JPH0329398B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH0329398B2 JPH0329398B2 JP57207315A JP20731582A JPH0329398B2 JP H0329398 B2 JPH0329398 B2 JP H0329398B2 JP 57207315 A JP57207315 A JP 57207315A JP 20731582 A JP20731582 A JP 20731582A JP H0329398 B2 JPH0329398 B2 JP H0329398B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- medium
- spore
- value
- sterilization
- bacterial suspension
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Apparatus For Disinfection Or Sterilisation (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
技術分野
本発明は滅菌における生物学的インジケーター
用菌懸濁液およびその製法に関するものである。 さらに詳しくは、バチルス ステアロサーモフ
イルス（Bacillus stearothermophilus）を適当
な溶媒に懸濁させてなる滅菌における一定したＤ
値を有する生物学的インジケーター用菌懸濁液お
よびその製法に関する。 医療器具等の滅菌は、高圧蒸気を使用するオー
トクレーブ滅菌法やエチレンオキサイドガス
（EOG）を使用するガス滅菌法により行なわれ
る。その際、滅菌の程度を知るために生物学的イ
ンジケーターが使用される。この生物学的インジ
ケーターとしては、紙上にバチルス ステアロ
サーモフイルス等の胞子の懸濁液を紙一片当り
の胞子数が102〜106個となるように紙に吸収さ
せて乾燥させたものがある。使用に際しては、こ
の紙片を被滅菌物とともに滅菌処理し、その
後、該紙片に付着した胞子を適当な培地で培養
し、培養によつて微生物が生育すれば滅菌が不充
分であると判定され、微生物が生育しなければ滅
菌が完全であると判定される。このような生物学
的インジケーターにおいて指標菌として使用され
る菌は、一定の滅菌条件下では常に一定数の菌が
死滅するようなものでなければならない。このよ
うな指標菌の力価を表わす数値としてＤ値
（Decimal reduction value）がある。Ｄ値とは
一定の滅菌条件下で最初の生菌数の1/10に減少
（90％死滅）させるのに必要な時間（分）を意味
する。そこで生物学的インジケーターの信頼度を
高めるためには、できるだけバラつきの少ないＤ
値を与える生物学的インジケーターが要求され
る。 先行技術および問題点 従来、バチルス ステアロサーモフイルスは、
オートクレーブ滅菌法における指標菌として使用
されているが、それを担持させた生物学的インジ
ケーターのＤ値は必ずしも一定ではなく、よりバ
ラつきの少ないものが要望されていた。 発明の目的 そこで本発明者等は、可及的にバラつきの少な
いＤ値を有する生物学的インジケーター用菌懸濁
液を提供すべく鋭意研究を重ねた結果、本発明を
完成させた。 即ち、本発明の目的は、次の構成を有する生物
学的インジケーター用菌懸濁液の製法によつて達
成される。 バチルス ステアロサーモフイルス（Bacillus
stearothermophilus）を普通寒天培地上で増菌
培養し、さらに芽胞形成培地で培養し、得られた
菌体を生理食塩水に懸濁させてなる滅菌における
生物学的インジケーター用菌懸濁液の製法におい
て、前記芽胞形成培地への塗抹量は、普通寒天培
地から芽胞形成培地への移植面積比を１：１と
し、芽胞形成培養温度を約60℃とし、培養時間を
約72時間とすることを特徴とする115℃の滅菌に
おけるＤ値が2.14±0.14分（95％信頼限界）であ
る生物学的インジケーター用菌懸濁液の製法。 発明の具体的説明 本発明の生物学的インジケーター用菌懸濁液
は、バチルス ステアロサーモフイルス
（Bacillus stearothermophilus）を普通寒天培
地上で増菌培養し、菌体の一定量を芽胞形成培地
に移植塗抹し、該培地上で一定の温度および時間
で培養し、得られた菌体を適当な溶媒に懸濁させ
ることによつて得られる。一定の高いＤ値を有す
るバチルス ステアロサーモフイルス懸濁液を得
るためには、増菌培地から芽胞形成培地への移植
塗抹量を多くすることが必要である。好適には、
増菌培地から芽胞形成培地への移植面積比を１：
１とする。さらに、一定のＤ値を与えるためには
芽胞培養における温度および時間を一定にするこ
とが必要である。 上記製法において、上記移植面積比を１：１と
し、培養温度を約60℃とし、培養時間を約72時間
とするとＤ値が115℃において2.14±0.14分（95
％信頼限界）という極めて変動の小さい菌懸濁液
が得られる。 一定の低いＤ値を有するバチルス ステアロサ
ーモフイルス懸濁液は、上記移植塗抹量を少なく
し、例えば移植面積比を１：３とし、芽胞培養を
約57℃で約120時間行い、適当な溶媒に懸濁後、
90℃、30分の加熱処理を行うとＤ値が115℃で
0.56±0.14分（95％信頼限界）の菌懸濁液が得ら
れる。しかしながら、Ｄ値が一定であつてもこの
ように低い力価の菌懸濁液はあまり実用的ではな
い。 上記製法において菌体を懸濁させる溶媒として
は生理食塩水が好ましい。培地としては通常本菌
の培養に使用されるもの、即ち、普通寒天培地、
トリプトソイ寒天培地等が使用される。 本発明の菌懸濁液は常法に従つて適当な担体例
えば紙、メンブランフイルター、ガラスフイル
ター、ザイツフイルター等に担持させて使用され
る。 次に実施例を示して本発明をさらに具体的に説
明する。 実施例 (A) 実験材料および方法 (1) 使用菌株 オートクレーブ滅菌用指標菌としてバチル
ス ステアロサーモフイルス（Bacillus
stearothermophilus）IAM11001株を用い
た。 (2) 菌懸濁液の耐熱性試験法 該菌体をガラスキヤピラリーに封入後、
115℃で一定時間（１〜４分間）処理し、生
理食塩水で段階希釈を行つたのち、トリプト
ソイ寒天培地と混釈し60℃、48時間培養し生
じたコロニー数を計測する。 (3) Ｄ値測定法 処理条件下で経時的に生残菌数を測定し、
その生残曲線より求めた。 (4) 力価 力価の標準値としては、米国薬局方第20版
（USPXX）に従がい、Ｄ値1.5分を目安とし
て用いた。 (5) 検討因子 該菌体を紙片に生菌を付着させる前段階
までの菌懸濁液の調製方法に主眼を置いて検
討した。その調製法は次の通りである。保存
株を普通寒天培地上で増菌後、更に芽胞形成
培地で培養する。生理食塩水に懸濁させ、必
要ならば、90℃、30分の加熱処理を行つたの
ち、生菌数測定及び耐熱性試験を行つたの
ち、紙片に付着させ乾燥させる。検討因子
としては、普通寒天培地での培養温度、芽胞
形成培地での培養温度、時間及びその培地へ
の塗抹量及び加熱処理の有無の４因子をとり
挙げ、L16直交表に割りつけた。各因子の水
準内容は次の通りである。 因子 Ａ：芽胞形成培地での培養時間（時間）：
A1：48、A2；72、A3；96、A4；120 Ｂ：培養温度（Ｃ）：B1；57、B2；60、B3；
63 （普通寒天及び芽胞形成培地） Ｃ：芽胞形成培地への塗抹量 C1；多い
C2；少ない この「多い」とは、普通寒天培地から芽
胞形成培地へ移植する際、移植面積比を
１：１の割合で移植したものをいい、１：
３としたものを「少ない」と称している。 Ｄ：加熱処理 D1；有、D2；無 （90℃、30分） 交互作用はＡ×Ｂを求めた。 【表】 上記表における１乃至４の数字は各因子記
号（Ａ〜Ｄ）における右下付番号を示し、例
えばＡ因子欄の数字１はA1を数字２はA2を
それぞれ意味する。 (B) 実験結果 測定結果は、Ｄ値を計算して表−１にまとめ
た。得られた数値を用いて分散分析を行うと表
−２の如くなつた。検討した因子にはいずれも
有意差が認められた。各因子の水準間の差は第
１図乃至第４図の通りである。 【表】 【表】 【表】 ＊ 実験番号
【表】 発明の具体的効果 上に詳述したように、本発明によれば、バチル
ス ステアロサーモフイルスを溶媒に懸濁してな
る滅菌における一定したＤ値を有する生物学的イ
ンジケーター用懸濁液およびその製法が提供され
る。 本発明によればさらに、上記Ｄ値が115℃にお
いて2.14±0.14分（95％信頼限界）である生物学
的インジケーター用懸濁液およびその製法が提供
される。
用菌懸濁液およびその製法に関するものである。 さらに詳しくは、バチルス ステアロサーモフ
イルス（Bacillus stearothermophilus）を適当
な溶媒に懸濁させてなる滅菌における一定したＤ
値を有する生物学的インジケーター用菌懸濁液お
よびその製法に関する。 医療器具等の滅菌は、高圧蒸気を使用するオー
トクレーブ滅菌法やエチレンオキサイドガス
（EOG）を使用するガス滅菌法により行なわれ
る。その際、滅菌の程度を知るために生物学的イ
ンジケーターが使用される。この生物学的インジ
ケーターとしては、紙上にバチルス ステアロ
サーモフイルス等の胞子の懸濁液を紙一片当り
の胞子数が102〜106個となるように紙に吸収さ
せて乾燥させたものがある。使用に際しては、こ
の紙片を被滅菌物とともに滅菌処理し、その
後、該紙片に付着した胞子を適当な培地で培養
し、培養によつて微生物が生育すれば滅菌が不充
分であると判定され、微生物が生育しなければ滅
菌が完全であると判定される。このような生物学
的インジケーターにおいて指標菌として使用され
る菌は、一定の滅菌条件下では常に一定数の菌が
死滅するようなものでなければならない。このよ
うな指標菌の力価を表わす数値としてＤ値
（Decimal reduction value）がある。Ｄ値とは
一定の滅菌条件下で最初の生菌数の1/10に減少
（90％死滅）させるのに必要な時間（分）を意味
する。そこで生物学的インジケーターの信頼度を
高めるためには、できるだけバラつきの少ないＤ
値を与える生物学的インジケーターが要求され
る。 先行技術および問題点 従来、バチルス ステアロサーモフイルスは、
オートクレーブ滅菌法における指標菌として使用
されているが、それを担持させた生物学的インジ
ケーターのＤ値は必ずしも一定ではなく、よりバ
ラつきの少ないものが要望されていた。 発明の目的 そこで本発明者等は、可及的にバラつきの少な
いＤ値を有する生物学的インジケーター用菌懸濁
液を提供すべく鋭意研究を重ねた結果、本発明を
完成させた。 即ち、本発明の目的は、次の構成を有する生物
学的インジケーター用菌懸濁液の製法によつて達
成される。 バチルス ステアロサーモフイルス（Bacillus
stearothermophilus）を普通寒天培地上で増菌
培養し、さらに芽胞形成培地で培養し、得られた
菌体を生理食塩水に懸濁させてなる滅菌における
生物学的インジケーター用菌懸濁液の製法におい
て、前記芽胞形成培地への塗抹量は、普通寒天培
地から芽胞形成培地への移植面積比を１：１と
し、芽胞形成培養温度を約60℃とし、培養時間を
約72時間とすることを特徴とする115℃の滅菌に
おけるＤ値が2.14±0.14分（95％信頼限界）であ
る生物学的インジケーター用菌懸濁液の製法。 発明の具体的説明 本発明の生物学的インジケーター用菌懸濁液
は、バチルス ステアロサーモフイルス
（Bacillus stearothermophilus）を普通寒天培
地上で増菌培養し、菌体の一定量を芽胞形成培地
に移植塗抹し、該培地上で一定の温度および時間
で培養し、得られた菌体を適当な溶媒に懸濁させ
ることによつて得られる。一定の高いＤ値を有す
るバチルス ステアロサーモフイルス懸濁液を得
るためには、増菌培地から芽胞形成培地への移植
塗抹量を多くすることが必要である。好適には、
増菌培地から芽胞形成培地への移植面積比を１：
１とする。さらに、一定のＤ値を与えるためには
芽胞培養における温度および時間を一定にするこ
とが必要である。 上記製法において、上記移植面積比を１：１と
し、培養温度を約60℃とし、培養時間を約72時間
とするとＤ値が115℃において2.14±0.14分（95
％信頼限界）という極めて変動の小さい菌懸濁液
が得られる。 一定の低いＤ値を有するバチルス ステアロサ
ーモフイルス懸濁液は、上記移植塗抹量を少なく
し、例えば移植面積比を１：３とし、芽胞培養を
約57℃で約120時間行い、適当な溶媒に懸濁後、
90℃、30分の加熱処理を行うとＤ値が115℃で
0.56±0.14分（95％信頼限界）の菌懸濁液が得ら
れる。しかしながら、Ｄ値が一定であつてもこの
ように低い力価の菌懸濁液はあまり実用的ではな
い。 上記製法において菌体を懸濁させる溶媒として
は生理食塩水が好ましい。培地としては通常本菌
の培養に使用されるもの、即ち、普通寒天培地、
トリプトソイ寒天培地等が使用される。 本発明の菌懸濁液は常法に従つて適当な担体例
えば紙、メンブランフイルター、ガラスフイル
ター、ザイツフイルター等に担持させて使用され
る。 次に実施例を示して本発明をさらに具体的に説
明する。 実施例 (A) 実験材料および方法 (1) 使用菌株 オートクレーブ滅菌用指標菌としてバチル
ス ステアロサーモフイルス（Bacillus
stearothermophilus）IAM11001株を用い
た。 (2) 菌懸濁液の耐熱性試験法 該菌体をガラスキヤピラリーに封入後、
115℃で一定時間（１〜４分間）処理し、生
理食塩水で段階希釈を行つたのち、トリプト
ソイ寒天培地と混釈し60℃、48時間培養し生
じたコロニー数を計測する。 (3) Ｄ値測定法 処理条件下で経時的に生残菌数を測定し、
その生残曲線より求めた。 (4) 力価 力価の標準値としては、米国薬局方第20版
（USPXX）に従がい、Ｄ値1.5分を目安とし
て用いた。 (5) 検討因子 該菌体を紙片に生菌を付着させる前段階
までの菌懸濁液の調製方法に主眼を置いて検
討した。その調製法は次の通りである。保存
株を普通寒天培地上で増菌後、更に芽胞形成
培地で培養する。生理食塩水に懸濁させ、必
要ならば、90℃、30分の加熱処理を行つたの
ち、生菌数測定及び耐熱性試験を行つたの
ち、紙片に付着させ乾燥させる。検討因子
としては、普通寒天培地での培養温度、芽胞
形成培地での培養温度、時間及びその培地へ
の塗抹量及び加熱処理の有無の４因子をとり
挙げ、L16直交表に割りつけた。各因子の水
準内容は次の通りである。 因子 Ａ：芽胞形成培地での培養時間（時間）：
A1：48、A2；72、A3；96、A4；120 Ｂ：培養温度（Ｃ）：B1；57、B2；60、B3；
63 （普通寒天及び芽胞形成培地） Ｃ：芽胞形成培地への塗抹量 C1；多い
C2；少ない この「多い」とは、普通寒天培地から芽
胞形成培地へ移植する際、移植面積比を
１：１の割合で移植したものをいい、１：
３としたものを「少ない」と称している。 Ｄ：加熱処理 D1；有、D2；無 （90℃、30分） 交互作用はＡ×Ｂを求めた。 【表】 上記表における１乃至４の数字は各因子記
号（Ａ〜Ｄ）における右下付番号を示し、例
えばＡ因子欄の数字１はA1を数字２はA2を
それぞれ意味する。 (B) 実験結果 測定結果は、Ｄ値を計算して表−１にまとめ
た。得られた数値を用いて分散分析を行うと表
−２の如くなつた。検討した因子にはいずれも
有意差が認められた。各因子の水準間の差は第
１図乃至第４図の通りである。 【表】 【表】 【表】 ＊ 実験番号
【表】 発明の具体的効果 上に詳述したように、本発明によれば、バチル
ス ステアロサーモフイルスを溶媒に懸濁してな
る滅菌における一定したＤ値を有する生物学的イ
ンジケーター用懸濁液およびその製法が提供され
る。 本発明によればさらに、上記Ｄ値が115℃にお
いて2.14±0.14分（95％信頼限界）である生物学
的インジケーター用懸濁液およびその製法が提供
される。
第１図、第２図、第３図および第４図はそれぞ
れ芽胞形成培地での培養時間（因子Ａ）、培養温
度（因子Ｂ）、芽胞形成培地への塗抹量（因子Ｃ）
および加熱処理（因子Ｄ）における水準間の差を
示すグラフである。
れ芽胞形成培地での培養時間（因子Ａ）、培養温
度（因子Ｂ）、芽胞形成培地への塗抹量（因子Ｃ）
および加熱処理（因子Ｄ）における水準間の差を
示すグラフである。
Claims (1)
- １ バチルス ステアロサーモフイルス
（Bacillus stearothermophilus）を普通寒天培
地上で増菌培養し、さらに芽胞形成培地で培養
し、得られた菌体を生理食塩水に懸濁させてなる
滅菌における生物学的インジケーター用菌懸濁液
の製法において、前記芽胞形成培地への塗抹量は
普通寒天培地から芽胞形成培地への移植面積比を
１：１とし、芽胞形成培養温度を約60℃とし、培
養時間を約72時間とすることを特徴とする、115
℃の滅菌におけるＤ値が2.14±0.14分（95％信頼
限界）である生物学的インジケーター用菌懸濁液
の製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57207315A JPS5998697A (ja) | 1982-11-26 | 1982-11-26 | 生物学的インジケ−タ−用菌懸濁液およびその製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57207315A JPS5998697A (ja) | 1982-11-26 | 1982-11-26 | 生物学的インジケ−タ−用菌懸濁液およびその製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5998697A JPS5998697A (ja) | 1984-06-07 |
| JPH0329398B2 true JPH0329398B2 (ja) | 1991-04-24 |
Family
ID=16537731
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57207315A Granted JPS5998697A (ja) | 1982-11-26 | 1982-11-26 | 生物学的インジケ−タ−用菌懸濁液およびその製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5998697A (ja) |
-
1982
- 1982-11-26 JP JP57207315A patent/JPS5998697A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5998697A (ja) | 1984-06-07 |
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