JPH03501562A - 抗‐ｃ３ｂ１受容体（ｃｒ３）抗体および治療用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抗−０３Ｂ１受容体（ＣＲ３）抗体 および治療用組成物 発明の分野 本発明は免疫学の分野に関する。さらに詳しく１ヨ、本発明は骨髄性単球細胞の 細胞表面受容体に対する抗体、および炎症刺激に反応した骨髄性単球細胞の動員 を阻害するためのこれらの抗体の治療的使用に関する。

発明の背景 骨髄性単球細胞は単球、好中球およびマクロファージを包含し、白血球の種類で ある。これらの細胞は細胞性免疫応答システムの主要な成分であり、細菌やカビ の感染に対する主要な防御手段である。しかしながら、さらに骨髄性単球細胞は 、とくにある種の炎症および自己免疫疾患を含めた非感染性疾患における組織障 害の病因１こもかかわっている。これらの細胞は血管系内を循環し、炎症部位に 動員され、血管系から浸出１．て炎症刺激部位に向けて遊走する。

骨髄性単球細胞が炎症部位に動員される機構はよくわかっていない、１．かじな がら、最近の研究は、ある種の細胞表面分子、とくに白血球機能性抗原（ＬＦＡ ）群の表面受容体が、骨髄性単球細胞の内皮細胞への付着およびこれらの細胞の 炎症部位への動員に関係するものとしている（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、　Ｔ、Ａ、　 ｌ　Ｄ、Ｃ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ　（１９８６）　。

Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｒ　Ｍａｃｒｏ−ｐｈａｇｅｓ、　Ｃ１ｂａ　Ｆ ｏｕｎｄａ口ＯｎＳｙｍｐｏｓｉｕｍｕ　１１８　：　１０２〜１０６頁；およ びＭｅｎｔｚｅｒ、Ｓ、Ｊ、、Ｍ、Ａ、Ｖ、Ｃｒｉｎｉｎｓ、Ｓ、Ｊ、、Ｂｕｒ ａｋｏｆ’ｆ　＆ＬＦＡ群の細胞表面受容体は３種の構造的に関連したヘテロダ イマーの糖蛋白質から作られ、それぞれが独特な高分子量αサブユニットを有し 、これが３種の群のメンバーのすべてについて構造的に同一な、共通のβサブユ ニットに非共有結合で連結している。これらのＬＦＡ細胞表面受容体は、ＬＦＡ −１（ＣＤ１１ａａサブユニツトと共通のＣＤ１８βサブユニツトからなる）、 ＣＲ３（Ｍａｃ−１またはＭｏｌとも呼ばれる）（ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８）およ びｐ１５０．９５　（ＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８）である。培養ヒト調帯静脈内皮細 胞への好中球の付着の研究（ＰｏｈｌＩＩａｎら（１９８６）　、　ｊ、Ｉｍｍ ｕｎｏｌ、。

１３６巻２号４５４８〜４５５３頁）では、共通のＣＤ１８βサブユニツトに対 する抗体（６０，３）は、ｋｉａｃ−１（すなわちＣＲ３またはＭ　ｏ　１　） のαサブユニットに対して特異性を有する他の抗体（６０，１）よりもはるかに 強力に付着を阻害することが示されている。

最近のｆｉｎ　ｖｉｖｏ研究では、Ａｒｆｏｒｓと共同研究者ら（Ａｒｆｏｒｓ 、　Ｋ−Ｅ、、Ｃ，Ｌｕｎｄｂｃｒｇ、　Ｌ、Ｌｉｎｄｂｏｍ、　Ｋ、Ｌｕｎｄ ｂｅｒｇ。

３３８〜３４０）は、ＣＣｌ２複合体、すなわちＬＦＡ群のすべてのメンバーに 対するマウスモノクローナル抗体がウサギで好中球蓄積および血漿漏出の両者を 阻害することが明らかにされた。この研究では、好中球蓄積と炎症を起こさせる ために比較的短時間の化学的刺激が用いられた。これらの研究で用いられた抗体 （６０，３）は　ＣＤｗ１８複合体の共通なβ鎖ポリペプチド上に存在するエピ トープまたはα−βヘテロダイマーの四級構造によって形成されたエピトープに 対して特異性を有するものと思われる（Ｗａｌｌｌｓら（１９８６）　、　Ｂ） ｏｏｄ、６７　：１００７）。

また、さらに最近の研究では（Ｇ、ｌｓｍａｌｌ、　Ｍ、Ｌ。

Ｍｏｒｇａｎｒｏｔｈ、　Ｒ，Ｐ、　Ｔｏｄｄ　ＩＩＩ＆Ｌ、Ａ、Ｂｏｘｅｒ　 （１９８７）　。

Ｂｌｏｏｄ、６９巻４号、１１６７〜１１７４頁）、好中球誘発肺傷害の実験モ デルにおいて１．摘出潅流ラット肺の活性化ヒト好中球による肺傷害は抗Ｍ　ｏ 　１抗体での好中球のプ１ツインキュベージジンにより阻害されることが示され た。この研究に用いられたモノクローナル抗体、抗−ＭｏｌはＭｏ１（ＣＲ３／ Ｍａｃｌ）のαサブユニットに特異性を有し、すなわちＭｏｌ　（ＣＲ３／Ｍａ ｃｌ）に特異的でＬＦＡ群の他のメンバーには特異的でない。この研究に用いら れた実験モデルは、血管内皮表面における内皮細胞傷害の測定に基づくもので、 炎症刺激の血管外部位への好中球の動員の結果としての傷害に基づくものではな い。

本発明者らは、チオグリコール酸誘導腹腔マクロファージに対するモノクローナ ル抗体を製造し、これらの抗サブクラスの抗−ＣＲ３特異的抗体を同定した。

本発明者らの得た結果は、骨髄性単球細胞が炎症部位に動員される機構に洞察を 与えるものであった。ＬＦＡ受容体のαおよび３両サブユニットが骨髄性単球細 胞の内皮への付着に関与するように思われるが、骨髄性単球細胞が内皮細胞の単 層を通過して外に出てついで炎症部位への遁走が起こる場合にはＣＲ３単独が重 要な役割を果しているものと考えられる。

ＬＦＡ群の３型補体受容体（ＣＲ３）成分のα鎖ポリペブチ：Ｚ上のエピトープ に対して特異性を有するラットモノクローナル抗体（Ｍｌ／７０）が報告されて いる（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、　Ｔ、、　Ｇ、Ｇａ１ｆｒｅ、　ＤＪＪｅｃｈｅｒ　 ＆　Ｃ，Ｍｉｉｓｔｅｔｎ（１９７９）　、　Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ 、９　：　３０１）　ｏ　しかしながら、本発明者らの実験では、この抗体は、 炎症刺激に対する骨髄性単球細胞のｉｎ　ｖｉｖｏでの阻害には有用ではないこ とが明らかにされ、また本発明者らが新しいサブクラスの抗−ＣＲ３抗体の同定 に用いたｊｎ　ｖｌｔｒｏスクリーニング検定をバスしない。同様に、本発明者 らはｌｓｍａｉ　ｌら（上述）によって検討された抗−Ｍｏｌ抗体（ｔｒＣ−Ｍ ｏｌモノクローナル抗体４４）を試験したが、をバスしないことが見出された。

発明の要約 したがって、本発明の第一の態様は、炎症刺激に対する骨髄性単球細胞の動員の 阻害に使用できる抗ＣＲ３特異的抗体を提供するものである。

好ましい態様においては、本発明の抗体は、以下に述べるスクリーニング検定に おいて、ｉｎ　ＶｉｔｒＯで細菌用プラスチックへの骨髄性卓球細胞の付着を阻 害できる。本で惹起できる炎症刺激に対する骨髄性単球細胞の動員の阻害との間 には、驚くべきことにきわめて高い相関があチックへの骨髄性単球細胞の付着を 阻害せず、この検定は新しいサブクラスの抗−ＣＲ３特異的抗体を明らかに−ニ ング検定において細菌用プラスチックへの骨髄性単球細胞の付着を阻害すること によって特徴づけられる抗−ＣＲ３特異的抗体を提供するものである。

本発明の抗体を同定し、明らかにするために用いられるＩｎ　ｖｌｔｒｏスクリ ーニング検定については詳細を後述する。しかしながら、このスクリーニング検 定の重要な特徴は次のとおりである。

スクリーニング検定に用いられる細胞は、特質上、それらの表面上にＣＲ３受容 体を有する骨髄性単球細胞である。たとえば、用いられる細胞はマクロファージ であり、チオグリコール酸誘発腹腔マクロファージ（Ｔ　Ｐ　Ｍ　）の使用が便 利である。

Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ検定に用いられる表面は通常、細胞プラスチックであり、また ＣＲ３を有する骨髄性単球細胞に対して類似の付着性をもつ任意の他の表面が使 用できる。たとえば、非修正ポリスチレンプラスチック表面が用いられる。スク リーニング検定には、非修正ポリスチレン細菌用プラスチックマイクロタイター プレートを使用するのが便利である。組織培養用の処理プラスチック表面は、ス クリーニング検定に使用するには一般に適当でない。

使用されるスクリーニング法は、細胞を細菌用プラスチック表面とインキュベー トし、ついで細胞を固定、染色するものである。次に付着の程度を、細胞から染 料の回収および分光測光的なｌｖ＋定によって定量化する。付着の阻害は、非処 置細胞と付着に先立って抗体で前処置した細胞とで得られた結果を比較して決定 される。

抗体による前処置は、比較的低温で、たとえば細菌用プラスチックマイクロタイ タープレートのウェル中たとえば４℃で３０分間行うのが便利である。しかしな がら、付着には通常、比較的高温たとえば３７℃で３０分間のインキュベーショ ンが要求される。本発明者らは、細菌用プラスチックとのインキュベーション時 に満足を付着が起こるためには、通常少なくとも１００μＭの濃度のマグネシウ ム（Ｍ　ｇ　２＋）が必要なことを見出した。インキュベーション培地は、２０ ％（Ｖ／Ｖ　）ウシ胎仔血清（Ｆ　ＣＳ）を含有する。ｕ＋ｂｅｃｃｏ培地の１ ｓｃｏｖｅによる改良培地または他の適当な同等の培地とするのが便利である。

本発明の第二の態様の抗体は特質として、本明細書に記述するｉｎ　ｖｉｔｒｏ スクリーニング検定で試験した場合、骨髄性単球細胞の細菌用プラスチックへの 付着を少なくとも８５％まで、好ましくは少なくとも９０％、とくに好ましい態 様においては、本発明の第二の態様の抗体は、たとえば以下に記述するｉｎ　ｖ ｌｔｒｏ検定において、細菌用プラスチックからの骨髄性単球細胞の脱着を起こ させることができるものである。たとえば、細胞を適当なインキュベージジンた とえば３７℃で６０分間インキュベートして細菌用プラスチックに付着させ、つ いで飽和濃度の抗体を含む培地と適当な時間たとえば５μｇ／ｍｌ、３７℃で３ ０分間インキュベートする。

脱着の程度は付着検定の場合と同様に、固定、染色および分光測光による測定法 を用いて決定できる。好ましい抗体は通常、本明細書でとくに説明するようなｉ ｎ　ｖｌｔｒｏ脱苫検定において、たとえば飽和濃（５μｇ／ｍｌ）の抗体に３ ７℃で３０分間曝露したのち、グリココール酸誘発腹腔マクロファージの少なく とも５０％とくに約６５％を、また多形核白血球の少なくとも７５％とくに少な くとも８５％を脱着させることができる。

本発明の抗体は性質上、炎症刺激に対する骨髄性単球によって測定できる。抗体 は、以下に述べる特異的抗体５Ｃ６と同程度に骨髄性単球細胞の１ｎ　ｖｉｖｏ 動員を阻害できることが好ましい。

とくに好ましい抗体は、以下に述べる特異的抗体５Ｃ６と類似のまたは同一の特 性を有する抗体である。すなわち、抗体は性質上、ＣＲ３に特異的な抗原性エピ トープ、たとえばＣＲ３のαサブユニットに対する結合特異性を有する。エピト ープはβ鎖の存在を要求するものであるが、性質上ＬＦＡ群の共通のβ−鎖ポリ ペプチド上のエピトープではない。抗体は性質上、ＣＲ３特異的抗体であって、 ＬＦＡ群特異的抗体ではない。

また、抗体は任意の適当な免疫グロブリンクラスまたはサブクラスに属するもの であってよいが、ＩｇＧたとえばＩｇＧ２またはＩ　ｇＧ２ｂ抗体であることが 好ましい。また、抗体は比較的高い親和性を有することが好ましい。たとえば、 本明細書に特定するような、細菌用プラスチック表面の骨髄性単球細胞の付着を 阻害するのに十分な親和性である。

本発明の抗体は、単一特異性抗血清、さらに好ましくはモノクロール抗体、また は組換え抗体すなわち組換えＤＮＡ技術によって製造された抗体であり、キメラ 、人体痘苗およびＣＤＲ−移植抗体を包含する。組換え抗体、キメラ抗体、人体 痘苗抗体およびＣＤＲ−移植抗体の製造方法は公開された国際特許出ＭＷＯ８４ １０３７１２号、ＷＯ３６１０１５３３号、および公開されたヨーロッパ特許出 願ＥＰＯ２３９４６０号に記載されている。

抗体は完全なまたは実質的に完全な抗体分子からなることが好ましいが、抗体フ ラグメントたとえばＦ　（Ａｂ’　）　２フラグメントであってもよい。

抗体は、細胞Ｗ合または他の抗体産生細胞系不滅化技術によってモノクローナル 抗体として得るのが有利である。抗体を作るのに用いられる抗原は性質上ＣＲ３ からなるものである。骨髄性単球細胞たとえばチオグリコール酸誘発腹腔マクロ ファージが抗原として使用できるが、精製および／または合成ＣＲ３抗原たとえ ば精製ＣＲ３αサブユニット糖蛋白質もしくはポリペプチドまたはそれらのフラ グメントも使用できる。モノクローナル抗体の製造技術はよく知られていて、本 技術分野の熟練した研究者には理解されているところである。組換え抗体は、免 疫グロブリン遺伝子の適当な操作およσ形質転換宿主細胞の調製によって得られ 、これも本技術分野においてよく知られた技術によって行われる。組換えＤＮＡ 操作のための遺伝子は、適当なモノクローナル抗体産生細胞系から得るのが便利 である。モノクローナル抗体および組換えＤＮＡ技術の両者により本発明の抗体 の産生に使用できる細胞の樹立が保障される。

本発明の第三の態様にはまた、ＣＲ３特異的抗体を産生ずる複数個の異なる細胞 を製造１−１各細胞を細菌用プラスチックへの骨髄性単球細胞の付着を阻害する 抗体についてスクリーニングし、付着を阻害する抗体を産生ずる細胞を選択する ことからなる、本発明の第二の態様の抗体を産生ずる細胞系の製造方法が包含さ れる。

さらに、本発明の第四の態様には、本発明の第二の態様に従って抗体を産生ずる 細胞系を包含する。

本発明の抗体はヒトおよび動物の治療的処置に使用できる。この処置に有用なた めには、使用される抗体は通常、骨髄性単球細胞の凝集、溶解またはクリアラン スを生じないものである。たとえば補体を固定したり、細胞を溶解したりしない 。また、ヒトの処置用には、抗体はヒト抗体または人体痘苗抗体であることが好 ましい。

抗体は、炎症刺激に対する骨髄性単球細胞の供給の結果としてまたは内皮への骨 髄性単球細胞の付着の合併の結果として生じる疾病または疾病状態、たとえば血 管透過性亢進の処置または予防に使用できる。骨髄性単球細胞の供給がその発症 または病因に関与していると思われる疾病には、炎症性、急性過敏症および自己 免疫疾患がある。とくに本発明の抗体は、Ｔ−リンパ球によって仲介される遅延 型過敏症反応において骨髄性単球細胞が関与する疾病、たとえば慢性炎症および 薬剤性過敏症反応の処置および予防に使用できる。このような疾患の例としては 、さらに、慢性関節リウマチ、免疫性脈管炎、糸球体腎炎、および炎症性腸疾患 がある。本発明の抗体を用いて処置できる他の疾患の例としては、エンドトキシ ン毒性、痛風、免疫複合体病、多発性硬化症およびその他の炎症性腸疾患、好中 球皮膚病、心筋梗塞後遺症、成人呼吸窮迫症候群、播種住血管内凝固症候群、気 腫、喘息およびアルサス現象を挙げることができる。本発明の抗体はこれらのお よび類似の疾患に関して処置および予防に使用できる。しかしながら、急速に増 殖している急性感染因子たとえばある種の細菌によって惹起された疾病状態に本 発明の抗体を使用することは望ましくないことに留意すべきである。

したがって、本発明の第五の態様では、本発明の第一の態様による抗体を適当な 賦形剤、希釈剤または担体と混合してなる治療用組成物を提供する。本発明に従 って使用される治療用組成物は、必要に応じて１種または２種以上の生理的に許 容される担体、希釈剤または賦形剤を用いて常法により製剤化できる。抗体組成 物は、経口、経頬、非経口もしくは経直腸投与用に、または経鼻もしくは吸入投 与に適した剤形に製剤化される。

しかしながら、通常は、抗体組成物は注射、たとえば１回注射または連続注入に よる非経口投与用に製剤化される。注射用製剤は単位用二剤形として提供できる 。組成物は、油性または水性ビークル中懸濁液、溶液または乳化液のような剤形 とすることができ、懸濁剤、安定剤および／または分散剤のような処方用剤を添 加することができる。また活性成分は粉末剤形とし、用量に適当なビークルたと えば滅菌したパイロジエンを含まない水で調製することもできる。このような非 経口用組成物には、長期持続性のデポ組成物の剤形も包含される。

さらに一般的には、デボ組成物は体内移植または筋肉内注射によって投与するこ ともできる。

本発明の第六の態様は、本発明の第一の態様または第二の態様による抗体を、適 当な賦形剤、希釈剤または担体と混合することによる治療用組成物の製造方法を 提供する。

通常、賦形剤、希釈剤または担体は生理的に許容される賦形剤、希釈剤または担 体である。

さらに、第七の態様として、本発明は、炎症刺激に対する骨髄性単球細胞の動員 を阻止するための医薬の製造における抗−ＣＲ３特異的抗体の使用を包含する。

さらに、第への態様として、本発明は、ヒトまたは動物に本発明の第一の態様の 抗体の有効量を投与することによる、その対象における炎症刺激への骨髄性単球 細胞の動員を阻止する治療方法を提供する。

ヒトまたは動物対象に投与される抗体の量は抗体の性質および対象の種類に依存 する。すなわち、以下にとくに述べる５Ｃ６抗体の場合、約０．５ｍｇの用量で 、マウスにおいて４日間まで炎症刺激への骨髄性卓球細胞の動員に基づくと、ヒ トの患者に要求される用量は約１ｇに相当し、通常は０．１から約１０ｆまでと 考えられる。

ために使用できることが明らかにされた。本発明者らは、骨髄性単球細胞が血管 内皮細胞単層を透過し、ついで炎症部位に遊走するためにはＣＲ３のみが不可欠 であることを明らかにした。抗−ＣＲ３Ｑ異的抗体の使用は、ＬＦＡ群の他のメ ンバーに対する抗体たとえばＬＦＡの共通βサブユニットに対する抗体の使用に 比べて、とくに有利である。ＣＲ３は骨髄性単球細胞に特異的な表面抗原であり 、一方ＬＦＡ群の他のメンバーはＢリンパ球および１９２２球を含めた免疫系の 他の種類の細胞の表面上に存在する。したがって、本発明における抗−ＣＲ３特 異的抗体は骨髄性単球細胞を特異的に標的とし、望ましくない全免疫系への全身 的作用を招くことになる免疫系の他の細胞には有意に作用しない。抗−ＣＲ３特 異的抗体の使用は、他の免疫系を実質的に無傷で機能性に維持し、感染性および 他の侵襲性刺激は防御できるので、有利である。

図面の簡単な説明 本発明をさらに、添付の図面、第１図〜第６図を参照しながら、以下の実施例に より、例示のみの意味で説明する。

第１図は、細胞を培地ｆｉｉ独（Ｃ）、５Ｃ６またはＭ／７０ｍＡｂ　（１０５ ）中でプレインキニベーションしたのちの定量的付着検定の結果を示すグラフで ある。チオグリコール酸誘発腹腔マクロファージ（ＴＰＭ）または骨髄ＰＭＮ（ ＢＭ）を細菌用プラスチック（Ｂ　Ｐ）または組織培養プラスチック（ＴＣＰ） 上の９６ウニルプレートの各ウェルに加えた。結果は３７℃で３０分インキュベ ーションし、洗浄し、ギームザ染色したのち、３種の別個の実験の各４回の実験 の平均±ＳＤで示す。細胞数は１０５付看細胞／ウエルの内部標準から計算した 。

第２図は、ＢＰに付着したＴＰＭまたはＴＣＰに付着した骨髄ＰＭＮ　（ＢＭ） のｍＡｂ　５Ｃ６による脱着の定量的検定の結果を示すグラフである（材料と方 法の項に記載した検定）。培地単独（Ｃ）またはＭｌ／７０上清（Ｍｌ／７０） ではＢＰからのＴＰＭ、ＴＣＰからのＢＭのいずれの脱芒も認められなかった（ 結果は２種の別個の実験での各３回の測定値の平均±ＳＤで示す）。

第３図は、培養Ｔ　Ｐ　Ｍの”５Ｓ−Ｍｅｔ標識免疫沈降の１０％５ＤＳ−ＰＡ ＧＥゲルのオートラジオグラフである（対照プレバレージョンはラット−モルモ ットＰ　Ｍ　ＮｍＡｂ　ｌＡｌ０１４で沈殿させ、一方、Ｍｌ／７０および５Ｃ ６はいずれも１６５および９５ｋＤａのへテロダイマーを沈殿した。

第４図は、５ＲＢＣをチャレンジした感作マウスにおける経時的な足踪厚の増大 に対する５　Ｃ６ｉ、ｖ、投与の作用を示すグラフである。

第５図は、５Ｃ６存在下または不存在下における能動免疫処置マウスのチャレン ジ後に認められる足踏腫脹の経時的変化を示すグラフである。

Ｓ６図は、未使用の同系マウスの腹腔に感作リンパ球とツベルクリンを移入後の 骨髄性単球細胞の炎症性動員に対する５Ｃ６の作用を示すグラフである。

発明の態様の詳細な説明 以下の実施例１および２ではカッコ内の数字によって参考文献を指示する。

ニング、性質およびｉｎ　ｖｉｖｏ試験について述べる。

マウスチオグリコール酸腹腔マクロファージ（ＴＰＭ）および多形核白血球（Ｐ ＭＮ）はＢｒｅｗｅｒの完全チオグリコール酸ブロス１　ｍｌの腹腔内（ｉｐ） 注射後それぞれ４日および１日に、洗浄によって腹腔から収穫した。ギームザ染 色サイトスピンプレバレージョンでは４日目浸出細胞（３Ｘ　１０７細胞）の約 ８０％はＰＭＮであった。

骨ヤ細胞、約４５％ＰＭＮは大腿腔のリン酸緩衝食塩水ＣＰ　Ｂ　Ｓ）での潅水 によって得た。ＢＣＧ活性化および非活性腹腔マクロファージならびにクツバー 細胞は文献（１）に従って単離した。

両性のマウス（、Ｃ５７／Ｂ　１またはＰａｔｈｏｌｏｇｙＯｘｆｏｒｄ、ＰＯ ）はＳｉｒ　Ｗｉｌｌｌａｍ　Ｄｕｎｎ　５ｃｈｏｏｌ　ｏｒ　Ｐａｔｈｏｌｏ ｇｙで育種した。ＡＯクラットＳＰＦラット）は本発明者らの属する部門のＭ　 ＲＣＣｅ１ｌｕｌａｒ　１ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　Ｌｌｎｉｔから入細胞は２０％ ウシ胎仔血清（Ｆｅ２）を含むＤｕｌｂｅｃｃ。

培地の１ｓａｖｅ改良培地に懸濁し、底の平坦な細菌用プラスチック（Ｂ　Ｐ　 ）　（Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｒｌｃｋｓａｎｓｖｏｒｔｈ。

Ｈｅｒｔｆｏｒｄｓｈｉｒｅ）または組織培養処理プラスチック（Ｔ　ＣＰ　） 　（Ｓｔｅｒｉｌｌｎ、　Ａｓｈｒｏｒｄ、　Ｍｌｄｄｌｅｓｅｘ　）のいずれ かの９６ウエルプレートに、１０５細胞／ウエルの密度に添加した。３７℃で３ ０分間インキニベーションしたのち、プレートをＰＢＳで３回洗浄し、付着細胞 をメタノールで固定した。１０％ギームザ溶液で１０分間染色したのち、プレー トを流水で洗浄し、乾燥し、残った染料はメタノール中に溶解した。染色は自動 プレートリーダー　（Ｄｙｎａｔｅｃｈ　Ａｌｅｘａｎｄｒｌａ、　Ｖａ）によ って４６０ｎｍの吸収を測定して定量した。この検定は、ウェルあたり５ｘ１０ ３〜１０５付着細胞の間で直線であった。抗体（ａ　ｂ）阻止実験では、ハイブ リドーマ：Ａ整培地をマイクロタイタープレートに加え、同じ培地中の細胞を添 加する前に４℃に冷却した。４℃で３０分間ブレインキュベーション後、ａｂ処 装、対照細胞のいずれも付着せず、ついでプレートを３７℃に３０分間加温した のち洗浄、処理を行った。脱着検定では、１０５マクロフアージを血清含有培地 中で平板培養して３７℃で６０分間付着を行わせた。洗浄して付着しなかった細 胞を除去したのち、培地にａｂを加え、３７℃で３０分間細胞をインキュベート シた。次にプレートを上述のように洗浄、処理し、脱着細胞のパーセントを計纂 した。細胞を５μＭサイトカラシンＢ　（ＣＢ）　、ＩＱμＭ　／　ｍｌコルセ ミドまたは５５Ｍ２−デオキシグルコースの１種または２種以上中でプレインキ ュベートし、ついで上述のように１０％ＦＣＳを含む培地中で付着検定を実施す ることにより、付着に対する様々な阻害剤を検討した。付着に際しての陽イオン の要求を評Ｈする実験は１０％ＦＣ８を含むｌ５ｃｏｖｅ培２十 地中、Ｃａ　およびＭ　ｇ　’＊たはＣａ２＋単独を拘束するために５μＭエチ レンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）または５ｍＭエチルグリコールビスアミノエチ レン四酢酸（ＥＧＴＡ）のいずれかを加えて実施した。絶対的な陽イオン要求は 、Ｃａ　およびＭ　ｇ　２＋を含まないハンクス平衡塩２◆ 溶液（ＨＢ　Ｓ　Ｓ）中、二ぼ陽イオンを透析で除去した１０％ＦＣＳと所定量 のＣａ　ＣＤ　２またはＭｇＣ！！２を加えて付着検定を実施することによって 決定した。付着に対する表面蛋白分解の影響は、細胞を（１，５ｍｇ／ｍ１Ｐｒ ｏｎａｓｃ（Ｂｏｅｈｒｉｎｌｅｒ、　Ｌｅｗｅｓ、　５ｕｓｓｅｘ）または０ ．１ｍｇ／ｍ？結晶トリプシンを懸濁したｌ５ＣＯＶＱ培地中、班白質を加えな いで、３７℃において３０分間処理して評価した。細胞を１０５’ｇ　Ｆ　ＣＳ 中で洗浄したのち、適当な基板上血清含有培地中に取り、標準付着検定によって 評慨した。

抗体産生 ｍＡｂ　５Ｃ６は、Ｔ　Ｐ　Ｍで４回免疫処置したＡＯクラットらの肺臓細胞と Ｙ３ラット骨Ｉ！！！細胞系の融合細胞の産生物であった。融合は、Ｇａ１ｆｒ ｃら（２）の記載に従って実施した。ハイブリドーマ上清はＴＰＭの付着の阻害 および脱着についてスクリーニングした。１０５６のウェルから１個の陽性培養 体を単離し、限界希釈法で２回クローン化した。抗体は腹水から、硫酸ナトリウ ム沈澱ＳＤ　Ｅ　Ａ　Ｅ　−８ｅｐｈａｃｅｌ（Ｐｈａｒｉａｃｌａ、　Ｈｏｕ ｎｓｌｏｗ。

Ｍｌｄｄｌｅｓｅｘ）上陰イオン交換クロマトグラフィーおよびＳ−３００Ｓｅ ｐｈａｄｅｘ（Ｐｈａｒｍａｃｌａ）上ゲル濾過クロマトグラフィーによって精 製した。純度は、１０％アクリルアミドゲル中ドデシル硫酸ナトリウムポリアク リルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、Ｖｙｃｋｏｆ’ｒら（３ ）の緩衝系とクーマシーブルー染色を用いて評価した。このＩｇＧは還元または 非還元条件のいずれで流しても他の蛋白質バンドを示さなかった６　Ｆ　（ａ　 ｂ　’　）　２フラグメントはＲｏｕｓｓｃａｕｘら（４）に従い、０，１Ｍ酢 酸塩中１）Ｈ４，ＯでＩｇＧをペプシン消化し、ついでゲル濾過クロマトグラフ ィーで精製することにより製造した。

ＦａｂフラグメントはＩｇＧを７５ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７，０／　７５μ Ｍ　Ｎ　ａ　ＣＤ中でパパイン消化し、ＤＥＡＥ　−５ｅｐｈａｅｅｌ上陰イオ ン交換クロマトグラフィーで精製して製造した。５Ｃ６は）１．Ｂａｚｉｎ博士 （Ｃａｔ、ｈｏｌｌｃＵｎｉｖｅｒｓｌｔｙ、　Ｌｏｕｖａｊｎ　）によって恵 与されたラットＩｇＧサブクラスに対する抗血清を用いた０ｕｃｈｔｅｒＬｏｎ ｙゲル拡散によって型を決められたＩ　ｇＧ２ｂである。５Ｃ６はＭａｓｏｎの 方法（５）でフルオレセイン標識された。

標識、免疫沈降および５ＤＳ−ＰＡＧＥ４日目Ｔ　Ｐ　Ｍを１０’個細胞／　１ ０　ｃｍ培養皿になるように加え、メチオニンを含まない培地中２００μＣ１の ３５Ｓ−メチオニンを添加して一夜培養した。非標識メチオニンとの追跡インイ ンキニベーション後、細胞をＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中１％ｖ／ｖ　Ｔｒｌｔｏ ｎ　Ｘ　−１００，１０ｍＭ　ＥＤＴＡ、３ｍＭフェニルメチルスルホンフルオ リド（ＰｍｓＦ）および３ｍＭヨード酢酸アミドで溶解した。

溶解液をＰｒｏｔｅｌｎＡ−８ｅｐｈａｒｏｓｅで予め澄明化したのち、界面活 性剤中ｍＡｂを４℃で６０分間添加した。次にｍＡｂ−ａｇ複合体をウサギＩｇ Ｇ抗−ラットＩ　ｇＧ−ＰｒｏｔｅｌｎＡ−５ｅｐｈａｒｏｓｅで沈澱させた。

ビーズを標準方法で洗浄し、２％ＳＤＳ含有サンプル緩衝液中で煮沸した。

溶出液を１０％ポリアクリルアミドゲル上電気泳動およびオートラジオグラフィ ーによって分析した。対照プレバレーシランは、マウスＭφ上には見出されない 決定基に対するｍＡｂを含有した。ペプチドマツピング実験では、Ｐｒｏｔｅｉ 　ｎＡ−８ｅｐｈａｒｏｓｃピーズ上５Ｃ６およびＭ１／７０免疫沈降体を１０ ０μｇ　／　ｍｌの結晶トリプシンにより３７℃で様々な時間消化させた。反応 はビーズをＳＤＳサンプル緩衝液中で煮沸することによって停止させ、得られな 分裂パターンを５ＤＳ−ＰＡＧＥによって分析した。

８導化基板の製造 フィブロネクチン被覆表面は、組織培養プラスチック表面をゼラチンついで新鮮 なマウス血清により室温で１時間被覆することにより製造した。ウェルをついで 徹底的に洗浄した。ポリーＬ−リジン被覆、グルタルアルデヒド活性化表面を（ ６）に記載されているようにジニトロフェニル（ＤＮＰ）ウシ血清アルブミン（ ＢＳＡ）−抗−ＤＮＰ免疫複合体で誘導化した。

走化性検定 走化性トリペプチド、ホルミルメチオニルロイシルフェニルアラニン（ｆＭＬＰ ）に反応した骨髄性単球細胞の指向性遁走は、（７）に記載されているようにア ガロース下に検定した。

動員検定 ＰＯマウスに、１ｍｌのチオグリコール酸ブロスのｉｐ注注射４問 または抗−Ｌ３Ｔ４サブクラスに合致するＹＴＡｍＡｂを静脈内（ｉｖ）注射し た。とくに指示のない限り、ａｂ注射はすべて０．５■とした。最初の注射から １８および９６時間後にマウスを層殺し、腹腔浸出細胞血液、肝臓、膵臓および 骨髄を採取した。浸出細胞、骨髄細胞および血中白血球（１％デキストランＴ５ ００で赤血球を沈降させたのち）の総数および分画をＭ　ａｙ　−　Ｇｒｕｎｗ ａｌｄ−Ｇｉｅｍｓａ染色を用いてめた。ｍＡｂによる動員の阻止は、Ａｂ−処 置マウスの総浸出細胞数から非活性化細胞を差引いて対照マウスからの動員細胞 数で割って計葬した。細胞は次に、ＢＰまたはＴＣＰへの付着を試験した。

肝臓および膵臓は以下のように組織学的に検査した。一部の実験では、組織をグ ルタルアルデヒドに固定し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。フルオ レセインイソチオシアネート（Ｆ　ＩＴＣ）−５Ｃ６をＩｎ　ＶＩＶＯで注射し た実験では、臓器をＴｌ５ｓｕｅｔｅｋ　（ＭｉｌｅｓＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅ ｓ、　Ｎａｐｅｒｖ目１ｅ、　Ｉｔ）に包埋した凍結切片（５μ膳）の直接免疫 蛍光によってｍＡｂの存在を調べた。別法として、動物を（８）の記載に従って 潅流固定し、組織の凍結切片を、°切片に外因性の最初のａｂを加えることなく イムノペルオキシダーゼ法で解析した。

ロゼツト検定 ヒツジ赤血球（Ｅ）をＩｇＭａｂとｉ　Ｃ３ｂまたはＣ１４２（９）またはウサ ギ−抗−ヒツジＥ　ＩｇＧでオプソニン化し、５％Ｖ　／　Ｖ懸濁液として４℃ でロゼツト形成にまたは付着性ＴＰＭ（１０）による３７℃での貧食に使用した 。洗浄し、グルタルアルデヒド固定後、位相差顕微鏡によって１１００７Ｐに対 して付着した赤血球の数を計数して結合を定量した。

顕微鏡検査 蛍光顕微鏡検査はＺｅｌｓｓ　Ａｘｆｐｈｏｔエビ蛍光顕Ｗ１鏡を用いて実施し た。走査電子顕微鏡による検査は（１０）に記載されているようにして実施した 。

蛋白定量 ＩｇＧの蛋白質濃度は、標準としてＢＳＡを用い、ＬＯｖｒｙら（１１）に従っ て測定した。

本発明者らは、食細胞表面分子の機能性エピトープに対するｍＡｂについてのス クリーニング法を開発するｔ投杼々な単純で再現性のある短時間の付着性検定法 でＮ１φおよびＰＭＮ付着の性質を調べた。様々な一次マウスに１φのＭＲ培養 処理プラスチック（Ｔ　ＣＰ）また細菌プラスチック（ポリスチレン）への付着 性を検査した。これらの基板へのＭφの選択的付着が、他の血球および線維等細 胞からの迅速な精製の基礎となるからである（１２）。

検定はすべて血清の存在下に実施した。様々な細胞のプラスチック基板に対する 比較的な付着性を第１表に示す。

Ｍφおよび浸出液ＰＭＮのＢＰへの付着はＭｇ２＋依存性で、プロナーゼ感受性 であり、効率的な結合には加温ならびに細胞骨格安定化が要求される。ＴＰＭを ３７℃で０．５ｍｇ／ｍｌのプロナーゼに曝露すると３０分でそのＢＰへの付着 能は完全に消失する。この効果は少なくとも６時間持続し、細胞は２４時間培養 すると完全に回復する。

休止ＰＭＮおよび組織マクロファージたとえばフッパー細胞はＢＰに付着するこ とができない。ＢＰへの付着には少なくとも１００μＭの細胞外Ｍ　ｇ　２＋が 必要で、Ｃａ２＋単独ではこの要求に代用とならない。ＰＭＮ　（休止または浸 出にかかわらず）のＴＣＰへの付着はＢＰへのＭφの付着と同じ性質をもってい た。試験したすべての細胞種がＴＣＰによく付着し、様々な程度の拡散を示した 。ＢＰへの付着に関しては、ＴＣＰへのＭφの付着には加温と正常な細胞骨格を 要求するが、蛋白分解に抵抗性を示し、部分的に陽イオン非依存性である点で異 なっていた。

第１表 １０％ＦＢＳ中３７℃、３０分後のｉｎ　ｖｊｔｒｏ細胞付着付着細胞数の測定 には４６０■のギームザ吸収を使用非活性腹腔Ｍφ　０．１７４　９Ｂ±４　０ ．１３５　７４±３チオグリコ一ル酸ＰＭφ　０．１８９　１０４±５　０．１ ４７　８１±５クツパー細胞　０．１８１　９９±３　０．００２　１±３骨髄 ＰＭＮ　Ｏ，１８０９９±３　０．００８　４±３浸出ＰＭＮ　［１，１１１θ 　１０２土４０．１５１　８３±５両者ともなし　０．１０４　５７±５　０． ００４　２±２プロナーゼ　０．１８２　１００±２　０．００５　３土２温度 ＜４０℃　０．００８　４±８　０．００４　２±２サイト力ラシンＢ５μＭ　 Ｏ，０７２４０±３　０．０５８　３２±３コルセミド１０ｕ　ｇ／ｍｌ　Ｏ， ０６３３５±５　０．０４９　２７±４サイトカラシンＢ 十コルセミド　１１．００６　３±２　（１，ＱＯ２１±２２−デオキシグルコ ース　０．１５１　８３±３　０．０５１　２８±１ＢＰへのＭφの付着は、細 胞付着に関与するプロナーゼ感受性、陽イオン依存性表面成分を同定する有用な 手段であると考えられた。すなわち、本発明者らは、この検定を、まずＴＰＭの ＢＰへの付着を阻害する機能性ｍＡｂの、次にＢＰからの付ＷＴＰＭの脱着の検 定に使用した。

ｍＡｂ５６はＢＰへの付着を阻害し、付着Ｔ　Ｐ　Ｍを脱着させる ２回の連続的助合のそれぞれで、ＢＰへのＴＰＭの付着を阻害することができる ｍＡｂを分布するひとつのハイブリドーマを単離した。両者とも同じ抗原を同定 し、この報告はこれらのｍＡｂの第一の５Ｃ６と命名された抗体に限定される。

ｍＡｂ　５Ｃ６の、細菌および組轍培養処理プラスチックに対するＴＰＭの付着 に対する作用を検討した。本発明者らは、非処置４日目ＴＰＭが血清含有培地中 、３７℃で３０分後、ＢＰ上に付着し、拡散した。これらの細胞を３７℃に加温 して付着させる前に５Ｃ６ハイブリド一マ上清中４℃で３０分間プレインキエベ ーシッンすると、ＢＰへのＴＰＭ付着性の完全な喪失を招くことを見出した。一 方、非処理ＴＰＭは３７℃で３０分間後にＴＣＰに付着し拡散したが、５Ｃ６と ブレインキュベーションした細胞は、ＴＣＰに対する付着性は損われていないが 、拡散は全く認められなかった。

非処理Ｔ　Ｐ　Ｍのガラスへの付着は、ＴＣＰ上に認められた付着に類似してい た。ガラスに付着した対照Ｔ　Ｐ　Ｍは平坦でよく拡散した。これらの細胞を５ Ｃ６ｍＡｂ中でブレインキュベーションしたのち、細胞は、比較的小さいカタツ ムリのようなフットプロセスを介して付着したが、大半の形質膜は細胞体部の上 に著しくがき乱されたドーム状に残った。ＭφのガラスおよびＴＣＰの付着には ２相、すなわちｍＡｂ　５Ｃ６抵抗性付着と、それにつぐｍＡｂ　５Ｃ６感受性 拡散があった。

第■表 ５Ｃ６Ｍａｂ（完全１　ｇＧ、Ｆ　（ａｂ’　）　２およびＦａｂフラグメント ）およびＭｌ／７０　１ｇＧの機能特性の比較 ＢＰへのＴＰＭ　９２ｆ１％　５１ｆ３％　０％　−２２％付着の阻害 付着ＴＰＭ（ＢＰ）　６５±４％　８±３％　５±２％　Ｂ±３％の脱着 ＥＩＣ３ｂ　ノｏゼット　〉９５％　〉９５％　０％　〉９５％形成の阻害 プロナーゼ　８５±１％　ＮＤ　ＮＤ　２６±ｌ駕５Ｃ６、Ｉ　ｇＧ、Ｆ　（ａ ｂ’　）　２およびＦａｂは１．１０および１００μｇ　／　ｍｌで使用した。

ロゼツト形成は方法の項に記載のように定量した。結果は少なくとも３回の実験 の平均圧ＳＤを示している。

Ｔ　Ｐ　Ｍ　ハ懸濁液中（３０分、３７℃）　０．５　ｍｇ／ｍｌプロナーゼで 消化し、０．２５％グルタルアルデヒドに固定し、ＦＣＳ中で制止して、１×１ ０６細胞を痕跡間接結合アッセイ（２実験）による４回測定して検定した。非処 理細胞は５Ｃ６の結合後筒２ｃ７）ａｂ　３９０３：！：４７ｃｐｍを結合し、 プロナーゼ消化後３３３６±５１　ｃｐｓを結合する。Ｍｌ／７０を′！ｓ１の ａｂとして用いると非処理細胞は３２９２±３５ｃｐｍを結合し、プロナーゼ処 理後はわずか８６６±１２ｃｐ−を結合するにすぎない。プロナーゼ感受性であ ることが知られているＭφ特異的Ｆ４／８０ａｇはこの処理で消失した。

第１図および第ｎ表にはｍＡｂの存在下または不存在下における付讐の定量的検 定結果をまとめる。これらは、５Ｃ６１ｇＣ；が０．５　μｇ／ｌｏｌテＢ　Ｐ へｃ７）Ｔ　ＰＭ（７）付着を９２±１％阻害し、一方弁処理細胞または、比較 のために飽和濃度の抗−ＣＲ３ｍＡｂ　Ｍｌ／７０で処理した細胞は付着能力の 変化を示さなかった。非処理細胞に比べてＭｌ／７０処理細胞での付着性の増大 はこのａｂによる細胞の凝集およびこれらのクラスターの付着によるものである 。Ｍφ付着に対するその作用に加えて、５Ｃ６はまたＴＣＰに対するＰＭＨの付 着を消失させた。

この付着は対照またはＭｌ／７０処理ＰＭＮでは損われなかった。Ｍ’ｌ／７０ 処理は懸濁液中で骨髄性単球細胞の凝集を招いたが、５Ｃ６処理Ｐ　Ｍ　Ｎまた はＭφは分離したままであった。

ＣＡＳＴａｇまたはニワトリ線維芽細胞のフィブロネクチン受容体は、ブイプロ ネクチン被覆基板に付着した細胞を脱着させる能力において同一であった（１３ ）　。

この前提により、５Ｃ６がＴＰＭｔ−ＢＰからまたは骨髄ＰＭＮをＴＣＰから脱 着させる能力を調べた。細胞を３７℃で６０分間付着させたのち、プレートを洗 浄し、ついで飽和濃度（５μｇ／ｍ１）５Ｃ６もしくはＭｌ／７０含有培地また はａｂを含まない培地を加えた。３７℃で５分以内に５Ｃ６で処理した拡散細胞 は球状になったが、一方、Ｍｌ／７０および対照細胞は変化しなかった。３７℃ で３０分間までに（第２図）、５Ｃ６処理ＴＰＭの６５％および５Ｃ６処理ＰＭ Ｎの８５％以上が脱着した。

これは、同じ期間でのＭｌ／７０処理ＴＰＭまたはＰＭＮの脱着３％とは明らか に相違した。低濃度のｍ　Ａ、　ｂ（Ｏ００５μｇ　／　ｍｌ　）による脱；は 遅く、付着細胞の球形化には３０分、脱着には９０分が必要であった。特定の基 板たとえばフィブロネクチンまたは免疫複合体へのＴＰＭの付着は５Ｃ６ｍＡｂ によって影響されなかった。

ｍＡｂ　５Ｃ６はＣＲ３に結合し、ｉ　Ｃ３ｂ結合を阻害する ５Ｃ６によって２識されるａｇの性質を、ｍＡｂの細胞結合像によって調べ、分 子種を免疫沈降によって同定した。固定細胞での間接結合数→１免疫検定および 生細胞の直接免疫蛍光研究により、５Ｃ６は、クツパー細胞表面（免疫ペルオキ シダーゼ染色によって側定される）および休止またはＢＣＧ活性化リンパ球には 存在しない、ＴＰＭ、ＲＰＭ、ＢＣＧ活性化ＭφおよびＰ　Ｍ　Ｎ上のメタノー ルおよびグルタルアルデヒド安定性エピトープに結合することが明らかにされた 。　Ｓ−Ｍｅｔ標識ＴＰＭからの５　Ｃ６ａｇの免疫精製により、Ｍｌ／７０で 沈殿させたＣＲ３と共移動する１６５ｋＤａおよび９５ｋＤａのヘテロダイマー が明らかにされた（第３図）。これらの分子の同一性はさらに、Ｃ５６によって 沈殿した１６５ｋＤａ鎖から、限定トリプシン分解後にＣＲ３のα鎖と同じペプ チドマツピングの結果が得られたことにより証明された。さらに、完全なＭｌ／ ７０と同様に、５ｃ６　ＩｇＧもそのＦ　（ａ　ｂ’　）　２７ラグメントもＴ ＰＭへのＥＡｉＣ３ｂのロゼツト形成を阻害しく　Ｆ　ａｂは阻害しなイ）、一 方、ＥＡＣ１４２またはＥ　Ｉ　ｇＧ　（ＦＣＲ）のロゼツト形成阻害は認めら れなかった。ＥＡｉＣ３ｂロゼツト形成の最大阻害は５Ｃ６ＩｇＧの０．３５Ｍ ｇ／ｍｌで得られた。

５Ｃ６エピトープはＭ　１　／　７０エピトープと明らかに異なる ＢＰへのＴＰＭの付着を阻害する能力の、５Ｃ６とＭ１／７０の間での相違から 、本発明者らはこの２種のａｂがＣＲ３分子上の異なるエピトープを同定する可 能性を検討することとした。したがって、これらのａｂの、蛋白分解消化Ｔ　Ｐ 　Ｍ細胞表面に対する結合の感受性を比較した。細胞表面のプロナーゼ消化（０ ，５ｍｇ／ｍｌ、３０分、３０℃）は大部分のＭｌ／７０結合部位を破壊し、Ｍ φ特異的Ｆ４／８０エピトープを消失させたが、５０６部位は蛋白分解により強 い抵抗性を示した（第■表）。

５Ｃ６抗原は、Ｍｌ／７０の場合と同様、ＣＲ３と共通のβ鎖を有するＬＦＡ− １群に豊富なリンパ球上にはなく、骨髄性単球細胞に限定されることから、多分 α鎖エピトープであると考えられる。鎖を溶液中ｐＨ１１で解離させると５Ｃ６ はａｇを沈降させなくなったことから、５Ｃ６−エピトープはα鎖とともに共通 のβ鎖を要求するものと思われる。プロナーゼ消化がＴ　Ｐ　ＭのＢＰへの付着 を消失させたが、５ＣＨの結合は大部分無傷であったことから（第１表参照）、 ５Ｃ６−エピトープはまた、ＣＲ３の付着性ドメインからも分離された。

させる能力について、特定の免疫グロブリンフラグメントを調べた。完全な５Ｃ ６ＩｇＧは、非処理細胞に比較して９２％ＴＰＭの付着を阻害した（第■表）。

５Ｃ６のＦ（ａｂ’）２フラグメントは、間接結合検定において完全なＩｇＧに 匹敵する結合を示したが、付着の阻害は約５０％であった。Ｆａｂフラグメント もよく結合し、０．１μｇ／ｍｌ蛋白質で５０％飽和を示したが、ＴＰＭの付着 は阻害しなかった。興味あることに、精製５Ｃ６１ｇＧを重任結合が有意になる ０、０５ｍｇ／ｍｌの濃度で用いた実験では、ＩｇＧの機能的活性は前地帯様現 象に低下した。二価結合が必須条件であるが、単独では付着の阻害には不十分な ことが明らかであった、完全な５Ｃ６ＩｇＧのみが付着を逆転できるが、これら の条件下での脱着は部分的であった。

骨髄性単球細胞のＩｎ　ｖｌｖｏにおける炎症部位への動員に対するｍＡｂの作 用 本発明者らは次に、骨髄性単球細胞の腹腔への動員におけるＣＲ３の役割の可能 性について調べた。マウスに精製５Ｃ６ＩｇＧを静脈注射したのち４時間後に、 滅菌チオグリコ−酸ブロスを腹腔内にチャレンジした。この一連の実験では、計 ２２匹の５Ｃ６１ｇＧ注射マウスと２０匹の対照マウスについて検討した◎第■ 表 ５Ｃ６１ｇＧの注射で腹腔浸出液への骨髄性単球細胞の動員は阻害された。

前処置　Ａ　Ｂ　ＣＤ ＰＢＳ　ｉｖまたは処置なし　３６±４　、５４Ｐ　４０Ｍ　６Ｌ　１Ｂ±２　 ８０Ｐ　１２Ｍ　１１＋−。

０．５　ｍｇ　５０６　ＩｇＧ　ｉｖ　９．０±２　３５Ｐ　５１Ｍ　１４　１ ７±２　７７Ｐ　１３Ｍ　ＩＯＬ０．５ｍｇ５ｅ８Ｆ（ａｂ’）　ｉｖ　２６　 ７ＬＰ２９Ｍ　１５　７２Ｐ１３Ｍ１５ＬＯ，５ｍｇ　ＹＴＡ　１ｇＧｉｖ　２ ２　６５Ｐ　３３Ｍ　２Ｌ　１４　７５Ｐ　ＩＯＭ　１５ＬＢ、　４日目腹腔浸 出液と血中白血球に対する５Ｃ６１ｇＧ処置の影響ＰＢＳ　Ｉｖ　２７土４　Ｐ ２５　ＭＢＢ　１．９　９．１　５５Ｐ　１２８３３Ｌ０．５　ｍｇ　５Ｃ８Ｉ ｇＧ　９．４±２　Ｐ８　Ｍ２Ｓ　Ｌ５４　８．８　５２Ｐ　ＩＯＭ　３８Ｌ対 照 チオグリコール酸ブロスに曝露されず、５Ｃ６ＩｇＧ前処置を実施または実施し なかった動物では細胞Ｓ 数５〜６Ｘ１０　．３５％Ｍ１６５％してあった。血球数および骨髄細胞数も対 照と差がなかった。

全く処置しなかったかＰＢＳのみを与えた対照動物では、チオグリコール酸注射 １８時間後の腹腔への細胞の動員は阻害されなかった。細胞産生は非処置対照に 対して３〜４倍に増大し、ＰＭＮおよびＭφが優占的であった。４日目までに、 動員腹腔細胞産生は２５まで低下し、これはＭφの割合が多（ＰＭＮは少なかっ た。ＣＤ４抗原に対するＭａｂに合致するアイソタイプ、ＹＴＡｏ、５ｍｇを静 脈内に注射した２匹のマウスでは、同じ実験でＰＢＳを注射された動物からの回 収細胞数２Ｘ１０６に対して、１８時間目に２２Ｘ１０６個の腹腔細胞が回収さ れ、動員のわずかな低下を示した。著しく対照的に、５Ｃ６ＩｇＧ注射動物での 腹腔動員は１８時間には８４±３％に低下し、一方ｍＡｂを投与されたがチオグ リコール酸ブロスを投与されなかった動物では影響は認められなかった。５０６ 　１ｇＧ処置動物では、動員の阻害は少なくとも４日間持続した。分画数からは 、ａｂ処置マウスでは１８時間目に８．１　ｘ　１０６ＰＭＮが回収されたのに 対し対照では２．０Ｘ１０　．４日目のＭφは３．５×１０６に対し対照ではＩ ＪＸＩＯ７であった。

５Ｃ６完全１ｇＧの骨髄性単球細胞の動員阻害能はｉｎ　ｖｉｔｒｏでのその付 着阻害と相関したが、ｉｎ　ｖｉｔｒｏで部分的な付着阻害しか示さないＦ　（ ａ　ｂ’　）　２フラグメントは１ｎ　ｖｉｖｏでの動員を阻害しなかった。５ Ｃ６１ｇＧによる動員阻害は用量依存性で、腹腔動員を１８時間目に８０％以上 阻害できるＩｇＧの最小用量は０．５ｍｇ　ＫｇＧＩｖで、０．１．０．２およ び０　、３５　ｍｇでの動員阻害はそれぞれ４０％、５１％および６８％であっ た（１実験、各データにつきマウス２匹）。

ｍＡｂをｉｖ処装した後に回収された腹腔細胞はｉｎ　ｖｉｔｒｏでブロスＢＰ およびＴＣＰによく付着し、これは５Ｃ６への曝露が飽和に達していなかったこ とを示唆する。５Ｃ６ｍＡｂを直接ｉｐ注射した実験では、収穫したときＢＰに 付着するかＴＣＰ上に拡散する能力を１ｎ　ＶｉｔｒＯでｍＡｂ処置したＭφの ように喪失していたすべての腹腔Ｍφへのａｂの結合が生じた。

対照およびｍＡｂ処置マウスの血液、骨髄肝臓および膵臓を検査して、その作用 部位を同定した。大腿骨髄細胞の数および分画には対照および５Ｃ６処置マウス 間で差はなかった。骨髄プラグをバラホルムアルデヒドで軽く固定し、包埋し、 凍結した切片を免疫ペルオキシダーゼ法で染色してＩｎ　ＶＩＶＯで結合したＡ ｂを検出した。５Ｃ６処置マウスからの骨髄では大部分の成熟骨髄性単球細胞に 濃厚なｍ識が認められた。芽細胞、リンパ球および非活性骨髄Ｎ１φは期待され たように標識されていなかった。細胞死の徴候はなかった。第ｍ表のＣおよびＤ 欄は対照および実験動物での血中白血球の分析結果である。

チオグリコール酸ブロスは１８時間目にＰＭＮ白血球増多を誘発し、これはａｂ 処装および対照マウスで同様であった。５Ｃ６１ｇＧ前処置を受けまたは受けず 、チオグリコール酸に曝露されなかったマウスでは、細胞数７〜１０Ｂ／ｍｌ、 ＰＭＮ６０〜７０％であった。これらのデータは、骨髄性単球細胞の骨髄から血 中への移行は傷害されていないことを示した。さらに、対照および５Ｃ６１ｇＧ 処置マウスのいずれの血中白血球にも凝集は認めなかった。対照動物からの血中 ＰＭＮは１ｎｖｉｔｒｏでＢＰおよびＴＣＰによく付着したが、５Ｃ６−ＩｇＧ −処置マウスからの血中白血球はいずれの基板にも付着しなかった。肝臓および 膵臓切片の組織学的分析では、白血球凝集、細胞死または貧食による除去の徴候 は認められなかった。肝臓ジヌソイドおよび膵臓赤髄の検査にはとくに注意を払 ったが、対照動物とｍＡｂ処置動物との間に差を認めなかった。これらの観察は 、過度のＰＭＮ辺緑化または貧食クリアランスが腹腔への骨髄性単球細胞の動員 低下によるとは考えて難いことを示した。観察されたａｂによる動員の阻害は、 循環細胞の内皮への付着の阻害および／または辺縁化細胞の組織空間への指向性 移送の欠如によるものと考えられた。したがって、本発明者らは、５Ｃ６処置マ ウスおよび対照マウスからの骨髄白血球の、ｆＭＬＰに反応して走化性刺激を受 ける能力を、アガロース下の検定によって調べた（６匹の動物について３回の実 験）。５Ｃ６−１ｇＧ処置マウスと対照マウスからの骨髄Ｐ　Ｍ　Ｎによる移動 距離には差はなく　（データは示していない）　、Ｉｎ　ｖｌｖｏでのｍＡｂ処 置が、白血球の特定の走化性刺激に対する反応能力を損うことはなかったことを 示している。

し 本例は、感作マウスに特異抗原（ａ　ｇ）チャンジを行なうことによって、ある いは、未処理の同系マウスに細胞免疫移入することによって誘導されるＴ−セル 依存性炎症が、本発明のＣＲ３特異的モノクローナル抗体（５Ｃ６）によって抑 制される程度を調べたものである。

８週分のＣ５７／ＢＬ６雌性マウスを、Ｓｉｒ　ＷｉＮｉａｍＤｕｎｎ　５ｅｈ ｏｏｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ）あるいはツクスツール研究 所（Ｐａｒｉｓ）の特異病原フリーのユニットから入手した。

マウスの免疫及び処置 Ａｌ５ｅｖｅｒｓ溶液ＣＧＩＢＣＯ，Ｐａ１ｓ！ｅｙ、　５ｃｏｔｌａｎｄ）中 のヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）を、ダルベツコＡのリン酸緩衝化生理食塩水（Ｐ　 Ｂ　Ｓ）で３回洗浄し、殺菌した通常の食塩水に再懸濁した。１０５ＳＲＢＣを 尾静脈中へ１．ｖ、投与した。３ｘ１０　個の生きたＢＣＧ生物（バスツ・−ル 研究所）（１４）を両側の後足社に皮下注射してマウスを免疫化した。

５ＲＢＣに対するＤＴＨのアッセイ 免疫４日後に、１０　または１０８ＳＲＢＣ（５０ｇｇ）を右側の後足筐に皮下 注射して抗原チャレンジに付すことによってマウスのＤＴＨについてアッセイし た。

一定時間後に、ダイヤルゲージキャリパ−で足踏の腫脹を測定し、二の値からチ ャレンジに付さなかった尾鉱の値を差し引いた。次いで、足踏を取り、ホルモル 生理食塩水中に固定化した。次いでワックス包理足蹟の切片を切り出し、ヘマト キシリン及びエオシンで染色した。同系マウスでのＤＴＨ反応の局所細胞免疫移 入を（１５）に記載された方法と同様にして実施した。簡単に言えば、免疫４日 後に５０１０のヘパリンをマウスに投与し、その１５分後にヘパリン化血液を採 取し、希釈して、５ＲＢＣ感作Ｔ−セルの源として用いた。次いでこれを５ＲＢ Ｃあるいは無関係のａｇと混合し、未処理の同系マウスの片方の後足跳に注射し 、１４−１８時間後に足ヒの厚さを調べた。上記のようにして足だについて組織 学的調査を行なった。

ツベルクリンに対する細胞免疫移入炎症応答のアッセイ足蹟をＢＣＧで免疫して ４−６日後に、ドレイニングリンパ節を除去し、それの細片を得、シングルサス ペンションをツベルクリン反応性Ｔリンパ球の源として用いた。！、５Ｘ１０７ 細胞をツベルクリン５０μｇと混合し、その１　ｍｌを未処理の同系マウスの腹 腔に注射した（１６）。４８時間後に腹膜細胞を採取してカウントし、そのサイ トスピン調製物につい−て、採取した異なる細胞の正確な評価が可能である間接 イムノパーオキシダーゼ技術（１７）により、免疫細胞化学的な調査を行なった 。

具体的には、Ｆ　４　／　８０　ａ　ｇ　（１８）についてのサイトスピン調製 物をムリン精製Ｆ　４　／　８０　ａｇに対するポリクローナルラビット抗血清 で染色して、マクロファージ（Ｍφ）の比率を調べた。これによって、５Ｃ６ラ ツトｍＡｂでラベル化した時でさえもＮ１φの特異的染色が可能である。

ＤＴ）ＩのｍＡｂ５Ｃ６発現の効果 ムリンをＣＲ３に対する５Ｃ６、即ちラット１　ｇＧ２ｂｍＡｂを例１と同様に して調整し精製した。ＩｇＧ１嘘をａｇチャレンジと同時にあるいは６時間後に １．ｖ、投与し、その効果をコントロールと比較した。コントロールでは、バッ ファー単独、ムリン骨髄単球細胞に対するコントロールラットＩ　ｇＧ２ａｍＡ ｂ７／４　（１９）、あるいはｉｎ　ｖｌｖｏで非活性の５Ｃ６のＦ　（ａ　ｂ ’　）　２７ラグメントを投与した。感作Ｔセル及びａｇで局所注射することに よってＤＴＨを養子移入した実験では、５Ｃ６またはコントロール調製物を感作 と同時にドナーマウスに１．ｖ、注射し、ａｇ反反応性上セル進化に対する効果 ヲ調べた。ローカルトランスファーと同時にｍＡｂを１、ｖ、注射して炎症細胞 の全身への移動に影響を及ぼした。

あるいは、トランスファー血液細胞をｍＡｂとともにプレインキユベートシ、次 いで、局所注射する前に遠心により洗浄した。

シンプルｉ、ｖ、注射後の・ｍ　Ａ　ｂ　＠、永１続性２りの方法によって循環 ５Ｃ・６１ｇ・Ｇ・の妥当性−を・評価し大。最初・に、１ｇ＋ｇのｉ、ｖ、単 回注射後の１１時間から４日後に、一連の血液サンプルを採取した。次いで、５ ％胎児牛血清を含むｌ５ｃｏｖｅ倍地ＣＰＩｏｖ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ。

’Ｐａ１ｓｌｅｙ、　５ｅｏｔｌａｎｄ）で希釈し、４日後にチオグリコレート 除去Ｍφを希釈血清中でインキユベートシ、その後、例１と同様にしてバクテリ アプラスチックに対する接着性を測定した。注射４日後、サンプル血清の１＝１ ０希釈は８５％以上でプラスチックへの接着を阻害した。Ｆ！ＴＣ−５０６の１ ．ｖ、単回注射後、１．４，２４．４８及び７２時間後に、ｍＡｂの血液白血球 、腹膜細胞および骨髄細胞への結合程度を、Ｂｅｃｔｏｒ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ 　Ｆ　Ａ　Ｃ６■装置を用いた蛍光分析により調べた。骨髄卓球細胞への飽和結 合のみが、実験期間中継続した。

インタクトＩｇＧまたはＦ　（ａ　ｂ’　）　２の３０００ユニツトをマウスに １．ｖ、注射した。注射後、１０分、２時間、４時間、８時間、２４時時間−尾 静脈より血液５０μｇを採取した。この血液の一連の希釈液について、例１と同 様にして結合活性をアッセイした。間接ラジオイムノアッセイによりグルタルア ルデヒド固定チオグリコレート除去マクロファージへの付着性で結合性を規定し た。ヨード化第２抗体の固定化量の最大結合の５０％まで上昇させる抗を体の希 釈率の逆数を１　ｍｌ当りの結合数とした。、このアッセイでは、純粋５Ｃ６１ ｇｃの１　ｒｎｇ　／　ｍｌ中１には６３００結合ユニットが含有されていた。

結果 ５ＲＢＣでの活性免疫後のＤＴＨに対するｍＡｂ５Ｃ６の効果 低ドーズの５ＲＢＣで筋注免疫したマウスでの足ＩＩ！ＤＴＨが、骨髄単球細胞 のＴリンパ球仲介レクリしメントの良好なモデルであるという証拠がある（２１ −２２）。

このＤＴＨの主たる特徴は、活性免疫４日後に最大特異応答となり、ａｇチャレ ンジ２０時間後にピークに達する。５ＲＢＣ感作マウスのＴｂｙｌ”、ＣＤ’＋ リンパ球を含む細胞サスペンションをトランスファーするだけで、このＳＲＢ　 （特異的応答を未処理同系マウスに全身的にあるいは局所的にトランスファーす ることができる（２２）。移入する３０時間前に照射したマウスに感作Ｔリンパ 球を移入した時には、アトブチイブＤＴＨ応答は検出されなかった。骨髄及び血 液骨髄単球細胞プールが欠除したこのようなマウスでは、ＤＴＨ応答は、骨髄細 胞の１．ｖ、注射のみで復元された（２２）。そこで、この免疫学的特異炎症応 答でのＣＲ３仲介骨髄単球接着性の重要性について調べた。

である。活性感作コントロールマウスの足筬サイズ（バーＢ）ではｌ、２６±０ ．２８１＋ｍの有意な上昇が観察され、これに比べて、ａｇチャレンジ２０時時 間−未処理マウス（バーＡ）では、０．１（１±０．０５鰭の無視し得る上昇し か観察されなかった。足踏の厚さの上昇度は、注射ａｇＯ量に依存しており、高 投与量の５ＲＢＣ（１０８細胞／足諺、バーＢ）では、ａｇの１／１０の投与量 で観察される腫脹（０，５４±０．１８１１！１％バーＦ）の２．８倍を示した 。

ａｇチャレンジと同時に５Ｃ６ｍＡｂ１■を筋肉注射することにより、高投与量 （バーＣ）及び低投与量（バーＧ）でのａｇチャレンジ２０時時間−足並の腫脹 が完全に除かれた。ａｇチャレンジ後６時間まで５Ｃ６ｍ　Ａ　ｂ　ｊ、ｖ、注 射を遅らせても、依然として、２０時間後の足並の腫脹を有効に抑制した（バー Ｄ）。５Ｃ６ＩｇＧ効果の特異性は表■に示されており、ここでは、足蹟の腫脹 に対する５Ｃ６１Ｇの抑制効果をバッファー単独と比較した。５Ｃ６と同数で循 環骨髄性単球細胞に結合したｍ　Ａ　ｂ　７　／　４あるいは５Ｃ６のペプシン Ｆ（ａ　ｂ　’　）　２フラグメントはいずれも足筬の腫脹を抑制しなかった。

５Ｃ６１ｇＧ及びＦ　（ａ　ｂ　’　）　２の半減期はそれぞれ、７．５時間、 ２時間以下であった。

表■ ５ＲＢＣでの抗原チャレンジ２０峙間の足蹟の厚さの上昇ＰＢＳ　５ＲＢＣＯ， １）５土り、１０Ｓ　ＲＢ　ＣＳ　ＲＢ　Ｃ１，０５玉０．ＩＣｌ５ＲＢＣ５Ｒ ＢＣ５Ｃ６１ｇＧ　Ｏ，１０±０．０５Ｓ　ＲＢ　ＣＳ　ＲＢ　Ｃ５Ｃ［ｉ　Ｆ （ａｂ’）２０．９０±０．２０アツセイ法は材料及び方法で述べたのと同じで ある。

抗体（１ｍｇ）はａｇチャ１／ンジと同時に静注した。示した結果は、１群４匹 での平均±ＳＤである。

２０時間後での、５Ｃ６のＤＴＨの抑制能は定数の組織学的調査によって確認さ れた。未処理マウスでの注射５ＲＢＣに対する２０時間応答は、脈管外の組織ス ペース中でのインタクト５ＲＢＣを示した。これらの赤血球に対するホスト応答 は、浸透好中球あるいは単球では最少である。これに対して、５Ｃ６ｍＡｂなし で５ＲＢＣでチャレンジした活性感作マウスでは、明らかな炎症浸潤を２０時間 後に示し、それは単球として好中球で構成されていた。ａｇチャレンジと同時あ るいは６時間後１：５ｃ６　１ｇＧ１．ν、注射した活性免疫マウスでは、イン タクト５ＲＢＣは脈管外組織スペースへ分散し、骨髄性単球炎症浸潤はなかった 。

骨髄性単球細胞のＤＴＨへのＣＲ３−依存性およびＣＲ３−非依存性動員 第５図には、５Ｃ６の存在下または不存在下に能動免疫したマウスのａｇチャレ ンジ後に認められる経時的な足！！腫脹を例示する。対照の感作マウスは、ａｇ チャレンジ１２時間以内に足蓋厚の有意な増大を示し、た。ついでこの腫脹は２ ４時間でピークに達し、４８時間ではピークレベルの４２％に消退し、７２時間 でベースラインに復した。ａｇチャレンジの時点で５Ｃ６を注射したマウスでは 、２４時間に、感作対照における０、９０±０．１７ｍｍに比し、足筬サイズの 増大はＯ，ＯＳ±０．０７ｍであった。４８時間では５Ｃ６処置マウスの足筬サ イズの増大は０．３９±Ｄ。０７關で、これは非処置感作マウスにおける消退し 始めた増大０．３８±０．０５＋ｎと２はなかった。４８時間以降は、５Ｃ６処 置マウスと対照マウスの曲線はほぼ重なっていた。ａｇチャレンジ２０時時間− ５０６の２回目の注射を行ったが、５Ｃ６処置マウスに認められた４８時間目の 遅延した足筬サイズの増大にはみるべき変化はなかった。足筬に５ＲＢＣを注射 した未処置動物では、いずれの時点でも足蹟サイズの増大は示さなかった。

１　ｍｇの１ｇＧ１回投与後の５Ｃ６１ｇＧの循環レベルは血漿サンプルの系列 希釈によって分析した。ｍＡｂの抗付着力画は、例１に記載したように骨髄好中 球または誘発Ｍφのいずれかを用いｉｎ　ｖｌｔｒｏで検定１−た。機能的飽和 血中レベルは少なくとも７２時間維持された。５Ｃ６の１回厘、Ｖ、注射後、血 液、骨髄および腹腔への５０６の結合のＦＡＣ３分析では、血中骨髄性単球細胞 への飽和結合は注射後１時間以内に達成され、７２時間維持された。どの段階で も、白血球枯渇、細胞毒性または分画血球数の変化の徴候は認められなかった。

骨髄の標識は１時間では弱く、２４時間までに飽和に達し、ついで実験期間中安 定に維持された。したがって、循環５Ｃ６ＩｇＧの適当なレベルが、機能および 結合の両方の意味で実験中維持され、また４８時間の時点で５Ｃ６がＤＴＨを阻 害しなかったことはｍＡｂの不適当な濃度によるものではないと結論された。

経時的な５Ｃ６の影響は組織学的な検査でも同様に、容品に観察される。２０時 間では５Ｃ６による炎症性動員の阻害は完全であった。能動的に感作したマウス からの対照足跡を４８時間に検査したところ、顕症の炎症性骨髄性単球の浸潤を 示した。組織空間に認められる無傷の５ＲＢＣはきわめてわずかで、多くの高度 に貧食した細胞と赤血球屑が充満していた。これに対して、５Ｃ６注射マウスで の４８時間での炎症性浸潤はわずかで、この時点で認められる腫脹を十分説明す るものであった。

血管外組織空間での大部分のａｇは無傷のままであった。

能動免疫動物におけるチャレンジを受けた足跡への骨髄性単球細胞の動員は二相 性であると本発明者らは結論している。大部分の足１！腫脹と大半の炎症性細胞 動員を説明する初期のＣＲ３−依存性の相がある。第２の相は、４８時間で認め られた中等度の腫脹と細胞性浸潤を説明するＣＲ３−非依存性の相であり、この 時点では５Ｃ６処置および対照マウスの足跡の増大は識別できなくなったが、細 胞性浸湧とａｇの残存の両者における明らかな差は残っている。

ＣＲ３は骨髄性単球系統に限定され、休止または活性化リンパ球上には存在しな いが、５Ｃ６ｍＡｂの作用は骨髄性単球の動員の阻止に限定され、Ｔ−リンパ球 が活性化されＤＴＨに転換する能力を障害しないことを明らかにするのは重要で ある。機能性感作Ｔ−細胞の増殖に対する５Ｃ６の作用を評価するため、マウス に５Ｃ６を１．ｖ、注射し、ついで５ＲＢＣで免疫した。４日後に感作Ｔ−細胞 を収穫し、遠心分離により洗浄し、５ＲＢＣと混合して未処置の同系マウスの足 跡に注射した。第７表には、ａｇおよび血中白血球の受動移入後に認められる足 跡腫脹が、全身性５Ｃ６の存在下または不存在下に５ＲＢＣで免疫したマウスか ら回収されたドナー白血球を、用いた場合と類似することを示している。

第７表 ｍＡｂ５Ｃ６はＴ−細胞依存性骨髄性単球の動員を阻害するが、ａｇ−依存性Ｔ −細胞初回抗原刺激または活ＰＢＳ　血中白血球　） 〃５ＲＢＣ）　０．１０±０．０５ 〃　血中白血球＋５ＲＢＣ） ＳＲＢＣ血中白血球　）　０．１０±０．０５〃　５ＲＢＣ’） 〃　血中白血球＋５ＲＢＣ０，５２±０．０５が　血中白血球＋５ＲＢＣ０，１ ０±０．０８受容者をＤＯ６ＩｇＧ １、■、処装 〃　血中白血球＋５ＲＢＣ０，５８±０．０９ＳＲＢＣ＋５Ｃ［ｉ　ＩｇＧ　血 中白血球　＞　Ｏ，Ｏａ±０．０６〃　〃　５ＲＢＣ） 〃　〃　血中白血球＋５ＲＢＧ　Ｏ，６５±０．１２材料および方法の項に記載 したようにして実施。

結果は１群４匹のマウスの平均±ＳＤで示す。

それぞれ２回の別の実験でも同様な結果が得られた。

本発明者らは受容者マウスへの５Ｃ６の注射の、５ＲＢＣ反応性Ｔ−細胞および ５ＲＢＣの受動局所移入後の過敏症に対する作用について検討した。局所移入は ＤＴＨの急性の開始を招き、ａｇチャレンジ１５時間後にピークに達した。

第■表には、未処置同系受容者に対する５ＲＢＣ混合感作血中白血球を局所移入 すると対照マウスにおいて１５時間の時点で足跡サイズの０．５２土０．０５＋ ｎの増大を招くこと、一方、白血球またはａｇ単独では何らの応答も誘発しない ことを示している。感作細胞とａｇの局所移入の時点でマウスに５Ｃ６を１．ｖ 、注射すると、足跡サイズの増大は有意に低下し、１５時間の時点で０．１０± ０．０８ｍｍであった。この結果は組織学的観察によって確認された。

５Ｃ６の効果は、単一解剖部位でのａｇ単独への炎症細胞のＴセル依存性レクリ ートメントの抑制に限定されない。そこで、ＢＣＧ感作Ｔリンパ球及びツベルク リンを同時に注射した後の、単球の腹腔へのレクリートメントを調べた。このシ ステムは、腹膜細胞のサンプリングが可能であり、回収した炎症細胞の数の正確 な評ばか可能である。単球のＣＲ３依存性レクリートメントを際立たせるために 、２日後の細胞応答を調べた。

第６図には、未処理同系マウスの腹腔への感作リンパ球とツベルクリンのトラン スファー後での炎症レクリートメントに対する５Ｃ６の効果が示されている。細 胞あるいはａｇを注射しない未処理マウス、あるいは細胞又はａｇのみを注射し た未処理マウスでは、４．８５±１．６８Ｘ１０８腹朕白血球が得られ、その４ ５％（２，Ｉ　Ｘ　１０６）はＭφであり、Ｆ４／８０８ｇの発現を免疫細胞化 学的に調べた。２％は好中球であり、５３％はリンパ球である。１．５　Ｘｌ０ ７ＢＣＧ免疫リンパ節細胞及び５０ｇｇツベルクリンを移入して４８時間後、腹 膜細胞の数は、９．１２±２．２９Ｘ　１０６１：上、ｆｒ、　Ｌ　タ。！ｃ　 ノロ　６９６　（１３，１０ｘ１０６）はＭφ、８％は好中球、２６％はリンパ 球であった。これに対して、感作細胞及びツベルクリンをトランスファーすると 同時に５Ｃ６を１．ｖ、注射したマウスでは、４８時間後に４．２８±２．２２ Ｘ　１０６の腹膜白血球しか得られず、その４７％（２，０１Ｘ　１６６＞はＭ φ、３％は好中球、５０％はリンパ球であった。ツベルクリン単独を注射した場 合には、回収した細胞中では何んらの量的あるいは定性的変化はなかった。ＢＣ Ｇ感作Ｔセルとツベルクリンの局所注射に対する細胞応答は、主として、単球的 であり、最初の集団を考慮に入れれば、５Ｃ６ｍ　Ａ　ｂ　ｉ、ｖ、により完全 に抑制できる。

引　用　文　献 １、　Ｌｅｅ、　Ｓ−’Ｈ，，Ｐ、Ｒ，Ｃｒｏｃｋｅｒ　ａｎｄ　Ｓ、　Ｇｏｒ ｄｏｎ、　１９８６゜Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　Ｐｌａｓｍａ　ｍｅｍｂｒａｎｅ 　ａｎｄ　５ｅｃｒｅｔｏｒｙｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｉｎ　１ｕｒｉｎｅ　ｍ ａｌａｒｉａ、　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｒＰｌａｍｏｄｉｕｍ　Ｙｏｅｌｉｉ　１ ｎｆｅｃｔｌｏｎ　ｏｎ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ　１ｎｔｈｅ　１ｉｖｅｒ、 　５ｐｌｅｅｎ　ａｎｄ　ｂｉｏｏｄ、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｗｅｄ。

ｌＨ：５４゜ ２、　Ｇａ１ｆｒｅ、　ｃ、、　ｃ、　Ｍｌｌｓｔｅｉｎ　ａｎｄ　Ｂ、　Ｗｒ ｉｇｈｔ。１９７ｇ。

Ｒａｔ　Ｘ　ｒａｔ　ｈｙｂｒｉｄ　ｍｙｅｌｏｍａｓ　ａｎｄ　ａ　ｍｏｎｏ ｅｌｏｎａｌａｎｔｉ−Ｐｄ　ｐｏｒｌｉｏｎ　ｏｒｍｏｕｓｅ　ＩｇＧ、　Ｎ ａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）　１７７：１８１゜ ３、　Ｖｙｃｋｏｆ’ｒ、　Ｍ、、　Ｄ、　Ｒｏｄｂａｒｄ　ａｎｄ　Ａ、　Ｃ ｈｒａｉｂａｃｈ。

１９７７、Ｐｏｌｙａｃｒｙｌ−ａｍ！ｃｌｅ　ｇｅｔ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏ ｒｅｓｉｓｉｎ　ＳＤＳ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｂｕｔｔｅｒｓ　ｕｓｉｎｇ 　ｍｕｌｔｌｐｈａｓｌｃｂｕｒｌ’ｅｒ　ｓｙｓｔｅｍｓ、　Ａｎａｌ、　Ｂ ｉｏｃｈｅｍ、　７８：４５９．４、　Ｒｏｕｓｓｅａｕｘ、　Ｊ、、　Ｒ，Ｒ ｏｕｓｓｅａｕｘ−Ｐｒｅｖｏｓｔ　ａｎｄ　Ｔｌ。

Ｂａｚｌｎ、　１９８３．０ｐｔＩｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔ ｈｅｐｒｅｐａｒａｔｌｏｎ　ｏｆ　Ｆａｂ　ａｎｄ　Ｆ　（ａｂ’＞２　ｆｒ ａｇｍｅｎｔｓｆｒｏｍ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ＩｇＧ　ｏｒ　ｄｉＮ’ｅｒ ｅｎｔ　ｒａｔ　ＩｇＧｓｕｂｃｌａｓｓｅｓ、　Ｊ、　ｌｎｍｕｎｏｌ、　Ｍ ｅｔｈ、　１３４：１４１゜５、　Ｍａｓｏｎ、　Ｄ、Ｗ、、　１９７Ｇ、　Ｔ ｈｅ　ｅｌａｓｓ　ｏｆ　ｓｕｒｆａｅｅｉｉｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ　ｏｎ 　ｃｅｌｌｓ　ｃａｒｒｙｉｎｇ　Ｉｇｃ　ｍｅｍｏｒｙｉｎ　ｒａｔ　ｔｈｏ ｒａｃｉｃ　ｄｕｃｔ　ｌｙｍｐｈ、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ。

１４３：１１２２゜ ８、　Ｍｉｃｈｌ、　Ｊ、、　Ｍ、Ｍ、　Ｐｉｅｃｚｏｎｋａ、　Ｊ、Ｃ，Ｕｎ ｋｅｌｅｓｓ　ａｎｄＳ、Ｃ，５ｌｌｖｅｒｓｔｅｉｎ、１９８０．　Ｅｆｆｅ ｃｔｓ　ｏｒｉｍｍｏｂｉｌ’１ｓｅｄ　１ｍｍｕｎｅ　ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ　 ｏｎ　Ｐｃ−ａｎｄｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｆｕｎｃｔｉｏ ｎ　ｉｎ　ｒｅｓｌｄｅｎｔ　ａｎｄｔｈｌｏ−ｇｌｙｃｏｌｌａｔｅ−ｅｌｉ ｃｉｔｅｄ　ｍｏｕｓｅ　ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ、　Ｊ 、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、１５０：６０７゜７、　Ｚｉｇｍｏｎｄ、Ｓ、Ｈ，，１９８ ０，Ｇｒａｄｉｅｎｔｓ　ｏｆｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｉｎ 　ｖａｒｉｏｕｓ　ａｓｓａｙ　ｓｙｓｔｅｍｓＩｎ　Ｍｏｎｏｎｕｅｌｅａｒ 　Ｐｈａｇｏｃｙｔｅｓ、ｅｄ、Ｒ，ｖａｎ　Ｆｕｒｔｈ。

Ｍａｒｔｉｎｕｓ　Ｎ１ｊｈｏｆｆ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｔｈｅ　Ｈａｇｕ ｅ、　ｐｐ４８１−４７３゜ ８、　Ｈｕｇｅ、Ｄ、Ａ、、Ｄ、Ｈａｌｐｉｎ、Ｈ，Ｃｈａｒｌｔｏｎ　ａｎｄ 　Ｓ。

Ｃａｒｄｏｎ、１９８４．　Ｔｈｅ　！ｉｍｕｎｏｈｌｓｔｏｃｈｅｓｌｃａｌ ｌｏｃａｌｌｓａｔｌｏｎ　ｏｒ　Ｆ４／８０．　Ｐｒｏｅ、　Ｎａ１ｌ　Ａｅ ａｄ。

Ｓｃｉ、、Ｕ、Ｓ、Ａ、８１：４）７４．９、　Ｍｌｅｋｌｅｓ、ＬＪ、、Ｒ， Ｂ、Ｓｉｎ　ａｎｄ　Ｅ、Ｓ１ｍ、１９１！４゜＾ｎａｌｙｓｆｓ　ｏｒ　Ｃａ 　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｃｔｉｖｌｔｙ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　Ｂ。

ｌｙ＊ｐｈｏｅｙｔｅｓ　ａｎｄ　１ｓｏｌａｔｌｏｎ　ｏｆ　ｃｏＢ＋ｅｓｅ ｎｔｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｔｙｐｅ　２゜　Ｂｉｏｃｈｅｓ、Ｊ、２２４ニア５゜ ｌＯｏ　Ｅｚｅｋｏｖｉｔｚ、Ｒ，Ａ、Ｂ、、Ｒ，Ｂ、Ｓｉｎ、Ｇ、Ｇ、Ｍａｃ Ｐｈｅｒｓｏｎａｎｄ　Ｓ、Ｇｏｒｄｏｎ、１９８５．　Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏ ｎ　ｏｒ　ｈｕｍａｎｍｏｎｏｃｙｔｅｓ、ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ　ａｎｄ　 ｐｏｌｙ−ｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒ　Ｉｅｕｋｏｃｙｔｅｓ　ｖｌｔｈ　ｚ ｙｍｏｓａｎｉｎ　ｖｌｔｒｏ、　Ｊ、ＣｌＩｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、７Ｂ：２３６ ８゜１１、Ｌｏｖｒｙ、　０．Ｈ，、Ｎ、Ｊ、　Ｒｏｓｅｂｒｏｕｇｈ、　Ａ、 Ｌ、　Ｐａｒｒ　ａｎｄＲ，Ｊ、Ｒａｎｄａｌｌ、１９５１．　Ｐｒｏｔｅｉｎ 　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｆｏｌｉｎ−ｐｈｅｎｏｌ　ｒ ｅａｇｅｎｔ、　Ｊ、Ｂｊｏｌ、Ｃｈｅｗ、１９３：２６５゜ １２、　Ｈｏ５ｉｅｒ、Ｄ、Ｅ、、１９８１．　５ｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｒ　 ｍｕｒｌｎｅｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ　ｂｙ　ａｄｈｅｒｅｎｃｅ　ｔｏ　５ｏ ｌｉｄ　５ｕｂｓｔｒａｔｅｓ。

Ｉｎ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｓｔｕｄｙｉｎｇ　ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｐ ｈａｇｏｃｙｔｅｓ、ｅｄ、Ｄ、０．　Ａｄａｍｓ、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒ ｅｓｓ。

Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、ｐｐ、１７ｇ−１８６゜１３、　Ｎｅｔ、Ｎ、Ｊ、、Ｃ，Ｌ ｏｗｒｅｙ、Ｃ，Ｄｅｃｋｅｒ、Ａ、Ｔｏｖａｒ。

Ｃ，Ｄａｍｓｋｙ、Ｃ，Ｂｕｅｋ　ａｎｄ　Ａ、Ｆ、Ｈｏｒｖｊｔｚ、１９ｇ２ ゜Ａ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｌｂｏｄｙ　ｄｅｔａｃｈｅｓ　ｅ＋ｃｂ ｒｙｏｎｉｃｓｋｅｌｅｔａｌ　ｍｕｓｃｌｅ　ｆｒｏｍ　ｅｘｔｒａｃｅ！Ｉ ｕｌａｒ　ｍａｔｒｉｃｅｓ、Ｊ、Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、９５：６５４゜１４、 　Ｇｈｅｏｒｇｈｉｕ、Ｍ、ａｎｄ　Ｌ、Ｃｈａｍｂｏｎ、　１９７６゜Ｐｒｅ ｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｒｅｓｈ　ＢＣＧ　５ｅａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｖａｃｃｉｎｅ　ａｔ　４．　−２５　ａｎｄ　−７０＠Ｃ、Ｃａｎｃｅｒ　１ ｓｓｕｎｏｌ。

ｌｍ５ｕｎｏｔｈｅｒ、１：１１゜ １５、　Ｍａｒｃｈａｌ、Ｇ、ａｎｄ　Ｇ、Ｍｉｌｏｎ、１９８４．　Ｎｕｇｅ ｒａｔｌｏｎｏｒ　ＤＴＨ−ｍｅｄｉａｔｉｎｇ　Ｔｌｙｓｐｈｏｅｙｔｅｓ　 ｉｎ　ｇｌｅｅ　ｕｎｄｅｒｏｐｔｉｍａｌ　ＮｔｒａＮｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉ ｏｎｓ、　＾ｎｎ、１ｎｓｔ。

Ｐａ５ｔ、１３５：３５Ｌ １Ｂ、　Ａｕｇｌｅｒ、Ｊ、、Ｆ、Ｌｅｐａｕｌｔ、Ｃ；、Ｏｒａｎｇｅ　ａｎ ｄ　Ｓ。

Ａｕｇｌｅｒ−Ｇｉｂｏｒｙ、１９７４．　ＩＪｎ　ｎｏｕｖｅａｕ　ＰＰＤｈ ａｕｔｅｍｅｎｔ、ｐｕｒｉｒｉｅ、＾ｎｎ、１ｎｓｔ、Ｐａ５ｔ、１２５ｃ： ＢＩ３゜ １７、　Ｃｒｏｃｋｅｒ、Ｐ、Ｒ，ａｎｄ　Ｓ、Ｇｏｒｄｏｎ、１９８５゜ｌ５ ｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｘｓａｔｉｏｎ　Ｏｒ　ｒｅｓｌ ｄｅｎｔＳｔｒＯｍａｌ　ＩａＣｒＯｐｈａｇｅＳ　ａｎｄ　Ｊ’１ａｅｌｌＯ ｐ０１ｅｔｉＣｃｌｕｓｔｅｒｓ　ｆｒｏ＠　ｍｏｕｓｅ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒ ｏｗ、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍａｄ。

１Ｂ２：９９３゜ １ｇ、　Ａｕ５ｔｙｎ、Ｊ、Ｍ、ａｎｄ　Ｓ、Ｇｏｒｄｏｎ、１９８１．　Ｆ４ ／８０　ａｌｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｄｉｒｅｅｔｅｄ　ｓｐ ｅｃｉｆｉｃａｌｌｙａｇａｉｎｓｔ　ｔｈｅ　ｍｏｕｓｅ　ｍａｃｒｏｐｈａ ｇｅ、　Ｅｕｒ、Ｊ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、１：８０５゜ １９、Ｈｌｒｓｃｈ、　Ｓ、　ａｎｄ　Ｓ、　Ｇｏｒｄｏｎ、　１９８Ｂ、Ｐｏ ｌｙｍｏｒｐｈｌｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ’　ａ　ｎｅｕｔｒｏｐ旧Ｉ　 ｄｉｆＴｅｒｅｎｔｉａｔｌｏｎａｎＮｇｅｎ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｂｙ　５ｏ ｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　７／４゜Ｉｓａｕｎｏｇｅｎｅｔｌｓｃ 、Ｎｔ：２２９゜２０、　Ｍｉｌｏｎ、Ｇ、、Ｇ、Ｍａｒｃｈａｌ、Ｓｅｍａｎ 、Ｐ、Ｔｒｕｒｒａ−Ｂａｃｈｉ　ａｎｄ　Ｖ、Ｚｉｌｂｅｒｆａｒｂ、１９８ ３．　Ｉｓ　ｔｈｅｄｅｌａｙｅｄ−ｔｙｐｅ　ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｌｖｉ ｔｙ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ａｆｔｅｒａ　ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｏｒ　ａｎｔｉｇ ｅｎ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｂｙ　ｈｅｌｐｅｒ　Ｔｃｅｌｌｓ７　Ｊ、Ｉａｍｕ ｎｏｌ、１３０：１１０３’。

２１、　Ｍａｒｃｈａｌ、Ｇ、、Ｇ、Ｍｌｌｏｎ、Ｂ、Ｈｕｒｔｒｅｌ　ａｎｄ 　Ｐ、Ｈ。

Ｌａｇｒａｎｇｅ、１９７８．　Ｔｉｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｃ１ｒｃｕｌａ ｔｉｏｎｏｆ　ｃｅｌｌｓ　ｍｅｄｉａｔｉｎｇ　ＤＴＨｉｎ　ｎｏｒｇ＋ａｌ 　ａｎｄｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ−ｔｒｅａｔｅｄ　ａｌｃｅ　ｄｕ ｒｉｎｇｒｅｓｐｏｎｓｅ、ｔｏ　５ｈｅｅｐ　ｒｅｄ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｌ ｓ、　Ｉａｍｕｎｏｌ。

３５：９８１゜ ２２、　Ｍａｒｃｈａｌ、Ｇ、ａｎｄ　Ｇ、Ｍｌｌｏｎ、１９８Ｂ、Ａｓ５ａｙ 　ｆ’ｏｒｑｕａｎｔＨａＮｏｎ　ｏｒ　ｍａｔｕｒｅ　ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ　 ｉｎ　ｍｕｒｉｎｅｈａｅｌｏｌ）ＯｌｅｔｉＣｔｉｓｓｕｅｓ、　Ａｎｎ、１ ｎｓｔ、Ｐａ５ｔｅｕｒ１３９：８５゜ ＦＩＧ、１ イ寸着細０２用’ｔＡ告　ンζ ＦＩＧ、２ ５ＦＩＢＣ５ＲＢＣ！ｙＪＢｃ　５ＲＢＣ５ＲＢＣ（＋、）３ＲＢＣ［＋）　！ ５ＦＩＢＣ［ｉ）　÷ヤレンシ”　ｏａ　［Ｓ、Ｃ）ＳＣ５（ＬＶ）　７０ ＦＩＧ、５ ＦＩＧ。６ 手続補正書（自発） 平成２年　６　月／／日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）炎症刺激に対する骨髄性単球細胞の動員を阻害するために用いる抗−ＣＲ ３特異的抗体 （２）細菌用プラスチックヘの骨髄性単球細胞の付着を阻害できる請求項（１） 記載の抗体 （３）細菌用プラスチックヘの骨髄性単球細胞の付着の阻害能によって特徴づけ られる抗−ＣＲ３特異的抗体（４）骨髄性単球細胞の細菌用プラスチックヘの付 着を少なくとも８５％まで阻害する請求項（２）または（３）記載の抗体 （５）細菌用プラスチックからの骨髄性単球細胞の脱着を起こす請求項（１）〜 （５）に記載の抗体（６）細菌用プラスチックからチオグリコール酸誘発腹腔マ クロファージの少なくとも５０％を脱着させることができる請求項（５）記載の 抗体 （７）ＣＲ３のαサブユニットに特異性を有する請求項（１）〜（６）に記載の 抗体 （８）抗−ＣＲ３特異的抗体を産生する複数個の細胞系を調製し、その細胞系を 骨髄性単球細胞の細菌用プラスチックヘの付着を阻害する抗体についてスクリー ニングし、付着を阻害する抗体を産生する細胞系を選択することからなる請求項 （３）記載の抗体を産生する細胞系の製造方法 （９）請求項（８）記載の方法で作られた細胞系（１０）請求項（１）または（ ３）に記載の抗体を適当な賦形剤、希釈剤または担体と混合した治療用組成物（ １１）非経口投与用の請求項（１０）記載の治療用組成物（１２）請求項（１） または（３）に記載の抗体を適当な賦形剤、希釈剤または担体と混合する請求項 （１０）に記載の治療用組成物の製造方法 （１３）抗−ＣＲ３特異的抗体の、炎症刺激に対する骨髄性単球細胞を阻害する 医薬の製造のための使用（１４）抗−ＣＲ３特異的抗体の有効量をヒトまたは動 物対象に投与する、対象における炎症刺激に対する骨髄性単球細胞の動員を阻害 する治療方法 （１５）Ｔ−リンパ球によって仲介される遅延型過敏症において骨髄性単球細胞 の動員が関与する疾患の治療または予防のための請求項（１４）記載の方法（１ ６）慢性炎症、薬剤誘発過敏症反応、慢性関節リウマチ、免疫性脈管炎、糸球体 腎炎または炎症性腸疾患の治療または予防のための請求項（１５）記載の方法（ １７）炎症刺激に対する骨髄性単球細胞の動員の結果として生じる疾病または疾 病状態の治療または予防における抗−ＣＲ３特異的抗体の使用