JPH0353900A - 淋菌特異性オリゴヌクレオチドゾンデ及び病原性ナイセリア種淋菌の検出法 - Google Patents
淋菌特異性オリゴヌクレオチドゾンデ及び病原性ナイセリア種淋菌の検出法Info
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- JPH0353900A JPH0353900A JP2182861A JP18286190A JPH0353900A JP H0353900 A JPH0353900 A JP H0353900A JP 2182861 A JP2182861 A JP 2182861A JP 18286190 A JP18286190 A JP 18286190A JP H0353900 A JPH0353900 A JP H0353900A
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- neisseria
- sonde
- neisseria gonorrhoeae
- gonococcus
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は特異性核酸ゾンデ及び病原体淋菌（Ｎｅｉｓｓ
ｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）の検出法に関する
。
ｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）の検出法に関する
。
従来の技術
淋菌は淋疾、すなわち今日なお最も多い届出義務のある
感染症の病原体である（也界保健統計年鑑（Ｗｏｒｌｄ
ＩｌｅａｌＬｈ ＳＬａｌ；ｉｓｔｉｃｓ 八ｎｎｕ
ａｌ）、１９７９年、Ｇｅｎｅｖａ在、ｌｌｌｌ｛０）
。男性の場合生殖器感染は尿道口の膿性炎症及び腫順に
よって認識することができる。この症状は感染事例の９
０％において生じる。未治療の場合この感染は上行し、
数週間後には前立腺炎の徴候を生じる。これに対し女性
の場合には感染事例の５０％で何らの症状も生じないか
又は極く僅かな徴候が現れるにすぎない。感染は特に頚
管で生じるが、尿道において．も起こり得る。女性のｌ
Ｏ〜１５％ではこの感染は卵管に移行し、その結果特に
不妊症となる可能性がある。男性又は女性の事例の１〜
３％ではこの病原体により全身系の発病が起こり得る。
感染症の病原体である（也界保健統計年鑑（Ｗｏｒｌｄ
ＩｌｅａｌＬｈ ＳＬａｌ；ｉｓｔｉｃｓ 八ｎｎｕ
ａｌ）、１９７９年、Ｇｅｎｅｖａ在、ｌｌｌｌ｛０）
。男性の場合生殖器感染は尿道口の膿性炎症及び腫順に
よって認識することができる。この症状は感染事例の９
０％において生じる。未治療の場合この感染は上行し、
数週間後には前立腺炎の徴候を生じる。これに対し女性
の場合には感染事例の５０％で何らの症状も生じないか
又は極く僅かな徴候が現れるにすぎない。感染は特に頚
管で生じるが、尿道において．も起こり得る。女性のｌ
Ｏ〜１５％ではこの感染は卵管に移行し、その結果特に
不妊症となる可能性がある。男性又は女性の事例の１〜
３％ではこの病原体により全身系の発病が起こり得る。
ずなわち間節炎、心内膜炎及びＪＩ！膜炎を誘発ずる可
能性がある。これらの感染はしばしば無症候的に進行す
ることから、多くの保菌者は知らないうちに病気の蔓延
に加担することになる（デービス（Ｄａｖｉｓ）その他
「マイクロバイオロジー」（旧ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）
、Ｉｌａｒｐｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄ
ｉＬｉｏｎ版）。
能性がある。これらの感染はしばしば無症候的に進行す
ることから、多くの保菌者は知らないうちに病気の蔓延
に加担することになる（デービス（Ｄａｖｉｓ）その他
「マイクロバイオロジー」（旧ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）
、Ｉｌａｒｐｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄ
ｉＬｉｏｎ版）。
ナイセリア属は狭い同系のダラム陰性双球菌の１グルー
プであり、これには病原性兼びに非病原性の種が属する
。従って淋菌と、人の粘膜で増殖する他の非病原性種と
の識別は後の治療にとって極めて重要な意味をもつ。従
って淋疾の診断を専ら鏡検によって行う場合には、しば
しば混同する危険性がある。
プであり、これには病原性兼びに非病原性の種が属する
。従って淋菌と、人の粘膜で増殖する他の非病原性種と
の識別は後の治療にとって極めて重要な意味をもつ。従
って淋疾の診断を専ら鏡検によって行う場合には、しば
しば混同する危険性がある。
淋菌の決定的な診断検ｊｕ法は培養の使用を前提とする
。しかしこの場合にはしばしば材料の移送及び培養に関
して問題がある．それというのも淋菌はその自己分解的
酵素系により温度変化及び乾燥のような環境の影響に極
めて敏感であるからである。更に潜伏期は少なくとも２
０時間であることから、その培養には時間がかかる。こ
のため病原体の培養並ひに決定的な同定は困難な場合が
あり、従って微生物研究所で実施ずる必要のある事例は
多い。培養した淋菌の分化は炭水化物の分解、酸化酵素
反応、共同凝集反応による抗原検出及び蛍光一抗体一選
別法によって行う。
。しかしこの場合にはしばしば材料の移送及び培養に関
して問題がある．それというのも淋菌はその自己分解的
酵素系により温度変化及び乾燥のような環境の影響に極
めて敏感であるからである。更に潜伏期は少なくとも２
０時間であることから、その培養には時間がかかる。こ
のため病原体の培養並ひに決定的な同定は困難な場合が
あり、従って微生物研究所で実施ずる必要のある事例は
多い。培養した淋菌の分化は炭水化物の分解、酸化酵素
反応、共同凝集反応による抗原検出及び蛍光一抗体一選
別法によって行う。
淋菌を培養するため選択培地を使用するが、これには例
えばナイセリア・ラクタミカ（Ｎ．ｌａｃｔａｍｉｃａ
）のような非病原性のナイセリア種も発育する可能性
がある。このことから混同の危険性が生じ、これは精密
で、費用の嵩む生化学分化によってのみ阻止することが
できるにすぎない。従って迅速かつ特異的に淋菌の検出
を行うことのできる診断テストを開発することが試みら
れてきた。
えばナイセリア・ラクタミカ（Ｎ．ｌａｃｔａｍｉｃａ
）のような非病原性のナイセリア種も発育する可能性
がある。このことから混同の危険性が生じ、これは精密
で、費用の嵩む生化学分化によってのみ阻止することが
できるにすぎない。従って迅速かつ特異的に淋菌の検出
を行うことのできる診断テストを開発することが試みら
れてきた。
近年病原菌を同定するため、迅速性の観点から核酸雑種
形成の牽引技術が開発された。淋菌に対しても核酸ゾン
デを診断に利用することが試みられている。
形成の牽引技術が開発された。淋菌に対しても核酸ゾン
デを診断に利用することが試みられている。
診断に使用することのできる核酸ゾンデは２つの判定基
準を満たしていなければならない。
準を満たしていなければならない。
まずこのゾンデは特異性でなければならない。
５
すなわち偽肯定（ ｆａｌｓｃｈ−ｐｏｓｉＬｉｖｅ）
試験結果を排除し得るために、被検病原体の核酸とのみ
雑種形成されるべきである。このゾンデはまた敏感でな
ければならない。すなわち核酸雑種形戒により僅かな病
原体をも検出可能であるべきであり、これにより感染の
初期における偽否定（ｆａｌｓｃｈ−ｎＢａｔ．ｉｖｅ
）試験結果を咀止することができる。
試験結果を排除し得るために、被検病原体の核酸とのみ
雑種形成されるべきである。このゾンデはまた敏感でな
ければならない。すなわち核酸雑種形戒により僅かな病
原体をも検出可能であるべきであり、これにより感染の
初期における偽否定（ｆａｌｓｃｈ−ｎＢａｔ．ｉｖｅ
）試験結果を咀止することができる。
数年前からリポソームＲ Ｎ Ａ （ ｒＲＮ Ａ
）に対して相補性である核酸−ゾンデを用いて、特異的
に生体を検出し得ることは公知である。この種のゾンデ
は、細胞１個当たり（ ｒｌ”ｊＮＡの）コピー１０
００〜１０，０００個を有することから感受性が高いと
いう利点を有する。
）に対して相補性である核酸−ゾンデを用いて、特異的
に生体を検出し得ることは公知である。この種のゾンデ
は、細胞１個当たり（ ｒｌ”ｊＮＡの）コピー１０
００〜１０，０００個を有することから感受性が高いと
いう利点を有する。
このｒＲＮＡ−特異試料を用いて生体を同定する方法は
すでにいくつかの文献に記載されている（欧州特許第０
１５５ ３５９号明細書、Ｉ’ＣＴ ＷＯ８４／０２
７２１号明細書、欧州特許出願公開第００７６ １２３
号明細書〉。
すでにいくつかの文献に記載されている（欧州特許第０
１５５ ３５９号明細書、Ｉ’ＣＴ ＷＯ８４／０２
７２１号明細書、欧州特許出願公開第００７６ １２３
号明細書〉。
淋菌に関しても、その配列が１６ＳｒＲＮＡの６
部分領域に対して相補的なゾンデを、この病原体の特異
検出のために使用してきた。この場合ゾンデの配列は、
淋菌からのヌクレオチド１５４４個を有ｔる１６Ｓ１・
Ｒ Ｎ Ａの３つの部分領域（ヌクレオチド位＝１２５
〜１５０、４５５〜４８５、９８０〜１０１５）からｆ
１￥たちのであった。」−記の各ゾンデは混合物として
、種々のナイセリア種［淋菌、髄膜炎菌（ Ｎ．ｍｅｎ
ｉｎｇｉｔｉｄｊｓ） 、ナイセリア・キネレア（ Ｎ
．ｃｉｎｅｒｃａ ） 、ナイセリア・ラクタミカ、ナ
イセリア・ムコーザ（ Ｎ．ｍｕｃｏｓａ ）及びナイ
セリア・ザブフラバ（Ｎ．ｓｕｂｆｌａｖａ） ］及び
キンゲラ・キンガエ（Ｋｉｎｇｅｌｌａ Ｋｉｎｇａｅ
）から分離されたすべてのＲＮＡに対して雑種形成を生
じた。その結果これらの試料は淋菌に対して特異性であ
ると見做されたく欧州特許出願公開第０ ２７２ ００
９号明細書）。
検出のために使用してきた。この場合ゾンデの配列は、
淋菌からのヌクレオチド１５４４個を有ｔる１６Ｓ１・
Ｒ Ｎ Ａの３つの部分領域（ヌクレオチド位＝１２５
〜１５０、４５５〜４８５、９８０〜１０１５）からｆ
１￥たちのであった。」−記の各ゾンデは混合物として
、種々のナイセリア種［淋菌、髄膜炎菌（ Ｎ．ｍｅｎ
ｉｎｇｉｔｉｄｊｓ） 、ナイセリア・キネレア（ Ｎ
．ｃｉｎｅｒｃａ ） 、ナイセリア・ラクタミカ、ナ
イセリア・ムコーザ（ Ｎ．ｍｕｃｏｓａ ）及びナイ
セリア・ザブフラバ（Ｎ．ｓｕｂｆｌａｖａ） ］及び
キンゲラ・キンガエ（Ｋｉｎｇｅｌｌａ Ｋｉｎｇａｅ
）から分離されたすべてのＲＮＡに対して雑種形成を生
じた。その結果これらの試料は淋菌に対して特異性であ
ると見做されたく欧州特許出願公開第０ ２７２ ００
９号明細書）。
このゾンデ混合物を、選択された最も異なる種（下記参
照〉で検査した。その際この公知ゾンデは、非病原性で
はあるが淋菌と極めて近似する種であ、るナイセリア・
デニトリフイカンツ（ Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｄｅｎｉ
ｔ；ｒｉｆｉｃａｎｓ ）の核酸と雑種形威ずることが
検出された。
照〉で検査した。その際この公知ゾンデは、非病原性で
はあるが淋菌と極めて近似する種であ、るナイセリア・
デニトリフイカンツ（ Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｄｅｎｉ
ｔ；ｒｉｆｉｃａｎｓ ）の核酸と雑種形威ずることが
検出された。
発明が解決しようとする課題
従って本発明の課題は、従来公知のｒｌ”ｊＮＡゾンデ
とは異なり高められた特異性を有し、これにより病原性
の押を確実に定性的及び定量的に検出することを可能と
する、淋菌用の検出ゾンデを提供ずることにあった。
とは異なり高められた特異性を有し、これにより病原性
の押を確実に定性的及び定量的に検出することを可能と
する、淋菌用の検出ゾンデを提供ずることにあった。
課題を解決１るための手段
この課題は、オリゴヌクレオチドＲＳ２及びＲＳ３の群
から選択される、淋菌に対して特異性のヌクレオチドー
ゾンデによって解決される。ＲＳ２又はＲＳ３のオリゴ
ヌクレオチドは、その配列又はその配列の１部が淋菌の
１６３ ｒＲ Ｎ Ａの部分領域Ｒ２及びＲ３に対して
相補的であることによって特徴づけられ、これに関して
は第１表に示した通りである。
から選択される、淋菌に対して特異性のヌクレオチドー
ゾンデによって解決される。ＲＳ２又はＲＳ３のオリゴ
ヌクレオチドは、その配列又はその配列の１部が淋菌の
１６３ ｒＲ Ｎ Ａの部分領域Ｒ２及びＲ３に対して
相補的であることによって特徴づけられ、これに関して
は第１表に示した通りである。
第１表
領域 淋菌の１６ｓ ｒＲＮＡ上のヌクレオチド位Ｒ
２ ８２０−８６０ ＡＴＧ
ＴＣＡ八ＴＴ八ＧＣＴＧＴＴＧＧＧＣ ＡＡＣＴＴＧＡＴＴＧ ＣＴＴＧＧＴＡＧＣＧ ゛ｒ Ｒ３ ６５ − ｔｏｏ
ＧＧＡＣＧＧＣ八ＧＣＡＣＡＧＧＧ八八ＧＣ ＴＴＧＣＴＴＣＴＣＧ ＧＧＴＧＧＣ このゾンデを用いて淋菌の特異検出を達或ずることがで
きる。ナイセリア・デニトリフイ力ンスのような近似の
ナイセリア種との雑種形成並びに他の種との雑種形成は
認められなかった。このゾンデの高い特異性は極めて有
意義である。なぜなら被検物（例えば塗抹標本〉には、
人の粘膜の成・分である多くの非病原性ナイセリア種が
存在し得るからである。この理由から人の粘膜で増殖す
るが、ナイセリア種ではない他の微生物も特異性的に鑑
別された。
２ ８２０−８６０ ＡＴＧ
ＴＣＡ八ＴＴ八ＧＣＴＧＴＴＧＧＧＣ ＡＡＣＴＴＧＡＴＴＧ ＣＴＴＧＧＴＡＧＣＧ ゛ｒ Ｒ３ ６５ − ｔｏｏ
ＧＧＡＣＧＧＣ八ＧＣＡＣＡＧＧＧ八八ＧＣ ＴＴＧＣＴＴＣＴＣＧ ＧＧＴＧＧＣ このゾンデを用いて淋菌の特異検出を達或ずることがで
きる。ナイセリア・デニトリフイ力ンスのような近似の
ナイセリア種との雑種形成並びに他の種との雑種形成は
認められなかった。このゾンデの高い特異性は極めて有
意義である。なぜなら被検物（例えば塗抹標本〉には、
人の粘膜の成・分である多くの非病原性ナイセリア種が
存在し得るからである。この理由から人の粘膜で増殖す
るが、ナイセリア種ではない他の微生物も特異性的に鑑
別された。
特異性に関する特に良好な結果は一定のゾンデで達戒さ
れる。
れる。
本発明の特に優れた１実施態様では、淋菌特異性核酸ゾ
ンデとして、その配列が第２表から明らかである１８個
又は２８個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド
ＲＳ２”又は／及びＲＳ３８を使用ずる。
ンデとして、その配列が第２表から明らかである１８個
又は２８個のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド
ＲＳ２”又は／及びＲＳ３８を使用ずる。
同様に淋菌を検出するために、全領域Ｒ２又はＲ３に対
して相補的でありまたＲＳ２一又はＲＳ３°で示される
核酸−ゾンデを使用ずることが特に有利である。従って
ＲＳ２−はヌクレオチド４１個の長さをまたＲＳ３”は
ヌクレオチド３６個の長さをイｆする。
して相補的でありまたＲＳ２一又はＲＳ３°で示される
核酸−ゾンデを使用ずることが特に有利である。従って
ＲＳ２−はヌクレオチド４１個の長さをまたＲＳ３”は
ヌクレオチド３６個の長さをイｆする。
本発明によるゾンデはヌクレオヂド少なくとも１４個の
長さであり、その５゜一及び／′又は３′末端に別のヌ
クレオチド、有利には１０個までのヌクレオチドを有し
ていてもよい。
長さであり、その５゜一及び／′又は３′末端に別のヌ
クレオチド、有利には１０個までのヌクレオチドを有し
ていてもよい。
この場合ゾンデの付加的なヌクレオチドは任意のヌクレ
オチドであってよいが、ｌ６ＳｒＲＮＡの５′一又は３
゛一末端に存在するヌクレオチドに対して相補的である
ヌクレオチドが有利である。
オチドであってよいが、ｌ６ＳｒＲＮＡの５′一又は３
゛一末端に存在するヌクレオチドに対して相補的である
ヌクレオチドが有利である。
１０
本発明による、淋菌に対して特異性の核酸ゾンデは更に
種々異なる形で存在することもできる。すなわちこのゾ
ンデは一本鎖オリゴヌクレオヂドとして、相補的オリゴ
ヌクレオチドと共に二本鎖オリゴヌクレオチド断片とし
て、又は淋菌からのＤＮＡ又はＲＮＡに対する相同性を
有さない他の配列、例えばクローニングベクターと結合
して存在していてもよい。同様に修飾された又は修飾さ
れていないリボヌクレオチド例えばデオキシリボヌクレ
オチドを使用することもできる。この場合例えばＭ１３
のような一木蛸ベクター及び例えばｐ Ｂ Ｒ ３２２
−誘導体のような二本鎖ベクターで異なる可能性がある
。更に一本鎖又は二木鎖形のこの種の試料の配列は互い
に結合していてもよく、この場合にはこれらの配列の２
個又は数個が１つのベクター内に存在することになる。
種々異なる形で存在することもできる。すなわちこのゾ
ンデは一本鎖オリゴヌクレオヂドとして、相補的オリゴ
ヌクレオチドと共に二本鎖オリゴヌクレオチド断片とし
て、又は淋菌からのＤＮＡ又はＲＮＡに対する相同性を
有さない他の配列、例えばクローニングベクターと結合
して存在していてもよい。同様に修飾された又は修飾さ
れていないリボヌクレオチド例えばデオキシリボヌクレ
オチドを使用することもできる。この場合例えばＭ１３
のような一木蛸ベクター及び例えばｐ Ｂ Ｒ ３２２
−誘導体のような二本鎖ベクターで異なる可能性がある
。更に一本鎖又は二木鎖形のこの種の試料の配列は互い
に結合していてもよく、この場合にはこれらの配列の２
個又は数個が１つのベクター内に存在することになる。
二本鎖形を使用する場合、実際に検出反応が起こる前に
変性によってゾンデは一本鎖に分離される。
変性によってゾンデは一本鎖に分離される。
本発明の他の優れた１実施態様では核酸一ゾンデを標識
化する。これば基本的には自体公知のすべての標識化法
により、すなわち放射性同位元素の埋封又は、非放射性
標識化を介しての埋封、例えば修飾されたヌクレオチド
の埋封及び適当な検出系によって可能である。
化する。これば基本的には自体公知のすべての標識化法
により、すなわち放射性同位元素の埋封又は、非放射性
標識化を介しての埋封、例えば修飾されたヌクレオチド
の埋封及び適当な検出系によって可能である。
本発明の他の対象は、少なくともｌ種の雑種形成可能の
ゾンデを雑押形成条件下で使用しまた雑種形成を検出す
ることにより淋菌を検出する方法であり、これは特異的
検出のために本発明によるオリゴヌクレオチドゾンデの
１つを使用することによって特徴づけられる。
ゾンデを雑押形成条件下で使用しまた雑種形成を検出す
ることにより淋菌を検出する方法であり、これは特異的
検出のために本発明によるオリゴヌクレオチドゾンデの
１つを使用することによって特徴づけられる。
本発明によるオリゴヌクレオチドゾンデは、細菌ゲノム
上のｒＲＮＡとまた相応ずるｒＲＮＡ遺伝子と雑種形成
する。従って本発明による方法では、２つのヌクレオチ
ド型を介して淋菌の存在及び不存在を定量的にまた定性
的に測定することができる。
上のｒＲＮＡとまた相応ずるｒＲＮＡ遺伝子と雑種形成
する。従って本発明による方法では、２つのヌクレオチ
ド型を介して淋菌の存在及び不存在を定量的にまた定性
的に測定することができる。
本発明によるゾンデの少なくとも１つにより雑種形戒を
介して検出する処理は、雑種形成を介して核酸を検出す
るそれ自体公知の方法により実施することができる。Ｄ
ＮＡ−ＤＮＡ−ｍ種形成はサウザーン（Ｓｏｕｔｈｅｒ
ｎ）著”Ｊ，１４ｏ１、Ｂｉｏ１、、第９８巻（１９７
５）．第５０３頁に初めて記載され、次第に開発された
ものである。すべての適当な核酸一雑種形成バッチ、例
えば固相一雑種形戒、溶液雑種形威、サンドイッチー雑
種形成、二戒分雑種形成を使用することができる。次い
で検出をゾンデの放射性又は非放射性標識化を介して行
う。
介して検出する処理は、雑種形成を介して核酸を検出す
るそれ自体公知の方法により実施することができる。Ｄ
ＮＡ−ＤＮＡ−ｍ種形成はサウザーン（Ｓｏｕｔｈｅｒ
ｎ）著”Ｊ，１４ｏ１、Ｂｉｏ１、、第９８巻（１９７
５）．第５０３頁に初めて記載され、次第に開発された
ものである。すべての適当な核酸一雑種形成バッチ、例
えば固相一雑種形戒、溶液雑種形威、サンドイッチー雑
種形成、二戒分雑種形成を使用することができる。次い
で検出をゾンデの放射性又は非放射性標識化を介して行
う。
本発明によれば上記の核酸一ゾンデを使用することによ
って、被検物中における淋菌の存在及び従って患者の感
染を迅速かつ確実に検出することができる。このために
培養を行うことは必要ない。
って、被検物中における淋菌の存在及び従って患者の感
染を迅速かつ確実に検出することができる。このために
培養を行うことは必要ない。
実施例
本発明を次の実施例により詳詠する。
例 １
スロットープロット（ＳｌｏｉＢＩｏｔ）装置を用いて
次の種の染色体ＤＮＡをそれぞれ装置のスロットにニト
ロセルロースフィルターを介して施１３ した： 病原性ナイセリア種： 淋菌：４種の分離菌、 髄膜炎菌＝４種の分離菌、 非病原性ナイセリア種： ナイセリア・ラクタミカ＝３種の分離菌、ナイセリア・
ムコーザ：３種の分離菌、ナイセリア・サブフラバ、ナ
イセリア・ペルフラバ（Ｎ．ｐｅｒｆｌａｖａ）、 ナイセリア・シツ力（ Ｎ．ｓｉｃｃａ） ： ２種の
分離菌ナイセリア−エロンガータ（Ｎ．ｅｌｏｎｇａｔ
ａ）、ナイセリア・キネレア：２種の分離菌、ナイセリ
ア・フラバ（Ｎ．ｆｌａｖａ） ： ２種の分離菌ナイ
セリア・デニトリフィカンス。
次の種の染色体ＤＮＡをそれぞれ装置のスロットにニト
ロセルロースフィルターを介して施１３ した： 病原性ナイセリア種： 淋菌：４種の分離菌、 髄膜炎菌＝４種の分離菌、 非病原性ナイセリア種： ナイセリア・ラクタミカ＝３種の分離菌、ナイセリア・
ムコーザ：３種の分離菌、ナイセリア・サブフラバ、ナ
イセリア・ペルフラバ（Ｎ．ｐｅｒｆｌａｖａ）、 ナイセリア・シツ力（ Ｎ．ｓｉｃｃａ） ： ２種の
分離菌ナイセリア−エロンガータ（Ｎ．ｅｌｏｎｇａｔ
ａ）、ナイセリア・キネレア：２種の分離菌、ナイセリ
ア・フラバ（Ｎ．ｆｌａｖａ） ： ２種の分離菌ナイ
セリア・デニトリフィカンス。
非ナイセリア・種：
インフルエンザ菌（ｔｌａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆ
ｌｕｅｎｚａｅ）、パラインフルエンザ菌（｝！ａｅｍ
ｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、唾
液レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｓａｌｉｖ
ａｒｉｕｓ） 、ミュータンス・レンサ球菌（Ｓｔ．ｒ
ｃｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）、ストレプ１ゝ
コッカス゜１／１ アガラクチｘ （Ｓｔ；ｒｅｐＬｏｃｏｃｃｕｓ ａｇ
ａｌａｃＬｉａｅ）、黄色葡萄球菌（ＳＬａｐｈｙｌｏ
ｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）＋表皮葡萄球菌（ＳＬａ
ｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、
スタロコツカス・ザプ口フィチカス （Ｓｔａｐｈｙｌ
ｏｃｏｃｃｕｓｓａｐｒｏｐｌ＋ｙｔｉｃｕｓ）、大腸
菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、キンゲラ・
キンガエ。
ｌｕｅｎｚａｅ）、パラインフルエンザ菌（｝！ａｅｍ
ｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、唾
液レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｓａｌｉｖ
ａｒｉｕｓ） 、ミュータンス・レンサ球菌（Ｓｔ．ｒ
ｃｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）、ストレプ１ゝ
コッカス゜１／１ アガラクチｘ （Ｓｔ；ｒｅｐＬｏｃｏｃｃｕｓ ａｇ
ａｌａｃＬｉａｅ）、黄色葡萄球菌（ＳＬａｐｈｙｌｏ
ｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）＋表皮葡萄球菌（ＳＬａ
ｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、
スタロコツカス・ザプ口フィチカス （Ｓｔａｐｈｙｌ
ｏｃｏｃｃｕｓｓａｐｒｏｐｌ＋ｙｔｉｃｕｓ）、大腸
菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、キンゲラ・
キンガエ。
細菌の染色体ＤＮＡｓの調整は、ステルン（Ｓシｅｒｎ
）その他著「セルＪ （Ｃｅｌｌ） ３７（１９８４）
、第４４７頁に記載されている記録に基づき行った。
）その他著「セルＪ （Ｃｅｌｌ） ３７（１９８４）
、第４４７頁に記載されている記録に基づき行った。
このためフィルタを装置に張り、真空にし、個々の記録
点を２×桜街液２００ Ｊｉβで湿した（２×緩衝液：
ＮａＣｌ２モル／β、トリスー＋１ｃＩ ５０ｍモル／
１、ｐｌ−１７．５、及びＥＤＴＡ１ｍモル／１）。Ｄ
ＮＡにトリス−ＩＩＣＩ ５０ｍモル／β、ｐＨ７，５
及びＥＤＴ八５ｍモル／１の榎街液５０μ｛を加え、３
分間煮沸して変性させた。引続きバッチを直ちに氷上に
移し、２×緩衝液５０μｇを加え、この溶液をスロット
にピペットで入れた。スロットを１×緩ＷＩ液１００μ
ｇ（２×緩衝液を水で１＝１に稀釈）で後洗浄し、フィ
ルタを装置木質的に前記の方法により行った（サウザー
ン著”Ｊ．ｌ４ｏ１．Ｂｉｏ１、” ９ｇ（１９７５）
、第５０３頁）。
点を２×桜街液２００ Ｊｉβで湿した（２×緩衝液：
ＮａＣｌ２モル／β、トリスー＋１ｃＩ ５０ｍモル／
１、ｐｌ−１７．５、及びＥＤＴＡ１ｍモル／１）。Ｄ
ＮＡにトリス−ＩＩＣＩ ５０ｍモル／β、ｐＨ７，５
及びＥＤＴ八５ｍモル／１の榎街液５０μ｛を加え、３
分間煮沸して変性させた。引続きバッチを直ちに氷上に
移し、２×緩衝液５０μｇを加え、この溶液をスロット
にピペットで入れた。スロットを１×緩ＷＩ液１００μ
ｇ（２×緩衝液を水で１＝１に稀釈）で後洗浄し、フィ
ルタを装置木質的に前記の方法により行った（サウザー
ン著”Ｊ．ｌ４ｏ１．Ｂｉｏ１、” ９ｇ（１９７５）
、第５０３頁）。
種特５′４性を確認するため合成オリゴヌクレオチドを
種々の細菌種からの、フィルタに結合した染色体ＤＮＡ
と雑種形威させた。このため各ニトロセルロースフィル
タを２ 時間Ｉ Ｘ Ｖ Ｈ Ｐ内で前雑種形成させた
（ ２ ｘ Ｖ Ｉ−Ｉ Ｐ ：牛の血清アルブミン０
．１％、フイコール（Ｆｉｃｏｌｌ） ４００，０００
０．１％、ポリビニルプロピリドン０．１％、グリ
セリン１％、ＮａＣＩ Ｌ．Ｓモル／ （１ 、Ｎａ２
１ＩＰ０４５０ｍモル／ｌ及びヘリング精液−Ｄ Ｎ
Ａ １０＋ｎｇ／．ｌ！）。ＶＦ｛Ｐに含まれるヘリン
グ精液−ＤＮＡは、予め８０℃に加熱することによって
変性させた。
種々の細菌種からの、フィルタに結合した染色体ＤＮＡ
と雑種形威させた。このため各ニトロセルロースフィル
タを２ 時間Ｉ Ｘ Ｖ Ｈ Ｐ内で前雑種形成させた
（ ２ ｘ Ｖ Ｉ−Ｉ Ｐ ：牛の血清アルブミン０
．１％、フイコール（Ｆｉｃｏｌｌ） ４００，０００
０．１％、ポリビニルプロピリドン０．１％、グリ
セリン１％、ＮａＣＩ Ｌ．Ｓモル／ （１ 、Ｎａ２
１ＩＰ０４５０ｍモル／ｌ及びヘリング精液−Ｄ Ｎ
Ａ １０＋ｎｇ／．ｌ！）。ＶＦ｛Ｐに含まれるヘリン
グ精液−ＤＮＡは、予め８０℃に加熱することによって
変性させた。
雑種形成は雑種形成炉内において４２℃で行った。ＶＨ
Ｐを除去し、雑種形成緩衝液（ Ｈ Ｐ ）中の３２ｐ
一標識化オリゴヌクレオチドー試料によって代えた（Ｈ
Ｐ ： ＩＸＶＨＰ及び、ゾンデのＧＣ一含有量に応じ
て０〜３０％のホルムアミドを添加）。Ｉ｛ Ｐをその
使用前に８０’Ｃに加熱した。少なくとも６時間雑種形
成させた後、フィルタを洗浄桜街液（ Ｗ Ｐ ： Ｎ
ａＣＩ Ｏ．３６ モル／ｐ． Ｎａ２１１Ｐ０４ １
０ｍモル／｛、ＳＤＳ ０．０５％）『１コで、まず室
温で２回、次いて４２℃で２回洗浄した。
Ｐを除去し、雑種形成緩衝液（ Ｈ Ｐ ）中の３２ｐ
一標識化オリゴヌクレオチドー試料によって代えた（Ｈ
Ｐ ： ＩＸＶＨＰ及び、ゾンデのＧＣ一含有量に応じ
て０〜３０％のホルムアミドを添加）。Ｉ｛ Ｐをその
使用前に８０’Ｃに加熱した。少なくとも６時間雑種形
成させた後、フィルタを洗浄桜街液（ Ｗ Ｐ ： Ｎ
ａＣＩ Ｏ．３６ モル／ｐ． Ｎａ２１１Ｐ０４ １
０ｍモル／｛、ＳＤＳ ０．０５％）『１コで、まず室
温で２回、次いて４２℃で２回洗浄した。
次いで洗浄温度を、試料のＧＣ−含有量に応じて最高６
８℃にまで高めた。実際の最高洗浄温度並びにホルムア
ミド含有量は第２表に示す。この表は更に使用した核酸
−ゾンデＲＳ２”及びＲＳ３・の配列を示す。
８℃にまで高めた。実際の最高洗浄温度並びにホルムア
ミド含有量は第２表に示す。この表は更に使用した核酸
−ゾンデＲＳ２”及びＲＳ３・の配列を示す。
第２表
ソンテ ゾンデの配列 ＋ＩＰのホルム 洗浄の
符号 ５ ’−＞ ３ ’− アミド含有 温度
量（％） （℃〉 ＲＳ２” ＴＡＣＣＡＡＧＣ八ＡＴＣＡ八ＧＴ
ＴＧ Ｏ ５０ＲＳ３’
ＣＣＡＣＣＣＧＡＧＡＡＧＣＡＡＧＣＴＴＣＣＣＴ
ＧＴＧＣＴ３０ ６８ フィルタをＸ線フィルムに曝した。
符号 ５ ’−＞ ３ ’− アミド含有 温度
量（％） （℃〉 ＲＳ２” ＴＡＣＣＡＡＧＣ八ＡＴＣＡ八ＧＴ
ＴＧ Ｏ ５０ＲＳ３’
ＣＣＡＣＣＣＧＡＧＡＡＧＣＡＡＧＣＴＴＣＣＣＴ
ＧＴＧＣＴ３０ ６８ フィルタをＸ線フィルムに曝した。
第３表には種々の核酸ゾンデを病原性、非病原性ナイセ
リア 押及ひ非ナイセリア種と雑種１ ７ 形戊させた際の結果を示すものである。
リア 押及ひ非ナイセリア種と雑種１ ７ 形戊させた際の結果を示すものである。
第３表
種＋１／族 分離菌Ｎｏ． オリゴヌクレ
オチド ＲＳ２’ ＲＳ３” 淋菌 ７４＋＋ 淋菌 ５１４ ＋ ＋淋菌
ｒ２＋＋ 淋菌 ＲＩ６ ４１髄ｌε炎菌
Ｂ 髄膜炎菌 Ｄ 髄１模炎＋ｚ＋ ２ − ５髄膜炎菌
Ｚ ナイセリア・ラクタミカ １８５５ ナイセリア・ラクタミカ ２８７９ ナイセリア・ラクタミカ ３２７２ ナイセリア・ムコーザ １１２ ナイセリア・ムコーザ １１４ ナイセリア・ムコーザ ２８８８ ナイセリア・ザブフラバ １２４ ナイセリア・ベルフラバ １２０ ナイセリア・シツカ ２８４４ ナイセリア“・シツカ １１８ ナイセリア．エロンガータ １２９ ナイセリア・キネレア １２６ ナイセリア・キネレア ２ｌ９９ ナイセリア・フラバ １２２ ナイセリア・フラバ １２３ ナイセリア・デニトリフイカンス ２９５０ インフルエンザ菌 ２２１４−１パラインフルエ
ンザ菌 １２０７ 唾液レンサ球菌 ＤＳｌ４ ２００６７−１９７４ミュ
ータンスレンサ球菌 ＾ＴＣＣ ２５１７５ ストレブトコッカス・アガラクチェ ＤＳＭ ２１０４ 黄色葡萄球菌 ｉ４７２ 表皮葡萄球菌 ＡＴＣＣ １４９９０スタフイロコ
ッカス・サブロフイチカスＡＴＣＣ １５３０５ 大腸菌 １４２４ キンゲラ・キンガエＡＴＣＣ ２３３３０１′ ”Ｒｅ
ｒｇｅｙ’ｓ １４ａｍｕａｌ ｏｒ Ｓｙｓｔｅｍａ
ｔ．ｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ （１９８４）に
よる分類クリーク（ Ｎ．Ｒ．Ｋｒｉｃｇ）．ホルト（
Ｊ．Ｇ．ｌｌｏｌｔ）（ｅｄｓ） 、ｌｌｌｉｌｌｉ
ａｍｓ ａｎｄ Ｉ’ｌｉｌｋｉｎｓ出版、ｌ′Ｉａｆ
ｔｉｍｏｒｅ在、第 ２８８〜２９８頁。
オチド ＲＳ２’ ＲＳ３” 淋菌 ７４＋＋ 淋菌 ５１４ ＋ ＋淋菌
ｒ２＋＋ 淋菌 ＲＩ６ ４１髄ｌε炎菌
Ｂ 髄膜炎菌 Ｄ 髄１模炎＋ｚ＋ ２ − ５髄膜炎菌
Ｚ ナイセリア・ラクタミカ １８５５ ナイセリア・ラクタミカ ２８７９ ナイセリア・ラクタミカ ３２７２ ナイセリア・ムコーザ １１２ ナイセリア・ムコーザ １１４ ナイセリア・ムコーザ ２８８８ ナイセリア・ザブフラバ １２４ ナイセリア・ベルフラバ １２０ ナイセリア・シツカ ２８４４ ナイセリア“・シツカ １１８ ナイセリア．エロンガータ １２９ ナイセリア・キネレア １２６ ナイセリア・キネレア ２ｌ９９ ナイセリア・フラバ １２２ ナイセリア・フラバ １２３ ナイセリア・デニトリフイカンス ２９５０ インフルエンザ菌 ２２１４−１パラインフルエ
ンザ菌 １２０７ 唾液レンサ球菌 ＤＳｌ４ ２００６７−１９７４ミュ
ータンスレンサ球菌 ＾ＴＣＣ ２５１７５ ストレブトコッカス・アガラクチェ ＤＳＭ ２１０４ 黄色葡萄球菌 ｉ４７２ 表皮葡萄球菌 ＡＴＣＣ １４９９０スタフイロコ
ッカス・サブロフイチカスＡＴＣＣ １５３０５ 大腸菌 １４２４ キンゲラ・キンガエＡＴＣＣ ２３３３０１′ ”Ｒｅ
ｒｇｅｙ’ｓ １４ａｍｕａｌ ｏｒ Ｓｙｓｔｅｍａ
ｔ．ｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ （１９８４）に
よる分類クリーク（ Ｎ．Ｒ．Ｋｒｉｃｇ）．ホルト（
Ｊ．Ｇ．ｌｌｏｌｔ）（ｅｄｓ） 、ｌｌｌｉｌｌｉ
ａｍｓ ａｎｄ Ｉ’ｌｉｌｋｉｎｓ出版、ｌ′Ｉａｆ
ｔｉｍｏｒｅ在、第 ２８８〜２９８頁。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、淋菌特異性オリゴヌクレオチドゾンデがａ）配列： ＴＡＣＣＡＡＧＣＡＡ ＴＣＡＡＧＴＴＧ を有するオリゴヌクレオチドＲＳ２＾＊ ｂ）配列： ＣＣＡＣＣＣＧＡＧＡ ＡＧＣＡＡＧＣＴＴＣ ＣＣＴ
ＧＴＧＣＴを有するオリゴヌクレオチドＲＳ３＾＊ ｃ）配列： ＡＣＧＣＴＡＣＣＡＡ ＧＣＡＡＴＣＡＡＧＴ ＴＧＣ
ＣＣＡＡＣＡＧＣＴＡＡＴＴＧＡＣＡ Ｔ を有するオリゴヌクレオチドＲＳ２＾＊＾＊又は／及び ｄ）配列： ＧＣＣＡＣＣＣＧＡＧ ＡＡＧＣＡＡＧＣＴＴ ＣＣＣ
ＴＧＴＧＣＴＧＣＣＧＴＣＣ を有するオリゴヌクレオチドＲＳ３＾＊＾＊であること
を特徴とする淋菌特異性オリゴヌクレオチドゾンデ。 ２、ゾンデがその５′−及び／又は３′−末端に別のヌ
クレオチドを１０個まで有する請求項１記載のゾンデ。 ３、ゾンデが修飾された又は修飾されていないリボヌク
レオチド又はデオキシリボヌクレオチドからなる請求項
１又は２記載のゾンデ。 ４、ゾンデが標識された形で存在する請求項１から３ま
でのいずれか１項記載のゾンデ。 ５、雑種形成可能のゾンデを使用して雑種形成条件下に
また雑種形成の検出下に病原性ナイセリア種淋菌を検出
する方法において、請求項１から４までのいずれか１項
記載のゾンデをその特異性検出のために使用することを
特徴とする病原性ナイセリア種淋菌の検出法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3923341A DE3923341A1 (de) | 1989-07-14 | 1989-07-14 | Neisseria gonorrhoeae-nachweis |
| DE3923341.3 | 1989-07-14 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0353900A true JPH0353900A (ja) | 1991-03-07 |
| JPH0630639B2 JPH0630639B2 (ja) | 1994-04-27 |
Family
ID=6385055
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2182861A Expired - Lifetime JPH0630639B2 (ja) | 1989-07-14 | 1990-07-12 | 淋菌特異性オリゴヌクレオチドゾンデ及び病原性ナイセリア種淋菌の検出法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5173401A (ja) |
| EP (1) | EP0408077B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0630639B2 (ja) |
| AT (1) | ATE114725T1 (ja) |
| DE (2) | DE3923341A1 (ja) |
| ES (1) | ES2065442T3 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0799998A (ja) * | 1993-06-23 | 1995-04-18 | F Hoffmann La Roche Ag | ナイセリア・ゴノレエの検出方法、並びにそのための試薬およびキット |
| JP2016198018A (ja) * | 2015-04-08 | 2016-12-01 | 東ソー株式会社 | 淋菌を検出するためのオリゴヌクレオチドプライマーおよび当該プライマーを用いた淋菌の検出方法 |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5217862A (en) * | 1989-05-24 | 1993-06-08 | Amoco Corporation | Method for the detection of Neisseria gonorrhoeae |
| DE4219821A1 (de) * | 1992-06-17 | 1993-12-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Spezifischer Nachweis von Neisseria Gonorrhoeae |
| US5389515A (en) * | 1992-09-15 | 1995-02-14 | Boehringer Mannheim Corporation | Isolated nucleotide sequences for identifying Neisseria gonorrhoeae |
| JPH10500310A (ja) * | 1994-05-19 | 1998-01-13 | ダコ アクティーゼルスカブ | 淋菌及びトラコーマ クラミジアの検出のためのｐｎａ プローブ |
| US5747252A (en) * | 1995-06-07 | 1998-05-05 | Gen-Probe Incorporated | Nucleic acid probes and amplification oligonucleotides for Neisseria species |
| US5888733A (en) * | 1995-11-16 | 1999-03-30 | Dako A/S | In situ hybridization to detect specific nucleic acid sequences in eucaryotic samples |
| US5976805A (en) * | 1998-04-27 | 1999-11-02 | Becton Dickinson And Company | Neisseria gonorrhoeae specific DNA fragment--GC3 |
| US7229800B2 (en) * | 2004-04-16 | 2007-06-12 | Becton, Dickinson And Company | Neisseria gonorrhoeae assay |
| AP2012006092A0 (en) | 2009-07-07 | 2012-02-29 | Council Scient Ind Res | Nucleic acid primers, probe and method for detection of neisseria gonorrhoeae. |
| CN110177887B (zh) | 2016-11-10 | 2024-10-29 | 达丽斯生物医学公司 | 用于扩增和检测沙眼衣原体的多核苷酸 |
| US11047007B1 (en) | 2020-03-23 | 2021-06-29 | Talis Biomedical Corporation | Polynucleotides for amplification and detection of SARS-CoV-2 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4900659A (en) * | 1986-01-30 | 1990-02-13 | Enzo Biochem, Inc. | Nucleotide sequence composition and method for detection of Neisseria gonorrhoeae and method for screening for a nucleotide sequence that is specific for a genetically distinct group |
| WO1988003957A1 (en) * | 1986-11-24 | 1988-06-02 | Gen-Probe Incorporated | Nucleic acid probes for detection and/or quantitation of non-viral organisms |
| JPH02203800A (ja) * | 1988-04-15 | 1990-08-13 | Innogenetics Sa:Nv | ナイセリア菌株を検出するための交雑プローブ |
-
1989
- 1989-07-14 DE DE3923341A patent/DE3923341A1/de not_active Withdrawn
-
1990
- 1990-07-12 JP JP2182861A patent/JPH0630639B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-12 US US07/551,839 patent/US5173401A/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-13 AT AT90113485T patent/ATE114725T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-07-13 ES ES90113485T patent/ES2065442T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-13 EP EP90113485A patent/EP0408077B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-13 DE DE59007814T patent/DE59007814D1/de not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0799998A (ja) * | 1993-06-23 | 1995-04-18 | F Hoffmann La Roche Ag | ナイセリア・ゴノレエの検出方法、並びにそのための試薬およびキット |
| JP2016198018A (ja) * | 2015-04-08 | 2016-12-01 | 東ソー株式会社 | 淋菌を検出するためのオリゴヌクレオチドプライマーおよび当該プライマーを用いた淋菌の検出方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE59007814D1 (de) | 1995-01-12 |
| JPH0630639B2 (ja) | 1994-04-27 |
| EP0408077A3 (en) | 1991-03-27 |
| EP0408077B1 (de) | 1994-11-30 |
| EP0408077A2 (de) | 1991-01-16 |
| ES2065442T3 (es) | 1995-02-16 |
| ATE114725T1 (de) | 1994-12-15 |
| DE3923341A1 (de) | 1991-01-24 |
| US5173401A (en) | 1992-12-22 |
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