〜２５
０、好ましくは約２〜１００である（特に分子量が中程
度の抗原の場合）］該結合基を該アミノ官能基に結合す
る方法は様々であり、単結合、二重結合、アミド結合、
それらの硫黄類似体、例えばチオアミド、チオ尿素等の
形である。単結きはアルキルハライドを用いるか、オキ
ソカルボニル基を還元アミン化することにより達成でき
る。二重結合はシフ塩基を用いることにより達成でき、
一方アミドとその類似体とは活性エステル、アシルハラ
イド、酸無水物、イソシアネート、チオイソシアネート
により達成できる。
好ましくはエチル基であり、ＺとＺｌとが同一である時
には、Ｚは前記の如くＹと共に６Ｒ環を形成してもよく
； 芳香環に結きしたアミノ基は３〜４個の炭素原子により
分断されており： Ｅは直接結合手又はＣ５〜Ｓアルキレン基であり； Ｄと［）Ｉは酸素原子又は硫黄原子であり（この場合に
酸素はオキシ又は非オキソカルボニル、特に後者の形で
存在し、硫黄はチオエーテル又はチオノとして存在する
）； ｐとｑは０又は１であり、ｐとｑとの和は少なくとも１
であり； Ａは分子量が少なくとも５，０００の、但し通常は１千
万以下の、更に普通には約６０万以下のポリアミノ酸で
あり、この分子量は普通、酵素と抗原のいずれが存在す
るかにより異なり、酵素の場合で約１０，０００〜６０
０，０００、更に普通には１０，０００〜３００゜００
０であり、抗原の場合には５，０００〜１０７、普通に
は２０．０００〜６００，０００、更に普通には２５，
０００〜２５０，０００であり； ｎは少なくとも１であり、かつＡ中に存在する有効アミ
ノ基の数より多くはなく、−船釣には平均して約１〜Ａ
′）分“量／ であり、酵素１．５００ の場合にｎは普通には１〜３０の、更に普通には２〜３
０の、好ましくは２〜１２の範囲内にあり、抗原の場き
にその範囲は一般には約１〜５００、普通には２〜２５
０、好ましくは約２〜１００である（特に分子量が中程
度の抗原の場合）］該結合基を該アミノ官能基に結合す
る方法は様々であり、単結合、二重結合、アミド結合、
それらの硫黄類似体、例えばチオアミド、チオ尿素等の
形である。単結きはアルキルハライドを用いるか、オキ
ソカルボニル基を還元アミン化することにより達成でき
る。二重結合はシフ塩基を用いることにより達成でき、
一方アミドとその類似体とは活性エステル、アシルハラ
イド、酸無水物、イソシアネート、チオイソシアネート
により達成できる。
結合基を例示すると、カルボニル、マレジオイル、スク
シンジオイル、グルタルジオイル、オキソエチレン（−
ＣＨ２ＣＯ−）、１−オキソプロピレン（−ＣＯＣＨ２
ＣＨ２）、スクシンジイミノイルである。
シンジオイル、グルタルジオイル、オキソエチレン（−
ＣＨ２ＣＯ−）、１−オキソプロピレン（−ＣＯＣＨ２
ＣＨ２）、スクシンジイミノイルである。
特に重要な化合物は次の一船釣■で示されるリドカイン
誘導体である。
誘導体である。
（式中、Ｅ、Ｄ、Ｄ’、ｐ、ｑ、Ａ、ｎは前記定義通り
である）結き基が非オソキヵルボニル基かそのチオ類似
体である場き、結合官能体はアミド、チオアミドである
。大部分の場合、抗原の有効アミノ基に結合するアミド
が該当する。有効アミノ基は末端アミノ基として存在し
、リジン、アルギニン、ヒスチジン等に存在する。
である）結き基が非オソキヵルボニル基かそのチオ類似
体である場き、結合官能体はアミド、チオアミドである
。大部分の場合、抗原の有効アミノ基に結合するアミド
が該当する。有効アミノ基は末端アミノ基として存在し
、リジン、アルギニン、ヒスチジン等に存在する。
使用できる抗原ポリアミノ酸の分子量は様々であり、通
常は約５千〜１千万、更に普通には約２万５千〜６０万
、好ましくは約２万５千〜２５万である。
常は約５千〜１千万、更に普通には約２万５千〜６０万
、好ましくは約２万５千〜２５万である。
普通には、抗原の分子量１．５００当たり約１個以下の
、更に普通には分子量２，０００当たり約１個以下の結
合体が存在する。普通には分子量５００，０００当たり
少なくとも約１個の、更に普通には分子量ｓｏ、ｏｏ。
、更に普通には分子量２，０００当たり約１個以下の結
合体が存在する。普通には分子量５００，０００当たり
少なくとも約１個の、更に普通には分子量ｓｏ、ｏｏ。
当たり少なくとも１個の結合体が存在する０分子量が中
程度（３５，０００〜１．０００，０００）の抗原の場
合、結合体数は一般には約２〜２５０、更に普通には１
０〜１００である。低分子量（３５，０００未満）抗原
の場合、結合体数様々なタイプの蛋白買を抗原物質とし
て用いることができる０例えばアルブミン、血清蛋白（
例えばグロブリン）、水晶体蛋白、リボ蛋白等である０
例示すると、牛血清アルブミン、キーポールリンペット
（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌ ｉｍｐｅｔ）ヘモシアニン、
卵アルブミン、牛γ−グロブリン等である。別法として
、充分な数の有効アミノ基を持つ自戒ポリアミノ酸、例
えばリジン類、を製造できる。
程度（３５，０００〜１．０００，０００）の抗原の場
合、結合体数は一般には約２〜２５０、更に普通には１
０〜１００である。低分子量（３５，０００未満）抗原
の場合、結合体数様々なタイプの蛋白買を抗原物質とし
て用いることができる０例えばアルブミン、血清蛋白（
例えばグロブリン）、水晶体蛋白、リボ蛋白等である０
例示すると、牛血清アルブミン、キーポールリンペット
（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌ ｉｍｐｅｔ）ヘモシアニン、
卵アルブミン、牛γ−グロブリン等である。別法として
、充分な数の有効アミノ基を持つ自戒ポリアミノ酸、例
えばリジン類、を製造できる。
本発明の化合物の製造においては、アミノ基が保護され
た適当なアニリン誘導体を常法でニトロ化して論−又は
ｐ−ニトロアニリンを提供する。ついで保護基をアミノ
基から除く。ついでアミノ基を適当にアシル化して所望
アニリドとし、ニトロ基をアミノ基に還元して結合用の
アミノ官能基を提供する９次図に反応工程を示す。
た適当なアニリン誘導体を常法でニトロ化して論−又は
ｐ−ニトロアニリンを提供する。ついで保護基をアミノ
基から除く。ついでアミノ基を適当にアシル化して所望
アニリドとし、ニトロ基をアミノ基に還元して結合用の
アミノ官能基を提供する９次図に反応工程を示す。
図中、Ｔ以外の記号は前記定義通りであり、Ｔはアリー
ルスルホニル、トリフルオルアセチル等の保護基である
。ニトロ化は酸の存在下で容易に実施できる。弱カルボ
ン酸ではｐ−誘導体が得られ、強鉱酸（例えば硫酸）で
は−一誘導体が得られる。約５０〜１００℃の範囲内の
温度を用いる。
ルスルホニル、トリフルオルアセチル等の保護基である
。ニトロ化は酸の存在下で容易に実施できる。弱カルボ
ン酸ではｐ−誘導体が得られ、強鉱酸（例えば硫酸）で
は−一誘導体が得られる。約５０〜１００℃の範囲内の
温度を用いる。
ついで保護基を加水分解く通常は酸水溶液による）によ
り除去し、ついで適当なアミノ酸又はクロルアセチルク
ロリドでアミノ基をアシル化し、クロルを適当な二級ア
ミンで置換する。ついでニトロ基を常法、例えば緩和条
件下で白金又はパラジウムを用いての接触還元により還
元できる。
り除去し、ついで適当なアミノ酸又はクロルアセチルク
ロリドでアミノ基をアシル化し、クロルを適当な二級ア
ミンで置換する。ついでニトロ基を常法、例えば緩和条
件下で白金又はパラジウムを用いての接触還元により還
元できる。
ついで、二Ｉ・口塞から誘導されたアミノ基を、活性ハ
ロゲン、活性アシル基（例えば：１１−ニトロフェニル
、Ｎ−オキシスクシンイミド等の活性エステル）、アシ
ルハライド、酸無水物又はカルボン酸を使用してジイミ
ドとカップリングさせ、或はオキソカルボニル化合物と
縮合させ、ついで金属水素化物で還元する。普通、結合
基中の第二官能基は非オキソカルボニル基（その硫黄類
似体を含む）であり、これは前述した手段のいづれによ
っても活性化できる。抗原との縮合は通常、緩和な条件
下で、−最には約−１０〜３０℃で、不活性極性溶媒（
普通には混成水性溶媒であり、これは約Ｏ〜５０ Ｖ／
Ｖ＄の有機溶媒、例えばポリエーテル、ジメチルホルム
アミド等、を含む）中で実施される。一般にこの反応は
約７〜１０の範囲内のｐＨで実施する。
ロゲン、活性アシル基（例えば：１１−ニトロフェニル
、Ｎ−オキシスクシンイミド等の活性エステル）、アシ
ルハライド、酸無水物又はカルボン酸を使用してジイミ
ドとカップリングさせ、或はオキソカルボニル化合物と
縮合させ、ついで金属水素化物で還元する。普通、結合
基中の第二官能基は非オキソカルボニル基（その硫黄類
似体を含む）であり、これは前述した手段のいづれによ
っても活性化できる。抗原との縮合は通常、緩和な条件
下で、−最には約−１０〜３０℃で、不活性極性溶媒（
普通には混成水性溶媒であり、これは約Ｏ〜５０ Ｖ／
Ｖ＄の有機溶媒、例えばポリエーテル、ジメチルホルム
アミド等、を含む）中で実施される。一般にこの反応は
約７〜１０の範囲内のｐＨで実施する。
前述の如く、該抗体は競き蛋白結き分析法で使用される
。１競合蛋白結合分析法では酵素結合体を使用し、この
方法は均質酵素免疫分析法と呼ばれる。この分析法では
酵素を対象化合物の誘導体に結合させて使用する。抗体
が酵素に結合された基に結合する時には、酵素の活性が
実質上かわることが好ましい（普通には活性を実質上低
下させる）。
。１競合蛋白結合分析法では酵素結合体を使用し、この
方法は均質酵素免疫分析法と呼ばれる。この分析法では
酵素を対象化合物の誘導体に結合させて使用する。抗体
が酵素に結合された基に結合する時には、酵素の活性が
実質上かわることが好ましい（普通には活性を実質上低
下させる）。
酵素に結合する基の数は通常は約１〜３０、更に普通に
は約２〜２０、好ましくは約２〜１２である。
は約２〜２０、好ましくは約２〜１２である。
オキシドリダクターゼ、しドロラーゼ、リアーゼ等の様
々な酵素を用いることができる。特に重要なのは、ニコ
チンアミド、アデニン、ジヌクレオチド（Ｎ Ａ Ｄ
’）又はそのリン酸エステル（ＮＡＤＰ）を受容体とす
る酵素、例えばグルコース ６−ホスフェートデヒドロ
ゲナーゼ、マレートデヒドロゲナーゼ、アルコールデヒ
ドロゲナーゼ、ラクテートデヒドロゲナーゼ等のデヒド
ロゲナーゼ；ペルオキシダーゼ；オキサダーゼ；グリコ
シドヒドロラーゼ；等である。
々な酵素を用いることができる。特に重要なのは、ニコ
チンアミド、アデニン、ジヌクレオチド（Ｎ Ａ Ｄ
’）又はそのリン酸エステル（ＮＡＤＰ）を受容体とす
る酵素、例えばグルコース ６−ホスフェートデヒドロ
ゲナーゼ、マレートデヒドロゲナーゼ、アルコールデヒ
ドロゲナーゼ、ラクテートデヒドロゲナーゼ等のデヒド
ロゲナーゼ；ペルオキシダーゼ；オキサダーゼ；グリコ
シドヒドロラーゼ；等である。
大部分の場合に該酵素結合体は次の一般大■で示される
。
。
（式中、ｎｌとＥＮＺ以外の記号は全て前記定義通りで
あり、ｎｌは平均で約１〜２０、更に普通には約２〜１
２であり、ＥＮＺは酵素を示す、）大部分の場合におい
て、該酵素は約ｔｏ、ｏｏｏ〜６００．０００の、更に
普通には約１０，０００〜３００，０００の範囲内の分
子量を持つ。既に示したちの以外の酵素を例示するとリ
ゾチーム、β−グルクロニダーゼ、グルコースオキシダ
ーゼ、カタラーゼ、ペルオキシダーゼである。
あり、ｎｌは平均で約１〜２０、更に普通には約２〜１
２であり、ＥＮＺは酵素を示す、）大部分の場合におい
て、該酵素は約ｔｏ、ｏｏｏ〜６００．０００の、更に
普通には約１０，０００〜３００，０００の範囲内の分
子量を持つ。既に示したちの以外の酵素を例示するとリ
ゾチーム、β−グルクロニダーゼ、グルコースオキシダ
ーゼ、カタラーゼ、ペルオキシダーゼである。
均質酵素免疫分析法の実施方法は、アメリカ特許第３，
８１７，８３７号明細書に記載されている。その方法で
は、酵素結き体、対象薬物を含むと思われる未知サンプ
ル、対象薬物に対する抗体を水性被緩衡化媒体中であわ
せ、既知量の対象薬物を含むサンプルとの比較により所
定時間中の酵素活性を決定する。
８１７，８３７号明細書に記載されている。その方法で
は、酵素結き体、対象薬物を含むと思われる未知サンプ
ル、対象薬物に対する抗体を水性被緩衡化媒体中であわ
せ、既知量の対象薬物を含むサンプルとの比較により所
定時間中の酵素活性を決定する。
以下の実施例は本発明の説明のために例示するものであ
り、限定するものではない。
り、限定するものではない。
実施例において、温度は特記ない限り℃単位であり、％
は特記ない限り重量によるものであり、ＴＬＣは薄層ク
ロマトグラフィーを、ＤＭＦはジメチルホルムアミドを
、Ｌ Ａ Ｈは水素化アルミニウムリチウムを、ＴＨＦ
はテトラヒドロフランを表わす。
は特記ない限り重量によるものであり、ＴＬＣは薄層ク
ロマトグラフィーを、ＤＭＦはジメチルホルムアミドを
、Ｌ Ａ Ｈは水素化アルミニウムリチウムを、ＴＨＦ
はテトラヒドロフランを表わす。
アミド
２．６−シメチルアニリン（１６社、１５．６ｆＩ、１
３０ミリモル）の篩乾燥ピリジン（５０ｄ）溶液に２７
ｇ（７１ミリモル）の、ヘキサンから２度再結晶したト
シルクロリドを加えた。２時間還流加熱後に５００＠１
の氷冷２Ｎ ＨＣＺに注ぎ入れたら黄色固体が形成さ
れた。これを水浴中で冷却後に集め、ゴム板（ｒｕｂｂ
ｅｒ ｄｅｎ）で圧し、Ｐ２Ｏ５で１時間真空乾燥し
た（ｍｐ１３０〜１３２°）、この粗生成物をそのまま
次工程で使用した。
３０ミリモル）の篩乾燥ピリジン（５０ｄ）溶液に２７
ｇ（７１ミリモル）の、ヘキサンから２度再結晶したト
シルクロリドを加えた。２時間還流加熱後に５００＠１
の氷冷２Ｎ ＨＣＺに注ぎ入れたら黄色固体が形成さ
れた。これを水浴中で冷却後に集め、ゴム板（ｒｕｂｂ
ｅｒ ｄｅｎ）で圧し、Ｐ２Ｏ５で１時間真空乾燥し
た（ｍｐ１３０〜１３２°）、この粗生成物をそのまま
次工程で使用した。
実施例１で得た粗スルホンアミドを発煙硝酸（２５＋１
＞／水（２００ｍｌ）に小量ずつ添加した。２００…ｌ
の氷酢酸と約７００１のＮ ａ Ｎ Ｏ２とを添加後に
１時間還流した。急速に撹拌しながら冷却混合物を４０
０ｍｆの氷水に注ぎ入れた。形成された淡黄色沈澱物を
集め、水で洗い、−夜真空屹燥して３１．９．の生成ｍ
（ｍｐ１５７〜１６０°）を得た。Ｔ Ｌ ＣとＮＭ
Ｈによれば純度は〉９５％であり、２，６ジメチルアニ
リンに基づく全収率は８１？６だった。
＞／水（２００ｍｌ）に小量ずつ添加した。２００…ｌ
の氷酢酸と約７００１のＮ ａ Ｎ Ｏ２とを添加後に
１時間還流した。急速に撹拌しながら冷却混合物を４０
０ｍｆの氷水に注ぎ入れた。形成された淡黄色沈澱物を
集め、水で洗い、−夜真空屹燥して３１．９．の生成ｍ
（ｍｐ１５７〜１６０°）を得た。Ｔ Ｌ ＣとＮＭ
Ｈによれば純度は〉９５％であり、２，６ジメチルアニ
リンに基づく全収率は８１？６だった。
サンプルをエタノール／水から結晶させた（ｒｉｐ１６
２．５〜１６４°）。
２．５〜１６４°）。
ゼン
二ト口スルホンアミド（実施例２．３１．９ｇ）を濃Ｈ
２Ｓ Ｏ＜ （１００ｍｌ）／水（１０＋＊ｉ’）溶液
に懸濁し、水浴（〜９５°）中で全ての物質が液解する
まで時折撹拌しながら加熱した。生じた暗褐色混合物を
３００ａｌｌの氷水に注ぎ入れ、濃水酸化アンモニウム
で塩基性（ｐＨ１２）にした、生じた黄褐色沈澱物を集
め、水で洗い、熱エタノール／水から結晶させて１１．
３．の黄色微針状晶を得た（輸ｐ１５６〜１６０°）、
母液を濃縮し、水を加えて２．７３の生成物を得た。あ
わせた収量は１４ｇ（８２％）だった０分析用サンプル
をクロロホルムから結晶化させた（ｍｐ１５８〜１５９
°）。
２Ｓ Ｏ＜ （１００ｍｌ）／水（１０＋＊ｉ’）溶液
に懸濁し、水浴（〜９５°）中で全ての物質が液解する
まで時折撹拌しながら加熱した。生じた暗褐色混合物を
３００ａｌｌの氷水に注ぎ入れ、濃水酸化アンモニウム
で塩基性（ｐＨ１２）にした、生じた黄褐色沈澱物を集
め、水で洗い、熱エタノール／水から結晶させて１１．
３．の黄色微針状晶を得た（輸ｐ１５６〜１６０°）、
母液を濃縮し、水を加えて２．７３の生成物を得た。あ
わせた収量は１４ｇ（８２％）だった０分析用サンプル
をクロロホルムから結晶化させた（ｍｐ１５８〜１５９
°）。
トアニリド
室温で、クロルアセチル クロリド（ａｍｌ、７９ミリ
モル）の篩乾燥ベンゼン（３０ｎ＋１’）溶液を、急速
撹拌されている実施例３の生成物（１２ｇ、７２ミリモ
ル）と乾燥ピリジン（５，８ａ＋ｆｆｉ、７２ミリモル
）とのベンゼン（５００ｍｌ）溶液に滴下した。沈澱物
が一度に形成された０滴下完了の４５分後に反応混合物
を冷却し、沈澱物を集め、水で洗い、真空デシケータで
一夜乾燥した。生成物を２．５１の沸騰ベンゼンに溶解
し、約１．５１にまで濃縮させて生成物（１２，７３ｆ
Ｉ、７３τ）を非常に長くて薄い淡黄色針状晶（町）２
２７〜２２８°）として沈澱させることにより結晶化さ
せた。
モル）の篩乾燥ベンゼン（３０ｎ＋１’）溶液を、急速
撹拌されている実施例３の生成物（１２ｇ、７２ミリモ
ル）と乾燥ピリジン（５，８ａ＋ｆｆｉ、７２ミリモル
）とのベンゼン（５００ｍｌ）溶液に滴下した。沈澱物
が一度に形成された０滴下完了の４５分後に反応混合物
を冷却し、沈澱物を集め、水で洗い、真空デシケータで
一夜乾燥した。生成物を２．５１の沸騰ベンゼンに溶解
し、約１．５１にまで濃縮させて生成物（１２，７３ｆ
Ｉ、７３τ）を非常に長くて薄い淡黄色針状晶（町）２
２７〜２２８°）として沈澱させることにより結晶化さ
せた。
実施例４のクロリド（１２，７ｇ、５２．５ミリモル）
と１３．６＋ａＮ（１３２ミリモル）のジエチルアミン
とを７５＋ａｌｌの乾燥ベンゼン中で１５時間完了した
らクロリドはゆっくり溶解し、溶液は反応終了時に澄明
だった。
と１３．６＋ａＮ（１３２ミリモル）のジエチルアミン
とを７５＋ａｌｌの乾燥ベンゼン中で１５時間完了した
らクロリドはゆっくり溶解し、溶液は反応終了時に澄明
だった。
冷却後に褐色溶液を濾過し、１６０ｕｉ！の１０％塩酸
で完全に抽出した。あわせた水層をエーテルで洗い、冷
却し、濃ＫＯＨでアルカリ性にし、黄色沈澱物を集めた
。
で完全に抽出した。あわせた水層をエーテルで洗い、冷
却し、濃ＫＯＨでアルカリ性にし、黄色沈澱物を集めた
。
生成物をエタノールに溶解し、水性エタノールからまず
９．７ｇを、ついで２．１ｇ（全収率８０１）を結晶化
させた。羽毛状淡黄色結晶のｍｐは９２〜９４°だった
。
９．７ｇを、ついで２．１ｇ（全収率８０１）を結晶化
させた。羽毛状淡黄色結晶のｍｐは９２〜９４°だった
。
ｍｌに−
α−ジエチルアミノ−４−アミノ−２，６一ジメ２０滴
の氷酢酸とスパーチル２杯のアダム触媒とを含む５０ｍ
１のエタノール中の実施例５のニトロ化合物（２，０９
，７，２ミリモル）にパー装置で３５ボンド／平方１イ
ンチで２時間水素添加した。触媒を窒素下でセライト床
を通して吸引ｒ去し、無水エタノールで完全に洗った。
の氷酢酸とスパーチル２杯のアダム触媒とを含む５０ｍ
１のエタノール中の実施例５のニトロ化合物（２，０９
，７，２ミリモル）にパー装置で３５ボンド／平方１イ
ンチで２時間水素添加した。触媒を窒素下でセライト床
を通して吸引ｒ去し、無水エタノールで完全に洗った。
蒸発により定量収率の黄色油状物を得た。これは放置に
より結晶化した。
より結晶化した。
この固体を最小量のエーテルに溶解し、炭と共に沸騰し
、濃縮し、冷却し、容器壁をこすってそれぞれ４６７す
、４００りの２つの黄色針状晶を得た。ｍｐ９１〜９３
°。シクロヘキサンから２度目の結晶後のＴｌ１ｐは９
３．５〜９５°だった。
、濃縮し、冷却し、容器壁をこすってそれぞれ４６７す
、４００りの２つの黄色針状晶を得た。ｍｐ９１〜９３
°。シクロヘキサンから２度目の結晶後のＴｌ１ｐは９
３．５〜９５°だった。
丈ン■上１旦工へ９１１Ｌ
窒素下のｐ−アミノリドカイン（実施例６；５５１６＋
？、０．２２ミリモル）の乾燥Ｄ Ｍ Ｆ （２，０＋
ａ１）溶液に１１０μｒのトリエチルアミンを加えた。
？、０．２２ミリモル）の乾燥Ｄ Ｍ Ｆ （２，０＋
ａ１）溶液に１１０μｒのトリエチルアミンを加えた。
−２０°にまで冷却後に５３ ｍｇ（０，２６５ミリモ
ル）のｐ−ニトロフェニルクロロホルメートを加えた。
ル）のｐ−ニトロフェニルクロロホルメートを加えた。
生成混き物を−１０〜−−２０’で２時間撹拌した。１
時間かけて生成カルバメート溶液を、３０ｖａｌの０．
１Ｍカーボネート緩衡剤（ｐＨ９，１）と１２＋＊／の
ＤＭＦとの混液中の７００１のＢ ｇＧ （０，３２ミ
リモルリジン）に加えた。ｐＨはＨＣＩで絶えず調整し
て８〜９の値を維持した。カルバメートの添加完了後に
反応混合物を水浴中で３時間撹拌し、ついで４×４１の
０．ＩＭＮ ａ ＨＣ０３と４×４２の水酸化アンモニ
ウム水溶液（ｐＨｑ）とで約３日間透析した。
時間かけて生成カルバメート溶液を、３０ｖａｌの０．
１Ｍカーボネート緩衡剤（ｐＨ９，１）と１２＋＊／の
ＤＭＦとの混液中の７００１のＢ ｇＧ （０，３２ミ
リモルリジン）に加えた。ｐＨはＨＣＩで絶えず調整し
て８〜９の値を維持した。カルバメートの添加完了後に
反応混合物を水浴中で３時間撹拌し、ついで４×４１の
０．ＩＭＮ ａ ＨＣ０３と４×４２の水酸化アンモニ
ウム水溶液（ｐＨｑ）とで約３日間透析した。
生成結合体溶液をガラスウールついで粗適きディスクを
通してｒ過し、最後に凍結乾燥して３２０りの結合体を
得た。＾最大２８０ ｎｍでのＵ、Ｖ’。
通してｒ過し、最後に凍結乾燥して３２０りの結合体を
得た。＾最大２８０ ｎｍでのＵ、Ｖ’。
の差により３８．１のハプテン価が測定された。
及１１影
一ア≧ノリド インの スクシンアミドｐ−アミノリド
カイン（実施例６ ；１．５４ｇ、５．１ミリモル、と
無水コハク酸（５２０ｍｙ、５．２ミリモル）との乾燥
ＴＨＦ（５０ｍｆｆｉ、ＬＡＨから蒸留したてのもの）
溶液を一夜撹拌した。ＴＬＣ（アルミナ、クロロホルム
）は出発物質が残っていることを示した。
カイン（実施例６ ；１．５４ｇ、５．１ミリモル、と
無水コハク酸（５２０ｍｙ、５．２ミリモル）との乾燥
ＴＨＦ（５０ｍｆｆｉ、ＬＡＨから蒸留したてのもの）
溶液を一夜撹拌した。ＴＬＣ（アルミナ、クロロホルム
）は出発物質が残っていることを示した。
出発物質が残っていないことがＴＬＣにより示されるま
で小量の無水コハク酸を加えた。溶媒を真空除去して黄
色泡状物を得た。
で小量の無水コハク酸を加えた。溶媒を真空除去して黄
色泡状物を得た。
生成物を水に溶解し、６Ｎ塩酸を加えてｐＨを２にし、
ついで蒸発乾燥させた。残渣を小量の水に溶解し、加熱
しながらアセトンを加え、混濁させた。塩酸塩が小さな
六方晶（町）１５２〜１５４°）として結晶化した。こ
の物質は非常に吸湿性だった。
ついで蒸発乾燥させた。残渣を小量の水に溶解し、加熱
しながらアセトンを加え、混濁させた。塩酸塩が小さな
六方晶（町）１５２〜１５４°）として結晶化した。こ
の物質は非常に吸湿性だった。
３２μｌ（１当ｊｉ）のインブチルクロロホルメートを
加え、−２５°での撹拌を１．５時間続けた。
加え、−２５°での撹拌を１．５時間続けた。
製造された混成酸無水物を１５分後にＢｇＧ（５０・Ｏ
ｍｙ、０．２４２ミリモルリジン）の水（２０ｎ＋１＞
中水冷溶液（ｐＨ８，５）に滴下した。希ＮａＯＨを加
えてｐＨを８．４〜８．７に保った。混合物を２時間撹
拌し、４１のＯ，１Ｍ ＮａＨＣＯ３で１度、４１の水
で４度透析した。凍結乾燥により３００ｍｙの結合体を
得た。
ｍｙ、０．２４２ミリモルリジン）の水（２０ｎ＋１＞
中水冷溶液（ｐＨ８，５）に滴下した。希ＮａＯＨを加
えてｐＨを８．４〜８．７に保った。混合物を２時間撹
拌し、４１のＯ，１Ｍ ＮａＨＣＯ３で１度、４１の水
で４度透析した。凍結乾燥により３００ｍｙの結合体を
得た。
λ最大２８０ｎｍでのＵ、Ｖ の差により４．５のハ
アテ・ン価が測定された。
アテ・ン価が測定された。
上記方法を追打して得られた第２の結き体のハプテン価
は１０だった。
は１０だった。
窒素下、１０ｍ１の乾燥ＤＭＦ中の９４ ｍｙ（０，２
４２ミリモル）のｐ−アミノリドカインの半スクシンア
ミドを６８μｌ（２当量）のトリエチルアミンで処理し
た。−２５″にまで冷却し、３０分間撹拌漫にイソブチ
ル混成酸無水物を窒素下、−２５°で、４社の乾燥ＤＭ
Ｆ中の２００ｍｙのｐ−アミノリドカインの半スクシン
アミド（実施例８）と２当量のトリエチルアミンと１当
量のイソブチルクロロホルメートとから製造した。−２
５°で２時間経過後に混成酸無水物をＢ Ｓ Ａ （３
００ｍＦＩ＞／水（２０ｍｌ）（ｐＨ８，５，０°）に
加え、必要に応じて希ＮａＯＨを加えて８．４〜８．６
のｐＨを保った。
４２ミリモル）のｐ−アミノリドカインの半スクシンア
ミドを６８μｌ（２当量）のトリエチルアミンで処理し
た。−２５″にまで冷却し、３０分間撹拌漫にイソブチ
ル混成酸無水物を窒素下、−２５°で、４社の乾燥ＤＭ
Ｆ中の２００ｍｙのｐ−アミノリドカインの半スクシン
アミド（実施例８）と２当量のトリエチルアミンと１当
量のイソブチルクロロホルメートとから製造した。−２
５°で２時間経過後に混成酸無水物をＢ Ｓ Ａ （３
００ｍＦＩ＞／水（２０ｍｌ）（ｐＨ８，５，０°）に
加え、必要に応じて希ＮａＯＨを加えて８．４〜８．６
のｐＨを保った。
反応混合物を一夜撹拌し、ついで４１の０．１ＭＮ １
１２ ＣＯ３１０，ＩＭ Ｎ ａＨＣＯｘｌＪｌ衡液で
透析した。
１２ ＣＯ３１０，ＩＭ Ｎ ａＨＣＯｘｌＪｌ衡液で
透析した。
凍結乾燥により３３３ｍｇの白色粉末を得た。
λ最大２７９ｎｍ、２４８ｎｍでＵ、Ｖ、示差法を使用
して１３のハブテン価を測定した。
して１３のハブテン価を測定した。
実施例１の粗スルホンアミド（３６，８ｇ、１４１ミリ
モル）を氷酢酸（２５０ｍｌ）／濃硫酸（１２０＋＊１
）混液に懸濁させ、６０〜７０′″にまで加温したら黄
色にかわった。約４５°にまで冷却後、５０ｍＺの濃硫
酸と５０ｍ１の氷酢酸と８＋＊１の発煙硝酸とからなる
溶液を激しく撹拌しながら滴下し、ついで周囲温度で一
夜撹拌した。
モル）を氷酢酸（２５０ｍｌ）／濃硫酸（１２０＋＊１
）混液に懸濁させ、６０〜７０′″にまで加温したら黄
色にかわった。約４５°にまで冷却後、５０ｍＺの濃硫
酸と５０ｍ１の氷酢酸と８＋＊１の発煙硝酸とからなる
溶液を激しく撹拌しながら滴下し、ついで周囲温度で一
夜撹拌した。
生じた黄色スラリーを５００ｇの水に注ぎ、冷却し、集
めた。水性エタノールから結晶化させて３２．２．の生
成物（ｍｐ１３０〜１３２°）を得た。
めた。水性エタノールから結晶化させて３２．２．の生
成物（ｍｐ１３０〜１３２°）を得た。
実施例１１のスルホンアミド（３２，２ｇ、０．１０５
モル）を７５＠１の９０％硫酸に懸濁させ、蒸気浴で２
０〜３０分加熱し、冷却し、３００ｍｆの氷水に注ぎ入
れた。形成された固体物質を、溶液を綿栓を通過させる
ことによりｒ去し、溶液を冷却し、濃アンモニアでカル
カリ性にした。黄色沈澱物を集め、ベンゼン／軽油から
結晶化させて、１４．２ｙ（８１２）（ｍｐ７０〜７２
°）のものを２つ得た。ベンゼン／ヘプタンから２度結
晶化させた後のｔｏｐは７２〜７５゜だった。
モル）を７５＠１の９０％硫酸に懸濁させ、蒸気浴で２
０〜３０分加熱し、冷却し、３００ｍｆの氷水に注ぎ入
れた。形成された固体物質を、溶液を綿栓を通過させる
ことによりｒ去し、溶液を冷却し、濃アンモニアでカル
カリ性にした。黄色沈澱物を集め、ベンゼン／軽油から
結晶化させて、１４．２ｙ（８１２）（ｍｐ７０〜７２
°）のものを２つ得た。ベンゼン／ヘプタンから２度結
晶化させた後のｔｏｐは７２〜７５゜だった。
激しく撹拌しながら、５０社の乾燥ベンゼン中の４．４
＋ａｒ（７，２１ｇ、５５ミリモル）のクロルアセチル
クロリドを、４．１ｍ／（５０ミリモル）の乾燥ピリジ
ンを含む２００ｍ１の乾燥ベンゼン中の８．３ｇ（５０
ミリモル）の２，６−シメチルー３−ニトロアニリンニ
滴下した。撹拌を３０分続け、形成された黄色沈澱物を
集め、水で洗い、真空デシケータ中で一夜乾燥した。生
成物（ｒＲ針状晶）ハ８．７ｇ（７２％）（ａｐ１６２
〜１６３°）であった。
＋ａｒ（７，２１ｇ、５５ミリモル）のクロルアセチル
クロリドを、４．１ｍ／（５０ミリモル）の乾燥ピリジ
ンを含む２００ｍ１の乾燥ベンゼン中の８．３ｇ（５０
ミリモル）の２，６−シメチルー３−ニトロアニリンニ
滴下した。撹拌を３０分続け、形成された黄色沈澱物を
集め、水で洗い、真空デシケータ中で一夜乾燥した。生
成物（ｒＲ針状晶）ハ８．７ｇ（７２％）（ａｐ１６２
〜１６３°）であった。
５．０ｇ（２０，６ミリモル）の実施例１３のクロル化
合物と５．３ｍＡ’（３，７８ＦＩ、５１．６ミリモル
）とを３００ｍ１’のベンゼンに溶解してなる溶液を一
夜還流した。冷却後、有＠層を各５０社の１０％ＨＣｌ
で３度抽出し、あわせた水層を５０ｍＮのベンゼンで洗
った。
合物と５．３ｍＡ’（３，７８ＦＩ、５１．６ミリモル
）とを３００ｍ１’のベンゼンに溶解してなる溶液を一
夜還流した。冷却後、有＠層を各５０社の１０％ＨＣｌ
で３度抽出し、あわせた水層を５０ｍＮのベンゼンで洗
った。
水層を冷却し、濃ＮａＯＨでアルカリ性にした。
沈澱物は形成されなかった。
水層を１５０＋＊ｊ＋のクロロホルムで抽出し、ついで
乾燥、蒸発して黄色油状物を得た。これは放置により固
化した（５．１７ｇ、９０ｇ）、ｍｐ５５〜５９゜実施
例６，７，９．１０の方法によりｌ−ニトロリドカイン
を還元し、リドカインに対する抗体を製造するために様
々な抗原に結合させた。
乾燥、蒸発して黄色油状物を得た。これは放置により固
化した（５．１７ｇ、９０ｇ）、ｍｐ５５〜５９゜実施
例６，７，９．１０の方法によりｌ−ニトロリドカイン
を還元し、リドカインに対する抗体を製造するために様
々な抗原に結合させた。
グルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ（Ｇ６
ＰＤＨ）原液を、Ｇ６ＰＤＨの乾燥粉末を０．０５５Ｍ
ト！Ｊ ス−ＨＣ１１ｊＪｔｌｔ？１（ｐＨ８，１，
室温）テ再生して約２〜３Ｂ、／ｍｌの濃度とすること
により調製した。小フラスコに１ｍｌの該酵素溶液を入
れ、撹拌しながら０°にまで冷却した。ついで２０＋ｏ
ｙのグルコース−６−ホスフェートと２０ＢのＮＡＤＨ
とを加え、ついで３００μ！のカルピトールをゆっくり
と加え、ｐＨを２Ｎ ＮａＯＨで９に調整した。
ＰＤＨ）原液を、Ｇ６ＰＤＨの乾燥粉末を０．０５５Ｍ
ト！Ｊ ス−ＨＣ１１ｊＪｔｌｔ？１（ｐＨ８，１，
室温）テ再生して約２〜３Ｂ、／ｍｌの濃度とすること
により調製した。小フラスコに１ｍｌの該酵素溶液を入
れ、撹拌しながら０°にまで冷却した。ついで２０＋ｏ
ｙのグルコース−６−ホスフェートと２０ＢのＮＡＤＨ
とを加え、ついで３００μ！のカルピトールをゆっくり
と加え、ｐＨを２Ｎ ＮａＯＨで９に調整した。
乾燥リドカイン半スクシンアミドＨＣ１（０，０７５ミ
リモル）の乾燥Ｄ Ｍ Ｆ （３７５μｌ）溶液を調製
し、混合物を撹拌し、２１μｌのトリエチルアミンを撹
拌下、−１０°に維持しながら液面下に加えた。生成溶
液を撹拌しながらその液面下に１４μｌのカルビトール
クロルホルメートをゆっくりと加えた。
リモル）の乾燥Ｄ Ｍ Ｆ （３７５μｌ）溶液を調製
し、混合物を撹拌し、２１μｌのトリエチルアミンを撹
拌下、−１０°に維持しながら液面下に加えた。生成溶
液を撹拌しながらその液面下に１４μｌのカルビトール
クロルホルメートをゆっくりと加えた。
１．５時間後に混成酸無水物は使用可能になっていた。
約１５秒後に２５μｌの該混成酸無水物を、局所濃度を
最小にする条件下で加えた。約１５分の反応時間後に酵
素の一部を取り出してその活性をチエツクし、所望活性
と阻止力とがえられるまで上述の如き混成酸無水物の添
加をくり返した０反応中、必要に応じて２Ｎ ＮａＯ
Ｈを加えてｐＨを８．５より高く維持した。得られた結
果を次式に示す。
最小にする条件下で加えた。約１５分の反応時間後に酵
素の一部を取り出してその活性をチエツクし、所望活性
と阻止力とがえられるまで上述の如き混成酸無水物の添
加をくり返した０反応中、必要に応じて２Ｎ ＮａＯ
Ｈを加えてｐＨを８．５より高く維持した。得られた結
果を次式に示す。
分析は、実施例９の抗原の注射に応答して製造された抗
体を用いて常法により実施した。その分析方法は後に述
べる。
体を用いて常法により実施した。その分析方法は後に述
べる。
表１
カルピトール９．０４ ７４５’ １．３１１＋２５μ
ｌＨ＾ ９．００ ７２５ １．３３５ ７．９
３．２２＋５０μ１ＭＡ ８．９７ ８８１ １
．３８５ １６．１ ９．０３＋５０μ州＾ ８．
９４ ６２６ １．１３５ ２７．９ １６．５４＋１
００μＩＭ＾ ８．９０ ５５３ １．４３５ ５７
．５ ２３．１５＋５０μ州＾ ８．８９ ４９５
１．５８５ ６９．６ ３４．０６＋５０μｌＮ八
８．８８ ４３２ １．６３５ ８！、４ ４２．４７
＋５０ １ＭＡ ８．８７ ３１０ １．６８５
９３．５ ５８．６１反応温き物の内容を示す。各実験
ではこの混合物に指示量のＭＡを加え、５μｌをテスト
用に採取した。
ｌＨ＾ ９．００ ７２５ １．３３５ ７．９
３．２２＋５０μ１ＭＡ ８．９７ ８８１ １
．３８５ １６．１ ９．０３＋５０μ州＾ ８．
９４ ６２６ １．１３５ ２７．９ １６．５４＋１
００μＩＭ＾ ８．９０ ５５３ １．４３５ ５７
．５ ２３．１５＋５０μ州＾ ８．８９ ４９５
１．５８５ ６９．６ ３４．０６＋５０μｌＮ八
８．８８ ４３２ １．６３５ ８！、４ ４２．４７
＋５０ １ＭＡ ８．８７ ３１０ １．６８５
９３．５ ５８．６１反応温き物の内容を示す。各実験
ではこの混合物に指示量のＭＡを加え、５μｌをテスト
用に採取した。
２阻止率であり、これは過剰抗リドカイン存在下での割
合の減少を示す。
合の減少を示す。
３失活化率であり、リドカイン誘導体の結合に原因する
酵素活性の消失度を示す。
酵素活性の消失度を示す。
’ＭＡは混成酸無水物を意味する。
上記表から、失活化は比較的低度ながらすぐれた阻止化
が達成できたことは明白である。従って、該酵素結合体
はりドカイン測定のための分析（被分析媒体中のりドカ
イン濃度の小さな差に基づく比較的大きな光学密度差を
比較的短時間で読み取ることができる）で使用できる。
が達成できたことは明白である。従って、該酵素結合体
はりドカイン測定のための分析（被分析媒体中のりドカ
イン濃度の小さな差に基づく比較的大きな光学密度差を
比較的短時間で読み取ることができる）で使用できる。
分析では、フローセル付きサーモクヴエットを備えたギ
ルホード３０ＯＮミクロサンプル分光光度計を用いた。
ルホード３０ＯＮミクロサンプル分光光度計を用いた。
読みは全て３４０ｎｍで行った０次の溶液を分析で使用
する試薬として調製しな。
する試薬として調製しな。
表■
緩衡剤： ０．０５５Ｍ ）リス−ＨＣＺ。
ｐＨ８，１（室温）
０．０５ｇナトリウムアジド
ｏ、ｏｏｓｓチメロサール
酵素結合体：緩衡剤
０．９１ ＮａＣ１
１，０＄ ＩＳＡ、ｐ［（８，１（室温）被分析媒体中
の７５０に等しい ΔＯＤの最大割合を示すのに充分量の 酵素結合体（実施例１５） 分析緩衡剤：緩衡剤 ０．５１ ＮａＣｊ’ ０．０１＄ （Ｖ／ＶＨ−リドンＸ−１００ｐＨ８，１
（ＲＴ） 抗体試薬１！衡剤 １．０＄ ＩＳＡ （：６Ｐ（Ｎａ）０．０６６Ｍ ＨＡＤ ０．０４Ｍ ｐＨ５（ＲＴ） 分析に最適化された抗リドカイン ％は特記ない限り全てＷ ／ Ｖ （ｙ／ ｍｌ）であ
る。
の７５０に等しい ΔＯＤの最大割合を示すのに充分量の 酵素結合体（実施例１５） 分析緩衡剤：緩衡剤 ０．５１ ＮａＣｊ’ ０．０１＄ （Ｖ／ＶＨ−リドンＸ−１００ｐＨ８，１
（ＲＴ） 抗体試薬１！衡剤 １．０＄ ＩＳＡ （：６Ｐ（Ｎａ）０．０６６Ｍ ＨＡＤ ０．０４Ｍ ｐＨ５（ＲＴ） 分析に最適化された抗リドカイン ％は特記ない限り全てＷ ／ Ｖ （ｙ／ ｍｌ）であ
る。
Ｒ３Ａ ＝ウサギ血清アルブミン
分析の実施に用いた方法は次の通りである。
５０μｌ被検サンプルを希釈装置に入れ、２５０μｒの
分析用緩衝剤と共に１ｍｌクロアンキャップに入れた。
分析用緩衝剤と共に１ｍｌクロアンキャップに入れた。
被希釈サンプルの５０μｌを分析用緩衡剤２５０μｒと
共に第２のクロアンキャップに入れた。この第２のクロ
アンキャップに５０ｕｌの抗体試薬を２５０μｌの分析
用緩衝剤と共に導入し、ついで５０μｌの酵素試薬と２
５０μｌの分析用緩衡剤とを添加した。酵素添加直後に
サンプル全量を７０−セル中に吸引した。１５秒後に最
初の読みをとり、その３０秒後に２度目の読みをとった
。結果は２．６６７における吸光度の差として求めた。
共に第２のクロアンキャップに入れた。この第２のクロ
アンキャップに５０ｕｌの抗体試薬を２５０μｌの分析
用緩衝剤と共に導入し、ついで５０μｌの酵素試薬と２
５０μｌの分析用緩衡剤とを添加した。酵素添加直後に
サンプル全量を７０−セル中に吸引した。１５秒後に最
初の読みをとり、その３０秒後に２度目の読みをとった
。結果は２．６６７における吸光度の差として求めた。
次式に、既知量のりドカインを含む多数のサンプルを用
いて得られた結果を示す。
いて得られた結果を示す。
表■
サンプル中のリドカイン濃度 ΔＯＤＸ上記結果を半
対数紙にグラフ化することにより、被検サンプル中のリ
ドカイン濃度を決定できる。
対数紙にグラフ化することにより、被検サンプル中のリ
ドカイン濃度を決定できる。
サンプルに３μｇ／ｌａｒのリドカイン血清と５μｌの
交差反応体とを加えて交差反応性の研究を実施した。プ
ロ力インアミド、イソプロテレノール、プロプラノロー
ル、エフェドリン、メタンフェタミンの様な類似薬物で
は交差反応性は［察されなかった。
交差反応体とを加えて交差反応性の研究を実施した。プ
ロ力インアミド、イソプロテレノール、プロプラノロー
ル、エフェドリン、メタンフェタミンの様な類似薬物で
は交差反応性は［察されなかった。
リドカイン、モノエチルグリシンキシリジド、グリシン
キシリジドの既知代謝産物のうちでは前者のみが若干の
交差反応性を示した。しかし、約３〜１０μｇ／ａｈ（
ｌの範囲内の量のこの交差反応性代謝産物念被分析媒体
に導入することによりその交差反応性を有効に低下させ
ることができ、それゆえ被分析サンプル中に存在する代
謝産物のいづれも読みに有意には影響しないことが発見
された。
キシリジドの既知代謝産物のうちでは前者のみが若干の
交差反応性を示した。しかし、約３〜１０μｇ／ａｈ（
ｌの範囲内の量のこの交差反応性代謝産物念被分析媒体
に導入することによりその交差反応性を有効に低下させ
ることができ、それゆえ被分析サンプル中に存在する代
謝産物のいづれも読みに有意には影響しないことが発見
された。
上記の結果より、リドカインとその預似体との高恣度で
正確で反復性のある分析を本発明により達成できるとい
うことが明白である。生成される杭木は、リドカインの
脱エチル代謝産物は例外として、有意な交差反応性を示
さない。
正確で反復性のある分析を本発明により達成できるとい
うことが明白である。生成される杭木は、リドカインの
脱エチル代謝産物は例外として、有意な交差反応性を示
さない。
該代謝産物の交差反応性は小量の該代謝産物を被分析媒
体に加えることにより容易に除去でき、それゆえ、被分
析サンプル中に存在する代謝産物が結果に影響すること
はない。
体に加えることにより容易に除去でき、それゆえ、被分
析サンプル中に存在する代謝産物が結果に影響すること
はない。
以上に本発明の理解を明白にするために例示、実施例に
より若干詳細に記載したが、本発明の範囲内において変
更、修正をなしえることは明白である。
より若干詳細に記載したが、本発明の範囲内において変
更、修正をなしえることは明白である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、一般式 I ： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、ＸとＸ＾１とはメチル基であり； ａとｂとは０又は１であり、ａとｂとの和は少なくとも
１であり； Ｙは水素原子かメチル基であるか、あるいはＹは、Ｚ、
Ｙと結合している炭素原子、及びＺと結合している窒素
原子と一緒に６員環を形成してもよく； ＺとＺ＾１とは同一でも異なってもよく、Ｃ＿１＿〜＿
４アルキル基であり、但し、Ｚは前記の如くＹと共に６
員環を形成してもよく； 芳香環に結合した二個のアミノ基は３〜４個の炭素原子
により隔てられており； Ｅは直接結合手又はＣ＿１＿〜＿５アルキレン基であり
； ＤとＤ＾１は酸素原子又は硫黄原子であり；ｐとｑは０
又は１であり、ｐとｑとの和は少なくとも１であり； ＡＮＴは分子量が少なくとも５，０００の抗原ポリアミ
ノ酸残基であり； ｎは少なくとも１であり、かつＡＮＴ中に存在する有効
アミノ基の数より多くはない数である。）で示される抗
原ポリアミノ酸結合化合物。 ２、一般式 I でＺとＺ＾１がエチル基であり、ａとｂ
が共に１であり、Ｙが水素原子である、特許請求の範囲
第１項記載の化合物。 ３、一般式 I でＥがアルキレン基であり、ｐとｑが１
であり、ＤとＤ＾１が酸素原子である、特許請求の範囲
第１項記載の化合物。 ４、一般式 I でｐが１であり、ｑが０であり、Ｅが直
接結合手である、特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ５、一般式II： ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中、ＡＮＴは抗原ポリアミノ酸残基であり；ｎは１
〜５００の範囲内にあり； Ｅは直接結合手又はＣ＿１＿〜＿５アルキレン基であり
； ＤとＤ＾１は酸素原子又は硫黄原子であり；そしてｐと
ｑは０又は１であり、ｐとｑとの和は少なくとも１であ
る。） で示される特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ６、一般式IIでＤとＤ＾１が酸素原子であり、ｐとｑが
１である、特許請求の範囲第５項記載の化合物。 ７、一般式IIでＥがアルキレン基である、特許請求の範
囲第６項記載の化合物。 ８、一般式IIでＥが直接結合手であり、Ｄ＾１が酸素原
子であり、ｑが１であり、ｐが０である、特許請求の範
囲第５項記載の化合物。 ９、一般式III： ▲数式、化学式、表等があります▼（III） （式中、ＡＮＴは抗原ポリアミノ酸残基である）で示さ
れる特許請求の範囲第１項記載の化合物。 １０、一般式IIIでＡが牛γ−グロブリンである、特許
請求の範囲第９項記載の化合物。 １１、一般式IV： ▲数式、化学式、表等があります▼（IV） （式中、ＡＮＴは抗原ポリアミノ酸残基である）で示さ
れる特許請求の範囲第１項記載の化合物。 １２、一般式IVでＡＮＴが牛γ−グロブリンである、特
許請求の範囲第１１項記載の化合物。 １３、一般式IVでＡＮＴが牛血清アルブミンである、特
許請求の範囲第１１項記載の化合物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US05/775,658 US4069105A (en) | 1977-03-03 | 1977-03-03 | Lidocaine antigens and antibodies |
| US775658 | 1977-03-03 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1959378A Division JPS53108904A (en) | 1977-03-03 | 1978-02-22 | Reagent for concurrent protein bond analyzing method |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH032199A true JPH032199A (ja) | 1991-01-08 |
Family
ID=25105080
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1959378A Granted JPS53108904A (en) | 1977-03-03 | 1978-02-22 | Reagent for concurrent protein bond analyzing method |
| JP62290422A Granted JPS6420451A (en) | 1977-03-03 | 1987-11-17 | Antibody used for emulation protein bond analysis |
| JP2088991A Pending JPH032199A (ja) | 1977-03-03 | 1990-04-03 | 競合蛋白結合分析法で使用される抗原ポリアミノ酸―アニリド化合物結合体 |
Family Applications Before (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1959378A Granted JPS53108904A (en) | 1977-03-03 | 1978-02-22 | Reagent for concurrent protein bond analyzing method |
| JP62290422A Granted JPS6420451A (en) | 1977-03-03 | 1987-11-17 | Antibody used for emulation protein bond analysis |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4069105A (ja) |
| JP (3) | JPS53108904A (ja) |
| AU (1) | AU513665B2 (ja) |
| DE (1) | DE2805962A1 (ja) |
| IT (1) | IT1102385B (ja) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4195128A (en) * | 1976-05-03 | 1980-03-25 | Bayer Aktiengesellschaft | Polymeric carrier bound ligands |
| DE2619451A1 (de) * | 1976-05-03 | 1977-11-24 | Bayer Ag | Verfahren zur bindung von hoch- und niedermolekularen liganden an polymere traeger |
| IT1081627B (it) * | 1977-07-27 | 1985-05-21 | Snam Progetti | Procedimento per la preparazione di materiali biocompatibili e manufatti cosi' ottenuti |
| US4235969A (en) * | 1978-05-08 | 1980-11-25 | Syva Company | Procainamide antigen conjugates and antibodies |
| US4225485A (en) * | 1978-07-24 | 1980-09-30 | Miles Laboratories, Inc. | Chemiluminescent naphthalene-1,2-dicarboxylic acid hydrazide-labeled polypeptides and proteins |
| US4223013A (en) * | 1978-12-29 | 1980-09-16 | Syva Company | Amitriptyline conjugates to antigenic proteins and enzymes |
| US4256833A (en) * | 1979-01-08 | 1981-03-17 | Majid Ali | Enzyme immunoassay for allergic disorders |
| JPS5687559A (en) * | 1979-12-18 | 1981-07-16 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | Novel succinic acid amide derivative and its preparation |
| US4347312A (en) * | 1980-03-20 | 1982-08-31 | Research Triangle Institute | Detection of antibiotics in milk |
| US4785080A (en) * | 1981-03-30 | 1988-11-15 | Baker Instruments Corporation | Labeled analytes |
| US4378428A (en) * | 1981-03-30 | 1983-03-29 | Baker Instruments Corporation | Method for carrying out non-isotopic immunoassays, labeled analytes and kits for use in such assays |
| JPH0651643B2 (ja) * | 1983-01-19 | 1994-07-06 | 帝人株式会社 | 殺細胞性修飾免疫グロブリン及びその製造方法 |
| DE3482444D1 (de) * | 1983-03-30 | 1990-07-19 | Lilly Industries Ltd | Immunoglobulinkonjugate. |
| US4650771A (en) * | 1983-11-04 | 1987-03-17 | Miles Laboratories, Inc. | Immunogens, antibodies, labeled conjugates, and related derivatives for lidocaine and analogs thereof |
| US5099000A (en) * | 1989-12-22 | 1992-03-24 | Abbott Laboratories | Derivatives and analogues of monoethylglycinexylidide and their production and use |
| AU2402292A (en) * | 1991-07-29 | 1993-03-02 | Serex, Inc. | Differential binding affinities and dissociation assays based thereon |
| JPH0614387U (ja) * | 1992-03-02 | 1994-02-22 | 有限会社南極防熱工業所 | 扉装置 |
| US5470997A (en) * | 1992-04-06 | 1995-11-28 | Biosite Diagnostics Incorporated | Amphetamine derivatives and protein and polypeptide amphetamine derivative conjugates and labels |
| DE4239429A1 (de) * | 1992-11-24 | 1994-05-26 | Merck Patent Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Immunkonjugaten |
| US5710009A (en) * | 1994-02-17 | 1998-01-20 | Serex, Inc. | Receptor:release ligand (reland) complexes and release assays using said reland and methods and kits based thereon |
| US5776859A (en) * | 1995-11-15 | 1998-07-07 | Nickel; Alfred A. | Sodium channel active novel compounds and related processes and bioassay techniques |
| EP0888552A1 (en) * | 1996-03-20 | 1999-01-07 | Serex, Inc. | Chromatographic immunoassay device and method utilizing particle valency for quantitation |
| CN1255044A (zh) * | 1997-04-01 | 2000-05-31 | 卡里克斯治疗公司 | 苦瓜中的口服活性成分,其活性肽,及它们治疗糖尿病的用途 |
| US6531130B1 (en) | 1999-07-06 | 2003-03-11 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford University | Treatment of demyelinating autoimmune disease with ordered peptides |
| NZ505525A (en) * | 2000-06-30 | 2003-03-28 | Horticulture & Food Res Inst | Polymers imprinted with phenols for the binding of phenols, and a method and sensor for the detection and/or measurement of a phenol by measuring the binding of phenol to the polymer |
| US20040076671A1 (en) * | 2002-10-21 | 2004-04-22 | Aletha Tippett | Methods and compositions for topical wound treatment |
| US7161034B2 (en) * | 2004-04-20 | 2007-01-09 | Dade Behring Inc. | Lidocaine analogs and methods of making and using same |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3690834A (en) * | 1971-01-11 | 1972-09-12 | Syva Co | Ligand determination with spin labeled compounds by receptor displacement |
| US3817837A (en) * | 1971-05-14 | 1974-06-18 | Syva Corp | Enzyme amplification assay |
| DE2324544A1 (de) * | 1972-05-15 | 1973-11-29 | Biological Developments | Synthetische antigene und ihre verwendung |
| US3843696A (en) * | 1972-09-05 | 1974-10-22 | Syva Co | Methadone analog compounds |
| US3878187A (en) * | 1972-09-11 | 1975-04-15 | Syva Co | Polypeptide derivatives of amphetamine and analogs for immunoassays |
| US3966556A (en) * | 1972-11-06 | 1976-06-29 | Syva Company | Compounds for enzyme amplification assay methadone analogs |
| US3875011A (en) * | 1972-11-06 | 1975-04-01 | Syva Co | Enzyme immunoassays with glucose-6-phosphate dehydrogenase |
| US3888866A (en) * | 1973-06-01 | 1975-06-10 | Syva Co | Nitrogen derivatives of benzoyl ecgonine |
| GB1511571A (en) * | 1974-06-28 | 1978-05-24 | Syva Co | Lactam compounds and conjugates |
| CA1028643A (en) * | 1975-02-20 | 1978-03-28 | Judith I. Blakemore | Polylodothyronine immunoassay |
| US4026879A (en) * | 1976-03-23 | 1977-05-31 | Hoffmann-La Roche Inc. | Antigen-containing propranolol derivatives |
-
1977
- 1977-03-03 US US05/775,658 patent/US4069105A/en not_active Expired - Lifetime
-
1978
- 1978-02-13 DE DE19782805962 patent/DE2805962A1/de active Granted
- 1978-02-17 IT IT48096/78A patent/IT1102385B/it active
- 1978-02-22 JP JP1959378A patent/JPS53108904A/ja active Granted
- 1978-03-02 AU AU33768/78A patent/AU513665B2/en not_active Expired
-
1987
- 1987-11-17 JP JP62290422A patent/JPS6420451A/ja active Granted
-
1990
- 1990-04-03 JP JP2088991A patent/JPH032199A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4069105A (en) | 1978-01-17 |
| IT7848096A0 (it) | 1978-02-17 |
| DE2805962C2 (ja) | 1987-12-23 |
| JPS53108904A (en) | 1978-09-22 |
| JPS6420451A (en) | 1989-01-24 |
| AU513665B2 (en) | 1980-12-11 |
| JPH0243144B2 (ja) | 1990-09-27 |
| DE2805962A1 (de) | 1978-09-07 |
| AU3376878A (en) | 1979-09-06 |
| IT1102385B (it) | 1985-10-07 |
| JPH0236599B2 (ja) | 1990-08-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH032199A (ja) | 競合蛋白結合分析法で使用される抗原ポリアミノ酸―アニリド化合物結合体 | |
| US3878187A (en) | Polypeptide derivatives of amphetamine and analogs for immunoassays | |
| US4273866A (en) | Ligand analog-irreversible enzyme inhibitor conjugates and methods for use | |
| JP3009170B2 (ja) | 薬物の検出用試剤 | |
| JP5031585B2 (ja) | ５−フルオロ−ウラシル免疫測定法 | |
| US4550163A (en) | Ligand analog-irreversible enzyme inhibitor conjugates | |
| JPS6236368A (ja) | レゾルフイン−誘導体並びにその製法 | |
| US5395933A (en) | Carbamazepine hapten analogues | |
| JPS6217187B2 (ja) | ||
| AU1141697A (en) | Topiramate immunoassay, as well as analogs and antibodies | |
| US4156081A (en) | Theophylline antigens and antibodies | |
| US20070142631A1 (en) | Enzyme inhibiton immunoassay | |
| US4275160A (en) | Imipramine derivatives and poly(amino acid) conjugates | |
| EP0095229A2 (en) | Acetaminophen analogs, antigens, and antibodies | |
| US4230805A (en) | Theophylline antigens and antibodies | |
| US4608252A (en) | Chloramphenicol derivatives antigens and antibodies | |
| US4262089A (en) | Theophylline antigens and antibodies | |
| US5439798A (en) | Maleimide adduct conjugates of procainamide and NAPA | |
| US4235969A (en) | Procainamide antigen conjugates and antibodies | |
| JPS638427B2 (ja) | ||
| US5525474A (en) | Piperidine analogs and conjugates of procainamide and NAPA | |
| US4329502A (en) | Propranolol antigen conjugates and antibodies | |
| JPS604940B2 (ja) | カテコールアミンの分析方法 | |
| US4489157A (en) | Chloramphenicol derivatives | |
| CA1205403A (en) | Chloramphenicol derivatives antigens and antibodies |