JPH0331298A - プロリルエンドペプチターゼ阻害ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、ペプチドおよび／またはその塩を含有する健
忘症の予防または治療に使用できる栄養組成物およびこ
れに使用できる新規ペプチドに関する。

〔従来の技術〕

近年、食品蛍白質の酵素分解物中に、オピオイドペプチ
ド、ＡＣＥ阻害ペプチドなどの種々の薬理活性ペプチド
が存在することが報告されてきた（　Ｖ、Ｂｒａｎｔｌ
、　Ｈ，Ｔｅｓｃｈｅｍａｃｈｅｒ、　Ａ、Ｈｅｎｃｈ
ｅｎ、　ａｎｄＦ、　Ｌｏｔｔｓｐｅｉｃｈ：　Ｈａ　
　ｅ−Ｓｅｉｌｅｒ　ｓ　Ｚ、　Ｐｈ　５ｉｏｌ。

■叩ユ　３６０，１２１１　（１９７９）。

Ｓ、　　Ｌｏｕｋａｓ、　　Ｄ、　　Ｖａｒｏｕｃｈａ
、　　Ｃ，Ｚｉｏｕｄｒｏｕ＋　　Ｒ，八。

５ｔｒｅａｔｙ、　ａｎｄ　Ｗ、　Ａ、　Ｋｌｅｅ　：
　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ　、　　２２　。

４５６７　　（１９８３）。

Ｓ、Ｍａｒｕｙａｍａ、に、Ｎａｋａｇｏｍｉ、Ｎ、Ｔ
ｏｍｉｚｕｋａ、ａｎｄＨ，５ｕｚｕｋｉ　：　Ａ　ｒ
ｉｃ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、＋　　４９　（５）　
＋１４０５　（１９８５）、参照）。

この様なペプチドの実際の生理的意義は未だ明らかでは
ないが、食品として摂取される蛋白質中に、栄養という
一次的機能のほかに、生体制御の外来的因子の機能を果
たす可能性が見出されたことは興味深いことである。さ
らに母乳というヒトが最初に口にする唯一の“食品”は
様々な生体制御因子が含まれていて、健康に育っていく
源となっている。

最近Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇらによって人乳β−カゼインの
全アミノ酸配列が決定された（　Ｒ，Ｇｒｅｅｎｂｅｒ
ｇ、　Ｍ。

Ｌ、　Ｇｒｏｖｅｓ、　ａｎｄ　Ｈ，Ｊ、　Ｄｏｗｅｒ
　：Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、＋２５９　（８Ｌ　
　５１３２　（１９８４）、参照）。

この蛋白質より合成的手法を用いてＡＣＥ阻害活性を持
つペプチドが報告されている（特開平１８３０９６号公
報参照）。

この様に天然、食品中の蛋白質のアミノ酸配列に薬理作
用を持つものが見出されれば、それは従来の医薬より穏
やかな薬理効果を期待でき、安全な医薬、あるいは機能
性食品成分として応用できるのではないかと考えられる
。

一方、近年、医療技術等の進歩に伴い、高齢者の増加が
進んでいるが、老年痴呆は大きな社会問題になりつつあ
る。痴呆の薬理側学的あるいは神経化学的機序に関する
研究では、アルツハイマー型痴呆における脳内コリン作
動性神経系の機能低下環、神経伝達物質の変動のほか、
各種の神経ペプチドの関与が報告されている。神経ペプ
チドのうち、バソプレッシンは学習・記憶の過程に関与
し、脳内の記憶の固定に関与すると言われている（鶴　
大奥、芳本　忠：　ＢＩＯＩＮＤＵＳＴＲＹ　　４　（
１０）７８８−７９６　（１９８７）、参照）プロリル
エンドペプチダーゼ（ＥＣ３，４゜２１．２６）はプロ
リンを含むペプチドのプロリンのカルボキシル側をｉｎ
　ｖｉｔｒｏ、　ｉｎ　ｖｉｖｏで特異的に切断する酵
素で、バソプレッシンも分解・不活性化する（　Ｔ、　
Ｙｏｓｈｉｎ＋ｏｔｏ、　Ｔ、　ＮｉｓｈＮ１５ｈｉ、
　Ｔ。

Ｗｉｔａ、　　ａｎｄ　Ｄ、　Ｔｓｕｒｕ　：　Ｊ、　
Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　　９４　＋　　１１７９（１９８
３）参照）。また抗痴呆薬として開発されたアニラセタ
ム（ロシュ社）がこの酵素に対して阻害活性をもつこと
も報告され（Ｔ、　Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ＋に、　Ｋａｄ
ｏ、　Ｆ、　Ｍａｔｓｕｂａｒａ、　Ｎ、　Ｋｏｒｉｙ
ａｍａ、　Ｈ，Ｋａｎｅｔｏ。

ａｎｄ　Ｄ、　Ｔｓｕｒｕ　：　Ｊ、　Ｐｈａｒｍａｃ
ｏｂｉｏ　［）　ｎ、＋　　１０　＋７３０　（１９８
７）参照）、プロリルエンドペプチダーゼがバソプレッ
シンと共に記憶−健忘との関わりがあることを示唆して
いる。

さらには、ラット、マウスを用いた実験でプロリルエン
ドペプチダーゼに特異的な阻害剤が抗健忘症作用を示す
ことが報告されている。

プロリルエンドペプチダーゼの活性部位のサブサイトに
ついてはＳ３、Ｓ２．５１　、Ｓｔ　　、Ｓｔサイトが
酵素と基質の結合に関与すると報告されている（　Ｒ，
Ｗａｌｔｅｒ、　ａｎｄ　Ｔ、　Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ：
　Ｂｉｏ−句匹見■１ひ工１７　（２０）、、４９３９
　（１９７８）参照）。その基質特異性はＰ、にＬ−プ
ロリン、Ｐｚ、Ｐ＋’にＬ体の光学特異性があり、Ｐ３
に疎水性基が存在すると反応は高くなり、Ｐ４あるいは
Ｐ、’へ鎖長を延ばすと反応性は低下する。

最近、鶴らは、非競争阻害を示すＺＰｒｏ−ＸＩＯ−’
μＭ）を合成しており、酵素阻害剤としてはＰ３からＰ
＋までの鎖長を持つものが有効であるとしている（鶴　
大奥、芳本　忠、山元面子。

郡山信宏、池沢竜平、古川　淳、赤羽健司、倉科喜−：
第１６回構造活性相関シンポジウム講演要旨集２３０−
２３３　（１９８８）。

Ｄ、　Ｔｓｕｒｕ、　Ｔ、　Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ＋　Ｎ
、　Ｋｏｒｉｙａｍａ、　ａ−ｎｄ　Ｓ。

Ｐｕｒｕｋａｗａ　：　Ｊ　　Ｂｉｏｃｈｅｍ、＋　１
０４．５８０（１９８Ｂ）、参照）。

既に新しい抗健忘薬のターゲットとして、プロリルエン
ドペプチダーゼ阻害剤の研究が進められている。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明は、プロリルエンドペプチダーゼの阻害活性を有
するペプチドを検索し、健忘症の予防または治療の効果
を有する栄養組成物及び安全性の高い薬剤を開発するこ
とを目的としている。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、上記課題につき鋭意検討を行ない、人乳
β−カゼイン中の薬理活性を検討した結果、下記構造式
で示されるペプチドが、プロリルエンドペブチターゼ阻
害活性を有することを見出し、本発明を完成した。

Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ １１ｉｓ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−ＰｒｏＩｌｅ−Ｔｙ
ｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＶａｌＩｌｅ−Ｔｙ
ｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＧｌｕＩｌｅ−Ｔｙｒ−
Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　−Ｇｌｕ−ＰｒｏＩｌｅ−Ｔｙ
ｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−ｒｌｅ
Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　　−Ｇｌｕ−
Ｐｒｏ−１ｅ−ＰｒｏＴｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　
−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ４　ｅＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　　−Ｇ
ｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＰｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
−Ｉ　　ｅＶａ　　−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ に１ｌ−ｐｒｏ−Ｉｌｅ Ｌｅｕ−１１ｓ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇ
ｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ
−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＰｈｅ−Ｖａｌ−Ｇ
ｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＶａｌ−Ｇｌｕ
−Ｐｒｏ−Ｔｉｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＧｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉ
ｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＰｒｏ−ｒｌｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ このうち、下記構造式で示されるペプチドは新規である
。

Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ ｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ ｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ ｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　　−Ｇ　ｕｅ−Ｔ
ｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　　−Ｇ　　ｕ−Ｐｒｏｅ
−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　　−Ｇ　ｕ−Ｐｒｏ
−１ｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　　−Ｇ　ｕ−
Ｐｒｏ−ＩＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａ　　−Ｇ　　ｕ−Ｐｒ
ｏ−ＩＰｈｅ−Ｖａ　　−Ｇ　　ｕ−Ｐｒｏ Ｖａ　　−Ｇ　　ｕ−Ｐｒｏ− Ｇ　　ｕ−Ｐｒｏ Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇ
　　ｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉ Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−１ ｅ−Ｐｒｏ ｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ ｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ ｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ 即ち、本発明は上記新規ペプチド及びプロリルエンドペ
プチターゼ阻害活性を有するペプチドおよびその塩の少
なくとも一種を含有する栄養組成物である。

塩の形態の場合、その塩類としては、塩酸塩、臭化水素
酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩
および酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、マレ
イン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、メタンスル
ホン酸塩、Ｐ−）ルエンスルホン酸塩等の有機酸塩が挙
げられる。なお、医薬に含有する場合は、医薬上許容さ
れる塩の形態をとる。

ペプチドを構成するアミノ酸は、天然に存在するという
点でＬ一体が望ましい。

本発明のペプチドはペプチド合成に通常用いられる固相
法で、ペプチド結合の任意の位置で二分される２種のフ
ラグメントの一方に相当する反応性カルボキシル基を有
する原料と、他方のフラグメントに相当する反応性アミ
ノ基を有する原料をジシクロへキシルカルボジイミド法
を用いて縮合させ、生成する縮合物が保護基を有する場
合、その保護基を除去させることにより製造し得る。

この反応工程において反応に関与すべきでない官能基は
、保護基により保護される。アミノ基の保護基としては
、例えばベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシ
カルボニル、Ｐ−ビフェニルイソプロピルオキシカルボ
ニル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル等が挙
げられる。Ｃ端のカルボキシル基はクロルメチル樹脂、
オキシメチルＰＡ脂、ｐ−アルコキシベンジルアルコー
ル樹脂等の担体に結合している。

縮合反応は、ジシクロへキシルカルボジイミド等の縮合
剤の存在下にて実施する。

縮合反応終了後、保護基は除去され、さらにペプチドの
Ｃ端と樹脂との結合を切断する。

さらに、本発明の新規ペプチドは通常の方法に従い精製
される。例えばイオン交換クロマトグラフィー、逆相液
体クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフ
ィー等が挙げられる。

本発明の栄養組成物は、医薬又は食品の形態で提供でき
る。医薬は、経口的に又は非経口的に適用され得る。

本発明の医薬が提供される形態としては、経口投与用に
は、例えば、散剤、顆粒、錠剤、糖衣錠、カプセル、液
剤等、非経口投与用には例えば、懸濁液、液剤、乳剤、
アンプル及び注射液等が挙げられ、或いは、これらを組
合せた形態でも提供できる。組合せ得る希釈剤としては
、固体、半固体及び液体のいずれでもよく、例えば、水
、ゼラチン、ｖＮ類、澱粉類、脂肪酸、その塩、アルコ
ール、油脂、タルク、生理食塩水等又はこれらの２種以
上の組合せが挙げられる。本発明医薬におけるペプチド
及び／又はそれらの塩の総重量が占める比率は、一般に
０．０１〜１００重景％であ重量一方、本発明組成物は
、食品として極めて有効に提供し得る。本発明の食品に
おけるペプチド及び／又はそれらの塩の総重量の占める
比率は、−般に０．０１〜１０％である。官能面で、本
発明のアミノ酸の高濃度での使用が好ましくない場合、
例えば、比較的高融点の油脂、蛋白、澱粉等でカプセル
化して用いる、或いは、マスキング剤を併用する等の方
法の採用が好ましい。

１土■ 以下、実施例により本発明を具体的に説明する。

なお、本明細書中で用いた略号は、次の意味を有する。

Ａｌａ、　Ａ Ａｒｇ、　Ｒ Ａｓｎ＋　Ｎ Ａｓｐ、　Ｄ Ｇｌｎ、　Ｑ Ｇｌｕ、　Ｅ Ｇｌｙ、　Ｇ 旧ｓ、！！ Ｉｌｅ、　！ Ｌｅｕ、　Ｌ Ｌｙｓ、　Ｋ Ｐｈｅ＋　’ アラニン（以下アミノ酸は全てＬ体） アルギニン アスパラギン アスパラギン酸 グルタミン グルタミン酸 グリシン ヒスチジン イソロイシン ロイシン リジン フェニルアラニン Ｐｒｏ、　　Ｐ Ｓｅｒ、　　５ Ｔｈｒ、　　Ｔ Ｔｒｐ、　　Ｗ Ｔｙｒ、　　Ｙ Ｖａｌ、　　Ｖ 一 ｍｏｃ− ｐＮＡ ＯＮｐ ０ＮＳｕ ＯＢｔ ０ＮＳｕ ＤＣＧ ＳＣＤ ＣＵｒｅａ ＭＡＰ ＤＭＦ プロリン セリン スレオニン トリプトファン チロシン バリン ベンジルオキシカルボニル 聾−フルオレニルメチルオキシカルボニルｐ−ニトロア
ニリド ｐ−二トロフェノールエステル スクシンイミドエステル １−ヒドロキシベンゾトリアゾール Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド ジシクロへキシルカルボジイミド 水溶性カルボジイミド（１−エチル−５−（３−ジメチ
ルアミノプロピル）−カルボジイミド２ ジシクロヘキシル尿素 ジメチルアミノピリジン ジメチルホルムアミド ＤＭＳＯジメチルスルホキシド ＴＦＡ　　　　）リフルオロ酢酸 ＴＭＳＯＴｆ　　）リフルオロメタンスルホン酸トリメ
チルシリル Ｂｕｔｔ−ブチル Ｍｔｒ　　　４−メトキシ−２，３，６−メチル−ベン
ゼンスルホニル Ａｃｍ　　　アセトアミドメチル Ｍｂｈ　　　　ジメトキシベンズヒドリルＭｅＯＨメタ
ノール Ａ　ｃ　ＯＨ酢酸 ｎ−ＢｕＯＨｎ−ブタノール ＡＣＥ　　　アンジオテンシン変換酵素実施例１．　１
１Ｂ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏの合成樹脂１　ｇ　（ＯＨＯ，３
５ｍｍｏｌ　）を手動用固相合成用反応容器（５０ｍｆ
）に入れ、塩化メチレン１５ｍｊｌ！、塩化メチレン−
ＤＭＦ１５ｍＡ！で洗浄後、ＦｍｏｃＰｒｏＯＨ０，１
８ｇ　（０，５３ｍｍｏｌ　、　　１．５当量）、ＤＣ
Ｇ　Ｏ，１２ｇ　（０，５８ｍｍｏｌ　、　　１．７当
１）、ｐ−ジメチルアミノピリジン０．０６　ｇ　（０
，５３ｍｍｏｌ。

１、５当量）を塩化メチレン−ＤＭＦに溶解し、添加、
３時間振盪した。これを順次、塩化メチレン、ＤＭＦお
よびイソプロパツールで洗浄後、導入量の定量を行った
（０．１５μｍｏｌ／ｇ）。なお塩化メチレンは安定剤
として７９１７０．０００５〜０．００５％含有のもの
を使用した。

これを以下のＦｍｏｃ基除去サイクルに付した。

ａ）　　ＤＭＦ　１５ｍ１中、１分間振とう（１回）。

ｂ）　２０％ピペリジン−ＤＭＦ溶液１５ｍｊ！中、２
分間振とう。

ｃ）　２０％ピペリジン−ＤＭＦ溶液１５ｍ２中で１０
分間振とうし、Ｆｍｏｃ基を脱離。

ｄ）　　ＤＭＦ　１５ｍｆｆ１で４回洗浄。

ｅ）　イソプロパツール１５ｍ１！、で１回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法（Ｅ、Ｋａｉｓｅｒ　ｅｔ　ａ
ｌ、、　Ａｎａｌ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　、ｆ土、５９５　（１９７０））に
より、Ｆ＋ｗｏｃ基が完全に除去したことを確認し、も
し、不完全ならば上記の除去サイクルを繰り返した。ま
た、完全に除去されているならば、以下に示す縮合サイ
クルに供した。

ｆ）　　Ｆｍｏｃ基除去サイクルで得られたＨ−Ｐｒｏ
樹脂をＤＭＰ１５ｍｌで２回振とうすることによって膨
潤させた。

ｇ）　　Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ−（ＢｕＬ）ＯＨ（２０７ｍ
ｇ、　０．４５ミリモル）　、ＨＯＢｔ　（７３ｍｇ、
　０．５４ミリモル）のＤＭＦ（１５ｍｌ）を加え、１
分間振とう。

ｈ）１Ｍジシクロへキシルカルボジイミド塩化メチレン
溶液０．５　ｍ　ｌを添加し、７００分間振う。

ｉ）　　ＤＭＦ　１５ｍｊ！で２回洗浄。

ｊ）　イソプロパツール１５ｍｆで２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法によって縮合が完了しているか
否かを確認し、もし、不完全ならば、上記の縮合サイク
ルを繰り返した。

Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−樹脂を用いている場合は、ここでの
Ｐｍｏｃ基除去サイクルとして以下の方法を用いた。

ｋ）　　ＤＭＦ　１５ｍｆ中、１分間振とう（１回）。

１）０．２％ピペリジン−〇ＭＦ溶液１５ｍｌ中で５分
間振とう後、再び０．２％ピペリジン−〇ＭＦ溶液１５
ｍｌで３０分振とうし、Ｆｍｏｃ基を脱離。

ｍ）　　ＤＭＦ　１５ｍｆで２回洗浄。

ｎ）　イソプロパツール１５ｍ１で１回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓｅｒ法によってＦｍｏｃ基が除去され
ていることを確認した、そしてｇ）ステップをＢｏｃ−
Ｉｌｅ−０）１で行なう縮合サイクルに付した。こうし
てＢｏｃ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ樹脂を得、ついで、
樹脂からの脱離工程に供した。

すなわち、塩化メチレン１５ｍ１で２回洗浄し、塩化メ
チレン（６ｍｆ）−アニソール（１，０ｍ　ｌ　）チオ
フェノール（０，３８ｍ／り混合溶液に懸濁、続いて、
トリフルオロ酢酸（１２ｍｆ）−塩化メチレン（１，４
ｍ　ｌ　）を加え、１時間振とうした。

樹脂をろ過し、得られたろ液を減圧濃縮して、残渣にエ
ーテルを加え、ろ過することによって、得られる白色粉
末を逆相液体クロマトグラフィーに供し、求めるＩｌｅ
−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ画分を分取し、得られる溶出画分を濃
縮乾固した。ついで、蒸留水を加え数回濃縮乾固を繰り
返した後、少量の蒸留水にとかし、凍結乾燥した。続い
て、これをイオン交換樹脂カラムに付しＴＦＡを除去し
た。再び、少量の蒸留水に溶解し、凍結乾燥した。こう
して精製されたＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏを得た。精製物
の一部をとりＦＡＢ質量分析器により分子量測定を行っ
てｔａ／ｚ　：３９２　（Ｍ゛十Ｈとなり理論値に一致
した。さらに、６Ｎ−Ｈ（／！水溶液で加水分解し、ア
ミノ酸分析に供したところＩｌｅ　　１．　Ｏ０１Ｔｙ
ｒ　　１．０２、Ｐｒｏ　１．１０の比となりこれもま
た理論値と一致した。従って、求めるペプチドが合成さ
れているこロマトグラフィーで純度よく合成されている
ことを確認した。

実施例２〜３１ 上記実施例と同様の方法により下記化合物をそれぞれ合
成した。

実施例３２　活性評価 活性の測定にはＦｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｍｅ
ｎｉｎ　ｏｓｅ　ｔｉｃｕｍ由来のプロリルエンドペプ
チダーゼ（ＥＣ３，４゜２１．２６）と合成基質Ｚ−Ｇ
ｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮＡを用いた。

試料のペプチドは酵素反応時に１ｍＭ、０．３ｍＭ、０
．１ｍＭ、０．０３ｍＭ、０．０１ｍＭとなる様に４０
％ジオキサン水溶液に溶解した。活性の強いものは更に
希釈して用いた。

試験は、まず０．５　ｍ　ｌの０．１　Ｍリン酸ナトリ
ウム系緩衝液（ｐＨ７）、上記試料溶液０．１２５ｍｊ
！、２ｍＭ　　Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮＡ　４０％ジ
オキサン水溶液０．１２５ｍｆを混合し、３０°Ｃの恒
温槽に５分ブレインキュベートを行った。次に、０．２
　Ｕ　／　ｍ　ｌの酵素０．０５　Ｍリン酸ナトリウム
系緩衝液を０．０５ｍｊ２加え攪拌、３０°Ｃで１０分
間インキュベートした。反応の停止には１．０　ｍ　ｌ
のトリトンＸ−１００酢酸ナトリウム緩衝液（１０ｇ　
、　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００／９５ｍ１　１Ｍ酢酸ナ
トリウム緩衝液、ｐ　Ｈ４，０）を加えた。

活性は４１０ｎｍの吸光度を測定し、下の算式より酵素
活性を導き、対照の５０％の活性となる濃度をＩＣ，。

値とした。

既知の阻害剤も合わせて、 表に示した。

活性データの一部を 〔発明の効果〕 以上より明らかなように、本発明のペプチドは、プロリ
ルエンドベプチターゼの活性阻害効果を有し、健忘症の
予防、治療剤としても使用できる栄養組成物として効め
で有用である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記構造式のいずれかで示されるペプチドおよびそ
   の塩 Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＧｌｕＩｌ
   ｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
   Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐ
   ｒｏ−ＩｌｅＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ
   −Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−ＰｒｏＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖ
   ａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＰｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ
   −Ｐｒｏ−Ｉｌｅ Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇ
   ｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ
   −Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＰｈｅ−Ｖａｌ−Ｇ
   ｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＧｌｕ−Ｐｒｏ
   −Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ ２、下記構造式のいずれかで示されるペプチドおよび／
   またはその医薬上許容される塩を有効成分として含有す
   る栄養組成物。 Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＧｌｕＩｌ
   ｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
   Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐ
   ｒｏ−ＩｌｅＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ
   −Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−ＰｒｏＴｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐ
   ｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＰｒｏ−Ｐｈｅ
   −Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＰｈｅ−Ｖａｌ−Ｇ
   ｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇ
   ｌｕ−Ｐｒｏ−ＩｌｅＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ
   −Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＰｈｅ−Ｖａｌ−Ｇ
   ｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＶａｌ−Ｇｌｕ
   −Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＴｙｒＧｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉ
   ｌｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ ３、健忘症の予防または治療効果を有するものである請
   求項２記載の組成物。