JPH0352899A - カルシトニン類似体 - Google Patents
カルシトニン類似体Info
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- JPH0352899A JPH0352899A JP1188650A JP18865089A JPH0352899A JP H0352899 A JPH0352899 A JP H0352899A JP 1188650 A JP1188650 A JP 1188650A JP 18865089 A JP18865089 A JP 18865089A JP H0352899 A JPH0352899 A JP H0352899A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は生物学的活性を有する新規力ルシトニン置換類
似体に関するものである。
似体に関するものである。
既知の天然カルシトニンは鰻、鮭、鶏、豚，ヒト，ウシ
、羊、ラット，が知られて釦シ，すべて３２個のアミノ
酸により構成されている。例えば鰻カルシトニンは次式
のべプテド構造を有している： また，％開昭６３−２７７６９８．特開昭６３−２８４
１９８，！％開昭６３−２８７８００、Ｊ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．Ｖｏｌ １５９ Ｐ１２５（１９８６）−Ｅ
ｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ ．１ １ ７ ．
Ｐ８０（１ ９８７ ）、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｖｏｌ
．１ ６２ ．Ｐろ９９（ １ ９８７ ） には，
天然カルシトニン置換類似体が開示されている。
、羊、ラット，が知られて釦シ，すべて３２個のアミノ
酸により構成されている。例えば鰻カルシトニンは次式
のべプテド構造を有している： また，％開昭６３−２７７６９８．特開昭６３−２８４
１９８，！％開昭６３−２８７８００、Ｊ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．Ｖｏｌ １５９ Ｐ１２５（１９８６）−Ｅ
ｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ ．１ １ ７ ．
Ｐ８０（１ ９８７ ）、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｖｏｌ
．１ ６２ ．Ｐろ９９（ １ ９８７ ） には，
天然カルシトニン置換類似体が開示されている。
本発明は従来知られていなかったカルシトニンの置換類
似体を新規に提供することを目的とするものである。
似体を新規に提供することを目的とするものである。
本発明は公知のカルシトニ／と同一の種類の生物学的活
性を有し，５１個のアミノ酸配列によって構成される〔
１．７−ジーアラニン，デス−２２−ｆ口シン〕カルシ
トニンを提供するものである。
性を有し，５１個のアミノ酸配列によって構成される〔
１．７−ジーアラニン，デス−２２−ｆ口シン〕カルシ
トニンを提供するものである。
本発明のカル／トニン置換類似体と，公知の天然力ルン
トニ／との構造上の相違点は、（１）１及び７の位置の
７ステインがアラニンで置換されてお，ｊ）１２１２２
の位置のチロシンが欠失していることである。これらの
新規ペプテドはペプチドの合戒修飾についてのＩＵＰＡ
Ｃ−ＩＵＰ命名法（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．．（ １９８
４）Ｖｏ１．２１９，３４５−３７７）に従って、〔１
，７−ジーアラニン、デス−２２−チロシン〕カルシト
ニンと命名される。この新規なペプチドはカルシトニ／
の合成に通常必要とされるアミノ酸の逐次的付加と〔１
，Ｚーシーアラニン，テスー２２−チロシン〕カルシト
ニンを構或するために必要な１番目と７番目の位置での
アラニンの導入、訃よび２２番目のテロシ／の欠失によ
って製造される。
トニ／との構造上の相違点は、（１）１及び７の位置の
７ステインがアラニンで置換されてお，ｊ）１２１２２
の位置のチロシンが欠失していることである。これらの
新規ペプテドはペプチドの合戒修飾についてのＩＵＰＡ
Ｃ−ＩＵＰ命名法（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．．（ １９８
４）Ｖｏ１．２１９，３４５−３７７）に従って、〔１
，７−ジーアラニン、デス−２２−チロシン〕カルシト
ニンと命名される。この新規なペプチドはカルシトニ／
の合成に通常必要とされるアミノ酸の逐次的付加と〔１
，Ｚーシーアラニン，テスー２２−チロシン〕カルシト
ニンを構或するために必要な１番目と７番目の位置での
アラニンの導入、訃よび２２番目のテロシ／の欠失によ
って製造される。
基本となるカルシトニンとしては，前記種々の天然カル
シトニンであってよいが、好豊しくは、鰻カルシトニン
、鮭カルシトニン、釦よび鶏カルシトニンである。天然
の鰻カルシトニンに対する本発明のカルシトニン置換類
似体は下記式（１）で表わされるペプテド構造を有して
いる。
シトニンであってよいが、好豊しくは、鰻カルシトニン
、鮭カルシトニン、釦よび鶏カルシトニンである。天然
の鰻カルシトニンに対する本発明のカルシトニン置換類
似体は下記式（１）で表わされるペプテド構造を有して
いる。
Ａｌ ａ−Ｓｓ ｒ−Ａａｎ−Ｌｅｕ−Ｓｅ ｒ−Ｔｈ
ｒ−Ａｌ ａ−Ｖａ １ −Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ
−Ｌｅｕ−Ｓｅ ｒ−Ｇｌ ｎ−Ｇｌ ｕ 一Ｌｅｕ
−Ｈｉ ｓ −Ｌｙ ｓ −Ｌｅ ｕ −Ｇｌ ｎ −
Ｔｈｒ−Ｐｒ ｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓ ｐ−Ｖａ
１ −Ｇｌ ｙ−Ａｌ ａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ −Ｐｒｏ
−ＮＨ！＠ ＠ １１ ・［１１また，天然の鮭カルシ
トニンに対応する本発明？カルシトニン置換類似体は下
記式（２）で表わされるペブチド構造を有している。
ｒ−Ａｌ ａ−Ｖａ １ −Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ
−Ｌｅｕ−Ｓｅ ｒ−Ｇｌ ｎ−Ｇｌ ｕ 一Ｌｅｕ
−Ｈｉ ｓ −Ｌｙ ｓ −Ｌｅ ｕ −Ｇｌ ｎ −
Ｔｈｒ−Ｐｒ ｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓ ｐ−Ｖａ
１ −Ｇｌ ｙ−Ａｌ ａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ −Ｐｒｏ
−ＮＨ！＠ ＠ １１ ・［１１また，天然の鮭カルシ
トニンに対応する本発明？カルシトニン置換類似体は下
記式（２）で表わされるペブチド構造を有している。
Ａｌ ａ−Ｓｅ ｒ −Ａｓ ｎ−Ｌｅ ｕ−Ｓｓ ｒ
−Ｔｈｒ −Ａｌ ａ−Ｖａ １ −Ｌｅ ｕ−Ｇｌ
ｙ−Ｌｙ ｓ −Ｌｅｕ−Ｓｅ ｒ −Ｇｌ ｎ−Ｇｌ
ｕ−Ｌｅｕ −Ｈｉ ｓ ｛ｙ ｓ −Ｌｅｕ−Ｇｌ
ｎ−Ｔｈｒ−Ｐｒ ｏ −Ａｒｇ−Ｔｈｒ −Ａｓ
ｎ−Ｔｈｒ −Ｇｌｙ −Ｓｓ ｒ−Ｇｌ ｙ−Ｔｈｒ
−Ｐｒｏ− ＮＨ， ｅ ＠ ・
ｓ （２１さらに、天然鶏カルシトニンに対応する本発
明のカルシトニ／置換類似体は下記式（３）で表わされ
るペプチド構造を有している。
−Ｔｈｒ −Ａｌ ａ−Ｖａ １ −Ｌｅ ｕ−Ｇｌ
ｙ−Ｌｙ ｓ −Ｌｅｕ−Ｓｅ ｒ −Ｇｌ ｎ−Ｇｌ
ｕ−Ｌｅｕ −Ｈｉ ｓ ｛ｙ ｓ −Ｌｅｕ−Ｇｌ
ｎ−Ｔｈｒ−Ｐｒ ｏ −Ａｒｇ−Ｔｈｒ −Ａｓ
ｎ−Ｔｈｒ −Ｇｌｙ −Ｓｓ ｒ−Ｇｌ ｙ−Ｔｈｒ
−Ｐｒｏ− ＮＨ， ｅ ＠ ・
ｓ （２１さらに、天然鶏カルシトニンに対応する本発
明のカルシトニ／置換類似体は下記式（３）で表わされ
るペプチド構造を有している。
Ａｌ ａ−Ａｌ ａ−Ｓｅ ｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅ ｒ−Ｔ
ｈｒ−Ａｌ ａ−Ｖａ ｌ −Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ
−Ｌｅｕ−Ｓｅ ｒ −Ｇｌ ｎ−Ｇｌ ｕ−Ｉｊｕ−
Ｈｔ ｓ 一Ｌｙｅ − Ｌｅｕ −Ｇｌ ｎ−Ｔｈｒ
−Ｐｒ ｏ−Ａｒｇ−Ｔｈ ｒ−Ａｓ ｐ−Ｖａ ｌ
−Ｇｌｙ−Ａｌ ａ−Ｇｌｙ−Ｔｈ ｒ−Ｐｒｏ−
ＮＨｚ ＠ ｅ ＊ ＊ （３１本
ペプチドを合或するに当ってはボリマー樹脂を利用した
固相合或法や一般的な有機合成法である液相合成法が利
用できる。固相合成に用いる樹脂にはクロロメチル樹脂
，オキシメチル樹脂、４−（オキシメチル）フヱニルア
セタミドメチル樹脂，ペンズヒドリルア■冫樹脂、ポリ
アクリルアミド樹脂などが利用できる。１ｆｃ用いられ
るアミノ酸はすべて光学的にＬ体であり、必要に応じて
官能基を保護した保護アミノ酸が用いられる。
ｈｒ−Ａｌ ａ−Ｖａ ｌ −Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ
−Ｌｅｕ−Ｓｅ ｒ −Ｇｌ ｎ−Ｇｌ ｕ−Ｉｊｕ−
Ｈｔ ｓ 一Ｌｙｅ − Ｌｅｕ −Ｇｌ ｎ−Ｔｈｒ
−Ｐｒ ｏ−Ａｒｇ−Ｔｈ ｒ−Ａｓ ｐ−Ｖａ ｌ
−Ｇｌｙ−Ａｌ ａ−Ｇｌｙ−Ｔｈ ｒ−Ｐｒｏ−
ＮＨｚ ＠ ｅ ＊ ＊ （３１本
ペプチドを合或するに当ってはボリマー樹脂を利用した
固相合或法や一般的な有機合成法である液相合成法が利
用できる。固相合成に用いる樹脂にはクロロメチル樹脂
，オキシメチル樹脂、４−（オキシメチル）フヱニルア
セタミドメチル樹脂，ペンズヒドリルア■冫樹脂、ポリ
アクリルアミド樹脂などが利用できる。１ｆｃ用いられ
るアミノ酸はすべて光学的にＬ体であり、必要に応じて
官能基を保護した保護アミノ酸が用いられる。
ぬ−アミン保護基としてはカルボベンゾキシ基（Ｚ），
第３プチルオキシ力ルボニル基（Ｂｏａ）． ９−フ
ルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）、ホ
ルミル基（ＨＣＯ），アセチル基（Ａｃ）などがある。
第３プチルオキシ力ルボニル基（Ｂｏａ）． ９−フ
ルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）、ホ
ルミル基（ＨＣＯ），アセチル基（Ａｃ）などがある。
乙一カルボキシ保護基としてはベンジル基（Ｂｚｌ）、
第５プテル基（Ｂｕ’），メチル基（Ｍｅ）、 エチル
基（，Ｅｔ）、フエナシル基（Ｐａｃ）などが利用でき
る。１たアミノ酸側鎖の官能基の保護基としては，ベン
ジル基（ Ｂｚｌ ），Ｐ 一トルエンスルホニル基（
Ｔｏｓ）、ｐ−ニトロフェノール基（Ｎｏｔ ）、ペン
ズヒドリル基（Ｂｚｈ）、アセタミドメチル基（Ａｃｍ
）、第３プチル基（Ｂｕｔ），第５プチルオキシ力ルボ
ニル基（Ｂｏａ）．シクロヘキシル（ＣＨｅＸ）、４−
メトキシ−２．３，６２、｝リメチルベンゼンスルホニ
ル基（Ｍｔｒ）などが利用できる。これらの保護基は目
的に応じて１つまたはそれ以上を任意に選択して利用で
きる。
第５プテル基（Ｂｕ’），メチル基（Ｍｅ）、 エチル
基（，Ｅｔ）、フエナシル基（Ｐａｃ）などが利用でき
る。１たアミノ酸側鎖の官能基の保護基としては，ベン
ジル基（ Ｂｚｌ ），Ｐ 一トルエンスルホニル基（
Ｔｏｓ）、ｐ−ニトロフェノール基（Ｎｏｔ ）、ペン
ズヒドリル基（Ｂｚｈ）、アセタミドメチル基（Ａｃｍ
）、第３プチル基（Ｂｕｔ），第５プチルオキシ力ルボ
ニル基（Ｂｏａ）．シクロヘキシル（ＣＨｅＸ）、４−
メトキシ−２．３，６２、｝リメチルベンゼンスルホニ
ル基（Ｍｔｒ）などが利用できる。これらの保護基は目
的に応じて１つまたはそれ以上を任意に選択して利用で
きる。
？ミノ酸の逐次付加反応はカルボジイミドを用いた脱水
縮合や、活性エステルを利用する方法などが利用できる
。カルポジイ■ドとしては，ジシクロへキンルカルポジ
イミド，１−エチル−６（３−ジメチルアミノプロビル
）カルボジイミドなどが利用でき、活性エステルとして
はＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（−０Ｓｕ）
、ペンタフルオロフェノールエステル（−０Ｐｆｐ）、
ジヒドロキソベンズトリアジンエステル（−０Ｄｈｂｔ
）などが利用できる。
縮合や、活性エステルを利用する方法などが利用できる
。カルポジイ■ドとしては，ジシクロへキンルカルポジ
イミド，１−エチル−６（３−ジメチルアミノプロビル
）カルボジイミドなどが利用でき、活性エステルとして
はＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（−０Ｓｕ）
、ペンタフルオロフェノールエステル（−０Ｐｆｐ）、
ジヒドロキソベンズトリアジンエステル（−０Ｄｈｂｔ
）などが利用できる。
反応触媒としてはＤＭＦ，ＴＨＦ．ジクロロメタン，ク
ロロホルム，酢酸エチル，ジオキサン，ＤＭＳＯ− Ｎ
−メチルピロリドン、ピリジン、水などが利用できる。
ロロホルム，酢酸エチル，ジオキサン，ＤＭＳＯ− Ｎ
−メチルピロリドン、ピリジン、水などが利用できる。
保護基の脱離剤としては、保護基の種類、目的に応じて
、フッ化水素、トリ７ルオロ酢酸，トリフルオロメタン
スルホン酸，アンモニア／メタノール、臭化水素／酢酸
，水素／パラジウム炭素，酢酸／亜鉛粉末，アルカリ／
水一メタノールなどが利用できる。
、フッ化水素、トリ７ルオロ酢酸，トリフルオロメタン
スルホン酸，アンモニア／メタノール、臭化水素／酢酸
，水素／パラジウム炭素，酢酸／亜鉛粉末，アルカリ／
水一メタノールなどが利用できる。
合成途中または合成後の精製法としては逆相、純相、イ
オン交換、ゲル済過などの各種クロマトグラ７イーや再
結晶などが利用できる。
オン交換、ゲル済過などの各種クロマトグラ７イーや再
結晶などが利用できる。
く実施例１〉
（１）べ／ズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂へのプロリ
ンの導入 ＢＨＡ＠脂５ ？ （ −ＮＨ， ： ０．５關ｏ ｌ
．／Ｓ’ ）・をＤＭＦ５０ｍｌに懸濁し，時々攪拌し
ながら膨潤させた。上澄をデカンテーションにて除去し
、更に５０ｍｌのＤＭＦを加え洗浄した後、グラスフィ
ルターで枦過した。これを２００ｍｌのナスフラスコに
入れ，ＤＭＦ ５０ｍｌを加えた後， Ｂｏｃｌ？ｒｏ
１０ｗｏｌ（２．１５ＳＦ）を加え５分間攪拌した。さ
らにＤＣＣ １ ２ｍｏｌ （ ２．５ ｆ ）、ＨＯ
ＢＴ１ ：２ｍｏｌ（１．６２ｆ）加え、終夜室温で攪
拌した。グラスフィルターで炉過した後、ＤＭＦ、塩化
メチレン、メタノール、塩化メテレン、メタノールの順
で洗浄し、最後に塩化メチレンで洗浄した後，自然乾燥
した。得られた樹脂１■を加水分解してアミン酸分析装
置にてＢｏｃＰｒｏ ｆｆの導入量を定量したところ口
．３９聰ｏｆ／Ｓ’ であった。
ンの導入 ＢＨＡ＠脂５ ？ （ −ＮＨ， ： ０．５關ｏ ｌ
．／Ｓ’ ）・をＤＭＦ５０ｍｌに懸濁し，時々攪拌し
ながら膨潤させた。上澄をデカンテーションにて除去し
、更に５０ｍｌのＤＭＦを加え洗浄した後、グラスフィ
ルターで枦過した。これを２００ｍｌのナスフラスコに
入れ，ＤＭＦ ５０ｍｌを加えた後， Ｂｏｃｌ？ｒｏ
１０ｗｏｌ（２．１５ＳＦ）を加え５分間攪拌した。さ
らにＤＣＣ １ ２ｍｏｌ （ ２．５ ｆ ）、ＨＯ
ＢＴ１ ：２ｍｏｌ（１．６２ｆ）加え、終夜室温で攪
拌した。グラスフィルターで炉過した後、ＤＭＦ、塩化
メチレン、メタノール、塩化メテレン、メタノールの順
で洗浄し、最後に塩化メチレンで洗浄した後，自然乾燥
した。得られた樹脂１■を加水分解してアミン酸分析装
置にてＢｏｃＰｒｏ ｆｆの導入量を定量したところ口
．３９聰ｏｆ／Ｓ’ であった。
（２） 残余アミ７基のブロックと脱保護（１１で得
られた樹脂０．６１に塩化メテレン１００ｍＢを加え，
充分膨潤させたのち、グラスフィルターで炉過し、１０
Ｖ／Ｖ％無水酢酸の塩化メテレン溶液１００ｍＡ’を加
え１時間攪拌した。ごく少量を取り出しニンヒドリン試
薬で陰性であることを確認した後，Ｐ過し，塩化メチレ
ンで充分洗浄した。これをＩＷ／Ｖ％のインドールを３
む５０Ｖ／Ｖ％トリフルオ口酢酸（ＴＦＡ）の塩化メチ
レン溶液５０ｍｌに懸濁し、室温で３０分間反応させた
後、グラスフィルターで炉過し、塩化メチレン、メタノ
ール、塩化メチレン、メタノール、塩化メチレンの順で
洗浄した。
られた樹脂０．６１に塩化メテレン１００ｍＢを加え，
充分膨潤させたのち、グラスフィルターで炉過し、１０
Ｖ／Ｖ％無水酢酸の塩化メテレン溶液１００ｍＡ’を加
え１時間攪拌した。ごく少量を取り出しニンヒドリン試
薬で陰性であることを確認した後，Ｐ過し，塩化メチレ
ンで充分洗浄した。これをＩＷ／Ｖ％のインドールを３
む５０Ｖ／Ｖ％トリフルオ口酢酸（ＴＦＡ）の塩化メチ
レン溶液５０ｍｌに懸濁し、室温で３０分間反応させた
後、グラスフィルターで炉過し、塩化メチレン、メタノ
ール、塩化メチレン、メタノール、塩化メチレンの順で
洗浄した。
次に１０Ｖ／Ｖ ％ ト！Ｊエテルアミンの塩化メチ
レン溶液５０ｍｌを加え５分間攪拌して中和し、グラス
フィルターでｐ過した後、上記と同様の方法で洗浄し、
ＤＭＦ １ ０ｍｌ Ｋ懸濁した。
レン溶液５０ｍｌを加え５分間攪拌して中和し、グラス
フィルターでｐ過した後、上記と同様の方法で洗浄し、
ＤＭＦ １ ０ｍｌ Ｋ懸濁した。
（３） アミノ酸の逐次付加反応
（２）で得た樹脂のＤＭＦ’懸濁液を内径１０閣のカラ
ムに充填し、以下のステップでＦｍｏｃ−アミノ酸活性
エステルを順次付加した。
ムに充填し、以下のステップでＦｍｏｃ−アミノ酸活性
エステルを順次付加した。
の付加
力２ムにＤＭＦを５ ｒｎｌ ／分で１５分間流し、洗
浄した後， Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ（ Ｂｕ ｔ） Ｏ
Ｄｈｂｔ Ｏ．８■ｏｌ（０．４５ｆ）ｔハイドロキシ
ペンゾドリアゾールのＤＭＦ溶液（０．３３Ｍ）に溶か
し、５ ｍｌ ／分の流速で循環させながら室温にて３
０分間反応させた。反応後ＤＭＦを５ｍ６７分で１０分
間流し、カラムを洗浄した。
浄した後， Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ（ Ｂｕ ｔ） Ｏ
Ｄｈｂｔ Ｏ．８■ｏｌ（０．４５ｆ）ｔハイドロキシ
ペンゾドリアゾールのＤＭＦ溶液（０．３３Ｍ）に溶か
し、５ ｍｌ ／分の流速で循環させながら室温にて３
０分間反応させた。反応後ＤＭＦを５ｍ６７分で１０分
間流し、カラムを洗浄した。
第２ステｙ ７ ： Ｆ’ｍｏ ｃ − Ｇｌ ’！
−ＯＰｆ ｐの付加第１ステップ終了後２０Ｖ／Ｖ
％ピペリジンのＤＭＦ溶液を５ ｍｌ ／分で１０分間
流しＦｍｏｃ一基を除去した後、ＤＭＦを５ｍｌ７分で
１０分間流し、洗浄した。第２ステップに用いるＦｍｏ
ｃ−Ｇｌｙ−ＯＰｆｐ Ｏ．８ｍ＋ｏｌ （０．３６
７．Ｓ’）をハイドロキシベンゾ｝ ＩＪアゾールのＤ
ＭＦ溶液（０．３３Ｍ）に溶かし、５ ｍｌ ／分の流
速で循環させながら室温にて３０分間反応させた。反応
後−ＤＭＦを５ｍｌ７分で１０分間流し、カラムを洗浄
した。
−ＯＰｆ ｐの付加第１ステップ終了後２０Ｖ／Ｖ
％ピペリジンのＤＭＦ溶液を５ ｍｌ ／分で１０分間
流しＦｍｏｃ一基を除去した後、ＤＭＦを５ｍｌ７分で
１０分間流し、洗浄した。第２ステップに用いるＦｍｏ
ｃ−Ｇｌｙ−ＯＰｆｐ Ｏ．８ｍ＋ｏｌ （０．３６
７．Ｓ’）をハイドロキシベンゾ｝ ＩＪアゾールのＤ
ＭＦ溶液（０．３３Ｍ）に溶かし、５ ｍｌ ／分の流
速で循環させながら室温にて３０分間反応させた。反応
後−ＤＭＦを５ｍｌ７分で１０分間流し、カラムを洗浄
した。
第３ステップから第２９ステップ
第３ステップから第２９ステップまでは第２ステップと
同一の方法条件を用い，表１に示すＦｍｏ ｃ− アミ
ノ酸活性エステルを順次付加した。
同一の方法条件を用い，表１に示すＦｍｏ ｃ− アミ
ノ酸活性エステルを順次付加した。
第３０ステップ： Ｆｍｏｃ − Ｌ − Ａｌａ −
ｏｐｔ’ ｐの付加第２９ステニソプ終了後＋ ２０Ｖ
／Ｖ ％ビベリジン（７） Ｄ Ｍ Ｆ溶液を５ｍｌ
ｌ分で１０分間流し、Ｆｍｏｅ基を除去した後、ＤＭＦ
を５ ｍｌ ／分で１５分間流し，洗浄した。第３０ス
テップばに用いるＦｍｏｃ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＰｔｐ
Ｏ。８ｍｏｌ （０．３７．８ｆ ）をノ１イドロキシ
ベンゾトリアゾールのＤＭＦｌｉ（０．３３Ｍ） に
溶かし、５ ｍｅ ／分の流速で循環させながら室温に
て３０分間反応させた。反応後ＤＭＦを５ｍｌｌ分で１
０分間流し、カラムを洗浄した。再び２ ０ Ｖ／Ｖ
％ビペリジンのＤＭＦ溶液を５ ｍｌ ／分で１０分間
流しＦｍｏ ｃ基を除去した後、ＤＭＦ、塩化メチレン
の順で５ ｍｅ ／分で各１５分間洗浄した。
ｏｐｔ’ ｐの付加第２９ステニソプ終了後＋ ２０Ｖ
／Ｖ ％ビベリジン（７） Ｄ Ｍ Ｆ溶液を５ｍｌ
ｌ分で１０分間流し、Ｆｍｏｅ基を除去した後、ＤＭＦ
を５ ｍｌ ／分で１５分間流し，洗浄した。第３０ス
テップばに用いるＦｍｏｃ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＰｔｐ
Ｏ。８ｍｏｌ （０．３７．８ｆ ）をノ１イドロキシ
ベンゾトリアゾールのＤＭＦｌｉ（０．３３Ｍ） に
溶かし、５ ｍｅ ／分の流速で循環させながら室温に
て３０分間反応させた。反応後ＤＭＦを５ｍｌｌ分で１
０分間流し、カラムを洗浄した。再び２ ０ Ｖ／Ｖ
％ビペリジンのＤＭＦ溶液を５ ｍｌ ／分で１０分間
流しＦｍｏ ｃ基を除去した後、ＤＭＦ、塩化メチレン
の順で５ ｍｅ ／分で各１５分間洗浄した。
（４１ 側鎖保護基の脱保護とべブチドの切や出し第
３０ステップを終了した樹脂をカラムから取シ出し、グ
ラスフィルター上でｔ−アミルアルコールで充分洗浄し
たのち、エーテルで洗浄し、自然乾燥した（１．１４ｆ
）。
３０ステップを終了した樹脂をカラムから取シ出し、グ
ラスフィルター上でｔ−アミルアルコールで充分洗浄し
たのち、エーテルで洗浄し、自然乾燥した（１．１４ｆ
）。
コレｔ １．２ ５Ｗ／Ｖ ％ ，ｙ ｘ． ／ −
ル．、１．２５Ｗ／Ｖ係エタンジチオール、４７．５
Ｖ／Ｖ 憾ＴＦＡを含む塩化メテレン溶液に懸濁し、
１時間放置した後，炉過し、エーテルで洗浄して自然乾
燥した。
ル．、１．２５Ｗ／Ｖ係エタンジチオール、４７．５
Ｖ／Ｖ 憾ＴＦＡを含む塩化メテレン溶液に懸濁し、
１時間放置した後，炉過し、エーテルで洗浄して自然乾
燥した。
これをテフロン（商標）容器に入れ、エタンジチオール
０． ５扉ｌ＋アニソール０．５ｍｌ．トリクレゾール
０． ５ ｒｔｔｌを加え、１０分間放置した後ドライ
アイス一二タール（−６０℃）で冷却して密封，減圧下
、フフ化水素２０ｍｌを容器内に導入した。０℃で１時
間反応させ側鎖の保護基を脱離した後、減圧下でフフ化
水素を除去した。テフロ／容器の密封を解除し，エーテ
ル２００ｍ／！を加え３０分間攪拌した後、生じた沈澱
物と樹脂を済取し，エーテルで充分洗浄して自然乾燥し
た。
０． ５扉ｌ＋アニソール０．５ｍｌ．トリクレゾール
０． ５ ｒｔｔｌを加え、１０分間放置した後ドライ
アイス一二タール（−６０℃）で冷却して密封，減圧下
、フフ化水素２０ｍｌを容器内に導入した。０℃で１時
間反応させ側鎖の保護基を脱離した後、減圧下でフフ化
水素を除去した。テフロ／容器の密封を解除し，エーテ
ル２００ｍ／！を加え３０分間攪拌した後、生じた沈澱
物と樹脂を済取し，エーテルで充分洗浄して自然乾燥し
た。
沈澱物をＩＯＶ／Ｖ ％酢酸水溶液に溶解し、グラス
フィルターで炉過して樹脂を除去した。ｐ液を濃縮し、
凍結乾燥して粗ペブチド４００ｍ９を得た。
フィルターで炉過して樹脂を除去した。ｐ液を濃縮し、
凍結乾燥して粗ペブチド４００ｍ９を得た。
（５）粗ペプテドの精製
粗ペプテド３５０Ｉｎ９を［］．ＩＶ／Ｖ ％ＴＦＡ
を含む水溶液に溶解し高速液体クロマトグラフイー（Ｈ
ＰＬＣ）（逆相ＯＤＳ′ｈ７ム）に添加し、Ａ液／Ｂ液
＝２０％、Ａｉ／Ｂ液＝３０％，Ａ液／Ｂ液＝４０係の
順で溶出し，３０優溶出の分画を集め凍結乾燥した。
を含む水溶液に溶解し高速液体クロマトグラフイー（Ｈ
ＰＬＣ）（逆相ＯＤＳ′ｈ７ム）に添加し、Ａ液／Ｂ液
＝２０％、Ａｉ／Ｂ液＝３０％，Ａ液／Ｂ液＝４０係の
順で溶出し，３０優溶出の分画を集め凍結乾燥した。
凍結乾燥後同一の方法で再び精製を行い、精製ベブチド
４２ｍ９を得た。
４２ｍ９を得た。
（Ａ液：０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリルＢ液：０
．１係ＴＦＡを含む水） （６）（１，７−ジーアラニン．デス−２２−チロシン
〕カルシトニンのアミノ酸分析 得られた精製ペプチドの一部を１％フェノールを含む６
ＮＨＣｌ で加水分解し，そのアミノ酸組或を分析した
。（表１） （表 １） 理論値（ＭｏｌｃＬ） 分析値（Ｍｏ１％）
回収率（憾）ＡＳＸ ６．４５２
６．６０３ １０２．３ＴＨＲ １２．９０
３ １２．３５９ ９５．８ＳＥＲ
９．６７７ ａ７３６ ９０
．３ＧＬＸ ９．６７７ １０．４９７
１０８．５ＧＬＹ ９．６７７
１０．２７５ １０６．２ＡＬＡ ９．
６７７ １０．２８９ １０６．３ＶＡ
Ｌ ６．４５２ ６．４６１
１００．１ＬＥＵ １６．１２９ １５．
６３１ ９６．９ＴＹＲ ０
０ ０ＨＩＳ ３．２
２６ ２．９８１ ９２．４ＬＹＳ
６、４５２ ６．３４１
９８．３ＡＲＧ ３．２２６ ３．０
８９ ９５．８ＰＲＯ ６．４５２
６．７３２ １０４．３（７）（１．７
−ジーアラニン，デス−２２−テロシ／〕カルシトニン
の生物学的アッセイ〔１，７−ジーア２ニン、デス−２
２−ｆ口シン〕カルシトニンの生物学的活性をラットの
血清中カルシウム低下作用を指標として測定した。
．１係ＴＦＡを含む水） （６）（１，７−ジーアラニン．デス−２２−チロシン
〕カルシトニンのアミノ酸分析 得られた精製ペプチドの一部を１％フェノールを含む６
ＮＨＣｌ で加水分解し，そのアミノ酸組或を分析した
。（表１） （表 １） 理論値（ＭｏｌｃＬ） 分析値（Ｍｏ１％）
回収率（憾）ＡＳＸ ６．４５２
６．６０３ １０２．３ＴＨＲ １２．９０
３ １２．３５９ ９５．８ＳＥＲ
９．６７７ ａ７３６ ９０
．３ＧＬＸ ９．６７７ １０．４９７
１０８．５ＧＬＹ ９．６７７
１０．２７５ １０６．２ＡＬＡ ９．
６７７ １０．２８９ １０６．３ＶＡ
Ｌ ６．４５２ ６．４６１
１００．１ＬＥＵ １６．１２９ １５．
６３１ ９６．９ＴＹＲ ０
０ ０ＨＩＳ ３．２
２６ ２．９８１ ９２．４ＬＹＳ
６、４５２ ６．３４１
９８．３ＡＲＧ ３．２２６ ３．０
８９ ９５．８ＰＲＯ ６．４５２
６．７３２ １０４．３（７）（１．７
−ジーアラニン，デス−２２−テロシ／〕カルシトニン
の生物学的アッセイ〔１，７−ジーア２ニン、デス−２
２−ｆ口シン〕カルシトニンの生物学的活性をラットの
血清中カルシウム低下作用を指標として測定した。
得られたカルントニン類似体精製物を０． １％ＢＳＡ
を含む０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．２）に
溶解した後，ＳＤ系ラット（４週齢雄）の尾静脈よシ投
与した。投与量は１匹当り０．５ｎｇ− １．０ｎｇ．
２．０ｎｇ、４．０ｎｇ− ８．Ｏｎｇ． １６．０
ｎｇ、８０．０ｎｇ であった。
を含む０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．２）に
溶解した後，ＳＤ系ラット（４週齢雄）の尾静脈よシ投
与した。投与量は１匹当り０．５ｎｇ− １．０ｎｇ．
２．０ｎｇ、４．０ｎｇ− ８．Ｏｎｇ． １６．０
ｎｇ、８０．０ｎｇ であった。
投与後１時間経過した後，抑清中のカルシウム濃度をＯ
ＣＰＣ法（和光純薬：カルシウムＣ−テストワコー）に
よる比色定量（５７０ｎｍ）によシ測定した。血清カル
シウム濃度を１０％低下させる量ｉ１０ｍＵとしてカル
シトニン１■あタシのＵ数を求めたところ、１３００Ｕ
／■ であった。
ＣＰＣ法（和光純薬：カルシウムＣ−テストワコー）に
よる比色定量（５７０ｎｍ）によシ測定した。血清カル
シウム濃度を１０％低下させる量ｉ１０ｍＵとしてカル
シトニン１■あタシのＵ数を求めたところ、１３００Ｕ
／■ であった。
本発明は，天然型カルシトニンのシステインをアラ二ン
に置換することにより，環状構造を持たない安定な化合
物であるという特徴を有している。
に置換することにより，環状構造を持たない安定な化合
物であるという特徴を有している。
特に合成にあたっては，環状化反応が不要であるので，
副反応物が少なく精製が極めて容易である。
副反応物が少なく精製が極めて容易である。
また２２番目のチロシンを欠失させることにより，合成
が簡略化できるという効果も有している。
が簡略化できるという効果も有している。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、〔１，７−ジ−アラニン、デス−２２−チロシン〕
カルシトニン ２、カルシトニンが鰻カルシトニン置換類似体、鮭カル
シトニン置換類似体、又は鶏カルシトニン置換類似体で
ある請求項第１項記載のカルシトニン。 ３、構造式： Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ａ
ｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｓｅ
ｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ
−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−
Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｎ
Ｈ＿２、Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔ
ｈｒ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅ
ｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇ１ｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ
−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−
Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇ１ｙ−Ｔｈｒ−Ｐ
ｒｏ−ＮＨ＿２、又はＡｌａ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ
−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−
Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｈ
ｉｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ａｒ
ｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ
−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ＿２、である請求項第１項記載
のカルシトニン。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1188650A JPH0352899A (ja) | 1989-07-20 | 1989-07-20 | カルシトニン類似体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1188650A JPH0352899A (ja) | 1989-07-20 | 1989-07-20 | カルシトニン類似体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0352899A true JPH0352899A (ja) | 1991-03-07 |
Family
ID=16227438
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1188650A Pending JPH0352899A (ja) | 1989-07-20 | 1989-07-20 | カルシトニン類似体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0352899A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102341851A (zh) * | 2009-03-06 | 2012-02-01 | 株式会社Ntt都科摩 | 声音信号编码方法、声音信号解码方法、编码装置、解码装置、声音信号处理系统、声音信号编码程序以及声音信号解码程序 |
-
1989
- 1989-07-20 JP JP1188650A patent/JPH0352899A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102341851A (zh) * | 2009-03-06 | 2012-02-01 | 株式会社Ntt都科摩 | 声音信号编码方法、声音信号解码方法、编码装置、解码装置、声音信号处理系统、声音信号编码程序以及声音信号解码程序 |
| CN102737641A (zh) * | 2009-03-06 | 2012-10-17 | 株式会社Ntt都科摩 | 声音信号编解码方法、编解码装置和声音信号处理系统 |
| CN102737642A (zh) * | 2009-03-06 | 2012-10-17 | 株式会社Ntt都科摩 | 声音信号编解码方法、编解码装置和声音信号处理系统 |
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