JPH0340833B2 - - Google Patents
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明者らは先にヒトの黒色腫細胞の培養物に
対しマウスIgG3単クローン抗体（AbR24）が血清
に特異的に高感度を有することを開示した（参照
(1)）。試験された全ての黒色腫細胞系及び２種の
星状細胞腫はこの抗体によつて検出された熱安定
性細胞表面抗原に対して陽性であつた。しかしな
がら、脈絡膜の黒色細胞及び脳は抗原のレベルは
低かつた、広い種類の他の細胞及び組織は不反応
性であつた。同様な限られた特性を有する３種の
他の単クローン抗体（AbsC5、I24及びK9）は同
一の融合から導かれた。これらの抗体は同様な黒
色腫と強い反応性を示すそして上皮細胞との反応
性に乏しい、しかし僅かながら広い特異性の範囲
を有していたそれらは又MOLT−４（Ｔ−細胞
系）、白血球及び或種の胎児組織と弱く反応する。 AbR24により検出された抗原は先に特性が明ら
かになつたジシアロ ガングリオシド
（disialoganglioside）GD3−としてその中に同定
される。他の細胞と組織との比較は、黒色細胞は
GD3の高レベルを有している。かくして、これら
の抗体は組織試料が黒色腫かそうでないかの検出
に使用される。このことは特性が明らかな病巣に
対し特に有用である。これらの抗体はまた血清、
血漿、尿又は他の体液中のGD3の検出液に用いる
こともできる。これは黒色腫及びグリコリポイド
レベルが上昇している他の病気の可能性の早期診
断に役立つことができる。 マウス単クローン抗体AbR24（Dippoldら、
Proc Natl Acad Sci 77；6114−6118、1980）
はPA−MHA血清学的検定を用いて生活し得る
培養細胞で試験した場合、ヒト黒色腫細胞に対し
高度の特異性を有している。 この抗体により検出された抗原は黒色腫細胞か
ら単離されたそして組成的及び部分構造分析によ
り及び薄層クロマトグラフ（TLC）により標準
GD3と比較することによつてGD3ガングリオシド
であることを示した。AbR24は標準GD3と反応す
る。しかし試験された他のどのガングリオシドと
も反応しなかつた。TLC及びAbR24との反応性
を用い、広範囲の細胞及び組織についてGD3の存
在を試験した。グリコリポイド媒介免疫結合
（GNIA）とよぶ新らしい血清学的検出はガング
リオシドとAbR24の反応性を検出することにより
行われる。黒色腫（培養細胞又は腫瘍組織）は主
ガングリオシドとしてGD3及びGM3を有すること
を示した。試験した他の細胞及び組織もまたGD3
を含むが、一般に僅かであつた。黒色腫（及び
MOLT−４、Ｔ−細胞系）は主成分としてGD3及
びGM3を持つ単純化したガングリオシド輪郭によ
り特徴づけられた。黒色腫細胞に対するGD3の偏
在とAbR24の血清学的特異性の明瞭な差異は異な
る細胞中のGD3の局部化と濃度の関係で説明する
ことができる。組織培養 黒色腫及び他の細胞の誘導及び培養については
参照文献１〜４を参照する。一般の悪性組織は外
科的又は死後の標本から得られた。単クローン抗体 マウス単クローン抗体AbR24、AbC5、AbI12及
びAbN9は先に参照(1)に記載されている。 AbR24及びAbC5はIgG3抗体でありそしてAbI12
及びAbN9はそれぞれIgG2b及びIgG1抗体である。グリコリポイド GD3はDr.Y−T.Li.トウラン大学、ニユーオー
リンズ（参照５）から得られた。GM3及びGM2は
Drs.S.Kundu及びD.M.Marcus.ベイラー大学、ヒ
ユウストン、TXから得られた。GM1、GD1ａ、
GT1はスペルコ（Supelco）lnc.，ベルホンテ．
PAから購入した。ラクトシルーセラミドはクリ
コリポイド バイオケミカルCO.バーミンガム、
Alから購入した。黒色腫表面細胞抗原の血清学的検出 黒色腫細胞の細胞表面抗原とAbR24及びAbC5
の反応性はレツド セル ロゼツテイング法
（red cell rosetting method）（参照３）を用い
標識セルはヒトＯレツド セル（RBC）を、ス
タヒロコツカス アウレウス（Staphylococcus
aureus）プロテインＡは（PA−MHA）と結合
されているものを用いてミクロテスト
（Microtest）プレートのウエルで生育した培養
細胞で測定した。AbI12及びAbN9はウサギ抗−
マウスIg−結合標識セルを用いたこの方法の変形
法を用いて検出した。 酵素処理 上記の如く黒色腫細胞がミクロテスト プレー
トのモノレーヤーとして生育したら、ハンク
（Hank）の平衡塩溶液〔HBSS、ミクロバイオロ
ジカル アソシエート（Microbiological
Associates）〕で洗い、そして後ビブロ コレア
エ（Vibro cholerae）ニウラミニダーゼ〔カル
ビオフエミー（Calbiochem）〕又はβ−ガラクト
シダーゼ〔シグマ（Sigma）タイプV11〕を10μ
のHBSS中1U／ウエルを用いて処理した。 後37°で１時間培養し、この細胞をPBS−２％
ガンマ−グロブリン（GG）−フリーFBSで４回
洗いそしてPA−又はIgG−MHAを用いて抗体と
の反応性を測つた。グリコリポイドの単離 グリコリポイドはSaito及びHakomoriの方法
（参照６）の変形法により始めの単離を行い、そ
してDEAE−セフアデツクス クロマトグラフイ
ーにより中性及び酸性フラクシヨンを分離した。
酸性グリコリポイド（ガングリオシド）は続いて
DEAE−セフアデツクス クロマトグラフイー及
びアルカリ加水分解によりクロロホルム−メタノ
ール（Ｃ−Ｍ）抽出物から直接単離した（参照
７）。簡単に細胞はＣ−Ｍ（２：１）中に均質化さ
れそして後Ｃ−Ｍ（１：１）で再抽出された。Ｃ
−Ｍ（１：２）の抽出物を蒸発及び再溶解した後、
濾過し、蒸発し、そして冷却しつつ24時間蒸溜氷
水に透析した。透析後、試料は蒸発され、Ｃ−Ｍ
−H2O（30：60：８）にとかし、そしてDEAE−
セフアデツクス カラム（Ｃ−Ｍ−0.8M酢酸ナ
トリウムで平衡にされた）に適用した。このカラ
ムをＣ−Ｍ−H2O（30：60：８）で洗つた後、酸
性リポイドがＣ−Ｍ−0.8M酢酸ナトリウム
（30：60：８）で溶離され、そして蒸発しそして
前述のように透析した。この酸性フラクシヨンは
後メタノール中0.1N NaOHで37℃で３時間加水
分解し、冷水に48時間透析し、蒸発しそしてＣ−
Ｍ（４：１）中にとかした。この溶液を予めＣ−
Ｍ（４：１）で洗つたビオシル（Biosil）Ａカラ
ムに適用した。Ｃ−Ｍ（４：１）で不純物を溶離
した後、ガングリオシドがＣ−Ｍ（１：２）で溶
離された。薄層クロマトグラフイ（TLC） シリカゲル プレート〔レツドプレート、フイ
ツシヤー サイエンテイフイツク Co（Fisher
Scientific Co.）〕を120℃で１時間加熱し活性化
した。展開クロマトグラムに用いる溶媒はｎ−プ
ロパノール−NH4OH−H2O60：9.5：11.5（溶媒
１）（参照８と同じ）、及びクロロホルム：メタノ
ール：2.5N NH4OH、60：40：９（溶媒２）であ
つた。 溶媒を始めの所から12cm移したらすぐプレート
を除いてそして110〜120℃で12〜15分空気乾燥
し、室温に冷却し、そしてレゾルシノール−HCl
（参照９）を噴霧する。 予備分析のために、プレートを空気流フード中
で室温にて２〜３時間乾燥した。バンドがヨード
蒸気で現視され、輪郭が明瞭になり、そしてシリ
カゲルをプレートからかき取つた。このゲルを後
Ｃ−Ｍ−H2O（50：50：15）40ml及び少量のダウ
エツクス50（Na+）で２回抽出した。懸濁液を15
分間1000rpmで遠心分離しそして上記のビオシル
Ａカラムに適用する。不純物をＣ−Ｍ（４：１）
で溶離しそして吸着されたガングリオシドを後Ｃ
−Ｍ（１：２）で溶離した。炭化水素分析 セルペレツト中のリポイド−結合シヤル酸はワ
ーレン（Warren）により記載（参照10）されて
いるように１時間80℃で0.1N HCl中で加水分解
後、Ｃ：Ｍ（２：１および１：２）抽出物で決定
した。砂糖は彼等のＯ−トリフルオロ酢酸（参照
11）の如くメタノーリシス（メタノール性0.1N
HClで100°16時間）後測定された；Ｎ−アセチル
ノイラミン酸は1.0N HClで80°、1.0時間メタ
ノールシス後同一操作により同定した。グリコリポイドの血清学的検定 () 受身赤血球凝集検定（Passive
hemmaglutination assay）（参照12） グリコリポイド（6μｇシヤル酸）を溶解し、
管（10×75mm）中に等分に分けて入れる。そし
て真空中でP2O5のデシケーター中で乾燥する。
各管にPBSの200μを加え、管の横をこする。
そして溶液を50℃で15分音波を当てた。大きな
管に移した後PBSの0.8mlを加えた。グリコリ
ポイド溶液にPBS中ヒトＯ−RBCの２％懸濁
液を徐々に滴下した。37℃で30分後１度混合し
１時間後、このセルをPBS（各12ml）で２回洗
つた。反応性は処理したRBCの懸濁液とミク
ロタイター（microtiter）プレート中の適当に
希釈したAbR24（50μ各）を混合することによ
り試験した。４℃で１−２時間後、凝固反応は
視的に測定された。 () 抗体阻害検定 Ｃ−Ｍ（１：２）に溶解したグリコリポイド
（6μｇシヤル酸）を管（６×50mm）に等分に入
れそして前分析として乾燥した。 AbR24（１：２×104）を30μ加えそして管
を旋回させた。室温で30分そして後４℃で30分
間培養した。管を2000rpmで20分間遠心しそし
て表面浮遊物を除きそして連続的に希釈した。
これらの試料は直ちにホルムアルデヒド固定
SK−MEL−28ターゲツトセルに移した〔ホル
ムアルデヒド固定はPBS中0.33％HCHO ミ
クロテスト プレート〔フアルコン（Falcon
3034）〕のウエルに中に生育する細胞をPBS中
0.33％HCHOで処理することにより行なつた。
この処理はAbR24の反応性を変えることはな
い。そしてターゲツトセルのすぐに役立つ原料
の貯蔵に提供される〕。抗体反応性はPA−
MHA検定法で検出された。非吸着抗体はポジ
テイブコントロールとして使用される。 () グリコリポイド−媒介免疫結合検出
（GMIA）95％エタノール中グリコリポイドの
溶液をマイクロテスト プレート〔フアルコン
（Falcon3034；ウエル当り10μ）〕のウエルに
加えそしてこのプレートを45分P2O5で真空中
デシケーターで乾燥した。リポイド−結合シヤ
ル酸の約100nｇは有効な吸収及び抗体と最高
に反応性に対する適当量であつた。ウエルは
PBS−２％GG−フリーFBS（10ml／洗滌）で
３回洗い、そしてプレートをガーゼでしみをつ
けた。希釈した抗体（５％GG−フリーFBS含
有PBS中）をウエルに加えた。そして室温で
45分培養した。プレートをしみをつけ、PBS
−２％GG−フリーFBSで４回洗つた。そして
再びしみをつけた。プロテインＡ−結合Ｏ−
RBCの0.2％懸濁液の10μをウエルに加えた。
プレートを室温で30分間培養した。しみをつけ
た後、プレートをPBS−２％GG−フリーFBS
で２回洗い、再びしみをつけそして光顕微鏡の
下で読んだ。反応はレツド セルにより被覆し
たウエルの割合により測定された。試験はウエ
ルの結合セルが見えなかつた時又はセルの周囲
が薄い環であつた場合は負として読んだ。 () 薄層クロマトグラフイーにより分離した後
血清学的−反応性グリコリポイドの検出 薄層クロマトグラフイーにより分離されたグ
リコリポイドの血清学的反応性は 1251−プロ
テインＡを結合抗体の検出に用いるMagnani
ら（参照13）の方法の変形によつて試験され
た。溶媒１又は２中でクロマトグラフイーした
後、薄層は１％ポリビニルピロリドンを含む
PBS緩衝液中で洗われそして４℃で６時間
AbR24（１：1500）で処理した。プレートは
125I−プロテインＡ（10μci／μｇ；７×
105cpm／ml）で処理され、Hunter及び
Greenwood（参照14）の手順に従つて調整され
た。４℃で12時間放置後、プレートはPBSで
洗い、空気で乾燥しそして２−６時間クロネツ
クス（cronex）増感スクリーンを有するＸ−
オマツト（Omat）Ｒフイルムにさらした。結 果 SK−MEL−28のニウラミニダーゼ
（neuraminidase）処理後AbR24血清学的反応性
の変化と抗原治癒の動力学 ノイラミニダーゼ〔ビブロ コレラエ（Vibro
cholerae）〕で処理後、SK−MEL−28黒色腫細
胞はもはやPA−MHA検定においてAbR24と反
応しなかつた（後記の表１）。AbC5〔AbR24と同
様な血清学的特性を持つた抗体（参照１）〕との
反応性もまた失なわれた。SK−MEL−28のグリ
コプロテインに血清学上無関係の決定子と確認さ
れるAbN9とAbI12との反応性はノイラミニダー
ゼにより影響されなかつた。酵素−処理細胞はプ
ロテインＡ又は抗−マウスIg−標識細胞と何れに
も無特性反応性を示さなかつた。β−ガラクトシ
ダーゼはSK−MEL−28細胞とAbR24又はAbC5
との反応性において検出し得る効力は持つていな
かつた（表１）。これらの結果はシヤル酸は抗体
AbR24及びAbC5により確認された抗原決定子の
重要部を構成していることを示した。 SK−MEL−28とAbR24の血清学的反応性はニ
ウラミニダーゼを除去しそしてMEM−FBSで置
き代えた後30分間は不検出であつた。この媒体で
37℃に培養を続け、２時間後AbR24反応性の一部
復元が生じそして22時間後血清学的反応性が完成
に復元した（第１図）。 SK−MEL−28黒色細胞からAbR24−反応性抗
原の単離とそのGD3ガングリオシドとしての同定 グリコリポイドはクロロホルム−メタノール
（Ｃ−Ｍ）抽出及びSato及びHakomoriの開示
（参照５）によりそれらのアセテートのフロリシ
ル（Florisil）クロマトグラフイーにより、培養
した黒色腫細胞（SK−MEL−28）から単離され
た、そしてグリコリポイドの調整はDEAE−セフ
アデツクス クロマトグラフイーにより中性及び
酸性成分に分画された。AbR24抗体（PA−
MHAで検出される）に対する阻害活性は酸性グ
リコリポイド フラクシヨン中に主としてあるこ
とが判つた。 その後の実験において、SK−MEL−28細胞か
らの酸性グリコリポイドはDEAE−セフアデツク
スのＣ−Ｍ抽出の分画（参照６）及びアルカリ加
水分解によつて不純物のホスホリポイドを除くこ
とによつて直接単離された。この混合物中の個々
のガングリオシドは溶媒１中でプレパラテイブ薄
層クロマトグラフイーにより（参照８）単離され
た。プレートからシリカゲルバンドを切り取りそ
してグリコリポイドを抽出することにより、抗原
活性はCM1及びCD1ａ上に移転した主酸性グリコリ
ポイド バンドの中にあつた（第２図）。第２図
中に表われたデータにおいて、フラクシヨンの抗
原活性はGMIA検出により測定された。同様の結
果はAbR24とSK−MEL−28標本細胞とのPA−
MHA検出を用いて抗体阻害試験により得られ
た。 単離されたAbR24−反応性グリコリポイドは下
記規準に従つてCD3〔NANA（２→８）NANA（２
→３）Galβ（１→４）Glc−ceramide〕として同
定した。（）含有グリコース、ガラクトース及
びＮ−アセチルノイラミン酸が1.0：1.09：2.11、
ヘキソサミンの痕跡（＜0.1）の割合を示す純粋
グリコリポイドのカルボハイドレート分析、（）
ビブリオコレラエ（Vibrio cholerae）ニウラミ
ニダーゼ（37℃で３時間）でガングリオシドの部
分加水分解はCM3とラクトシルセラミドで薄層ク
ロマトグラム上に２つの成分を形成させる（第３
図）。そして（）AbR24は標準GD3と反応する
が、他の標準ガングリオシド試験の何れにも反応
しなかつた（下記参照）。 黒色細胞と非黒色細胞、及び正常及び悪性組織
中のGD3の分配 () 種々の原料からのガングリオシドの薄層ク
ロマトグラフ−パターン全ガングリオシドフラ
クシヨンは極めて多種類の腫瘍細胞系、新鮮腫
瘍及び正常組織から調整した。これらの抽出物
がTLCにより分画されそしてガングリオシド
をレゾルシノール試薬を用い検出した時、黒色
腫はガングリオシドの特有パターンを持つこと
が明らかになつた。全ての黒色腫細胞系の実験
において、CD3とCM3と共移動するグリコリポイ
ドは主として酸性グリコリポイドであつた。こ
れらの細胞系の多くの主要成分はGD3と反応し
た（第３図及び第４図）。GD3はまたマウスの
目及びウシの脈絡膜の抽出物中の主にガングリ
オシドであつた。MOLT−４（Ｔ−細胞系）を
除いては、他の細胞又は組織は主要成分として
GD3を持つていなかつた。 新鮮黒色腫瘍の抽出物はGD3及びGM3が優位
性をもちSK−MEL−28と似たガングリオシド
パターンを有していた（第３図）。殆どの黒色
腫細胞系はこの単純化したパターンを持つた。
しかしながら幾つかは高ガングリレポイドがか
なりの量検出でき一層複雑なプロフイルを示し
た（第３図及び第４図）。GD3は実験した黒色
腫細胞系の全ガングリオシド画分の18−63％を
構成していた（第４図）。殆どの黒色腫細胞系
及び組織標本は30−50％範囲の値であつた。こ
の値は成人脳において７％、腎臓癌細胞系
（SK−RC−７）において９％、RAJI細胞（バ
ーキツト（Burkitt）リンパ様組織腫）におい
て11％、MOLT−４細胞において33％と対比
された（第４図）。AbR24の血清学的反応性の
見地から、それらのグリコリポイド画分中の
GD3の割合が高いこと、また全ガングリオシド
のレベルが高いことは重要なことである。この
ことは、細胞系の数においてリポイド−結合シ
ヤル酸のレベルの測定から明らかである。黒色
腫において、その値は0.039−0.063μmol／0.1
ml細胞の範囲であつた（９系で測定した）。
RAJI、MOLT−４及び腎臓癌（３系）はそれ
ぞれ0.011±0.003、0.013±0.006及び0.025−
0.029μmol／0.1ml細胞のリポイド−結合シヤル
酸値を持つた。 () AbR24抗体を用いて細胞系及び組織のGD3
の検出、多種の細胞及び組織のGD3レベルは
R24抗体を用いて測定された。４種の検出法が
使用された：(a)受身赤血球凝集、(b)抗体阻害、
(c)新方法、MHA法の平易化とグリコイポイド
のプラスチツクスに吸収する能力との併合によ
り考案したGMIA、(d) 125I−プロテインＡを用
いTLCクロマトグラム上でGD3と反応した
AbR24を検出する方法。検出値の感度は受身赤
血球凝集検定は最も感度が低くそして 125I−
PA法は最も感度が高い（表）。 最も感度が低い検定法（受身赤血球凝集）の使
用において、GD3は黒色腫細胞系及び黒色腫組織
の抽出物は検出できたが、他の原料からは検出で
きなかつた（表）。比較的感度の高い検出（PA
−MHAの阻害及びGMIA法）はGD3は広い範囲
の細胞（ウシの脈絡膜、マウスの目、胎児及び成
人肺、RAJIB−細胞系、MOLT−4T−細胞系、
RT−４膀胱癌細胞系及びAJ星状細胞腫細胞系）
が検出できたことを示した。代表的な阻害実験は
第５図に示され、そしてデータは表に集約され
ている。GMIA法の使用において、黒色腫からの
R24−反応性グリコリポイド又は標準GD3で被覆
したウエルは強い反応性を持つことが判つた：こ
の反応の幾つかの定量的データを第７図に示し
た。他の純粋なグリコリポイド（GM1、GD1ａ、
GM3及びGM2）はこの検出では不反応であつた
（表及び第６Ｄ図）。AbR24のみ加えてもまた不
反応であつた（第６Ｃ図）。 この方法を他の細胞から抽出した酸性グリコリ
ポイドに適用すると阻害検出として大体同様な結
果が得られた（表）。これらの方法により測定
されたGD3の限定された分配の比較において、
125I−プロテインＡ法は実験した全ての細胞及び
組織のGD3を検出した（表）。これらの組織及
び細胞の検出されたAbR24−反応性成分は正真の
GD3であることは標準GD3と共に混合（２溶媒シ
ステムにおいて）することにより、また関係のな
いグリコプロテイン特性を検出した他のプロテイ
ンＡ−結合単クローナル抗体（AbI12）が不反応
性であつたことを検知することによつて示され
た。 【表】 【表】 【表】 【表】 【表】 検 討 黒色腫細胞の細胞表面抗原に対し血清学的に特
異の高感度を示すマウス単クローナル抗体R24は
ジシアロ−ガングリオシド−GD3と認められた。
従来の研究はガングリオシドに対する抗体を得る
のは困難であつた（参照15）。このことは大部分
のガングリオシドは免疫を与えた種の成分であ
り、そしてまた、本来シラリダーゼ活性であるた
め、免疫学的にガングリオシドが分解する（参照
16）事実に基いて行わなければならない。この観
点により、非常に高いGD3含量を持つ黒色腫細胞
（SK−MEL−28）で６ケ月間以上免疫して生成
したマウスR24は重要なことである。ガングリオ
シドと認められる二つの他の単クローナル抗体は
最近開示された（参照17、18）。一つはニワトリ
のノイロン細胞と特異に反応しそしてGQ画分中
に存在する高ガングリオシドの一つに影響される
（参照17）。第２のものはヒト結腫癌に対して影響
されそして未だ性質未知のモノシアロガングリオ
シドとして認められた（参照18）。 本発明者らはCD3は黒色腫細胞培養物及び黒色
腫組織中に顕著に存在するガングリオシドである
ことを知つた。他の細胞と比べた場合、黒色腫細
胞はまた全ガングリオシドレベルが高い。他にも
示されるように、GD3は大部分の哺乳類組織中に
少量存在する。しかし、それはガングリオシドの
30−40％より成る網膜中の主要ガングリオシドで
ある。成人脳中、GD3は全ガングリオシド含量の
約８−10％を示す（参照19）。GD3のレベルは胎
児脳中が高い、胎児ラツト脳（懐妊15−17日）の
GD3は全ガングリオシド含量の約50％示す、20日
により約10％に急激に低下する（参照20）。
Portoukalian及び共同研究者（参照21）はTLC
及びカルボハイドレート分析により固定したGD3
は黒色腫の主構成であることも発表した（参照
21）。彼らは実験した４種の異なつた黒色腫標本
のGD3の割合はガングリオシドの31.0％から57.2
％に変化した。これらの結果から、発明者ら自身
の分析と同様、GD3ガングリオシドは悪性黒色腫
の主な成分であると結論することができる。正常
な黒色細胞がGD3のレベルが高いかどうかは現在
不明である。正常の脈略膜黒色細胞は直接血清学
試験におけるAbR24との反応性は弱い（力価１：
100）、それに比べ黒色腫細胞のAbR24との反応性
は高い（１：５×104−105の力価）（参照１）培
養皮膚黒色細胞の方法の最近の発展（参照22）を
もつて、今は黒色細胞及び黒色腫のGD3含量の直
接的比較をすることは可能であろう。GD3の正確
な生物学的要因は明確には判らないが、GD3はセ
ロトニン結合の役割を有していると示唆された
（参照23、24）。 実験において、ガングリオシドのTLCパター
ンは異なる黒色腫細胞系から単離した。本発明者
らは種々のガングリオシドの割合の変化を注目し
た。大部分の細胞系GD3及びGM3は主としてガン
グリオシドであつた（第３図及び第４図）。幾つ
かの黒色腫細胞系はGM2と一層複合したパターン
を示した。そして幾つかの高ガングリオシドは一
層よく表われる。これらのガングリオシド輪郭の
相違は癌の生物的特性（例えば、区別状態）に関
係するかどうかは明らかにする必要がある。一般
的に黒色腫は特有のガングリオシド輪郭を表わ
す。実験した他の細胞及び組織のＴ−セル系
MOLT−４のみ同様な輪郭を示した。そしてこ
れはおそらくＴ−細胞及び神経−外胚葉性細胞原
例えばThy−１による抗原の他の標本であろう
（参照25）。ウシ脈絡膜及びマウス目から導いたガ
ングリオシドは３又は４の顕著な成分のただ一つ
のGD3と一層複雑なパターンを持つ。 GD3ガングリオシドの存在が黒色腫細胞を決し
て制限するものではない、−それは遍在である。
細胞表面抗原に対する直接血清学検出を用い、黒
色腫のみ、脈絡膜黒色細胞、及び星状細胞腫は
AbR24と反応性があつた（参照１）。敏感な吸収
試験を用いてさえ、試験した他の細胞及び組織の
正常脳のみAbR24を吸収した。ここに表われた血
清学的知見と生化学的データの間の明らかな矛盾
に対して多くの説明が示される。第１はGD3は大
部分の非−黒色腫細胞の細胞表面成分ではないこ
との可能性である。GD3が他のガングリオシドの
生合成的前駆物であるそしてそれ故主として細胞
中に存在する、ゴオルギ（Golgi）装置中で、グ
リコリポイド合成に関与するグリコシル トラン
スフエアーズが見い出される（参照（26）、（27））
ことが証明されるであろう。本発明者らの生化学
的研究は全体の細胞又は組織に対し行われ、その
結果はこの説明と確かに適合する。他の可能性は
GD3がR24−ネガテイブ細胞の細胞表面に存在す
る。しかし抗体との反応はしないということであ
る。この現象は他の細胞膜グリコリポイドで見い
出した。例えばグロボシドは赤血球膜の主要グリ
コペプチドであるが、赤血球反応は抗−グロボシ
ド抗体と微弱に反応する（参照（28））。勿論、
GD3は血清学試験に用いて検出される量で大部分
の非−黒色腫細胞の表面に表れない可能性もあ
る。直接及び吸収試験の両方でAbR24と反応する
細胞型は高リポイド−結合シヤル酸含量及び顕著
ガングリオシドとしてGD3の両者を持つことは重
要なこととして注目することである。 黒色腫細胞のGD3及びGM3の集積の機構どうで
あるか？一つの可能性の説明は黒色腫細胞はＮ−
アセチルガラクトサミル トランスフエラーゼの
低レベルを有している。その結果酵素に対する一
般の基質例えばGM3及びGD3の集積が生ずる（第
９図）。ウシの甲状腺において、一つのＮ−アセ
チルガラクトサミン−トランスフエラーゼはGD3
及びGM3に作用しGD2及びGM2になる（参照
（27））。そして黒色腫におけるこの酵素のレベル
は低いことは本発明者が得られたガングリオシド
パターンを明らかにするであろう。他の可能性
の説明は黒色腫はβ−Ｎ−アセチルガラクトサミ
ニダーゼの高レベルを有している。その結果GM2
及びGD2の生成を減少させるか又は黒色腫が或種
のシアリルトランスフエラーゼのレベルを上げ、
その結果GD3及びGM3の合成を増加させることで
ある。黒色腫患者は血清シアリルトランスフエラ
ーゼレベルを上げることはこの見地からして重要
なことである（参照29）。癌組織の酵素レベルは
未だ研究されていない。しかしながら、ヒト黒色
腫細胞系のグリコプロテインは他の細胞型のグリ
コプロテインに比べシアリル化を増進する（参照
30）事実は黒色腫中のこの酵素の活性の増加を示
唆する。本出願中に使用した略語 TLC：薄層クロマトグラフイー；MHA：混合
血球凝集検出；Ｃ−Ｍ：クロロホルム−メタノー
ル；FBS：胎児ウシ血清；NANA：Ｎ−アセチ
ルノイラミン酸；Gal：Ｄ＝−ガラクトース；
Glc：Ｄ−グルコース；GalNAc：Ｎ−アセチル
−Ｄ＝−ガラクトサミン；Cer；セラマイド；
GM1：βGal1−3GalNAc1→4βGal〔３←2NANA〕
１→4Glc−Cer；CM3；NANA2→3βGal1→4Glc
→Cer；GD3；NANA2→8NANA2→3βGal1→
4Glc−Cer；GDla；NANA2→3βGal1→
3GalNAcβ1→4Gal〔３←2NANA〕Glc−Cer；
GM2：βGalNAc1→4βal〔３→2NANA〕Glc−
Cer.GTla；NANA2→8NANA2→3βGal1→
3GalNAcβ1→4Gal〔３←2NANA〕Glc−Cer. 〔Svennerholmの命名法（参照（31）〕 参照文献 １ Dippold、W.G.、Lloyd、K.O.、Li、L.T.
C.、Ikeda、H.、Oettgen、H.F.及びOld、L.J.
（1980）ヒト悪性黒色腫の細胞表面抗原：単ク
ローン抗体で６個の抗原システムの解明、
Proc−Natl Acad：Sci.USA 77：6114。 ２ Carey、T.E.、Takahashi、T.、Resnick、
L.A.、Oettgen、H.F.及びOld、L.J.（1976）ヒ
ト悪性黒色腫の細胞表面抗原：培養した自然発
生黒色腫細胞の体液免疫に対する混合血液吸着
分析。Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：3278。 ３ Pfreundschuh、M.、Shiku、H.、
Takahashi、T.、Ueda、R.Ransohoff、J.、
Oettgen、H.F.及びOld、L.J.（1978）悪性脳腫
瘍の細胞表面抗原の血清分析。Proc.Natl.
Acad.USA 75：5122。 ４ Ueda、R.、Shiku、H.、Pfreundschuh、
M.、Takahashi、T.、Li.L.T.C.、Whitmore、
W.F.、Oettgen、H.F.及びOld、L.J. ５ 1toh、T.、Li、Ｙ−T.、Li.S−Ｃ及びYu、
R.K.（1981）テー、ザツクス脳から新規なモノ
シアロシルペンタヘキソシル セラミドの単離
とその性質。J.Biol.Chem 250：105。 ６ Saito、T.及びHakomori.S.（1971）動物細胞
から全グリコリポイドの定量的単離。J.Lipid
Ros．12：257。 ７ Yu、R.K.及びLedeen、R.W.（1972）ヒト、
ウシ及びウサギの血漿のガングリオシドJ.
Lipid Res．13：680。 ８ Watanabe、K.、Powell、M.E及び
Hakomori、S.（1979）新シアロシル結合及び
核構造を持つガングリオシドの単離とその性
質。J.Biol.Chem．254：8223。 ９ Svennerholm、L.（1957）サイアリン酸の定
量的価格、．比色計によるレゾルシノール−
塩酸法。Biochim.Biophys Acta 24：604。 10 Warrn、L.（1963）シヤル酸のチオバルビツ
ール酸検定法Methods in Enzymol．６：463。 11 Zanetta、J.P.、Breckenridge、W.C及び
Vincendon、Ｇ（1972）トリフルオロアセテー
ト誘導体としてＯ−メチルグリコシドのモノサ
ツカライドの分析。J.Chromatogr．69：291。 12 Yokoyama、M.、Trams、E.G及びBrady、
R.O.（1963）ガングリオシドによる免疫化学的
研究。J.Immunol．90：372。 13 Magnani、J.L.、Smith、D.F.及び
Ginsburg、V.（1980）結合コレラ毒素： 125I−
ラベル毒素を直接薄層クトマトグラムに結合に
よるガングリオシドの検出。Anal.Biochem．
109：399。 14 Hunter、W.M.及びGreenwood、F.C.（1962）
高特異活性のヨウ素−131ラベルされたヒト生
長ホルモンの調製。Nature194：495。 15 Rapport、M.M及びGrof、L.（1969）リポイ
ドの免疫化学反応。Prog.Allergy 13：273−
331（1969） 16 Kundu.S.K.、Marcus、D.M及びVeh、R.W.
（1980）GD3及びGM1ガングリオシドに対する抗
体の調製及び性質。Ｊ ．Neurochem．34：
184。 17 Eisenbarth、G.S.、Walsh、F.S.及び
Nirenberg.M.（1979）ニウロンの血漿膜抗原に
対する単クローン抗体。Proc.Natl.Acod.Sci.
USA 76：4913。 18 Magnani、J.L.、Brockhaus、M.、Smith、
D.F.、Ginsburg、V.、Blaszeyguk.m.、
Mitchell、K.F.、Steplewski、２、及び
Koprowski、H.（1981）モノシアロガングリオ
シドは結腸癌の抗原を明らかにした単クローン
抗体である。Science 212：55。 19 Urban、P.F.、Harth、S.、Freysz、L.及び
Dreyfus、H.TLC及びHPTLCによる異なる種
からの脳及び網膜のガングリオシド。ガングリ
オシドの構造及び機能。Adv.Exp.Med.Biol.、
ed.L.Svennerholm（Plenum、New York）、
Vol.125、P.149−157、1980。 20 Irwin、L.N.、Michael、D.B.及びIrwin、C.
C.（1980）胎児ラツト及びマウス脳のガングリ
オシドパターン、J.Neurochem 34：1527。 21 Portoukalian、J.、Zwingelstein、G.及び
Dore.J、（1979）ヒト悪性黒色腫瘍の悪性生長
価の高い時のリポイド組成。Eur.J.Biochem．
94：19。 22 Eisinger、M.及びMarko、O.ホルボール及
びコレラの存在下生体外正常ヒト黒色細胞の選
択増殖。Proc.Natl Acad.Sci.USA（速報） 23 Wooley、D.W.及びGommi、B.W.（1965）。
セロトニン受容体V11.受容体として種々の純
粋ガングリオシドの活性。Proc.Natl.Acad.
Sci.USA53：959。 24 Tamir、H.、Brunner、W.、Casper、D.及
びRapport、M.M.（1980）セロトニンの結合の
ガングリオシドによりプロテイン結合セロトニ
ンの増強。J.Neurochem.34：1719。 25 Reif、A.E.及びAllen、J.M.V.（1964）AKR
胸腺抗原及びその白血病及び神経組織中の分
布。J.Exp.Med.120：413。 26 Keenan、T.W.、Morre、D.J.及びBasu、S.
（1975）ガングリオシド生合成。Golgi装置に
おけるラツト肝臓からグリコフインゴリポイド
グリコシル トランスフエラーゼの濃縮。J.
Biol.Chem249：310。 27 Pucuszka.T.、Duffard、R.O.、Nishimura、
R.N.、Brady、R.P.及びFishman、P.H.
（1979）ウシ甲状腺ガングリオシドの生合成。
J.Biol。Chem．253：5839。 28 Hakomori、S.（1973）腫瘍細胞膜のグリコ
リポイド。Adv.Cancer Res．18：265。 29 Silver、H.K.B.、Karim、K.A.、
Archibald、E.L.及びSalinas、F.A.（1979）血
清シアリン酸及び悪性黒色腫患者の腫瘍負荷の
監視としてのシアリルトランスフエラーゼ。
Cancer Res．39：5036。 30 Lloyd、K.O.、Travassos、L.R.、
Takahashi、T.及びOld、L.J.（1979）ヒト腫瘍
細胞系の細胞表面グリコプロテイン；悪性黒色
腫の異状特性。J.Natl.Cancer Inst．63：623。 31 Svennerholm、L.（1963）ヒト脳ガングリオ
シドのクロマトグラフイー分離。J.
Neurochem．10：613。 32 Yu、R.K.及びAndo、S.（1980）ガングリオ
シドの構造及び機能の新鮮脳の新ガングリオシ
ドの構造。（ed.L.Svennerholm）Advances in
Experimental Medicine and Biology 125：
33（Plenum Press）New York。
対しマウスIgG3単クローン抗体（AbR24）が血清
に特異的に高感度を有することを開示した（参照
(1)）。試験された全ての黒色腫細胞系及び２種の
星状細胞腫はこの抗体によつて検出された熱安定
性細胞表面抗原に対して陽性であつた。しかしな
がら、脈絡膜の黒色細胞及び脳は抗原のレベルは
低かつた、広い種類の他の細胞及び組織は不反応
性であつた。同様な限られた特性を有する３種の
他の単クローン抗体（AbsC5、I24及びK9）は同
一の融合から導かれた。これらの抗体は同様な黒
色腫と強い反応性を示すそして上皮細胞との反応
性に乏しい、しかし僅かながら広い特異性の範囲
を有していたそれらは又MOLT−４（Ｔ−細胞
系）、白血球及び或種の胎児組織と弱く反応する。 AbR24により検出された抗原は先に特性が明ら
かになつたジシアロ ガングリオシド
（disialoganglioside）GD3−としてその中に同定
される。他の細胞と組織との比較は、黒色細胞は
GD3の高レベルを有している。かくして、これら
の抗体は組織試料が黒色腫かそうでないかの検出
に使用される。このことは特性が明らかな病巣に
対し特に有用である。これらの抗体はまた血清、
血漿、尿又は他の体液中のGD3の検出液に用いる
こともできる。これは黒色腫及びグリコリポイド
レベルが上昇している他の病気の可能性の早期診
断に役立つことができる。 マウス単クローン抗体AbR24（Dippoldら、
Proc Natl Acad Sci 77；6114−6118、1980）
はPA−MHA血清学的検定を用いて生活し得る
培養細胞で試験した場合、ヒト黒色腫細胞に対し
高度の特異性を有している。 この抗体により検出された抗原は黒色腫細胞か
ら単離されたそして組成的及び部分構造分析によ
り及び薄層クロマトグラフ（TLC）により標準
GD3と比較することによつてGD3ガングリオシド
であることを示した。AbR24は標準GD3と反応す
る。しかし試験された他のどのガングリオシドと
も反応しなかつた。TLC及びAbR24との反応性
を用い、広範囲の細胞及び組織についてGD3の存
在を試験した。グリコリポイド媒介免疫結合
（GNIA）とよぶ新らしい血清学的検出はガング
リオシドとAbR24の反応性を検出することにより
行われる。黒色腫（培養細胞又は腫瘍組織）は主
ガングリオシドとしてGD3及びGM3を有すること
を示した。試験した他の細胞及び組織もまたGD3
を含むが、一般に僅かであつた。黒色腫（及び
MOLT−４、Ｔ−細胞系）は主成分としてGD3及
びGM3を持つ単純化したガングリオシド輪郭によ
り特徴づけられた。黒色腫細胞に対するGD3の偏
在とAbR24の血清学的特異性の明瞭な差異は異な
る細胞中のGD3の局部化と濃度の関係で説明する
ことができる。組織培養 黒色腫及び他の細胞の誘導及び培養については
参照文献１〜４を参照する。一般の悪性組織は外
科的又は死後の標本から得られた。単クローン抗体 マウス単クローン抗体AbR24、AbC5、AbI12及
びAbN9は先に参照(1)に記載されている。 AbR24及びAbC5はIgG3抗体でありそしてAbI12
及びAbN9はそれぞれIgG2b及びIgG1抗体である。グリコリポイド GD3はDr.Y−T.Li.トウラン大学、ニユーオー
リンズ（参照５）から得られた。GM3及びGM2は
Drs.S.Kundu及びD.M.Marcus.ベイラー大学、ヒ
ユウストン、TXから得られた。GM1、GD1ａ、
GT1はスペルコ（Supelco）lnc.，ベルホンテ．
PAから購入した。ラクトシルーセラミドはクリ
コリポイド バイオケミカルCO.バーミンガム、
Alから購入した。黒色腫表面細胞抗原の血清学的検出 黒色腫細胞の細胞表面抗原とAbR24及びAbC5
の反応性はレツド セル ロゼツテイング法
（red cell rosetting method）（参照３）を用い
標識セルはヒトＯレツド セル（RBC）を、ス
タヒロコツカス アウレウス（Staphylococcus
aureus）プロテインＡは（PA−MHA）と結合
されているものを用いてミクロテスト
（Microtest）プレートのウエルで生育した培養
細胞で測定した。AbI12及びAbN9はウサギ抗−
マウスIg−結合標識セルを用いたこの方法の変形
法を用いて検出した。 酵素処理 上記の如く黒色腫細胞がミクロテスト プレー
トのモノレーヤーとして生育したら、ハンク
（Hank）の平衡塩溶液〔HBSS、ミクロバイオロ
ジカル アソシエート（Microbiological
Associates）〕で洗い、そして後ビブロ コレア
エ（Vibro cholerae）ニウラミニダーゼ〔カル
ビオフエミー（Calbiochem）〕又はβ−ガラクト
シダーゼ〔シグマ（Sigma）タイプV11〕を10μ
のHBSS中1U／ウエルを用いて処理した。 後37°で１時間培養し、この細胞をPBS−２％
ガンマ−グロブリン（GG）−フリーFBSで４回
洗いそしてPA−又はIgG−MHAを用いて抗体と
の反応性を測つた。グリコリポイドの単離 グリコリポイドはSaito及びHakomoriの方法
（参照６）の変形法により始めの単離を行い、そ
してDEAE−セフアデツクス クロマトグラフイ
ーにより中性及び酸性フラクシヨンを分離した。
酸性グリコリポイド（ガングリオシド）は続いて
DEAE−セフアデツクス クロマトグラフイー及
びアルカリ加水分解によりクロロホルム−メタノ
ール（Ｃ−Ｍ）抽出物から直接単離した（参照
７）。簡単に細胞はＣ−Ｍ（２：１）中に均質化さ
れそして後Ｃ−Ｍ（１：１）で再抽出された。Ｃ
−Ｍ（１：２）の抽出物を蒸発及び再溶解した後、
濾過し、蒸発し、そして冷却しつつ24時間蒸溜氷
水に透析した。透析後、試料は蒸発され、Ｃ−Ｍ
−H2O（30：60：８）にとかし、そしてDEAE−
セフアデツクス カラム（Ｃ−Ｍ−0.8M酢酸ナ
トリウムで平衡にされた）に適用した。このカラ
ムをＣ−Ｍ−H2O（30：60：８）で洗つた後、酸
性リポイドがＣ−Ｍ−0.8M酢酸ナトリウム
（30：60：８）で溶離され、そして蒸発しそして
前述のように透析した。この酸性フラクシヨンは
後メタノール中0.1N NaOHで37℃で３時間加水
分解し、冷水に48時間透析し、蒸発しそしてＣ−
Ｍ（４：１）中にとかした。この溶液を予めＣ−
Ｍ（４：１）で洗つたビオシル（Biosil）Ａカラ
ムに適用した。Ｃ−Ｍ（４：１）で不純物を溶離
した後、ガングリオシドがＣ−Ｍ（１：２）で溶
離された。薄層クロマトグラフイ（TLC） シリカゲル プレート〔レツドプレート、フイ
ツシヤー サイエンテイフイツク Co（Fisher
Scientific Co.）〕を120℃で１時間加熱し活性化
した。展開クロマトグラムに用いる溶媒はｎ−プ
ロパノール−NH4OH−H2O60：9.5：11.5（溶媒
１）（参照８と同じ）、及びクロロホルム：メタノ
ール：2.5N NH4OH、60：40：９（溶媒２）であ
つた。 溶媒を始めの所から12cm移したらすぐプレート
を除いてそして110〜120℃で12〜15分空気乾燥
し、室温に冷却し、そしてレゾルシノール−HCl
（参照９）を噴霧する。 予備分析のために、プレートを空気流フード中
で室温にて２〜３時間乾燥した。バンドがヨード
蒸気で現視され、輪郭が明瞭になり、そしてシリ
カゲルをプレートからかき取つた。このゲルを後
Ｃ−Ｍ−H2O（50：50：15）40ml及び少量のダウ
エツクス50（Na+）で２回抽出した。懸濁液を15
分間1000rpmで遠心分離しそして上記のビオシル
Ａカラムに適用する。不純物をＣ−Ｍ（４：１）
で溶離しそして吸着されたガングリオシドを後Ｃ
−Ｍ（１：２）で溶離した。炭化水素分析 セルペレツト中のリポイド−結合シヤル酸はワ
ーレン（Warren）により記載（参照10）されて
いるように１時間80℃で0.1N HCl中で加水分解
後、Ｃ：Ｍ（２：１および１：２）抽出物で決定
した。砂糖は彼等のＯ−トリフルオロ酢酸（参照
11）の如くメタノーリシス（メタノール性0.1N
HClで100°16時間）後測定された；Ｎ−アセチル
ノイラミン酸は1.0N HClで80°、1.0時間メタ
ノールシス後同一操作により同定した。グリコリポイドの血清学的検定 () 受身赤血球凝集検定（Passive
hemmaglutination assay）（参照12） グリコリポイド（6μｇシヤル酸）を溶解し、
管（10×75mm）中に等分に分けて入れる。そし
て真空中でP2O5のデシケーター中で乾燥する。
各管にPBSの200μを加え、管の横をこする。
そして溶液を50℃で15分音波を当てた。大きな
管に移した後PBSの0.8mlを加えた。グリコリ
ポイド溶液にPBS中ヒトＯ−RBCの２％懸濁
液を徐々に滴下した。37℃で30分後１度混合し
１時間後、このセルをPBS（各12ml）で２回洗
つた。反応性は処理したRBCの懸濁液とミク
ロタイター（microtiter）プレート中の適当に
希釈したAbR24（50μ各）を混合することによ
り試験した。４℃で１−２時間後、凝固反応は
視的に測定された。 () 抗体阻害検定 Ｃ−Ｍ（１：２）に溶解したグリコリポイド
（6μｇシヤル酸）を管（６×50mm）に等分に入
れそして前分析として乾燥した。 AbR24（１：２×104）を30μ加えそして管
を旋回させた。室温で30分そして後４℃で30分
間培養した。管を2000rpmで20分間遠心しそし
て表面浮遊物を除きそして連続的に希釈した。
これらの試料は直ちにホルムアルデヒド固定
SK−MEL−28ターゲツトセルに移した〔ホル
ムアルデヒド固定はPBS中0.33％HCHO ミ
クロテスト プレート〔フアルコン（Falcon
3034）〕のウエルに中に生育する細胞をPBS中
0.33％HCHOで処理することにより行なつた。
この処理はAbR24の反応性を変えることはな
い。そしてターゲツトセルのすぐに役立つ原料
の貯蔵に提供される〕。抗体反応性はPA−
MHA検定法で検出された。非吸着抗体はポジ
テイブコントロールとして使用される。 () グリコリポイド−媒介免疫結合検出
（GMIA）95％エタノール中グリコリポイドの
溶液をマイクロテスト プレート〔フアルコン
（Falcon3034；ウエル当り10μ）〕のウエルに
加えそしてこのプレートを45分P2O5で真空中
デシケーターで乾燥した。リポイド−結合シヤ
ル酸の約100nｇは有効な吸収及び抗体と最高
に反応性に対する適当量であつた。ウエルは
PBS−２％GG−フリーFBS（10ml／洗滌）で
３回洗い、そしてプレートをガーゼでしみをつ
けた。希釈した抗体（５％GG−フリーFBS含
有PBS中）をウエルに加えた。そして室温で
45分培養した。プレートをしみをつけ、PBS
−２％GG−フリーFBSで４回洗つた。そして
再びしみをつけた。プロテインＡ−結合Ｏ−
RBCの0.2％懸濁液の10μをウエルに加えた。
プレートを室温で30分間培養した。しみをつけ
た後、プレートをPBS−２％GG−フリーFBS
で２回洗い、再びしみをつけそして光顕微鏡の
下で読んだ。反応はレツド セルにより被覆し
たウエルの割合により測定された。試験はウエ
ルの結合セルが見えなかつた時又はセルの周囲
が薄い環であつた場合は負として読んだ。 () 薄層クロマトグラフイーにより分離した後
血清学的−反応性グリコリポイドの検出 薄層クロマトグラフイーにより分離されたグ
リコリポイドの血清学的反応性は 1251−プロ
テインＡを結合抗体の検出に用いるMagnani
ら（参照13）の方法の変形によつて試験され
た。溶媒１又は２中でクロマトグラフイーした
後、薄層は１％ポリビニルピロリドンを含む
PBS緩衝液中で洗われそして４℃で６時間
AbR24（１：1500）で処理した。プレートは
125I−プロテインＡ（10μci／μｇ；７×
105cpm／ml）で処理され、Hunter及び
Greenwood（参照14）の手順に従つて調整され
た。４℃で12時間放置後、プレートはPBSで
洗い、空気で乾燥しそして２−６時間クロネツ
クス（cronex）増感スクリーンを有するＸ−
オマツト（Omat）Ｒフイルムにさらした。結 果 SK−MEL−28のニウラミニダーゼ
（neuraminidase）処理後AbR24血清学的反応性
の変化と抗原治癒の動力学 ノイラミニダーゼ〔ビブロ コレラエ（Vibro
cholerae）〕で処理後、SK−MEL−28黒色腫細
胞はもはやPA−MHA検定においてAbR24と反
応しなかつた（後記の表１）。AbC5〔AbR24と同
様な血清学的特性を持つた抗体（参照１）〕との
反応性もまた失なわれた。SK−MEL−28のグリ
コプロテインに血清学上無関係の決定子と確認さ
れるAbN9とAbI12との反応性はノイラミニダー
ゼにより影響されなかつた。酵素−処理細胞はプ
ロテインＡ又は抗−マウスIg−標識細胞と何れに
も無特性反応性を示さなかつた。β−ガラクトシ
ダーゼはSK−MEL−28細胞とAbR24又はAbC5
との反応性において検出し得る効力は持つていな
かつた（表１）。これらの結果はシヤル酸は抗体
AbR24及びAbC5により確認された抗原決定子の
重要部を構成していることを示した。 SK−MEL−28とAbR24の血清学的反応性はニ
ウラミニダーゼを除去しそしてMEM−FBSで置
き代えた後30分間は不検出であつた。この媒体で
37℃に培養を続け、２時間後AbR24反応性の一部
復元が生じそして22時間後血清学的反応性が完成
に復元した（第１図）。 SK−MEL−28黒色細胞からAbR24−反応性抗
原の単離とそのGD3ガングリオシドとしての同定 グリコリポイドはクロロホルム−メタノール
（Ｃ−Ｍ）抽出及びSato及びHakomoriの開示
（参照５）によりそれらのアセテートのフロリシ
ル（Florisil）クロマトグラフイーにより、培養
した黒色腫細胞（SK−MEL−28）から単離され
た、そしてグリコリポイドの調整はDEAE−セフ
アデツクス クロマトグラフイーにより中性及び
酸性成分に分画された。AbR24抗体（PA−
MHAで検出される）に対する阻害活性は酸性グ
リコリポイド フラクシヨン中に主としてあるこ
とが判つた。 その後の実験において、SK−MEL−28細胞か
らの酸性グリコリポイドはDEAE−セフアデツク
スのＣ−Ｍ抽出の分画（参照６）及びアルカリ加
水分解によつて不純物のホスホリポイドを除くこ
とによつて直接単離された。この混合物中の個々
のガングリオシドは溶媒１中でプレパラテイブ薄
層クロマトグラフイーにより（参照８）単離され
た。プレートからシリカゲルバンドを切り取りそ
してグリコリポイドを抽出することにより、抗原
活性はCM1及びCD1ａ上に移転した主酸性グリコリ
ポイド バンドの中にあつた（第２図）。第２図
中に表われたデータにおいて、フラクシヨンの抗
原活性はGMIA検出により測定された。同様の結
果はAbR24とSK−MEL−28標本細胞とのPA−
MHA検出を用いて抗体阻害試験により得られ
た。 単離されたAbR24−反応性グリコリポイドは下
記規準に従つてCD3〔NANA（２→８）NANA（２
→３）Galβ（１→４）Glc−ceramide〕として同
定した。（）含有グリコース、ガラクトース及
びＮ−アセチルノイラミン酸が1.0：1.09：2.11、
ヘキソサミンの痕跡（＜0.1）の割合を示す純粋
グリコリポイドのカルボハイドレート分析、（）
ビブリオコレラエ（Vibrio cholerae）ニウラミ
ニダーゼ（37℃で３時間）でガングリオシドの部
分加水分解はCM3とラクトシルセラミドで薄層ク
ロマトグラム上に２つの成分を形成させる（第３
図）。そして（）AbR24は標準GD3と反応する
が、他の標準ガングリオシド試験の何れにも反応
しなかつた（下記参照）。 黒色細胞と非黒色細胞、及び正常及び悪性組織
中のGD3の分配 () 種々の原料からのガングリオシドの薄層ク
ロマトグラフ−パターン全ガングリオシドフラ
クシヨンは極めて多種類の腫瘍細胞系、新鮮腫
瘍及び正常組織から調整した。これらの抽出物
がTLCにより分画されそしてガングリオシド
をレゾルシノール試薬を用い検出した時、黒色
腫はガングリオシドの特有パターンを持つこと
が明らかになつた。全ての黒色腫細胞系の実験
において、CD3とCM3と共移動するグリコリポイ
ドは主として酸性グリコリポイドであつた。こ
れらの細胞系の多くの主要成分はGD3と反応し
た（第３図及び第４図）。GD3はまたマウスの
目及びウシの脈絡膜の抽出物中の主にガングリ
オシドであつた。MOLT−４（Ｔ−細胞系）を
除いては、他の細胞又は組織は主要成分として
GD3を持つていなかつた。 新鮮黒色腫瘍の抽出物はGD3及びGM3が優位
性をもちSK−MEL−28と似たガングリオシド
パターンを有していた（第３図）。殆どの黒色
腫細胞系はこの単純化したパターンを持つた。
しかしながら幾つかは高ガングリレポイドがか
なりの量検出でき一層複雑なプロフイルを示し
た（第３図及び第４図）。GD3は実験した黒色
腫細胞系の全ガングリオシド画分の18−63％を
構成していた（第４図）。殆どの黒色腫細胞系
及び組織標本は30−50％範囲の値であつた。こ
の値は成人脳において７％、腎臓癌細胞系
（SK−RC−７）において９％、RAJI細胞（バ
ーキツト（Burkitt）リンパ様組織腫）におい
て11％、MOLT−４細胞において33％と対比
された（第４図）。AbR24の血清学的反応性の
見地から、それらのグリコリポイド画分中の
GD3の割合が高いこと、また全ガングリオシド
のレベルが高いことは重要なことである。この
ことは、細胞系の数においてリポイド−結合シ
ヤル酸のレベルの測定から明らかである。黒色
腫において、その値は0.039−0.063μmol／0.1
ml細胞の範囲であつた（９系で測定した）。
RAJI、MOLT−４及び腎臓癌（３系）はそれ
ぞれ0.011±0.003、0.013±0.006及び0.025−
0.029μmol／0.1ml細胞のリポイド−結合シヤル
酸値を持つた。 () AbR24抗体を用いて細胞系及び組織のGD3
の検出、多種の細胞及び組織のGD3レベルは
R24抗体を用いて測定された。４種の検出法が
使用された：(a)受身赤血球凝集、(b)抗体阻害、
(c)新方法、MHA法の平易化とグリコイポイド
のプラスチツクスに吸収する能力との併合によ
り考案したGMIA、(d) 125I−プロテインＡを用
いTLCクロマトグラム上でGD3と反応した
AbR24を検出する方法。検出値の感度は受身赤
血球凝集検定は最も感度が低くそして 125I−
PA法は最も感度が高い（表）。 最も感度が低い検定法（受身赤血球凝集）の使
用において、GD3は黒色腫細胞系及び黒色腫組織
の抽出物は検出できたが、他の原料からは検出で
きなかつた（表）。比較的感度の高い検出（PA
−MHAの阻害及びGMIA法）はGD3は広い範囲
の細胞（ウシの脈絡膜、マウスの目、胎児及び成
人肺、RAJIB−細胞系、MOLT−4T−細胞系、
RT−４膀胱癌細胞系及びAJ星状細胞腫細胞系）
が検出できたことを示した。代表的な阻害実験は
第５図に示され、そしてデータは表に集約され
ている。GMIA法の使用において、黒色腫からの
R24−反応性グリコリポイド又は標準GD3で被覆
したウエルは強い反応性を持つことが判つた：こ
の反応の幾つかの定量的データを第７図に示し
た。他の純粋なグリコリポイド（GM1、GD1ａ、
GM3及びGM2）はこの検出では不反応であつた
（表及び第６Ｄ図）。AbR24のみ加えてもまた不
反応であつた（第６Ｃ図）。 この方法を他の細胞から抽出した酸性グリコリ
ポイドに適用すると阻害検出として大体同様な結
果が得られた（表）。これらの方法により測定
されたGD3の限定された分配の比較において、
125I−プロテインＡ法は実験した全ての細胞及び
組織のGD3を検出した（表）。これらの組織及
び細胞の検出されたAbR24−反応性成分は正真の
GD3であることは標準GD3と共に混合（２溶媒シ
ステムにおいて）することにより、また関係のな
いグリコプロテイン特性を検出した他のプロテイ
ンＡ−結合単クローナル抗体（AbI12）が不反応
性であつたことを検知することによつて示され
た。 【表】 【表】 【表】 【表】 【表】 検 討 黒色腫細胞の細胞表面抗原に対し血清学的に特
異の高感度を示すマウス単クローナル抗体R24は
ジシアロ−ガングリオシド−GD3と認められた。
従来の研究はガングリオシドに対する抗体を得る
のは困難であつた（参照15）。このことは大部分
のガングリオシドは免疫を与えた種の成分であ
り、そしてまた、本来シラリダーゼ活性であるた
め、免疫学的にガングリオシドが分解する（参照
16）事実に基いて行わなければならない。この観
点により、非常に高いGD3含量を持つ黒色腫細胞
（SK−MEL−28）で６ケ月間以上免疫して生成
したマウスR24は重要なことである。ガングリオ
シドと認められる二つの他の単クローナル抗体は
最近開示された（参照17、18）。一つはニワトリ
のノイロン細胞と特異に反応しそしてGQ画分中
に存在する高ガングリオシドの一つに影響される
（参照17）。第２のものはヒト結腫癌に対して影響
されそして未だ性質未知のモノシアロガングリオ
シドとして認められた（参照18）。 本発明者らはCD3は黒色腫細胞培養物及び黒色
腫組織中に顕著に存在するガングリオシドである
ことを知つた。他の細胞と比べた場合、黒色腫細
胞はまた全ガングリオシドレベルが高い。他にも
示されるように、GD3は大部分の哺乳類組織中に
少量存在する。しかし、それはガングリオシドの
30−40％より成る網膜中の主要ガングリオシドで
ある。成人脳中、GD3は全ガングリオシド含量の
約８−10％を示す（参照19）。GD3のレベルは胎
児脳中が高い、胎児ラツト脳（懐妊15−17日）の
GD3は全ガングリオシド含量の約50％示す、20日
により約10％に急激に低下する（参照20）。
Portoukalian及び共同研究者（参照21）はTLC
及びカルボハイドレート分析により固定したGD3
は黒色腫の主構成であることも発表した（参照
21）。彼らは実験した４種の異なつた黒色腫標本
のGD3の割合はガングリオシドの31.0％から57.2
％に変化した。これらの結果から、発明者ら自身
の分析と同様、GD3ガングリオシドは悪性黒色腫
の主な成分であると結論することができる。正常
な黒色細胞がGD3のレベルが高いかどうかは現在
不明である。正常の脈略膜黒色細胞は直接血清学
試験におけるAbR24との反応性は弱い（力価１：
100）、それに比べ黒色腫細胞のAbR24との反応性
は高い（１：５×104−105の力価）（参照１）培
養皮膚黒色細胞の方法の最近の発展（参照22）を
もつて、今は黒色細胞及び黒色腫のGD3含量の直
接的比較をすることは可能であろう。GD3の正確
な生物学的要因は明確には判らないが、GD3はセ
ロトニン結合の役割を有していると示唆された
（参照23、24）。 実験において、ガングリオシドのTLCパター
ンは異なる黒色腫細胞系から単離した。本発明者
らは種々のガングリオシドの割合の変化を注目し
た。大部分の細胞系GD3及びGM3は主としてガン
グリオシドであつた（第３図及び第４図）。幾つ
かの黒色腫細胞系はGM2と一層複合したパターン
を示した。そして幾つかの高ガングリオシドは一
層よく表われる。これらのガングリオシド輪郭の
相違は癌の生物的特性（例えば、区別状態）に関
係するかどうかは明らかにする必要がある。一般
的に黒色腫は特有のガングリオシド輪郭を表わ
す。実験した他の細胞及び組織のＴ−セル系
MOLT−４のみ同様な輪郭を示した。そしてこ
れはおそらくＴ−細胞及び神経−外胚葉性細胞原
例えばThy−１による抗原の他の標本であろう
（参照25）。ウシ脈絡膜及びマウス目から導いたガ
ングリオシドは３又は４の顕著な成分のただ一つ
のGD3と一層複雑なパターンを持つ。 GD3ガングリオシドの存在が黒色腫細胞を決し
て制限するものではない、−それは遍在である。
細胞表面抗原に対する直接血清学検出を用い、黒
色腫のみ、脈絡膜黒色細胞、及び星状細胞腫は
AbR24と反応性があつた（参照１）。敏感な吸収
試験を用いてさえ、試験した他の細胞及び組織の
正常脳のみAbR24を吸収した。ここに表われた血
清学的知見と生化学的データの間の明らかな矛盾
に対して多くの説明が示される。第１はGD3は大
部分の非−黒色腫細胞の細胞表面成分ではないこ
との可能性である。GD3が他のガングリオシドの
生合成的前駆物であるそしてそれ故主として細胞
中に存在する、ゴオルギ（Golgi）装置中で、グ
リコリポイド合成に関与するグリコシル トラン
スフエアーズが見い出される（参照（26）、（27））
ことが証明されるであろう。本発明者らの生化学
的研究は全体の細胞又は組織に対し行われ、その
結果はこの説明と確かに適合する。他の可能性は
GD3がR24−ネガテイブ細胞の細胞表面に存在す
る。しかし抗体との反応はしないということであ
る。この現象は他の細胞膜グリコリポイドで見い
出した。例えばグロボシドは赤血球膜の主要グリ
コペプチドであるが、赤血球反応は抗−グロボシ
ド抗体と微弱に反応する（参照（28））。勿論、
GD3は血清学試験に用いて検出される量で大部分
の非−黒色腫細胞の表面に表れない可能性もあ
る。直接及び吸収試験の両方でAbR24と反応する
細胞型は高リポイド−結合シヤル酸含量及び顕著
ガングリオシドとしてGD3の両者を持つことは重
要なこととして注目することである。 黒色腫細胞のGD3及びGM3の集積の機構どうで
あるか？一つの可能性の説明は黒色腫細胞はＮ−
アセチルガラクトサミル トランスフエラーゼの
低レベルを有している。その結果酵素に対する一
般の基質例えばGM3及びGD3の集積が生ずる（第
９図）。ウシの甲状腺において、一つのＮ−アセ
チルガラクトサミン−トランスフエラーゼはGD3
及びGM3に作用しGD2及びGM2になる（参照
（27））。そして黒色腫におけるこの酵素のレベル
は低いことは本発明者が得られたガングリオシド
パターンを明らかにするであろう。他の可能性
の説明は黒色腫はβ−Ｎ−アセチルガラクトサミ
ニダーゼの高レベルを有している。その結果GM2
及びGD2の生成を減少させるか又は黒色腫が或種
のシアリルトランスフエラーゼのレベルを上げ、
その結果GD3及びGM3の合成を増加させることで
ある。黒色腫患者は血清シアリルトランスフエラ
ーゼレベルを上げることはこの見地からして重要
なことである（参照29）。癌組織の酵素レベルは
未だ研究されていない。しかしながら、ヒト黒色
腫細胞系のグリコプロテインは他の細胞型のグリ
コプロテインに比べシアリル化を増進する（参照
30）事実は黒色腫中のこの酵素の活性の増加を示
唆する。本出願中に使用した略語 TLC：薄層クロマトグラフイー；MHA：混合
血球凝集検出；Ｃ−Ｍ：クロロホルム−メタノー
ル；FBS：胎児ウシ血清；NANA：Ｎ−アセチ
ルノイラミン酸；Gal：Ｄ＝−ガラクトース；
Glc：Ｄ−グルコース；GalNAc：Ｎ−アセチル
−Ｄ＝−ガラクトサミン；Cer；セラマイド；
GM1：βGal1−3GalNAc1→4βGal〔３←2NANA〕
１→4Glc−Cer；CM3；NANA2→3βGal1→4Glc
→Cer；GD3；NANA2→8NANA2→3βGal1→
4Glc−Cer；GDla；NANA2→3βGal1→
3GalNAcβ1→4Gal〔３←2NANA〕Glc−Cer；
GM2：βGalNAc1→4βal〔３→2NANA〕Glc−
Cer.GTla；NANA2→8NANA2→3βGal1→
3GalNAcβ1→4Gal〔３←2NANA〕Glc−Cer. 〔Svennerholmの命名法（参照（31）〕 参照文献 １ Dippold、W.G.、Lloyd、K.O.、Li、L.T.
C.、Ikeda、H.、Oettgen、H.F.及びOld、L.J.
（1980）ヒト悪性黒色腫の細胞表面抗原：単ク
ローン抗体で６個の抗原システムの解明、
Proc−Natl Acad：Sci.USA 77：6114。 ２ Carey、T.E.、Takahashi、T.、Resnick、
L.A.、Oettgen、H.F.及びOld、L.J.（1976）ヒ
ト悪性黒色腫の細胞表面抗原：培養した自然発
生黒色腫細胞の体液免疫に対する混合血液吸着
分析。Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：3278。 ３ Pfreundschuh、M.、Shiku、H.、
Takahashi、T.、Ueda、R.Ransohoff、J.、
Oettgen、H.F.及びOld、L.J.（1978）悪性脳腫
瘍の細胞表面抗原の血清分析。Proc.Natl.
Acad.USA 75：5122。 ４ Ueda、R.、Shiku、H.、Pfreundschuh、
M.、Takahashi、T.、Li.L.T.C.、Whitmore、
W.F.、Oettgen、H.F.及びOld、L.J. ５ 1toh、T.、Li、Ｙ−T.、Li.S−Ｃ及びYu、
R.K.（1981）テー、ザツクス脳から新規なモノ
シアロシルペンタヘキソシル セラミドの単離
とその性質。J.Biol.Chem 250：105。 ６ Saito、T.及びHakomori.S.（1971）動物細胞
から全グリコリポイドの定量的単離。J.Lipid
Ros．12：257。 ７ Yu、R.K.及びLedeen、R.W.（1972）ヒト、
ウシ及びウサギの血漿のガングリオシドJ.
Lipid Res．13：680。 ８ Watanabe、K.、Powell、M.E及び
Hakomori、S.（1979）新シアロシル結合及び
核構造を持つガングリオシドの単離とその性
質。J.Biol.Chem．254：8223。 ９ Svennerholm、L.（1957）サイアリン酸の定
量的価格、．比色計によるレゾルシノール−
塩酸法。Biochim.Biophys Acta 24：604。 10 Warrn、L.（1963）シヤル酸のチオバルビツ
ール酸検定法Methods in Enzymol．６：463。 11 Zanetta、J.P.、Breckenridge、W.C及び
Vincendon、Ｇ（1972）トリフルオロアセテー
ト誘導体としてＯ−メチルグリコシドのモノサ
ツカライドの分析。J.Chromatogr．69：291。 12 Yokoyama、M.、Trams、E.G及びBrady、
R.O.（1963）ガングリオシドによる免疫化学的
研究。J.Immunol．90：372。 13 Magnani、J.L.、Smith、D.F.及び
Ginsburg、V.（1980）結合コレラ毒素： 125I−
ラベル毒素を直接薄層クトマトグラムに結合に
よるガングリオシドの検出。Anal.Biochem．
109：399。 14 Hunter、W.M.及びGreenwood、F.C.（1962）
高特異活性のヨウ素−131ラベルされたヒト生
長ホルモンの調製。Nature194：495。 15 Rapport、M.M及びGrof、L.（1969）リポイ
ドの免疫化学反応。Prog.Allergy 13：273−
331（1969） 16 Kundu.S.K.、Marcus、D.M及びVeh、R.W.
（1980）GD3及びGM1ガングリオシドに対する抗
体の調製及び性質。Ｊ ．Neurochem．34：
184。 17 Eisenbarth、G.S.、Walsh、F.S.及び
Nirenberg.M.（1979）ニウロンの血漿膜抗原に
対する単クローン抗体。Proc.Natl.Acod.Sci.
USA 76：4913。 18 Magnani、J.L.、Brockhaus、M.、Smith、
D.F.、Ginsburg、V.、Blaszeyguk.m.、
Mitchell、K.F.、Steplewski、２、及び
Koprowski、H.（1981）モノシアロガングリオ
シドは結腸癌の抗原を明らかにした単クローン
抗体である。Science 212：55。 19 Urban、P.F.、Harth、S.、Freysz、L.及び
Dreyfus、H.TLC及びHPTLCによる異なる種
からの脳及び網膜のガングリオシド。ガングリ
オシドの構造及び機能。Adv.Exp.Med.Biol.、
ed.L.Svennerholm（Plenum、New York）、
Vol.125、P.149−157、1980。 20 Irwin、L.N.、Michael、D.B.及びIrwin、C.
C.（1980）胎児ラツト及びマウス脳のガングリ
オシドパターン、J.Neurochem 34：1527。 21 Portoukalian、J.、Zwingelstein、G.及び
Dore.J、（1979）ヒト悪性黒色腫瘍の悪性生長
価の高い時のリポイド組成。Eur.J.Biochem．
94：19。 22 Eisinger、M.及びMarko、O.ホルボール及
びコレラの存在下生体外正常ヒト黒色細胞の選
択増殖。Proc.Natl Acad.Sci.USA（速報） 23 Wooley、D.W.及びGommi、B.W.（1965）。
セロトニン受容体V11.受容体として種々の純
粋ガングリオシドの活性。Proc.Natl.Acad.
Sci.USA53：959。 24 Tamir、H.、Brunner、W.、Casper、D.及
びRapport、M.M.（1980）セロトニンの結合の
ガングリオシドによりプロテイン結合セロトニ
ンの増強。J.Neurochem.34：1719。 25 Reif、A.E.及びAllen、J.M.V.（1964）AKR
胸腺抗原及びその白血病及び神経組織中の分
布。J.Exp.Med.120：413。 26 Keenan、T.W.、Morre、D.J.及びBasu、S.
（1975）ガングリオシド生合成。Golgi装置に
おけるラツト肝臓からグリコフインゴリポイド
グリコシル トランスフエラーゼの濃縮。J.
Biol.Chem249：310。 27 Pucuszka.T.、Duffard、R.O.、Nishimura、
R.N.、Brady、R.P.及びFishman、P.H.
（1979）ウシ甲状腺ガングリオシドの生合成。
J.Biol。Chem．253：5839。 28 Hakomori、S.（1973）腫瘍細胞膜のグリコ
リポイド。Adv.Cancer Res．18：265。 29 Silver、H.K.B.、Karim、K.A.、
Archibald、E.L.及びSalinas、F.A.（1979）血
清シアリン酸及び悪性黒色腫患者の腫瘍負荷の
監視としてのシアリルトランスフエラーゼ。
Cancer Res．39：5036。 30 Lloyd、K.O.、Travassos、L.R.、
Takahashi、T.及びOld、L.J.（1979）ヒト腫瘍
細胞系の細胞表面グリコプロテイン；悪性黒色
腫の異状特性。J.Natl.Cancer Inst．63：623。 31 Svennerholm、L.（1963）ヒト脳ガングリオ
シドのクロマトグラフイー分離。J.
Neurochem．10：613。 32 Yu、R.K.及びAndo、S.（1980）ガングリオ
シドの構造及び機能の新鮮脳の新ガングリオシ
ドの構造。（ed.L.Svennerholm）Advances in
Experimental Medicine and Biology 125：
33（Plenum Press）New York。
第１図はニウラミニダーゼ処理後SK−MEL−
28細胞のAbR24−反応性抗原の時間の進行に伴う
再表示である。第２図はグリコリポイド−媒介免
疫結合（GMIA）検定を用いて薄層クロマトグラ
フイー上のAbR24−反応性グリコリポイドの分配
を示す。SK−MEL−28細胞からの酸性グリコリ
ポイドは溶媒１のTLCにより分離した。シリカ
ゲルバンド（１cm巾）はプレートからかきとり、
Ｃ：Ｍ（1.2）で抽出しそして明細書記載のように
GMIAにより抗原を検定した。第３図は多くの細
胞系及び組織から酸性グリコリポイド画分の薄層
クロマトグラフイーを示す。レーン１：GM3；
２：GD3；３：GM1；４：SK−MEL−28黒色腫細
胞系；５：SK−MEL−28から単離されたAbR24
−反応性抗原；６：SK−MEL−37黒色腫細胞
系；７：SK−MEL−64黒色腫細胞系；８：
MeWo；９：SK−MEL−13黒色腫細胞系；１
０：黒色腫（外科的標本）；１１：MOLT−４
Ｔ−細胞系；１２：マウス目；１３：SK−RC−
７腎臓細胞系；１４：成人脳。ガングリオシドは
溶媒１で分離しそしてレゾルシノール−HClで現
視した。第４図は黒色腫及び他の細胞からガング
リオシドの薄層クロマトグラムの濃度計によるト
レースである。Ａ：SK−MEL−28黒色腫細胞
系；Ｂ：SK−MEL−37黒色腫細胞系；Ｃ：SK
−MEL−13黒色腫細胞系；Ｄ：黒色腫（外科的
標本）；Ｅ：成人脳；Ｆ：RajiB−細胞系；Ｇ：
MOLT−４細胞系；Ｈ：SK−RC−７腎臓細胞
系。全ガングリオシド画分の％としてGD3の量は
ピークの面積から計算した。そして各パネルで示
す。第５図は多種の細胞系及び組織からの酸性グ
リコリポイドによりSK−MEL−28黒色腫細胞の
AbR24の反応性の阻害を示す。検定：PA−
MHA；〓：AbR24対照；〓：成人脾臓；●：成
人肝臓；Ｏ：硬骨魚類目；■：SK−RC−７腎臓
癌細胞系；▲：成人脳；◇MeWo黒色腫細胞
系；◆：SK−MEL−29黒色腫細胞系；▽：SK
−MEL−37黒色腫細胞系；▼：マウスの目；
□：MOLT−４ Ｔ−細胞系；△：黒色腫（外
科的標本）；Ｏ：SK−MEL−28黒色腫細胞系。
第６図はAbR24を用いたグリコリポイド−媒介免
疫結合（GMIA）検定を示す。ウエルＡ：SK−
MEL−28黒色腫細胞系から単離したAbR24−反
応性グリコリポイド。ウエルＢ：GD3ガングリオ
シド；ウエルＣ：非ガングリオシド；ウエルＤ：
GM2及びCM3ガングリオシド混合物。抗体：
AbR24（１：1000）。第７図はGMIA検定において
AbR24によりGD3ガングリオシドの検出を示す。
AbR24の希釈は本図で示した。第８図はAbR24及
び 125I−プロテインＡの反応性によりTLCプレ
ート上のGD3ガングリオシドの検出。右側：ガン
グリオシドがレゾルシノール−HCl試薬で現視さ
れた。左側：AbR24及び 125I−プロテインＡと反
応したガングリオシド。ライン１：AbR24−反応
性ガングリオシド；ライン２：成人脳から抽出し
たガングリオシド。溶媒２。第９図はガングリオ
シドの生合成の提案された経路図〔Yu及びAndo
（参照32）後変更〕である。
28細胞のAbR24−反応性抗原の時間の進行に伴う
再表示である。第２図はグリコリポイド−媒介免
疫結合（GMIA）検定を用いて薄層クロマトグラ
フイー上のAbR24−反応性グリコリポイドの分配
を示す。SK−MEL−28細胞からの酸性グリコリ
ポイドは溶媒１のTLCにより分離した。シリカ
ゲルバンド（１cm巾）はプレートからかきとり、
Ｃ：Ｍ（1.2）で抽出しそして明細書記載のように
GMIAにより抗原を検定した。第３図は多くの細
胞系及び組織から酸性グリコリポイド画分の薄層
クロマトグラフイーを示す。レーン１：GM3；
２：GD3；３：GM1；４：SK−MEL−28黒色腫細
胞系；５：SK−MEL−28から単離されたAbR24
−反応性抗原；６：SK−MEL−37黒色腫細胞
系；７：SK−MEL−64黒色腫細胞系；８：
MeWo；９：SK−MEL−13黒色腫細胞系；１
０：黒色腫（外科的標本）；１１：MOLT−４
Ｔ−細胞系；１２：マウス目；１３：SK−RC−
７腎臓細胞系；１４：成人脳。ガングリオシドは
溶媒１で分離しそしてレゾルシノール−HClで現
視した。第４図は黒色腫及び他の細胞からガング
リオシドの薄層クロマトグラムの濃度計によるト
レースである。Ａ：SK−MEL−28黒色腫細胞
系；Ｂ：SK−MEL−37黒色腫細胞系；Ｃ：SK
−MEL−13黒色腫細胞系；Ｄ：黒色腫（外科的
標本）；Ｅ：成人脳；Ｆ：RajiB−細胞系；Ｇ：
MOLT−４細胞系；Ｈ：SK−RC−７腎臓細胞
系。全ガングリオシド画分の％としてGD3の量は
ピークの面積から計算した。そして各パネルで示
す。第５図は多種の細胞系及び組織からの酸性グ
リコリポイドによりSK−MEL−28黒色腫細胞の
AbR24の反応性の阻害を示す。検定：PA−
MHA；〓：AbR24対照；〓：成人脾臓；●：成
人肝臓；Ｏ：硬骨魚類目；■：SK−RC−７腎臓
癌細胞系；▲：成人脳；◇MeWo黒色腫細胞
系；◆：SK−MEL−29黒色腫細胞系；▽：SK
−MEL−37黒色腫細胞系；▼：マウスの目；
□：MOLT−４ Ｔ−細胞系；△：黒色腫（外
科的標本）；Ｏ：SK−MEL−28黒色腫細胞系。
第６図はAbR24を用いたグリコリポイド−媒介免
疫結合（GMIA）検定を示す。ウエルＡ：SK−
MEL−28黒色腫細胞系から単離したAbR24−反
応性グリコリポイド。ウエルＢ：GD3ガングリオ
シド；ウエルＣ：非ガングリオシド；ウエルＤ：
GM2及びCM3ガングリオシド混合物。抗体：
AbR24（１：1000）。第７図はGMIA検定において
AbR24によりGD3ガングリオシドの検出を示す。
AbR24の希釈は本図で示した。第８図はAbR24及
び 125I−プロテインＡの反応性によりTLCプレ
ート上のGD3ガングリオシドの検出。右側：ガン
グリオシドがレゾルシノール−HCl試薬で現視さ
れた。左側：AbR24及び 125I−プロテインＡと反
応したガングリオシド。ライン１：AbR24−反応
性ガングリオシド；ライン２：成人脳から抽出し
たガングリオシド。溶媒２。第９図はガングリオ
シドの生合成の提案された経路図〔Yu及びAndo
（参照32）後変更〕である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 抗体R24（AbR24）と試験試料とを反応させ、
そしてこの反応の程度を測定することからなる試
験試料中のGD3ジシアロ ガングリオシドの存在
を測定する方法。 ２ 反応段階が試験試料の懸濁液とAbR24の混合
を含み、この反応の程度を凝集体を視力的に勘定
することにより測定する受身赤血球凝集検定法を
使用する特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３ 抗体阻害検定法を使用する特許請求の範囲第
１項記載の方法。 ４ グリコリポイド媒介免疫結合検定法を使用す
る特許請求の範囲第１項記載の方法。 ５ 薄層クロマトグラフイーにより分離後血清学
的反応性グリコリポイドの検出よりなる方法を用
いる特許請求の範囲第１項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US365065 | 1982-04-02 | ||
| US06/365,065 US4507391A (en) | 1982-04-02 | 1982-04-02 | Method for detecting the presence of GD3 ganglioside |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58223066A JPS58223066A (ja) | 1983-12-24 |
| JPH0340833B2 true JPH0340833B2 (ja) | 1991-06-20 |
Family
ID=23437333
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|---|---|---|---|
| JP58055318A Granted JPS58223066A (ja) | 1982-04-02 | 1983-04-01 | Ｇｄ↓３ガングリオシドの存在を検出する方法 |
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|---|---|
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| EP (1) | EP0091005B1 (ja) |
| JP (1) | JPS58223066A (ja) |
| CA (1) | CA1210689A (ja) |
| DE (1) | DE3365236D1 (ja) |
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| CA1254846A (en) * | 1982-11-30 | 1989-05-30 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Monoclonal antibodies against melanocytes and melanomas |
| US4675287A (en) * | 1984-07-26 | 1987-06-23 | Scripps Clinic And Research Foundation | Monoclonal antibody directed to human ganglioside GD2 |
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| US4906562A (en) * | 1984-12-21 | 1990-03-06 | Oncogen | Monocolonal antibodies and antigen for human non-small cell lung carcinomas |
| US4935495A (en) * | 1984-12-21 | 1990-06-19 | Oncogen | Monoclonal antibodies to the L6 glycolipid antigenic determinant found on human non-small cell lung carcinomas |
| US4743543A (en) * | 1985-09-09 | 1988-05-10 | Coulter Corporation | Method for enhancing and/or accelerating immunoassay detection of human carcinoma tumor associated antigen in a pathology sample |
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| US5104652A (en) * | 1986-11-13 | 1992-04-14 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Compositions and method for treatment of cancer using monoclonal antibody against GD3 ganglioside together with IL-2 |
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| US5006470A (en) * | 1987-04-16 | 1991-04-09 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Human monoclonal antibodies to cell surface antigens of melanoma |
| JP2754206B2 (ja) * | 1987-11-17 | 1998-05-20 | メクト株式会社 | α２→３結合を認識するモノクローナル抗体 |
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| JP2706777B2 (ja) * | 1988-02-19 | 1998-01-28 | メクト株式会社 | 非天然型ｇｄ▲下３▼を認識するモノクローナル抗体 |
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| US5171665A (en) * | 1989-04-17 | 1992-12-15 | Oncogen | Monoclonal antibody to novel antigen associated with human tumors |
| US6020145A (en) * | 1989-06-30 | 2000-02-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for determining the presence of carcinoma using the antigen binding region of monoclonal antibody BR96 |
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| US5980896A (en) * | 1989-06-30 | 1999-11-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies reactive with human carcinomas |
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| US5728821A (en) * | 1994-08-04 | 1998-03-17 | Bristol-Myers Squibb Company | Mutant BR96 antibodies reactive with human carcinomas |
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| RU2208790C1 (ru) * | 2002-10-28 | 2003-07-20 | Лихванцева Вера Геннадьевна | СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ УВЕАЛЬНОЙ МЕЛАНОМЫ НА ОСНОВЕ МАРКЕРА АПОПТОЗА Bax |
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|---|---|---|---|---|
| GB2043890B (en) * | 1979-01-30 | 1983-09-07 | Otsuka Pharma Co Ltd | Determination of tumour associated glycolinkage and diagnosis of cancer |
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1983
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- 1983-03-30 CA CA000424894A patent/CA1210689A/en not_active Expired
- 1983-04-01 JP JP58055318A patent/JPS58223066A/ja active Granted
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