JPH0353894A - 抗ヒトｃｄ４ペプチドに対するモノクローナル抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、　ヒトＣＤ４タンパク質の断片ペプチド（７
０−１３２）　（ＣＤ４分子のＮ末端から数えて、７０
番目から１３２番目のアミノ酸鎖より成るペプチド）を
免疫原とするモノクローナル抗体に関するものである。

ヒトＣＤ４タンパク質は、後天性免疫不全症（ＡＩＤＳ
）の原因ウイルスであるＩＩＩＶの外被糖タンパク質（
ｇｐｌ２０）と特異的に結合し、Ｔリンパ細胞をＨＩＶ
感染に導く受容体として知られ（Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ　
ｅｔ　ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ　３１２，　７６３−７６７
（１９８４），　Ｋｌａｔｚｍａｎｎ　ｅｔ　ａｌ．Ｎ
ａｔｕｒｅ　３１２，　７６７−７６８（１９８４），
　Ｍｅ．　Ｄｏｕｇａｌ　ｅｔ　ａｌ．Ｓｃｉｏｎａ　
２３１，　３８２−３８５（１９８６），　Ｓｏｄｒｏ
ｓｋｉ　ｅｔ　ａｌ．Ｎａｔｕｒ　３２２，　４７０−
４７４（１９８６），　Ｌａｓｋｙ　ｅｔ　ａｌ．　Ｃ
ｅｌｌ５０，　９７５−９８５（１９８７））、　更に
ヒトＣＤ４ペプチド（７０−１３２）は、ｇｐｌ２０と
の特異的結合領域であろうことが報告されている。

従って、ヒトＣＤ４ペプチド（７０−１３２）に対する
モノクローナル抗体は、ＨＩＶ感染機構の解析に必須で
あるばかりでなく、本抗体を応用した抗ＨＩＶ薬（イデ
ィオタイプ抗体の利用など）の開発を通じて医療界に大
きく貢献するものである。

（従来の技術） ヒトＣＤ４タンパク質は、　Ｔリンパ細胞の細胞膜を貫
通する膜タンパクである。　このＣＤ４分子は、ＨＩＶ
のレセプタータンパク質であることが解明され、不溶性
ＣＤ４分子（ＣＤ４分子中の、膜外部分のみを発現させ
た可溶性分子）が、ＣＤ４と、ＨＩＶ外被糖タンパク質
ｇｐｌ２０との結合を拮抗的に阻害することにより、　
抗旧Ｖ活性を示すことが明らかにされている。

これらのことから、ＡＩＤＳの予防・治療におけるＣＤ
４分子を介した感染機構の重要性が、認識されるに至っ
た。

ヒトＣＤ４分子全体を免疫原として作成されたマウスモ
ノクローナル抗体として、ＯＫＴ４Ａ，　Ｂ，　Ｃ，　
Ｄ，Ｅ，　Ｆ，　Ｌｅｕ３ａ，　ＭＴ１５１などが、一
般に知られ、その中でも、ＨＩＶ感染阻害作用の強い，
　ＯＫＴ４Ａに関する研究が進められたが、この抗体の
エピトープである、ヒトＣＤ４ペプチド（１１−４０）
　，　（１８−５１）　，　（１ｇ−６９）　，（２６
−４７）には、旧Ｖ感染阻害作用が認められなかった。

（Ｊａｍｅｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ．　Ｓｃｉｅｎｃｅ　２
４０．　１３３５−１３３９（１９８８）、コノためＯ
ＫＴ４Ａ　（７）有する、ＨＩＩＶ感染阻害作用は，　
ＣＤ４分子中のｇｐｌ２０とのが１合領域を直接的にブ
ロックする為に生ずるとは考えにくく、真の結合領域は
不確定なままであった。

（発明が解決しようとする問題点） このような現状を踏まえて、ＣＤ４分子中の真のｇｐｌ
２０との結合領域の固定と、これに対するモノ−３ クローナル抗体の作製が待たれていた。

ところがＣＤ４分子中のｇｐｌ２０との結合領域を解析
する手段として、モノクローナル抗体を利用した場合、
ＣＤ４分子が大きさ（５５ｋｄ）に比べ、抗体分子は、
かなり大きいため（約］．５０ｋｄ）、抗体結合時には
、その大きさによる立体障害が、ｇｐｌ２０との結合性
に大きく反映されることが当然予想され、判定を誤りか
ねない。このため、本研究者等は、ヒトＣＤ４分子の部
分ペプチドを多数（１６種類）作製し、このヒトＣＤ４
ペプチドの示す、拮抗的なＩＩＩＶ感染阻害活性を基に
、ＣＤ４分子中のｇｐｌ２０との結合領域を調査した。

このＣＤ４ペプチドはＣＤ４分子に比べ、約１７７であ
るので、立体障害は極小さいものと思われる。従って、
このＨＩＶ感染阻害活性を有するＣＤ４ペプチドは、真
のｇｐｌ２０との結合領域であると考えられ、これを免
疫原として作製されたモノクローナル抗体は、ＣＤ４分
子上のｇｐｌ２０との結合領域をエピトープとするもの
であり、旧■感染機構の解析に幅広く応用可能なはずで
ある。

（問題点を解決するための手段） −４ 本発明者等は、このような問題点を解決すべく、鋭意研
究を重ねた結果、ＨＩＶ感染阻害活性を有するヒトＣＤ
４ペプチド（７０−１３２）、ペプチド（６８−９４）
、ペプチド（８６−１０４）、ペプチド（１０５−１２
０）を化学合或し、これを免疫原として動物に免疫し、
その動物のリンパ球と骨髄腫細胞（ミエローマ）とを融
合させることにより得られたハイブリドーマ細胞株３株
が、それぞれ抗ＣＤ４ペプチド（７０−１３２）　，　
（６８−９４），　（８６−１０４）抗体を生産するこ
とを発見し、本発明を完成させたのである。

即ち、ハイブリドーマＣＰ−９（ＦＥＲＭ　Ｐ−１０８
６４）がＣＤ４ペプチド（７０−１３２）に結合する抗
体を生産し、ハイブリドーマＣＰ−１（ＦＥＲＭ　Ｐ−
１０８６２）がＣＤ４ペプチド（７０−１３２）及び（
６８−９４）に結合する抗体を生産し、、ハイブリドー
マＣＰ−２（ＦＥＲＭ　Ｐ−１０８６３）がＣＤ４ペプ
チド（７０−１３２）及び（８６−１０４）に結合する
抗体を生産することを見出したものである。

次に本発明を詳細に説明する。

本発明のモノクローナル抗体を製造するに際しては、ま
ず抗原となるヒトＣＤ４ペプチド（７０−．１．３２）
を用意する。本発明においては、この６３残基のペプチ
ドを化学合或により作製した。

本発明者らは、Ｆｍｏｃアミノ酸を使用した固相合戒法
（Ｓｈｅｐｐａｒｄ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｊ．　Ｃｈｅｎ
＋．　Ｓｏｃ．，　Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，　１６５−
１６６（１９８５））　を採用し、当ペプチドを高純度
で合成した。アミノ酸配列は、Ｍａｄｄｏｎらの報告（
Ｍａｄｄｏｎ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｅｌｌ，　４７，
　３３３−３４８（１９８６））に基いて決定した。

まずそれぞれの部分ペプチドのＣ一末端に相当するＦｍ
ｏｃアミノ酸ペンタフルオロフェニル（Ｐｆｐ）エステ
ルをジメチルホルムアミド中で４−ジメチルアミノピリ
ジン存在下、ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂に
結合させ、次いで結合すべき別のＦｍｏｃアミノ酸Ｐｆ
ｐエステルと縮合反応により結合させた。

また、スレオニンとセリンについては１−オキソ２−ヒ
ドロキシージヒドローペンゾトリアジン（ＤＥＢＴ）エ
ステルを用いて導入した。各アミノ酸のカップリング反
応終了後、ペプチドの結合した樹脂を２０％ピペリジン
・ジメチルホルムアミド混液で処理してＮ末端Ｆｍｏｃ
基を除去し、次いでｍ−クレゾール存在下、室温にてＴ
ＦＡ−チオアニソールを作用させて脱保護をすると同時
に、目的とする部分ベブチドを樹脂より回収した。また
、アルギニン残基を含むペプチドはトリメチルシリルブ
口ミト（ＴＮＳＢｒ）チオアニソール／ＴＦＡで処理を
行った。

本発明者らは上述の方法によりＣＤ４分子の部分ペプチ
ドを合威したが、その方法はこれに限られるわけではな
く他の化学合或法や当該部分ペプチドに対応するＤＮＡ
を得て、これを適当なベクターに押入し、動物細胞や養
生物で発現させて目的とする部分ペプチドを得ても良い
のである。

次に、得られた抗原で咄乳動物、好ましくはマウス又は
ラットに免疫するが、例えばマウスを用いる場合５〜ｌ
Ｏ週令が好ましく、マウス１匹あたり１回につき０．０
０１〜１ｍｇ、好ましくは５０−２００μｇをアジュバ
ント、例えばフロイントの完全アジュバントと良く混合
して投与する。投与は皮下注射、静脈内注射、腹腔内注
射Ａ５により行なわれる。その後、１〜３週ごとに再び
アジュバント、７ 例えばフロイントの不完全アジュバントと良く混合して
皮下、静脈内、腹腔内等に１〜５回投与して、十分免疫
する。

このようにして免疫された動物から、最終免疫の２〜４
日後に、リンパ球を採取する。リンパ球調製には牌臓、
リンパ篩、末梢血等が用いられる。

このリンパ球を骨髄腫細胞（ミエローマ）と融合させる
。

骨髄腫細胞としては、特定酵素の欠損した細胞、例えば
マウ．Ｘ　ミｘ　ｏ　−　マＰ３−Ｘ６３−Ａｇ８−Ｕ
ｌ　（Ｐ３−Ｕｌ）、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８−６５３（
Ｘ６３−６５３）、Ｐ３−ＮＳＩ−１−Ａｇ４−１（Ｎ
Ｓ−１）、ラットミエローマ２１０−ＲＣＹ３−Ａｇｌ
２３等が好ましい。細胞融合はケラーとミルシュタイン
の方法（ネイチャー２５６，　４９５−４９７．　１９
７５）により行うことができる。

細胞融合の終了後、選択培地、例えばＲＡＴ（ヒボキサ
ンチンーアミノブテリンーチミジン）培地によりハイブ
リドーマを選択する。

ヒトＣＤ４ペプチド（７０−１３２）に対する抗体を産
生じているハイブリドーマを、後記の酵素免疫測定８ 法により選出しその後限界希釈法によるクローニングを
ｌ〜３回くり返すと、モノクローナル抗体を産生ずるハ
イブリドーマ細胞を得た。

得られたハイブリドーマは、（７０−１３２）のアミノ
酸６３残基中、どのような部域を認識しているのかを調
べるため、（７０−１３２）を三領域に大きく分け、こ
れらとの反応性により分離した。すなわち、（６８−９
４）　，　（８６−１０４）　，　（１０５−１２０）
を抗原として、酵素免疫測定法により検索したところ、
（７０−１３２）と反応するクローン株（ハイブリドー
マＣＰ−９としてＦＥＲＭ　Ｐ−１０８６４の番号で寄
託されている。）の他にに（６８−９４）とも反応する
クローン株（ハイブリドマＣＰ−１としてＦＥＲＭ　Ｐ
−１０８６２の番号で寄託されている。）、また（８６
−１０４）とも反応するクローン株（ハイブリドーマＣ
Ｐ−　２としてＦＥＲＭ　Ｐ−１０８６３の番号で寄託
されている。）を得た。（１０５−１２０）と反応する
ものは検出されなかった。

このように、本発明のモノクローナル抗体には異ったエ
ピトープ（少なくとも３種）を認識するものが存在し、
ＣＤ４分子と、ｇｐｌ２０との結合部位を検索する上に
おいては、好都合である。

こうして得られたモノクローナル抗体産生ハイブリドー
マ細胞株を同系の動物の腹腔内に接種し、増殖させたの
ち腹水を採取することにより、あるいは培養器で培養す
ることにより、目的のモノクローナル抗体を得ることが
できる。

こうして得られた抗体は必要に応じ精製して使用するこ
とができる。すなわち硫安分画、イオン交換体、ゲル濾
過、アフィニティクロマトグラフイーなどの、通常タン
パン質に適用される方法を用いて精製することができる
。

また本発明で得られたモノクローナル抗体は、ＭＯＬＴ
−４、ＭＴ−４などｃｏ４（＋）細胞の膜に存在するＣ
Ｄ４分子と、直接反応することが、ウエスタンプロット
を用いて調べることにより判明した。上記の細胞をＩ　
Ｘ　１０７個程度集め、Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００、Ｎ
Ｐ．４０などの界面活性剤を０．１％含むＰＢＳで細胞
をホモジナイズし、ＩＸ１０Ｓｇ、６０分の遠心上清を
得て、これを硫安塩析により濃縮した。次に、この膜粗
画分をＬａｅｍｍｌｉの方法　（Ｎａｔｕｒｅ，　２２
７，　６８０（１９７０））に従うｓｏｓ−ｉｏ％ポリ
アクリルアミドゲル電気泳動により分離し、更に、Ｔｏ
ｗｂｉｎ等の方法（Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ，　７６．　４３５０−４３５４（
１９７９））に従ってウエスタンブロッテイングを行っ
た。ベルオキシダーゼを結合した２次抗体により発色さ
せると、ＣＤ４分子の分子量５５，０００に対応する部
分に特異的に発色するバンドが見られ、またこのバンド
は，抗ＣＤ４モノクローナル抗体、ＯＫＴＪとも反応し
た。

これらのことにより、ＣＤ４ペプチドを免疫原として作
製されたモノクローナル抗体が、ＣＤ４タンパク質とも
反応することが確認された。

さて、本発明で得られたモノクローナル抗体は、ＣＤ４
分子と結合性を有し、かつ、ＨＩＶ　ｇｐｌ２０との特
異的結合部位を認識しているので、ＨＩＶ感受性細胞と
ＨＩＶとの感染モデル系に応用した結果、ＨＩＶ感染阻
害作用（阻害率〜７５％）を有することが示された。

実施例 （１）免疫マウス牌細胞の調製 ５週令のＢＡＬＢ／ｃ雌マウス（日本チャールズリー１
１ バー社より入手）に、ヒトＣＤ４ペプチド（７０−１３
２）２００μｇをフロイントの完全アジュバンｉ・と共
に腹腔内投与して免疫した。更に２週間後に同ペプチド
５００μｇをＰＢＳに溶解して腹腔内投与して、追加免
疫した。３日後に牌臓を摘出しＲＰＭＩ−１６４０培地
中でほぐし、懸濁、洗浄し、融合用の牌細胞を調製した
。

（２）マウス骨髄腫細胞（ミエローマ）の調製マウスミ
エＯ　−　マＰ３−Ｘ６３−Ａｇ８−０１を１０％ＦＣ
Ｓ含有ＤＭＥＭ培地で培養し、対数増殖期にある細胞を
集め、融合用の親株とした。

（３）細胞融合 （１）と（２）で得られた牌細胞（２×ＩＯ＋１個）と
、マウス骨髄腫細胞（２　Ｘ　１０７個）とを混合し、
遠心分離して上清を捨ててペレットをよくほぐし、５０
％ポリエチレングリコール１５００　（ベーリンガーマ
ンハイム社製）１ｍＱを１〜２分間で徐々に加え細胞融
合を行った。更に、約１０分間かけてＤＭＥＭ培地１　
０ｍｌ２を攪拌しながら滴下し融合を完成させた。これ
に、ＦＣ５　１　ｍＱを加え融合反応を停止した。

１２ 遠心分離により上清のボリエチレングリコール溶液を除
き、ペレッ１−を１０％ＦＣＳを含むＤＭ［ＥＭ１？“
ｆ地で洗い、遠心分離によって上清を除いた。ペレット
をＨＡＴ培地（１００μ阿とポキサンチン、０．４μＮ
アミノプテリン、１６μＮチミジン、０．０３％し−グ
ルタミン、１５％ＦＣＳを含むＤＭＥＭ培地）により懸
濁し、５×１０４細胞／穴となるように９６穴培養プレ
ートに０．２一／穴づつ分注した。炭酸ガス培養器中、
３７℃の条件下で培養し、１日おきにＨＡＴ培地を０．
１ｍＱ／穴づつ新鮮なものと交換した。７〜１０日間培
養、育威し、ハイブリドーマコロニーを得た。

〔酵素免疫測定法〕

ＥＬＩＳＡ用９６穴アミノプレート（住友ベークライト
社製）に、ＰＢＳで溶解したヒトＣＤ４ペプチド（０．
１〜１μｇ／ｍＱ）を５０μＱ／穴づつ分注し、室温で
１〜４時間放置してプレート穴底面に吸着させる。０．
１５Ｈの塩化ナトリウムを含むリン酸バッファ一（ＰＢ
Ｓ、ｐＨ７．４）で３回洗浄した後、３％力ゼインナト
リウムを含むＰＢＳを各穴に満たし室温で１時間静置し
、プレート穴全体をカゼインでコーティングする。

各穴の液を捨てた後、ＰＢＳで洗浄し、ハイブリドーマ
培養上清液を５０μ氾／穴加え、室温でｌ〜４時間放置
する。０．０５％Ｔｔｚｅｅｎ２０を含むＰＢＳで５回
洗浄、ＰＢＳＡで２回洗浄後、ベルオキシダーゼ結合抗
マウスＩｇＧ抗体（バイオランド社製）の４０００倍Ｐ
ＢＳ希釈液を５０μ息／穴分注し、室温で１〜２時間放
置する。０．０５％Ｔｗｅｅｎ　２０−ＰＢＳで５回洗
浄、ＰＢＳで２回洗浄後１０ｍＭオルトフェニレンジア
ミン−０．０２５％ＢＳＡを含む５０ｍＭ酢酸ナトリウ
ムバッファ−　（ｐ｝１５．０）と０．１％過酸化水素
水とを３：１に混合した発色液を５０μ氾／穴加え室温
で１５〜３０分放置して反応させる。これに、０．１％
亜硫酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ０３　）を含むＩＮ硫酸を
１５０μＱ／穴加え反応を停止後、４９２ｎｍで測定す
る。求めるハイブリドーマの検索に際しては、高い測定
値を示した上清液の株を選択すれば良い。

（４）ハイブリドーマのスクリーニングとクローニング 各穴の培養上清液をとり、前述の酵素免疫測定法に供し
た。抗原には、ヒトＣＤ４ペプチド（７０−１３２）を
用いた。抗体産生を示した穴のハイブリドーマは、限界
希釈法にてクローニングを行い、抗ヒトＣＤ４ペプチド
（７０−１３２）抗体を産生ずるクローン１１株（ＣＰ
Ｉ−１１）を得た。

（５）モノクローナル抗体のエピトープ検索抗原として
、ヒトＣＤ４ペプチド（６ｇ−９４）　，　（８６−１
０４）　，（１０５−１２０）を用い、（７０−１３２
）と反応した穴の培養上清液を試料として、前述の酵素
免疫測定法に供した。　（６８−９４）と反応する１ク
ローン、（８６−１０４）と反応する２クローンを得た
。（表−１）（６）モノクローナル抗体の精製 上記（５）で得たハイブリトーマ１１株を無血清培地Ａ
ＳＦ１０３（味の素社製）で各々５０＋ｎｆｌずつ培養
し、細胞濃度１×ｌＯ４個／ｍＱとなった培養物を遠心
分離し、その上養液をプロテインＡ−アガロース（バイ
オランド社製）又はレンチルレクチンーセファロース（
ファルマシア社製）にかけ、前者ではｐＨ４．０のクエ
ン酸緩衝液、後者では１０％メチルーα一Ｄ−マンノピ
ラノシド含有ＰＢＳで溶出したのち、ＰＢＳに透析して
各精製モノクローナル抗体（ｃｒｔ−１１）を得た。

１５− 上記（６）で得たモノクローナル抗体のＣＤ４分子との
反応性を、ウエスタンプロット法を用いて確認した。

〔ウエスタンプロット法によるＣＤ４分子との反応性の
確認〕 ＭＯＬＴ−４細胞（ＣＤ４　＋　）Ｉ　Ｘ　１０７個を
０．１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ１００を含むＰＢ３　３　ｍ
Ｑに懸濁し、Ｐｏｔｔｅｒ型ホモジナイザーでホモジナ
イズした。これをＩＸ１０’ｇ、１時間遠心し、上清を
膜粗画分とした。硫酸アンモニウムを加え、８０％飽和
硫安沈澱画分を、透析、凍結乾燥し、電気泳動の試料と
した。０．１％ＳＯＳを含む１０％ポリアクリルアミド
ゲルで電気泳動、分離させた後、２０％メタノールを含
有する２５ｍＭ　トリスヒドロキシアミノメタン−１９
２ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ８．３）内でタンパク質を
ポリアクリルアミドゲルからニトロセルロースペーパー
に電気的に転写した。ニトロセルロースペーパーを１％
力ゼインーＰＢＳに室温、ｌ時間浸してコートした。次
に各モノクローナル抗体と各々４℃で一晩反応させ、ｌ
６ 洗浄し、ベルオキシダーゼ認識した抗マウスＩｇＧ（Ｈ
　十Ｌ）　（カッペル社製）の１００倍希釈液を室温で
約２時間反応させた。洗浄後、４−クロロー１−ナフト
ール（生化学工業社製）０．５ｍｇ／Ｊ．過酸化水素水
０．０２％を含むベルオキシダーゼ基質液を室温で３０
分反応させ、発色するタンパク質のバンドを調べた。

上記（６）で得た１１種のモノクローナル抗体は、いず
れもヒトＣＤ４分子の分子量５５０００と一致するタン
パク質のみに特異的に反応した。

表−１ モノクローナル抗体のエピトープ検索 ｃｐ−１　　　　　　　（＋）　　　　（＋）ｃｐ−２
　　　　　　（＋）　　　　　　　　（＋）ＣＰ−３　
　　　　　　（＋） ＣＰ−　４　　　　　　　（　＋） ＣＰ−５　　　　　　　（＋） ＣＰ−６　　　　　　　（＋） ＣＰ−７　　　　　　　（＋） ｃｐ−ｓ　　　　　　　（＋） ＣＰ−９　　　　　　　（＋） ＣＰ−１０　　　　　　　（＋） ＣＰ−１１　　　　　　（＋）　　　　　　　　　（＋
）（＋）：反応性有り 尚、本発明におけるヒトＣＤ４ペプチドのアミノ酸一次
構造配列は以下の通りである。

（１）ペプチド（７０−１３２） Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｉ１ｅ−Ｉ１ｅ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｌ
ｅｕ−Ｌｙｓ−Ｉ１ｅ−Ｇ　ｌｕ−Ａ　ｓｐ−Ｓｅｒ−
　Ａ　ｓｐ−　Ｔｈ　ｒ−　Ｔｙｒ−　Ｉ　ｌｅ−Ｃｙ
　ｓ−Ｇｌｕ−　Ｖａ　ｌ−　Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ
−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−
Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ａ
ｌａ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｌｅ
ｕ−Ｌｅｕ−Ｇ１ｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ
−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−
Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓ
ｅｒ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ（２）ペプチド（６８−
９４） Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｉ１ｅ−Ｉ１ｅ−Ｌ
ｙｓ−ＡｓｎＬｅｕ−Ｌｙｓ−Ｉ１ｅ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ
−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｉ１ｅ−Ｃｙｓ−
Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｇ
ｌｕ−Ｇｌｕ （３）ベプチド（８６−１０４） Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｌ
ｙｓＧｌｕ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ
−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ａｌａ （４）ペプチド（１０５−１２０） Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌ
ｅｕＧｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ
−ＬｅｕＴｈｒ−Ｌｅｕ

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒトＣＤ４ペプチド（７０−１３２）と反応する
   モノクローナル抗体。
2. （２）ヒトＣＤ４ペプチド（６８−９４）と反応するモ
   ノクローナル抗体。
3. （３）ヒトＣＤ４ペプチド（８６−１０４）と反応する
   モノクローナル抗体。