JPH03285678A - 植物組織の培養方法及び装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は植物Ｍｉ織の培養方法及び装置に係り、特に器
官培養における被培養物の破壊を回避して大量の被培養
物を高密度に、且つ高増殖率で培養するのに好適な培養
方法及び装置に関する。

〔従来の技術〕

植物組織を培養し、被培養物から有用な物質を得る工業
的な培養技術の検討が行われている。このような培養技
術に用いられる培養槽としては、アミノ酸等の醗酵用の
培養槽をベースとしたものが適用されており、これらの
培養槽としては、被培養物の特性（被培養物の形態、最
適培養条件等）を考慮した、例えば、第１０図に示すタ
ンク型培養槽及び第１１図に示す回転式円筒型培養槽が
代表的なものである。

第１０図に示す培養槽は、タンク１１１内の被培養物を
含む培養液１１２を撹拌翼１１３によって撹拌するよう
になっている。また、第１１図に示す培養槽では、円筒
型培養槽１２１内に熱交換器１２２が設置され、この熱
交換器１２２の下方に気体噴出用多孔中空体１２３が設
置されており、円筒型培養槽１．２１が回転して、被培
養物を含む培養液１２４が撹拌されるようになっている
。

一般に、植物細胞をタンクで培養する場合、細胞の集塊
の状態を維持することが培養効率がよく、この点から培
養槽における被培養物は、できるだけ静止した状態で維
持しながら、培養液中の溶存酸素濃度が高くして細胞の
分化及び生育を高めることが望まれる。しかしながら、
上記した培養槽の場合、培養槽内で被培養物を静止した
状態で培養液のみを撹拌することが困難である。このた
め、細胞の集塊が破壊され、細胞を効率的に増殖させる
ことができない。また、第１１図に示す培養槽では、培
養液１２４中の溶存酸素量を上げるために、多量の空気
を気体噴出用多孔中空体１２３から槽内に供給すると、
バブリングによる泡立ちが生じ、被培養物が流出する問
題がある。

さらに、被培養物の種類によっては、培養液中の溶存酸
素を飽和溶存酸素量以上とする必要がある。しかし、第
１０図及び第１１図の培養槽では、培養液１１２，１２
４中の溶存酸素を飽和溶存酸素量以上とするのに必要な
酸素供給は実質的に不可能である。培養槽に効率的に酸
素を供給する培養方法として、培養液を培養槽から出し
入れし、気液双方を被培養物に接触させる方法が提案さ
れている。（例えば、特開昭６１−７８３８１号公報、
特開平１−１３９８７号公報） この方法を実施するための代表的な培養装置を第１２図
に示す。第１２図において、通排気孔１３１、　ａを有
する培養槽１３１と貯留槽（タンク）１３２とを導通す
る導液管１３３の途中に設けたポンプ１３４により、培
養液１３５は、培養槽１３１に供給され、また培養槽１
３１から排出される。そして、培養液１３５の供給と培
養液１３５の排出を交互に行ない、被培養物１３６は、
培養液が培養槽１３１から抜き出された時に培養槽１３
１の底部に蓄積し、培養液１３５が培養槽１３１に存在
する時には、被培養物１３６は培養液１３５中に分散、
浮遊して培養される。

第１２図に示す培養装置においては、気相及び液相との
接触による酸素供給によって細胞の分化及び成育に対す
る配慮がなされているが、培養過程における培養液の移
動により、被培養物が培養槽内で移動し破壊する恐れが
ある。すなわち、培養液の吸引排出時において、被培養
物も同期して移動し、培養槽内においては被培養物が立
体的に激しく拡散するため、被培養物が静置状態を維持
することができず破壊され、効率的な増殖を行うことが
できない。

一方、培養槽内にゴム、合成樹脂等からなる柔軟な膜状
体を設け、この膜状態の伸縮動作によって培養液を拡散
する培養装置が提案されている。

（特開平１１２４３７９号公報、特開昭６４＝２３８８
４号公報） 上記のような膜状体の伸縮動作による培養槽の形状変化
によって培養液を攪拌する場合、培養液内の被培養物の
拡散等によって破壊する恐れがあり、効率的な増殖作用
を期待することができない。

以上のように、従来の培養装置においては、液体培養に
おける細胞の破壊、バブリングの泡立ちによる被培養物
の流出等について充分配慮されておらず、高効率の培養
に問題があった。

本発明の目的は、攪拌及び酸素供給のためのバブリング
による被培養物の流出を防止し、かつ高い溶存酸素濃度
で被培養物を高密度に細胞破壊のない培養方法及び装置
を提供することにある。

〔課題を解決するための手段〕 上記した目的を達成するために、本発明の培養方法は、
培養槽内に全面又はその一部にカルス乃至毛状根が通過
しない程度以下の培養液通液部を有するバッフルプレー
ト上の被培養物が静置状態を維持しろる範囲内で槽内の
培養液液面を周期的又は断続的に上下動させて被培養物
を培養することにある。

さらに本発明の培養装置は、培養液液面を周期的又は断
続的に上下動させる培養液脈動手段として、例えば培養
槽に並設して設けられたタンクとその間を接続する導液
管の間にポンプ及び電磁弁からなる培養液脈動手段又は
培養槽に並設して設けたタンクとこのタンクを上下方向
に昇降させる昇降装置とを設けたことを特徴とする。

〔作用］ 培養液をポンプ等の機器あるいは培養槽と導通ずるタン
クを上下方向に昇降させることによって培養槽内の培養
液液面は上下方向に移動する。液体培養において単細胞
は培養液内で分散されても増殖作用において問題はなく
、カルス乃至毛状根の場合には組織が集塊化された場合
に増殖作用が向上する。

この場合、被培養物はバッフルプレート上で静置状態を
維持し、培養液はバッフルプレート上で水平方向に流れ
を形成する。この流れによって培養液を拡散し、培養に
必要な成分を被培養物に供給し、かつ溶存酸素を効率的
に被培養物に供給可能となる。被培養物はバッフルプレ
ート上で静置状態にあり破壊されないので被培養物は高
効率的に増殖する。

バッフルプレート上の被培養物を静置状態に維持しうる
範囲で培養液を脈動させる場合には、バッフルプレート
の形態によって培養液の平均線速度が異なり、バッフル
プレートが全面多孔体からなる場合、通液部を上下動す
る培養液の平均線速度は１５〜４７ｍｍ／ｍｉｎの範囲
にあることが望ましく、その一部に通液部を有するバッ
フルプレー０ トの場合には、通液部を上下動する培養液の平均線速度
は５３〜１６６　ｍｍ／ｍｉｎの範囲にあることが望ま
しい。このような平均線速度に調整すれば、バッフルプ
レート上の被培養物は静置された状態で培養液の攪拌効
果によって効率的な増殖が行われる。

特にバッフルプレートを培養槽内に多段に設けた場合に
は、バッフルプレート上の被培養物の増殖と共に、バッ
フルプレートの間隙が大きくなり被培養物の自重による
圧縮が回避される。さらにバッフルプレートが多段に設
置されている場合には、培養槽底面に被培養物の全重量
が負荷されることなくバッフルプレートの各段に分散さ
れるために僅かな強度でも細胞が破壊されやすい被培養
物においては増殖率が高（なる。

さらに、その一部に通液部を有する八ツフルブレ−１・
を二段以上に多段化した場合に、各バッフルプレートの
通液部を水平方向に対して互いに移動した位置にすれば
、各バッフルプレート上の培養液は水平方向流れを形成
し、被培養物の上下動の動きがなく、被培養物の破壊が
防止できる。

次に、バッフルプレート上の被培養物が周期的又は断続
的に空気若しくは酸素を含む気相と接触するように培養
液液面を上下動させれば、被培養物に対する酸素供給が
不足することなく効率的に供給でき、また、培養槽の上
部から空気を吹き込むことによって酸素供給効果をさら
に高めることになる。

〔実施例〕

以下、本発明の実施例を図面に基づいて説明する。

第１図及び第２図は、それぞれ本発明の培養装置の実施
例を示す概略的構成図である。

第１図においては、培養槽１とタンク２はポンプ３を途
中に設けた導液管４によって接続され、培養槽１の頂部
に設けられた培養液供給ノズル５とタンク２との間は導
液管６によって接続されている。また、ポンプ３が介設
された導通管にはバイパス管７が設けられ、このバイパ
ス管７には電磁弁８が設置されている。

培養槽１の内部には塔の高さ方向に沿って等間隔にバッ
フルプレート９ａ、９ｂ、９ｃ　　９ｄ９ｅ、９ｆが設
置されている。

第３図は第１図における多段に設置されたハシフルプレ
ートの位置関係を示す説明図であり、第４図は第１図の
要部拡大縦断面図である。培養槽１内に多段に設置され
るバッフルプレート９はそれぞれ円板状に形成されてお
り、その中心部にはそれぞれのバッフルプレートを高さ
方向に等間隔に設置するだめの支持部材１４が設けられ
ている。

この支持部材１４に対し、１２０°Ｃの角度で等間隔に
三つの開口部（培養液通液部）１５ａ、１５ｂ、１５ｃ
が形成されている。このような開口部を有するバッフル
プレート９ａに対し、その下方に位置するバッフルプレ
ート９ｂは支持部材１４を軸としてバッフルプレート９
ａに対し６０　”Ｃ回転した状態で配置されており、ま
た、八ツフルプレート９ｄは支持部材１４を軸として、
さらに６０°Ｃの角度で回転した状態で配置されている
。

したがって、第４図中、八ツフルブレー）９ａ、９ｃは
、第３図のＡ−Ａ線断面図に相当し、バッフルプレート
９ｂは、第３図のＢ−Ｂ線断面図に相当する。

また、特に第３図においては図示していないが、バッフ
ルプレート９ｂ、バッフルプレート９ｅ。

バッフルブレー）９ｆの場合にもそれぞれ支持部材１４
を軸としてそれぞれ６０°Ｃずつ回転することによって
培養槽１０の高さ方向において隣接するバッフルプレー
トの開口部はそれぞれ６０°Ｃの角度で位相した配置状
態となっている。

開口部１５ａから１５ｃは、それぞれ多孔体からなって
おり、その多孔体の各々の口径は単細胞は移動しうるが
、細胞の集塊物、例えばカルス乃至毛状根は通過しない
程度のポーラスの構造となっている。バッフルプレート
９の外周縁部はゴム又は合成樹脂からなる弾性体１６が
固定されており、この弾性体１６が培養槽１の内壁面を
摺動可能となっている。

なお、１１は空気ノズルを示し、槽中心部を軸として水
平面で回転自在に設置されている。

３ ４ 次に第１図、第３図及び第４図を基に本実施例の培養装
置の作用について説明する。

まず、培養槽１内の培養液１０は、ポンプ３の作動によ
って抜き出され、タンク２に送液される。

このポンプ３の作動によって培養液を抜き取る場合、培
養液１０の液面が最上段のバッフルプレート９ａの上部
にある範囲内でポンプの作動が停止すると同時に電磁弁
８が開き、培養槽１から抜き出された培養液１０が再び
培養槽１１内に送液される。

このようにポンプ３による培養液１０の抜き出し、及び
電磁面弁８の作動による培養液１０の培養槽への供給を
、培養液１０の液面が最上段のバッフルプレート９ａの
上部にある範囲内で行なったとき、被培養物は常時、液
浸状態で培養液１０は脈動状態となる。すなわち、バッ
フルプレート９上の被培養物には、水平方向の力が発生
するため、培養液１０の脈動攪拌中には上下運動するこ
となく、各々のバッフルプレート９上で静置状態を維持
することになる。

ここでいう脈動とは、培養液の液面が周期的又は断続的
に上丁動する動作をいう。

バッフルプレー１〜９上の被培養物は液体培地中に存在
し、所定量の培養液１０を培養槽１の底部から抜き出し
、かつ供給を繰り返すことによって培養液１０の攪拌効
果が得られる。このような操作の間にバッフルプレート
９上の被培養物が増殖する。被培養物の増殖過程におい
ては、バッフルプレート９が槽の高さ方向に多段に設置
されているために、被培養物は各バッフルプレート９上
に分割されて増殖し、被培養物の自重等による被培養物
の圧縮・破壊が解消される。被培養物の増殖が進行した
場合にも各バッフルプレート９はそれぞれ培養槽１の内
壁面に固定されることなく、槽の高さ方向に摺動可能に
設置されているために培養物の増殖の進行によってバッ
フルプレート９上の被培養物が増加した場合、各々のバ
ッフルプレート９間の間隙が大きくなり、被培養物の圧
縮・破壊が回避されることになる。

前記したように各バッフルプレート９上の被培養物は、
常時培養液に接触した状態で培養液が脈動するが、これ
らの操作の間に培養液を培養槽１から抜き出し各々のバ
ッフルプレート９上の被培養物を空気にさらす状態にし
、空気ノズル１１がら空気を被培養物に吹き込むと、被
培養物に対する酸素の供給が効率的となる。最上段のバ
ッフルプレー）９ａの上部に培養液の液面が存在して脈
動させる間にも空気ノズル１１がら空気を吹き込むこと
によって培養液中の溶存酸素量を高めることができる。

すなわち、培養液との有効接触面積（ａ）が増大し、酸
素移動係数（ｋ、）が一定の時、酸素移動容量係数（ｋ
、）が増大する。また、被培養物に直接空気を吹き付け
る場合、培養液中に被培養物が浸漬されている場合には
被培養物に対する酸素の供給が不足するが、被培養物に
直接空気を吹き付けると液膜を通して、被培養物に酸素
を供給できるために被培養物の内部が酸素不足となって
褐変する事態がなくなる。

第５図及び第６図は、第３図及び第３図に対応する変形
例を示している。第５図においてはバッフルプレート１
７の周縁部に多孔体からなる環状の開口部１８が設けら
れ、その外周縁部にゴム又は合成樹脂からなる弾性体〕
９が設けられている。

このようなバッフルプレート１７に相隣接するバッフル
プレート２０はその中心部に円形状の多孔体からなる開
口部２１が設けられ、外周縁部にはゴム又は合成樹脂か
らなる弾性体２２が設けられている。このようなバッフ
ルプレート１７．２０を支持部材２３を介して交互に配
置したものである。

本実施例においても、第３図及び第４図同様、被培養物
の上下方向の移動がなく、水平方向の移動のみを維持し
、被培養物を静置状態で培養液を攪拌することができる
ために、効率の良い培養を行うことができる。

次に第２図に示す培養装置においては、第１図の場合と
同様な構造からなる培養槽１がタンク２と導液管１３を
介して接続されている。タンク２は昇降装置１２によっ
て垂直方向に昇降自在に配置されでおり、タンク２内の
培養液］０の液面は７ ８ 培養槽１内の培養液の液面に対応するような位置に配置
されている。

この培養装置においては、昇降装置１２を介してタンク
２を垂直方向に上下動させることによって培養槽１内の
培養液に脈動状態を起こすことができ、第１図に示す培
養装置と同様な効果を発揮することができる。

前記したような培養装置においては、各々の八ツフルプ
レート９の外周縁部に設けられた弾性体１．６．１９．
２２が培養槽１の内壁面に摺動自在になっており、培養
液１０が培養槽１内で脈動する際、これらの弾性体１６
，１９．２２も脈動動作に応じて脈動するために、弾性
体と培養槽１の内壁面付近における培養液１０の液溜ま
りを防止することができる。このような液溜りの防止は
、培養槽内の洗浄の際の水切りに対しても有効である。

第１図及び第２図に示す培養装置においては、少なくと
もその一部に開口部を有するバッフルプレートを多段に
設置した例を示しているが、本発明は多段に設置するこ
となく一部に開口部を有するバッフルプレートを一段の
み設置してもよい。

さらに開口部を有しない多孔体からなるバッフルプレー
ト３０を培養槽１内に一段又は二段以上の多段に設置し
てもよい。

なお、本発明において上記した多孔体とは、所謂、多数
の連続孔を有するものであればよく、セラミックス、金
属の焼結体等の他にメツシュ状のものでもよい。

多孔体に形成される孔の径は、被培養物の種類等により
当然界なるが、大略３０〜６０μｍ程度が望ましい。さ
らに各バッフルプレート上の被培養物が増殖してその容
積を拡大したときに、各バッフルプレートが上下方向に
伸縮可能な構造とすることが望ましい。このような構造
として、培養槽の内壁面にバッフルプレートが上昇する
際は、通過可能で、バッフルプレートが下降するときに
係止可能な形状からなるホックを設けることが望ましい
。

次に本発明による脈動攪拌時のバッフルプレートによる
培養液の水平方向流れの形成が被培養物の拡散を抑制す
る原理を第７図及び第８図を基に説明する。

第７図は一部に開口部を有するバッフルプレートを多段
化した装置、第８図は全面多孔体のバッフルプレートを
多段化した装置である。

バッフルプレート９の多段化によって培養液流れ２５（
線速度ベクトル）は培養液流れの水平方向成分２６と培
養液流れの軸方向成分２７に分解され、被培養物の培養
槽内での分散が抑制され、被培養物をバッフルプレート
９上に静置することができる。

第９図は、バッフルプレートが全面多孔体からなるとき
（図中、■で示す）と、バッフルプレートがその一部に
開口部を有するとき（図中、■で示す）における開口部
（バッフルプレート通液部）の平均線速度と、被培養物
の槽内軸方向最大移動距離との関係を示している。なお
、第９図において、被培養物の比重は、約１．０２であ
る。

第９図から明らかなように、バッフルプレートが全面多
孔体からなるとき（■）では、バッフルプレート通液部
の平均線速度が４７ｍｍ／ｍａｎを超えると、被培養物
が静置状態を維持することができなくなり、一方、バッ
フルプレート通液部の平均線速度が１５ｎｎｎ／ｍｉｎ
よりも遅いと、バックルプレート上の培養液の撹拌が不
十分となり、効率的な増殖が困難となる。

したがって、バッフルプレートが全面多孔体からなると
きは、バッフルプレート通液部の平均線速度を１５胴／
　ｍ　ｉ　ｎ〜４７肛／　ｍ　ｉ　ｎとすることが望ま
しい。

バッフルプレートがその一部に開口部を有するとき（■
）では、バッフルプレート通液部の平均線速度が１６６
ｍｍ／ｍｉｎを超えると、被培養物が静置状態を維持す
ることができなくなり、一方、バッフルプレート通液部
の平均線速度が５３ｍｍ／ｍｉｎよりも遅いと、バッフ
ルプレート上の培養液の撹拌が不十分となり、効率的な
増殖が困難となる。

したがって、バッフルプレーＩ・がその一部に開１ ２ 口部を有するときは、バッフルプレート通液部の平均線
速度が５３　ｍｍ／ｍｉｎ　〜１６６　ｍｍ／ｍｉｎと
することが望ましい。

次に本発明の培養方法を実施例によりさらに詳細に説明
する。

実施例　１ 第３図に示すような一部に開口部を有するバッフルプレ
ートを培養槽内に一段又は二段以上設置し、ポンプ３の
作動で、有効容積１３ｆｆｉの培養槽１の底部より、２
．！Ｍ！／ｍｉｎの吸引速度で４５ｓｅｃ培養液１０は
培養槽１内からタンク２に送液される。吸引開始４５ｓ
ｅｃ後の培養槽１内の培養液１０の液面は最上段のバッ
フルプレー）９ａの上部にあり、バッフルプレー）９ａ
上の被培養物は全て液体培地内に存在する。

次いでポンプ３の作動が停止すると同時に閉していた電
磁弁８が開き、培養槽ｌから抜き出された培養液１０が
再び培養槽１内に送液される。すなわち被培養物は常に
液体培地内にあるバッフルプレート９」二にあり、培養
液１０がタンク２と培養槽１との間で吸引２吐出を繰り
返し、培養槽１内において培養液１０が脈動あるいは攪
拌状態にあっても、静置状態を維持する。このときの培
養液の軸方向線速度は１６６ｍｍ／ｍｉｎであった。空
気は上部吹き付はノズル１１より間欠的あるいは連続的
に供給される。

以上の培養方法において従来の液体培養法では培養する
ことのできなかった極小の攪拌強度で破壊し、活性を失
うもろいカルスやプロトコーム様球体（Ｐ　Ｌ　Ｂ　）
の培養が可能となった。

実施例　２ 実施例１と同様の培養装置において、ポンプ３の作動で
有効容積１３ｆｆｉの培養槽１９底部より２゜５ｆｆｉ
／ｍｉｎの吸引速度で１（１０　ｓｅｃ培養液１０は培
養槽１内からタンク２に送液される。タンク２への送液
開始６０　ｓｅｃ後、バッフルプレート９は気相（この
場合は空気）と接触する。この気相との接触時間は７０
　ｓｅｃであった。タンク２への送液開始７５ｓｅｃ後
、タンク２より培養液供給ノズル５を通じて培養液１０
が培養槽１の上部より、気相に接触中の被培養物に噴霧
される。この培養液１０の培養槽１の上部からの供給時
間は２５ｓｅｃであった。

次いでポンプ３の作動が停止し、閉じていた電磁弁８が
開き、培養液１０は培養槽１の底部から培養槽１内に送
り込まれ、ポンプ作動前の培養液液面レベルに戻り、バ
ッフルプレート９上の被培養物は全て培養液中に入る。

電磁弁８は１２０ｓｅｃ開いており、２２０　ｓｅｃ後
に再びポンプ３が作動を開始する。この間、空気は上部
吹き付はノズル１１より間欠的あるいは連続的に供給さ
れる。

本実施例における培養液の軸方向線速度は１６６ｍｍ　
／　ｍ　ｉ　ｎであった。以上の培養方法において、常
時、被培養物が液体培地中にある状態では培養できない
あるいは増殖が遅い例えばカンゾウ根茎由来カルスの培
養が可能になった。

実施例　３ 全面が通液可能なバッフルプレートを培養槽内に一段又
は二段以上配置し、ポンプの作動で、有効容積１３！の
培養槽底部より、０．８〜２．ｉ／ｍｉｎの吸引速度あ
るいは吐出速度で培養槽内の培養液を出し入れさせたと
き、比重約１．０２の被培養物は液中に浸漬していても
プレー１〜上で静置状態を維持した。このときの培養液
の軸方向線速度は１５〜４７ｍｍ／ｍｉｎである。この
ときの被培養物の軸方向最大移動距離を第１表に示す。

第　　１　　表 なお、本発明において、被培養物としては、グリチルリ
チン含有カンゾウ細胞塊、不定根、毛状根を用いること
ができる。

［発明の効果〕 以上のように本発明によれば、 （１）　　培養液の培養槽内におりる脈動運動及び培養
６ 液の出し入れを実施しても被培養物の破壊がなく、また
、被培養物は培養液中で静置状態に維持しながら、培養
液の攪拌及び抜き出しが可能であるので、特に懸濁培養
を好まない器官培養等の場合、被培養物を効率よく培養
することができる。

（２）培養物を同一の培養槽で気相は液相に接触させる
ことができ、かつ培養槽の上部から空気等のガスを吹き
つけることが可能となり、被培養物の内部に酸素を効率
的に供給できるため、被培養物の増殖速度が速くなる。

（３）　　バッフルプレートの多段化により、被培養物
を培養槽の上部から下部に均一に分布させることができ
、高密度で、かつ全ての被培養物が同一の成長過程で培
養することができる。また、増殖した被培養物の自重に
より培養槽底部の被培養物が圧縮され、破壊されること
がない。

（４）　　タンクの昇降装置を設置する場合には、ポン
プ等を用いることなく、培養液の送液が可能となり、こ
れによって、連続無菌培養が可能となる。

以上のような効果から、被培養物を高増殖率で培養でき
、生合成を利用した有用物質の組織培養生産の高効率化
が図られる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の培養装置の一実施例を示す概略的構成
図、第２図は本発明の培養装置の他の実施例を示す概略
的構成図、第３図は第１図及び第２図の培養装置におけ
るバッフルプレートの配置状態を示す説明図、第４図は
第１図及び第２図の装置における要部拡大縦断面図、第
５図及び第６図は第３図及び第３図に対応する変形例を
示す説明図及び拡大縦断面図、第７図及び第８図は本発
明による培養液の流れ状態の原理を示す説明図、第９図
はハフフルプレート通液部平均線速度と、被培養物の槽
内軸方向最大移動距離との関係を示すグラフ、第１０図
、第１１図、第１２図は従来の培養装置を示す概略的構
成図である。 １・・・・・・培養槽、２・・・・・・タンク、３・・
・・・・ポンプ、５・・・・・・培養液供給ノズル、８
・・・・・・電磁弁、９・・・・・・バッフルプレート
、１０・・・・・・培養液、１１・・・・・・空気ノズ
ル、１２・・・・・・昇降装置、１４・・・・・・支持
部材、１５　ａ、　　１５　ｂ、　　１５　ｃ−開口部
（通液部）、１６・・・・・・弾性体、１７ａ、１７ｂ
、１７ｃ・・・・・・バッフルプレート、１８．２１・
・・・・・開口部（通液部）、１９．２２・・・・・・
弾性体、２３・・・・・・支持部材、３０・・・・・・
バッフルプレート。

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. （１）培養槽内に、全面又はその一部にカルス乃至毛状
   根が通過しない程度以下の多数の孔を有する多孔体から
   なる培養液通液部を備えたバッフルプレート上の被培養
   物が静置状態を維持しうる範囲内で、槽内の培養液液面
   を周期的又は断続的に上下動させて被培養物を培養する
   ことを特徴とする培養方法。
2. （２）前記バッフルプレートが、培養槽内に一段設置さ
   れていることを特徴とする請求項（１）記載の培養方法
   。
3. （３）前記バッフルプレートが、培養槽の高さ方向に沿
   って間隔をもって多段に設置されていることを特徴とす
   る請求項（１）記載の培養方法。
4. （４）前記バッフルプレートが、全面にカルス乃至毛状
   根が通過しない程度以下の多数の孔を有する多孔体から
   なる培養液通液部を有し、該通液部を上下動する培養液
   の平均線速度が１５ｍｍ／ｍｉｎ〜４７ｍｍ／ｍｉｎの
   範囲にあることを特徴とする請求項（１）記載の培養方
   法。
5. （５）前記バッフルプレートが、その一部にカルス乃至
   毛状根が通過しない程度の多数の孔を有する多孔体から
   なる培養液通液部を備え、該通液部を上下動する培養液
   の平均線速度が５３ｍｍ／ｍｉｎ〜１６６１ｍｍ／ｍｉ
   ｎの範囲にあることを特徴とする請求項（１）記載の培
   養方法。
6. （６）前記バッフルプレート上の被培養物が周期的又は
   断続的に空気若しくは酸素を含む気相と接触するように
   培養槽内の培養液液面を上下動させることを特徴とする
   請求項（１）記載の培養方法。
7. （７）前記培養槽の上部から間欠的又は連続的に空気を
   供給することを特徴とする請求項（１）記載の培養方法
   。
8. （８）前記被培養物が、グリチルリチン含有カンゾウ細
   胞塊、不定根、毛状根を用いることを特徴とする請求項
   （１）乃至請求項（７）のいずれかに記載の培養方法。
9. （９）培養槽内に、全面又はその一部にカルス乃至毛状
   根が通過しない程度以下の多数の孔を有する多孔体から
   なる培養液通液部を備えたバッフルプレートを一段又は
   多段に設け、前記バッフルプレート上の被培養物が静置
   状態を維持しうる範囲内で槽内の培養液液面を周期的又
   は断続的に上下動させるための培養液脈動手段を備えた
   ことを特徴とする培養装置。
10. （１０）前記バッフルプレートが、培養槽の高さ方向に
    間隔をもって二段以上に設置され、相隣接するバッフル
    プレートに形成された培養液通液部は、一方の通液部の
    位置に対し他方のバッフルプレートに形成された培養液
    通液部は他方のバッフルプレートに形成された培養液通
    液部に対し、水平方向に移動した位置に配置されている
    ことを特徴とする請求項（９）記載の培養装置。
11. （１１）前記培養槽に並設して培養液を貯留するタンク
    を設け、該タンクと前記培養槽との間を導液管を介して
    接続すると共に、前記タンク内の培養槽を前記培養槽に
    供給排出するための培養液吸引排出手段を備えたことを
    特徴とする請求項（９）記載の培養装置。
12. （１２）前記培養液の吸引排出手段が、前記導液管に配
    設されたポンプと該ポンプに対してバイパスラインを設
    け、該バイパスラインに電磁弁を設けたことを特徴とす
    る請求項（１１）記載の培養装置。
13. （１３）前記培養液吸引排出手段が、前記培養槽に並設
    して設けられたタンクと該タンクと前記培養槽を連結す
    る導液管とを備え、前記タンクを上下方向に昇降させる
    昇降装置を設けたことを特徴とする請求項（１１）記載
    の培養装置。
14. （１４）前記バッフルプレートが、その外周縁部にゴム
    又は合成樹脂からなる弾性体を備え、該弾性体が前記培
    養槽の内壁面で摺動自在に設けられていることを特徴と
    する請求項（９）記載の培養装置。