JPH0322930A - アスパラガス属植物のクラウン形成及び増殖方法、並びに、種苗増殖方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はアスパラガス属植物のクラウン形或及び増殖方
法、並びに、植物体及び種苗増殖方法に関する． 〔従来の技術〕 アスパラガス属植物の増殖は、従来、播種もしくは株分
けによって行われてきた。アスパラガス属植物は、雌雄
異株であり、雄株の方が品質や栽培管理の点で良いとさ
れている。さらに、遺伝的に変異の大きな作物であるた
め播種による増殖は、雌株の混入を招き、又、株毎の収
量及び品質の差異を招き、栽培上著しい問題となってい
る。また、株分けによる増殖は多くの人手と長い年月を
必要とし、効率が非常に悪く、ウイルス病などが伝染し
ていく危険性も非常に高い。

以上のような問題点を改善する目的で、近年、組織培養
による優良株クローンの大量増殖が注目されている．通
常、アスパラガスの大量増殖は、組織片を培養し、多量
の苗条（ｓｈｏｏｔ）を増殖させた後、各々を発根培地
に移植し、不定根の分化を経て幼苗となす。しかし、発
根率が一般的に低いために、増殖効率が低いという問題
点がある。また、組織片を培養し、カルスを形成させた
のち、カルスより生じる不定胚を用いて大量増殖の手法
とするための試みがなされている（例えば、昭和６１年
度園芸学会秋季大会研究発表要旨Ｐ２１０〜２１１、昭
和６１．ｌｌ．２３〜２５、於琉球大学、昭和６２年度
園芸学会研究発表要旨Ｐ２５４〜２５５、昭和６２．１
０．７〜９、於九州大学）。不定胚を生長させることに
より、発根率が低いという問題は解決するものの、単離
した不定胚はほとんどが培養の途中でカルス化あるいは
奇形化を引き起こすことが問題となっている。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明者らは従来のアスパラガス属植物の組織培養方法
には前記した問題点のあることを認知した上で、従来法
とは異なる新規な方法によって組織培養してアスパラガ
ス属植物の種苗を効率よく増殖する方法について検討し
た． 〔課題を解決するための手段〕 その結果、本発明者等はアスパラガス属植物を組織培養
して増殖するに際し、支持材に含浸した液体培地を用い
通気条件下で組織培養してクラウンを形或させ植物体と
することにより上記従来技術の問題点を良好に解消し得
ることを見出し、この新知見に基づいてさらに研究を重
ねることにより本発明を完戒するに至ったものである。

したかっ”で、本発明の方法によれば、 ■　アスパラガス属植物の組織又はカルスを支持材に含
浸した液体培地を用い通気条件下で培養してクラウンを
形成させることを特徴とするアスパラガス属植物のクラ
ウン形或方法、■　■の方法でカルスを培養して形成さ
せたクラウンを切断して得た切片をさらに支持材に含浸
した液体培地を用い通気条件下で培養してクラウンを肥
大させ、さらに必要に応じて同様のクラウン切断→切片
培養→クラウン肥大の増殖プロセスを繰り返すことを特
徴とするアスパラガス属植物のクラウン増殖方法、 ■　■又は■の方法で得られたクラウンを支持材に含浸
した液体培地を用い通気条件下で培養して植物体を生育
させることを特徴とするアスパラガス属植物の植物体の
増殖方法、 ■　■の方法で得られた植物体を馴化せしめて種苗とす
ることを特徴とするアスパラガス属植物の種苗増殖方法
、 が提供される。

本発明では、アスパラガス属に属する植物であればすべ
て使用できる。該植物として具体的には食用アスパラガ
スであるＡｓｐａｒａｇｕｓ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ
Ｌ．ｖａｒ．ａｌｔｉｌｉｓ　Ｌ．を例示でき、本発明
ではこれを用いるのが好ましい。

本発明ではアスパラガス属植物の組織又はカルス（ｃａ
Ｈｕｓ）が組織培養されてクラウン（ｃｒｏｗｎ）が形
成される．この場合のＭｉ織培養に用いられる組織とし
ては胚、茎頂、茎、擬葉、地下茎等のＩＪｌｗｉを例示
できる。カルスについては、本発明では該組織を例えば
公知の培養方法（例えば、園芸学会雑誌　第４０巻　第
４号　１１頁〜１７頁，　１９７１年）によって培養し
て得られるカルスを用いることができる。

本発明のクラウン形或において使用される培地は、無機
成分及び炭素源を必須戒分とし、これに植物ホルモン類
、ビタミン類を添加し、更に必要に応じてアミノ酸類を
添加した培地である。該培地の無Ｉ！！戒分としては、
窒素、リン、カリウム、ナトリウム、カルシウム、マグ
ネシウム、イオウ、鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、モリ
ブデン、塩素、ヨウ素、コバルト等の元素を含む無機塩
をあげることができ、具体的には、硝酸カリウム、硝酸
ナトリウム、硝酸アンモニウム、塩化カリウム、塩化カ
ルシウム、リン酸１水素カリウム、リン酸２水素ナトリ
ウム、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム、硫酸ナ｝
　ＩＪウム、硫酸第１鉄、硫酸第２鉄、硫酸マンガン、
硫酸銅、モリブデン酸ナトリウム、三酸化モリブデン、
ヨウ化カリウム、硫酸亜鉛、ホウ酸、塩化コバルト等の
化合物を例示できる。

該培地の炭素源としては、庶糖やグルコースなどの炭水
化物、その誘導体、脂肪酸などの有機酸及びエタノール
等の１級アルコールなどを例示できる。

該培地の植物ホルモンとしては、例えば、ナフタレン酢
酸（ＮＡ＾）、インドール酢酸（１４Ａ）、ｐクロロフ
ェノキシ酢酸、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２．
　４−［））、インドール酪酸（ＩＢ八）、及びこれら
の誘導体等のオーキシン類及びペンジルアデニン（ＢＡ
）、カイネチン、ゼアチン等のサイトカイニン類を例示
できる。

該培地のビタ旦ン類としては、ビオチン、チアミン（ビ
タミンＢ，）、ビリドキシン（ビタミンＢ６）、ピリド
キサール、ビリドキサミン、パントテン酸カルシウム、
アスコルビン酸（ビタミンＣ）、イノシトール、ニコチ
ン酸、ニコチン酸アミド及びリポフラビン（ビタミンＢ
６）などを例示できる。

該培地のアミノ酸類としては、例えばグリシン、アラニ
ン、グルタミン、システィン、フエニルアラニン及びリ
ジンなどを例示できる。

本発明の前記培地は、通常は、前記無機成分を約０．　
１μＨないし約１００ｌＩＭ、前記植物ホルモン類を約
０．０１ｍｇ／ｊ！ないし約１５０ｍｇ／　１及び前記
アミノ酸類を０ないし約１０００■／１含ませて使用さ
れることが望ましい． 本発明に係わる組織培養に用いられる前記培地として具
体的には、従来から知られている植物の組織培養に用い
られている培地、例えば、ムラシゲ・スクーグ（’６２
）　［Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ　＆　Ｓｋｏｏｇｌの培地、
リンスマイヤー・スクーグ（ＲＭ−１９６５）　［Ｌｉ
ｎｓａ＋ａｉｅｒ＆　Ｓｋｏｏｇ］の培地、ホワイト　
（’６３）　［Ｗｈｉｔｅ］の培地、ガンボルグ［Ｇａ
ｍｂｏｒｇ］のＢ−５培地、三井の門９培地、ニッチ・
ニッチの培地［Ｎｉｔｃｈ　＆　Ｎｉｔｃｈ］等に前記
した炭素源及び植物ホルモンを添加し、更に必要に応じ
て前記したビタ藁ン類、ア藁ノ酸類を添加して調整され
た培地を例示できるが本発明ではこの中でも特にニッチ
・エッチ、リンスマイヤー・スクーグ、ムラシゲ・スク
ーズの培地を用いて調整される培地が好ましい。上記し
た従来公知の培地のＭｉ戒に関しては、例えば、竹内、
中嶋、古谷著の「新植物組織培養，　ｐ３Ｂ６〜ｐ３９
１、朝倉書店、１９７９年に記載されている。本発明の
クラウン形或方法において使用できる前記培地は、液体
培地であり、ポリエステル、ポリオレフイン、ポリビニ
ルクロライド、ポリビニリデン、ポリアクリルニトリル
アセテートアルコールなどのボリマー類、ロックウール
、バーミキュライト、バーライトなどの人工土壌、プラ
スチック網、金網等の支持体に含浸して用いる。

本発明では前記液体培地を用い通気条件下でアスパラガ
ス属植物の組織又はカルスを組織培養してクラウンを形
成させるものである。

この場合の本発明で言うところのクラウンとは全植物体
中の地下茎に相当し形態的には短縮茎にあたる貯蔵組織
であり、組織又はカルスを組織培養して得られる、塊状
ないしは冠状の形状をした細胞の塊であって幼芽あるい
は幼芽の基になる幼芽原基を含んでいるものをさす。

通気の方法としては、エアーポンプ、ガスボンベ、ファ
ンなどを用いた強制通気とフィルターをつけた培養器に
風をあてる、温度変化による空気の膨張、収縮を利用す
るなどの自然換気などがあげられる。使用する気体とし
ては酸素、二酸化炭素、窒素、空気などのうち２種類以
上の気体を混合した気体を用いることができる。本発明
では特に、酸素が５〜２０ｖｏ１／χ、二酸化炭素が４
００〜１０００ｐｐｍを含む混合気体が望ましい。通気
速度は、培養容器の形状や大きさにより異なるが、培養
容器内気相部分の換気回数が１〜２０回／ｈが望ましい
。

クラウン形成に使用する培養装置としては、液体培地を
含浸させるための支持材を有し、気相部の通気を行いう
るようにしたものであれば、何ら限定されない。具体的
には、第２図に示すような装置が使用できる。

第１図は、本発明の方法によるアスパラガス属植物のク
ラウン形或、増殖、植物体の増殖等のプロセスを示す図
である．図の上部には、苗条の茎を切断した得られた切
片を組織培養してクラウンが形或される経路が示されて
おり、図の下部の左側には、前記クラウンからクラウン
を増殖する増殖サイクルが示され、図の下部の右側には
、このようにして増殖されたクラウンから発根、再生さ
せた植物体が示されている。

本発明においてクラウンを形成させるための培地として
は前述のような培地を使用できるが、特にシーＪ糖を初
朋糖濃度として３％以上含有する培地を用いた場合にク
ラウン形或率を高めることができる。

本発明では、クラウン形成の際通気条件を採用すること
により、維管束系の発達した良質のクラウンの形成でき
、かつ形或速度を向上させることができる。得られたク
ラウンは、発根しやすく、またビトリフィケーションを
避けることができる。

本発明では、上記のようにして形成させたクラウンを切
断し、好ましくは少なくとも１個の芽を含むように切断
し、得られた切片をさらに支持材に含浸させた液体培地
を用い通気条件下で培養しすることによりクラウンを肥
大威長させることができる． 上記クラウンの肥大、増殖を行うための液体培地はクラ
ウン形成に使用するのと同様のものが使用でき、特にシ
ａｍを３％（初期濃度）以上含有する培地を用いた場合
に、クラウンの増殖率を向上させうる。通気条件は前述
と同様でよい。

本発明では、クラウンの肥大において通気条件を採用す
ることにより、良質のクラウンを得る、即ち、発根しや
すいクラウンを得て、ビトリフィケーシジン防止するこ
とができる。

さらに必要に応じて、同様のクラウン切断一切片組織培
養一クラウン肥大の増殖プロセスを繰り返すことにより
クラウンの増殖を行うことができる。

次いで上記のようにして増殖されたクラウンの中から適
宜量のクラウンを抜き取って発根培地で培養して発根さ
せ、前記芽を適宜大きさの植物体に生育させる。この植
物体への生育工程も、前述のクラウン形成に用いたと同
様の液体通気培養によれば、貯蔵根の発根率及び発根速
度を高め、良質の苗をうることかできる。

発根は培地中に抗ジベレリン剤を添加した場合に特に促
進される．抗ジベレリン剤としては具体的にはアンシ壽
ドールが挙げられる． さらに本発明では、必ずしも馴化工程は必要でないが、
必要に応じて上記植物体を馴化することによって種苗と
することができ、以上の方法を繰り返すことによりアス
パラガス属植物の種苗を大量に増殖させることができる
。

以下、本発明の方法を実施例によって具体的に示す。

実施例１ アスパラガスの品種゛北海１００”の無菌系で維持して
いるシュートを切断して、長さ７〜１０＋ａ＋ａに調整
した節を材料とした．培地は、無機要素をＭＳ培地、有
機要素をニッチ・ニッチを基本とし、ＮＨ４ＮＯ３を１
／２倍に、ＣａＣｌ．を２倍とし、グルタミン１０４Ｍ
を添加したものを基本培地（以後、ＡＳＰ培地と略記）
とした。

培地は、ＡＳＰ培地を基本とし、ショｔＪ３６０ｇ／ｌ
、ｐＨ５．８の液体培地を用い、オーキシンとしてＩＢ
Ａ１０−６？ｌ　、サイトカイニンとしてＢ八を３Ｘ１
０−＆Ｍ、抗ジベレリンとしてアンシミドールを１０−
ｈＭを添加した．これを市販のカルチャーボックス（容
禎約１０００ａｔｇ，ふたにシリコンチューブを取り付
け、ガス用ろ過フィルターをつけたもの）にポリエステ
ルウール約２．０ｇとともに各１８０ｄ分注した後、上
記アスパラガス茎切片を１００個置床して、２５゜Ｃ、
３０００１ｕｘ　，通気速度３０ｍ／＋ｗｉｎの条件下
で４週間培養したところ表１に示す結果を得た。

比較例１ 実施例１において、空気通気を行わないこと以外は実施
例１と同様にして行った結果、表ｌに示す結果を得た。

実施例２ 実施例１の手法により得られたアスパラガスの品種“北
海１００”のクラウンを２〜３芽を含むように切り分け
たものを材料とした。培地はＡＳＰ培地を基本とし、シ
−ｙｌ！６０ｇ／Ｊ！ＳｐＨ５．７とし、これにオーキ
シンとしてＩＢＡ　＠１０−’Ｍ　、サイトカイニンと
してＢ＾を１０−’Ｍ　、抗ジベレリンとしてアンシミ
ドールを１０−’Ｍ添加した。これを市販のカルチャー
ボックス（容積約１０００ｒｄ，ふたにシリコンチュー
ブを取り付け、ガス用ろ過フィルターをつけたもの）に
ポリエステルウール約３．０ｇとともに各１８０ｄ分注
した後、上記アスパラガスクラウンを２５個／ＢＯＸず
つ計１００個置床して、２５℃、３０００］ｔｖ　、空
気通気速度３０ｄ／＋ｇｉｎの条件下で４週間培養した
ところ表２に示す結果を得た。

比較例２ 実施例２において、空気通気を行わないこと以外は実施
例２と同様にして行った結果、表２に示す結果を得た。

実施例３ 実施例２の手法により維持しているアスパラガスの品種
“北海１００”のクラウンを２〜３芽を含むように切り
分けたものを材料とした。培地はＡＳＰ培地を基本とし
、シ！Ｆ　１！６０ｇ／　ｌ　，　　ｐＨ５．　７とし
、これにオーキシンとしてＩＢＭを１０−’Ｍ　、サイ
トカイニンとしてＢＡを１０−’？ｌ　，抗ジベレリン
としてアンシミドールをＩＯ−″Ｈ添加した。これを市
販のカルチャーボックス（容積約１０００ｄ、ふたにシ
リコンチューブを取り付け、ガス用ろ過フィルターをつ
けたものに）にポリエステルウール約３．　０ｇととも
に各１８０一分注した後、上記アスパラガスクラウンを
２５個／ＢＯＸずつ計１００個置床して、２５゜Ｃ、３
０００］ＩＪＸ　，空気通気速度３　０　ｄ　／　ｍ　
ｉ　ｎの条件下で４週間培養したところ表３に示す結果
を得た。

比較例３ 実施例３において、空気通気を行わないこと以外は実施
例３と同様にして行った結果、表３に示す結果を得た。

（本頁以下余白） 表　　１ 実施例１ 比較例１ クラウン形或率 ８５％ ６２％ 表３ 発根率　　平均生重／発根個体 実施例３　７６％　　　　　１９５■ 比較例３　３４％　　　　　１８０ｍｇ表２ 実施例２ 比較例２ クラウン増殖率 ４．３倍 ３．５倍 （本頁以下余白） 〔発明の効果〕 本発明の方法によれば、組織培養により、アスパラガス
属植物からクラウンを形成させ、また、これを効率的に
大量増殖することができ、さらに、得られたクラウンを
経由して植物体及び種苗を大量に効率良く増殖させるこ
とができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、アスパラガス属植物のクラウン形戊、増殖、
植物体の増殖等のプロセスを示す図、第２図は、クラウ
ン形或に使用する培養装置である。 第 １ 図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、アスパラガス属植物の組織又はカルスを支持材に含
   浸した液体培地を用い通気条件下で培養してクラウンを
   形成させることを特徴とするアスパラガス属植物のクラ
   ウン形成方法。 ２、請求項１記載の方法で形成させたクラウンを切断し
   て得た切片をさらに支持材に含浸した液体培地を用い通
   気条件下で培養してクラウンを肥大させ、さらに必要に
   応じて同様のクラウン切断→切片培養→クラウン肥大の
   増殖プロセスを繰り返すことを特徴とするアスパラガス
   属植物のクラウン増殖方法。 ３、請求項１又は請求項２記載の方法で得られたクラウ
   ンを支持材に含浸した液体培地を用い通気条件下で培養
   して植物体を生育させることを特徴とするアスパラガス
   属植物の植物体の増殖方法。 ４、植物体の生育工程に発根工程を含むことを特徴とす
   る請求項３記載のアスパラガス属植物の植物体の増殖方
   法。 ５、請求項３又は４記載の方法で得られた植物体を馴化
   せしめて種苗とすることを特徴とするアスパラガス属植
   物の種苗増殖方法。