JPH03220108A - 新規微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、新規な微生物に関し、さらに詳細には、フザ
リウム属の植物病原菌に対して抗菌活性を有する微生物
に係わる。

［従来の技術、発明が解決しようとする問題点］フザリ
ウム属に属する植物病原菌に起因する例えば萎ちょう病
および根腐病などの多くの植物病害が知られており、こ
れによる被害は農家の収益に大きな被害を与えている。

中でも収益性の高い野菜についての被害は大きい。

野菜等の収益性が高い作物の連作は、土壌の理化学的性
質の悪化ならびに土壌伝染性病害および土壌害虫の発生
により現在のところ困難とされている。

連作障害は、特に土壌伝染性病害によることが多（、こ
のような土壌伝染性病害の大部分は、フザリウム属に属
する植物病原菌に起因する。この土壌伝染性病害は、土
壌中に生存する病原菌が植物体に侵入することによるも
ので、有効な防除薬剤は少なく、従来の農薬のみでこれ
らの植物病害を防ぐことはできなかった。

またこのような土壌伝染性病害を防除するには、耐病性
品種の育種および接木などの園芸学的手段があるが、こ
れらは長時間を要して速効的ではなく、かつ、煩雑であ
って実用的ではない。また、これらの土壌伝染性の病害
のうち、甚大な被害を与える例としてトマト萎ちょう病
およびイチゴの萎黄病などがあるが、これらの病害を効
率よく防除するための農薬はまだ知られていない。

そこで、土壌病害を防除する新しいタイプの方法の開発
が望まれていた。

［問題を解決するための手段］ 本発明者らは、腐敗病、萎黄病、つる割病、萎ちょう病
、立枯病および乾腐病などの土壌伝染性病害を防除する
ために、これらの植物病害の病原菌であるフザリウム属
に属する微生物に対して抗菌活性を示す微生物を広く探
索したところ、これらの土壌伝染性病害菌に対して抗菌
活性を示す新規な微生物を見出した。

すなわち、本発明は、シュードモナス　バンプイーに属
し、フザリウム属の植物病原菌に対して抗菌活性を有す
ることを特徴とする新規微生物である。本細菌の代表的
な菌株である、シュードモナス　パンデイ（Ｐｓｅｕｄ
ｏｔｍｏｎａｓ　ｖａｎｄｉｉ）シＡ−１３１６（微工
研菌寄第１０７３２号）の菌学的性質を下記に示す、す
なわち、 １、形態 肉汁液体培地および肉汁寒天培地のそれぞれで３０℃で
１日間培養した。

（１）細胞の形状および大きさ 球状または短稈状 輻０．５〜０．９μｍ、長さ０．５〜１．５　μｎ＋集
団、単細胞または双細胞となる。

運動性　　　　　　極鞭毛を有する。

胞子の有無　　　　生産されない。

ダラム染色　　　　ダラム陰性。

抗酸性　　　　　　陰性。

細胞外粘着物　　　生産されない。

次の各培地における生育状態 （特に断わらなければ３０°Ｃで３日間の培養）（１）
肉汁寒天平板培養 コロニーの形態および形状： 外形−円形、大きさ一２〜３ｍｌｌ１ 隆起−半円状、構造−均質２表面−平滑。

辺縁−平滑で全緑２色−白色または黄白色。

透明度−不透明、硬度−バター質。

（２）肉汁寒天斜面培地 接種線に一様に旺盛に生育する。

隆起−中程度１表面−平滑９辺縁−平滑。

（３） （４） （５） （６） （７） 色−白色または黄白色、透明度−不透明、硬度−バター
質。

肉汁液体培地邑 全体に生育する。沈澱あり。

閉環を形成しない。

ペプトン水液体培地 全体に旺盛に生育する。沈澱あり。

閉環を形成しない。

肉汁寒天穿刺培養 小乳頭状に一様に生育する。培地表面では直径２〜４鶴
位に生育する。

肉汁ゼラチン穿刺培養 ２０℃で１０日間培養。

全体に旺盛に生育し、ゼラチンの液化がみられる。

リドマスミルク培養 ３０℃で４週間培養。

菌の生育がみられ、カゼインは消化されるが、凝固はみ
られない。

３、生理学的性質 （１）硝酸塩の還元　　　硝酸塩を亜硝酸に還元する。

（２）ＭＲテスト　　　　陰性。

（３）ＶＰテスト　　　　陰性。

（４）インドールの生成　陰性。

（５）硫化水素の生成　　陰性。

（６）でん粉の加水分解　陰性。

（７）くえん酸の利用　　（コーザーＫｏｓｅｒ培地と
クリステンセンＣｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ培地を併用）利
用する。

（８）窒素源の利用 アンモニウム７塩、ペプトンおよび尿素を窒素源として
それぞれ利用する。しかし、硝酸塩を利用しない。

（９）色素の生成　　　　生成しない。

（１０）ウレアーゼ　　　　陽性。

（１１）カタラーゼ　　　　陽性。

（１２）アンモニアの生成　生成する。

（１３）生育の範囲 ｐＨ４〜８の範囲で生育する。

ｐＨ６〜７．５の範囲が好ましい。

温度５〜３７℃で生育する。４２℃では生育しない。２
５〜３０℃が好ましい。

（１４）酸素に対する態度　　好気性。

（１５）オキシダーゼ反応　　陽性。

（１６）　Ｏ−Ｆテスト（ヒューライフソンＨｕｇｈ　
Ｌｅｉｆｓｏｎ法による。） 糖を酸化的に分解するが、醗酵的に分解しない。

（１７）糖類の資化性ならびに酸の生成およびガスの生
成 （以下余白） 資化性：資化して、分解する。

＋（ｗ）　　：弱く資化あるいは弱く酸を生成する。

（１８）その他の炭素源の資化性 （１９）耐塩性 ３重量％ＮａＣｌ含有培地で生育しない。

（２０）ビタミン要求性 ビタミンを絶対的に要求しない。

（２１）脱窒反応　　　　　　陽性。

（２２）ＣＴＣ（グアニン＋シトシン）含量６８．５　
ｉｏ１％ （２３）主要な菌体脂肪酸組成 飽和脂肪酸 不飽和脂肪酸 （２４）主要なヒドロキシ酸 ３−ヒドロキシ酸 ２−ヒドロキシ酸 （２５）キノン・タイプ Ｃ１６：０ Ｃ１６：Ｌ　Ｃ１８：１ ３０Ｈ−Ｃ１４：０ ３０Ｈ−Ｃ１６：０ ２０）１−　Ｃ１６：０ ユビキノンＱ＠ （以下余白） （２６）での略号の説明 ＡＴＣＣ：アメリカン　タイプ　カルチャー　コレクシ
ョン （Ａ＋ｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃ
ｏ１１ｅｃｔｉｏｎ。

１２０３１　Ｐａｒｋｌａｗｎ　Ｄｒｉｖｅ　Ｒｏｃｋ
ｖｉｌｌｅ。

ＭＤ　２０８５２　ＵＳＡ） ＮＴＡＥＳ：農林水産省農業環境技術研究所（Ｎａｔｉ
ｏｎａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ａｇｒｏ−Ｅｎ
ｖｉｒｏｎ−ｍｅｎｔａｌ　５ｃｉｅｎｃｅ。

茨城系つくば市観音台３３−１−１ ）ＪＣ：理化学研究所微生物系統保存施設（Ｊａｐａｎ
　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎ
ｉｓｓ＋ｓ。

埼玉県和光市広沢２−１） Ｔ：標準菌株（Ｔｙｐｅ　５ｔｒａｉｎ）であることを
示す。

（２７）分離源 土壌 本発明の微生物（以下　本細菌　と記す）は、極鞭毛を
有するダラム陰性細菌で、ＧＣ含量が６８．５　ａ＋ｏ
１％であり、主要な菌体脂肪酸組成がＣ１６：Ｏ，Ｃ１
６：１．　　Ｃ１８：１であり、３−ヒドロキシ酸Ｃ１
４：０．　　Ｃ１６：０および２−ヒドロキシ酸Ｃ１６
：Ｏを主要なヒドロキシ酸とし、かつ、キノン・タイプ
がユビキノンＱ、であることから、バージイズ　マニュ
アル　オブ　システィマチイック　バクテリオロジ−（
Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍ
ａｔｉｃ　Ｂａｃ　ｔｅｒ　ｉｏ　ｌｏｇｙ）第１巻　
編集者　クリーブ（Ｋｒｉｅｇ）およびホルト０（ｏｆ
ｔ）：　ウィリアムズ　アンドゥィルキンス（Ｗｉｌｌ
ｉａｍｓ　ａｎｄ　Ｗｉｌｋｉｎｓ）社、　（１９８４
）によれば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属のｒＲＮ＾グル
ープＨに属する菌株と思われる。しかしながら、本細菌
とｒＲＮＡグループ■の各菌種とは、ゼラチンの液化、
脱窒反応、糖からの酸の生成および炭素源の資化性など
が異なる。さらに、ｒＲＮＡグループ■の各菌株とは、
ＤＮＡ−ＤＮＡの相同性で明らかに区別される。

従って、本発明者らは、本細菌を新菌種と判断して、こ
れをシュードモナス　バンプイー（Ｐｓｅｕ−ｄｏａ＋
ｏｎａｓ　　ｖａｎｄｉ）と命名した。

本発明において、菌学的性質を調べるための方法は、バ
ージイズ　マニュアル　オプ　システィマチイック　バ
クテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏ
ｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ
）第１巻　編集者クリーブ（にｒｉｅｇ）およびホルト
（Ｈｏｌｔ）：　ウィリアムズ　アンドゥィルキンス（
Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ａｎｄ’Ｗｉｌｋｉｎｓ）社、　（
１９８４）、　医科学研究所学友会編「細菌学実習提要
、　（１９５８）および　長谷用　武治編著「微生物の
分類と同定Ｊ　（１９７５）に準拠した。　土壌からの
本細菌の分類は、０．０２５ｗｔ％フザリン酸を含有す
る肉汁培地（ｐＨ７＞を用いて、常法で行った。

本細菌の培養に使用する培地は、本細菌が資化し得る炭
素源を含有していることを要し、さらに、適量の窒素源
および無機物などを含有している培地であればよく、合
成培地および天然培地のどちらでもよい。

炭素源としては、本細菌が資化し得る炭素源であれば特
に制限はないが、糖蜜および肉エキスなどの天然物、Ｄ
−グルコースおよびＤ−フラクトースのような糖類、Ｄ
−ソルビトールおよびグリセロールなどの糖アルコール
、ならびに、コハク酸および酢酸などの有機酸、エタノ
ール、ｎ−プロピルアルコールなどのアルコールなどが
使用できる。

培地におけるこれらの炭素源の濃度は、炭素源の種類に
より異なり、微生物を生育、増殖させるように、適宜、
選択される。

窒素源としては、たとえば、アンモニウム塩などの無機
窒素化合物および／またはたとえば、コーン・ステイー
プ・リカー、カゼイン、ペプトンおよび肉エキスなどの
有機窒素含有物が用いられる。

また、無機成分としては、たとえば、カルシウム塩、マ
グネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、りん酸塩、
マンガン塩、亜鉛塩、鉄塩、銅塩、モリブデン塩、コバ
ルト塩、はう素化合物およびよう素化合物などが用いら
れる。

さらに、ビタミンなどの栄養物質を要求する菌株を使用
する場合は、その菌株が要求する栄養物質を添加する。

培養条件は、温度は、５〜３７℃、好ましくは、２５〜
３０°Ｃとされ、ｐＨは、４〜８、好ましくは、６〜７
．５とされる。このような条件で好気的番こ培養を行う
。

本菌株の生育、増殖が比較的悪くはなるが、これらの条
件をはずして培養することを妨げない。

また、培養液の溶存酸素濃度は、本細菌が生育、増殖で
きるような溶存酸素濃度であればよく、特に制限はない
が、通常は、０．５〜２０ｐｐｍ＋程度が好ましい。こ
のような溶存酸素濃度とするためには、通気ガス量を調
節したり、撹拌したり、通気ガスとして酸素ガスまたは
空気との混合ガスを使用したり、また培養槽内の圧力を
高めるなどの手段が採用される。

また、培養方式は、回分培養、連続培養または、半連続
培養のいずれでも良い。

、窒素源として、アンモニウム塩を使用した場合には、
培養期間中に、アンモニアが菌体生産のために消費され
て培養液のｐＨが低下する。この場合には、培養液のｐ
Ｈを所定の値に保つために、アンモニア、苛性カリおよ
び苛性ソーダなどのアルカリを添加することが好ましい
。

このようにして本細菌を培養したのち、常法により菌体
を培養液から分離する。目的とする物質が、菌体外に排
出される酵素、補酵素およびアミノ酸などの物質の場合
には、これらの物質は培養液から抽出９分離され、さら
に精製される。一方、目的とする物質が、補酵素、核酸
、ビタミン類、タンパク質および脂質４などの菌体内物
質である場合には、菌体を種々な方法で処理し、目的物
質は抽出、分離され、さらに、精製される。

得られたこれらの物質は、食品、医薬品、飼料、飼料添
加物および工業原料などとして有効に利用される。

さらに、本細菌は、フザリウム属の植物病原菌に対して
抗菌活性を有することから、フザリウム属に属する病原
菌に起因するユウガオ、トマト、イチゴ、ニラ、ラッキ
ョ、ミツバ、ゴボウ、アスパラガス、タマネギ、キャベ
ツ、キュウリ、チシャ、ヘチマ、ナス、メロン、ハス、
スイカ、タイコン、ホウレンソウ、セルツー、チョロギ
、サトイモ、ヤマイモ、ショウガおよびウドなどの野菜
に発生する乾腐病、株枯病、萎ちょう病、立枯病、萎黄
病、つる割病、根腐病、半枯病および腐敗病などの植物
病害を防除することができる。

これらの植物病害の防除のために、本細菌または培養液
をそのまま、また、本細菌は、菌体外に抗菌物質を排出
することから、培養上澄液を土壌と混入するかもしくは
土壌表面に噴霧するが、または植物体に噴霧するかもし
くは植物体を培養液または培養上澄液に浸漬して本細菌
または有効成分を付着させるなどの手段を採用し得る。

なお、これらの方法では、使用された細菌が自然界で徐
々に死滅するため、多量の細菌が必要とされる。

また、培養上澄液を用いる場合は、培養液中に排出され
る抗菌物質が少ないため、多量の培養上澄液が必要とさ
れる。

たとえば、トマト萎ちょう病などの土壌伝染性植物病害
を効率よく防除するためには、たとえば、ニラおよびネ
ギなどのような本細菌に親和性のある植物体に、本細菌
を接種し、この接種植物体を病害防除の対象となる植物
（以下、対象植物と記す）に混植することにより、本細
菌を土壌中で増殖させ、本細菌の抗菌作用により、目的
とする病原菌を防除することが好ましい。

［実施例］ 次に、本発明を実施例によってさらに具体的に説明する
が、本発明はこれらの実施例に限定するものではない。

実施例１ 土壌的１ｇ−ｔ−滅菌水１ｄ無菌的に加えて懸濁させた
。この懸濁液ｌ−を、０．０２５ｗｔ％フザリン酸を含
有する肉汁培地（普通ブイヨン・米研）にいれ、２８°
Ｃで７日間静置培養を行った。

この培養液を、前記と同様な０．０２５ｗｔ％フザリン
酸含有肉汁寒天平板培地で培養し、発生した単一コロニ
ーを肉汁寒天斜面培地に植菌して培養した。この中から
、シュードモナス　バンプイーＶＡ−１３１６の純粋菌
株が得られた。

１１容三角フラスコに肉汁液体培地２００−いれ、これ
を前記のシュードモナス　バンプイー　ＶＡ−１３１６
を接種して、３０″Ｃで１日間培養して得られた培養液
の吸光度（６１０ｎｍ）は、４．０であった。

使用例１ シャーレ中のポテトデキストロース寒天培地（日永製薬
製、組成：ポテト　出液　２０％、ぶどう糖２％、寒天
１．５％）表面に、シュードモナスバンディーＶＡ−１
３１６とフザリウム　オキシスポラム　エフ　エスピー
　ククモリナム　（植物病原菌）を３ｃｍの間隔をおい
て対置して接種し、２５°Ｃで７日間培養し、この病原
菌の生育の状態を観察した。

その結果、病原菌の生育は阻害された。

使用例２ シュードモナス　バンプイー　ＶＡ−１３１６ヲ肉汁培
地（デイフコ社製、Ｄｉｆｉｃｏ）で３０″Ｃで１日間
培養し、この培養液にニラの鱗茎を浸漬接種した。

この接種ニラ鱗茎を、トマトの定植時にトマトの株元約
２０ｃｍ付近に混植した。

トマトの根腐れ萎ちょう病の防除試験の結果を第１表に
示す。

第　　１　　表 ［発明の効果］ 本発明の細菌は、合成培地および天然培地のいずれでも
旺盛に生育し、容易に培養を行うことができ、種々の醗
酵生産物を効率よく、かつ、安定して製造することが出
来る。

さらに、本細菌は、フザリウム属の植物病原菌に対して
抗菌活性を示すことから、フザリウム属に属する植物病
原菌に起因する植物病害を効率よく、しかも簡便に防除
することが可能となり、野菜等の栽培における生産性を
著しく向上させることが可能となる。

代 理 人

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. シュードモナスバンディーに属し、フザリウム属の植物
   病原菌に対して抗菌活性を有することを特徴とする新規
   微生物。