JPH03505579A - ヒト免疫不全ウイルス（ｈｉｖ）のインビボにおける活性の阻害方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）による感受性細胞の感染を阻害する ための抗−マラリア剤の使用に関する。また、本発明は、Ｉ（ＩＶの増殖阻害方 法にも関する。

後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＢ）は、現在、化アメリカ、ヨーロッパおよび中 央アフリカにおいて重大な状頭にある。ＡＩＤＳの原因物質は、レト（ｌウィル スであると信じられている。最近の評価では、約１５０万人のアメリカ人がＡＩ ＤＳウィルスにさらされたであろうことが示唆されている。感染した個人は、激 しい免疫抑制を示し、これは変性の攻撃および致命的疾患にさえ続く。

ＬＡＶとして知られている第１のＡＩＤＳレトロウィルスの単離および特徴付け は、Ｆ、　Ｂａｒｒｅ−８１ｎｏｕｓｓｉらの論文＋１１１ｎＣＥ１．２２０　 ：８６Ｂ−８７１（１９８５ンに記述されている。このウィルスのある稲の抽出 物および該ウィルスに対する抗体を検出するためのそれの蛋白質のいくつかの使 用が、Ｄｒ、　Ｌｕｃ　ＭＯｎｔａｇｎｉｅｒらに対して発行された米国特許第 ４．７０８．８１８号に記述されている。

引き続き別々の研究者等によりＡＩＤＢレトロウィルスの数種の単離物が報告さ れ、核率離物が異なった命名によって文献中に引用されている。現在では、以前 にリンパ節症関連ウィルス（ＬＡＶ）　、免疫不全関連ウィルス（よりＡＶｉお よびよりＡＶ２）　、ヒトＴ−リンフオトロビツクウイルスタイプ■（ＨＴＬＶ 　−ＩＩＩ　）　、およびＡより８関連ウイルス（ＡＲＶ）と称されたものは、 すべて同じレトロウィルスの変異体であるものと認識されている。例えばＮａｔ ｕｒａｌ、　３１３　：　６５６−６６７　（１９８５）参照。

ウィルスの分類に関する国際委員会により権能を与えられた小委員会は、ＡＩＤ Ｂレトロウィルスを、ＨＩＶの省略形で知られているＩヒト免疫不全ウィルスｌ と公式に命名することを提案した。ＨＩＶの単離物に対して明確ではあるが制限 された関連性（例えば核酸配列の同一性が２０％以上であるが５０％未満である ）を有するヒトレトロウィルス単離物は、該グループの存在する構成員に対して 生物学的および構造的に強い興味をそそるような類似性がない限り、Ｈ工■と称 すべきではない。５Ｏ１８ｎ（１，２３２：　６９７　（１９８６）。

Ｈ工ｖ−２（以前はＩＪＡＶ−２）と称される他の病原性ヒトレトロウィルスが 、最近西アフリカのＡＩＤＳ　、９者から発明された。（ｊｌ、ａＶｅｌらの８ ｃｉθｎｃｅ、　２３３　：　３４３−３４６（１９８６）。■工ｖ−２感染は 、原型のＡＩＤＳ　１フィルスＨＩＶ−ｉにより起こるものと臨床的に区別でき ない免疫不全症候群を伴う。Ｈ工ｖ−２は、Ｈ工ｖ−１に関連あるが、異なるも のである。（）ｕｙａｄｇ２−らのＮａｔｕｒｅ、　５２６：６６２−６６９（ １９８７）。

ＨＩＶに遺伝的に関連し、生物学的に類似丁レトロウィルス類が、ヒトより下位 の霊長類から単離されている。これらのし）ｏウィルスは、サル免疫不全ウィル ス（ＳＸＶ）等の適当な宿主種の免疫不全ウィルスとして命名されている。ＳＩ Ｖは、ニューイングランド地区霊長類研究所（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｒｅｇ ｉｏｎａｌ　Ｐｒｉｍａｔｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ：ＮＦｉＲＰＲｏ ）において、捕獲されたリーサル短尾サル（Ｍａｃａｃａ　ｍｕｌａｔｔａ）か ら最初に単離された。このことは、アフリカミトリプルからの５ＴＬＶ　−ＩＩ Ｉと称される８工Ｖの単離に関する論文へとすぐに引き継がれた。

広汎な血清学的交差反応性が、ＩＩＩＩＶ−２とＳＩＶの間に存在する。

ＨＩＶの転移は、性的接触を通してしばしば起こるが、催眠剤を静脈内的に使用 する人々もまた、高い危険性をもつ群を示す。また多くの人々が、汚染した血液 または血液製品を投与された後に■工ＶＫ感染している。

マラリアが風土病である地域におけるＡＩＤＢの発生率の観点から、ＨＩＶの転 移における別の因子の重要性がより確かなものとなりつつある。ＡｘＤｓの原因 論的に考えられる一つの因子は、網内細胞系における不完全ＦＣ−受容体機能で ある。Ｂ、　Ｓ、　Ｂｅｎ６６ｒのＪ、１ｎｆｅｃｔ。

Ｄｉｓ、１５２：４０９−４１２（１９８５）。赤血球細胞上の不完全ＦＣ−受 容体機能および引き続く工ｇＧ被覆赤血球のクリアランスが、Ａ、ＩＤＳ患者に おいて示されている。更に、ＡＩＤＢウィルスに対するレトロウィルス抗体反応 性は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ　ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ　Ｋ対する抗体水準とかな り交差反応性があることが示されている。Ｒ，Ｊ、　ＢｉｇｇａｒらのＬａｎｃ ｅｔ、　１９８５年９月７日：５２０−５２３゜交差反応性については議論が残 るが（Ｒ，Ｊ、　ＢｉｇｇａｒらのＨｅｗ　Ｆ、ｎｇｌ、Ｊ、ｍｅｄ、、　３１ ５　：　５７−８（１９８＜５）、Ａ、　Ｐ２．　Ｇｒｅｅｎｂｕｒｇら（７） 　Ｌａｎｃｅｔ、　１９８６年８月２日：２４７−２４９）、この議論は、ＡＩ ＤＳウィルスに対する抗体の発生を伴つＡＩＤｓの伝染性物質のクリアランスと 二重の感染の可能性とを考慮していない。ＡＩＤＳおよびマラリア間の抗体の交 差反応性は、日和見感染におけるかなり特定的な抗マラリア剤の有効性により、 更に示される。ピリメタミン（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｍｉｎｅ）　−ス／ｌ／　７ アドキ７　ン（ｓｕｌｆａｄｏｘｉｎりの組合ぜは、ＡＩＤＳ　患者におけるニ ューモサイテスヵリニ感染の治療に有効であることが示されている。

Ｒ，Ｄ、　ＰｅａｒｓｏｎらのＡｎｎ４ｎｔ、Ｍｅｄ、、　１０６　：　７１４ −７１８　（１９８７）。

ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２等の多重的なヒト免疫不全ウィルスの存在は、複雑 な疫学的描像な示す。これらのレトロウィルスの１ん延をくい止めるために、Ｈ 工Ｖ感染に対して有効なワクチンまたは医薬組成物が開発されなければならない ことが一般に信じられている。ワクチンの開発については研究が進められている が、有効な薬剤は未だ見出されていない。従って、この分野においてインビボに てＨ工Ｖ活性な阻害する方法が必要とされている。

発明の要約 この発明は、この分野におけるこれらの必要性を満たすことを目的とする。より 特定的には、ヒト宿主に対し、保護効果、治療効果またはヒトにおけるマラリア の伝達防止を示し得る抗マラリア剤を投与することを含んでなる、インビボでの ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）の活性の阻害方法を提供する。該抗マラリア剤 は、 （ａ）　　アルカロイド類； （ｂ）９−アミノ−アクリジン類； （Ｃ）４〜アミノキノリン類； （ｄ）８−アミノキノリン類； （θ）　ビグアニド類； （ｆ）　　ジヒドロフオレートリダクターゼ阻害剤類；（ｇ）　　スルフォン類 ； （目　スルフォンアミド類； （１）　　メフロキン； （ｊ）　　ハロファントリン； （ｋ）　　ヒドロキシアニリノ−ベンズ−ナフチリジン類；および （（１）　セスキテルペンラクトン類；かもなる群から選択される。該抗マラリ ア剤は、ＨＩＶによる７９７２球の感染をインビボにおいて防止するか、もしく は少なくとも阻害するか、またはＨＩＶのインビボにおける複製を防止するか、 もしくは少なくとも阻害するために充分な量をもってヒトに投与される。

ＨＩＶのとらえどころのないことおよび多様性が、決定的な治療を困難にしてい た。ここに示されるものは、［Ｖ感染の拡散および獲得を防止でき、またこのよ うな感染の治療の補助となる薬剤および方法である。

好ましい実施　様の　細な　明 本発明の方法は、ＨＩＶに感染した、およびＨ工Ｖ感染に感受性であるいずれの ヒトの治療についても有用である。ＩＨ工Ｖ感染ｌとの表現は、０ｅｎｔｅｒａ 　ｏｆ　ＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌ　、　Ａｔ１ａｎｔａ、Ｇｅｏｒｇｉａ により発行された分類方式に含まれる全ての型を包含する。これらの感染は、急 性Ｈ工Ｖ感染、無症候性症状、存続性全身化リンパ節症、および全身性疾患、神 経性疾患、二次感染、二次癌等の他の疾患、およびＨ工Ｖ感染または免疫抑制に よる他の症状を含む。

本発明の方法は、感染したヒトにおけるＨＩＶ−１−ｊたはＨＩＶ−２の活性を 阻害するために特に有用である。この発明は、文献中にＬＡＶ−１、ＨＴＬＶ− ［、およびＬＡＶ−［として同定されているヒト単離物を参照して記述されてい るが、本発明は、同じまたは同等なレトロウィルスに１でおよぶものと理解され るであろう。これらのレトロウィルス°類は、ＡＩＤＢおよびＨ工Ｖ疾患の原因 物質と信じられている。

この開示の目的のために、ウィルスは、次の基準を実質的に満たす場合に、ＬＡ Ｖ／ＨＴＬＶ−Ｉｎと同じまたは同等であるものと考える： （ａ）　　ウィルスが、７９７２球、特にＴ−ヘルパー細胞（ＣＤ４”）に対し て同性である： （ｂ）　　ウィルスが、感染ＯＤ４＋細胞について細胞変性的である； （Ｃ）　　ウィルスが、ＲＮＡ−依存性ＤＮＡポリメラーゼ（逆転写酵素）をコ ードし、これがＭｇ　２”−依存性であり、かつその３’ＬＴＲからの逆転写の ためのプライマーとしてオリゴ（ｄＴ）１ｚ−ｘｓを使用し得る；（ｄ）　　ウ ィルスが、ＬＡＹ／ＨＴＬＶ−［［の疋５および１部匡領域によりコードされる 蛋白質と実質的に免疫的に交差反応性である；および （ｅ）ウィルスが、ＬＡＶ　ｔたはＨ’ｌ’Ｌｖ−ＩＩＩに対し、実質的なヌク レオチド相同性（約７５１００％）およびアミノ酸配列相同性（約７５−１００ ％）を共有する。

本発明の方法で使用される基本的な医薬的活性成分は、抗マラリア剤である。こ こで使用されるように、ｌ抗マラリア剤ｌなる用語は、ヒトにおいてマラリア感 染に対して保護的（予防的）効果、治癒的（治療的）効果を有するか、またはマ ラリアの伝染を防止する薬剤を含む。従って、抗マラリア剤は、マラリア感染が 起こる前、またはマラリア感染が明白になる前に感染もしくはその何らかの症状 が起こることを防止する目的で使用される薬剤も含む。１だ、抗マラリア剤は、 確立したマラリア感染に対して作用させるために治療的に用いられる薬剤も含む 。更には、抗マラリア剤は、ヒト宿主におけるマラリア寄生虫の生命循環を干渉 または妨害する薬剤を含め、マラリアベクターによるヒト感染を防止するために 有用な薬剤を含む。

本発明の方法を実施するために使用し得る抗マラリア剤は、キニンおよびキニジ ン等のアルカロイド類；メパクリン等の９−アミノ−アクリジン類；クロロキン およびアモジアキン等の４−アミノキノリン類；プリマキン、パマキン、および キノシト等の８−アミノキノリン類からなる群から選択されろ。プロガニル（り ａルガニド）等のビグアニド類もまた使用され得る。他の好ましい抗マラリア剤 の例は、ビリメトアミン等のジアミノピリミジン類、もしくはトリメトプリム等 の他のジヒドロフオレートレダクターゼ阻害剤；ソアミノゾフェニルスルフオン （ＤＤＳ　１−１．Ｈはダゾソン）およびジホルミルジフェニルスルフォン等の スルフォン類；ならびにスルファシアシン、スルファメトキシピラジン、スルフ ァモノメトキシン、スルファトキシンおよびスルファメトキサゾール等のスルフ ォンアミド類である。メフａキン；ハａファントリン；ビロナリジン等のヒト” ｃｚキシアニリノ〜ペンシーナフチリシン類；およびアルテミシニン等のセスキ テルペンラクトン類も１だ使用することができる。これらの抗マラリア剤および その調製方法は、この分野で知られている。

１種以上の抗マラリア剤の組合せは、ビリメトアミン−スルファトキシン以外に 、本発明の方法の実施において使用され得ろ。従って、例えばビリメトアミンと クロルキンとを組合せて使用できる。同様に、アモジアキンは、ダプソンと組合 せることができ、りｏ。

キンは、プリマグアニンもしくはタａルゾａグアニルと共に使用することができ 、プリメトアミンもしくは他の抗フオレート剤は、スルファトキシンと組合せる ことができ、およびビリメトアミンは、スルフアレンもしくはスルファシアシン もしくはスルファメトキシピラジンと共に使用することができる。

抗マラリア剤として使用されている抗生物質は、本発明の方法において単独で使 用された場合に有効性が見出されなかった。従って、ここで使用されるｌ抗マラ リア剤ｌの表現は、抗マラリア性抗生物質を本発明の方法の実施において単独で 使用される場合のみ除外することを意図している。しかしながら、テトラサイタ リンおよびタリンダマイシン（ドキシサイクリン、リンコマイシン）等の抗マラ リア性抗生物質は、前述した抗マラリア剤の１種以上と組合わせて使用し得るも のと理解されるであろう。

′！た、本発明の方法は、インビボにおいて前述の抗マラリア剤から生成される 代謝産物に類似する代謝産物を生成する化合物に加え、インビボにおいて、前述 の抗マラリア剤の一つに変化する化合物を用いて実施され得る。

該抗マラリア剤は、遊離の塩基の形態、あるいは製薬学的に許容される酸付加塩 の形態で使用され得る。

好適な塩の例は、クロライド、とドロクロライド、サルフェート、ホスフェート およびジホスフェートである。他の水に可溶な非毒性の、無機および有機塩も使 用され得る。

本発明の方法の実施において、該抗マラリア剤は、ヒト宿主に対して、該薬剤を 抗マラリア剤としてヒトに投与する場合に通常使用される投与形態の一つを用い て投与される。従って、例えば該薬剤は、宿主に経口的経路、または静脈内的も しくは筋肉内的注射で非経口的に投与され得る。注射の目的には、上記の化合物 は、この目的のために慣用的に使用されているベヒクル中の溶液、懸濁物、また は乳化物の形態で調Ｉ８！され得る。他の投与様式も使用し得る。

該抗マラリア剤は、本発明の方法においてＨ工Ｖによる７９７２球の感染をイン ビボで防止するか、もしくは少くとも阻害する、またはＨ工Ｖのインビボでの複 製を防止するか、もしくは少くとも阻害するために適切な薬剤濃度を与えるため に光分な量をもって使用される。従って、該薬剤の量は、ヒト宿主による吸収、 分配およびクリアランスに依存する。当然ながら該抗マラリア剤の有効性は、投 与に関連する。抗マラリア剤の投与量は、検出可能な最少の効果を生じるために 充分な量であるが、確立された致死投与量未満でなければならない。宿主に投与 される抗マラリア剤の投与量は、広い限度にわたって変化し得る。該化合物は、 治療的に有効な最少量で投与され得、該投与量は患者が耐えられる最大投与量ま で所望により増大される。該抗マラリア剤は、比較的高負荷の投与量として投与 され、より低い維持投与量に続けられるか、または均一な投与量で投与され得る 。

投与の量および頻度は、本発明の方法で使用される抗マラリア剤によって変化す る。該抗マラリア剤は、本発明においては、マラリア治療のために推奨される最 大投与量の約６倍までの量で使用される。一般に該投与量は、マラリア治療のに めに推奨される最大投与量の約５倍を越えず、最も普通にはそのよ５な推奨最大 投与量の約４倍以下である。以下は、好適な投与量水準の例である。

キニンジヒドロクロリドまたはサルフェートは、３００−６５０ｓｖの該薬剤を 含む錠剤をもって、１日２−６錠を経口投与され得る。この薬剤の液体製剤は、 この薬剤を３００−５００ｗｉ／−含む溶液を用いた注射により、６００′Ｍｉ が投与されろ１で約３−４時間の期間にわたって投与され、この処置は、２４時 間に２−６回繰返され得る。

抗マラリア剤であるりＯａキンホスフェートおヨヒクロロキンサルフエートは、 錠剤の形態（１００＊。

１５０ｑおよび３００１Ｍりで、３００■−６００■を１週間にわたって経口的 に投与され得ろ。これらの抗マラリア剤の溶液は、２００−３００■の投与量で ６時間で繰返し筋肉内的に５％溶液として注射されるか、またけ５００ｔＩＬｔ 食塩水中の３００−６００１１９を静脈内的（点滴）に注射されるように、筋肉 内的ま１こは静脈内的に投与される。

アモジア力インヒドロクロリドまたはその遊離の塩基は、２００■の該薬剤を含 む錠剤で、１週間にわたり４　（３０−２，００Ｄｑの割合で経口的に投与され 得る。

他の例として、プリマキンジホスフェートは、５〜−７．５■の該薬剤を含む錠 剤をもって１日あ定り２−６錠の割合で経口的に投与される。

プログアニルは、各１００Ｉ１９を含む錠剤として日に１−２錠の割合で経口的 に投与される。クロロプログアニルは、該薬剤２０■を含む錠剤として、週に１ 錠の割合で経口的に投与される。同様に、プリメトアミン（２５１９）を含む錠 剤を、週１錠の割合で投与できる。

メフロキンも、経口投与に適している。該薬剤２５０■を含む錠剤を、１．５０ ０Ｗｉを単独または分割した投与量として投与し得ろ。

該抗マラリア剤の投与量は、平均的体格の成人との関連において特定される。従 って、投与量は、より軽い′！たは重い体格を有する患者に対して２０−２５％ 調節し得る。同様に、小児のための投与量は、よく知られた投与量計算式を用い て調節し得る。

プリマキンは、そのより効果的な網内細胞系に対する外部赤血球効果、およびウ ィルスの流出を介して本発明の方法に使用する１こめ５好ましい抗マラリア剤で ある。成人に対する投与量は、経口的に約１５岬７日塩基（２６■／日塩）ある いは経口的に約４５Ｗ／週塩基（７９■／週塩）である。小児に対して投与量は 、経口的に１日あたり約０．５呼／ｋｇ塩基（１日あたり０．５ｖ／ゆ塩）また は経口的に１週あたり約０．９呼／ゆ塩基（１週あたり１．５ｓｖ／ｋｉｊ塩） である。

前述したように、本発明においてはいずれの抗マラリア剤もマラリア治療のため に推奨される投与量の数倍の投与水準で使用できる。従って、例えばプリマキ／ の成人投与量は、約２５０■／週塩基までである。

他の例としては、クロロキンは、本発明において成人投与量約１８００ｖ／週で 使用できる。

溶血の危険性のため、特にグルコース−７５−Ｐ−デヒドロデナーゼ欠損をもっ たヒトにおいては、別法がある。これらは、より低毒性の８−アミノキノリン類 、マＬ−は他の担体結合プリマキン薬剤を含む。

Ｊ、　［（ｏｆｓｔｅｅｎｇｅらのＪＩＭθｄ、ｃｈｅｍ、、　２９　：　１７ ６５−１７６９（１９８６）。

マラリアの防御および治療における抗マラリア剤の作用機序については多くの推 論がある。Ｄ、　Ａ、　Ａ、。

ＡｋｉｎｔＯｎｗａ　、　Ｊ、Ｔｈｅｏｒ、Ｂ１０１．　、ｉ　０６　：　７８ −８７（１９８４）　。Ｒ，Ｄｅｓ：ＬａｕｒｉａｒｓらのＢｉｏｃｈｉｍｉｅ ａ　ｅｔＢｉＯｐｈｙａｉｃａＡｃｔａ、　９３１　：　２６７−２７５（１９ ８７，１）提案されている機構は、リノソームヵテプシンの阻害、散性の細胞内 部位での水素化、膜の安定化、および酵素誘導を含む。マラリアの防御および治 療における抗マラリア剤の正身の効果は、網内細胞へのスボｏｆイトの侵入阻害 にあるものと思われる。Ａ、　Ｌ、　８０ｈＷａｒｆ：ＺらのＭｏ１ｅｃ、　ａ ｎｄ　ＢＢｌｏｏｂｅ、　ｐａｒａｓｉｔ、コＡ：　３　Ｑ　５−３１１（１９ ８５）。いずれにしても本発明の方法により抗マラリア剤がインビボにおいてＨ 工Ｖの活性な阻害する機構は、完全には理解されていない。事実、該機構は、レ トロウィルスの一つ以上の遺伝子型もしくは表現型の特性の修飾、またはウィル スの修飾あるいは細胞の工程等の一つの因子筐たは因子の組合せに依存するであ ろう。従って抗マラリア剤は、細胞受容体の機能もしくはウィルスエンペロープ 受容体を妨害することにより、あるいは結合機構の性質を変化させることにより 、感受性ＣＤ４＋細胞の感染を阻害するであろう。レトロウィルスが細胞内に転 座されることの証拠がある。しかして、抗マラリア剤は、転座工程を変更するで あろう。更には、ウィルス複製に必要な産生物の発現を調節する遺伝子要素が、 抗ウィルス剤によって変更を受けるか、あるいはそれらのａ能が影響を受けるで あろう。従って、例えば該抗マラリア剤は、逆転写酵素阻害剤として作用するか 、またはレトロウィルスのエンペローノ糖蛋白質の性質を変えるか、！遺伝子発 現を阻害するか、または細胞表面の！遺伝子決定因子の発現に影響を与えるであ ろう。該抗マラリア剤は、Ｈ工Ｖ感染が起こる前後のいずれにおいても網内細胞 系の機能化を介して機能することもあってよい。例えば、該抗マラリア剤は、Ｆ Ｃ−受容体発現を増強するか、または単核食細胞系においてインビボで機能して もよい。このことは、ＡよりＢに伴う日和見感染への感受性の低減なもたらす。

該抗マラリア剤は、感染食細胞においてＨ工Ｖの増殖を阻害することもある。該 抗マラリア剤は、これらのいずれかの方法で、またはそれらの組合せによって、 あるいは現在認識すれていない他の方法で作用するものと理解されるであろう。

いずれにしても、該抗マラリア剤は、これらの効果の一つ以上が達成されるため に充分な量をもって患者に投与され得る。

細胞の感染防止または阻害における抗マラリア剤の有効性は、標準的インビトロ アッセイを使用して示される。従って、抗マラリア剤のＨ工Ｖ感染または複製に 対ｆる阻害効果は、ウィルスまたはウィルス感染細胞を、抗マラリア剤の存在下 または非存在下で培養し、結果を比較することにより示され得る。

一つの方法は、該ウィルスにさらされた、正常末梢血単核細胞または他の培養細 胞の培養に関する。感染性の試験は、感受性指示細胞と共−培養される遊離のウ ィルスまたはウィルス感染細胞のいずれを用いることもできる。該ウィルスは、 受容指示細胞内にて複製する。抗マラリア剤の非存在下におけるウィルス複製を 、該薬剤存在下でのウィルス複製と比較することにより、該薬剤のＨ工ＶＫ対す る阻害効果を示し得ろ。

ウィルス複製は、逆転写酵素（ＢＴ　）活性を監視することにより測定され得る 。ウィルス産生は、ウィルス粒子および種々のウィルス蛋白質の電子顕微鏡的証 拠によっても測定され得る。ウィルス蛋白質の１こめの種程の検出プロトコール は、多くの動物種においく該ウィルスに対して調製される標準的抗体類を使用す る。

免疫螢光は、ウィルス蛋白質を迅速に検出し得、感受性の過剰免疫血清が調製さ れ得る。放射免疫ＳよびＦｉＬ工８Ａアッセイは、放射標識または色測定的に同 定可能な抗原−抗体系が、反応性抗原の添ｎｏにより乱され得ろ系における競合 によって、ウィルス蛋白質の存在を測定するために使用され得る。

抗マラリア剤の有効性を示すための別のアプローチは、ウィルスｍＲ，ＮＡ　Ｋ 　７１１０えて、非組込みおよび組込みウィルスＤＮＡの検出による該ウィルス の検出に関する。

Ｎａｔｕｒｅ％　３１２：１６６−１６９（１９８４）、サデンおよびノーゾン デａットハイプリダイゼーション技術は、ウィルス保有細胞および組織のウィル スＤＮＡおよびＲＮＡの相対量を測定するために有用である。

５ｃｉｅｎｃｅ、　２２７　：　１７７−−１８２　（１９８５）ｏプローブは 、分子的にクローン化された標識プロウィルスＤＮＡを使用して組込みゾロウィ ルス用に構築され、次いでＤＮＡ転移実験において、細胞内ＤＮＡに組込１れた プロウィルスゲツムがあるか否かをＩ・イブリダイゼーションによって測定する ことができる。少数の細胞のみがプロウィルスを含む場合には、その場（ｉｎ日 １ｔｕ）のハイブリダイゼーションが試みられる。

更に特定的に、典型的な実験においては、細胞は、その１個あたりに数倍のウィ ルス粒子をもって細胞不含ピリオンにさらされ、抗ウィルス剤の存在下または非 存在下で培養される。高分子量ρＤＮＡが多数回抽出され、放射標識Ｈ工Ｖプａ −プを用いてウィルスＤＮＡの含有量がアッセイされる。５ａｔｕｒｅ、　３１ ２　：　１６６−１６９（１９８４）。培養条件下にて抗マラリア剤が非存在で ある場合、ウィルスＤＮＡが検出されろ。対照的に、抗マラリア剤により完全に 保護された細胞由来のＤＮＡにおいては、非組込みおよび組込みＤＮＡのいずれ も検出されない。

ウィルスにさらされ、抗マラリア剤を用いて、または用いずに培養された標的Ｔ 細胞においてウィルスＲＮＡが発現されたか否かを測定することによってもウィ ルス複製を監視することが可能である。この実験においては、細胞が■工Ｖにさ らされ、ｊｆ、−ＲＮＡが細胞から抽出される。次いで抽出ＲＮＡは、放射標識 Ｈ工ＶアンチセンスＲＮＡプローデを用いたノーデンデロットハイフリダイゼー ションによってウィルスＲＮＡの含有量にツイテアツセイされる。５ｃｉｅｎｃ ｅ　、　２２７　：　１７７−１８２（１９８５）。ジデオキシヌクレオシド類 が存在しない場合に、ウィルスｆｆ１ＲＮＡが検出可能である。

これらの培養物を、抗マラリア剤の存在下に延長期間維持した場合には、該細胞 内でのウィルスＲＮＡ発現は、検出されないか、あるいは検出されても実質的に 低減された量で存在する。このアッセイ系は、抗マラリア剤のＨ工Ｖヌクレオチ ド合成の阻害およびウィルスにさらされたＴ細胞におけるｍＲＮＡの発現の阻害 についての能力の評価を可能とする。

加えて、Ｈ工Ｖ−ニー感染細胞系ＭＴ２およびＭＴ４は、ウィルスの細胞変性効 果に感受性である。従って、これらの細胞は、該抗マラリア剤のＨ工Ｖ感染また は増殖に対する阻害効果を示すためのゾラーク形成アッセイにおいて使用され得 る。５ｃｌｅｎｃｏ　、　２２９　：　５６３−５６６　（１９８５）。

ＨｆｆＶ感染またはＨ工Ｖ複製の阻害における該抗マラリア剤の有効性は、ＨＸ Ｖの細胞変性効果に対して部分的に抵抗性であるＨ９細胞におけるウィルスｐ２ ４ｇａｇ蛋白質の発現に対して、該薬剤の阻害効果を測定することにより、イン ビトロでも示される。Ｍ、　Ｐｏｐｏｖｉｃらの５ｃｉｅｎｃｅ、２２’４：４ ９７−５００（１９８４）。

Ｈ９細胞をウィルスにさらした後、ｐ２４抗原が、ネズミモノクローナル抗体を 用いた間接的免疫螢光アッセイにより測定される。Ｈ９細胞は、Ｈ工Ｖの細胞変 性効果に対して比較的に抵抗性であり、■工Ｖへの曝露に続＜ｐ　２４　ｇａｇ 蛋白質の発現は、ウィルス感染性およびインビトａでの複製の指標として使うこ とができる。

従って、該化合物の抗ウイルス効果を、ウィルスにさらされ、薬剤を用いて培養 されたＨ９細胞において■工Ｖｐ２４ｇａｇ蛋白質の発現を定量することにより 評価することが可能である。Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａ、　Ｓｃｉ、　Ｕ ＳＡ　。

抗ＨＩＶ活性は、Ｈ工Ｖの細胞変性効果に対する抗マラリア剤の阻害効果を示す ことによっても表し得る。不死化すれたヘルパーインデューサＴ細胞クロー／（ ＡＴＨ３）が記述されており、該ウィルスの細胞変性効果を示す。ＡＴＨ８細胞 が試験管内で培養された場合には、これらの細胞は試験管の底部にペレットヲ形 成し、また該ペレットは生存可能な標的Ｔ細胞の数を反映する。これらの条件の もとに、細胞変性効果は、直接の目視点検を容認する。保護的な抗マラリア剤の 非存在下にてＨＩＶにさらされ１こ場合には、該ウィルスは、標的Ｔ細胞に十分 な細胞変性効果を及ぼす。抗マラリア剤をアッセイの開始時に培養中に添加した 場合には、標的ＡＴＨ８細胞は、該ウィルスの細胞変性効果から保護され、成長 を続けることができる。これらの観察は、染料排除法により生存可能細胞の数を 計数することにより、実証され、定量化され得る。従ってこのｕ工ｖ細胞変性効 果阻害アッセイは、選択化合物の有力な抗ウィルス活性と毒性との同時評価を可 能とする。このアッセイの更に詳細については、Ｍ、　Ｈ１ｒｏａｋｉらの５ｃ ｉｅｎｃａ１２４０　：６４６−６４９（１９８８）径間。

最後に、該抗マラリア剤の活性は、インビトロにおいて正常Ｔ細胞により示され 得ろ。このアッセイにおいては、正常破傷風トキシドー特異的ヘルパー／インデ ューサクローン化Ｔ細胞（ＴＭエエ細胞）等の正常クローン化ヘルパー／インデ ューサＴ細胞が、抗原−誘導増殖性応答に対する薬剤の効果を監視するために使 用される。この技術の詳細は、Ｈ，Ｍｉｔｓｕｙａらの５ｃｉｅｎｃｅ、２４０ ：６４６−６４９（１９８８）に記載されている。

該抗マラリア剤のＨ工Ｖ感染１には複製の防止′！１こは阻害における効果は、 チンパンジーを用いてインビボで確認され得る。ＨＩＶによる永続的感染は、Ａ よりＳ様疾患は表れないが、この霊長類を用いて示される。抗マラリア剤の有効 性は、処置および未処置チンパンジーをＨ工Ｖ抗原に対する血漿変換について比 較することにより、ま１こ動物から感染性ウィルスを再単離することにより、筐 た証明可能なリンパ節症により、Ｔｉもしくは１８９７２球水準の変化により、 筐りはこれらの因子の組合せにより示され得る。

これらのアッセイを行なうために必要なＨＩＶは、慣用の供給源から慣用技術を 用いて得られる。例えば、患者の末梢血、骨髄、および池の組織から調製した単 核細胞をミドビン（フィトヘマグルチニン−Ｐ）で４８−７２時間刺激し、Ｔｉ 胞成長因子（ＴＣ（）？）を添加した育生培地を用いて細胞培養物中に確立され 得る。

ウィルスは、（１）ウィルス逆転写酵素活性を上澄液で監視すること；（２）ウ ィルスを新鮮な正常ヒトＴ−リンパ球（例えば、屓帯血、成人末梢血、または骨 髄白血球）または確立されたＴ−細胞系に伝染させること；Ｍ、　ＰＯｐＯＶｉ （！らの５ｃ１ａｎｃｅ、　２２４　：　４９７　（１９８４）ｙ（３）固定化 または断片化細胞の電子顕微鏡的観察；および（４）間接的免疫螢光筐たはウェ スタンプロット工程を血清陽性提供者の血清を用いて行なうことによる抗原発現 の試験によって検出され得る。ウィルス−陽性細胞の検出およびウィルス単難物 の特徴付けと比較は、Ｈ工Ｖ特異的免疫試薬および核酸プａ−プを使用して行な うことができる。Ｆ、Ｂａｒｒθ−８ｉｎｏｕｓｓｉらのＢｃｌｅｎｃｅ、ノ５ ｃｉｅｎｃｅ、　２２０　：　８６５−８６７　（１９Ｂ５　）。

多くの確立された細胞系が、ＨＩＶ−１感染の１こめの使用し得る標的として試 験された。リンパ系白血病の成人から誘導され、ＥＩＴと称されるある檻の新形 成性異数体Ｔ−細胞系は、ＨＴＩ、Ｖ−ＩＩＩの感染に感受性である。

ＨＴ細胞は、リンパ節症候群またはＡＩＤＥＩの患者由来のＴ−細胞短期間培養 物（Ｔ（！ＧＦ中で育生）から収穫された濃縮細胞培養液に、親細胞を反復して 曝露させた後に、継続的にＨＴＬＶ−［［を産生ずる。細胞増殖が衰微した場合 に、通常培養液への曝露後１０〜２０日で、新鮮な（感染していない）　ＨＴ親 細胞が培養物に格別される。ＨＩＶに対する許容性を改善するため、および永久 的生育とウィルスの継続的産生な保持するために、ＨＴ細胞母集団が広くクロー ン化された。ＨＴ細胞のこれらのりａ−ン中のいくつかが細胞培養中に維持され ている。

ＨＴに加え、ＨＩＶに感染され、これの産生を継続し得る数種のＴまたは前駆− Ｔヒト細胞系がある。これらのＩｉｌ［ｌ相系の例は、Ｈ４、Ｈ９、ＨＵＴ−７ ８、ＯＢＭ。

ＭＱｌｔ３、およびＴｉ　７．４である。（）ａｌ’ｌｏらの米ｍｌ特許第４， ６５２．５９９号。更に、ある３３　＋　ＩＪンパ芽球細胞系も生理的にＨＩＶ に感染し得る。Ｌ、　ＭＯｎｔａｇｎｉｅｒらのｓｃｉθＴｌＣｅ、　２２５　 ：　６３−６６　（１９８４）。

該抗マラリア剤およびそれらの製薬学的に許容される塩は、ヒト！含み、これに 限定されろことなく哺乳動物において使用され、免疫系機能の妨害、特にＣＤ４ ”　Ｔ　ＩＪンパ球の水準の低下に関連して生じるヒトおよび感受性のヒト以外 の霊長類における細胞変性および病理学的症状の治療において、ビル、錠剤、口 内錠、トローチ、カプセル、座薬、注射または経口溶液等の形態で臨床に使われ る。

哺乳類の病理学的症状の治療において使用するため医薬組成物を調製するために 、適切な製薬学的に許容される担体、希釈剤および補助薬を、ここに記述した抗 マラリア剤と組合せることができる。本発明の医薬組成物は、該活性化合物を固 体″ｆたは液体の製薬学的に許容される非毒性担体と共に含有する。このような 医薬担体は、鉱油、動物、野菜もしくは合成起源のものを含む水および油等の無 菌液体であり得る。好適な液体の例は、ピーナツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油等 である。該医薬組成物が、静脈内的に投与される場合には、水が好ましい担体で ある。生理的食塩水、ならびにデキス）ｏ−スおよびグリセロール水溶液は、特 に注射溶液のための液体担体として使用され得る。好適な医薬用賦形剤は、デン プン、グルコース、ラクトース、シュクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦、チ ョーク、シリカゾル、炭酸マグネシウム、ステアリン散マグネシウム、ステアリ ン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセａ−ル、メルク、塩化ナトリウム、乾 燥スキムミルク、グリセロール、ゾロビレングリコール、水、エタノール、等を 含む。これらの組成物は、溶液、懸濁物、錠剤、ピル、カプセル、粉剤、除数剤 等の形態をとり得る。好適な医薬担体は、Ｆ、Ｗ、Ｍａｒｔｊ、ｎのＩＨθｍｉ ｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　ＳｃｉθｎＣθ６Ｉに記載さ れている。該医薬組成物は、宿主にズ・工して適切な投与形態を与えるように、 治療的に有効量の活性化合物を好適量の担体と共に含有する。

要約すれば、該抗マラリア剤は、ヒトの治療の１こめの抗ウィルス剤として特に 有用である。それらは、ＡＩＤＢウィルス類に対して有力な抗ウィルス活性を示 し、このことは、先行技術である抗ウィルス剤の極めて限定的かつ特異的な抗ウ ィルス活性から見て、極めて異例であり予期し得ないものである。該抗マラリア 剤は、Ｈ工Ｖ複製、ならびに動物およびヒト細胞組織培養系におけるウィルス誘 発性細胞傷害について顕著な抑制作用を示す。該抗マラリア剤は、人よりＳに伴 う日和見感染発症の低減および中枢神経系に河するＨＩＶの進行性変質効果の低 減を含め、ヒトにおけろ死亡率および罹病率の表れを低減し得ろ。

手続補正書（自発） １、事件の表示 ＰＣＴ　／　ＵＳ　８９　／　０２５８６２、発明の名称 ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）のインビボにおける活性の阻害方法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 氏　名　　　デービス、マイクル、エイチ４、代理人 居　所　　〒１００東京都千代田区大手町二丁目２番１号新大手町ビルヂング３ ３１ 明細書及び請求の範囲翻訳文 国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ヒト宿主に、保護効果、治癒効果を示すか、１にはヒトにおいてマラリアの 転移を防止し得る抗マラリア剤を投与することを含んでなり、該抗マラリア剤が 、 （ａ）アルカロイド類； （ｂ）９−アミノアクリジン類； （ｃ）４−アミノキノリン類； （ｄ）８−アミノキノリン類； （ｅ）ビグアニド類； （ｆ）ジヒドロフオレートレダクターゼ阻害：剤類；（ｇ）スルフオン類； （ｈ）スルフォンアミド類； （ｉ）メフロキン； （ｊ）ハロフアントリン； （ｋ）ヒドロキシアニリノ−ベンゾ−ナフチリジン類；および （ｌ）セスキテルペンラクトン類； からなる群から選択され、かつ該抗マラリア剤が、ヒトに対してインビボにおい てＨＩＶによるＴリンパ球の感染を防止するか、もしくは少なくとも阻害するた めに充分である、またはインビボにおいてＨＩＶの複製を防止するか、もしくは 少なくとも阻害するために充分である量をもつて投与される、インビボにおける ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の活性阻害方法。 ２．該アルカロイドがキニンまたはキニジンである請求項１に記載の方法。 ５．該９−アミノアクリジンがメパクリニンである請求項１に記載の方法。 ４．該４−アミノキノリンがクロロキンまたはアモジアキンである請求項１に記 載の方法。 ５．該８−アミノキノリンがプリマキン、パマキン、またはキノシドである請求 項１に記載の方法。 ６．該ビグアニドがプログアニルである請求項１に記載の方法。 ７．該ジヒドロフオレートレダクターゼ阻害剤剤がジアミノピリミジンまたはト リメトプリムである請求項１に記載の方法。 ８．該ジアミノピリミジンがピリメトアミンである請求項７に記載の方法。 ９該スルフオンがジアミノジフエニルスルフオン、またはジホルミルジフエニル スルフオンである請求項１に記載の方法。 １．該スルフオンアミドがスルフアジアジン、スルフアメトキシピラジン、スル フアモノメトキシン、スルフアドキシンまたはスルフアメトキサゾールである請 求項１に記載の方法。 １１．該ヒドロキシアニリノ−ベンゾ−ナフチリジンがピロナリジンである請求 項１に記載の方法。 １２．該セスキテルペンラクトンがアルテミシニンである請求項１に記載の方法 。 １５．該抗マラリア剤が、製薬学的に許容される担体との混合調製物として宿主 に投与される請求項１に記載の方法。 １４．抗マラリア剤類の混合物が宿主に投与される言責求項１に記載の方法。 １５．該抗マラリア剤が抗生物質と共に宿主に投与される請求項１に記載の方法 。