JPH0335789A - ヌクレオシドの酵素的合成方法 - Google Patents
ヌクレオシドの酵素的合成方法Info
- Publication number
- JPH0335789A JPH0335789A JP2082913A JP8291390A JPH0335789A JP H0335789 A JPH0335789 A JP H0335789A JP 2082913 A JP2082913 A JP 2082913A JP 8291390 A JP8291390 A JP 8291390A JP H0335789 A JPH0335789 A JP H0335789A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleoside
- heterocyclic base
- phosphate
- alkylated
- group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/38—Nucleosides
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明はヌクレオシド、ヌクレオシド類似体および誘導
体を製造する方法に関する。さらに詳しくは、本発明は
、ヌクレオシド、ヌクレオシド類似体および誘導体の酵
素的合成に関する。
体を製造する方法に関する。さらに詳しくは、本発明は
、ヌクレオシド、ヌクレオシド類似体および誘導体の酵
素的合成に関する。
従来の技術および課題
ヌクレオシド類似体は、抗生物質として、かつ生物学的
プローブとして広範に使用されている。
プローブとして広範に使用されている。
スハドルニック（Ｓ ｕｈａｄｏｌｎｉｋ） 、ヌクレ
オシド・アンチバイオティックス（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄ
ｅＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ） 、ジェイ・ウィリー（ｊ
、Ｗｉｌｅｙ） 。
オシド・アンチバイオティックス（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄ
ｅＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ） 、ジェイ・ウィリー（ｊ
、Ｗｉｌｅｙ） 。
ニューヨーク、１９７０ 、スハドルニック、ヌクレ
オシドス・アズ・バイオロジカル・ブローブス（Ｎｕｃ
ｌｅｏｓｉｄｅｓ ａｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒ
ｏｂｅｓ） 、ジェイ・ウィリー、ニューヨーク、＋９
７９：ヌクレオシドアナログス（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ
Ａｎａｌｏｇｕｅｓ） ；ケミストリー、バイオロジ
ー・アンド・メディシナル・アプリケーションズ（ｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ、 Ｂ ｉｏｌｏｇｙａｎｄ Ｍｅｄｉ
ｃｉｎａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ） 、ウォルヵ
ーら（Ｗａｌｋｅｒ ｅｔ ａｔ、） 編、ナト・アド
バンスト・スタデイ−・インスティテユーツ・シリーズ
（ＮＡＴＯＡｄｖａｎｃｅｄ ５ｔｕｄｙ Ｉ ｎ
５Ｌｉｔｕｔｅｓ ５ｅｒｉｅｓ） 、プリーナム
（Ｐｌｅｎｕｍ） 、ニューヨーク、１９７９．２６巻
参照。あるヌクレオシドの抗寄生虫剤および抗ウィルス
剤としての効能により、この種の化合物における新しい
関心が刺激されている。ツユ−ぺ（Ｈｕｐｅ） ｓアン
・レボーツ・イン・メディシナル・ケミストリー（Ａｎ
ｎ、Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅ
＋＋１ｓｔｒｙ） 、ベイリー（Ｂａｉｌｅｙ） ｌｉ
、アカデミツク１プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ） 、ニューヨーク。
オシドス・アズ・バイオロジカル・ブローブス（Ｎｕｃ
ｌｅｏｓｉｄｅｓ ａｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒ
ｏｂｅｓ） 、ジェイ・ウィリー、ニューヨーク、＋９
７９：ヌクレオシドアナログス（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ
Ａｎａｌｏｇｕｅｓ） ；ケミストリー、バイオロジ
ー・アンド・メディシナル・アプリケーションズ（ｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ、 Ｂ ｉｏｌｏｇｙａｎｄ Ｍｅｄｉ
ｃｉｎａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ） 、ウォルヵ
ーら（Ｗａｌｋｅｒ ｅｔ ａｔ、） 編、ナト・アド
バンスト・スタデイ−・インスティテユーツ・シリーズ
（ＮＡＴＯＡｄｖａｎｃｅｄ ５ｔｕｄｙ Ｉ ｎ
５Ｌｉｔｕｔｅｓ ５ｅｒｉｅｓ） 、プリーナム
（Ｐｌｅｎｕｍ） 、ニューヨーク、１９７９．２６巻
参照。あるヌクレオシドの抗寄生虫剤および抗ウィルス
剤としての効能により、この種の化合物における新しい
関心が刺激されている。ツユ−ぺ（Ｈｕｐｅ） ｓアン
・レボーツ・イン・メディシナル・ケミストリー（Ａｎ
ｎ、Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅ
＋＋１ｓｔｒｙ） 、ベイリー（Ｂａｉｌｅｙ） ｌｉ
、アカデミツク１プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ） 、ニューヨーク。
１９８６．２１巻、２３章；マンスリら（Ｍａｎｓｕｒ
ｉ。
ｉ。
６ｔ ａｌ、） 、アン・レボーツ・イン・メディシナ
ル・ケミストリー、ベイリー編、アカデミツク・プレス
。
ル・ケミストリー、ベイリー編、アカデミツク・プレス
。
ニューヨーク、１９８７．２２巻、１５章；マンスリら
、アン・レボーツ・イン・メディシナル・ケミストリー
、アレン（Ａｌｉｅｎ） １７２．アカデミツク・プレ
ス、ニューヨーク、１９８８，２３＠、１７章参照。
、アン・レボーツ・イン・メディシナル・ケミストリー
、アレン（Ａｌｉｅｎ） １７２．アカデミツク・プレ
ス、ニューヨーク、１９８８，２３＠、１７章参照。
ジゾブジン（Ｚ １ｄｏｖｕｄｉｎｅ） （３°−アジ
ド−３′−デオキシチミジン、ＡＺＴ）および種々の２
°、３°−ジデオキシヌクレオシドが、エイズ（ＡＩＤ
Ｓ）患者の治療における殺ウイルス活性のため、特に注
目を浴びている。イゼール（Ｅｚｚｅｌｌ） 、ネイチ
ー？ （Ｎａｔｕｒｅ）、１９８７，３２６巻、４３
０頁；デクラーク （ＤｅＣＩｅｒＱ）、トレンヅ・イ
ン・ファーマコロジカル・サイエンシス（Ｔｒｅｎｄｓ
ｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌ、Ｓｃｉ、） 、 Ｉ ９８
？ 、 ８巻、３３９〜４５頁参照。最近、ｉ（β−
Ｄ−リボフラノシル）−１，２，４−トリアゾール−３
−カルボキシアミド（以下、ＲＴＣＡという）の広域ス
ペクトル性抗ウィルス活性が、植物ならびに動物ウィル
スの治療にまで広げられることが示された。ラーチ（Ｌ
ｅｒｃｈ） 、アンチバイジル・リサーチ（Ａ ｎｔ
１ｖｉｒａｌＲｅｓ、） 、１９８７．７巻、２５７〜
７０頁参照。
ド−３′−デオキシチミジン、ＡＺＴ）および種々の２
°、３°−ジデオキシヌクレオシドが、エイズ（ＡＩＤ
Ｓ）患者の治療における殺ウイルス活性のため、特に注
目を浴びている。イゼール（Ｅｚｚｅｌｌ） 、ネイチ
ー？ （Ｎａｔｕｒｅ）、１９８７，３２６巻、４３
０頁；デクラーク （ＤｅＣＩｅｒＱ）、トレンヅ・イ
ン・ファーマコロジカル・サイエンシス（Ｔｒｅｎｄｓ
ｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌ、Ｓｃｉ、） 、 Ｉ ９８
？ 、 ８巻、３３９〜４５頁参照。最近、ｉ（β−
Ｄ−リボフラノシル）−１，２，４−トリアゾール−３
−カルボキシアミド（以下、ＲＴＣＡという）の広域ス
ペクトル性抗ウィルス活性が、植物ならびに動物ウィル
スの治療にまで広げられることが示された。ラーチ（Ｌ
ｅｒｃｈ） 、アンチバイジル・リサーチ（Ａ ｎｔ
１ｖｉｒａｌＲｅｓ、） 、１９８７．７巻、２５７〜
７０頁参照。
ヌクレオシドは、伝統的に、ヌクレオシドアナログス：
ケミストリー、バイオロジイ・アンド・メディシナル・
アプリケーシゴンズ、ウォルカーら編、ナト・アドバン
スト・スタデイ−・インスティテクーツ・シリーズ、プ
リーナム、ニューヨーク。
ケミストリー、バイオロジイ・アンド・メディシナル・
アプリケーシゴンズ、ウォルカーら編、ナト・アドバン
スト・スタデイ−・インスティテクーツ・シリーズ、プ
リーナム、ニューヨーク。
１９７９．２９８に記載されている方法を包含する種々
の化学方法によって製造される。しかしながら、最近、
多くの論文が出版され、天然および非天然ヌクレオシド
の酵素的合成を報告している。
の化学方法によって製造される。しかしながら、最近、
多くの論文が出版され、天然および非天然ヌクレオシド
の酵素的合成を報告している。
例えば、クレニトスキー（Ｋｒｅｒ＋１ｔ−ｓｋｙ、ｅ
ｔ ａｌ、）、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミ
ストリー（Ｊ 、Ｍｅｄ、 Ｃｈｅｆｆｌ、）、 Ｉ
９８６ 、２９巻、１３８〜１４３頁：ウタガワら（じ
ｔａｇａｗａ、ｅｌ ａｔ、）、アグリカルチャラル・
アンド・バイオロジカル・ケミストリー（Ａｇｒｉｃ、
Ｂ ｉｏｌ、 Ｃｈｅｗ、）、 １９８６ 、５０（り
巻、＋２１−１２６頁；クレニトスキーら、カルボハイ
ドレート・リサーチ（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＲｅｓ
ｅａｒｃｈ）、 １９８１ 、９７巻、１３９〜１４６
頁クレニりスキーら、バイオケミストリー（Ｂｉｏ−ｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ）、４９８１ 、２０巻、３６１５〜
３６２１頁参照。これら論文の多くは、原復素環塩基が
新規なアグリコン基と交換されるトランスグリシコレ−
ジョン反応を報告している。かれらの研究は２つの基本
的な方策を用いている。
ｔ ａｌ、）、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミ
ストリー（Ｊ 、Ｍｅｄ、 Ｃｈｅｆｆｌ、）、 Ｉ
９８６ 、２９巻、１３８〜１４３頁：ウタガワら（じ
ｔａｇａｗａ、ｅｌ ａｔ、）、アグリカルチャラル・
アンド・バイオロジカル・ケミストリー（Ａｇｒｉｃ、
Ｂ ｉｏｌ、 Ｃｈｅｗ、）、 １９８６ 、５０（り
巻、＋２１−１２６頁；クレニトスキーら、カルボハイ
ドレート・リサーチ（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＲｅｓ
ｅａｒｃｈ）、 １９８１ 、９７巻、１３９〜１４６
頁クレニりスキーら、バイオケミストリー（Ｂｉｏ−ｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ）、４９８１ 、２０巻、３６１５〜
３６２１頁参照。これら論文の多くは、原復素環塩基が
新規なアグリコン基と交換されるトランスグリシコレ−
ジョン反応を報告している。かれらの研究は２つの基本
的な方策を用いている。
第１の方策は、ヌクレオシドからリボースｌリン酸（“
Ｒ−１−Ｐ”）を酵素的に合成し、ついで該Ｒ−ｌ−Ｐ
を単離することを包含する。ついで単離されたＲ−ｉＰ
を、加えた複素環との酵素的カップリング反応における
グリコシルドナーとして用いる。全プリンのプリン類似
体への交換はこの手段により達成することができる。
Ｒ−１−Ｐ”）を酵素的に合成し、ついで該Ｒ−ｌ−Ｐ
を単離することを包含する。ついで単離されたＲ−ｉＰ
を、加えた複素環との酵素的カップリング反応における
グリコシルドナーとして用いる。全プリンのプリン類似
体への交換はこの手段により達成することができる。
第２の方策は、グリコシルドナーとしてピリミジンヌク
レオシドを、グリコシルアクセプターとしてプリンまた
はプリン類似体を用いる。これはＲ−ｉＰを単離するこ
となく、ワン−ボット反応（ｏｎｅ−ｐｏｔ ｒｅａｃ
ｔｉｏｎ）として行われるが、反応媒体中に、ピリミジ
ンヌクレオシドホスホリラーゼとプリンヌクレオシドホ
スホリラーゼの両方が存在することを要する。
レオシドを、グリコシルアクセプターとしてプリンまた
はプリン類似体を用いる。これはＲ−ｉＰを単離するこ
となく、ワン−ボット反応（ｏｎｅ−ｐｏｔ ｒｅａｃ
ｔｉｏｎ）として行われるが、反応媒体中に、ピリミジ
ンヌクレオシドホスホリラーゼとプリンヌクレオシドホ
スホリラーゼの両方が存在することを要する。
興味深いことに、ウタガワらは、アグリ力ルチャラル・
アンド・バイオロジカル・ケミストリー１９８６．５０
（ｉ）巻、１２！〜１２６頁において、プリン類似体の
１．２．４−トリアゾール−３−カルボキシアミド（“
ＴＣＡ”、ＲＴＣＡのアグリコン成分）が、グリコシル
ドナーとしてイノシンを、触媒としてプリンヌクレオシ
ドホスホリラーゼ（’Ｐ Ｎ Ｐ ａｓｅ“）を用いる
ワン−ボット反応において全く測定可能な範囲までグリ
コシル化し得ないことを報告している。彼らは、Ｐ Ｎ
Ｐ ａｓｅに対するヒボキサンチンの親和力（イノシ
ンの加すン酸分解生酸物、Ｋｉ＝５．６ａ＋Ｍ）に比較
してＴＣＡの親和力（Ｋｍ＝ Ｉ ６７ｍＭ）が低いこ
とを例証した。ヒボキサンチンは、ＲＴＣＡ合成の競争
抑制剤として作用しているかもしれない。
アンド・バイオロジカル・ケミストリー１９８６．５０
（ｉ）巻、１２！〜１２６頁において、プリン類似体の
１．２．４−トリアゾール−３−カルボキシアミド（“
ＴＣＡ”、ＲＴＣＡのアグリコン成分）が、グリコシル
ドナーとしてイノシンを、触媒としてプリンヌクレオシ
ドホスホリラーゼ（’Ｐ Ｎ Ｐ ａｓｅ“）を用いる
ワン−ボット反応において全く測定可能な範囲までグリ
コシル化し得ないことを報告している。彼らは、Ｐ Ｎ
Ｐ ａｓｅに対するヒボキサンチンの親和力（イノシ
ンの加すン酸分解生酸物、Ｋｉ＝５．６ａ＋Ｍ）に比較
してＴＣＡの親和力（Ｋｍ＝ Ｉ ６７ｍＭ）が低いこ
とを例証した。ヒボキサンチンは、ＲＴＣＡ合成の競争
抑制剤として作用しているかもしれない。
前記酵素的方策の欠点は、Ｒ−１−Ｐを単離するが、ま
たはピリミジンおよびプリンヌクレオシドホスホリラー
ゼの両方が存在することのいずれかを要することである
。かかる制限を解消した新規合成方法の要望がある。本
発明の方法は、かかる方法を提供するものである。
たはピリミジンおよびプリンヌクレオシドホスホリラー
ゼの両方が存在することのいずれかを要することである
。かかる制限を解消した新規合成方法の要望がある。本
発明の方法は、かかる方法を提供するものである。
課題を解決するための手段
本発明は、（ａ）溶液中、ヌクレオシド形成酵素の存在
下、（ｉ）第１のヌクレオシドのグリコシル成分から解
離された場合、非活性化複素環塩基と比較すると、ヌク
レオシド形成酵素に対する比較的乏しい基質を提供する
、グリコシル成分に結合した活性化複素環塩基からなる
第１のヌクレオシドと、（ｉｉ）非活性化複素環塩基と
を、該第１のヌクレオシドが非活性化複素環塩基と結合
するためのグリコシル成分を供与するのに十分な時間反
応させ、 （ｂ）（ｉ）グリコシル成分に結合した非活性化複素環
塩基からなる第２のヌクレオシドおよび（ｉｉ）該グリ
コシル成分から解離した活性化複素環塩基を含有する混
合物を得、 （ｃ）得られた第２のヌクレオシドを該混合物から単離
することを特徴とするヌクレオシドを合成する方法を提
供する。
下、（ｉ）第１のヌクレオシドのグリコシル成分から解
離された場合、非活性化複素環塩基と比較すると、ヌク
レオシド形成酵素に対する比較的乏しい基質を提供する
、グリコシル成分に結合した活性化複素環塩基からなる
第１のヌクレオシドと、（ｉｉ）非活性化複素環塩基と
を、該第１のヌクレオシドが非活性化複素環塩基と結合
するためのグリコシル成分を供与するのに十分な時間反
応させ、 （ｂ）（ｉ）グリコシル成分に結合した非活性化複素環
塩基からなる第２のヌクレオシドおよび（ｉｉ）該グリ
コシル成分から解離した活性化複素環塩基を含有する混
合物を得、 （ｃ）得られた第２のヌクレオシドを該混合物から単離
することを特徴とするヌクレオシドを合成する方法を提
供する。
本発明の方法は、後に一括して示す反応式で具体的に示
される。
される。
反応式１は、反応体が第１のヌクレオシド（７−メチル
グアノシン・ヨウ化水素酸塩）および非活性化複素環塩
基（アデニン）からなり、それを酵素Ｅ（プリンヌクレ
オシドホスホリラーゼ）および有効量のリン酸水素ナト
リウムの存在下にて反応させ、アデノシンおよび７−メ
チルグアニンを生成する本発明の方法の１具体例を示す
。
グアノシン・ヨウ化水素酸塩）および非活性化複素環塩
基（アデニン）からなり、それを酵素Ｅ（プリンヌクレ
オシドホスホリラーゼ）および有効量のリン酸水素ナト
リウムの存在下にて反応させ、アデノシンおよび７−メ
チルグアニンを生成する本発明の方法の１具体例を示す
。
反応式２は、反応体が第１のヌクレオシド（７−メチル
グアノシン・ヨウ化水素酸塩）および非活性化複素環塩
基（３−デアザアデニン）からなり、それを酵素Ｅ（プ
リンヌクレオシドホスホリラーゼ）および有効量のリン
酸水素ナトリウムの存在下にて反応させ、３−デアザア
デノシンおよび７−メチルグアニンを生成する本発明の
方法のｌ具体例を示す。
グアノシン・ヨウ化水素酸塩）および非活性化複素環塩
基（３−デアザアデニン）からなり、それを酵素Ｅ（プ
リンヌクレオシドホスホリラーゼ）および有効量のリン
酸水素ナトリウムの存在下にて反応させ、３−デアザア
デノシンおよび７−メチルグアニンを生成する本発明の
方法のｌ具体例を示す。
反応式３は、反応体が第！のヌクレオシド（７−メチル
グアノシン・ヨウ化水素酸塩）および非活性化複素環塩
基（ＴＣＡ）からなり、それを酵素Ｅ（プリンヌクレオ
シドホスホリラーゼ）および有効量のリン酸水素ナトリ
ウムの存在下にて反応させ、ＲＴＣＡおよび７−メチル
グアニンを生成する本発明の方法の！具体例を示す。
グアノシン・ヨウ化水素酸塩）および非活性化複素環塩
基（ＴＣＡ）からなり、それを酵素Ｅ（プリンヌクレオ
シドホスホリラーゼ）および有効量のリン酸水素ナトリ
ウムの存在下にて反応させ、ＲＴＣＡおよび７−メチル
グアニンを生成する本発明の方法の！具体例を示す。
反応式４は、反応体が第１のヌクレオシド（７−メチル
グアノシン）および非活性化複素環塩基（アデニン）か
らなり、それを酵素Ｅ（プリンヌクレオシドホスホリラ
ーゼ）および有効量のリン酸水素ナトリウムの存在下に
て反応させ、アデノシンおよび７−メチルグアニンを生
成する本発明の方法のｌ具体例を示す。
グアノシン）および非活性化複素環塩基（アデニン）か
らなり、それを酵素Ｅ（プリンヌクレオシドホスホリラ
ーゼ）および有効量のリン酸水素ナトリウムの存在下に
て反応させ、アデノシンおよび７−メチルグアニンを生
成する本発明の方法のｌ具体例を示す。
反応式５は、反応体が第１のヌクレオシド（７−メチル
グアノシン）および非活性化複素環塩基（３−デアザア
デニン）からなり、それを酵素Ｅ（プリンヌクレオシド
ホスホリラーゼ）および有効量のリン酸水素ナトリウム
の存在下にて反応させ、３−デアザアデノシンおよび７
−メチルグアニンを生成する本発明の方法の！具体例を
示す。
グアノシン）および非活性化複素環塩基（３−デアザア
デニン）からなり、それを酵素Ｅ（プリンヌクレオシド
ホスホリラーゼ）および有効量のリン酸水素ナトリウム
の存在下にて反応させ、３−デアザアデノシンおよび７
−メチルグアニンを生成する本発明の方法の！具体例を
示す。
反応式６は、反応体が第１のヌクレオシド（７−メチル
グアノシン）および非活性化複素環塩基（ＴＣＡ）から
なり、それを酵素Ｅ（プリンヌクレオシドホスホリラー
ゼ）および有効量のリン酸水素ナトリウムの存在下にて
反応させ、ＲＴＣＡおよび７−メチルグアニンを生成す
る本発明の方法の１具体例を示す。
グアノシン）および非活性化複素環塩基（ＴＣＡ）から
なり、それを酵素Ｅ（プリンヌクレオシドホスホリラー
ゼ）および有効量のリン酸水素ナトリウムの存在下にて
反応させ、ＲＴＣＡおよび７−メチルグアニンを生成す
る本発明の方法の１具体例を示す。
反応式７は、反応体が第１のヌクレオシド（７−メチル
イノシン）および非活性化複素環塩基（アデニン）から
なり、それを酵素Ｅ（プリンヌクレオシドホスホリラー
ゼ）および有効量のリン酸水素ナトリウムの存在下にて
反応させ、アデノシンおよび７−メチルヒボキサンチン
を生成する本発明の方法の！具体例を示す。
イノシン）および非活性化複素環塩基（アデニン）から
なり、それを酵素Ｅ（プリンヌクレオシドホスホリラー
ゼ）および有効量のリン酸水素ナトリウムの存在下にて
反応させ、アデノシンおよび７−メチルヒボキサンチン
を生成する本発明の方法の！具体例を示す。
反応式８は、反応体が第１のヌクレオシド（７−メチル
イノシン）および非活性化複素環塩基（３−デアザアデ
ニン）からなり、それを酵素Ｅ（プリンヌクレオシドホ
スホリラーゼ）および有効量のリン酸水素ナトリウムの
存在下にて反応させ、３−デアザアデノシンおよび７−
メチルヒボキサンチンを生成する本発明の方法の！具体
例を示す。
イノシン）および非活性化複素環塩基（３−デアザアデ
ニン）からなり、それを酵素Ｅ（プリンヌクレオシドホ
スホリラーゼ）および有効量のリン酸水素ナトリウムの
存在下にて反応させ、３−デアザアデノシンおよび７−
メチルヒボキサンチンを生成する本発明の方法の！具体
例を示す。
反応式９は、反応体が第１のヌクレオシド（７−メチル
イノシン）および非活性化複素環塩基（ＴＣＡ）からな
り、それを酵素Ｅ（プリンヌクレオシドホスホリラーゼ
）および有効量のリン酸水素ナトリウムの存在下にて反
応させ、ＲＴＣＡおよび７−メチルヒボキサンチンを生
成する本発明の方法のｌ具体例を示す。
イノシン）および非活性化複素環塩基（ＴＣＡ）からな
り、それを酵素Ｅ（プリンヌクレオシドホスホリラーゼ
）および有効量のリン酸水素ナトリウムの存在下にて反
応させ、ＲＴＣＡおよび７−メチルヒボキサンチンを生
成する本発明の方法のｌ具体例を示す。
本発明はヌクレオシド、ヌクレオシド類似体および誘導
体（以下、簡単のため、ヌクレオシドという）の酵素的
合成における新規方法にある。本発明の方法において、
第１のヌクレオシドは、活性化複素環塩基に結合したグ
リコシル成分からなるものより選択される。活性化複素
環塩基とは、第１のヌクレオシドのグリコシル成分から
解離した場合に、非活性化複素環塩基と比較すると、ヌ
クレオシド形成酵素に対し乏しい基質を提供する複素環
塩基である。
体（以下、簡単のため、ヌクレオシドという）の酵素的
合成における新規方法にある。本発明の方法において、
第１のヌクレオシドは、活性化複素環塩基に結合したグ
リコシル成分からなるものより選択される。活性化複素
環塩基とは、第１のヌクレオシドのグリコシル成分から
解離した場合に、非活性化複素環塩基と比較すると、ヌ
クレオシド形成酵素に対し乏しい基質を提供する複素環
塩基である。
この第１のヌクレオシドを、ヌクレオシド形成酵素の存
在下、非活性化複素環塩基と反応させる。
在下、非活性化複素環塩基と反応させる。
ヌクレオシド形成酵素は、活性化複素環塩基とグリコシ
ル成分の間の結合を壊すが、または非活性化複素環塩基
とグリコシル成分の間の結合を形成するが、またはその
両方であるいずれかの酵素を包含する。反応の間に、第
１のヌクレオシドは、該グリコシル成分を非活性化複素
環塩基に付与し、第２のヌクレオシド（該グリコシル成
分に結合した非活性化複素環塩基からなるヌクレオシド
）および該グリコシル成分から解離した活性化複素環塩
基を得る。ついで、得られた第２のヌクレオシドを該反
応混合物から単離することができる。ここに記載された
方法は、一般的に、非活性化複素環塩基の酵素的グリコ
シレージタンに適応される。
ル成分の間の結合を壊すが、または非活性化複素環塩基
とグリコシル成分の間の結合を形成するが、またはその
両方であるいずれかの酵素を包含する。反応の間に、第
１のヌクレオシドは、該グリコシル成分を非活性化複素
環塩基に付与し、第２のヌクレオシド（該グリコシル成
分に結合した非活性化複素環塩基からなるヌクレオシド
）および該グリコシル成分から解離した活性化複素環塩
基を得る。ついで、得られた第２のヌクレオシドを該反
応混合物から単離することができる。ここに記載された
方法は、一般的に、非活性化複素環塩基の酵素的グリコ
シレージタンに適応される。
活性化複素環塩基は、非活性化複素環塩基と比較した場
合に、ヌクレオシド形成酵素に対する乏しい基質を提供
するため、該活性化複素環塩基がグリコシル成分と反応
するよりも速い速度で該非活性化複素環塩基がグリコシ
ル成分と反応する。
合に、ヌクレオシド形成酵素に対する乏しい基質を提供
するため、該活性化複素環塩基がグリコシル成分と反応
するよりも速い速度で該非活性化複素環塩基がグリコシ
ル成分と反応する。
非活性化複素環塩基がグリコシル成分と反応する速度と
活性化複素環塩基がグリコシル成分と反応する速度の差
異は、基本的に、反応が不可逆的である差異が好ましい
。活性化複素環塩基がグリコシル成分から解離した際に
、仮に該活性化複素環塩基が異性化を受けると、該活性
化複素環塩基はヌクレオシド形成酵素に対し特に乏しい
基質、すなわち、ヌクレオシド形成酵素の存在下、あっ
たとしても比較的遅い速度にてグリコシル成分と反応す
る基質となり、基本的に、かかる不可逆的工程が生じる
かもしれない。結果として、等量の第１のヌクレオシド
と非活性化複素環塩基を含有する混合物において、ヌク
レオシド形成酵素の存在下、第１のヌクレオシドを非活
性化複素環塩基と反応させ、実質的Ｉこ第１のヌクレオ
シド（グリコシル成分に結合した活性化複素環塩基から
なるヌクレオシド）よりも多量の第２のヌクレオシド（
グリコシル成分に結合した非活性化複素環塩基からなる
ヌクレオシド）が存在する混合物を平衡状態にて得る。
活性化複素環塩基がグリコシル成分と反応する速度の差
異は、基本的に、反応が不可逆的である差異が好ましい
。活性化複素環塩基がグリコシル成分から解離した際に
、仮に該活性化複素環塩基が異性化を受けると、該活性
化複素環塩基はヌクレオシド形成酵素に対し特に乏しい
基質、すなわち、ヌクレオシド形成酵素の存在下、あっ
たとしても比較的遅い速度にてグリコシル成分と反応す
る基質となり、基本的に、かかる不可逆的工程が生じる
かもしれない。結果として、等量の第１のヌクレオシド
と非活性化複素環塩基を含有する混合物において、ヌク
レオシド形成酵素の存在下、第１のヌクレオシドを非活
性化複素環塩基と反応させ、実質的Ｉこ第１のヌクレオ
シド（グリコシル成分に結合した活性化複素環塩基から
なるヌクレオシド）よりも多量の第２のヌクレオシド（
グリコシル成分に結合した非活性化複素環塩基からなる
ヌクレオシド）が存在する混合物を平衡状態にて得る。
第！のヌクレオシドの活性化度素環塩基はプリン、プリ
ン類似体または誘導体、またはピリミジン、ピリミジン
類似体または誘導体であってもよく、ヌクレオシド形成
酵素に対する乏しい基質を提供するように修飾されてい
ない複素環塩基と比較した場合、それはヌクレオシド形
成塩基に対し乏しい基質を提供するように修飾されてい
る。該活性化複素環塩基は、例えば、修飾アデニン、グ
アニン、ヒボキサンチン、シトシン、ウラシルまたはチ
ミンとすることができる。
ン類似体または誘導体、またはピリミジン、ピリミジン
類似体または誘導体であってもよく、ヌクレオシド形成
酵素に対する乏しい基質を提供するように修飾されてい
ない複素環塩基と比較した場合、それはヌクレオシド形
成塩基に対し乏しい基質を提供するように修飾されてい
る。該活性化複素環塩基は、例えば、修飾アデニン、グ
アニン、ヒボキサンチン、シトシン、ウラシルまたはチ
ミンとすることができる。
この方法にて用いられる活性化複素環塩基は、活性化複
素環塩基をヌクレオシド形成塩基に対し乏しい基質とす
る修飾以外は、この方法にて用いられる非活性化複素環
塩基と同様であってもよい。
素環塩基をヌクレオシド形成塩基に対し乏しい基質とす
る修飾以外は、この方法にて用いられる非活性化複素環
塩基と同様であってもよい。
例えば、該活性化複素環塩基が修飾グアニンであり、非
活性化複素環塩基がグアニンであってもよい。
活性化複素環塩基がグアニンであってもよい。
また、活性化複素環塩基は、非活性化複素環塩基と構造
的にかなり異なっていてもよい。例えば、活性化複素環
塩基が修飾プリン、プリン類似体または誘導体であり、
非活性化複素環塩基がピリミジン、ピリミジン類似体ま
たは誘導体であってもよい。（ピリミジンおよびプリン
型の両方の複素環塩基を一緒に混合して用いるような方
法においては、反応混合物は、グリコシル成分と各ピリ
ミジンおよびプリン型塩基の間の結合を破壊し、形成す
ることができる酵素類（または酵素）を含有していなけ
ればならない。） グリコシル成分はリボース、リボース類似体または誘導
体、またはデオキシリボース、デオキシリボース類似体
または誘導体としてもよい。リボース誘導体は、例えば
、リボース５−リン酸であってもよい。デオキシリボー
スは、例えば、デオキシリボース５−リン酸であっても
よい。
的にかなり異なっていてもよい。例えば、活性化複素環
塩基が修飾プリン、プリン類似体または誘導体であり、
非活性化複素環塩基がピリミジン、ピリミジン類似体ま
たは誘導体であってもよい。（ピリミジンおよびプリン
型の両方の複素環塩基を一緒に混合して用いるような方
法においては、反応混合物は、グリコシル成分と各ピリ
ミジンおよびプリン型塩基の間の結合を破壊し、形成す
ることができる酵素類（または酵素）を含有していなけ
ればならない。） グリコシル成分はリボース、リボース類似体または誘導
体、またはデオキシリボース、デオキシリボース類似体
または誘導体としてもよい。リボース誘導体は、例えば
、リボース５−リン酸であってもよい。デオキシリボー
スは、例えば、デオキシリボース５−リン酸であっても
よい。
従って、本発明の第１のヌクレオシドは、その複素環塩
基が第１のヌクレオシドのグリコシル成分から解離した
場合に、非活性化または非修飾複素環塩基と比較すると
、ヌクレオシド形成酵素に対し比較的乏しい基質を提供
するように修飾されているアデノシン、グアノシン、イ
ノシン、ウリジン、シチジン、チミジン、デオキシアデ
ノシン、デオキシグアノシン、デオキシイノシン、デオ
キシチミジン、デオキシウリジンまたはデオキシシチジ
ンであってもよい。同様に、本発明の第！のヌクレオシ
ドは、その複素環塩基が第１のヌクレオシドのグリコシ
ル成分から解離した場合に、非活性化または非修飾複素
環塩基と比較すると、ヌクレオシド形成酵素に対し比較
的乏しい基質を提供するように修飾されているヌクレオ
シド５−リン酸、すなわち、アデノシン５−リン酸、グ
アノシン５−リン酸、イノシン５−リン酸、チミジン５
−リン酸、ウリジン５−リン酸、シチジン５−リン酸、
デオキシアデノシン５−リン酸、デオキシグアノシン５
−リン酸、デオキシイノシン５−リン酸、デオキシチミ
ジン５−リン酸、デオキシウリジン５−リン酸またはデ
オキシシチジン５−リン酸のようなヌクレオチドとして
もよい。
基が第１のヌクレオシドのグリコシル成分から解離した
場合に、非活性化または非修飾複素環塩基と比較すると
、ヌクレオシド形成酵素に対し比較的乏しい基質を提供
するように修飾されているアデノシン、グアノシン、イ
ノシン、ウリジン、シチジン、チミジン、デオキシアデ
ノシン、デオキシグアノシン、デオキシイノシン、デオ
キシチミジン、デオキシウリジンまたはデオキシシチジ
ンであってもよい。同様に、本発明の第！のヌクレオシ
ドは、その複素環塩基が第１のヌクレオシドのグリコシ
ル成分から解離した場合に、非活性化または非修飾複素
環塩基と比較すると、ヌクレオシド形成酵素に対し比較
的乏しい基質を提供するように修飾されているヌクレオ
シド５−リン酸、すなわち、アデノシン５−リン酸、グ
アノシン５−リン酸、イノシン５−リン酸、チミジン５
−リン酸、ウリジン５−リン酸、シチジン５−リン酸、
デオキシアデノシン５−リン酸、デオキシグアノシン５
−リン酸、デオキシイノシン５−リン酸、デオキシチミ
ジン５−リン酸、デオキシウリジン５−リン酸またはデ
オキシシチジン５−リン酸のようなヌクレオチドとして
もよい。
本発明の好ましい具体例において、第１のヌクレオシド
は、その活性化複素環塩基がアルキル、アルキルフェニ
ル、ヒドロキシアルキルまたはヒドロキシアルキルフェ
ニル置換基で修飾されている複素環塩基であるアルキル
化ヌクレオシドであってもよい。かかる第１のヌクレオ
シドは、ジョーンズら（Ｊｏｎｅｓ、ｅｔ ａｔ、）、
ジェイ・アム・ケム（Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、） 、 １
９６３．８５巻、１９３〜２０１頁に記載されている操
作に従って製造することができる。特に好ましいアルキ
ル化ヌクレオシドは、７−メチルグアノシンおよび７−
メチルイノシンを有するメチルヌクレオシドである。７
−メチルグアノシンおよび７−メチルイノシンは共に、
クリコフスカら（Ｋｕｌｉｋｏｖｓｋａ、ｅｔ ａｔ、
）、バイオシミ力・エト・バイオフィジヵ・アクタ（Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、Ｂ １ｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、）、
１９８６ 、８７４巻。
は、その活性化複素環塩基がアルキル、アルキルフェニ
ル、ヒドロキシアルキルまたはヒドロキシアルキルフェ
ニル置換基で修飾されている複素環塩基であるアルキル
化ヌクレオシドであってもよい。かかる第１のヌクレオ
シドは、ジョーンズら（Ｊｏｎｅｓ、ｅｔ ａｔ、）、
ジェイ・アム・ケム（Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、） 、 １
９６３．８５巻、１９３〜２０１頁に記載されている操
作に従って製造することができる。特に好ましいアルキ
ル化ヌクレオシドは、７−メチルグアノシンおよび７−
メチルイノシンを有するメチルヌクレオシドである。７
−メチルグアノシンおよび７−メチルイノシンは共に、
クリコフスカら（Ｋｕｌｉｋｏｖｓｋａ、ｅｔ ａｔ、
）、バイオシミ力・エト・バイオフィジヵ・アクタ（Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、Ｂ １ｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、）、
１９８６ 、８７４巻。
３５５〜３６３頁に示されているように、プリンヌクレ
オシドホスホリラーゼ（“Ｐ Ｎ Ｐ ａｓｅ”）に対
する基質である。したがって、第１のヌクレオシドとし
て７−メチルグアノシンまたは７−メチルイノシンを用
いる場合、本発明の方法にて用いられる好ましいヌクレ
オシド形成酵素はＰ Ｎ Ｐ ａｇｅである。７−メチ
ルグアノシンはＰ Ｎ Ｐ ａｓｅ単位当たりＶｍａｘ
＝３．３マイクロモル／分およびＫａ＋＝１４．７μＭ
を有するため、それは本発明の方法において特Ｉこ有用
である。クリコフスカらはまた、その溶解限界までの濃
度にて、７−メチルグアノシンの活性化複素環塩基、す
なわち、７−メチルグアニンが酵素の生成物阻害を示さ
ないことを報告している。かかるアルキル化ヌクレオシ
ドは、アルキル化複素環塩基が該アルキル化ヌクレオシ
ドのグリコシル成分から分離された場合、非アルキル化
、すなわち非活性化複素環塩基と比較すると、ヌクレオ
シド形成酵素に対し比較的乏しい基質を提供するように
、アルキル基を複素環塩基に付加した修飾複素環塩基を
含有する。
オシドホスホリラーゼ（“Ｐ Ｎ Ｐ ａｓｅ”）に対
する基質である。したがって、第１のヌクレオシドとし
て７−メチルグアノシンまたは７−メチルイノシンを用
いる場合、本発明の方法にて用いられる好ましいヌクレ
オシド形成酵素はＰ Ｎ Ｐ ａｇｅである。７−メチ
ルグアノシンはＰ Ｎ Ｐ ａｓｅ単位当たりＶｍａｘ
＝３．３マイクロモル／分およびＫａ＋＝１４．７μＭ
を有するため、それは本発明の方法において特Ｉこ有用
である。クリコフスカらはまた、その溶解限界までの濃
度にて、７−メチルグアノシンの活性化複素環塩基、す
なわち、７−メチルグアニンが酵素の生成物阻害を示さ
ないことを報告している。かかるアルキル化ヌクレオシ
ドは、アルキル化複素環塩基が該アルキル化ヌクレオシ
ドのグリコシル成分から分離された場合、非アルキル化
、すなわち非活性化複素環塩基と比較すると、ヌクレオ
シド形成酵素に対し比較的乏しい基質を提供するように
、アルキル基を複素環塩基に付加した修飾複素環塩基を
含有する。
Ｐ Ｎ Ｐ ａｓｅ以外のヌクレオシド形成酵素を本発
明の方法において用いてもよい。本願明細書において用
いる場合、ヌクレオシド形成酵素とは、リン酸塩が存在
してもまたは不在であっても、第１のまたは第２のヌク
レオシドの活性化または非活性化複素環塩基成分とグリ
コシル成分の間のＣ−Ｎ結合の形成能または破壊能を有
するいずれの酵素をもいう。かくして、かかる語は、機
能的であるのにリン酸塩の存在を必要とするヌクレオシ
ド形成酵素のみＺ、：限定されるものではない。本発明
の方法にて用いることができるヌクレオシド形成酵素は
、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、ピリミジンヌク
レオシドホスホリラーゼ、ウリジンホスホリラーゼ、チ
ミジンホスホリラーゼ、ヌクレオシドリボシルトランス
フェラーゼ、ヌクレオシドデオキシリボシルトランスフ
ェラーゼ、アデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ
、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ、
ウラシルホスホリボシルトランスフェラーゼ、グアノシ
ンホスホリラーゼおよび５−メチルチオアデノシンホス
ホリラーゼを包含する。
明の方法において用いてもよい。本願明細書において用
いる場合、ヌクレオシド形成酵素とは、リン酸塩が存在
してもまたは不在であっても、第１のまたは第２のヌク
レオシドの活性化または非活性化複素環塩基成分とグリ
コシル成分の間のＣ−Ｎ結合の形成能または破壊能を有
するいずれの酵素をもいう。かくして、かかる語は、機
能的であるのにリン酸塩の存在を必要とするヌクレオシ
ド形成酵素のみＺ、：限定されるものではない。本発明
の方法にて用いることができるヌクレオシド形成酵素は
、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、ピリミジンヌク
レオシドホスホリラーゼ、ウリジンホスホリラーゼ、チ
ミジンホスホリラーゼ、ヌクレオシドリボシルトランス
フェラーゼ、ヌクレオシドデオキシリボシルトランスフ
ェラーゼ、アデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ
、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ、
ウラシルホスホリボシルトランスフェラーゼ、グアノシ
ンホスホリラーゼおよび５−メチルチオアデノシンホス
ホリラーゼを包含する。
種々の第！のヌクレオシドと複素環塩基の反応体の反応
混合物に添加されるべきヌクレオシド形成酵素の適当な
量は、当業者にとっては明らかである。本発明の方法に
おいて、タクレオシドホスホリラーゼ酵素をヌクレオシ
ド形成酵素として用いる場合、有効量のリン酸塩が反応
混合物中に含まれていなければならない。本発明の方法
の１具体例にて、第１のヌクレオシドに対するリン酸塩
の初期比率は約０．２５と約１，０の間にあることが好
ましい。かかる比率内での変動が、第２のヌクレオシド
の収量に著しい影響を与えることはないはずである。
混合物に添加されるべきヌクレオシド形成酵素の適当な
量は、当業者にとっては明らかである。本発明の方法に
おいて、タクレオシドホスホリラーゼ酵素をヌクレオシ
ド形成酵素として用いる場合、有効量のリン酸塩が反応
混合物中に含まれていなければならない。本発明の方法
の１具体例にて、第１のヌクレオシドに対するリン酸塩
の初期比率は約０．２５と約１，０の間にあることが好
ましい。かかる比率内での変動が、第２のヌクレオシド
の収量に著しい影響を与えることはないはずである。
本発明の非活性化複素環塩基は、プリン、プリン類似体
または誘導体、またはピリミジン、ピリミジン類似体ま
たは誘導体であってもよい。活性化複素環塩基が修飾プ
リン、プリン類似体または誘導体であり、非活性化複素
環塩基が非修飾ピリミジン、ピリミジン類似体または誘
導体である場合、その場合、該反応混合物は、グリコシ
ル成分と各修飾プリンおよび非修飾ピリミジンの間の結
合を破壊し、形成することができる酵素類（または酵素
）を含有しなければならない。かかる酵素混合物は、ピ
リミジンヌクレオシドホスホリラーゼを組み合わせたプ
リンヌクレオシドホスホリラーゼを包含する。同様に、
修飾ピリミジン、ピリミジン類似体または誘導体を活性
化複素環塩基として用い、非修飾プリン、プリン類似体
またはプリン誘導体を非活性化複素環塩基として用いる
場合、その場合、該反応混合物は、グリコシル成分と各
修飾ピリミジンおよび非修飾プリンの間の結合を破壊し
、形成することができる酵素類（または酵素）を含有し
なければならない。活性化複素環塩基および非活性化複
素環塩基が共にプリン、プリン類似体または誘導体であ
るが、または共にピリミジン、ピリミジン類似体または
誘導体である場合、その場合には第１のヌクレオシドの
活性化複素環塩基とグリコシル成分の間の結合を破壊し
、非活性化複素環塩基とグリコシル成分の間の結合を形
成し、第２のヌクレオシドを形成するのに十分な単一の
ヌクレオシド形成酵素であってもよい。
または誘導体、またはピリミジン、ピリミジン類似体ま
たは誘導体であってもよい。活性化複素環塩基が修飾プ
リン、プリン類似体または誘導体であり、非活性化複素
環塩基が非修飾ピリミジン、ピリミジン類似体または誘
導体である場合、その場合、該反応混合物は、グリコシ
ル成分と各修飾プリンおよび非修飾ピリミジンの間の結
合を破壊し、形成することができる酵素類（または酵素
）を含有しなければならない。かかる酵素混合物は、ピ
リミジンヌクレオシドホスホリラーゼを組み合わせたプ
リンヌクレオシドホスホリラーゼを包含する。同様に、
修飾ピリミジン、ピリミジン類似体または誘導体を活性
化複素環塩基として用い、非修飾プリン、プリン類似体
またはプリン誘導体を非活性化複素環塩基として用いる
場合、その場合、該反応混合物は、グリコシル成分と各
修飾ピリミジンおよび非修飾プリンの間の結合を破壊し
、形成することができる酵素類（または酵素）を含有し
なければならない。活性化複素環塩基および非活性化複
素環塩基が共にプリン、プリン類似体または誘導体であ
るが、または共にピリミジン、ピリミジン類似体または
誘導体である場合、その場合には第１のヌクレオシドの
活性化複素環塩基とグリコシル成分の間の結合を破壊し
、非活性化複素環塩基とグリコシル成分の間の結合を形
成し、第２のヌクレオシドを形成するのに十分な単一の
ヌクレオシド形成酵素であってもよい。
本発明の第１のヌクレオシドがメチルグアノシンまたは
メチルイノシンであり、ヌクレオシド形成酵素がＰ Ｈ
Ｐ ａｓｅである場合、水素イオンが反応の間に遊離す
るかもしれない。メチルグアノシンおよびメチルイノシ
ンは、酸不安定性（ｐＨがあまりに低いと、グリコシド
結合の切断が起こり、ヌクレオシドの破壊が生じること
を意味する）であり、かつ塩基不安定性（ｐＨがあまり
に高いと、イミダゾール環の環化が起こり、ヌクレオシ
ドを破壊することを意味する）である。メチルグアフシ
１ンおよびメチルイノシンの酵素的加リン酸分解はまた
ｐ）（に強く依存している。従って、本発明の方法の第
１のヌクレオシドとしてアルキル化ヌクレオシドを用い
、ヌクレオシド形成酵素としてＰ ＨＰ ａｇｅを用い
る場合、アルキル化ヌクレオシド１モル当たりリン酸塩
ｉモルに対応する弱緩衝（０，１Ｍ）リン酸塩溶液を用
い、適当なｐｉ−［を維持ことか好ましい。溶液のｌ）
Ｈをモニター賎察し、０．５Ｎ水酸化ナトリウムを周期
的に添加することにより、ｐＨを好ましくは約６．８と
約８．０の間、さらに好ましくは約７．０と約７．４の
間に維持すべきである。
メチルイノシンであり、ヌクレオシド形成酵素がＰ Ｈ
Ｐ ａｓｅである場合、水素イオンが反応の間に遊離す
るかもしれない。メチルグアノシンおよびメチルイノシ
ンは、酸不安定性（ｐＨがあまりに低いと、グリコシド
結合の切断が起こり、ヌクレオシドの破壊が生じること
を意味する）であり、かつ塩基不安定性（ｐＨがあまり
に高いと、イミダゾール環の環化が起こり、ヌクレオシ
ドを破壊することを意味する）である。メチルグアフシ
１ンおよびメチルイノシンの酵素的加リン酸分解はまた
ｐ）（に強く依存している。従って、本発明の方法の第
１のヌクレオシドとしてアルキル化ヌクレオシドを用い
、ヌクレオシド形成酵素としてＰ ＨＰ ａｇｅを用い
る場合、アルキル化ヌクレオシド１モル当たりリン酸塩
ｉモルに対応する弱緩衝（０，１Ｍ）リン酸塩溶液を用
い、適当なｐｉ−［を維持ことか好ましい。溶液のｌ）
Ｈをモニター賎察し、０．５Ｎ水酸化ナトリウムを周期
的に添加することにより、ｐＨを好ましくは約６．８と
約８．０の間、さらに好ましくは約７．０と約７．４の
間に維持すべきである。
以下の実施例は本発明の例示である。もちろん、反応体
の割合、反応時間および反応温度が変動しうることは明
らかである。種々の第１のヌクレオシド、非活性化複素
環塩基およびヌクレオシド形成酵素の選択は容易に行う
ことができる。したがって、該実施例はいずれの場合に
おいても本発明の範囲を限定するものとして解釈すべき
ではない。
の割合、反応時間および反応温度が変動しうることは明
らかである。種々の第１のヌクレオシド、非活性化複素
環塩基およびヌクレオシド形成酵素の選択は容易に行う
ことができる。したがって、該実施例はいずれの場合に
おいても本発明の範囲を限定するものとして解釈すべき
ではない。
以下の実施例にて用いられるＰ Ｎ Ｐ ａｓｅは、ト
ヨバ・ケミカル・カンパニー（Ｔｏｙｏｂａ Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙ）から入手した。プリンヌクレ
オシドは、ジョーンズら（Ｊｏｎｅｓ、ｅｔ ａｌ、）
、ジェイ・アム・ケム（Ｊ 、Ａｍ、 Ｃｈｅｗ、）
、 ｌ ９６３ 、８５巻、１９３〜２Ｑ１頁に報告さ
れている操作に従ってアルキル化し、以下の実施例の第
１のヌクレオシドを得た。
ヨバ・ケミカル・カンパニー（Ｔｏｙｏｂａ Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙ）から入手した。プリンヌクレ
オシドは、ジョーンズら（Ｊｏｎｅｓ、ｅｔ ａｌ、）
、ジェイ・アム・ケム（Ｊ 、Ａｍ、 Ｃｈｅｗ、）
、 ｌ ９６３ 、８５巻、１９３〜２Ｑ１頁に報告さ
れている操作に従ってアルキル化し、以下の実施例の第
１のヌクレオシドを得た。
実施例３．６および９のＴＣＡは、バネクら（Ｖ ａｎ
ｅｋ、ｅｔ ａｌ、）、ジェイ・コル・クゼク・ケム・
コムン（Ｊ 、Ｃｏ１１． Ｃｚｅｃｈ、 Ｃｈｅｗ、
Ｃｏａａｕｎ、）、 ｌ ９ Ｂ ４ 。
ｅｋ、ｅｔ ａｌ、）、ジェイ・コル・クゼク・ケム・
コムン（Ｊ 、Ｃｏ１１． Ｃｚｅｃｈ、 Ｃｈｅｗ、
Ｃｏａａｕｎ、）、 ｌ ９ Ｂ ４ 。
４９８．２４９２〜２４９５頁において以前に報告され
ている操作に従って合成した。実施例２．５および８の
３−デアザアデニンは、クレニトスキーら（Ｋ ｒｅｎ
ｉｔｓｋｙ、ｅｔ ａｌ、）、ジャーナル・オフ゛・メ
ディシナル・ケミストリー（Ｊ 、Ｍｅｄ、Ｃｈｅａ＋
、） 。
ている操作に従って合成した。実施例２．５および８の
３−デアザアデニンは、クレニトスキーら（Ｋ ｒｅｎ
ｉｔｓｋｙ、ｅｔ ａｌ、）、ジャーナル・オフ゛・メ
ディシナル・ケミストリー（Ｊ 、Ｍｅｄ、Ｃｈｅａ＋
、） 。
１９８６．２９巻、１３８〜１４２頁において以前に報
告されている操作に従って合成した。ｐＨ８節は、ｐＨ
コントローラーを用いて０．５Ｎ水酸化ナトリウムを添
加することにより行なった。該反応は、ライバら（Ｒｙ
ｂａ、ｅＬ ａｌ、）、ジエイ・クロマトグラフィー
（Ｊ 、 Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ） 、 ｌ
９８１ 。
告されている操作に従って合成した。ｐＨ８節は、ｐＨ
コントローラーを用いて０．５Ｎ水酸化ナトリウムを添
加することにより行なった。該反応は、ライバら（Ｒｙ
ｂａ、ｅＬ ａｌ、）、ジエイ・クロマトグラフィー
（Ｊ 、 Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ） 、 ｌ
９８１ 。
２１１巻、３３７〜３４６頁において記載されているよ
うに、移動相として０．５Ｎギ酸アンモニウム（ｐＨ４
，２）、メタノールおよびジクロロメタン（２：１Ｂ＋
８０）の混合物を用いるシリカゲル４．６ｍｍＸ２４ｃ
＋＋＋カラム上のＨＰＬＣによりモニター観察した。２
５４ｎａ＋にてセットしたＵＶ検出器を用い、カラム流
出をモニター観察し、反応体の消費量および生成物の形
成量を定量した。
うに、移動相として０．５Ｎギ酸アンモニウム（ｐＨ４
，２）、メタノールおよびジクロロメタン（２：１Ｂ＋
８０）の混合物を用いるシリカゲル４．６ｍｍＸ２４ｃ
＋＋＋カラム上のＨＰＬＣによりモニター観察した。２
５４ｎａ＋にてセットしたＵＶ検出器を用い、カラム流
出をモニター観察し、反応体の消費量および生成物の形
成量を定量した。
Ｘ１鯉
次に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明する。
実施例１
０．１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７）ｔｏ対中に、第１の
ヌクレオシドの７−メチルグアノシン・ヨウ化水素酸塩
１．０ミリモルおよび非活性化複素環塩基のアデニン０
．２５ミリモルを加えた。該溶液を０．５Ｎ水酸化ナト
リウムでｐｌ−（７，４に調整した。次に、２５Ｕのプ
リンヌクレオシドホスホリラーゼを加えた。ｐＨを７．
４に維持しながら、反応混合物を２５〜３０℃にて撹拌
した。反応の経過をＨＰＬＣによりモニター観察した。
ヌクレオシドの７−メチルグアノシン・ヨウ化水素酸塩
１．０ミリモルおよび非活性化複素環塩基のアデニン０
．２５ミリモルを加えた。該溶液を０．５Ｎ水酸化ナト
リウムでｐｌ−（７，４に調整した。次に、２５Ｕのプ
リンヌクレオシドホスホリラーゼを加えた。ｐＨを７．
４に維持しながら、反応混合物を２５〜３０℃にて撹拌
した。反応の経過をＨＰＬＣによりモニター観察した。
約４日後、ＨＰＬＣによってさらなる生成物形成の増加
が観察されない場合に反応を終えた。４日間の反応期間
の終わりには、アデニンは完全にアデノシンに変わった
。反応式ｌは、実施例１の概略方法を示している。
が観察されない場合に反応を終えた。４日間の反応期間
の終わりには、アデニンは完全にアデノシンに変わった
。反応式ｌは、実施例１の概略方法を示している。
実施例２
０．１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７）１０ｘＣ中に、第１
のヌクレオシドの７−メチルグアノシン・ヨウ化水素酸
塩１．０ミリモルおよび非活性化複素環塩基の４−アミ
ノ−１−Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン（“３−
デアザアデニン”）０．２５ミリモルを加えた。該溶液
を０．５Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ７，４に調整した。
のヌクレオシドの７−メチルグアノシン・ヨウ化水素酸
塩１．０ミリモルおよび非活性化複素環塩基の４−アミ
ノ−１−Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン（“３−
デアザアデニン”）０．２５ミリモルを加えた。該溶液
を０．５Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ７，４に調整した。
次に、２５０Ｕのプリンヌクレオシドホスホリラーゼを
加えた。ｐＨを７．４に維持しながら、反応混合物を２
５〜３０℃にて撹拌した。反応の経過をＨＰＬＣにより
モニター観察した。約２日後、ＨＰＬＣによってさらな
る生成物形成の増加が観察されない場合に反応を終えた
。２日間の反応期間の終わりには、６５％の３−デアザ
アデニンが３−デアザアデノシンに変わった。反応式２
は、実施例２の概略方法を示している。
加えた。ｐＨを７．４に維持しながら、反応混合物を２
５〜３０℃にて撹拌した。反応の経過をＨＰＬＣにより
モニター観察した。約２日後、ＨＰＬＣによってさらな
る生成物形成の増加が観察されない場合に反応を終えた
。２日間の反応期間の終わりには、６５％の３−デアザ
アデニンが３−デアザアデノシンに変わった。反応式２
は、実施例２の概略方法を示している。
実施例３
０．１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７）１０ｚ１２中に、第
１のヌクレオシドの７−メチルグアノシン・ヨウ化水素
酸塩１．０ミリモルおよび非活性化複素環塩基の１．２
．４−トリアゾール−３−カルボキシアミン（“ＴＣＡ
“）０．２５ミリモルを加えた。該溶液を０，５Ｎ水酸
化ナトリウムでｐＨ７，４に調整した。次に、１００Ｕ
のプリンヌクレオシドホスホリラーゼを加えた。ｐＨを
７．４に維持しながら、反応混合物を２５〜３０℃にて
撹拌した。反応の経過をＨＰＬＣによりモニター観察し
た。約２日後、ＨＰＬＣによってさらなる生成物形成の
増加が観察されない場合に反応を終えた。２日間の反応
期間の終わりには、５４％のＴＣＡがＲＴＣＡに変わっ
た。反応式３は、実施例３の概略方法を示している。
１のヌクレオシドの７−メチルグアノシン・ヨウ化水素
酸塩１．０ミリモルおよび非活性化複素環塩基の１．２
．４−トリアゾール−３−カルボキシアミン（“ＴＣＡ
“）０．２５ミリモルを加えた。該溶液を０，５Ｎ水酸
化ナトリウムでｐＨ７，４に調整した。次に、１００Ｕ
のプリンヌクレオシドホスホリラーゼを加えた。ｐＨを
７．４に維持しながら、反応混合物を２５〜３０℃にて
撹拌した。反応の経過をＨＰＬＣによりモニター観察し
た。約２日後、ＨＰＬＣによってさらなる生成物形成の
増加が観察されない場合に反応を終えた。２日間の反応
期間の終わりには、５４％のＴＣＡがＲＴＣＡに変わっ
た。反応式３は、実施例３の概略方法を示している。
実施例４
０．１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７）ＩＯ＋ｙＱ中に、第
１のヌクレオシドの中和された双性イオン形の７−メチ
ルグアノシン１．０ミリモルおよび非活性化複素環塩基
のアデニン０．２５ ミリモルを加えた。該溶液を０．
５Ｎ水酸化ナトリウムでｐ）（７，４に調整した。次に
、２５Ｕのプリンヌクレオシドホスホリラーゼを加えた
。ｐ）Ｉを７．４に維持しながら、反応混合物を２５〜
３０℃にて撹拌した。反応の経過をＨＰＬＣによりモニ
ター観察した。約４日後、ＨＰＬＣによってさらなる生
成物形成の増加が観察されない場合に反応を終えた。
１のヌクレオシドの中和された双性イオン形の７−メチ
ルグアノシン１．０ミリモルおよび非活性化複素環塩基
のアデニン０．２５ ミリモルを加えた。該溶液を０．
５Ｎ水酸化ナトリウムでｐ）（７，４に調整した。次に
、２５Ｕのプリンヌクレオシドホスホリラーゼを加えた
。ｐ）Ｉを７．４に維持しながら、反応混合物を２５〜
３０℃にて撹拌した。反応の経過をＨＰＬＣによりモニ
ター観察した。約４日後、ＨＰＬＣによってさらなる生
成物形成の増加が観察されない場合に反応を終えた。
４日間の反応期間の終わりには、アデニンは完全にアデ
ノシンに変わった。反応式４は、実施例４の概略方法を
示している。
ノシンに変わった。反応式４は、実施例４の概略方法を
示している。
実施例５
０．１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７） １０３１１２中
に、第１のヌクレオシドの中和された双性イオン形の７
−メチルグアノシン１．０ミリモルおよび非活性化複素
環塩基の３−デアザアデニン０．２５ミリモルを加えた
。該溶液を０．５Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ７，４に調
整した。次に、２５０Ｕのプリンヌクレオシドホスホリ
ラーゼを加えた。ｐＨを７．４に維持しながら、反応混
合物を２５〜３０℃にて撹拌した。反応の経過をＨＰＬ
Ｃによりモニター観察した。約２日後、ＨＰＬＣによっ
てさらなる生成物形成の増加が観察されない場合に反応
を終えた。２日間の反応期間の終わりには、７０％の３
−デアザアデニンが３−デアザアデノシンに変わった。
に、第１のヌクレオシドの中和された双性イオン形の７
−メチルグアノシン１．０ミリモルおよび非活性化複素
環塩基の３−デアザアデニン０．２５ミリモルを加えた
。該溶液を０．５Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ７，４に調
整した。次に、２５０Ｕのプリンヌクレオシドホスホリ
ラーゼを加えた。ｐＨを７．４に維持しながら、反応混
合物を２５〜３０℃にて撹拌した。反応の経過をＨＰＬ
Ｃによりモニター観察した。約２日後、ＨＰＬＣによっ
てさらなる生成物形成の増加が観察されない場合に反応
を終えた。２日間の反応期間の終わりには、７０％の３
−デアザアデニンが３−デアザアデノシンに変わった。
不溶性物質を濾過により除去した。
生成物を冷凍乾燥およびクロマトグラフィーにより濾液
から回収した。生成物はその紫外スペクトルおよび質量
スペクトルにより特徴付けられる。
から回収した。生成物はその紫外スペクトルおよび質量
スペクトルにより特徴付けられる。
測定値：ＵＶｍａｘ
ｐＨ１，２６０ｎｍ： ｐＨ１３，２６６ｎｍ報告値：
ＵＶ ｗａｘ ｐＨ１，２５２ｎｍ： Ｉ）ＨＩ３，２６５ｎｍルソー
ら（Ｒｏｕｓｓｅａｕ、ｅｔ ａｌ、）、バイオケミス
トリー（Ｂ １ｏｃｈｅＩｌｉｓｔｒｙ） 、 １９６
６ 、５巻、７５６頁参照。高速原子衝撃質量分光法は
、生成物の分子量が２６６であることを示した。反応式
５は実施例５の概略方法を示している。
ＵＶ ｗａｘ ｐＨ１，２５２ｎｍ： Ｉ）ＨＩ３，２６５ｎｍルソー
ら（Ｒｏｕｓｓｅａｕ、ｅｔ ａｌ、）、バイオケミス
トリー（Ｂ １ｏｃｈｅＩｌｉｓｔｒｙ） 、 １９６
６ 、５巻、７５６頁参照。高速原子衝撃質量分光法は
、生成物の分子量が２６６であることを示した。反応式
５は実施例５の概略方法を示している。
実施例６
０．１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７）ｌｏｘｉ＞中に、第
１のヌクレオシドの中和された双性イオン形の７−メチ
ルグアノシン１．０ミリモルおよび非活性化複素環塩基
のＴＣＡｏ、２５ミリモルを加えた。
１のヌクレオシドの中和された双性イオン形の７−メチ
ルグアノシン１．０ミリモルおよび非活性化複素環塩基
のＴＣＡｏ、２５ミリモルを加えた。
該溶液を０．５Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ７，４に調整
した。次に、１００Ｕのプリンヌクレオシドホスホリラ
ーゼを加えた。ｐｉ−１を７．４に維持しながら、反応
混合物を２５〜３０℃にて撹拌した。
した。次に、１００Ｕのプリンヌクレオシドホスホリラ
ーゼを加えた。ｐｉ−１を７．４に維持しながら、反応
混合物を２５〜３０℃にて撹拌した。
反応の経過をＨＰＬＣによりモニター観察した。
約２日後、ＨＰＬＣによってさらなる生成物形成の増加
が観察されない場合に反応を終えた。２日間の反応期間
の終わりには、６０％のＴＣＡがＲＴＣＡに変わった。
が観察されない場合に反応を終えた。２日間の反応期間
の終わりには、６０％のＴＣＡがＲＴＣＡに変わった。
不溶性物質を遠心分離により除去した。生成物をクロマ
トグラフィー（ウタガワら（Ｕ ｔａｇａｗａ、ｅｔ
ａｌ、）、アグリカルチャジル・アンド・バイオロジカ
ル・ケミストリー（Ａｇｒｉｃ。
トグラフィー（ウタガワら（Ｕ ｔａｇａｗａ、ｅｔ
ａｌ、）、アグリカルチャジル・アンド・バイオロジカ
ル・ケミストリー（Ａｇｒｉｃ。
Ｂ ｉｏｌ、ｃｈｅｍ、） 、 １９８６ 、５０巻、
１２１〜１２６頁）および冷凍乾燥により回収した。該
生成物は、ミズーリ州、セントルイス、シグマ・ケミカ
ル・カンパニー（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｓ＋１ｃａｌ Ｃ
ｏｍｐａｎｙ）より販売されているＲＴＣＡの標品試料
とクロマトグラフィー的には同一であると思われる。反
応式６は、実施例６の概略方法を示している。
１２１〜１２６頁）および冷凍乾燥により回収した。該
生成物は、ミズーリ州、セントルイス、シグマ・ケミカ
ル・カンパニー（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｓ＋１ｃａｌ Ｃ
ｏｍｐａｎｙ）より販売されているＲＴＣＡの標品試料
とクロマトグラフィー的には同一であると思われる。反
応式６は、実施例６の概略方法を示している。
実施例７
０．１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７）１０ｘＱ中に、第１
のヌクレオシドの中和された双性イオン形の７−メチル
イノシン１．０ミリモルおよび非活性化複素環塩基のア
デニン０．２５ ミリモルを加えた。
のヌクレオシドの中和された双性イオン形の７−メチル
イノシン１．０ミリモルおよび非活性化複素環塩基のア
デニン０．２５ ミリモルを加えた。
該溶液を０．５Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ７，４に調整
した。次に、２５Ｕのプリンヌクレオシドホスホリラー
ゼを加えた。Ｉ）Ｈを７．４に維持しながら、反応混合
物を２５〜３０℃にて撹拌した。反応の経過をＨＰＬＣ
によりモニター観察した。約２日後、ＨＰＬＣによって
さらなる生成物形成の増加が観察されない場合に反応を
終えた。２日間の反応期間の終わりには、９０％のアデ
ニンがアデノシンに変わった。反応式７は、実施例７の
概略方法を示している。
した。次に、２５Ｕのプリンヌクレオシドホスホリラー
ゼを加えた。Ｉ）Ｈを７．４に維持しながら、反応混合
物を２５〜３０℃にて撹拌した。反応の経過をＨＰＬＣ
によりモニター観察した。約２日後、ＨＰＬＣによって
さらなる生成物形成の増加が観察されない場合に反応を
終えた。２日間の反応期間の終わりには、９０％のアデ
ニンがアデノシンに変わった。反応式７は、実施例７の
概略方法を示している。
実施例８
０．１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７） ！ＯｘＱ中に、第
１のヌクレオシドの中和された双性イオン形の７−メチ
ルイノシン１．０ミリモルおよび非活性化複素環塩基の
３−デアザアデニン０．２５ミリモルを加えた。該溶液
を０．５Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ７，４に調整した。
１のヌクレオシドの中和された双性イオン形の７−メチ
ルイノシン１．０ミリモルおよび非活性化複素環塩基の
３−デアザアデニン０．２５ミリモルを加えた。該溶液
を０．５Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ７，４に調整した。
次に、２５０Ｕのプリンヌクレオシドホスホリラーゼを
加えた。ｐＨを７．４に維持しながら、反応混合物を２
５〜３０℃にて撹拌した。反応の経過をＨＰＬＣにより
モニター観察した。約２日後、ＨＰＬＣによってさらな
る生成物形成の増加が観察されない場合に反応を終えた
。２日間の反応期間の終わりには、７３％の３−デアザ
アデニンが３−デアザアデノシンに変わった。反応式８
は、実施例８の概略方法を示している。
加えた。ｐＨを７．４に維持しながら、反応混合物を２
５〜３０℃にて撹拌した。反応の経過をＨＰＬＣにより
モニター観察した。約２日後、ＨＰＬＣによってさらな
る生成物形成の増加が観察されない場合に反応を終えた
。２日間の反応期間の終わりには、７３％の３−デアザ
アデニンが３−デアザアデノシンに変わった。反応式８
は、実施例８の概略方法を示している。
実施例９
０．１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７）１０ｚ１２中に、第
１のヌクレオシドの中和された双性イオン形の７−メチ
ルイノシン１０．０ミリモルおよび非活性化複素環塩基
のＴＣＡｏ、２５ミリモルを加えた。
１のヌクレオシドの中和された双性イオン形の７−メチ
ルイノシン１０．０ミリモルおよび非活性化複素環塩基
のＴＣＡｏ、２５ミリモルを加えた。
該溶液を０．５Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ７，４に調整
した。次に、１０００のプリンヌクレオシドホスホリラ
ーゼを加えた。ｐＨを７．４に維持しながら、反応混合
物を２５〜３０℃にて撹拌した。
した。次に、１０００のプリンヌクレオシドホスホリラ
ーゼを加えた。ｐＨを７．４に維持しながら、反応混合
物を２５〜３０℃にて撹拌した。
反応の経過をＨＰＬＣによりモニター観察した。
約２日後、）ｆＰＬｃによってさらなる生成物形成の増
加が観察されない場合に反応を終えた。２日間の反応期
間の終わりには、５７％のＴＣＡがＲＴＣＡに変わった
。反応式９は、実施例９の概略方法を示している。
加が観察されない場合に反応を終えた。２日間の反応期
間の終わりには、５７％のＴＣＡがＲＴＣＡに変わった
。反応式９は、実施例９の概略方法を示している。
前記実施例にて記載されている一般的実験操作は、修飾
に適合させてもよい。例えば、５０％までの容量の水溶
液とアセトニトリルとの置換は酵素によって許容される
であろう。高濃度のアセトニトリルの存在下にて、反応
収量は影響されないが、またはある場合、特に第１のヌ
クレオシドとして３−デアザアデノシンを用いる場合に
は、わずかに増収される。他の許容される溶媒も当業者
にとっては明らかである。
に適合させてもよい。例えば、５０％までの容量の水溶
液とアセトニトリルとの置換は酵素によって許容される
であろう。高濃度のアセトニトリルの存在下にて、反応
収量は影響されないが、またはある場合、特に第１のヌ
クレオシドとして３−デアザアデノシンを用いる場合に
は、わずかに増収される。他の許容される溶媒も当業者
にとっては明らかである。
中和された双性イオン形の７−メチルグアノシン（実施
例４〜６の第１のヌクレオシド）は、製造の容易性およ
び第２のヌクレオシド、すなわち、トランスリポシレー
ジョン生成物（ｔｒａｎｓｒｉｂｏｓｙ−Ｉａｔｉｏｎ
ｐｒｏｄｕｃｔ）の収量の両方の点において、そのヨ
ウ化水素酸塩（実施例１〜３の第１のヌクレオシド）よ
りもわずかに優れているかもしれない。
例４〜６の第１のヌクレオシド）は、製造の容易性およ
び第２のヌクレオシド、すなわち、トランスリポシレー
ジョン生成物（ｔｒａｎｓｒｉｂｏｓｙ−Ｉａｔｉｏｎ
ｐｒｏｄｕｃｔ）の収量の両方の点において、そのヨ
ウ化水素酸塩（実施例１〜３の第１のヌクレオシド）よ
りもわずかに優れているかもしれない。
実施例７〜９の収量が示すように、本発明の方法におい
ては、７−メチルイノシン（実施例７〜９の第１のヌク
レオシド）を用いるトランスリポジレージタンが効果的
である。しかしながら、２つの因子が、メチル化イノシ
ンよりもメチル化グアノシンの使用を有利にしている。
ては、７−メチルイノシン（実施例７〜９の第１のヌク
レオシド）を用いるトランスリポジレージタンが効果的
である。しかしながら、２つの因子が、メチル化イノシ
ンよりもメチル化グアノシンの使用を有利にしている。
第１は、グアノシンの市販価格はイノシンの価格の約半
分であることである。第２は、７−メチルグアニンは非
常に不溶解性であると考えられることである。実施例１
〜６のトランスリポジレージタン反応の間に、７−メチ
ルグアノシンを加リン酸分解し、溶液から沈澱する７−
メチルグアニンを得た。該反応完了後、残りのいずれの
ドナー分子も弱酸性加水分解に付し、濾過または遠心分
離によりほとんど定量的に固形の７−メチルグアニンを
取り出すことができるヶ 聚艷空艷果 本発明は、Ｒ−１−Ｐの単離を必要とせず、かつピリミ
ジンヌクレオシドホスホリラーゼおよびプリンヌクレオ
シドホスホリラーゼの両方の酵素を使用することなく、
簡単にヌクレオシドを酵素的に合成することができる。
分であることである。第２は、７−メチルグアニンは非
常に不溶解性であると考えられることである。実施例１
〜６のトランスリポジレージタン反応の間に、７−メチ
ルグアノシンを加リン酸分解し、溶液から沈澱する７−
メチルグアニンを得た。該反応完了後、残りのいずれの
ドナー分子も弱酸性加水分解に付し、濾過または遠心分
離によりほとんど定量的に固形の７−メチルグアニンを
取り出すことができるヶ 聚艷空艷果 本発明は、Ｒ−１−Ｐの単離を必要とせず、かつピリミ
ジンヌクレオシドホスホリラーゼおよびプリンヌクレオ
シドホスホリラーゼの両方の酵素を使用することなく、
簡単にヌクレオシドを酵素的に合成することができる。
０
０Ｈ
Ｏ
Ｈ
０
Ｈ
Ｈ２
Ｏ
Ｈ
ＨＯ
０）１
０
Ｈ
０
Ｈ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、（ａ）溶液中、ヌクレオシド形成酵素の存在下、（
ｉ）第１のヌクレオシドのグリコシル成分から解離され
た場合、非活性化複素環塩基と比較すると、該ヌクレオ
シド形成酵素に対する比較的乏しい基質を提供する、グ
リコシル成分に結合した活性化複素環塩基からなる第１
のヌクレオシドと、（ｉｉ）非活性化複素環塩基とを、
該第１のヌクレオシドが非活性化複素環塩基と結合する
ためのグリコシル成分を供与するのに十分な時間反応さ
せ、 （ｂ）（ｉ）グリコシル成分に結合した非活性化複素環
塩基からなる第２のヌクレオシドおよび（ｉｉ）該グリ
コシル成分から解離した活性化複素環塩基を含有する混
合物を得、 （ｃ）得られた第２のヌクレオシドを該混合物から単離
することを特徴とするヌクレオシドの合成方法。 ２、活性化複素環塩基が、アルキル、アルキルフェニル
、ヒドロキシアルキルおよびヒドロキシアルキルフェニ
ル置換基からなる群より選択される置換基で修飾された
複素環塩基である請求項１記載の方法。 ３、第１のヌクレオシドが、修飾されたアデノシン、グ
アノシン、イノシン、ウリジン、シチジン、チミジン、
デオキシアデノシン、デオキシグアノシン、デオキシイ
ノシン、デオキシチミジン、デオキシウリジンおよびデ
オキシシチジンからなる群より選択される請求項１記載
の方法。 ４、第１のヌクレオシドが、修飾されたアデノシン５−
リン酸、グアノシン５−リン酸、イノシン５−リン酸、
チミジン５−リン酸、ウリジン５−リン酸、シチジン５
−リン酸、デオキシアデノシン５−リン酸、デオキシグ
アノシン５−リン酸、デオキシイノシン５−リン酸、デ
オキシチミジン５−リン酸、デオキシウリジン５−リン
酸およびデオキシシチジン５−リン酸からなる群より選
択される修飾ヌクレオシド５−リン酸である請求項１記
載の方法。 ５、ヌクレオシド形成酵素が、プリンヌクレオシドホス
ホリラーゼ、ピリミジンヌクレオシドホスホリラーゼ、
ウリジンホスホリラーゼ、チミジンホスホリラーゼ、ヌ
クレオシドリボシルトランスフェラーゼ、ヌクレオシド
デオキシリボシルトランスフェラーゼ、アデニンホスホ
リボシルトランスフェラーゼ、ヒポキサンチンホスホリ
ボシルトランスフェラーゼ、ウラシルホスホリボシルト
ランスフェラーゼ、グアノシンホスホリラーゼおよび５
−メチルチオアデノシンホスホリラーゼからなる群より
選択される請求項１記載の方法。 ６、（ａ）溶液中、ヌクレオシド形成酵素の存在下、（
ｉ）グリコシル成分に結合したアルキル化複素環塩基か
らなるアルキル化ヌクレオシドと、（ｉｉ）複素環塩基
とを、該アルキル化ヌクレオシドが該複素環塩基と結合
するためのグリコシル成分を供与するのに十分な時間反
応させ、グリコシル成分に結合した該複素環塩基からな
るヌクレオシドを含有する混合物を得、 （ｂ）得られたヌクレオシドを該混合物から単離するこ
とを特徴とするヌクレオシドの合成方法。 ７、アルキル化ヌクレオシドのグリコシル成分が、リボ
ース、リボース類似体、リボース誘導体、デオキシリボ
ース、デオキシリボース類似体およびデオキシリボース
誘導体からなる群より選択される請求項６記載の方法。 ８、グリコシル成分が、リボース、リボース５−リン酸
、デオキシリボースおよびデオキシリボース５−リン酸
からなる群より選択される請求項７記載の方法。 ９、アルキル化複素環塩基が、アルキル化プリン、アル
キル化プリン類似体、アルキル化プリン誘導体、アルキ
ル化ピリミジン、アルキル化ピリミジン類似体およびア
ルキル化ピリミジン誘導体からなる群より選択される請
求項８記載の方法。 １０、アルキル化ヌクレオシドが、メチルグアノシンお
よびメチルイノシンからなる群より選択される請求項９
記載の方法。 １１、複素環塩基が、プリン、プリン類似体、プリン誘
導体、ピリミジン、ピリミジン類似体およびピリミジン
誘導体からなる群より選択される請求項６記載の方法。 １２、複素環塩基が、アデニン、デアザアデニンおよび
１，２，４−トリアゾール−３−カルボキシアミンから
なる群より選択される請求項１１記載の方法。 １３、溶液のｐＨを、約６．８と約８．０の間に維持す
る請求項６記載の方法。 １４、（ａ）溶液中、ヌクレオシドホスホリラーゼ酵素
および有効量のリン酸塩の存在下、（ｉ）第１のヌクレ
オシドのグリコシル成分から解離された場合、非活性化
複素環塩基と比較すると、該ヌクレオシド形成酵素に対
する比較的乏しい基質を提供する、グリコシル成分に結
合した活性化複素環塩基からなる第１のヌクレオシドと
、（ｉｉ）非活性化複素環塩基とを、該第１のヌクレオ
シドが該非活性化複素環塩基と結合するためのグリコシ
ル成分を供与するのに十分な時間反応させ、（ｂ）（ｉ
）グリコシル成分に結合した非活性化複素環塩基からな
る第２のヌクレオシドおよび（ｉｉ）該グリコシル成分
から解離した活性化複素環塩基を含有する混合物を得、 （ｃ）得られた第２のヌクレオシドを該混合物から単離
することを特徴とするヌクレオシドの合成方法。 １５、活性化複素環塩基が、アルキル、アルキルフェニ
ル、ヒドロキシアルキルおよびヒドロキシアルキルフェ
ニル置換基からなる群より選択される置換基で修飾され
た複素環塩基である請求項１４記載の方法。 １６、グリコシル成分が、リボース、リボース類似体、
リボース誘導体、デオキシリボース、デオキシリボース
類似体およびデオキシリボース誘導体からなる群より選
択される請求項１５記載の方法。 １７、第１のヌクレオシドが、リボース、リボース５−
リン酸、デオキシリボースおよびデオキシリボース５−
リン酸からなる群より選択されるグリコシル成分に結合
した、アルキル化プリン、アルキル化プリン類似体、ア
ルキル化プリン誘導体、アルキル化ピリミジン、アルキ
ル化ピリミジン類似体およびアルキル化ピリミジン誘導
体からなる群より選択されるアルキル化複素環塩基から
なり、非活性化複素環塩基が、プリン、プリン類似体、
プリン誘導体、ピリミジン、ピリミジン類似体およびピ
リミジン誘導体からなる群より選択される請求項１６記
載の方法。 １８、ヌクレオシドホスホリラーゼ酵素が、プリンヌク
レオシドホスホリラーゼおよびピリミジンヌクレオシド
ホスホリラーゼからなる群より選択される請求項１７記
載の方法。 １９、（ａ）溶液中、ヌクレオシドホスホリラーゼ酵素
および有効量のリン酸塩の存在下、（ｉ）メチルグアノ
シンおよびメチルイノシンからなる群より選択される第
１のヌクレオシドと、（ｉｉ）アデニン、デアザアデニ
ンおよび１，２，４−トリアゾール−３−カルボキシア
ミンからなる群より選択される複素環塩基とを、該第１
のヌクレオシドが複素環塩基と結合するためのリボース
成分を供与するのに十分な時間反応させ、リボース成分
に結合した複素環塩基からなる第２のヌクレオシドを含
有する混合物を得、 （ｂ）得られた第２のヌクレオシドを該混合物から単離
することを特徴とするヌクレオシドの合成方法。 ２０、ヌクレオシドホスホリラーゼ酵素がプリンヌクレ
オシドホスホリラーゼである請求項１９記載の方法。 ２１、第１のヌクレオシドが、７−メチルグアノシンお
よび７−メチルイノシンからなる群より選択される請求
項２０記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US334699 | 1989-04-06 | ||
| US07/334,699 US5075225A (en) | 1989-04-06 | 1989-04-06 | Process for the enzymatic synthesis of nucleosides |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0335789A true JPH0335789A (ja) | 1991-02-15 |
Family
ID=23308410
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2082913A Pending JPH0335789A (ja) | 1989-04-06 | 1990-03-29 | ヌクレオシドの酵素的合成方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5075225A (ja) |
| EP (1) | EP0391592A1 (ja) |
| JP (1) | JPH0335789A (ja) |
| CA (1) | CA2008806A1 (ja) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ZA923640B (en) * | 1991-05-21 | 1993-02-24 | Iaf Biochem Int | Processes for the diastereoselective synthesis of nucleosides |
| US5602109A (en) * | 1994-01-10 | 1997-02-11 | Abbott Laboratories | Method to enhance the immune system of a human |
| US5700590A (en) * | 1994-01-10 | 1997-12-23 | Abbott Laboratories | Nutritional formula with ribo-nucleotides |
| US5492899A (en) * | 1994-01-10 | 1996-02-20 | Abbott Laboratories | Infant nutritional formula with ribo-nucleotides |
| US6136858A (en) * | 1994-01-10 | 2000-10-24 | Abbott Laboratories | Infant formula and methods of improving infant stool patterns |
| US5488039A (en) * | 1994-01-10 | 1996-01-30 | Abbott Laboratories | Method for the production of an enteral formula containing ribo-nucleotides |
| JP3864357B2 (ja) * | 1997-08-04 | 2006-12-27 | 有機合成薬品工業株式会社 | プリンヌクレオシド化合物の製造方法 |
| US20030022293A1 (en) * | 1997-09-18 | 2003-01-30 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
| US20030166132A1 (en) * | 1998-08-26 | 2003-09-04 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
| US6858721B2 (en) * | 2001-05-01 | 2005-02-22 | Mitsui Chemicals, Inc. | Method for producing cytosine nucleoside compounds |
| JP4173815B2 (ja) * | 2001-12-28 | 2008-10-29 | ヤマサ醤油株式会社 | ２’−デオキシグアノシンの製造法 |
| HUE029877T2 (en) | 2003-05-30 | 2017-04-28 | Gilead Pharmasset Llc | Modified fluorinated nucleoside analogues |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5985298A (ja) * | 1982-11-04 | 1984-05-17 | Yamasa Shoyu Co Ltd | ３′−デオキシグアノシンの製造法 |
| JPS61146194A (ja) * | 1984-12-18 | 1986-07-03 | Yamasa Shoyu Co Ltd | ３′−デオキシグアノシンの製造法 |
| JPS62253393A (ja) * | 1986-01-21 | 1987-11-05 | Yamasa Shoyu Co Ltd | リボヌクレオシドの製造法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4381344A (en) * | 1980-04-25 | 1983-04-26 | Burroughs Wellcome Co. | Process for producing deoxyribosides using bacterial phosphorylase |
| US4347315A (en) * | 1980-04-25 | 1982-08-31 | Burroughs Wellcome Co. | Synthesis of ribosides using bacterial phosphorylase |
| JPS58170493A (ja) * | 1982-04-01 | 1983-10-07 | Yamasa Shoyu Co Ltd | ３′−デオキシグアノシンの製造法 |
| DE3379274D1 (en) * | 1982-04-01 | 1989-04-06 | Yamasa Shoyu Kk | Process for producing 3'-deoxyguanosine |
-
1989
- 1989-04-06 US US07/334,699 patent/US5075225A/en not_active Expired - Fee Related
-
1990
- 1990-01-29 CA CA002008806A patent/CA2008806A1/en not_active Abandoned
- 1990-03-28 EP EP90303280A patent/EP0391592A1/en not_active Withdrawn
- 1990-03-29 JP JP2082913A patent/JPH0335789A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5985298A (ja) * | 1982-11-04 | 1984-05-17 | Yamasa Shoyu Co Ltd | ３′−デオキシグアノシンの製造法 |
| JPS61146194A (ja) * | 1984-12-18 | 1986-07-03 | Yamasa Shoyu Co Ltd | ３′−デオキシグアノシンの製造法 |
| JPS62253393A (ja) * | 1986-01-21 | 1987-11-05 | Yamasa Shoyu Co Ltd | リボヌクレオシドの製造法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5075225A (en) | 1991-12-24 |
| CA2008806A1 (en) | 1990-10-06 |
| EP0391592A1 (en) | 1990-10-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2619710B2 (ja) | ２′，３′−ジデオキシプリンヌクレオシド類の製造方法 | |
| Maley et al. | The synthesis of α-D-Glucosamine-1-phosphate and N-Acetyl-α-D-glucosamine-1-phosphate. Enzymatic formation of uridine Diphosphoglucosamine1 | |
| JPH0335789A (ja) | ヌクレオシドの酵素的合成方法 | |
| Fateev et al. | The chemoenzymatic synthesis of clofarabine and related 2′-deoxyfluoroarabinosyl nucleosides: The electronic and stereochemical factors determining substrate recognition by E. coli nucleoside phosphorylases | |
| Kamel et al. | Chemo-enzymatic synthesis of α-D-pentofuranose-1-phosphates using thermostable pyrimidine nucleoside phosphorylases | |
| Barai et al. | A universal biocatalyst for the preparation of base‐and sugar‐modified nucleosides via an enzymatic transglycosylation | |
| Wong et al. | Synthesis of novel disaccharides based on glycosyltransferases: β1, 4galactosyltransferase | |
| Zaitseva et al. | Chemical-enzymatic synthesis of 3′-amino-2′, 3′-dideoxy-β-D-ribofuranosides of natural heterocyclic bases and their 5′-monophosphates | |
| US20250276994A1 (en) | Cap analog for the 5'-end of eukaryotic messenger rnas | |
| US4347315A (en) | Synthesis of ribosides using bacterial phosphorylase | |
| JP4601060B2 (ja) | アジド化アミノ糖ヌクレオチド及びその応用 | |
| US4282352A (en) | Adenosine triphosphate derivative | |
| EP0038568B1 (en) | Synthesis of deazapurine nucleosides | |
| US20070065922A1 (en) | Biocatalytic synthesis of aminodeoxy purine N9-beta-D-nucleosides containing 3-amino-3-deoxy-beta-D-ribofuranose, 3-amino-2,3-dideoxy-beta-D-ribofuranose, and 2-amino-2-deoxy-beta-D-ribofuranose as sugar moieties | |
| Wu et al. | L-uridine: synthesis and behavior as enzyme substrate | |
| Scigelová et al. | Synthesis of α-mannosylated ergot alkaloids employing α-mannosidase | |
| EP0767239B1 (de) | Verfahren zur enzymatischen Synthese von Nukleotid-6-desoxy-D-xylo-4-hexulosen | |
| KR920005726B1 (ko) | 리보누클레오시드(ribonucleoside)의 제조방법 | |
| US6316228B1 (en) | Efficient synthesis of nucleosides | |
| DK149958B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af 4-amino-1-(2-desoxy-beta-d-ribofuranosyl)-1h-imidazo-(4,5-c)pyridin eller estere eller salte deraf | |
| Kitade et al. | Uridine analogs of 2′, 5′-oligoadenylates: on the biological role of the middle base of 2-5A trimer | |
| Sagi et al. | Incorporation of the carbocyclic analogue of (E)-5-(2-bromovinyl)-2′-deoxyuridine 5′-triphosphate into a synthetic DNA | |
| Zeng et al. | Synthesis of aryl azide derivatives of UDP-GlcNAc and UDP-GalNAc and their use for the affinity labeling of glycosyltransferases and the UDP-HexNAc pyrophosphorylase | |
| JPH06335395A (ja) | Ｎ−アセチルラクトサミンの製造法 | |
| Lawrence et al. | Reactions of spores and cells of Bacillus cereus with pyrimidine ribosides |