【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
本発明は、木材腐朽性担子菌の分離方法に関す
るものである。
更に詳細には、本発明は、カビその他の雑菌の
生育を抑え、木材腐朽性担子菌を効率よく分離す
る方法に関するものである。
本発明によれば、腐朽材より木材腐朽性担子菌
を効率よく分離することができ、しかもリグニン
の分解にすぐれた木材腐朽性担子菌を分離するこ
とができるので、木材腐朽処理や半材糖化工業の
技術分野及び木材腐朽性担子菌の微生物学的基礎
研究等の重要な役割を果すものである。
（従来の技術）
従来、腐朽材より木材腐朽性担子菌を分離する
培地としてはジヤガイモ・ブドウ糖寒天培地や麦
芽エキス寒天培地を用いるのが一般的である。
（青島清雄、椿啓介、三浦宏一郎編：菌類研究
法、P.176（1983））
（発明が解決しようとする問題点）
しかしながら、ジヤガイモ・ブドウ糖寒天培地
や麦芽エキス寒天培地はカビ、酵母などの生育に
も適した培地であり、木材腐朽性担子菌の選択分
離用培地としては不適当である。
即ち、木材腐朽性担子菌の選択分離にジヤガイ
モ・ブドウ糖寒天培地や麦芽エキス寒天培地を使
用すると、カビや酵母など木材腐朽性担子菌以外
の雑菌が多量発生して目的とする木材腐朽性担子
菌の生育が抑制され、容易に選択分離できないと
いうことになつてしまう。
また、ジヤガイモ・ブドウ糖寒天培地や麦芽エ
キス寒天培地を用いた場合、生育した多くのコロ
ニーのなかで、これが木材腐朽性担子菌であると
一見して識別することができず、きわめて不便な
ものであつた。
（問題点を解決するための手段）
本発明は、これら従来法が有する欠点を一挙に
解決するためになされたものである。
本発明は、木粉を唯一の栄養源として含有する
寒天培地を用いて木材腐朽性担子菌を分離する方
法である。
本発明では木粉を唯一の栄養源として含有する
寒天培地を用いたために、カビ、酵母等の雑菌の
生育を抑制し、より多くの担子菌を生育させるこ
とに成功したものである。
また、本発明では木粉が寒天培地中に分散して
いるため、木材腐朽性担子菌が生育したとき、コ
ロニーの周辺を薄白色、薄黄色又は薄暗褐色に変
化させ、ハローを形成するので、一見して木材腐
朽性担子菌として識別できるものである。
一般に木材腐朽性担子菌は、リグニン分解能の
強い菌とセルロース分解能の強い菌とに大別され
るが、リグニン分解能の強い菌は木粉中のリグニ
ンを分解してセルロースを残すため、作用した部
分は漂白されたようになり、薄白色及び薄黄色を
呈するようになる。また、セルロース分解能の強
い菌は木粉中のセルロースを分解してリグニンを
残すため、作用した部分はリグニンの色調にな
り、薄暗褐色を呈するようになる。
本発明に用いる木粉はいかなる木の粉末でもよ
い。ブナ、ナラ、クヌギ、シデ、シイ、クリ、マ
ツ、スギなどの木から選択して、粉末化すればよ
い。
木の粉末化に際しては、木材やチツプをよく乾
燥し、細断して、粉砕すればよい。粉砕したもの
は篩別し、20メツシユを通過したもの、好ましく
は40メツシユ〜100メツシユの大きさのものを分
取し、本発明に用いる木粉とするのがよい。
木粉は0.2％以上の適宜の量で培地に添加され
るが、１〜10％程度、好ましくは２〜４％程度で
十分である。
寒天は１〜２％程度用いられ、寒天の溶解液に
木粉を添加して培地を調製し、これをシヤーレに
分注し、木材腐朽性担子菌の選択分離に供するも
のである。
本発明においては、腐朽材その他担子菌含有物
を木粉寒天培地に接種して、25〜35℃で培養すれ
ば、多くのコロニーが発生し、そのコロニーのな
かで、薄白色及び薄黄色のハローを生じたコロニ
ーを採取すれば、リグリン分解能のすぐれた担子
菌を分離することができるものである。
（発明の効果）
本発明は、上記したような独特な新規な構成を
採用することにより、きわめて簡単に木材腐朽性
担子菌を分離できるというすぐれた効果を有する
が、要約すれば次の通りである。
(1) 寒天培地で木粉を唯一の栄養源としたため
に、カビ、酵母などの雑菌の生育を抑制し、多
くの担子菌を生育させることができる。
(2) 寒天培地で木粉を含有しているので、リグニ
ン分解能の強い担子菌は、木粉のリグニンを分
解し、セルロースを残して、薄白色及び薄黄色
のハローを形成するので、リグニン分解能の強
い担子菌を容易に分離することができる。
(3) 寒天培地で木粉を含有しているので、セルロ
ース分解能の強い担子菌は、木粉のセルロース
を分解し、リグニンを残して、薄暗褐色のハロ
ーを形成するので、セルロース分解能の強い担
子菌を容易に分離することができる。
次に本発明の実施例を示す。
実施例 １
木粉（40〜100メツシユ）2.0％、寒天1.6％を
含有する培地を120℃、15分間加熱殺菌した後、
無菌状態でシヤーレ（直径90mm）に20mlずつ分注
する。
上記、木粉寒天培地に火炎処理した腐朽材を接
種し、28℃で１〜２週間培養した後、単菌分離操
作を行なつた。
なお、比較のため、ジヤガイモエキス0.4％、
ブドウ糖2.0％、寒天1.6％を含有するジヤガイ
モ・ブドウ糖寒天培地（極東製薬工業）でも同様
の実験を行なつた。
それぞれの培地での分離結果を表１に示す。
The present invention relates to a method for isolating wood-decaying basidiomycetes. More specifically, the present invention relates to a method for suppressing the growth of mold and other germs and efficiently separating wood-decaying basidiomycetes. According to the present invention, wood-decaying basidiomycetes can be efficiently separated from decaying wood, and wood-decaying basidiomycetes that are excellent in decomposing lignin can be isolated, so wood decay treatment and semi-wood saccharification can be carried out. It plays an important role in the technical field of industry and basic microbiological research on wood-decaying basidiomycetes. (Prior Art) Conventionally, a potato-glucose agar medium or a malt extract agar medium has been commonly used as a medium for separating wood-decaying basidiomycetes from decaying wood. (Kiyoo Aoshima, Keisuke Tsubaki, Koichiro Miura (eds.: Fungi Research Methods, P.176 (1983)) (Problems to be solved by the invention) However, the potato/glucose agar medium and the malt extract agar medium do not contain mold, yeast, etc. Although it is a suitable medium for growth, it is unsuitable as a medium for selective isolation of wood-decaying basidiomycetes. That is, when a potato-glucose agar medium or a malt extract agar medium is used for the selective separation of wood-decaying basidiomycetes, a large amount of various bacteria other than wood-decaying basidiomycetes, such as molds and yeasts, are generated and the target wood-decaying basidiomycetes are isolated. The growth of this product is suppressed, and selective separation cannot be easily carried out. Furthermore, when using a potato-glucose agar medium or a malt extract agar medium, it is impossible to identify at a glance that among the many colonies that grow, these are wood-decaying basidiomycetes, which is extremely inconvenient. It was hot. (Means for Solving the Problems) The present invention has been made to solve all of the drawbacks of these conventional methods at once. The present invention is a method for isolating wood-decaying basidiomycetes using an agar medium containing wood flour as the only nutrient source. In the present invention, since an agar medium containing wood flour as the only nutrient source was used, the growth of various bacteria such as mold and yeast was suppressed, and more basidiomycetes were successfully grown. In addition, in the present invention, since wood flour is dispersed in the agar medium, when the wood-decaying basidiomycete grows, the area around the colony changes to pale white, pale yellow, or pale brown, forming a halo. At first glance, it can be identified as a wood-decaying basidiomycete. In general, wood-decaying basidiomycetes are broadly classified into those with strong lignin decomposition ability and those with strong cellulose decomposition ability. becomes bleached, taking on a pale white and pale yellow color. In addition, bacteria with strong cellulose decomposition ability decompose cellulose in wood flour and leave behind lignin, so the affected area takes on the color of lignin and takes on a pale brown color. The wood flour used in the present invention may be any wood powder. You can choose from trees such as beech, oak, sawtooth oak, hornbeam, Japanese chinquapin, chestnut, pine, and cedar, and turn them into powder. When turning wood into powder, the wood or chips may be thoroughly dried, shredded, and ground. The pulverized material is sieved, and the material that has passed through 20 meshes, preferably 40 meshes to 100 meshes in size, is separated and used as the wood flour used in the present invention. Wood flour is added to the medium in an appropriate amount of 0.2% or more, but about 1 to 10%, preferably about 2 to 4% is sufficient. Agar is used in an amount of about 1 to 2%, and a medium is prepared by adding wood flour to an agar solution, which is dispensed into a shear dish and used for selective isolation of wood-decaying basidiomycetes. In the present invention, if decayed wood and other materials containing basidiomycetes are inoculated onto a wood flour agar medium and cultured at 25 to 35°C, many colonies are generated, and among the colonies, pale white and pale yellow By collecting colonies that have formed a halo, it is possible to isolate basidiomycetes with excellent ligrin-degrading ability. (Effects of the Invention) The present invention has the excellent effect of being able to isolate wood-decaying basidiomycetes very easily by adopting the unique new configuration described above. be. (1) Since the agar medium uses wood flour as the only nutrient source, it suppresses the growth of various bacteria such as mold and yeast, and allows the growth of many basidiomycetes. (2) Since the agar medium contains wood flour, the basidiomycetes, which have a strong lignin decomposition ability, decompose the lignin in the wood flour, leaving behind cellulose and forming pale white and pale yellow halos, so the lignin decomposition ability is reduced. strong basidiomycetes can be easily isolated. (3) Since the agar medium contains wood flour, the basidiomycetes, which have a strong ability to decompose cellulose, decompose the cellulose in the wood flour, leaving behind lignin and forming a pale brown halo. Bacteria can be easily isolated. Next, examples of the present invention will be shown. Example 1 After heat sterilizing a medium containing 2.0% wood flour (40 to 100 mesh) and 1.6% agar at 120°C for 15 minutes,
Dispense 20 ml each into a chale (diameter 90 mm) under sterile conditions. The above-mentioned wood powder agar medium was inoculated with the flame-treated decayed wood, and after culturing at 28°C for 1 to 2 weeks, a single bacteria isolation operation was performed. For comparison, potato extract 0.4%,
Similar experiments were conducted using a potato glucose agar medium (Kyokuto Pharmaceutical Industries) containing 2.0% glucose and 1.6% agar. Table 1 shows the separation results using each medium.
【表】
実施例 ２
実施例１の木粉寒天培地を用いて単菌分離され
た木材腐朽性担子菌101株のうち58株を、木粉3.0
％、寒天1.6％から成る培地（直径90mmシヤーレ
に20ml分注）に接種し、28℃で１週間培養後培地
に生育したコロニーのハローの色変化を観察し
た。
また、50ml容三角フラスコに木粉（60〜80メツ
シユ）1.0ｇ、水2.5mlを加えた培地を120℃で15
分間加熱殺菌した後、上記菌株を接種し、28℃で
１ケ月間培養し、木粉中のリグニンを定量（JIS
P8008−1961）した。
培地の色変化とリグニン減少率との関係より、
色変化でリグニン分解菌であるか否かを判定しう
るかを検討した。
その結果は表２に示す。[Table] Example 2 Of the 101 wood-decaying basidiomycete strains isolated using the wood flour agar medium of Example 1, 58 strains were treated with wood flour 3.0.
% and 1.6% agar (20 ml dispensed into a 90 mm diameter shear dish) was inoculated, and after culturing at 28°C for one week, the color change of the halo of colonies grown on the medium was observed. In addition, a medium containing 1.0 g of wood flour (60 to 80 mesh) and 2.5 ml of water was placed in a 50 ml Erlenmeyer flask at 120℃ for 15 minutes.
After heat sterilizing for minutes, the above strain was inoculated and cultured at 28℃ for 1 month, and lignin in wood flour was determined (JIS
P8008−1961). From the relationship between the color change of the medium and the lignin reduction rate,
We investigated whether it is possible to determine whether or not it is a lignin-degrading bacterium based on color change. The results are shown in Table 2.
【表】【table】
【表】
腐朽前リグニン量
[Table] Lignin content before decay