JPH0339678B2 - - Google Patents
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- JPH0339678B2 JPH0339678B2 JP56097309A JP9730981A JPH0339678B2 JP H0339678 B2 JPH0339678 B2 JP H0339678B2 JP 56097309 A JP56097309 A JP 56097309A JP 9730981 A JP9730981 A JP 9730981A JP H0339678 B2 JPH0339678 B2 JP H0339678B2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/38—Nucleosides
- C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides
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- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は、微生物を用いるグアノシンの製造法
に関する。 グアノシンは、調味料として食品分野で重要な
位置を占めている5′−グアニル酸の製造原料とし
て有用である。醗酵法によつてグアノシンを製造
する方法としては、いくつかの方法が知られてお
り、たとえば、バチルス・プミルス（Bacillus
pumilus）やパチルス・リケニホルミス
（Bacillus licheniformis）を用いる方法（特公昭
48−33392）、バチルス・ズブチリス（Bacillus
subtilis）を用いる方法（特公昭55−2955）など
がある。しかしながら、これらの公知の方法にお
いては、培養液中のグアノシンの蓄積量は、たか
だか８ないし10ｇ／であつて、工業的な見地か
らは必ずしも有利な方法とはいえない。 本発明者らは、培養液中のグアノシン蓄積量を
増大させる目的で鋭意研究したところ、アデニン
要求性を有し、グアノシンを生産する能力を有す
る微生物を培養して、グアノシンを生成させるに
際し、微生物の生育に必須であるアデニン含有物
質を、微生物の生育状況等を勘案しつつ、培養の
進行中に少量ずつ間歇的または連続的に添加する
ことによつてグアノシンの生成量を、顕著に増大
させることができることを見い出し、これに基づ
いてさらに研究した結果、本発明を完成した。 本発明は、アデニン要求性およびグアノシン生
産能を有するバチルス属に属する微生物を培地に
培養しグアノシンを培養物中に生成蓄積せしめ培
養物からグアノシンを採取する方法において、ア
デニン含有物質の所要量の約50％以下を含有する
培地で培養を開始し、培地中のアデニン含有物質
のほぼ消費された時点からその所要量の残部を間
歇的または連続的に添加して培養することを特徴
とするグアノシンの製造法である。 本発明において用いられるアデニン含有物質と
しては、アデニン、アデノシン、5′−アデノシン
モノリン酸、3′−アデノシンモノリン酸、5′−ア
デノシンジリン酸、5′−アデノシントリリン酸、
リボ核酸、デオキシリボ核酸はもとより、それら
を含有する微生物菌体やその抽出物、肉エキス、
魚肉エキスなどの天然有機物や、アデニルコハク
酸などのアデニン誘導体などがあげられる。 従来、アデニン要求性微生物の培養において
は、アデニン含有物質の所要量の全量を初発培地
に添加する方法がとられているが、本発明におい
ては、初発培地に添加されるアデニン含有物質の
量を所要量の50％以下に制限し、培葉が開始され
て、初発培地に添加されたアデニン含有物質がほ
ぼ消費された時点からその所要量の残部を間歇的
または連続的に添加する方法が用いられる。 本発明でいう「アデニン含有物質の所要量」と
は、培地に添加されるアデニン含有物質の量であ
つて、グアノシンの生成蓄積が最大となるような
量をいう。この量は供試菌株の種類や培養条件に
よつて異るものであるが、通常はアデニンに換算
して約0.001ないし0.002mole／程度である。 「アデニン含有物質のほぼ消費された時点」と
は、培地中のアデニン含有物質の量がアデニンと
して約0.01ｍmole／以下になつた時点を意味
する。 本発明のアデニン含有物質の添加方法の具体例
としては、たとえば、あらかじめ決められたタ
イムスケジユールにしたがつて、アデニン含有物
質の添加量を等分して、または時間的に変化させ
ながら間歇的または連続的に添加する方法、培
養液中の微生物菌体の増殖量の変化にしたがつ
て、アデニン含有物質の添加量を変化させなが
ら、間歇的または連続的に添加する方法、培養
液中の溶存酸素濃度の変化や培養液の酸素消費量
をはじめ、培養液の発熱量など微生物の生育の状
況を各種のセンサーや検出機器類で検知して、あ
らかじめ決められた量のアデニン含有物質を間歇
的または連続的に添加する方法などが挙げられ、
いずれの方法も可能である。なかでも、培養時間
の経過と共に、アデニン含有物質の添加量を指数
的に増大させていく方法は、短時間で著量のグア
ノシンを生成蓄積させることが可能であるなどの
点で、一層有利である。この場合、アデニン含有
物質の添加開始後の時間ｔにおける、単位時間当
りのアデニン含有物質添加量（以下、「供給速度」
と呼ぶ。）Ｆ（ｔ）は次式のように表わすことがで
きる。 Ｆ（ｔ）＝Ｆ（ｏ）exp（Kt）（Ｋ≠Ｏ） ここでＦ（ｏ）は添加開始時における供給速度、
Ｋは定数（以下、「比供給速度」と呼ぶ。）であ
る。この方法によれば、時間tENDまでに添加され
たアデニン含有物質量AdTOTALは次式で示される。 AdTOTAL＝Ｆ（ｏ）／Ｋ ｛exp（KtEND）−１｝＋AdIN （ただし、AdINは初発培地に添加されたアデニ
ン含有物質の量。） アデニン含有物質の添加開始時期、添加するア
デニン含有物質量（AdTOTAL−AdIN＝AdADDとす
る。）、初発供給速度Ｆ（ｏ）、比供給速度Ｋは、使
用する微生物の種類や培地、培養条件などによつ
て異なるが、アデニン含有物質の添加開始時期と
しては、該菌の増殖量が最終到達増殖量の０％な
いし約75％、とりわけ、約５％ないし50％に達し
た時点からが、AdADDとしては、該菌の生育に必
要な量（通常、アデニンとして、約0.001ないし
0.002mole／の約25％ないし100％、とりわけ
約50％ないし95％が、Ｆ（ｏ）としては、単位時
間当り、AdADDの約0.1％ないし50％、とりわけ約
１％ないし20％が、Ｋとしては約0.01hr-1ないし
5hr-1、さらに好ましくは約0.05hr-1ないし
0.2hr-1、とりわけ約0.075ないし0.15hr-1が望ま
しい。 本発明で使用される微生物は、アデニン要求性
を有しかつグアノシン生産能を有するバチルス属
に属する微生物であればいずれでもよい。該バチ
ルス属菌としては、たとえば、バチルス・プミル
ス（Bacillus pumilus）、バチルス・ズブチリス
（Bacillus subtilis）などの種が挙げられ、具体
的には、バチルス・プミルスNo.148−Ｓ−16
（FERM BP−６、IFO 12483）、バチルス・ズブ
チリス ATCC 19221（IFO 14123）などが挙げ
られる。上記FERMBP番号は、ブダペスト条約
による工業技術院微生物工業技術研究所の寄託番
号を、ATCC番号はジ・アメリカン・タイプ・カ
ルチヤー・コレクシヨン（The American Type
Calture Collection）（米国）の寄託番号を、IFO
番号は財団法人発酵研究所の寄託番号をそれぞれ
表わす。なお、上記IFO 12483株は特公昭48−
33392号公報に記載されている。また上記ATCC
19221株は、ジ・アメリカン・タイプ・カルチヤ
ー・コレクシヨン発行のカタログ・オブ・ストレ
インズ第14版1980年（The American Type
Culture Collection Catalogue of Strains Ｉ
Fourteenth Edition 1980）に収載されている。 本発明に使用される微生物を培養する培地とし
ては、本発明で使用される微生物が生育する培地
が利用される。たとえば、培地に添加される炭素
源としては、でんぷん、ぶどう糖、庶糖などの糖
類のほか、グリセリン、メタノール、エタノー
ル、ソルビトールなどの一価ないし多価のアルコ
ール類、酢酸、プロピオン酸、ステアリン酸、オ
レイン酸などの脂肪酸類、大豆油、オリーブ油、
魚油、鯨油、棉実油、パーム油、ラードなどの油
脂類、ノナン、デカン、ウンデカン、ヘキサデカ
ン、エイコサン、ペンタコサンなどのｎ−パラフ
イン類のほか、ケロセン、ガスオイル、ベビーガ
スオイルなどの炭化水素類などがそれぞれ単独も
しくは混合して用いられる。窒素源としては、ペ
プトン、大豆粉、コーンステイープリカー、酵
母、肉エキスなどの有機窒素源のほか、硫酸、硝
酸、塩酸、炭酸などのアンモニウム塩、アンモニ
アガス、アンモニア水や尿素などの無機窒素源
が、それぞれ単独で、もしくは混合して用いられ
る。その他該菌の生育に必要な各種の無機塩類、
たとえばカルシウム、カリウム、ナトリウム、マ
グネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛などの硫酸
塩、塩酸塩、炭酸塩、硝酸塩、燐酸塩、酢酸塩な
どを、また該菌の生育に必要なアミノ酸類、ビタ
ミン類などを適宜選択して、それらを単独または
組合せて添加して用いられる。さらに必要に応じ
て、シリコーンオイル、ポリアルキレングリコー
ルエーテルなどの消泡剤や界面活性剤なとを添加
してもよい。 培養は、振盪あるいは通気撹拌深部培養などの
好気的条件下に実施される。培地のPHは通常約５
ないし８の範囲から選定されるが、好ましくはPH
約5.5ないし7.5の範囲で培養される。培養中に培
地のPHの変動が観測されれば、これを望ましい範
囲に補正するため、たとえば、水酸化アルカリ
（例、水酸化ナトリウム）、炭酸カルシウム、アン
モニアなどの水溶液、懸濁液あるいはアンモニア
ガスなどを適宜補添しつつ培養してもよい。培養
の温度は、使用される微生物の生育に適した温度
を選択すればよく、通常約20℃ないし60℃、好ま
しくは約25℃ないし45℃で培養するのが有利であ
る。培養の時間は、グアノシンの蓄積量が最大に
達するまで培養すればよく、通常約24ないし144
時間培養すれば、その目的を達成することができ
る。 本発明方法で発酵液中に生成されたグアノシン
はすでに公知されている通常の手段、たとえばイ
オン交換樹脂や活性炭によるクロマトグラフイ
ー、沈澱法あるいは溶媒抽出法などの分離精製手
段を単独もしくは組合せて適用することによつて
採取することができる。 本発明の方法によれば、従来のアデニン含有物
質を一括して培地に添加する方法に比べて、ほゞ
２倍にも達する量のグアノシンを、培養液中に蓄
積させることができる。したがつて、本発明方法
を用いると、一定量の設備を用いる場合であつて
も、目的物グアノシンの生産量が増大され、ま
た、培養液中の目的物グアノシンの含有量が多い
ので、目的物グアノシンの採取が容易であるなど
の点で、本発明は工業的生産上有利な方法であ
る。 以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に
説明する。なお、以下の実施例において、培地の
添加物のパーセント（％）はとくにことわりのな
いかぎり、重量／容量パーセント（Ｗ／Ｖ、％）
を表わす。 実施例 １ アデニン100mg／を含む栄養寒天培地上に生
育したバチルス・プミルスNo.148−Ｓ−16
（FERM BP−６、IFO 12483）をグルコース４
％、尿素0.2％、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム0.5
％、硫酸マグネシウム（７水塩）0.2％、塩化カ
リウム0.1％、硫酸マンガン（約４水塩）0.003
％、塩化カルシウム（２水塩）0.2％、コーンス
テイープリカー２％、リボ核酸0.25％、ヒスチジ
ン0.03％、ビオチン200μｇ／からなる滅菌シー
ド培地20mlを含む200ml容三角フラスコ５本に接
種し、18時間、37℃で振盪培養した。 このシード培養液100mlを、滅菌した22％グル
コース溶液１と、滅菌した硫酸アンモニウム
0.8％、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム1.0％、硫酸
マグネシウム（７水塩）0.4％、塩化カリウム0.2
％、塩化カルシウム（２水塩）0.4％、硫酸マン
ガン（約４水塩）0.006％、ヒスチジン0.03％、
ビオチン400μｇ／、イノシン0.1％、コーンス
テイープリカー5.0％およびリボ核酸0.03％（ア
デニン含有物質所要量の約10％）からなる主発酵
培地１とを入れた５容ジヤーフアーメンター
に移植して、温度38℃、回転数1000R.P.M.、通
気量0.6V.V.M.の条件で主発酵を開始した。この
培地の場合、増殖量の代表値として測定した
590nｍの波長における吸光度×希釈倍数（以下、
U.O.D.と称す。）の値が、初発４、最終32となる
ことが予備実験でわかつていたので、該菌が増殖
を開始してU.O.D.が7.2になつた培養８時間目よ
り、アデニン含有物質としてリボ核酸の10％溶液
を、初発供給速度Ｆ（ｏ）＝0.003％／hrで添加を
開始し、以後、添加リボ核酸総量が培地液量に対
し、0.32％になるまで表１に示した比供給速度Ｋ
で、１時間毎に添加し、72時間まで培養した。な
お、培養中は、培養液のPHが6.7に保持されるよ
うに、25％のアンモニア水を自動的に添加した。
このようにして得られた発酵終了液のグアノシン
量を高速液体クロマトグラフイーで測定し、表１
に示す結果を得た。
に関する。 グアノシンは、調味料として食品分野で重要な
位置を占めている5′−グアニル酸の製造原料とし
て有用である。醗酵法によつてグアノシンを製造
する方法としては、いくつかの方法が知られてお
り、たとえば、バチルス・プミルス（Bacillus
pumilus）やパチルス・リケニホルミス
（Bacillus licheniformis）を用いる方法（特公昭
48−33392）、バチルス・ズブチリス（Bacillus
subtilis）を用いる方法（特公昭55−2955）など
がある。しかしながら、これらの公知の方法にお
いては、培養液中のグアノシンの蓄積量は、たか
だか８ないし10ｇ／であつて、工業的な見地か
らは必ずしも有利な方法とはいえない。 本発明者らは、培養液中のグアノシン蓄積量を
増大させる目的で鋭意研究したところ、アデニン
要求性を有し、グアノシンを生産する能力を有す
る微生物を培養して、グアノシンを生成させるに
際し、微生物の生育に必須であるアデニン含有物
質を、微生物の生育状況等を勘案しつつ、培養の
進行中に少量ずつ間歇的または連続的に添加する
ことによつてグアノシンの生成量を、顕著に増大
させることができることを見い出し、これに基づ
いてさらに研究した結果、本発明を完成した。 本発明は、アデニン要求性およびグアノシン生
産能を有するバチルス属に属する微生物を培地に
培養しグアノシンを培養物中に生成蓄積せしめ培
養物からグアノシンを採取する方法において、ア
デニン含有物質の所要量の約50％以下を含有する
培地で培養を開始し、培地中のアデニン含有物質
のほぼ消費された時点からその所要量の残部を間
歇的または連続的に添加して培養することを特徴
とするグアノシンの製造法である。 本発明において用いられるアデニン含有物質と
しては、アデニン、アデノシン、5′−アデノシン
モノリン酸、3′−アデノシンモノリン酸、5′−ア
デノシンジリン酸、5′−アデノシントリリン酸、
リボ核酸、デオキシリボ核酸はもとより、それら
を含有する微生物菌体やその抽出物、肉エキス、
魚肉エキスなどの天然有機物や、アデニルコハク
酸などのアデニン誘導体などがあげられる。 従来、アデニン要求性微生物の培養において
は、アデニン含有物質の所要量の全量を初発培地
に添加する方法がとられているが、本発明におい
ては、初発培地に添加されるアデニン含有物質の
量を所要量の50％以下に制限し、培葉が開始され
て、初発培地に添加されたアデニン含有物質がほ
ぼ消費された時点からその所要量の残部を間歇的
または連続的に添加する方法が用いられる。 本発明でいう「アデニン含有物質の所要量」と
は、培地に添加されるアデニン含有物質の量であ
つて、グアノシンの生成蓄積が最大となるような
量をいう。この量は供試菌株の種類や培養条件に
よつて異るものであるが、通常はアデニンに換算
して約0.001ないし0.002mole／程度である。 「アデニン含有物質のほぼ消費された時点」と
は、培地中のアデニン含有物質の量がアデニンと
して約0.01ｍmole／以下になつた時点を意味
する。 本発明のアデニン含有物質の添加方法の具体例
としては、たとえば、あらかじめ決められたタ
イムスケジユールにしたがつて、アデニン含有物
質の添加量を等分して、または時間的に変化させ
ながら間歇的または連続的に添加する方法、培
養液中の微生物菌体の増殖量の変化にしたがつ
て、アデニン含有物質の添加量を変化させなが
ら、間歇的または連続的に添加する方法、培養
液中の溶存酸素濃度の変化や培養液の酸素消費量
をはじめ、培養液の発熱量など微生物の生育の状
況を各種のセンサーや検出機器類で検知して、あ
らかじめ決められた量のアデニン含有物質を間歇
的または連続的に添加する方法などが挙げられ、
いずれの方法も可能である。なかでも、培養時間
の経過と共に、アデニン含有物質の添加量を指数
的に増大させていく方法は、短時間で著量のグア
ノシンを生成蓄積させることが可能であるなどの
点で、一層有利である。この場合、アデニン含有
物質の添加開始後の時間ｔにおける、単位時間当
りのアデニン含有物質添加量（以下、「供給速度」
と呼ぶ。）Ｆ（ｔ）は次式のように表わすことがで
きる。 Ｆ（ｔ）＝Ｆ（ｏ）exp（Kt）（Ｋ≠Ｏ） ここでＦ（ｏ）は添加開始時における供給速度、
Ｋは定数（以下、「比供給速度」と呼ぶ。）であ
る。この方法によれば、時間tENDまでに添加され
たアデニン含有物質量AdTOTALは次式で示される。 AdTOTAL＝Ｆ（ｏ）／Ｋ ｛exp（KtEND）−１｝＋AdIN （ただし、AdINは初発培地に添加されたアデニ
ン含有物質の量。） アデニン含有物質の添加開始時期、添加するア
デニン含有物質量（AdTOTAL−AdIN＝AdADDとす
る。）、初発供給速度Ｆ（ｏ）、比供給速度Ｋは、使
用する微生物の種類や培地、培養条件などによつ
て異なるが、アデニン含有物質の添加開始時期と
しては、該菌の増殖量が最終到達増殖量の０％な
いし約75％、とりわけ、約５％ないし50％に達し
た時点からが、AdADDとしては、該菌の生育に必
要な量（通常、アデニンとして、約0.001ないし
0.002mole／の約25％ないし100％、とりわけ
約50％ないし95％が、Ｆ（ｏ）としては、単位時
間当り、AdADDの約0.1％ないし50％、とりわけ約
１％ないし20％が、Ｋとしては約0.01hr-1ないし
5hr-1、さらに好ましくは約0.05hr-1ないし
0.2hr-1、とりわけ約0.075ないし0.15hr-1が望ま
しい。 本発明で使用される微生物は、アデニン要求性
を有しかつグアノシン生産能を有するバチルス属
に属する微生物であればいずれでもよい。該バチ
ルス属菌としては、たとえば、バチルス・プミル
ス（Bacillus pumilus）、バチルス・ズブチリス
（Bacillus subtilis）などの種が挙げられ、具体
的には、バチルス・プミルスNo.148−Ｓ−16
（FERM BP−６、IFO 12483）、バチルス・ズブ
チリス ATCC 19221（IFO 14123）などが挙げ
られる。上記FERMBP番号は、ブダペスト条約
による工業技術院微生物工業技術研究所の寄託番
号を、ATCC番号はジ・アメリカン・タイプ・カ
ルチヤー・コレクシヨン（The American Type
Calture Collection）（米国）の寄託番号を、IFO
番号は財団法人発酵研究所の寄託番号をそれぞれ
表わす。なお、上記IFO 12483株は特公昭48−
33392号公報に記載されている。また上記ATCC
19221株は、ジ・アメリカン・タイプ・カルチヤ
ー・コレクシヨン発行のカタログ・オブ・ストレ
インズ第14版1980年（The American Type
Culture Collection Catalogue of Strains Ｉ
Fourteenth Edition 1980）に収載されている。 本発明に使用される微生物を培養する培地とし
ては、本発明で使用される微生物が生育する培地
が利用される。たとえば、培地に添加される炭素
源としては、でんぷん、ぶどう糖、庶糖などの糖
類のほか、グリセリン、メタノール、エタノー
ル、ソルビトールなどの一価ないし多価のアルコ
ール類、酢酸、プロピオン酸、ステアリン酸、オ
レイン酸などの脂肪酸類、大豆油、オリーブ油、
魚油、鯨油、棉実油、パーム油、ラードなどの油
脂類、ノナン、デカン、ウンデカン、ヘキサデカ
ン、エイコサン、ペンタコサンなどのｎ−パラフ
イン類のほか、ケロセン、ガスオイル、ベビーガ
スオイルなどの炭化水素類などがそれぞれ単独も
しくは混合して用いられる。窒素源としては、ペ
プトン、大豆粉、コーンステイープリカー、酵
母、肉エキスなどの有機窒素源のほか、硫酸、硝
酸、塩酸、炭酸などのアンモニウム塩、アンモニ
アガス、アンモニア水や尿素などの無機窒素源
が、それぞれ単独で、もしくは混合して用いられ
る。その他該菌の生育に必要な各種の無機塩類、
たとえばカルシウム、カリウム、ナトリウム、マ
グネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛などの硫酸
塩、塩酸塩、炭酸塩、硝酸塩、燐酸塩、酢酸塩な
どを、また該菌の生育に必要なアミノ酸類、ビタ
ミン類などを適宜選択して、それらを単独または
組合せて添加して用いられる。さらに必要に応じ
て、シリコーンオイル、ポリアルキレングリコー
ルエーテルなどの消泡剤や界面活性剤なとを添加
してもよい。 培養は、振盪あるいは通気撹拌深部培養などの
好気的条件下に実施される。培地のPHは通常約５
ないし８の範囲から選定されるが、好ましくはPH
約5.5ないし7.5の範囲で培養される。培養中に培
地のPHの変動が観測されれば、これを望ましい範
囲に補正するため、たとえば、水酸化アルカリ
（例、水酸化ナトリウム）、炭酸カルシウム、アン
モニアなどの水溶液、懸濁液あるいはアンモニア
ガスなどを適宜補添しつつ培養してもよい。培養
の温度は、使用される微生物の生育に適した温度
を選択すればよく、通常約20℃ないし60℃、好ま
しくは約25℃ないし45℃で培養するのが有利であ
る。培養の時間は、グアノシンの蓄積量が最大に
達するまで培養すればよく、通常約24ないし144
時間培養すれば、その目的を達成することができ
る。 本発明方法で発酵液中に生成されたグアノシン
はすでに公知されている通常の手段、たとえばイ
オン交換樹脂や活性炭によるクロマトグラフイ
ー、沈澱法あるいは溶媒抽出法などの分離精製手
段を単独もしくは組合せて適用することによつて
採取することができる。 本発明の方法によれば、従来のアデニン含有物
質を一括して培地に添加する方法に比べて、ほゞ
２倍にも達する量のグアノシンを、培養液中に蓄
積させることができる。したがつて、本発明方法
を用いると、一定量の設備を用いる場合であつて
も、目的物グアノシンの生産量が増大され、ま
た、培養液中の目的物グアノシンの含有量が多い
ので、目的物グアノシンの採取が容易であるなど
の点で、本発明は工業的生産上有利な方法であ
る。 以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に
説明する。なお、以下の実施例において、培地の
添加物のパーセント（％）はとくにことわりのな
いかぎり、重量／容量パーセント（Ｗ／Ｖ、％）
を表わす。 実施例 １ アデニン100mg／を含む栄養寒天培地上に生
育したバチルス・プミルスNo.148−Ｓ−16
（FERM BP−６、IFO 12483）をグルコース４
％、尿素0.2％、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム0.5
％、硫酸マグネシウム（７水塩）0.2％、塩化カ
リウム0.1％、硫酸マンガン（約４水塩）0.003
％、塩化カルシウム（２水塩）0.2％、コーンス
テイープリカー２％、リボ核酸0.25％、ヒスチジ
ン0.03％、ビオチン200μｇ／からなる滅菌シー
ド培地20mlを含む200ml容三角フラスコ５本に接
種し、18時間、37℃で振盪培養した。 このシード培養液100mlを、滅菌した22％グル
コース溶液１と、滅菌した硫酸アンモニウム
0.8％、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム1.0％、硫酸
マグネシウム（７水塩）0.4％、塩化カリウム0.2
％、塩化カルシウム（２水塩）0.4％、硫酸マン
ガン（約４水塩）0.006％、ヒスチジン0.03％、
ビオチン400μｇ／、イノシン0.1％、コーンス
テイープリカー5.0％およびリボ核酸0.03％（ア
デニン含有物質所要量の約10％）からなる主発酵
培地１とを入れた５容ジヤーフアーメンター
に移植して、温度38℃、回転数1000R.P.M.、通
気量0.6V.V.M.の条件で主発酵を開始した。この
培地の場合、増殖量の代表値として測定した
590nｍの波長における吸光度×希釈倍数（以下、
U.O.D.と称す。）の値が、初発４、最終32となる
ことが予備実験でわかつていたので、該菌が増殖
を開始してU.O.D.が7.2になつた培養８時間目よ
り、アデニン含有物質としてリボ核酸の10％溶液
を、初発供給速度Ｆ（ｏ）＝0.003％／hrで添加を
開始し、以後、添加リボ核酸総量が培地液量に対
し、0.32％になるまで表１に示した比供給速度Ｋ
で、１時間毎に添加し、72時間まで培養した。な
お、培養中は、培養液のPHが6.7に保持されるよ
うに、25％のアンモニア水を自動的に添加した。
このようにして得られた発酵終了液のグアノシン
量を高速液体クロマトグラフイーで測定し、表１
に示す結果を得た。
【表】
実施例 ２
バチルス・プミルスNo.148−Ｓ−16の代りにバ
チルス・ズブチリスATCC 19221（IFO 14123）
を用いて実施例１と同様の条件下に主発酵を開始
し、U.O.D.が7.5になつた培養８時間目から、リ
ボ核酸を添加量が約0.27または0.28％になるま
で、表２に示す供給速度で、１時間毎に添加し
た。培養72時間のグアノシン量を測定して表２の
結果を得た。
チルス・ズブチリスATCC 19221（IFO 14123）
を用いて実施例１と同様の条件下に主発酵を開始
し、U.O.D.が7.5になつた培養８時間目から、リ
ボ核酸を添加量が約0.27または0.28％になるま
で、表２に示す供給速度で、１時間毎に添加し
た。培養72時間のグアノシン量を測定して表２の
結果を得た。
【表】
実施例 ３
実施例１と同様に、バチルス・プミルスNo.148
−Ｓ−16（FERM BP−６、IFO 12483）を用い
て主発酵を開始するに当つて、初発培地に添加す
るリボ核酸量を表３に示すように変更して開始
し、それぞれ表３に示したU.O.D.まで増殖した
時点からリボ核酸を、Ｆ（ｏ）＝0.003％／hr、Ｋ
＝0.1hr-1の条件で添加を開始し、リボ核酸の添
加総量が、0.3％になるまで１時間毎に添加を行
なつて、72時間目の生成グアノシン量を測定した
処、表３に示す結果が得られた。
−Ｓ−16（FERM BP−６、IFO 12483）を用い
て主発酵を開始するに当つて、初発培地に添加す
るリボ核酸量を表３に示すように変更して開始
し、それぞれ表３に示したU.O.D.まで増殖した
時点からリボ核酸を、Ｆ（ｏ）＝0.003％／hr、Ｋ
＝0.1hr-1の条件で添加を開始し、リボ核酸の添
加総量が、0.3％になるまで１時間毎に添加を行
なつて、72時間目の生成グアノシン量を測定した
処、表３に示す結果が得られた。
【表】
３
Claims (1)
- １ アデニン要求性およびグアノシン生産能を有
するバチルス属に属する微生物を培地に培養しグ
アノシンを培養物中に生成蓄積せしめ培養物から
グアノシンを採取する方法において、アデニン含
有物質の所要量の約50％以下を含有する培地で培
養を開始し、培地中のアデニン含有物質のほぼ消
費された時点からその所要量の残部を間歇的また
は連続的に添加して培養することを特徴とするグ
アノシンの製造法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56097309A JPS58896A (ja) | 1981-06-22 | 1981-06-22 | グアノシンの製造法 |
| GB08217563A GB2101131B (en) | 1981-06-22 | 1982-06-17 | Method of producing guanosine by fermentation |
| FR8210827A FR2508060A1 (fr) | 1981-06-22 | 1982-06-21 | Procede de production de guanosine |
| KR8202779A KR880002417B1 (ko) | 1981-06-22 | 1982-06-22 | 구아노신의 제조법 |
| US06/688,286 US4593000A (en) | 1981-06-22 | 1985-01-07 | Method of producing guanosine |
| SG841/88A SG84188G (en) | 1981-06-22 | 1988-11-30 | Method of producing guanosine by fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56097309A JPS58896A (ja) | 1981-06-22 | 1981-06-22 | グアノシンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58896A JPS58896A (ja) | 1983-01-06 |
| JPH0339678B2 true JPH0339678B2 (ja) | 1991-06-14 |
Family
ID=14188881
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56097309A Granted JPS58896A (ja) | 1981-06-22 | 1981-06-22 | グアノシンの製造法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4593000A (ja) |
| JP (1) | JPS58896A (ja) |
| KR (1) | KR880002417B1 (ja) |
| FR (1) | FR2508060A1 (ja) |
| GB (1) | GB2101131B (ja) |
| SG (1) | SG84188G (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5942895A (ja) * | 1982-07-27 | 1984-03-09 | Takeda Chem Ind Ltd | イノシンおよびグアノシンの製造法 |
| US4792519A (en) * | 1985-03-05 | 1988-12-20 | International Technology Corporation | Method for the monitoring and control of microbial populations |
| US5204245A (en) * | 1991-05-15 | 1993-04-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Extraction of thymidine and other nucleosides |
| CN112301071A (zh) * | 2020-11-04 | 2021-02-02 | 赤峰蒙广生物科技有限公司 | 一种发酵法生产腺嘌呤的方法 |
| CN112592946A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-04-02 | 河南巨龙生物工程股份有限公司 | 一种环保型高产鸟苷的工艺方法 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2822319A (en) * | 1954-08-17 | 1958-02-04 | Monod Jacques | Methods for the cultivation of micro-organisms |
| NL157656B (nl) * | 1967-04-13 | 1978-08-15 | Takeda Chemical Industries Ltd | Werkwijze voor het bereiden van l-glutaminezuur met behulp van een micro-organisme. |
| JPS515075B1 (ja) * | 1970-02-05 | 1976-02-17 | ||
| JPS4833392A (ja) * | 1971-09-02 | 1973-05-09 | ||
| SE380040B (ja) * | 1972-03-20 | 1975-10-27 | Marabou Ab | |
| JPS5417033B2 (ja) * | 1973-06-14 | 1979-06-27 | ||
| JPS5414673B2 (ja) * | 1973-10-24 | 1979-06-08 | ||
| JPS5545198B2 (ja) * | 1973-09-22 | 1980-11-17 | ||
| NZ183731A (en) * | 1976-04-02 | 1980-04-28 | Ici Ltd | Process for culturing cells(microorganism and tissue culture) dependent on the relationship between cycle time and biomass efficiency ratio |
-
1981
- 1981-06-22 JP JP56097309A patent/JPS58896A/ja active Granted
-
1982
- 1982-06-17 GB GB08217563A patent/GB2101131B/en not_active Expired
- 1982-06-21 FR FR8210827A patent/FR2508060A1/fr active Granted
- 1982-06-22 KR KR8202779A patent/KR880002417B1/ko not_active Expired
-
1985
- 1985-01-07 US US06/688,286 patent/US4593000A/en not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-11-30 SG SG841/88A patent/SG84188G/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2508060B1 (ja) | 1984-12-21 |
| FR2508060A1 (fr) | 1982-12-24 |
| JPS58896A (ja) | 1983-01-06 |
| SG84188G (en) | 1989-04-14 |
| KR880002417B1 (ko) | 1988-11-08 |
| GB2101131B (en) | 1986-01-02 |
| US4593000A (en) | 1986-06-03 |
| GB2101131A (en) | 1983-01-12 |
| KR840000643A (ko) | 1984-02-25 |
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