JPH03239952A - 液体クロマトグラフ分析法および該分析装置 - Google Patents
液体クロマトグラフ分析法および該分析装置Info
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- JPH03239952A JPH03239952A JP3792690A JP3792690A JPH03239952A JP H03239952 A JPH03239952 A JP H03239952A JP 3792690 A JP3792690 A JP 3792690A JP 3792690 A JP3792690 A JP 3792690A JP H03239952 A JPH03239952 A JP H03239952A
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- scattered light
- raman scattered
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
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- G—PHYSICS
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- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は液体クロマトグラフに係り、特に検出器として
分光蛍光光度計を用いた液体クロマトグラフに関する。
分光蛍光光度計を用いた液体クロマトグラフに関する。
無蛍光物質の検出に、バックグランドに蛍光物質を添加
して、無蛍光物質による励起光の減少を蛍光の減少とし
て検出する方法は、薄膜クロマトグラフィやアガロース
ゲル電傑泳動法で分離を行なう際の検出法として用いら
れている。
して、無蛍光物質による励起光の減少を蛍光の減少とし
て検出する方法は、薄膜クロマトグラフィやアガロース
ゲル電傑泳動法で分離を行なう際の検出法として用いら
れている。
例えば薄膜クロマトグラフィでは、予めゲル中に254
nmの紫外(UV)光で青白色の蛍光を発する物質(西
独メルク社製 F254S)を添加した薄層を作成し、
分析試料を展開した後、UV光照射下でUVカットフィ
ルタを通して薄層を観察すると、254nmの光を吸収
する物質が吸着されている部分は励起光が吸収されるた
め蛍光が弱くなり、暗いスポットとして観察される(特
開昭54−140597号)。
nmの紫外(UV)光で青白色の蛍光を発する物質(西
独メルク社製 F254S)を添加した薄層を作成し、
分析試料を展開した後、UV光照射下でUVカットフィ
ルタを通して薄層を観察すると、254nmの光を吸収
する物質が吸着されている部分は励起光が吸収されるた
め蛍光が弱くなり、暗いスポットとして観察される(特
開昭54−140597号)。
液体クロマトグラフィでは、高性能のフローセル付分光
光度計が広く普及しているため、前記のような方法はあ
まり用いられていないが、分光蛍光光度計を用いて蛍光
を発しない物質を検出する際には、分析試料の溶離液に
蛍光物質を添加し、溶出された物質による励起光の吸収
を、前記と同様に蛍光の減少を検出することにより行う
方法が知られている〔ウニルナ−・G・クウレ他:アナ
リティカル ケミスト1ハロ 0.2642〜2646
頁1988年(Werner G Kuhr : An
al、Chem、 60 。
光度計が広く普及しているため、前記のような方法はあ
まり用いられていないが、分光蛍光光度計を用いて蛍光
を発しない物質を検出する際には、分析試料の溶離液に
蛍光物質を添加し、溶出された物質による励起光の吸収
を、前記と同様に蛍光の減少を検出することにより行う
方法が知られている〔ウニルナ−・G・クウレ他:アナ
リティカル ケミスト1ハロ 0.2642〜2646
頁1988年(Werner G Kuhr : An
al、Chem、 60 。
P 2642〜2646))。
r発明が解決しようとする課題〕
前記従来技術は、いずれも蛍光物質を溶離液へ添加しな
ければならないと云う煩雑さと、蛍光を発しない物質と
蛍光物質の同時検出についての配慮がなされておらず、
従って、溶離液が発する蛍光により蛍光物質の検出が妨
害されると云う問題があった6 また、検出が必要な成分の吸収スペクトルが多岐にわた
る場合についても配慮されておらず、例えば吸収の大き
く異なる複数成分を同時に検出することができないと云
う問題があった。
ければならないと云う煩雑さと、蛍光を発しない物質と
蛍光物質の同時検出についての配慮がなされておらず、
従って、溶離液が発する蛍光により蛍光物質の検出が妨
害されると云う問題があった6 また、検出が必要な成分の吸収スペクトルが多岐にわた
る場合についても配慮されておらず、例えば吸収の大き
く異なる複数成分を同時に検出することができないと云
う問題があった。
本発明の目的は、蛍光を発しない物質と蛍光物質との同
時検出が可能な液体クロマトグラフ分析法、あるいは、
吸収スペクトルの異なる複数成分を同時に検出すること
ができる液体クロマトグラフ分析法、並びに該分析装置
を提供することにある。
時検出が可能な液体クロマトグラフ分析法、あるいは、
吸収スペクトルの異なる複数成分を同時に検出すること
ができる液体クロマトグラフ分析法、並びに該分析装置
を提供することにある。
本発明者らは励起光を吸収するものが存在すると、ラマ
ン散乱光の強度を減少させることに気付き、これに基づ
き本発明に到達したものである。
ン散乱光の強度を減少させることに気付き、これに基づ
き本発明に到達したものである。
前記目的を達成する本発明の特徴は、分光蛍光光度計の
励起光により生ずる溶離液のラマン散乱光の強度変化を
検出することにより、分析試料の定量を行うもので、本
発明の要旨は次のとおりである。
励起光により生ずる溶離液のラマン散乱光の強度変化を
検出することにより、分析試料の定量を行うもので、本
発明の要旨は次のとおりである。
(1)溶離液の移送ポンプ、分析試料のサンプルインジ
ェクタ、分離カラムおよび分光蛍光光度計を有する分析
装置を用いた液体クロマトグラフ分析法において、 分光蛍光光度計の励起光により生ずる溶離液のラマン散
乱光の強度を連続的にモニタし、該ラマン散乱光の強度
の減少率を測定することにより溶出物質の検出を行うこ
とを特徴とする液体クロマトグラフ分析法。
ェクタ、分離カラムおよび分光蛍光光度計を有する分析
装置を用いた液体クロマトグラフ分析法において、 分光蛍光光度計の励起光により生ずる溶離液のラマン散
乱光の強度を連続的にモニタし、該ラマン散乱光の強度
の減少率を測定することにより溶出物質の検出を行うこ
とを特徴とする液体クロマトグラフ分析法。
(2)前記において、分光蛍光光度計の励起光により生
ずる溶離液のラマン散乱光の強度を連続的にモニタし、
溶質濃度Oのときのラマン散乱光強度Io、溶質濃度C
のときのラマン散乱光強度Iとすると、 C”−log(I / Io) よりTs質物質の定量を行うことを特徴とする液体クロ
マトグラフ分析法。
ずる溶離液のラマン散乱光の強度を連続的にモニタし、
溶質濃度Oのときのラマン散乱光強度Io、溶質濃度C
のときのラマン散乱光強度Iとすると、 C”−log(I / Io) よりTs質物質の定量を行うことを特徴とする液体クロ
マトグラフ分析法。
(3)溶離液の移送ポンプ、分析試料のサンプルインジ
ェクタ、分離カラムおよび分光蛍光光度計を有する液体
クロマトグラフ分析装置において、前記Cce −lo
g(I / Io)を測定できるlog、変換器を備え
たデータ処理装置を設けたことを特徴とする液体クロマ
トグラフ分析装置。
ェクタ、分離カラムおよび分光蛍光光度計を有する液体
クロマトグラフ分析装置において、前記Cce −lo
g(I / Io)を測定できるlog、変換器を備え
たデータ処理装置を設けたことを特徴とする液体クロマ
トグラフ分析装置。
また、前記において、分析中に分光蛍光光度計の励起光
の波長、蛍光測定波長の変更が可能な信号変換器を設け
ることにより、蛍光物質との同時検出、あるいは吸収ス
ペクトルの異なる複数成分の同時検出を行うことが可能
となった。
の波長、蛍光測定波長の変更が可能な信号変換器を設け
ることにより、蛍光物質との同時検出、あるいは吸収ス
ペクトルの異なる複数成分の同時検出を行うことが可能
となった。
−・般に希薄な溶液の蛍光スペクトルを測定すると励起
光の散乱光や二次光の他に、散乱光から振動数がν。ず
れた該溶媒に特異なラマン散乱光が観察される。
光の散乱光や二次光の他に、散乱光から振動数がν。ず
れた該溶媒に特異なラマン散乱光が観察される。
このラマン散乱光は、励起光により溶媒が発する光であ
る。従って、溶液中に励起光を吸収する物質やラマン散
乱光それ自身を吸収する物質が存在すると、その量に応
じてその強度が減少する。
る。従って、溶液中に励起光を吸収する物質やラマン散
乱光それ自身を吸収する物質が存在すると、その量に応
じてその強度が減少する。
このラマン散乱光の強度減少を測定することによって、
蛍光を発しない物質の検出が分光蛍光光度計により可能
となる。
蛍光を発しない物質の検出が分光蛍光光度計により可能
となる。
本発明を第1図〜第7図により説明する。
第1図は本発明の液体クロマトグラフ分析法の流路系統
図を示すものである。
図を示すものである。
溶離液1は、3%のブチルアルコールを含む0.1mo
lNH,CQ、0.025moIKH2PO4゜0.0
125moIK、HPO,水溶液である。
lNH,CQ、0.025moIKH2PO4゜0.0
125moIK、HPO,水溶液である。
これをポンプ2により 0.5mQ/分の流量で送液し
、サンプルインジェクタ3のマイクロシリンジにより分
析試料を所定量注入し、分離カラム4に送る。このカラ
ムは日立ゲル#3013−N(アニオン交換樹脂9粒径
5μm)を充填した内径4mmX長さ150mmのステ
ンレス環のものである。
、サンプルインジェクタ3のマイクロシリンジにより分
析試料を所定量注入し、分離カラム4に送る。このカラ
ムは日立ゲル#3013−N(アニオン交換樹脂9粒径
5μm)を充填した内径4mmX長さ150mmのステ
ンレス環のものである。
分離カラム4により分離溶出した液は、フロセルを取付
けた分光蛍光光度計5で検出される。
けた分光蛍光光度計5で検出される。
検出された信号は信号変換器6を介してデータ処理装置
7で定性または定量を行なう。さらに、分光蛍光光度計
5と信号変換器6はシステムコントローラ8により制御
されている。
7で定性または定量を行なう。さらに、分光蛍光光度計
5と信号変換器6はシステムコントローラ8により制御
されている。
第2図は、前記の実施例において第一図の分析装置に信
号変換器6を接続せずに、蛍光を発しないものとしてビ
タミンB1と、蛍光を発するものとしてビタミンB2を
分析して得たクロマトグラムである。
号変換器6を接続せずに、蛍光を発しないものとしてビ
タミンB1と、蛍光を発するものとしてビタミンB2を
分析して得たクロマトグラムである。
この場合の分光蛍光光度計の初期条件は、EX(励起波
長)=254 nm、EM(蛍光測定波長)=275n
m、すなわち254nmのビタミンB1の吸収を検出す
る条件である。そして、クロマトグラム上の9の時点で
EX=360nm、EM=440nmすなわちビタミン
B2の蛍光を検出するに最適な条件に変更し、同時にデ
ータ処理装置でゼロ点を取り直したものである。これに
よって。
長)=254 nm、EM(蛍光測定波長)=275n
m、すなわち254nmのビタミンB1の吸収を検出す
る条件である。そして、クロマトグラム上の9の時点で
EX=360nm、EM=440nmすなわちビタミン
B2の蛍光を検出するに最適な条件に変更し、同時にデ
ータ処理装置でゼロ点を取り直したものである。これに
よって。
ビタミンB1とビタミンB2の2成分を同時に定量する
ことができる。
ことができる。
第3図は信号変換器6を接続して、前記と同様にビタミ
ンB1およびB2を分析して得られたクロマトグラムで
ある。
ンB1およびB2を分析して得られたクロマトグラムで
ある。
この場合の分光蛍光光度計の測定条件は、EX=254
nm、EM=275nmで、信号変換器6により −l
og(I/I。)(Iはその時点での信号値、工0はス
タート時の信号値)により変換した。またクロマトグラ
ム上の10の時点で、EX=360nm、EM=440
nmとして信号変換を停止し、さらにデータ処理装置で
ゼロ点を取り直し、上記と同様に測定した。
nm、EM=275nmで、信号変換器6により −l
og(I/I。)(Iはその時点での信号値、工0はス
タート時の信号値)により変換した。またクロマトグラ
ム上の10の時点で、EX=360nm、EM=440
nmとして信号変換を停止し、さらにデータ処理装置で
ゼロ点を取り直し、上記と同様に測定した。
ビタミンB1およびビタミンB2の含有量と溶出面積(
検出量)との間には直線関係が成立し、容易に定量を行
うことができる。
検出量)との間には直線関係が成立し、容易に定量を行
うことができる。
第4図〜第7図は、本発明の根拠となるラマン散乱光強
度の変化を示すものである。
度の変化を示すものである。
分析試料には420nm付近に吸収極大を持つフェリシ
アン化カリウム水溶液を用いた。
アン化カリウム水溶液を用いた。
第4図、第5図はそれぞれ励起光波長を419nm、3
69nmとしたときの蛍光スペクトルで、11.13は
分析試料として水を用いた場合、12.14は分析試料
として0 、1 m g / m Qのフェリシアン化
カリウム水溶液を用いた場合のものである。
69nmとしたときの蛍光スペクトルで、11.13は
分析試料として水を用いた場合、12.14は分析試料
として0 、1 m g / m Qのフェリシアン化
カリウム水溶液を用いた場合のものである。
この様に励起光またはラマン散乱光の付近に吸収を持つ
物質が存在すると、ラマン散乱光の強度が減少し、これ
によってその物質の定量を行うことができる。
物質が存在すると、ラマン散乱光の強度が減少し、これ
によってその物質の定量を行うことができる。
第6図は前記フェリシアン化カリウムの濃度を変化させ
た分析試料のラマン散乱光の強度を測定したものである
。
た分析試料のラマン散乱光の強度を測定したものである
。
曲線15はEX=419nm、曲線16はEX=369
nmで得られた結果である。フェリシアン化カリウムの
濃度の増加に伴ってラマン散乱光強度は減少している。
nmで得られた結果である。フェリシアン化カリウムの
濃度の増加に伴ってラマン散乱光強度は減少している。
また、第7図はフェリシアン化カリウム濃度Oのときの
ラマン散乱光強度をIoとし、濃度Cのときのラマン散
乱光強度工とすると、濃度Cとlog(I/Io)との
関係を示すグラフである。
ラマン散乱光強度をIoとし、濃度Cのときのラマン散
乱光強度工とすると、濃度Cとlog(I/Io)との
関係を示すグラフである。
直線17はEX=419n、m、直線18はEX=36
9nmの場合を示したものであるが、双方とも濃度Iと
−QOg(I/Io)の間には直線関係が認められる。
9nmの場合を示したものであるが、双方とも濃度Iと
−QOg(I/Io)の間には直線関係が認められる。
第6図および第7図から、フェリシアン化カリウムの濃
度を容易に定量することができる。
度を容易に定量することができる。
クレアチニン、β−カロチン等の物質においても同様の
分析特性が得られた。こうした第6図および第7図に示
すような光吸収特性を持つ物質であれば容易に定量分析
を行うことができる。
分析特性が得られた。こうした第6図および第7図に示
すような光吸収特性を持つ物質であれば容易に定量分析
を行うことができる。
〔発明の効果]
本発明によれば、分光蛍光光度計により無蛍光物質の検
出を行う際、溶離液に蛍光物質を添加する必要がないた
め分析試料の作成が容易で、コストも低減できる。
出を行う際、溶離液に蛍光物質を添加する必要がないた
め分析試料の作成が容易で、コストも低減できる。
さらにまた、励起光の波長を変化させることにより、複
数の蛍光物質の同時検出や、吸収の異なる物質の同時検
出も可能である。
数の蛍光物質の同時検出や、吸収の異なる物質の同時検
出も可能である。
第1図は本発明の液体クロマトグラフ分析装置のの流路
系路間、第2図、第3図は本発明を用いて得られたクロ
マトグラム、第4図、第5図は吸光物質によるラマン散
乱光の変化を示すスペクトル図、第6図、第7図は吸光
物質の濃度とラマン散乱光強度との関係を示すグラフで
ある。 1・・・溶離液、2・・・送液ポンプ、3・・・サンプ
ルインジェクタ、4・・・分離カラム、5・・・分光蛍
光光度計、6・・・信号変換器、7・・・データ処理装
置、8・・・システムコントローラ。
系路間、第2図、第3図は本発明を用いて得られたクロ
マトグラム、第4図、第5図は吸光物質によるラマン散
乱光の変化を示すスペクトル図、第6図、第7図は吸光
物質の濃度とラマン散乱光強度との関係を示すグラフで
ある。 1・・・溶離液、2・・・送液ポンプ、3・・・サンプ
ルインジェクタ、4・・・分離カラム、5・・・分光蛍
光光度計、6・・・信号変換器、7・・・データ処理装
置、8・・・システムコントローラ。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、溶離液の移送ポンプ、分析試料のサンプルインジェ
クタ、分離カラムおよび分光蛍光光度計を有する分析装
置を用いた液体クロマトグラフ分析法において、 分光蛍光光度計の励起光により生ずる溶離液のラマン散
乱光の強度を連続的にモニタし、該ラマン散乱光の強度
の減少率を測定することにより溶出物質の検出を行うこ
とを特徴とする液体クロマトグラフ分析法。 2、溶離液の移送ポンプ、分析試料のサンプルインジェ
クタ、分離カラムおよび分光蛍光光度計を有する分析装
置を用いた液体クロマトグラフ分析法において、 前記溶離液の分光蛍光光度計の励起光により生ずるラマ
ン散乱光の強度と、前記分離カラムからの溶離液のラマ
ン散乱光の強度との差により溶出物質を定量することを
特徴とする液体クロマトグラフ分析法。 3、溶離液の移送ポンプ、分析試料のサンプルインジェ
クタ、分離カラムおよび分光蛍光光度計を有する分析装
置を用いた液体クロマトグラフ分析法において、 分光蛍光光度計の励起光により生ずる溶離液のラマン散
乱光の強度を連続的にモニタし、溶質濃度0のときのラ
マン散乱光強度I_o、溶質濃度Cのときのラマン散乱
光強度Iとすると、C∝−log(I/I_o) より溶質物質の定量を行うことを特徴とする液体クロマ
トグラフ分析法。 4、溶離液の移送ポンプ、分析試料のサンプルインジェ
クタ、分離カラムおよび分光蛍光光度計を有する液体ク
ロマトグラフ分析装置において、分光蛍光光度計の励起
光により生ずる溶離液のラマン散乱光の強度を連続的に
モニタし、溶質濃度0のときのラマン散乱光強度I_o
、溶質濃度Cのときのラマン散乱光強度Iとすると、C
∝−log(I/I_o) を測定できるlog変換器を備えたデータ処理装置を設
けたことを特徴とする液体クロマトグラフ分析装置。 5、溶離液の移送ポンプ、分析試料のサンプルインジェ
クタ、分離カラムおよび分光蛍光光度計を有する液体ク
ロマトグラフ分析装置において、分析中に分光蛍光光度
計の励起光波長、蛍光測定波長を変更できる信号変換器
を設けたことを特徴とする液体クロマトグラフ分析装置
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3792690A JP2882836B2 (ja) | 1990-02-19 | 1990-02-19 | 液体クロマトグラフ分析法および該分析装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3792690A JP2882836B2 (ja) | 1990-02-19 | 1990-02-19 | 液体クロマトグラフ分析法および該分析装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03239952A true JPH03239952A (ja) | 1991-10-25 |
| JP2882836B2 JP2882836B2 (ja) | 1999-04-12 |
Family
ID=12511158
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3792690A Expired - Fee Related JP2882836B2 (ja) | 1990-02-19 | 1990-02-19 | 液体クロマトグラフ分析法および該分析装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2882836B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2023105369A (ja) * | 2022-01-19 | 2023-07-31 | 株式会社島津製作所 | 分析装置 |
| JP2023131244A (ja) * | 2022-03-09 | 2023-09-22 | 株式会社島津製作所 | スペクトル測定装置を用いた分析方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN120418637A (zh) | 2022-12-28 | 2025-08-01 | 株式会社堀场制作所 | 分光分析装置和分光分析方法 |
-
1990
- 1990-02-19 JP JP3792690A patent/JP2882836B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2023105369A (ja) * | 2022-01-19 | 2023-07-31 | 株式会社島津製作所 | 分析装置 |
| JP2023131244A (ja) * | 2022-03-09 | 2023-09-22 | 株式会社島津製作所 | スペクトル測定装置を用いた分析方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2882836B2 (ja) | 1999-04-12 |
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