JPH0323528B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0323528B2 JPH0323528B2 JP54143145A JP14314579A JPH0323528B2 JP H0323528 B2 JPH0323528 B2 JP H0323528B2 JP 54143145 A JP54143145 A JP 54143145A JP 14314579 A JP14314579 A JP 14314579A JP H0323528 B2 JPH0323528 B2 JP H0323528B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- heparin
- mucopolysaccharide
- titer
- fraction
- molecular weight
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/81—Protease inhibitors
- G01N2333/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
- G01N2333/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
- G01N2333/8121—Serpins
- G01N2333/8128—Antithrombin III
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2400/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving carbohydrates
- G01N2400/10—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- G01N2400/38—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence, e.g. gluco- or galactomannans, Konjac gum, Locust bean gum or Guar gum
- G01N2400/40—Glycosaminoglycans, i.e. GAG or mucopolysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate, hyaluronic acid, heparin, heparan sulfate, and related sulfated polysaccharides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
Description
本発明は、生物学的特性を備えていて、それが
ために特に血液凝固に関して調節因子の役割をつ
とめることができるムコ多糖画分に関する。かか
る画分は特に哺乳類の組織抽出物のごときヘパリ
ン製剤から得ることができる。 現状においてヘパリンは、最も重要なものでは
ないにしても、臨床医が入手できる極めて重要な
抗凝血薬の１つであることは疑う余地がない。実
際ヘパリンは、血液の凝固亢進を生じ得るような
情況で、通常生理学的な止血過程に係わつている
一連の酵素反応のいくつかの段階に関与し得る。
同時にヘパリンは、特に、種々の形態の凝固亢進
を起こしたり維持したりすることにあづかる多数
の凝固因子を抑制することができる。 以下の説明を明らかにするのに必要な範囲内
で、凝血に関する基礎的な一般概念のいくつかを
簡単に述べる。凝固過程は、実際に、互いに複雑
に関係し合つてはいるが一般に連続して起こると
説明されている次の３つの段階からなつている。 − トロンボプラスチン生成段階、すなわちプロ
トロンビナーゼ（又は活性トロンボプラスチ
ン）生成段階、 − トロンビン生成段階、すなわち、カルシウム
イオンの存在下でプロトロンビナーゼの作用に
よつてプロトロンビンがトロンビンに変換され
る段階、最後は、 − フイブリン生成段階、すなわちトロンビンの
作用により血液のフイブリノーゲンがフイブリ
ンに変換される段階 であり、この蛋白質は不溶性になる傾向がある。 プロトロンビナーゼの生成は、トロンボプラス
チン生成過程において、本質的に２つの異なる経
路によつて起る。すなわち、２つの経路とは、固
有の即ち内因的な経路と、外来の即ち外因的な経
路であつて、それぞれ血漿由来および組織由来の
プロトロンビナーゼが生成する。この２種のプロ
トロンビナーゼは共にプロトロンビンを活性なト
ロンビンに活性化し得る。 固有の即ち内因的な経路（又は系）には、次々
に活性化され得る多数の因子即ち血漿のプロ酵素
（酵素前駆体）が関与しており（XII、XI、、
および因子）、活性化された生成物（XIIａ、XI
ａ、ａ、およびａ因子）は、それぞれ、次
のプロ酵素を活性化し得る酵素として作用する。
活性化された因子（ａ）は、特に因子およ
び血小板由来のリン脂質と反応することによつ
て、活性のある内因的血漿由来プロトロンビナー
ゼの生成に関与する。 外来の即ち外因的な系は、特に組織の障害に直
接依存し得るものであるが、内因系よりも少数の
因子を必要とするもので、特に組織トロンボプラ
スチンの生成が関与している。組織トロンボプラ
スチンは因子と組んで、丁度ａ因子と同じよ
うに、不活性なＸ因子をａ因子に変換する。こ
の場合、プロトロンビンがトロンビンに活性化さ
れる過程は本質的に内因系と同じであるが、ここ
では組織由来のリン脂質が関与しており血漿由来
のものではない。 それゆえに、ある意味では、固有の経由と外来
の経路は双方とも因子の活性化のレベルで（
因子はStuart因子とも呼ばれる）一緒になるの
で、それに続く２つの凝血段階、即ちトロンビン
生成およびフイブリン生成は、最早固有経路と外
来経路との間の差違を生じないと考えることがで
きる。 凝血過程が起こると、特にこの過程の引金を引
く原因となつた、例えば血管の損傷部をふさぐた
めに不溶性のフイブリン血塊が生成することにな
る。 これらの凝血過程の後、通常、特にプラスミン
の作用のもとで、血塊の溶解を生起させるため
に、線維素溶解（線溶）と称される過程が起こ
る。プラスミンなる酵素は通常不活性な前駆体、
即ちプラスミノーゲンの形で循環血液中に存在す
るが、フイブリンは不活性なプラスミノーゲンか
らフイブリン溶解活性のあるプラスミンへの変換
を起こさせ得る因子の１つになつている。 時間的に続いて起る２つの過程として凝血と線
維素溶解の系を呈示したが、実際問題として普通
はそうなつてない。すなわち、実際には、調和の
とれた反対に作用する活性化因子と阻害因子に依
存する極めて複雑な過程に従う均衡のとれた機構
が関与しているのである。凝固亢進という意味で
これらの機構の不均衡が生じると血栓が形成され
得る。また、凝固低下という意味で平衡がやぶれ
ると患者に出血の危険が生じる。 凝血−線溶機構の平衡が乱される毎に、例えば
患者に外科手術を施した際に、この平衡を復元す
るためにヘパリンの強力な抗凝血特性に頼らざる
を得ないことが多いのは、明らかに凝固亢進の影
響を軽減するためである。しかしながら、この再
平衡の試みは極めてデリケートであつて、その結
果、凝固亢進の危険例えば、術後血栓症の出現を
防止する目的であまりに大量の抗凝血剤を投与し
たり、抗凝血剤の選択性が不完全であつたりする
と、最終的に重篤な出血の原因となりかねなない
のである。それ故に、この処理を受けた患者を常
に監視する必要があり、また、連続的にせよ不連
続にせよ、特にHowell時間のごとき総括的凝血
性についての試験結果（これは一定の時間間隔で
行なわなければならない）に照して投与量を調整
する必要がある。 それゆえに本発明の目的は、上述の因難を少な
くとも部分的に克服することができる医薬の有効
成分および医薬自体を提供することであり、特
に、患者を凝固亢進の危険にさらす外科手術のご
とき処置を受けて凝血の病理になやんでいる患者
に、凝血−線溶系を臨床的に監視する経費をより
少なくして再平衡を可能にしかつ／又はより容易
に調節することができる医薬の有効成分（および
医薬自身）を提供することである。 本発明は、さらに詳細には、凝血に関し調節剤
としての効果を発揮し、特に凝血を遅らせ、しか
もより少数の凝血因子に関し、特に活性化された
因子に関してヘパリンの作用よりもさらに選択
的な阻害作用を有するムコ多糖画分に関する。 それゆえに、本発明は、ヘパリンから得られる
ムコ多糖画分に関し、又は哺乳動物の組織から抽
出によつて得られるような分子量が特に約2000か
ら50000におよぶヘパリン様構成成分を含む画分
から得られるムコ多糖画分に関する。この画分
は、アルコール度55〜61゜GLの水性アルコール媒
質（水−エタノール）に可溶であり、それよりも
アルコール含量の高い水−エタノール媒質には次
第に溶解度が低下し、純粋なアルコールには不溶
であり、抗ａ価（イン−ウエスラ−価のこと。
以下、Yin−Wessler価とする）と総括的凝血強
度（USP価−後述−のこと。以下、USP価と記
載する）との比が少なくとも２、特に少なくとも
３に等しく、好ましくは６よりも大であることを
特徴とする。特に、本発明は、アンチトロンビン
に固定され得る分子量4000未満のヘパリン様ム
コ多糖類のみからなるかなり精製されたムコ多糖
画分にも係り、このムコ多糖画分は、アルコール
度55〜61゜GLの水性アルコール媒質（水−エタノ
ール）に可溶であるが純アルコールに不溶であ
り、少なくとも40単位／mgの抗ａ（イン−ウエ
スラー）価、および少なくとも約３の抗ａ価／
総括的凝血強度比（ただし総括的凝血強度は０で
ない）を有することを特徴とする。 これらのムコ多糖画分をさらに分画すると、
Yin−Wessler価の点で特異的な活性が高く、
Yin−Wessler価とUSP価の比が10より大きく16
にもなるムコ多糖画分の製造が可能になる。 このYin−Wessler価（抗ａ価）はJ.Lab.
Clin.Med.1973、Vol.81；298〜300に述べられて
いる本発明者らの技法で測定される。 USP価はよく知られており、所定の条件下で
総括的凝血強度を示すものであつて、米国薬局方
XI版229〜230ページに記載の方法で測定される
ことを想起されたい。（「医薬物質と投与形態」と
題する第二補遺USP−NF、62ページ、および第
四補遺90ページも参照されたい）。 本発明は、ａ因子を極めて選択的に阻害する
能力を持つ特に重要な活性成分を提供するもので
ある。この活性は、総括的凝血に関する活性と対
照をなすものであつて、本発明においては総括的
凝血活性は極めて低い水準に維持することができ
る。 このムコ多糖画分は、それゆえに、トロンビン
形成段階に近い段階、実際には上記の固有経路と
外来経路とが交差する時期以降で関与するある種
の活性化因子を優先的に阻害して、今日治療に用
いられているヘパリンによつて生ずるのと同程度
の凝固亢進の危険を防止できるにもかかわらず、
上記の選択性によつて、従来のヘパリンで生ずる
ごとき出血の危険に至ることはないという、特に
有利な抗凝血薬の活性成分を構成するのである。
実際ヘパリンは、単にａ因子のみでなく、凝血
過程の他の段階において、ａ因子の前および後
に作用する他の因子、例えばａ因子をも阻害す
る。病理学的原因又はある外部的操作、例えば外
科的手術の影響下にあつて線溶系が平衡を失う傾
向にある際、生体内における凝血−繊維素溶解系
の再平衡（平衡復元）は、いくつかの凝血因子に
対して同時・無差別に作用し得る医薬を用いる場
合よりも、むしろ、特定の因子即ち因子に作用
する、さらに特定的にはの因子を阻害できるよ
うに選択的に作用する医薬を用いた場合の方がよ
り容易に達成されると考えられる。 本発明は上記のようなムコ多糖画分を得る方法
にも関するものであつて、この方法は次の工程か
らなる。 − アルコール度が約55゜GLと約61゜GLの間で、
好ましくは58゜GL程度である水・エタノールの
ような水性アルコール媒質に、ヘパリンを主体
とする物質、又は分子量が特に2000〜50000の
範囲内にあり、かつ無機塩含有量の低い、好ま
しくは１重量％未満のヘパリン様構成成分を主
体とする物質を懸濁せしめ、 − 不溶性画分を分離し、ムコ多糖画分が溶解し
ている溶液を回収し、次いでこの溶液から、特
に上記の水性アルコール媒質によるアルコール
沈澱によつて、溶解しているムコ多糖画分を分
離する。 本発明のムコ多糖を抽出できる出発材料は、通
常の注射可能な医薬品品質のヘパリンでもよい
し、哺乳動物の組織或いは器官、特に、例えば豚
又は牛の腸粘膜又は肺からヘパリン活性成分を抽
出する操作をした後に得られるごとき粗ヘパリン
でもよい。また、勿論特異活性の低い廃棄物が尚
ヘパリン様構成成分を含んでいるならば、注射可
能な品質を有し、かつ高めの特異活性を有するヘ
パリンを得るために上記の粗ヘパリンを精製する
際通常は廃棄される画分を出発原料とすることも
できる。 次に、このような原材料（本質的に蛋白、核酸
および無機塩をほとんど含まず、好ましくは無機
塩の含有量が１重量％未満）から、55゜〜61゜GLの
アルコールによる抽出で、Yin−Wessler価と
USP価との比が約２〜約５、特に３〜５である
低分子量の構成成分を含むムコ多糖画分を得るこ
とができる。 アルコール度が61゜GLより高い水・エタノール
混合溶媒を用いると、抽出収率がほぼゼロとなる
ことに注意されたい。これに反し、アルコール度
55゜GL未満の水性アルコール媒質を用いると、構
成成分の可溶化を来し、製品にこれが入るとYin
−Wessler価とUSP価との比を低下せしめる。 注目すべきは、上述の操作によつて得たムコ多
糖画分を、所定の割合の食塩のごとき無機塩の存
在下での一定の濃度の水性アルコール媒質による
再度の選択的沈澱又はゲル過のごとき種々の技
術によつてさらに分画処理できるということであ
る。 追加の分画は、前以て水に再度溶解した各々の
ムコ多糖画分に補足的な操作過程を適用すること
によつて達成できる。この過程では、上記の水溶
液に１〜２倍容量のエタノールと10〜100g／ｌ
の食塩とを加え、一方では活性が変ることなく生
成した沈澱を集め、他方では上清液に溶けたまま
でいる含有物を特に更にアルコール沈澱法で集め
る。これによつて、Yin−Wessler価とUSP価の
比が最初の画分の比、特に約３よりも更に高く、
６〜８程度になつた分画製品を得る。 Yin−Wessler価とUSP価との比（以下、Yin
−Wessler／USP比と言う）が更に高いムコ多糖
画分は、55〜61゜GLの水性アルコール媒質による
最初の抽出で得た画分を先ずPH7.5の0.5M NaCl、
0.1Mトリス−HCl溶液などのような水性溶媒に
再溶解した後にゲル過を行つても得ることがで
きる。このような溶液を、たとえば市販名
ULTROGEL AcA44なるビーズ状のポリアクリ
ルアミドとアガロースのゲルを通過させることが
できる。このゲルの有効分画ゾーンは有効分子量
4000と60000（線状分子の場合）の間にある。 本発明の高いYin−Wessler／USP比を持つム
コ多糖画分は、直径100mm、高さ1mのカラムを用
い、分画すべきムコ多糖の濃度とカラムに載せる
溶液の容量とをそれぞれ50mg／ml、37.5mlとし、
流速200ml／時でゲル過を行なつた際に、デツ
ドボリユーム（空容積）を入れずに（このデツド
ボリユームとはゲルの入つたカラムに収容される
液の容量、特にゲル粒子の間に空隙に含まれる液
容量を言う）2.5の液が溶出した後に流出して
来る分である。最も活性の高い画分は、この時に
（2.5の後に）出て来る1.5中に含まれる。最
初に出る2.5に含まれるものは、大部分ヘパラ
ン硫酸即ちヘパリチン硫酸から成つており、分子
量が大きくて粘度が高く、しかも抗凝血活性を持
つていない。 １個のカラムから、長さが等しく断面積の異な
るもう１つのカラムへ通すには、第１カラムに入
れる液の容量にくらべて、第２カラムへ入れる液
（同濃度）の容量は両カラムの断面積の比又は直
径の二乗の比に等しい比で変える必要がある。そ
うすると、第１カラムからの流出液量との比が両
カラムの断面積の比の二乗にほぼ等しい第２カラ
ムからの流出液量中に同一の画分が得られる。 この型のゲル過は、より好ましいYin−
Wessler／USP比を持つ画分が得られるという利
点とは別に、溶液にした際に粘度の低い製品が得
られるという追加の利点も持つている。 また、この点について注目すべきは、市販ヘパ
リン又は精製ヘパリン、特に注射可能な品質のも
のであつて、尚特にかなりの割合のヘパリン硫酸
又は高分子量の類似物質を含んでいるものからア
ルコール度55〜61゜GL、好ましくは58゜GLのアル
コール溶液によつてムコ多糖画分を抽出する本発
明の方法は、それ自体また、その水溶液の粘度を
かなりの割合で低下させることを可能にする方法
も構成していることであつて、その水溶液は、こ
れらのヘパリンから作ることができ、しかもこれ
らムコ多糖画分をほとんど含有しないのである。 この粘度低下は、そのようなヘパリンを以後非
経口投与、特に皮下注射によつて抗凝血剤として
治療に用いるに当つて或種の長所となる。 Yin−Wessler／USP比が６〜８の程度の画分
から、追加分画、特にゲル過又は類似の方法に
よつて、Yin−Wessler／USP比が10以上、特に
13〜16の程度で、かつYin−Wessler価が130以
上、特に135〜160単位／mgであることを特徴とす
るムコ多糖画分を得ることができる。 上記の分子量についての表示（下記、特に実施
例についても）は、ゲルカラムを通すゲル透過実
験に於いて、試料物質の所定量を含む溶液の、同
じく所定の溶出条件における保持時間の測定値か
ら導かれたものであると理解すべきである。即
ち、これらの表示分子量の対数と上記保持時間の
測定値とは、ポリスチレン−スルホン酸ナトリウ
ム標準品、特にCHROMPACK（Orsay−les−
Ulis社、フランス）の商品名で市販されているも
のの分子量4000.6500，16000および31000の対数
と、同じゲル透過条件下で測定した場合の保持時
間との関係と同じ比例関係を持つているのであ
る。 上記の処理を受けた画分が、どの程度の精製度
に達したかは別として、生理的に受け入れられる
ナトリウムのごとき金属の塩の状態にある限りに
おいては、これら処理済画分を、ヘパリンの塩に
応用され得る何れかの方法によつて別の生理的に
受け入れられる金属（たとえばカルシウムなど）
を含む混合塩又は単純塩に変えることができる。
これはフランス特許7313580（1973年４月13日出
願、本出願人による）に述べた方法によることが
でき、有利である。この方法では、本質的に、例
えばヘパリンのナトリウム塩を原材料とし、これ
を他の生理的に受け入れられる金属の別の塩、例
えば塩化カルシウムと溶液中で接触せしめ、次い
で（例えばアルコール沈澱法又は透析によつて）
ヘパリンに結合していないその金属イオンを分離
する操作を行い、置換度が充分でない際には第一
回の接触によつて得られたヘパリンの混合塩を、
所望の最終置換度に応じた量の他の塩、特に塩化
カルシウムと溶液中で再接触せしめる。 本発明の更に好ましいムコ多糖画分は上述のい
ずれかの画分から更に得ることができ、そのよう
な画分の特徴は次のごとくである。 − 市販名ULTROGEL ACA44なるビーズ状の
ポリアクリルアミドとアガロースのゲルを充填
したカラムにおけるゲル過操作において、直
径100mm、高さ1mのカラム内に、ムコ多糖画分
の濃度50mg／mlの液を37.5ml入れて、流速200
ml／時でゲル過を行う際に、デツドボリユー
ムを含めずに2.5が流出した後に流出する
（この画分の大部分は1.5の流出液に含まれ
る）。 − 10〜100ミクロンの粒度を持つシリカを充填
したカラムにおけるゲル透過系にあつては、高
さ250mm、直径９mmのカラムに、0.02Mの
Na2SO4緩衝液にこの画分を1.3mg／mlの濃度で
溶かした溶液50μを入れて、３ml／分の流速
で流す時に5.5〜7.5分、特に6.6〜7.0分の程度
の保持時間を示す。 本発明による好ましい画分をさらに特定する
と、ひとつは、アンチトロンビンに対する特別
な親和力で特徴付けられる。この親和力は、アン
チトロンビンに固定され得る能力のことで、特
にこの画分をPH7.5の0.2M NaCl，0.05Mトリス
−HCl緩衝液中でアガロースのごとき支持体（担
体）に固定されたアンチトロンビンと接触させ
る系で示される親和性である。また上記画分はさ
らに、Yin−Wessler／USP比が少なくとも６に
等しく、かつYin−Wessler価自身が少なくとも
300単位／mgに等しいことによつても特徴付けら
れる。 本発明による好ましい画分および化合物はYin
−Wessler／USP比が18よ高く、かつYin−
Wessler価が900単位／mgより高い。 また、本発明による画分および化合物はYin−
Wessler／USP比が50より高いとさらに好まし
い。 本発明のさらに好ましい化合物はYin−
Wessler／USP比が65より高くYin−Wessler価
が、1300単位／mgより高いことを特徴とする。 本発明による画分のアンチトロンビンに対す
る特殊な親和性は、極めて高く富化された画分を
その前段の画分から製造する際に利用できる肝要
な性質であつて、ここに言う製造法では、特に、
0.2M NaCl、0.05Mトリス−HCl（PH7.5）のよう
な緩衝液中で初めの画分を、支持体（特にアガロ
ース）上に固定化されたアンチトロンビンと接
触せしめることによつて、本発明の更に富化され
た画分又は製品をアンチトロンビンに選択的に
固定させ、次いで、固定された画分を、イオン強
度がより高くて固定画分を脱着させるのに充分な
緩衝液、特に2M NaCl、0.05MトリスHCl緩衝
液で溶出せしめる。 勿論、最後に述べた富化された画分又は化合物
を得ることのできる原材料は、さきに定義した本
発明による第１の画分には限られない。すなわ
ち、それらは、特に上記の性質を持ち上記の第一
画分自身を得た粗原材料から他の何らかの適切な
やり方で得ることもできるのである。 本発明は、さらに特定的に、前段階の画分の本
質的な活性成分を構成すると思われる実質的に均
質で実質的に純粋な状態にある化合物にも関係す
る。 これらの化合物は下記に示す条件下で行れわた
核磁気共鳴スペクトル（NMR）によつて特徴付
けられる。そのNMRは図１１，１２，１４およ
び１５に示した。 重水に溶かした本発明化合物の溶液について35
℃で270MHZの電磁波によつて行なわれたプロト
ン（1H）によるNMRスペクトル（図１１および
１２）を見ると、そのスペクトルの特徴として、
約4.5ppmおよび約5.2ppmの化学シフトの共鳴信
号が約5.4ppmの化学シフトの共鳴信号よりもか
なり弱いことが観察される（この際TSP即ち２，
２，３，３−d4−３−トリメチルシリルプロピオ
ン酸ナトリウムを測定用基準物質として用いた。） 5.4，5.2および4.8ppmの化学シフトで観察され
る信は、従来のヘパリンを同一条件下にNMRで
測定した際の信号に対応するものであつて、それ
ぞれ下記に特徴的なものである。 − ヘパリンのＮ−硫酸化グルコサミン単位の１
位のアノマープロトン（信号G1）、 − ２−０−硫酸化イズロン酸単位の１位のアノ
マープロトン（信号I1）、および − ２−０−硫酸化イズロン酸単位の５位のプロ
トン（信号I5）。 従来のヘパリンにあつては、（G1），（I1）およ
び（I5）の信号はすべて同程度の大きさの強度を
持つている（図１０）。 便宜上、本発明による画分又は化合物に関して
も、（プロトンの場合も13Cの場合も）対応する化
学シフトに関連して観察された信号は（G1），
（I1）および（I5）とする。 この言い方は異なつた条件で異なつた基準物質
を用いて得られるNMRスペクトルにも使用す
る。 本発明の化合物を重水に溶解した溶液について
20MHzの電磁波で行つた炭素１３（13C）の
NMRスペクトル（図１４および１５）を見る
と、スペクトルの特徴として次のことが観察され
る（基準物質としてはテトラメチルシランTMS
を使用した）。 − 本発明のムコ多糖画分に含まれるグルコサミ
ン単位の第一級炭素（６位）にOH基がある場
合に特徴的な共鳴信号が実際上存在しないこ
と、 − 100ppmの程度の化学シフトに相当する領域
内の（I1）および（G1）信号の領域内にいくつ
か追加の信号があること、 − 60ppm領域内でＮ−硫酸の信号（G2）に近
い所に１個追加の信号があること、 − 75ppm領域内に１個の共鳴信号が存在するこ
と（従来のヘパリンについて類似の条件下で得
たNMRスペクトルでは、通常これに対応する
信号はほとんど見られない）。上記の化学シフ
トの表示は、本発明のムコ多糖画分に含まれる
Ｎ−アセチルグルコサミン残基のCH3（図のス
ペクトルの25ppm領域）に対して相対的に表わ
した。 本発明による均質な化合物は、実質的に精製さ
れた状態にあつて、いずれもUSP価、Yin−
Wessler価およびアンチトロンビンへの特異的
な親和力に関する上述の特性を有しているもので
あるが、これらは、下記の追加的特性も有する均
質なオリゴ糖によつて形成されているという特徴
もある。 − ８ないし12個、特に10個の単糖単位からな
る、 − このオリゴ糖のグルコサミン単位の全ての第
一級位は硫酸化されている、 − このオリゴ糖は２個の２−０−硫酸化イズロ
ン酸単位当りおよび２個のＮ−硫酸化グルコサ
ミン単位当り１個のＮ−アセチルグルコサミン
単位を含んでおり、その他の糖は性質を異に
し、かつ別の置換基を含んでいる。 本発明によるオリゴ糖の少なくともいくつか
は、特に十糖類に関しては、その分子量が約2000
から約3000の範囲、特に約2500である。 本発明はまた、上述の一般的性質、より特定的
には、一方ではUSP価とYin−Wessler価に関し
て、他方ではアンチトロンビンへの親和性に関
して上述の性質を持つ多糖類画分にも関する。こ
れらの画分は高めの分子量を持つが、またその構
造中に上述の構造のオリゴ糖部分を含んでもい
る。 本発明の他の特徴は、本発明の実施に関して特
に図面を参照して記載した以下の好ましい実施例
についての記述中で明らかとなるであろう。 実施例 １ 原料は力価170IU／mg（USP単位）の注射用ヘ
パリン100gであつた。 この100gのヘパリンに、58゜GLのアルコール
2500mlを添加し、15分間非常に激しく撹拌した
後、さらに15分間激しく撹拌を続け、懸濁液を
7000r.p.mで１時間遠心分離にかけ、上清2400ml
を回収した。 この上清に、80mlの飽和食塩溶液を添加し、そ
の後100゜GLのアルコール2400mlを添加した。 沈澱した生成物を回収し、アルコールで洗浄
し、乾燥した。重量は2.1gであつた。得られた生
成物の特徴は次の通りであつた。 USP価：45IU／mg 抗ａ（Yin−Wessler）価：160U／mg 従つて抗ａ／USP比は3.55であつた。 実施例 ２ 注射用ヘパリンを製造するために行う市販ヘパ
リンの精製段階で生ずるごときヘパリンの副画分
に由来する物質を原料として用いた。特に、一部
は、塩化ナトリウム10−20g／ｌ含有のヘパリン
水溶液に100゜GLのアルコール0.6−0.7倍容量を添
加して得られる上清から得たものであつた。この
沈澱した精製ヘパリンをさらに精製するために回
収した。ここで使用した原料はまた、注射用ヘパ
リンから痕跡量の無機塩を除去するために行つた
種々のヘパリン精製操作の残渣、特にアルコール
沈澱操作によつて得られたものも含んでいた。 この原料10Kgに、58゜GLのアルコールを30倍容
量（300）添加し、この懸濁液を15分間激しく
分散及び撹拌した後、強力な撹拌を更に12時間続
けた。その後、48時間放置して、溶解しなかつた
原料を沈澱せしめた。やや曇つた上清液を採り、
遠心分離により清澄化した。 この上澄液（容量280）に、飽和塩化ナトリ
ウム溶液10、次いで100゜GLのアルコールを等
容量（280）添加した。得られたムコ多糖画分
を含む沈澱を100゜GLのアルコールで洗浄後、乾
燥した。 得られたムコ多糖画分660gのYin−Wessler価
とUSP価との比は、既に２より高かつた（これ
をP194HH(A)画分と名付ける）。 上記画分660gを水13200mlに溶解して、上記画
分の追加分画を行なつた。 即ち、生成した溶液に、塩化ナトリウム264g、
次いで、100゜GLのアルコール1.5倍容量（19.8）
を添加した。沈澱物を集めて、アルコールで洗浄
した。その後乾燥して、次のような特徴を有する
P194HH(C)画分640gを得た。 USP価：31IU／mg Yin−Wessler価：100U／mg ここで得られた上澄液にも、活性ムコ多糖画分
が含まれていた（このものの回収は実施例４に記
す）。 P194HH(C)画分はまた、USPテストでもYin−
Wesslerテストでも抗凝血作用を示さないヘパリ
チン−硫酸から主としてなる分子量の大きい物質
も比較的多量に含んでいた。 このP194HH(C)画分を50mg／mlの濃度で、
0.5M NaCl，0.1M tris−HCl緩衝液（PH7.5）に
再溶解した後、この溶液150mlを、ULTOGEL
AcA44を充填した直径215mm、高さ1mのカラム
に800ml／時の流速で流してゲル過を行つた。
デツドボリユームを除いて最初の流出液10中
に、高分子量の物質が流出した。この高分子量物
質の大部分はヘパリチン−硫酸であつた。 その後の流出液６から、Yin−Wessler価が
さらに高く、Yin−Wessler／USP比が４−８の
程度のムコ多糖画分を得ることができた。 実施例 ３ 本実施例は、実施例２のP194HH(C)画分の処理
方法の変法を述べる。 前記画分を50mg／mlの割合で0.5M NaCl、
0.1M tris−HCl緩衝液（PH7.5）に再溶解した後、
直径10cm、高さ100cmのカラムで、ULTROGEL
AcA44によるゲル過を行なつた。流出速度は、
200ml／時であつた。 この流出液を各50mlずつの画分に連続して集
め、各画分のムコ多糖含量を次の如く測定した。
画分１mlに100゜GLのアルコール２mlを添加し、
２分間静置後、混合物の濁度を分光光度計を用い
て660nmで測定した（光学密度測定）。この濁度
は、試験溶液のムコ多糖含量に正比例していた。 上記流出液のデツドボリユームを除いて４回目
の１の最後の１／３容量に含まれるC10画分を
集めた。このC10画分のYin−Wessler／USP比
は50／６であつた。 実施例 ４ 実施例２の最終上澄液に100゜GLのアルコール
19.8を追加し、生成した懸濁液を24時間放置し
た。 生じた沈澱を集め、100゜GLのアルコールで洗
浄後乾燥した。下記の特徴を有するP194HH(P)画
分6gを得た。 USP価：7IU／mg Yin−Wessler価：46U／mg 実施例 ５ P194HH(P)画分を50mg／mlの濃度で、PH7.5の
0.5M tris−HCl、30g／ｌ NaCl緩衝液に再溶
解した。 上記溶液を流出速度200ml／時で、
ULTROGEL AcA44カラム（Pharmacia
K100／100：容量７；高さ100cm：直径10cm）
によるゲル過にかけた。 得られた流出図の概略を図１に示すが、この図
は、物質含有量（660nmで測定した光学的密度
OD）の変化をリツター（ｌ）で表わした流出容
量の関数として示している。 カラムのデツドボリユームに相当する容量の液
体が流出した後に画分Ｋ、Ｊ、Ｉ、Ｈ、Ｇ、Ｆ、
Ｅ、Ｄ、Ｃ、Ｂ及びＡを連続収集したが、各々の
容量は、図１の各々対応する横座標の切片の長さ
によつて示されている。 上記の各画分の分析特性を次の表に示す。
ために特に血液凝固に関して調節因子の役割をつ
とめることができるムコ多糖画分に関する。かか
る画分は特に哺乳類の組織抽出物のごときヘパリ
ン製剤から得ることができる。 現状においてヘパリンは、最も重要なものでは
ないにしても、臨床医が入手できる極めて重要な
抗凝血薬の１つであることは疑う余地がない。実
際ヘパリンは、血液の凝固亢進を生じ得るような
情況で、通常生理学的な止血過程に係わつている
一連の酵素反応のいくつかの段階に関与し得る。
同時にヘパリンは、特に、種々の形態の凝固亢進
を起こしたり維持したりすることにあづかる多数
の凝固因子を抑制することができる。 以下の説明を明らかにするのに必要な範囲内
で、凝血に関する基礎的な一般概念のいくつかを
簡単に述べる。凝固過程は、実際に、互いに複雑
に関係し合つてはいるが一般に連続して起こると
説明されている次の３つの段階からなつている。 − トロンボプラスチン生成段階、すなわちプロ
トロンビナーゼ（又は活性トロンボプラスチ
ン）生成段階、 − トロンビン生成段階、すなわち、カルシウム
イオンの存在下でプロトロンビナーゼの作用に
よつてプロトロンビンがトロンビンに変換され
る段階、最後は、 − フイブリン生成段階、すなわちトロンビンの
作用により血液のフイブリノーゲンがフイブリ
ンに変換される段階 であり、この蛋白質は不溶性になる傾向がある。 プロトロンビナーゼの生成は、トロンボプラス
チン生成過程において、本質的に２つの異なる経
路によつて起る。すなわち、２つの経路とは、固
有の即ち内因的な経路と、外来の即ち外因的な経
路であつて、それぞれ血漿由来および組織由来の
プロトロンビナーゼが生成する。この２種のプロ
トロンビナーゼは共にプロトロンビンを活性なト
ロンビンに活性化し得る。 固有の即ち内因的な経路（又は系）には、次々
に活性化され得る多数の因子即ち血漿のプロ酵素
（酵素前駆体）が関与しており（XII、XI、、
および因子）、活性化された生成物（XIIａ、XI
ａ、ａ、およびａ因子）は、それぞれ、次
のプロ酵素を活性化し得る酵素として作用する。
活性化された因子（ａ）は、特に因子およ
び血小板由来のリン脂質と反応することによつ
て、活性のある内因的血漿由来プロトロンビナー
ゼの生成に関与する。 外来の即ち外因的な系は、特に組織の障害に直
接依存し得るものであるが、内因系よりも少数の
因子を必要とするもので、特に組織トロンボプラ
スチンの生成が関与している。組織トロンボプラ
スチンは因子と組んで、丁度ａ因子と同じよ
うに、不活性なＸ因子をａ因子に変換する。こ
の場合、プロトロンビンがトロンビンに活性化さ
れる過程は本質的に内因系と同じであるが、ここ
では組織由来のリン脂質が関与しており血漿由来
のものではない。 それゆえに、ある意味では、固有の経由と外来
の経路は双方とも因子の活性化のレベルで（
因子はStuart因子とも呼ばれる）一緒になるの
で、それに続く２つの凝血段階、即ちトロンビン
生成およびフイブリン生成は、最早固有経路と外
来経路との間の差違を生じないと考えることがで
きる。 凝血過程が起こると、特にこの過程の引金を引
く原因となつた、例えば血管の損傷部をふさぐた
めに不溶性のフイブリン血塊が生成することにな
る。 これらの凝血過程の後、通常、特にプラスミン
の作用のもとで、血塊の溶解を生起させるため
に、線維素溶解（線溶）と称される過程が起こ
る。プラスミンなる酵素は通常不活性な前駆体、
即ちプラスミノーゲンの形で循環血液中に存在す
るが、フイブリンは不活性なプラスミノーゲンか
らフイブリン溶解活性のあるプラスミンへの変換
を起こさせ得る因子の１つになつている。 時間的に続いて起る２つの過程として凝血と線
維素溶解の系を呈示したが、実際問題として普通
はそうなつてない。すなわち、実際には、調和の
とれた反対に作用する活性化因子と阻害因子に依
存する極めて複雑な過程に従う均衡のとれた機構
が関与しているのである。凝固亢進という意味で
これらの機構の不均衡が生じると血栓が形成され
得る。また、凝固低下という意味で平衡がやぶれ
ると患者に出血の危険が生じる。 凝血−線溶機構の平衡が乱される毎に、例えば
患者に外科手術を施した際に、この平衡を復元す
るためにヘパリンの強力な抗凝血特性に頼らざる
を得ないことが多いのは、明らかに凝固亢進の影
響を軽減するためである。しかしながら、この再
平衡の試みは極めてデリケートであつて、その結
果、凝固亢進の危険例えば、術後血栓症の出現を
防止する目的であまりに大量の抗凝血剤を投与し
たり、抗凝血剤の選択性が不完全であつたりする
と、最終的に重篤な出血の原因となりかねなない
のである。それ故に、この処理を受けた患者を常
に監視する必要があり、また、連続的にせよ不連
続にせよ、特にHowell時間のごとき総括的凝血
性についての試験結果（これは一定の時間間隔で
行なわなければならない）に照して投与量を調整
する必要がある。 それゆえに本発明の目的は、上述の因難を少な
くとも部分的に克服することができる医薬の有効
成分および医薬自体を提供することであり、特
に、患者を凝固亢進の危険にさらす外科手術のご
とき処置を受けて凝血の病理になやんでいる患者
に、凝血−線溶系を臨床的に監視する経費をより
少なくして再平衡を可能にしかつ／又はより容易
に調節することができる医薬の有効成分（および
医薬自身）を提供することである。 本発明は、さらに詳細には、凝血に関し調節剤
としての効果を発揮し、特に凝血を遅らせ、しか
もより少数の凝血因子に関し、特に活性化された
因子に関してヘパリンの作用よりもさらに選択
的な阻害作用を有するムコ多糖画分に関する。 それゆえに、本発明は、ヘパリンから得られる
ムコ多糖画分に関し、又は哺乳動物の組織から抽
出によつて得られるような分子量が特に約2000か
ら50000におよぶヘパリン様構成成分を含む画分
から得られるムコ多糖画分に関する。この画分
は、アルコール度55〜61゜GLの水性アルコール媒
質（水−エタノール）に可溶であり、それよりも
アルコール含量の高い水−エタノール媒質には次
第に溶解度が低下し、純粋なアルコールには不溶
であり、抗ａ価（イン−ウエスラ−価のこと。
以下、Yin−Wessler価とする）と総括的凝血強
度（USP価−後述−のこと。以下、USP価と記
載する）との比が少なくとも２、特に少なくとも
３に等しく、好ましくは６よりも大であることを
特徴とする。特に、本発明は、アンチトロンビン
に固定され得る分子量4000未満のヘパリン様ム
コ多糖類のみからなるかなり精製されたムコ多糖
画分にも係り、このムコ多糖画分は、アルコール
度55〜61゜GLの水性アルコール媒質（水−エタノ
ール）に可溶であるが純アルコールに不溶であ
り、少なくとも40単位／mgの抗ａ（イン−ウエ
スラー）価、および少なくとも約３の抗ａ価／
総括的凝血強度比（ただし総括的凝血強度は０で
ない）を有することを特徴とする。 これらのムコ多糖画分をさらに分画すると、
Yin−Wessler価の点で特異的な活性が高く、
Yin−Wessler価とUSP価の比が10より大きく16
にもなるムコ多糖画分の製造が可能になる。 このYin−Wessler価（抗ａ価）はJ.Lab.
Clin.Med.1973、Vol.81；298〜300に述べられて
いる本発明者らの技法で測定される。 USP価はよく知られており、所定の条件下で
総括的凝血強度を示すものであつて、米国薬局方
XI版229〜230ページに記載の方法で測定される
ことを想起されたい。（「医薬物質と投与形態」と
題する第二補遺USP−NF、62ページ、および第
四補遺90ページも参照されたい）。 本発明は、ａ因子を極めて選択的に阻害する
能力を持つ特に重要な活性成分を提供するもので
ある。この活性は、総括的凝血に関する活性と対
照をなすものであつて、本発明においては総括的
凝血活性は極めて低い水準に維持することができ
る。 このムコ多糖画分は、それゆえに、トロンビン
形成段階に近い段階、実際には上記の固有経路と
外来経路とが交差する時期以降で関与するある種
の活性化因子を優先的に阻害して、今日治療に用
いられているヘパリンによつて生ずるのと同程度
の凝固亢進の危険を防止できるにもかかわらず、
上記の選択性によつて、従来のヘパリンで生ずる
ごとき出血の危険に至ることはないという、特に
有利な抗凝血薬の活性成分を構成するのである。
実際ヘパリンは、単にａ因子のみでなく、凝血
過程の他の段階において、ａ因子の前および後
に作用する他の因子、例えばａ因子をも阻害す
る。病理学的原因又はある外部的操作、例えば外
科的手術の影響下にあつて線溶系が平衡を失う傾
向にある際、生体内における凝血−繊維素溶解系
の再平衡（平衡復元）は、いくつかの凝血因子に
対して同時・無差別に作用し得る医薬を用いる場
合よりも、むしろ、特定の因子即ち因子に作用
する、さらに特定的にはの因子を阻害できるよ
うに選択的に作用する医薬を用いた場合の方がよ
り容易に達成されると考えられる。 本発明は上記のようなムコ多糖画分を得る方法
にも関するものであつて、この方法は次の工程か
らなる。 − アルコール度が約55゜GLと約61゜GLの間で、
好ましくは58゜GL程度である水・エタノールの
ような水性アルコール媒質に、ヘパリンを主体
とする物質、又は分子量が特に2000〜50000の
範囲内にあり、かつ無機塩含有量の低い、好ま
しくは１重量％未満のヘパリン様構成成分を主
体とする物質を懸濁せしめ、 − 不溶性画分を分離し、ムコ多糖画分が溶解し
ている溶液を回収し、次いでこの溶液から、特
に上記の水性アルコール媒質によるアルコール
沈澱によつて、溶解しているムコ多糖画分を分
離する。 本発明のムコ多糖を抽出できる出発材料は、通
常の注射可能な医薬品品質のヘパリンでもよい
し、哺乳動物の組織或いは器官、特に、例えば豚
又は牛の腸粘膜又は肺からヘパリン活性成分を抽
出する操作をした後に得られるごとき粗ヘパリン
でもよい。また、勿論特異活性の低い廃棄物が尚
ヘパリン様構成成分を含んでいるならば、注射可
能な品質を有し、かつ高めの特異活性を有するヘ
パリンを得るために上記の粗ヘパリンを精製する
際通常は廃棄される画分を出発原料とすることも
できる。 次に、このような原材料（本質的に蛋白、核酸
および無機塩をほとんど含まず、好ましくは無機
塩の含有量が１重量％未満）から、55゜〜61゜GLの
アルコールによる抽出で、Yin−Wessler価と
USP価との比が約２〜約５、特に３〜５である
低分子量の構成成分を含むムコ多糖画分を得るこ
とができる。 アルコール度が61゜GLより高い水・エタノール
混合溶媒を用いると、抽出収率がほぼゼロとなる
ことに注意されたい。これに反し、アルコール度
55゜GL未満の水性アルコール媒質を用いると、構
成成分の可溶化を来し、製品にこれが入るとYin
−Wessler価とUSP価との比を低下せしめる。 注目すべきは、上述の操作によつて得たムコ多
糖画分を、所定の割合の食塩のごとき無機塩の存
在下での一定の濃度の水性アルコール媒質による
再度の選択的沈澱又はゲル過のごとき種々の技
術によつてさらに分画処理できるということであ
る。 追加の分画は、前以て水に再度溶解した各々の
ムコ多糖画分に補足的な操作過程を適用すること
によつて達成できる。この過程では、上記の水溶
液に１〜２倍容量のエタノールと10〜100g／ｌ
の食塩とを加え、一方では活性が変ることなく生
成した沈澱を集め、他方では上清液に溶けたまま
でいる含有物を特に更にアルコール沈澱法で集め
る。これによつて、Yin−Wessler価とUSP価の
比が最初の画分の比、特に約３よりも更に高く、
６〜８程度になつた分画製品を得る。 Yin−Wessler価とUSP価との比（以下、Yin
−Wessler／USP比と言う）が更に高いムコ多糖
画分は、55〜61゜GLの水性アルコール媒質による
最初の抽出で得た画分を先ずPH7.5の0.5M NaCl、
0.1Mトリス−HCl溶液などのような水性溶媒に
再溶解した後にゲル過を行つても得ることがで
きる。このような溶液を、たとえば市販名
ULTROGEL AcA44なるビーズ状のポリアクリ
ルアミドとアガロースのゲルを通過させることが
できる。このゲルの有効分画ゾーンは有効分子量
4000と60000（線状分子の場合）の間にある。 本発明の高いYin−Wessler／USP比を持つム
コ多糖画分は、直径100mm、高さ1mのカラムを用
い、分画すべきムコ多糖の濃度とカラムに載せる
溶液の容量とをそれぞれ50mg／ml、37.5mlとし、
流速200ml／時でゲル過を行なつた際に、デツ
ドボリユーム（空容積）を入れずに（このデツド
ボリユームとはゲルの入つたカラムに収容される
液の容量、特にゲル粒子の間に空隙に含まれる液
容量を言う）2.5の液が溶出した後に流出して
来る分である。最も活性の高い画分は、この時に
（2.5の後に）出て来る1.5中に含まれる。最
初に出る2.5に含まれるものは、大部分ヘパラ
ン硫酸即ちヘパリチン硫酸から成つており、分子
量が大きくて粘度が高く、しかも抗凝血活性を持
つていない。 １個のカラムから、長さが等しく断面積の異な
るもう１つのカラムへ通すには、第１カラムに入
れる液の容量にくらべて、第２カラムへ入れる液
（同濃度）の容量は両カラムの断面積の比又は直
径の二乗の比に等しい比で変える必要がある。そ
うすると、第１カラムからの流出液量との比が両
カラムの断面積の比の二乗にほぼ等しい第２カラ
ムからの流出液量中に同一の画分が得られる。 この型のゲル過は、より好ましいYin−
Wessler／USP比を持つ画分が得られるという利
点とは別に、溶液にした際に粘度の低い製品が得
られるという追加の利点も持つている。 また、この点について注目すべきは、市販ヘパ
リン又は精製ヘパリン、特に注射可能な品質のも
のであつて、尚特にかなりの割合のヘパリン硫酸
又は高分子量の類似物質を含んでいるものからア
ルコール度55〜61゜GL、好ましくは58゜GLのアル
コール溶液によつてムコ多糖画分を抽出する本発
明の方法は、それ自体また、その水溶液の粘度を
かなりの割合で低下させることを可能にする方法
も構成していることであつて、その水溶液は、こ
れらのヘパリンから作ることができ、しかもこれ
らムコ多糖画分をほとんど含有しないのである。 この粘度低下は、そのようなヘパリンを以後非
経口投与、特に皮下注射によつて抗凝血剤として
治療に用いるに当つて或種の長所となる。 Yin−Wessler／USP比が６〜８の程度の画分
から、追加分画、特にゲル過又は類似の方法に
よつて、Yin−Wessler／USP比が10以上、特に
13〜16の程度で、かつYin−Wessler価が130以
上、特に135〜160単位／mgであることを特徴とす
るムコ多糖画分を得ることができる。 上記の分子量についての表示（下記、特に実施
例についても）は、ゲルカラムを通すゲル透過実
験に於いて、試料物質の所定量を含む溶液の、同
じく所定の溶出条件における保持時間の測定値か
ら導かれたものであると理解すべきである。即
ち、これらの表示分子量の対数と上記保持時間の
測定値とは、ポリスチレン−スルホン酸ナトリウ
ム標準品、特にCHROMPACK（Orsay−les−
Ulis社、フランス）の商品名で市販されているも
のの分子量4000.6500，16000および31000の対数
と、同じゲル透過条件下で測定した場合の保持時
間との関係と同じ比例関係を持つているのであ
る。 上記の処理を受けた画分が、どの程度の精製度
に達したかは別として、生理的に受け入れられる
ナトリウムのごとき金属の塩の状態にある限りに
おいては、これら処理済画分を、ヘパリンの塩に
応用され得る何れかの方法によつて別の生理的に
受け入れられる金属（たとえばカルシウムなど）
を含む混合塩又は単純塩に変えることができる。
これはフランス特許7313580（1973年４月13日出
願、本出願人による）に述べた方法によることが
でき、有利である。この方法では、本質的に、例
えばヘパリンのナトリウム塩を原材料とし、これ
を他の生理的に受け入れられる金属の別の塩、例
えば塩化カルシウムと溶液中で接触せしめ、次い
で（例えばアルコール沈澱法又は透析によつて）
ヘパリンに結合していないその金属イオンを分離
する操作を行い、置換度が充分でない際には第一
回の接触によつて得られたヘパリンの混合塩を、
所望の最終置換度に応じた量の他の塩、特に塩化
カルシウムと溶液中で再接触せしめる。 本発明の更に好ましいムコ多糖画分は上述のい
ずれかの画分から更に得ることができ、そのよう
な画分の特徴は次のごとくである。 − 市販名ULTROGEL ACA44なるビーズ状の
ポリアクリルアミドとアガロースのゲルを充填
したカラムにおけるゲル過操作において、直
径100mm、高さ1mのカラム内に、ムコ多糖画分
の濃度50mg／mlの液を37.5ml入れて、流速200
ml／時でゲル過を行う際に、デツドボリユー
ムを含めずに2.5が流出した後に流出する
（この画分の大部分は1.5の流出液に含まれ
る）。 − 10〜100ミクロンの粒度を持つシリカを充填
したカラムにおけるゲル透過系にあつては、高
さ250mm、直径９mmのカラムに、0.02Mの
Na2SO4緩衝液にこの画分を1.3mg／mlの濃度で
溶かした溶液50μを入れて、３ml／分の流速
で流す時に5.5〜7.5分、特に6.6〜7.0分の程度
の保持時間を示す。 本発明による好ましい画分をさらに特定する
と、ひとつは、アンチトロンビンに対する特別
な親和力で特徴付けられる。この親和力は、アン
チトロンビンに固定され得る能力のことで、特
にこの画分をPH7.5の0.2M NaCl，0.05Mトリス
−HCl緩衝液中でアガロースのごとき支持体（担
体）に固定されたアンチトロンビンと接触させ
る系で示される親和性である。また上記画分はさ
らに、Yin−Wessler／USP比が少なくとも６に
等しく、かつYin−Wessler価自身が少なくとも
300単位／mgに等しいことによつても特徴付けら
れる。 本発明による好ましい画分および化合物はYin
−Wessler／USP比が18よ高く、かつYin−
Wessler価が900単位／mgより高い。 また、本発明による画分および化合物はYin−
Wessler／USP比が50より高いとさらに好まし
い。 本発明のさらに好ましい化合物はYin−
Wessler／USP比が65より高くYin−Wessler価
が、1300単位／mgより高いことを特徴とする。 本発明による画分のアンチトロンビンに対す
る特殊な親和性は、極めて高く富化された画分を
その前段の画分から製造する際に利用できる肝要
な性質であつて、ここに言う製造法では、特に、
0.2M NaCl、0.05Mトリス−HCl（PH7.5）のよう
な緩衝液中で初めの画分を、支持体（特にアガロ
ース）上に固定化されたアンチトロンビンと接
触せしめることによつて、本発明の更に富化され
た画分又は製品をアンチトロンビンに選択的に
固定させ、次いで、固定された画分を、イオン強
度がより高くて固定画分を脱着させるのに充分な
緩衝液、特に2M NaCl、0.05MトリスHCl緩衝
液で溶出せしめる。 勿論、最後に述べた富化された画分又は化合物
を得ることのできる原材料は、さきに定義した本
発明による第１の画分には限られない。すなわ
ち、それらは、特に上記の性質を持ち上記の第一
画分自身を得た粗原材料から他の何らかの適切な
やり方で得ることもできるのである。 本発明は、さらに特定的に、前段階の画分の本
質的な活性成分を構成すると思われる実質的に均
質で実質的に純粋な状態にある化合物にも関係す
る。 これらの化合物は下記に示す条件下で行れわた
核磁気共鳴スペクトル（NMR）によつて特徴付
けられる。そのNMRは図１１，１２，１４およ
び１５に示した。 重水に溶かした本発明化合物の溶液について35
℃で270MHZの電磁波によつて行なわれたプロト
ン（1H）によるNMRスペクトル（図１１および
１２）を見ると、そのスペクトルの特徴として、
約4.5ppmおよび約5.2ppmの化学シフトの共鳴信
号が約5.4ppmの化学シフトの共鳴信号よりもか
なり弱いことが観察される（この際TSP即ち２，
２，３，３−d4−３−トリメチルシリルプロピオ
ン酸ナトリウムを測定用基準物質として用いた。） 5.4，5.2および4.8ppmの化学シフトで観察され
る信は、従来のヘパリンを同一条件下にNMRで
測定した際の信号に対応するものであつて、それ
ぞれ下記に特徴的なものである。 − ヘパリンのＮ−硫酸化グルコサミン単位の１
位のアノマープロトン（信号G1）、 − ２−０−硫酸化イズロン酸単位の１位のアノ
マープロトン（信号I1）、および − ２−０−硫酸化イズロン酸単位の５位のプロ
トン（信号I5）。 従来のヘパリンにあつては、（G1），（I1）およ
び（I5）の信号はすべて同程度の大きさの強度を
持つている（図１０）。 便宜上、本発明による画分又は化合物に関して
も、（プロトンの場合も13Cの場合も）対応する化
学シフトに関連して観察された信号は（G1），
（I1）および（I5）とする。 この言い方は異なつた条件で異なつた基準物質
を用いて得られるNMRスペクトルにも使用す
る。 本発明の化合物を重水に溶解した溶液について
20MHzの電磁波で行つた炭素１３（13C）の
NMRスペクトル（図１４および１５）を見る
と、スペクトルの特徴として次のことが観察され
る（基準物質としてはテトラメチルシランTMS
を使用した）。 − 本発明のムコ多糖画分に含まれるグルコサミ
ン単位の第一級炭素（６位）にOH基がある場
合に特徴的な共鳴信号が実際上存在しないこ
と、 − 100ppmの程度の化学シフトに相当する領域
内の（I1）および（G1）信号の領域内にいくつ
か追加の信号があること、 − 60ppm領域内でＮ−硫酸の信号（G2）に近
い所に１個追加の信号があること、 − 75ppm領域内に１個の共鳴信号が存在するこ
と（従来のヘパリンについて類似の条件下で得
たNMRスペクトルでは、通常これに対応する
信号はほとんど見られない）。上記の化学シフ
トの表示は、本発明のムコ多糖画分に含まれる
Ｎ−アセチルグルコサミン残基のCH3（図のス
ペクトルの25ppm領域）に対して相対的に表わ
した。 本発明による均質な化合物は、実質的に精製さ
れた状態にあつて、いずれもUSP価、Yin−
Wessler価およびアンチトロンビンへの特異的
な親和力に関する上述の特性を有しているもので
あるが、これらは、下記の追加的特性も有する均
質なオリゴ糖によつて形成されているという特徴
もある。 − ８ないし12個、特に10個の単糖単位からな
る、 − このオリゴ糖のグルコサミン単位の全ての第
一級位は硫酸化されている、 − このオリゴ糖は２個の２−０−硫酸化イズロ
ン酸単位当りおよび２個のＮ−硫酸化グルコサ
ミン単位当り１個のＮ−アセチルグルコサミン
単位を含んでおり、その他の糖は性質を異に
し、かつ別の置換基を含んでいる。 本発明によるオリゴ糖の少なくともいくつか
は、特に十糖類に関しては、その分子量が約2000
から約3000の範囲、特に約2500である。 本発明はまた、上述の一般的性質、より特定的
には、一方ではUSP価とYin−Wessler価に関し
て、他方ではアンチトロンビンへの親和性に関
して上述の性質を持つ多糖類画分にも関する。こ
れらの画分は高めの分子量を持つが、またその構
造中に上述の構造のオリゴ糖部分を含んでもい
る。 本発明の他の特徴は、本発明の実施に関して特
に図面を参照して記載した以下の好ましい実施例
についての記述中で明らかとなるであろう。 実施例 １ 原料は力価170IU／mg（USP単位）の注射用ヘ
パリン100gであつた。 この100gのヘパリンに、58゜GLのアルコール
2500mlを添加し、15分間非常に激しく撹拌した
後、さらに15分間激しく撹拌を続け、懸濁液を
7000r.p.mで１時間遠心分離にかけ、上清2400ml
を回収した。 この上清に、80mlの飽和食塩溶液を添加し、そ
の後100゜GLのアルコール2400mlを添加した。 沈澱した生成物を回収し、アルコールで洗浄
し、乾燥した。重量は2.1gであつた。得られた生
成物の特徴は次の通りであつた。 USP価：45IU／mg 抗ａ（Yin−Wessler）価：160U／mg 従つて抗ａ／USP比は3.55であつた。 実施例 ２ 注射用ヘパリンを製造するために行う市販ヘパ
リンの精製段階で生ずるごときヘパリンの副画分
に由来する物質を原料として用いた。特に、一部
は、塩化ナトリウム10−20g／ｌ含有のヘパリン
水溶液に100゜GLのアルコール0.6−0.7倍容量を添
加して得られる上清から得たものであつた。この
沈澱した精製ヘパリンをさらに精製するために回
収した。ここで使用した原料はまた、注射用ヘパ
リンから痕跡量の無機塩を除去するために行つた
種々のヘパリン精製操作の残渣、特にアルコール
沈澱操作によつて得られたものも含んでいた。 この原料10Kgに、58゜GLのアルコールを30倍容
量（300）添加し、この懸濁液を15分間激しく
分散及び撹拌した後、強力な撹拌を更に12時間続
けた。その後、48時間放置して、溶解しなかつた
原料を沈澱せしめた。やや曇つた上清液を採り、
遠心分離により清澄化した。 この上澄液（容量280）に、飽和塩化ナトリ
ウム溶液10、次いで100゜GLのアルコールを等
容量（280）添加した。得られたムコ多糖画分
を含む沈澱を100゜GLのアルコールで洗浄後、乾
燥した。 得られたムコ多糖画分660gのYin−Wessler価
とUSP価との比は、既に２より高かつた（これ
をP194HH(A)画分と名付ける）。 上記画分660gを水13200mlに溶解して、上記画
分の追加分画を行なつた。 即ち、生成した溶液に、塩化ナトリウム264g、
次いで、100゜GLのアルコール1.5倍容量（19.8）
を添加した。沈澱物を集めて、アルコールで洗浄
した。その後乾燥して、次のような特徴を有する
P194HH(C)画分640gを得た。 USP価：31IU／mg Yin−Wessler価：100U／mg ここで得られた上澄液にも、活性ムコ多糖画分
が含まれていた（このものの回収は実施例４に記
す）。 P194HH(C)画分はまた、USPテストでもYin−
Wesslerテストでも抗凝血作用を示さないヘパリ
チン−硫酸から主としてなる分子量の大きい物質
も比較的多量に含んでいた。 このP194HH(C)画分を50mg／mlの濃度で、
0.5M NaCl，0.1M tris−HCl緩衝液（PH7.5）に
再溶解した後、この溶液150mlを、ULTOGEL
AcA44を充填した直径215mm、高さ1mのカラム
に800ml／時の流速で流してゲル過を行つた。
デツドボリユームを除いて最初の流出液10中
に、高分子量の物質が流出した。この高分子量物
質の大部分はヘパリチン−硫酸であつた。 その後の流出液６から、Yin−Wessler価が
さらに高く、Yin−Wessler／USP比が４−８の
程度のムコ多糖画分を得ることができた。 実施例 ３ 本実施例は、実施例２のP194HH(C)画分の処理
方法の変法を述べる。 前記画分を50mg／mlの割合で0.5M NaCl、
0.1M tris−HCl緩衝液（PH7.5）に再溶解した後、
直径10cm、高さ100cmのカラムで、ULTROGEL
AcA44によるゲル過を行なつた。流出速度は、
200ml／時であつた。 この流出液を各50mlずつの画分に連続して集
め、各画分のムコ多糖含量を次の如く測定した。
画分１mlに100゜GLのアルコール２mlを添加し、
２分間静置後、混合物の濁度を分光光度計を用い
て660nmで測定した（光学密度測定）。この濁度
は、試験溶液のムコ多糖含量に正比例していた。 上記流出液のデツドボリユームを除いて４回目
の１の最後の１／３容量に含まれるC10画分を
集めた。このC10画分のYin−Wessler／USP比
は50／６であつた。 実施例 ４ 実施例２の最終上澄液に100゜GLのアルコール
19.8を追加し、生成した懸濁液を24時間放置し
た。 生じた沈澱を集め、100゜GLのアルコールで洗
浄後乾燥した。下記の特徴を有するP194HH(P)画
分6gを得た。 USP価：7IU／mg Yin−Wessler価：46U／mg 実施例 ５ P194HH(P)画分を50mg／mlの濃度で、PH7.5の
0.5M tris−HCl、30g／ｌ NaCl緩衝液に再溶
解した。 上記溶液を流出速度200ml／時で、
ULTROGEL AcA44カラム（Pharmacia
K100／100：容量７；高さ100cm：直径10cm）
によるゲル過にかけた。 得られた流出図の概略を図１に示すが、この図
は、物質含有量（660nmで測定した光学的密度
OD）の変化をリツター（ｌ）で表わした流出容
量の関数として示している。 カラムのデツドボリユームに相当する容量の液
体が流出した後に画分Ｋ、Ｊ、Ｉ、Ｈ、Ｇ、Ｆ、
Ｅ、Ｄ、Ｃ、Ｂ及びＡを連続収集したが、各々の
容量は、図１の各々対応する横座標の切片の長さ
によつて示されている。 上記の各画分の分析特性を次の表に示す。
【表】
各画分は、４つのタイプに分類できることが観
察される。 ａ） 画分Ａ、Ｂ及びＣ。これらの流出容量は、
上記処理方法では、本質的に、第４番目に流出
した１に対応し（図１参照）、そのUSP価は
10未満でYin−Wessler価は80未満であつた。
分子量はせいぜい4000の程度であつた。 ｂ） 画分Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ及びＨ。これらの
USP価は10程度以下であり、Yin−Wessler価
は非常に高く、135〜161単位であつた。これら
の画分は、また最も好ましいYin−Wessler／
USP比を持ち、即ち１３−１６であり、本質
的に第３番目に流出した１中に含まれてい
た。これらの画分の分子量は、4000〜10000の
程度であり、特に4000〜8000であつた。 ｃ） 画分Ｉ及びＪ。これらの画分のYin−
Wessler／USP比は、好ましくない値に近く、
下記のＫ画分が恐らく混入していたのであろ
う。 ｄ） 画分Ｋ。この画分には、本質的に、抗凝血
作用を持たないヘパリン硫酸が含まれていた。 表には、ゲル透過法で測定した保持時間によ
つて評価した各画分の分子量を示した。この分子
量の計算には、対照物質として分子量既知のポリ
スチレン−スルホネートを用いた。画分Ｆの特徴
は、保持時間6.6分に対応する主ピークと、保持
時間6.1分に対応するシヨルダーとを持つことで
あつて、これから、使用した対照系で分子量が
7200位に位置する成分の存在することが証明され
る。 この測定では、粒度10〜100ミクロンのシリカ、
特に市販名LICHROPHOSPHERで販売されて
いるシリカを充填したカラム（250×９mm）を用
い、SPECTRAPHYSICS 3500クロマトグラフ
によつてゲル透過実験を行なつた。ムコ多糖1.3
mg／mlの濃度で、上記画分を0.02M Na2SO4緩衝
液に溶解した溶液を用い（カラムに最初に入れた
容量：50μl）、流速を３ml／分とした。物質の検
出は、紫外線分光計（200nm）で行つた。
察される。 ａ） 画分Ａ、Ｂ及びＣ。これらの流出容量は、
上記処理方法では、本質的に、第４番目に流出
した１に対応し（図１参照）、そのUSP価は
10未満でYin−Wessler価は80未満であつた。
分子量はせいぜい4000の程度であつた。 ｂ） 画分Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ及びＨ。これらの
USP価は10程度以下であり、Yin−Wessler価
は非常に高く、135〜161単位であつた。これら
の画分は、また最も好ましいYin−Wessler／
USP比を持ち、即ち１３−１６であり、本質
的に第３番目に流出した１中に含まれてい
た。これらの画分の分子量は、4000〜10000の
程度であり、特に4000〜8000であつた。 ｃ） 画分Ｉ及びＪ。これらの画分のYin−
Wessler／USP比は、好ましくない値に近く、
下記のＫ画分が恐らく混入していたのであろ
う。 ｄ） 画分Ｋ。この画分には、本質的に、抗凝血
作用を持たないヘパリン硫酸が含まれていた。 表には、ゲル透過法で測定した保持時間によ
つて評価した各画分の分子量を示した。この分子
量の計算には、対照物質として分子量既知のポリ
スチレン−スルホネートを用いた。画分Ｆの特徴
は、保持時間6.6分に対応する主ピークと、保持
時間6.1分に対応するシヨルダーとを持つことで
あつて、これから、使用した対照系で分子量が
7200位に位置する成分の存在することが証明され
る。 この測定では、粒度10〜100ミクロンのシリカ、
特に市販名LICHROPHOSPHERで販売されて
いるシリカを充填したカラム（250×９mm）を用
い、SPECTRAPHYSICS 3500クロマトグラフ
によつてゲル透過実験を行なつた。ムコ多糖1.3
mg／mlの濃度で、上記画分を0.02M Na2SO4緩衝
液に溶解した溶液を用い（カラムに最初に入れた
容量：50μl）、流速を３ml／分とした。物質の検
出は、紫外線分光計（200nm）で行つた。
【表】
実施例 ６
原材料：
使用した原材料は、動物組織（特に牛の腸粘膜
或いは豚の肺）からの抽出物の如き粗ヘパリンか
ら、注射用に供するヘパリンのカルシウム塩を製
造する際に生ずる副産物からなるものであつた。
この原材料（252Kg）は次のような特徴を有して
いた。 USP価：82IU／mg Yin−Wessler価：100U／mg その後、下記の処理を行つた。 58゜GLのアルコールによる抽出： 原材料252Kgを、58゜GLアルコール6000lに、激
しく撹拌しつつ分散させた。 不溶性の相を傾瀉ならびに遠心分離で分離し
た。可溶性画分を、NaCl及び100゜GLのアルコー
ルを添加して回収した。 得られた画分は、次の通りであつた。 不溶性画分：230Kg。製造段階に再循環。 可溶性画分：20.6Kg（USP価＝21IU／mg。 Yin−Wessler価＝90U／mg。 可溶性画分からの低分子量画分の抽出 58゜GLのアルコールに可溶の前記画分を水512
（20倍容量）に溶解しNaCl10.24Kgを添加後、
100゜GLのアルコール1.5倍容量、即ち768を添加
した。沈澱した画分を集めてアルコールで脱水
し、乾燥した。 重 量 ：19Kg USP 価 ：22IU／mg Yin−Wessler価：89U／mg この画分は別に貯蔵しておき、後に精製して注
射用カルシウム塩とした。 上記の沈澱操作後の上澄液1.5容量に、アルコ
ール1.5容量、即ち768を追加した。沈澱した画
分を集め、アルコールで脱水し、乾燥した。 重 量 ：700g USP 価 ：6IU／mg Yin−Wessler価：40U／mg 本画分700gは、低分子量のムコ多糖、殆ど硫
酸化していない高分子量のムコ多糖及び多かれ少
なかれ分解を起こしている核酸の混合物であつ
た。 低分子量画分からの核酸除去 次の方法に従つて塩化マンガンで沈澱させるこ
とにより核酸の大部分を除去した。 即ち、700gの画分を７の水に溶解た後、撹
拌しながら10％MnCl21lを添加した。精製した沈
澱（RNA及びDNAの不溶性マンガン塩から成
る）の大部分を遠心分離で除去した。ムコ多糖は
透明な上澄液からアルコール沈澱法で回収した。 重 量 ：480g USP 価 ：8IU／mg Yin−Wessler価：54U／mg 極めて低分子量の画分のゲル過による単離 極めて低分子量の画分を、ULTROGEL
AcA44によるゲル過で分離した。 直径200mm、高さ1mのカラムで、25gの画分が
処理可能であつた。 流出図は、図８に示した型のものであつた。 次のような特徴を有する３種の画分（番号(1)−
(3)）を収集した（最初は全部で25g）。 (1) 重 量：16g、USP価：12IU／mg， Yin−Wessler価：30U／mg， (2) 重 量 ：7g，USP価：6.5IU／mg， Yin−Wessler価：70U／mg， (3) 重 量 ：2g，USP価：2.1IU／mg， Yin−Wessler価：60U／mg。 不溶化アンチトロンビンを用いたクロマトグラ
フイ− アガロースに担持・固定されたアンチトロンビ
ンを用いて前記画分(3)のクロマトグラフイーを
行つた。 現在使用される100mlのカラムで、画分(3)700mg
が処理可能であつた。 吸着は0.2M NaCl，0.05M tris−HCl緩衝液
（PH7.5）によつて行い、2M NaCl，0.05M tris
−HCl緩衝液で溶出を行つた。 固定されなかつた部分（600−650mg）のUSP
価はほぼ１〜2IU／mg、Yin−Wessler価は10−
20U／mgであり、固定された部分（10−30mg）の
USP価は10−20IU／mg、Yin−Wessler価は1000
−1400U／mgであつた。 実施例 ７ 上記実施例５の画分Ａ，Ｂ及びＣをあわせて単
一画分にプールし、アガロース−アンチトロンビ
ンカラムを用い、実施例６に規定した条件下で
選択的固定による追加分画を行なつた。 固定された画分を溶出してP194HPAと称する
画分を得た。この画分のYin−Wessler価は
310U／mg、USP価は40IU／mgであつた。 同様の方法で、上記実施例５の画分Ｅ及びＦを
プールして、アガロース−アンチトロンビンカ
ラムを用い、再び上記の固定−溶出法によつて最
も活性の高い画分の分離を行つた。最終的に、
Yin−Wessler価900U／mg及びUSP価82IU／mgを
有するP194HHPF画分を得た。 上記画分P194HHPA及びP194HHPFについて
プトン（1H）のNMR分析を行つた。従来のヘパ
リン（7021HH）についても同様にNMR分析を
行つた。 即ち、上記の画分又はヘパリンの各々を14〜62
mg／0.35mlの濃度で前以つて重水に溶解し、フー
リエ変換系を備え、累積スペクトルを貯蔵できる
BRUKER装置（270MHz）を用いて分析を行つ
た。化学シフトは前記のごとくTSPを基準物質
として測定した。 図１０は、従来のヘパリンで得たNMRスペク
トルの代表的なものである。図１１及び図１２
は、同じくそれぞれ画分P194HHPF及び
P194HHPAのNMRスペクトルの代表的なもの
である。 これらのNMRスペクトルを比較すると、本発
明による画分の信号（I1）及び（I5）が、信号
（G1）に比して弱いことがはつきりとしている。
これらI1，I5，G1の信号は、ヘパリンの標準スペ
クトルでは実質的に同一強度であつた。 実施例 ８ 実施例６及び実施例７に記載した方法を他の原
材料に応用して同様に次の画分を得た。 P219HH ：USP価＝14IU／mg， Yin−Wessler価＝
1350U／mg， P225HH ：USP価＝17IU／mg， Yin−Wessler価＝1320U／
mg， P231HH ：USP価＝16.2IU／mg， Yin−Wessler価＝1400U／
mg， P194HHA ：USP価＝82IU／mg， Yin−Wessler価＝900U／
mg， P242HHA ：USP価＝16IU／mg， Yin−Wessler価＝
1800U／mg， P255HHA ：USP価＝36IU／mg， Yin−Wessler価＝
2145U／mg／ P242HHA画分を炭素１３（13C）のNMR分析
にかけた（図１４及び図１５）。標準物質（比較
用）として従来のヘパリン7071HHも同様に
NMR分析を行つた（図１３）。分析は各画分
（100mg／mlD2Oの濃度で重水に溶解した溶液）に
ついて、20HHzのVARIAN CFT−20の装置
（フーリエ変換系装備）で行つた（化学シフトの
測定の基準としてTMSを用いた。） 観測結果は下記の通りである。 (イ) 第１級炭素原子（本発明のムコ多糖画分に含
まれるグルコサミン単位の６位）のOH基の存
在を特徴づける共鳴信号が、実際上存在しない
こと。 (ロ) 100ppm程度の化学シフトに対応する領域中
の（I1）及び（G1）信号領域に補足的な信号が
いくつかあること（標準ヘパリンのNMRスペ
クトルでは見られない）。 (ハ) （G2）信号の近傍の60ppm領域中に１個の
補足的信号があること。 (ニ) 75ppm領域中に１個の共鳴信号が存在するこ
と（通常、市販のヘパリンを同一条件下で測定
したNMRスペクトルには対応する共鳴信号が
ない）。 上記に示した化学シフトは、本発明によるムコ
多糖に含まれるＮ−アセチルグルコサミン残基の
CH3（図１４及び図１５のスペクトルの25ppm領
域）に関して相対的に評価した。 本発明による画分或いは化合物に特有の信号に
は図１４及び図１５で星印（＊）を付けてある。 図１５には積分曲線（CI）をも示すが、これ
によつて下記の所見が得られた。 (イ) 調べた化合物は均質であり、従つて実質的に
純粋な物質であつた。 (ロ) 上記化合物は、＋糖類の特性を有する。 (ハ) 上記化合物は２単位の２−０−硫酸化イズロ
ン酸及び２単位のＮ−硫酸化グルコサミン当
り、１個のＮ−アセチルグルコサミン単位を含
む。 したがつて、本発明により、抗ａ活性が高
く、かつ、凝血過程の特徴である一連の継続的酵
素反応の中でａ因子に対して著しい選択性を有
するムコ多糖画分を製造することが可能になる。 この顕著な活性と選択性は、以下の薬理テスト
の結果からも例証される。この薬理テストは、ナ
トリウム塩の形態であつた実施例２のP194HHC
画分を上述の方法によつてカルシウム塩の形態に
変換して得られたP188CH画分について行なつた
ものである。 上記の結果は、図２〜７の曲線で示す。これら
の図はすべて、一方では本発明のムコ多糖画分、
他方では従来のヘパリン（170USP単位／mg）に
ついて抗凝血作用を比較して示すものである。 図２〜５の曲線は、従来のヘパリンの用量増加
によつてヒトの血漿中で誘発されたin Vitroの凝
血時間の変動と、P188CH画分による同様な変動
とを表わす（図４と５に対応するテストは、血小
板を含まず、したがつてXI因子の欠乏した血漿に
ついて行なつた）。 図６及び図７は、家兎を用いてin vivoで行な
つた実験結果を比較したものであり、図６では
P188CH画分を、図７では標準のヘパリンを用い
た（結果は、１群５匹の家兎の平均である）。各
動物には体重１Kg当り500Yin−Wessler単位の試
験組成物を投与した。 まず、図２はトロンビンの、図３はセフアリン
−カオリンの、図４は濃縮トロンボプラスチンの
存在下での凝血の、そして図５は希釈トロンボプ
ラスチンの存在下での凝血の、それぞれの時間変
化を秒で示す。これらの変化は、それぞれ研究対
照とした製剤により誘導されたものであり、本発
明のムコ多糖画分の場合を曲線a1，a2，a3および
a4に、及び標準ヘパリンの場合を曲線b1，b2，b3
およびb4に、それぞれの投与量（すべてUSP単
位／mlで表わす）の関数として示してある。 トロンビン時間及びセフアリン−カオリン時間
は共に、むしろ活性化された因子に対する阻害
および総括的凝血におよぼす製剤の作用を反映す
る測定値である。この点で、図２及び図３の曲線
は、本発明によるムコ多糖画分が、プロトロンビ
ンの不活化の阻害及び総括的凝血レベルの点で標
準のヘパリンに比して明らかに弱い効果を示すこ
とを明瞭に示している。逆に、図４及び図５は、
外因性凝血の特徴である一連の酵素反応（特に、
ａ因子が相対的に少ない場合）の方により直接
的に関連している現象を表わすものであつて、こ
れらの図は本発明のムコ多糖画分が標準のヘパリ
ンに対して顕著に優れていることを示している。
すなわち、この条件下でムコ多糖画分は血液サン
プルの凝血をよりゆつくり生起するのである。 図６には、本発明のムコ多糖画分500Yin−
Wessler単位を投与した家兎でみられた活性の変
動を、時間Ｈ（時間）の関数として示してある。
これら画分の活性を評価すべく、Yin−Wessler
価（YW5曲線）及びセフアリン−カオリン価
（CKT5曲線）（IU／ml血漿）の変化を時間Ｈ（時
間）の関数として表した。 標準のヘパリンについても同様の実験を行なつ
た。対応する活性の変動を、図７のYW6及び
CKT6曲線で示した。 図６から、本発明のムコ多糖500Yin−Wessler
単位を投与すると、CKT単位で表した総括的凝
血作用は比較的低レベルに留まつたままなのに比
べて、顕著な抗ａ活性を生じたことがわかる。
例えば、２時間後にはYin−Wessler活性は
0.85U／mlであるのに対し、CKT活性はわずか
0.15IU／mlであることに注意されたい。対照的に
標準のヘパリン500Yin−Wessler単位／mlでは、
CKT価で表わされるある効果が誘導され、この
効果はYin−Wessler価で測定可能な抗ａ活性
に比して明らかに大である。特に、２時間後に
は、抗ａ活性が、0.55U／mlであるのに対し、
総括的抗凝血活性（CKT）は0.38IU／mlである
ことに注意されたい。このように、CKT価と
Yin−Wessler価の差は、本発明のムコ多糖の場
合よりもはるかに少なかつた。即ち、CKT価に
対するYin−Wessler価の比は、標準のヘパリン
の場合の２未満から本発明のムコ多糖画分の場合
には５より大きい値になるのである。 このように、in vitro及びin Vivoの両方のテ
ストで、本発明のムコ多糖画分は、標準のヘパリ
ンに比して、特にａ因子の阻害の点で明確に高
い選択的作用を有するのである。 本発明によるムコ多糖画分は無毒である。本発
明によるムコ多糖画分のいずれを10000U（Yin−
Wessler価）／Kgで投与しても、家兎にはなんら
の毒性反応も起きなかつたし、また、家兎にフラ
ンス薬局方による発熱試験を行つても発熱効果は
全く認められなかつた。 従つて本発明は、より特定的には、前記のよう
な、特にその活性が少なくとも４０、好ましくは
少なくとも５０、更に好ましくは少なくとも
100U／（Yin−Wessler価）／mgにもなるムコ多
糖画分に関するもので、活性が300より高く、特
に900U（Yin−Wessler価）／mgより高い画分が
さらに望ましい。 本発明はまた、同様の活性を有し、発熱物質を
含むことなく、かつ医薬的な賦形剤と組み合わさ
つた医薬製剤にも関する。本発明は、特に、血液
凝固調節用として治療上有用な、上記画分の注射
可能な濃縮された滅菌溶液に関する。この溶液
は、皮下注射に用いる場合にはムコ多糖画分を、
1000〜100000単位（Yin−Wessler）ml／、特に
5000〜50000単位／ml、例えば25000単位／mlで含
有し、又は静脈注射又は潅流に用いる場合には例
えば500〜10000単位／ml、例えば5000単位／mlを
含有する。 本発明のムコ多糖画分は、ナトリウムおよび／
又はカルシウムの如き、少なくとも一個の生理学
的に許容されうる金属の塩の形態をなしていると
有利である。これらの医薬製剤は、適時使用可能
で１回限りの注射剤とするのが望ましい。 本発明の組成物は、ヒトまたは動物の血液凝固
の調節（予防上又は治療上）に特に適している。
特に、凝固亢進の危険のある患者の場合に適して
おり、更に、例えば、（外科手術、アテローム性
経過、腫瘍の増殖、細菌或いは酵素活性因子によ
る凝血機構の障害等において）組織トロンボプラ
チンの如きトロンボプラスチンが放出される結果
として前記の外因相の撹乱が生じて凝固亢進を呈
する恐れのある場合に適している。 以下に１例として人に使用可能な薬量について
記載するが、これは本発明を例示するためだけの
ものであつて本発明の保護範囲を限定する意味は
全くない。例えば、患者の凝固亢進の危険の程度
或いは血栓状態に応じて、１日２−３回に分けて
1000−25000Uを皮下注射するか、或いは、１日
容量1000−25000Uを一定間隔で非連続に静注す
るか、或いは、１日量1000−25000Uを連続的に
潅流するか、また或いは、1000−25000Uを（１
週間に３回）筋肉内注射する（ＵはYin−
Wessler単位）。投与量は、前以つて行なつた血
液分析結果、患者の疾患の程度及び一般的に患者
の健康状態に応じて、患者毎に増減させるのは勿
論である。 本発明は、本発明によるムコ多糖を特に、ａ
因子の阻害レベルで他の物質の抗凝血作用を研究
するための比較用の基準物質として実験室で使用
可能な生物学的試薬の構成に応用することにも関
する。 自明なことであり、かつ既に前述からわかるご
とく、本発明はより特別にこれまで見て来たよう
な応用および具体例には決して制限されるもので
はない。それとは逆にあらゆる変形が包含され、
特に上記で定義した水性アルコール系抽出用媒質
は、水とエタノール以外の１種のアルコール、例
えば脂肪族アルコール又は芳香族アルコール、好
ましくは炭素原子１〜６個を含む第一級アルコー
ルの如き環式又は非環式飽和脂肪族アルコールと
の混合物で構成されてもよいし、その際、勿論で
あるが、その媒質の水／アルコールの割合は、
各々の場合について簡単な通常の操作によつて、
55〜61゜GLの水−エタノール混合物で得られるム
コ多糖画分と等価なムコ多糖画分の抽出が行える
ように定めるべきである。
或いは豚の肺）からの抽出物の如き粗ヘパリンか
ら、注射用に供するヘパリンのカルシウム塩を製
造する際に生ずる副産物からなるものであつた。
この原材料（252Kg）は次のような特徴を有して
いた。 USP価：82IU／mg Yin−Wessler価：100U／mg その後、下記の処理を行つた。 58゜GLのアルコールによる抽出： 原材料252Kgを、58゜GLアルコール6000lに、激
しく撹拌しつつ分散させた。 不溶性の相を傾瀉ならびに遠心分離で分離し
た。可溶性画分を、NaCl及び100゜GLのアルコー
ルを添加して回収した。 得られた画分は、次の通りであつた。 不溶性画分：230Kg。製造段階に再循環。 可溶性画分：20.6Kg（USP価＝21IU／mg。 Yin−Wessler価＝90U／mg。 可溶性画分からの低分子量画分の抽出 58゜GLのアルコールに可溶の前記画分を水512
（20倍容量）に溶解しNaCl10.24Kgを添加後、
100゜GLのアルコール1.5倍容量、即ち768を添加
した。沈澱した画分を集めてアルコールで脱水
し、乾燥した。 重 量 ：19Kg USP 価 ：22IU／mg Yin−Wessler価：89U／mg この画分は別に貯蔵しておき、後に精製して注
射用カルシウム塩とした。 上記の沈澱操作後の上澄液1.5容量に、アルコ
ール1.5容量、即ち768を追加した。沈澱した画
分を集め、アルコールで脱水し、乾燥した。 重 量 ：700g USP 価 ：6IU／mg Yin−Wessler価：40U／mg 本画分700gは、低分子量のムコ多糖、殆ど硫
酸化していない高分子量のムコ多糖及び多かれ少
なかれ分解を起こしている核酸の混合物であつ
た。 低分子量画分からの核酸除去 次の方法に従つて塩化マンガンで沈澱させるこ
とにより核酸の大部分を除去した。 即ち、700gの画分を７の水に溶解た後、撹
拌しながら10％MnCl21lを添加した。精製した沈
澱（RNA及びDNAの不溶性マンガン塩から成
る）の大部分を遠心分離で除去した。ムコ多糖は
透明な上澄液からアルコール沈澱法で回収した。 重 量 ：480g USP 価 ：8IU／mg Yin−Wessler価：54U／mg 極めて低分子量の画分のゲル過による単離 極めて低分子量の画分を、ULTROGEL
AcA44によるゲル過で分離した。 直径200mm、高さ1mのカラムで、25gの画分が
処理可能であつた。 流出図は、図８に示した型のものであつた。 次のような特徴を有する３種の画分（番号(1)−
(3)）を収集した（最初は全部で25g）。 (1) 重 量：16g、USP価：12IU／mg， Yin−Wessler価：30U／mg， (2) 重 量 ：7g，USP価：6.5IU／mg， Yin−Wessler価：70U／mg， (3) 重 量 ：2g，USP価：2.1IU／mg， Yin−Wessler価：60U／mg。 不溶化アンチトロンビンを用いたクロマトグラ
フイ− アガロースに担持・固定されたアンチトロンビ
ンを用いて前記画分(3)のクロマトグラフイーを
行つた。 現在使用される100mlのカラムで、画分(3)700mg
が処理可能であつた。 吸着は0.2M NaCl，0.05M tris−HCl緩衝液
（PH7.5）によつて行い、2M NaCl，0.05M tris
−HCl緩衝液で溶出を行つた。 固定されなかつた部分（600−650mg）のUSP
価はほぼ１〜2IU／mg、Yin−Wessler価は10−
20U／mgであり、固定された部分（10−30mg）の
USP価は10−20IU／mg、Yin−Wessler価は1000
−1400U／mgであつた。 実施例 ７ 上記実施例５の画分Ａ，Ｂ及びＣをあわせて単
一画分にプールし、アガロース−アンチトロンビ
ンカラムを用い、実施例６に規定した条件下で
選択的固定による追加分画を行なつた。 固定された画分を溶出してP194HPAと称する
画分を得た。この画分のYin−Wessler価は
310U／mg、USP価は40IU／mgであつた。 同様の方法で、上記実施例５の画分Ｅ及びＦを
プールして、アガロース−アンチトロンビンカ
ラムを用い、再び上記の固定−溶出法によつて最
も活性の高い画分の分離を行つた。最終的に、
Yin−Wessler価900U／mg及びUSP価82IU／mgを
有するP194HHPF画分を得た。 上記画分P194HHPA及びP194HHPFについて
プトン（1H）のNMR分析を行つた。従来のヘパ
リン（7021HH）についても同様にNMR分析を
行つた。 即ち、上記の画分又はヘパリンの各々を14〜62
mg／0.35mlの濃度で前以つて重水に溶解し、フー
リエ変換系を備え、累積スペクトルを貯蔵できる
BRUKER装置（270MHz）を用いて分析を行つ
た。化学シフトは前記のごとくTSPを基準物質
として測定した。 図１０は、従来のヘパリンで得たNMRスペク
トルの代表的なものである。図１１及び図１２
は、同じくそれぞれ画分P194HHPF及び
P194HHPAのNMRスペクトルの代表的なもの
である。 これらのNMRスペクトルを比較すると、本発
明による画分の信号（I1）及び（I5）が、信号
（G1）に比して弱いことがはつきりとしている。
これらI1，I5，G1の信号は、ヘパリンの標準スペ
クトルでは実質的に同一強度であつた。 実施例 ８ 実施例６及び実施例７に記載した方法を他の原
材料に応用して同様に次の画分を得た。 P219HH ：USP価＝14IU／mg， Yin−Wessler価＝
1350U／mg， P225HH ：USP価＝17IU／mg， Yin−Wessler価＝1320U／
mg， P231HH ：USP価＝16.2IU／mg， Yin−Wessler価＝1400U／
mg， P194HHA ：USP価＝82IU／mg， Yin−Wessler価＝900U／
mg， P242HHA ：USP価＝16IU／mg， Yin−Wessler価＝
1800U／mg， P255HHA ：USP価＝36IU／mg， Yin−Wessler価＝
2145U／mg／ P242HHA画分を炭素１３（13C）のNMR分析
にかけた（図１４及び図１５）。標準物質（比較
用）として従来のヘパリン7071HHも同様に
NMR分析を行つた（図１３）。分析は各画分
（100mg／mlD2Oの濃度で重水に溶解した溶液）に
ついて、20HHzのVARIAN CFT−20の装置
（フーリエ変換系装備）で行つた（化学シフトの
測定の基準としてTMSを用いた。） 観測結果は下記の通りである。 (イ) 第１級炭素原子（本発明のムコ多糖画分に含
まれるグルコサミン単位の６位）のOH基の存
在を特徴づける共鳴信号が、実際上存在しない
こと。 (ロ) 100ppm程度の化学シフトに対応する領域中
の（I1）及び（G1）信号領域に補足的な信号が
いくつかあること（標準ヘパリンのNMRスペ
クトルでは見られない）。 (ハ) （G2）信号の近傍の60ppm領域中に１個の
補足的信号があること。 (ニ) 75ppm領域中に１個の共鳴信号が存在するこ
と（通常、市販のヘパリンを同一条件下で測定
したNMRスペクトルには対応する共鳴信号が
ない）。 上記に示した化学シフトは、本発明によるムコ
多糖に含まれるＮ−アセチルグルコサミン残基の
CH3（図１４及び図１５のスペクトルの25ppm領
域）に関して相対的に評価した。 本発明による画分或いは化合物に特有の信号に
は図１４及び図１５で星印（＊）を付けてある。 図１５には積分曲線（CI）をも示すが、これ
によつて下記の所見が得られた。 (イ) 調べた化合物は均質であり、従つて実質的に
純粋な物質であつた。 (ロ) 上記化合物は、＋糖類の特性を有する。 (ハ) 上記化合物は２単位の２−０−硫酸化イズロ
ン酸及び２単位のＮ−硫酸化グルコサミン当
り、１個のＮ−アセチルグルコサミン単位を含
む。 したがつて、本発明により、抗ａ活性が高
く、かつ、凝血過程の特徴である一連の継続的酵
素反応の中でａ因子に対して著しい選択性を有
するムコ多糖画分を製造することが可能になる。 この顕著な活性と選択性は、以下の薬理テスト
の結果からも例証される。この薬理テストは、ナ
トリウム塩の形態であつた実施例２のP194HHC
画分を上述の方法によつてカルシウム塩の形態に
変換して得られたP188CH画分について行なつた
ものである。 上記の結果は、図２〜７の曲線で示す。これら
の図はすべて、一方では本発明のムコ多糖画分、
他方では従来のヘパリン（170USP単位／mg）に
ついて抗凝血作用を比較して示すものである。 図２〜５の曲線は、従来のヘパリンの用量増加
によつてヒトの血漿中で誘発されたin Vitroの凝
血時間の変動と、P188CH画分による同様な変動
とを表わす（図４と５に対応するテストは、血小
板を含まず、したがつてXI因子の欠乏した血漿に
ついて行なつた）。 図６及び図７は、家兎を用いてin vivoで行な
つた実験結果を比較したものであり、図６では
P188CH画分を、図７では標準のヘパリンを用い
た（結果は、１群５匹の家兎の平均である）。各
動物には体重１Kg当り500Yin−Wessler単位の試
験組成物を投与した。 まず、図２はトロンビンの、図３はセフアリン
−カオリンの、図４は濃縮トロンボプラスチンの
存在下での凝血の、そして図５は希釈トロンボプ
ラスチンの存在下での凝血の、それぞれの時間変
化を秒で示す。これらの変化は、それぞれ研究対
照とした製剤により誘導されたものであり、本発
明のムコ多糖画分の場合を曲線a1，a2，a3および
a4に、及び標準ヘパリンの場合を曲線b1，b2，b3
およびb4に、それぞれの投与量（すべてUSP単
位／mlで表わす）の関数として示してある。 トロンビン時間及びセフアリン−カオリン時間
は共に、むしろ活性化された因子に対する阻害
および総括的凝血におよぼす製剤の作用を反映す
る測定値である。この点で、図２及び図３の曲線
は、本発明によるムコ多糖画分が、プロトロンビ
ンの不活化の阻害及び総括的凝血レベルの点で標
準のヘパリンに比して明らかに弱い効果を示すこ
とを明瞭に示している。逆に、図４及び図５は、
外因性凝血の特徴である一連の酵素反応（特に、
ａ因子が相対的に少ない場合）の方により直接
的に関連している現象を表わすものであつて、こ
れらの図は本発明のムコ多糖画分が標準のヘパリ
ンに対して顕著に優れていることを示している。
すなわち、この条件下でムコ多糖画分は血液サン
プルの凝血をよりゆつくり生起するのである。 図６には、本発明のムコ多糖画分500Yin−
Wessler単位を投与した家兎でみられた活性の変
動を、時間Ｈ（時間）の関数として示してある。
これら画分の活性を評価すべく、Yin−Wessler
価（YW5曲線）及びセフアリン−カオリン価
（CKT5曲線）（IU／ml血漿）の変化を時間Ｈ（時
間）の関数として表した。 標準のヘパリンについても同様の実験を行なつ
た。対応する活性の変動を、図７のYW6及び
CKT6曲線で示した。 図６から、本発明のムコ多糖500Yin−Wessler
単位を投与すると、CKT単位で表した総括的凝
血作用は比較的低レベルに留まつたままなのに比
べて、顕著な抗ａ活性を生じたことがわかる。
例えば、２時間後にはYin−Wessler活性は
0.85U／mlであるのに対し、CKT活性はわずか
0.15IU／mlであることに注意されたい。対照的に
標準のヘパリン500Yin−Wessler単位／mlでは、
CKT価で表わされるある効果が誘導され、この
効果はYin−Wessler価で測定可能な抗ａ活性
に比して明らかに大である。特に、２時間後に
は、抗ａ活性が、0.55U／mlであるのに対し、
総括的抗凝血活性（CKT）は0.38IU／mlである
ことに注意されたい。このように、CKT価と
Yin−Wessler価の差は、本発明のムコ多糖の場
合よりもはるかに少なかつた。即ち、CKT価に
対するYin−Wessler価の比は、標準のヘパリン
の場合の２未満から本発明のムコ多糖画分の場合
には５より大きい値になるのである。 このように、in vitro及びin Vivoの両方のテ
ストで、本発明のムコ多糖画分は、標準のヘパリ
ンに比して、特にａ因子の阻害の点で明確に高
い選択的作用を有するのである。 本発明によるムコ多糖画分は無毒である。本発
明によるムコ多糖画分のいずれを10000U（Yin−
Wessler価）／Kgで投与しても、家兎にはなんら
の毒性反応も起きなかつたし、また、家兎にフラ
ンス薬局方による発熱試験を行つても発熱効果は
全く認められなかつた。 従つて本発明は、より特定的には、前記のよう
な、特にその活性が少なくとも４０、好ましくは
少なくとも５０、更に好ましくは少なくとも
100U／（Yin−Wessler価）／mgにもなるムコ多
糖画分に関するもので、活性が300より高く、特
に900U（Yin−Wessler価）／mgより高い画分が
さらに望ましい。 本発明はまた、同様の活性を有し、発熱物質を
含むことなく、かつ医薬的な賦形剤と組み合わさ
つた医薬製剤にも関する。本発明は、特に、血液
凝固調節用として治療上有用な、上記画分の注射
可能な濃縮された滅菌溶液に関する。この溶液
は、皮下注射に用いる場合にはムコ多糖画分を、
1000〜100000単位（Yin−Wessler）ml／、特に
5000〜50000単位／ml、例えば25000単位／mlで含
有し、又は静脈注射又は潅流に用いる場合には例
えば500〜10000単位／ml、例えば5000単位／mlを
含有する。 本発明のムコ多糖画分は、ナトリウムおよび／
又はカルシウムの如き、少なくとも一個の生理学
的に許容されうる金属の塩の形態をなしていると
有利である。これらの医薬製剤は、適時使用可能
で１回限りの注射剤とするのが望ましい。 本発明の組成物は、ヒトまたは動物の血液凝固
の調節（予防上又は治療上）に特に適している。
特に、凝固亢進の危険のある患者の場合に適して
おり、更に、例えば、（外科手術、アテローム性
経過、腫瘍の増殖、細菌或いは酵素活性因子によ
る凝血機構の障害等において）組織トロンボプラ
チンの如きトロンボプラスチンが放出される結果
として前記の外因相の撹乱が生じて凝固亢進を呈
する恐れのある場合に適している。 以下に１例として人に使用可能な薬量について
記載するが、これは本発明を例示するためだけの
ものであつて本発明の保護範囲を限定する意味は
全くない。例えば、患者の凝固亢進の危険の程度
或いは血栓状態に応じて、１日２−３回に分けて
1000−25000Uを皮下注射するか、或いは、１日
容量1000−25000Uを一定間隔で非連続に静注す
るか、或いは、１日量1000−25000Uを連続的に
潅流するか、また或いは、1000−25000Uを（１
週間に３回）筋肉内注射する（ＵはYin−
Wessler単位）。投与量は、前以つて行なつた血
液分析結果、患者の疾患の程度及び一般的に患者
の健康状態に応じて、患者毎に増減させるのは勿
論である。 本発明は、本発明によるムコ多糖を特に、ａ
因子の阻害レベルで他の物質の抗凝血作用を研究
するための比較用の基準物質として実験室で使用
可能な生物学的試薬の構成に応用することにも関
する。 自明なことであり、かつ既に前述からわかるご
とく、本発明はより特別にこれまで見て来たよう
な応用および具体例には決して制限されるもので
はない。それとは逆にあらゆる変形が包含され、
特に上記で定義した水性アルコール系抽出用媒質
は、水とエタノール以外の１種のアルコール、例
えば脂肪族アルコール又は芳香族アルコール、好
ましくは炭素原子１〜６個を含む第一級アルコー
ルの如き環式又は非環式飽和脂肪族アルコールと
の混合物で構成されてもよいし、その際、勿論で
あるが、その媒質の水／アルコールの割合は、
各々の場合について簡単な通常の操作によつて、
55〜61゜GLの水−エタノール混合物で得られるム
コ多糖画分と等価なムコ多糖画分の抽出が行える
ように定めるべきである。
図１は、本発明による好ましいムコ多糖画分の
特徴的な溶出曲線を示す。図２〜７は、本発明に
よるムコ多糖画分（USP価で表わす）と、高い
抗凝血能を持つ従来のヘパリン（USP価で表わ
す）の生物学的性質を比較したものである。図８
は、他の成分も含んでいる画分から、本発明方法
によつて本発明画分を選択的に分離する操作を実
施する際の本発明画分の概略溶出線図を示す。図
９は、本発明によるもう１つの好ましいムコ多糖
画分の特徴的な溶出曲線の代表的なものである。
図１０は、従来のヘパリンの1HによるNMRスペ
クトルである。図１１と１２、は本発明による
別々の画分の1HによるNMRスペクトルである。
図１３は、比較として用いた従来のヘパリンの炭
素１３によるNMRスペクトルである。図１４
は、本発明による画分の炭素１３によるNMRス
ペクトルである。図１５は、図１４のNMRスペ
クトルの部分拡大図である。
特徴的な溶出曲線を示す。図２〜７は、本発明に
よるムコ多糖画分（USP価で表わす）と、高い
抗凝血能を持つ従来のヘパリン（USP価で表わ
す）の生物学的性質を比較したものである。図８
は、他の成分も含んでいる画分から、本発明方法
によつて本発明画分を選択的に分離する操作を実
施する際の本発明画分の概略溶出線図を示す。図
９は、本発明によるもう１つの好ましいムコ多糖
画分の特徴的な溶出曲線の代表的なものである。
図１０は、従来のヘパリンの1HによるNMRスペ
クトルである。図１１と１２、は本発明による
別々の画分の1HによるNMRスペクトルである。
図１３は、比較として用いた従来のヘパリンの炭
素１３によるNMRスペクトルである。図１４
は、本発明による画分の炭素１３によるNMRス
ペクトルである。図１５は、図１４のNMRスペ
クトルの部分拡大図である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 分子量10000未満のヘパリン様ムコ多糖類か
らなる血液凝固の制御能を持つムコ多糖組成物で
あつて、アルコール度55〜61゜GLの水性アルコー
ル媒質（水−エタノール）に可溶であるが純アル
コール（エタノール）に不溶であり、分子量4000
未満のヘパリン様ムコ多糖成分と分子量4000〜
10000の範囲のヘパリン様ムコ多糖成分とを含ん
でおり、抗Xa（イン−ウエスラー）価が少なくと
も40単位／mgでありかつ抗Xa（イン−ウエスラ
ー）価／総括的凝血強度（USP価）比が少なく
とも２である（ただし総括的凝血強度（USP価）
は０でない）ことを特徴とするムコ多糖組成物。 ２ 抗Xa（イン−ウエスラ−）価が少なくとも
100単位／mgであることを特徴とする特許請求の
範囲第１項に記載の組成物。 ３ 抗Xa（イン−ウエスラ−）価が少なくとも
130単位／mgであることを特徴とする特許請求の
範囲第２項に記載の組成物。 ４ 抗Xa（イン−ウエスラ−）価／総括的凝血強
度（USP価）比が３〜５であることを特徴とす
る特許請求の範囲第１項から第３項のいずれかに
記載の組成物。 ５ 抗Xa（イン−ウエスラ−）価／総括的凝血強
度（USP価）比が４〜８であることを特徴とす
る特許請求の範囲第１項から第３項のいずれかに
記載の組成物。 ６ 前記ヘパリン様ムコ多糖類の分子量が、2000
〜8000の範囲であることを特徴とする特許請求の
範囲第１項から第５項のいずれかに記載の組成
物。 ７ アルコール度約58゜GLの水性アルコール媒質
（水−エタノール）に可溶であることを特徴とす
る特許請求の範囲第１項から第６項のいずれかに
記載の組成物。 ８ 分子量4000未満のヘパリン様ムコ多糖成分の
総括的凝血強度（UPS価）が、分子量4000以上
のヘパリン様ムコ多糖成分の総括的凝血強度
（USP価）より小さいことを特徴とする特許請求
の範囲第１項から第７項のいずれかに記載の組成
物。 ９ 分子量4000未満のヘパリン様ムコ多糖成分が
分子量2600，2900および3300の構成成分を含むこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１項から第８項
のいずれかに記載の組成物。 １０ ヘパリン様ムコ多糖類が薬理学的に許容さ
れ得る塩の形態であることを特徴とする特許請求
の範囲第１項に記載の組成物。 １１ 塩がナトリウム塩であることを特徴とする
特許請求の範囲第１０項に記載の組成物。 １２ ヘパリン様ムコ多糖類が、前記ナトリウム
塩を変換して得られた薬理学的に許容され得る混
合塩または単純塩の形態であることを特徴とする
特許請求の範囲第１１項に記載の組成物。 １３ 分子量4000未満のヘパリン様ムコ多糖成分
と分子量4000〜10000の範囲のヘパリン様ムコ多
糖成分とを含んでおり、抗Xa（イン−ウエスラ
−）価が40単位／mg以上であり、かつ抗Xa（イン
−ウエスラ−）価／総括的凝血強度（USP価）
比が２以上（ただし総括的凝血強度（USP価）
は０でない）であり、血液凝固の制御能を持つム
コ多糖組成物の製造方法であつて、アルコール度
が55〜61゜GLの水性アルコール媒質（水−エタノ
ール）に、分子量が約2000〜約50000の範囲で無
機塩含量が低いヘパリン又はヘパリン様ムコ多糖
類をベースとする物質を懸濁させ、不溶画分を分
離し、ムコ多糖類が溶解している溶液を回収し、
該ムコ多糖類をアルコール沈澱によつて前記水性
アルコール媒質から分離することからなる方法。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR7831357A FR2440376A1 (fr) | 1978-11-06 | 1978-11-06 | Composition mucopolysaccharidique ayant une activite regulatrice de la coagulation, medicament la contenant et procede pour l'obtenir |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2321340A Division JPH03243601A (ja) | 1978-11-06 | 1990-11-27 | 血液凝固の制御能をもつムコ多糖組成物およびその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5569601A JPS5569601A (en) | 1980-05-26 |
| JPH0323528B2 true JPH0323528B2 (ja) | 1991-03-29 |
Family
ID=9214520
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14314579A Granted JPS5569601A (en) | 1978-11-06 | 1979-11-05 | Mucopolysaccharide composition having controllability of blood coagulation*vedicine containing it and its manufacture |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4804652A (ja) |
| JP (1) | JPS5569601A (ja) |
| FR (1) | FR2440376A1 (ja) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2478646A2 (fr) * | 1980-03-20 | 1981-09-25 | Choay Sa | Composition mucopolysaccharidique ayant une activite regulatrice de la coagulation, medicament la contenant et procede pour l'obtenir |
| IL61201A (en) * | 1979-10-05 | 1984-09-30 | Choay Sa | Oligosaccharides having no more than 8 saccharide moieties,their obtention from heparin and pharmaceutical compositions containing them |
| FR2495935A1 (fr) * | 1980-12-15 | 1982-06-18 | Choay Sa | Fractions mucopolysaccharidiques possedant des proprietes biologiques, leur procede de preparation et leur application en tant que medicaments |
| IT1195497B (it) * | 1983-03-08 | 1988-10-19 | Opocrin Spa | Procedimento per la preparazione di frazioni oligosaccaridiche dotate di proprieta' farmacologiche per degradazione chimica di eparina |
| FR2553287B1 (fr) * | 1983-10-18 | 1986-09-12 | Choay Sa | Compositions a base de mucopolysaccharides ou d'oligosaccharides, notamment a base de fractions ou fragments d'heparine, appropriees au traitement de desordres de la proliferation cellulaire |
| FR2568774B2 (fr) * | 1984-05-30 | 1989-05-19 | Choay Sa | Medicaments favorisant les proprietes d'ecoulement du sang et leur utilisation en therapeutique |
| CA1260461A (fr) * | 1984-10-18 | 1989-09-26 | Jean-Claude Lormeau | Procede de preparation de compositions de mucopolysaccharides dotes d'une activite antithrombotique elevee |
| FR2572080B1 (fr) * | 1984-10-18 | 1987-06-26 | Dropic | Procede de preparation de compositions de mucopolysaccharides dotees d'une activite antithrombotique elevee, les compositions obtenues et leur application en tant que medicaments |
| IT1214609B (it) * | 1985-05-17 | 1990-01-18 | Opocrin Spa | Esosaminoglicani solfati depolimerizzati ad attivita'antitrombotica, fibrinolitica, antinfiammatoria, loro procedimento di preparazione e composizioni farmaceutiche che li contengono. |
| FR2584606A1 (fr) * | 1985-07-12 | 1987-01-16 | Dropic | Utilisation de poly- et oligosaccharides pour l'obtention de medicaments actifs dans les pathologies du tissu conjonctif |
| IT1213384B (it) * | 1986-11-24 | 1989-12-20 | Lab Derivati Organici Mediolan | Processo per la preparazione controllata di gilcosaminoglicani a basso peso molecolare. |
| FR2614026B1 (fr) * | 1987-04-16 | 1992-04-17 | Sanofi Sa | Heparines de bas poids moleculaire, a structure reguliere, leur preparation et leurs applications biologiques |
| GB8826448D0 (en) * | 1988-11-11 | 1988-12-14 | Thrombosis Res Inst | Improvements in/relating to organic compounds |
| US5605938A (en) * | 1991-05-31 | 1997-02-25 | Gliatech, Inc. | Methods and compositions for inhibition of cell invasion and fibrosis using dextran sulfate |
| US5705178A (en) * | 1991-05-31 | 1998-01-06 | Gliatech, Inc. | Methods and compositions based on inhibition of cell invasion and fibrosis by anionic polymers |
| FR2704226B1 (fr) * | 1993-04-22 | 1995-07-21 | Sanofi Elf | 3-desoxy oligosaccharides, leurs procedes de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent. |
| AU754936B2 (en) * | 1996-11-27 | 2002-11-28 | Aventis Pharmaceuticals Inc. | Pharmaceutical composition comprising a compound having anti-Xa activity and a platelet aggregation antagonist compound |
| US20050085478A1 (en) * | 2003-08-22 | 2005-04-21 | Pharmacia Corporation | Compositions of a cyclooxygenase-2 selective inhibitor and a low-molecular-weight heparin for the treatment of central nervous system damage |
| EP1582531A1 (en) * | 2004-03-24 | 2005-10-05 | Aventis Pharma S.A. | Process for oxidizing unfractionated heparins and detecting presence or absence of glycoserine in heparin and heparin products |
| ITMO20040199A1 (it) * | 2004-07-29 | 2004-10-29 | Biofer Spa | Procedimento per la purificazione da gruppi e n no rsidui di eparine a basso peso molecolare ottentite tramite nitrosazione. |
| JP4946139B2 (ja) * | 2006-04-03 | 2012-06-06 | パナソニック株式会社 | 高周波加熱装置 |
| JP4516947B2 (ja) * | 2006-10-03 | 2010-08-04 | 有機合成薬品工業株式会社 | 微細に分割された酸性ムコ多糖類塩粒子の製造方法 |
| WO2009155108A1 (en) | 2008-05-30 | 2009-12-23 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Saccharide structures and methods of making and using such structures |
| WO2022015794A1 (en) | 2020-07-14 | 2022-01-20 | Optimvia, Llc | Methods for synthesizing non-anticoagulant heparan sulfate |
| JP2022540849A (ja) | 2019-07-09 | 2022-09-20 | オプティムヴィア、エルエルシー | 抗凝固性多糖類の合成方法 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2552507A (en) * | 1949-05-24 | 1951-05-15 | Squibb & Sons Inc | Purification and fractionation of heparin preparations |
| DE1129148B (de) * | 1960-10-19 | 1962-05-10 | Egyt Gyogyszervegyeszeti Gyar | Verfahren zur Herstellung von Heparin-Derivaten zytostatisch wirkender Stoffe |
| US3766167A (en) * | 1971-03-26 | 1973-10-16 | Research Corp | Orally active anticoagulant |
| JPS5318520B2 (ja) * | 1972-07-05 | 1978-06-15 | ||
| CA1042001A (en) * | 1973-04-13 | 1978-11-07 | Choay S.A. | Mixed heparin salts |
| US3985618A (en) * | 1975-05-02 | 1976-10-12 | Irving Innerfield | Method for detection of thrombosis and prethrombosis |
| US4122250A (en) * | 1977-08-22 | 1978-10-24 | Gottfried Schmer | Separation of high-activity heparin by affinity chromatography |
| US4175182A (en) * | 1978-07-03 | 1979-11-20 | Research Corporation | Separation of high-activity heparin by affinity chromatography on supported protamine |
| CA1136620A (en) * | 1979-01-08 | 1982-11-30 | Ulf P.F. Lindahl | Heparin fragments having selective anticoagulation activity |
| US4281108A (en) * | 1980-01-28 | 1981-07-28 | Hepar Industries, Inc. | Process for obtaining low molecular weight heparins endowed with elevated pharmacological properties, and product so obtained |
| US4351938A (en) * | 1980-05-19 | 1982-09-28 | Riker Laboratories, Inc. | Anticoagulant substance |
| US4550519A (en) * | 1984-04-05 | 1985-11-05 | Simmons Harold J | Fishing rod holder with automatic hook setter |
-
1978
- 1978-11-06 FR FR7831357A patent/FR2440376A1/fr active Granted
-
1979
- 1979-11-05 JP JP14314579A patent/JPS5569601A/ja active Granted
-
1985
- 1985-02-19 US US06/702,509 patent/US4804652A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2440376A1 (fr) | 1980-05-30 |
| FR2440376B1 (ja) | 1981-06-12 |
| JPS5569601A (en) | 1980-05-26 |
| US4804652A (en) | 1989-02-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0323528B2 (ja) | ||
| US4692435A (en) | Mucopolysaccharide composition having a regulatory action on coagulation, medicament containing same and process of preparation | |
| US4474770A (en) | Oligosaccharides having anti-Xa activity, pharmaceutical compositions containing them and method of use | |
| US4686288A (en) | Process for preparing mucopolysaccharide compositions having high antithrombotic activity, the compositions obtained and their use as medicaments | |
| US4847338A (en) | Low molecular weight heparin fragments as inhibitors of complement activation | |
| US4486420A (en) | Mucopolysaccharide composition having a regulatory action on coagulation, medicament process for preparation and method of use | |
| US4533549A (en) | Antithrombotic agent | |
| NO301719B1 (no) | Analogifremgangsmåte til fremstilling av terapeutisk aktive heparinderivater | |
| US4870166A (en) | Process for preparing high-purity dematan sulphate, and pharmaceutical compositions which contain it | |
| CN103285031B (zh) | 解聚海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞疾病药物中的应用 | |
| CA1240264A (en) | Covalently bound heparin-antithrombin iii complex | |
| US4446126A (en) | Antithrombin-heparin complex and method for its production | |
| JPH0424360B2 (ja) | ||
| IE52906B1 (en) | Short chain oligosaccharides having biological properties, a process for making the same and the use thereof as drugs | |
| USRE35770E (en) | Oligosaccharides having anti-Xa activity and pharmaceutical compositions containing them | |
| Bengtsson et al. | Interaction of heparin with proteins Demonstration of different binding sites for antithrombin and lipoprotein lipase | |
| EP0097625A2 (en) | Process for producing substantially pure dermatan sulfate and heparan sulfate glycosaminoglycans, and pharmaceutical use thereof | |
| EP0048898B1 (en) | Method for the production of an antithrombin-heparin complex and pharmaceutical compositions containing the complex | |
| US5470965A (en) | Complexable heterogenous oligosaccharides and alpha-hydosanes having therapeutical activity, process for their preparation and related pharmaceutical compositions | |
| US2921000A (en) | Thromboplastin | |
| JPS63128001A (ja) | Ｆｇａｇ及びその塩、その製造方法並びにそれを含有する播種性血管内凝固症候群治療剤 | |
| AU2015203727B2 (en) | High Purity Heparin and Production Method Therefor | |
| Losito et al. | Molecular Weight of Heparin Versus Biologic Activity Some Additional Considerations | |
| US20160082051A1 (en) | Use of sea cucumber glycosaminoglycan in preparing medicine for prevention and treatment of thromboembolic disease | |
| Thomas et al. | A comparative study of heparin and heparin fractions in preventing experimental venous thrombosis |