JPH0354450A - 電気泳動装置及び方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、電気泳動装置に関する。

本発明を要約すれば、電気溶離器（４８）は試料ゲル（
３０）からの少量のタンパク質を電気溶離及び濃縮する
。電気溶離器（４８）は、試料ホルダ（２８）中のゲル
（３０）から所望の分子を遠心濃縮器（２６）の膜（３
８）又は配列決定膜（ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｍｅｍｂ
ｒａｎｅ）上に直接溶離する。電気泳動の後、溶離され
た分子は、試料の操作を最小としそして膜（３８）のか
く乱を最小にして配列決定装置で濃縮又は処理すること
ができる。

電気泳動は、生物学的ポリマーなどの荷電した粒子を電
界により溶媒を通して移動させることを説明するのに使
用される用語である。タンパク質及び他の荷電した粒子
は、電界中を移動する相対的速度により特徴付けること
ができる。ドデシル硫酸ナトリウムーボリアクリルアミ
ドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）は夕冫バク質及び
ベブチドの分離のために広く利用される調製及び分析技
術である。

ＳＤＳ−ＰＡＧＥは、ＳＤＳの存在下に固有の電荷対質
量比及び見掛けの分子量に基づいて目的のタンパク質を
他の夕冫パク質から分離する。ポリアクリルアミドゲル
は、分子ふるいとして作用し、この分子ふるいをとおし
てタンパク質は寸法に応じて移動する。低分子量タンパ
ク質は、高い移動度を有する。タンパク質はＳＤＳ及び
メルカプトエタノールで処理されそして、それらが電界
の力によりゲルを通って移動するとき、あたかも均一な
形状と同一の電荷対質量比を有しているかのように振舞
う。タンパク質の分子量の決定は、既知の分子量のタン
パク質と相対的に比較したゲルを通るタンパク質の移動
に基づいて行うことができる。

ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分離の後、溶解された複合混合
物から個々の夕冫パク質又は目的の夕冫バク質を更に分
析又は配列決定のために同定及び回収することがしばし
ば望ましい。ポリアクリルアミドゲルからタンパク質を
除去するのに、最も普通には、拡散又は溶離による方法
が行なわれる。

電気溶離では、ゲルスラブをクーマシー・ブリリアント
・ブルー（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ　Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ　
Ｂｌｕｅ）などのような染料に浸漬し、この染料がＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥにより予め分離されたタンパク質を染色す
る。

次いで、目的のタンパク質を含むゲルバンドを切り取り
そして溶離装置に入れる。この溶離装置は更なる分析の
ためにタンパク質を電気泳動により除去及び単離する電
流を加える。

典型的な電気溶離法は、ハンカピラ−（Ｈａｎｋａｐｉ
１　１ｅｒ）等、メソッズ・イン・エンザイモロジ−（
Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍ）、■、２２７−２
３６（１９８３）、に記載されている。簡単に言えば、
タンパク質をクーマシー・ブリリアント・ブルーにより
染色し、切り取り、均質化し、透析膜で両端をキャップ
された溶離槽に入れる。溶離槽は電気泳動タンクの２つ
の電極を橋かけし、２チャンネルぜんどうポンプが室に
保持されている緩衝液を循環させる。溶離緩衝液（例え
ば、０．０５Ｍ　　ＮＨ，ＨＣＯｓ中のＯ−　　１　％
ＳＤＳ）ｔ”使用シテ、５０ｖの定電圧を１２−１６時
間印加し、これにより負に荷電したタンパク質をゲルか
ら正電極に向けて移動させる。第２の溶離は、塩及びＳ
ＤＳを除去するために、８０ボルトで２０−２４時間透
析緩衝液（例えばＯ−　０　１Ｍ　　ＮＨ＋ＨＣＯｓ中
の０．０２％ＳＤＳ）で行なわれる。次いでタンパク質
を多数の配列決定方法により分析することができる。

電気溶離の他の方法は、アンダーソン（Ａｎｄｅｒｓｏ
ｎ）等、ジャーナル・オブ・ビロロジー（Ｊ．　Ｖｉｒ
ｏｌ）、ｌ２、２４１（１９７３）、に記載されており
。この方法では、電気溶離は、パスチュールピペット（
Ｐａｓｔｅｕｒ　ｐｉｐｅｔ）中のゲルスライスからこ
のピペットの下端の透析バッグへと進められる。この方
法では、透析膜の大きい表面積への吸着Ｉ二よりタンパ
ク質が損失されることがあり、溶液は、ＳＤＳを除去す
るのに必要な長い透析を介して移動する。

故に、この方法は大量のタンパク質によってのみ有効で
ある。

電流電気溶離法は、タンパク質の有効な回収を与えるけ
れども、この方法は時間を要し（一般に１日）そしてこ
の装置は限定された数の試料を同時に溶離できるにすぎ
ない。更に、上記の両方法においては、溶離透析膜から
濃縮機又は透析器へのタンパク質試料の移動は、その試
料タンパク質又はポリベプチドの損失の危険を伴う。タ
ンパク質をゲルピースから直接濃縮器試料貯蔵器に溶離
する電気溶離装置は、エス・イハラ（Ｓ．　Ｉｈａｒａ
）等、“遠心分離濃縮器における電気泳動溶離によるポ
リアクリルアミドゲルからのポリペブチドの回収“（“
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　　Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ
　　ｆｒｏｍ　Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ　　Ｇｅ
ｌｓ　　ｂｙ　　ＥＩｅｃｔｒｏｐｈｒｅＬｉｃ　　Ｅ
ｌｕｔｉｏｎ　　ｉｎ　　ａ　　Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａ
ｔｉｏｎ　ＣｏｎｃｅｎｔｒａＬｏｒ”）、アナリティ
カル・バイオケミストリー（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、１６６、３４９−３５２（
１　９８７）、に記載されている。市販の入手可能な濃
縮器を作ってゲルスライスの試料管を上端に保持し、次
いで溶離緩衝液の浴に逆さまにして入れる。所望のタン
パク質を、試料管から重力に抗して上向きに濃縮器の膜
に向けて溶離する。電気泳動溶離の後、濃縮器及び溶離
緩衝液の浴を入れる装置を逆さまにする。

右側を上にした位置に再配向されている濃縮器は、溶離
したタンパク質の移動なしに遠心分離濃縮又は塩交換の
用意ができている。

この方法は試料の取り扱いを最小にすることにより試料
回収率を最大にするけれども、濃縮器を逆さまにするこ
とにより様々な欠点と困難が生じる。例えば、被験ゲル
スライスを保持している試料管は、濃縮器の端部に固定
されなければならずモして溶離中溶離緩衝液の浴内に！
ｌ縮器を逆さまにして保持することを可能とするために
透析膜により閉鎖されなければならない。又、重カに抗
する溶離は溶離緩衝液への電界の印カＤが止むと装置を
直ちに逆転させることを必要とする。そうしないと、溶
離された分子は、重カの下で試料管に逆戻りし、実際の
試料回収量は減少する。

従って、操作を簡単にし且つ試料の損失を最小にする電
気溶離装置に対する要求がある。

本発明の要約 先行技術の前記した問題は、本発明の電気泳動装置及び
方法により克服される。本発明の原理に基づく電気泳動
装置は、管組立体、上部緩衝液室及び下部緩衝液室を使
用する。上部緩衝液室は、下部緩衝液室の頂部に積み重
ねられ、各室は或る量の溶離液体を保持しており、この
溶離液体に適当な電界が加えられる。

管組立体は、上部緩′衝液室の溶離液に浸漬された上部
と下部緩衝液室の溶離液に浸漬された下部を持った主管
を備えている。この主管も或る量の溶離液を保持してい
る。主管の上部に取り外し可能に保持されているのは、
試料ゲルピースと溶離液を保持する試料ホルダである。

試料ホルダ中の溶離液は、上部緩衝液室及び主管中の溶
離液と流体連通している。主管の下部に配置されている
のは、溶離された分子を集めるための膜である。

電流は、上部緩衝液室及び下部緩衝液室中の溶離液を通
って流れ、試料ゲルピース中の所望の分子をゲルピース
から試料ホルダの下端を通り、主管を通って主管の下部
の膜へと溶出させる。膜は直接更に次ぎに処理するのに
適した方法で溶離された分子を保持する。更に、主管の
方位は、主管を更に調製したり再配向させたりしないで
、従って膜に保持された溶離された分子をかき乱すこと
なく次ぎの処理を可能とする。

本発明の１つの親点に従えば、主管は、好ましくは、遠
心枦過システムの濃縮器である。溶離の後、濃縮器管は
電気泳動装置から取り外すことができそして直接に遠心
分離して溶離された分子を枦過により濃縮することがで
きる。分子及びｖＩｋ縮器の最小の取り扱いは所望の分
子の回収を最適とする。

本発明の他の態様においては、主管は膜に向かって細く
なっていく形状の錐体である下部を有する。

このような形状は、溶離された分子を電気泳動の間膜に
向けて方向づけて膜の上に集める。更に、膜は配列決定
膜であり、溶離に続いて配列決定プロセスにおいて膜を
直接使用するように主管の鱈体形状の端部から取り外す
ことができる。配列決定膜が所望の分子を溶離している
膜であることで、試料の損失は最小となる。

本発明の他の観点では、気泡除去手段が使用される。下
部緩衝液室及び上部緩衝液室中に管組立体を位置付ける
間、気泡が下部緩衝液室中の主管の下に形成される。こ
れらの気泡は電流を阻止し、そのため溶離が達威されな
くなる。曲がった端部を持ったパスチュールピペットを
主管の下から気泡を抜き出すのに使用することができる
。これ又は他の適当な方法により気泡を除去した後、電
流は溶離緩衝液を通って流れて所望の電気泳動溶離を与
える。

本発明の前記の及び他の目的、特徴及び利点は添付図面
に例示されている本発明の好ましい態様の更に詳しい説
明により明らかとなるであろう。

図面において、同じ参照番号はすべての図面にわたり同
じ部品を表す。図面は必ずしも一定の縮尺にはなってお
らず、本発明の原理を説明するために強調がなされてい
る。

本発明は、被験ゲルから、分子を更に次ぎの処理ができ
るように設計された膜上に所望の分子を溶離する電気泳
動装置及び方法を提供する。溶離された分子は、該溶離
された分子を移動させることなく且つ回収された分子の
損失を防止するために膜の操作又はかく乱を最小として
更に直接処理に付する用意の整った構戒の膜上に保持さ
れる。

本発明の第ｌの例では、マイクロダラム量（ｌ−１００
μｇ）の夕冫バク質又はＤＮＡを試料ゲルピース（３０
）から第１図に示された遠心濃縮器２６の低吸着性膜３
８に又は第４図に示された後に詳細に説明する自動化タ
ンパク質配列決定器に使用可能な配列決定膜５２上に電
気泳動により溶離される。第１図の電気溶離器４８は、
ゲルピース３０の頂部と底部の間に電界を印加し、そし
てタンパク質又はＤＮＡをゲルピース３０を通して標的
膜３８に移動させ、その際遠心濃縮器２６は直立に配置
されている。溶離の後、その膜３８上の回収された分子
と中に入っている溶離緩衝液を保持している遠心濃縮器
２６は、電気溶離装置から取り外し、そして、回収され
た分子を更に処理することなく又は遠心濃縮器２６を更
に調整又は再配向させることなく遠心濃縮又は緩衝液交
換のために遠心分離器に入れることができる。濃縮器２
６は直立に配置されているので、回収された分子は電気
溶離装置４８から遠心分離器への移動中濃縮器２６中で
実質的にかき乱されないで保持される。次いで米国特許
第４．６３２，７６１号及び米国特許第４，７５５，３
０１号に開示されている方法などの当業界でよく使用さ
れる方法により遠心濃縮及び／又は緩衝液交換が行なわ
れる。これらの米国特許の内容は引照により本明細書に
加入する。

第１図を詳細に参照すると、本発明を具体化する電気溶
離装置４８は、上部解放箱状室ｌＯと下部解放箱状室ｌ
２を備えている。上部室１０は、室１２の解放表面の内
周の回りに取り付け又は配置された押縁（ｌｅｄｇｅ）
又は同様な壁要素上に着座している。各室１０、ｌ２は
、装置が完全に組み立てられたとき濃縮器２６の両端を
浸漬するのに十分な量の溶離緩衝液又は流体を保持して
いる。

各室内の溶離緩衝液は、それぞれの電流搬送線ｌ６及び
２４により電気的に荷電される。線ｌ６は上部室ＩＯの
内側底部表面の一側の長さに沿って走っており、そして
室ｌＯの端壁４４を通って突き出している負の電気端子
ｌ４に接続されている。

同様に、線２４は下部室ｌ２の内側底部表面のー側の長
さに沿って走っており、そして下部室ｌ２の端壁を通っ
て突き出している正の電気端子７０に接続されている。

好ましくは、線ｌ６と２４は白金より或るが、他の伝導
性材料の線も適する。

動力は、当業界で良く知られている定電圧電源から端子
ｌ４及び７０に接統されているか又は接続可能であるリ
ード線４０、４２（第２図に示されている）を介して線
１６及び２４に供給される。

動力は、例えば、約１　０　０−４　０　０ボルト時の
レベルで供給される。

好ましい態様では、端子ｌ４、７０とリード線４０、４
２との接続は、第２図に示された安全カバー３６を介し
てなされる。安全カバー３６は、上部室１０と、下部室
ｌ２の解放表面を通る下部室ｌ２への露出した入り口を
覆うような形状である。カバー３６の細長い側部はそれ
ぞれ室１０，Ｉ２の端壁４４、４６から離れて位置して
おり、そしてそれぞれ電気端子ｌ４及び７０を取り外し
可能に受け入れるための２つのコネクタ６０１６２を有
する。端子１４、７０とコネクタ６０、６２との電気的
接続は、安全カバー３６が室１０，ｌ２上に正しく位置
付けられない限りなされ得ない。その場合に、安全カバ
ー３６が、室ｌＯ及び１２のそれぞれの解放表面を介し
て室１０えおよび１２への接近を阻止していない限りは
、電気的接続はなされない。故に、いずれの室にも入る
ことを意図されない物の溶離は阻止されるか又は少なく
とも最小にされる。

上部室１０の底部壁には、第１図に示された５個などの
ような多数の孔ｌ８がある。孔ｌ８は後に述べるプラグ
２０又は管組立体２２（第ｌ図）及び５０（第４図）を
受け入れ且つ取り外し可能に保持するような寸法と形状
である。プラグ保持孔１８は電気溶離処理中にプラグ２
０がこれらの孔を閉じる場合に室ｌＯから溶離緩衝液を
排出するための口を与える。

管組立体２２は、管組立体の上部を上部室１０の溶離緩
衝液に浸漬しそして管組立体の下部を下部室ｌ２の溶離
緩衝液に浸漬するように、上部室ｌＯのそれぞれの孔ｌ
８に位置付けられる。管組立体２２の主部材は、好まし
くは、タンパク質の濃縮又は脱塩を行うように設計され
た低吸着性膜３８（例えばタンパク質の保持率が低く及
び枦過するように設計された膜）を持った型の遠心濃縮
器である。第１図に示されたような濃縮器２２は、タフ
リュ・アーノレ・グレース・アンド・カンパニ−・コネ
クチカットのアミコン（Ａｍｉｃｏｎ）事業部により製
造されそして米国特許第４，６３２．７６１号に記載さ
れているセントリコン装置（Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎｄｅｖ
ｉｃｅ）である。濃縮器２６のテーバー付きの外形は、
濃縮器２６が孔ｌ８に位置付けられるとき溶離緩衝液が
上部室１０から下部室ｌ２に漏洩するのを防止する。

遠心濃縮器２６の上端には、試料ホールダ２８が滑り嵌
めで収容されそして取り外し可能に保持されている。試
料ホールダ２８は被験ゲルピース３０を入れるためにキ
ャップ３２上にスナップを持ったｉ準実験室用５００ｐ
ｇ管又は同様なものである。キャップ３２は、室１ｏの
溶離緩衝液に浸漬されたとき試料ホールダ２８がらゲル
ピース３０が流出するのを防止する。試料ホールダ２８
のキャップ３２及びコニカルチップｉｌ！！３４は、そ
れを通るビンホールを有しており、このピンホールは、
電流の通過を可能としそして溶離緩衝液が、上部室ｌＯ
内の溶離緩衝液及び濃縮器２６内の溶離緩衝液と流体連
通して、試料ホールダ２８を通りて流れることを可能と
する。ビンホールは、又、ゲルピース３０が管２６に落
ち込むのを防止するのに十分に小さい直径である。コニ
カル端３４のピンホールは溶離された分子が試料ホール
ダ２８から濃縮器２６の内側に通過するのを可能とする
。

詳しく言うと、溶離中印加される電界の力は、負に帯電
した溶離された分子を、試料ホールダ２８中のゲルピー
ス３０から下部室ｌ２の正に帯電した線２４に向けて重
力の方向に引っ張る。試料ホールダ２８と線２４間に位
置した膜３８は移動する溶離された分子を途中で捕捉し
そして保持する。電界の力は重力場の力よりも大きいの
で重力の効果は殆どない。更に、重力と電界の力は同じ
方向であるので、重力は電界の力に反対しない。

溶離の後、電界の印Ｖａが止むと、溶離された分子はも
はや電界の力の下にはなくそして重力下に膜３８の上に
又は近くに浮き上がる傾向がある。濃縮器２６が直立に
配置されているる状態では、膜３８の小さな表面積への
溶離された分子の保持は電気溶離中及び電気泳動の直後
は前記力（即ち、電界と重力）の影響下に最大となる。

電気溶離装置４８の使用は下記のとおりである。

タンパク質又は他の所望の分子を含むゲルスライスを試
料ホールダ２８に入れる。ゲルスライスの離解は必要で
はないが、或る試料の効率の良い溶離を助けることがあ
る。遠心濃縮器２６は、上部室１０内の孔１８にこの室
の外側底部表面を通してしっかりと挿入される。下部室
１２は、溶離装置４８が完全ｌこ組み立てられるとき緩
衝液のレベルが濃縮器２６の＠３８の上にあるように溶
離緩衝液で満たされる。

上部室１０は下部室１２の上縁の押縁に着座するように
配置される。濃縮器２６の下にトラップされた気泡を、
第３図に示された曲がったパスチュールビベット８０で
追い出しそして除去する。気泡が除去された後、ピペッ
ドトＯを下部室ｌ２から取り外す。

上部室ＩＯと濃縮器２６を、溶離緩衝液が濃縮器を完全
に覆うように溶離緩衝液で満たす。試料ホールダ２８の
コニカルチップ端３４に注射針又は他の鋭いピン状の装
置で孔をあけてタンパク質の溶離を可能とする。同様に
、試料ホールダ２８のキャップ３２に孔をあけてホール
ダを濃縮器２６の頂部端に置いたとき溶離緩衝液で満た
すことを可能とする。試料ホールダ２８を、濃縮器２６
の内側に確実にはまり込むように濃縮器２６の頂部端に
挿入する。

然る後、安全カバー３６を、カバーのコネクタ６０，６
２及び上部室と下部室１０、１２の端子１４、７０との
正しい接続がなされるまで上部室１０に滑りこませる。

安全カバー３６のコネクタ６０，６２からの線又はリー
ド４０、４２を標準実験室用定電圧電源に差し込む。動
力は夕一冫オンされそして電気泳動は所望の長さの時間
進められる。

電気泳動が終了した後、安全カバー３６を取り外し、上
部緩衝液室１０をプラグ２０の除去により口ｌ８から排
液する。次いで試料ホールダ２８を濃縮器２６から持ち
上げ、ホールダ中の溶離緩衝液を濃縮器２６に排出させ
る・。濃縮器を上部室ｌＯから除去し、電気溶離された
タンパク質又は分子を濃縮することができ、そして緩衝
液は標準方法に従って（即ち遠心分離等により）交換す
ることができる。

電気溶離装置４８に使用可能な第２の型の管組立体５０
を第４図に例示する。この管組立体は、遠心濃縮器２６
とほぼ同じ長さと外径を有するが、そのコニカルチツプ
の基部の近くに小さな取り外し可能な配列決定膜５２を
含む。この膜は、好ましくは、ミリポア・コーポレーシ
ョン（ＭｉｌｉｐｏｒｅＣｏｒｐ）により製造されたイ
モビロン（ｌｍｍｏｂｉｌｏｎ）と呼ばれる膜などのＰ
ＶＤＦ膜である。

管組立体５０は被験ゲルピース３０を保持するための試
料容器５４を有する。試料容器５４は孔付き頂部とプラ
スチック網底部を有する。頂部５８は試料容器５４の上
端にはめ込まれ、そして管組立体５０が上部室１０の溶
離緩衝液に浸漬されるとき被験ゲルピースが流れ出すの
を防止する。

孔付き頂部と網底部は、溶離緩衝液、電流及び溶離され
た分子が容器５４を通過するのを可能とする。

試料容器５４は、主溶離管５６の頂部端に滑り嵌めされ
ている。主管５６の下端は、上部室１０の孔１８（第１
図）にはまり込むような形状と寸法である。主溶離管５
６は、下向きにとがっている錐体形状である。コニカル
端の細い端部には、配列決定膜５２が０−リングキャッ
プ６４により所定の位置にしっかりと保持されている。

この０−リングキャップ６４は、錐体の端部にきっちり
とねじ込まれて、主管５６の底部端に膜５２をシールさ
せそして電気泳動の後膜を容易に除去できるようにねじ
外される。更に錐体形状は膜の小さな表面積に溶離され
た分子を方向づけそして濃縮させる。

管組立体５０の使用は組立体２２について前記したのと
同じである。印加電流を試料容器５４と主管５６に通し
、ゲルピース３０中のタンパク質又は他の分子を試料容
器５４の網端部を通して配列決定膜５２に電気泳動させ
る。溶離された分子は主管５６の錐体形状端部により膜
５２に密集して集められる。

溶離の後、管組立体５０を管組立体２２で述べた方法と
同様にして装置から取り外す。Ｏ−リングキャップ６４
をねじ外しそして除去して溶離された分子を保持してい
る膜５２に容易に近接できるようにする。配列決定膜５
２を主管５６から取り外し、気相タンパク質配列決定器
又は同様なものの試料ホルダに直接置く。そのために、
試料ゲルスライスからのタンパク質バンドが膜５２から
直接配列決定される。

上記の配列決定は、多数のゲルピースからのタンパク質
を配列決定膜５２の小さな面積に濃縮する管組立体５０
により可能とされる。好ましい態様では、電気溶離装置
４８は、低濃度（０．００１−０．　　１μｇ／ｍｍ）
で少量（１０−ｔｏｏビコモル）でのみ入手できるタン
パク質の配列決定を可能とする。タンパク質の高収率電
気泳動濃縮は、これらの希小なタンパク質の効率の低い
濃縮及び精製の必要を減少させる。

下記の非限定的実施例により本発明を更に説明する。

実施例 九色 ウシ血清アルブミン（Ｂ　Ｓ　Ａ）を、約１０μＣｉ／
ｍｇの特異的活性に対してヨードビーズ法（Ｉｏｄｏｂ
ｅａｄ　ｍｅｔｈｏｄ）［ビアース・ケミカル社（Ｐｉ
ｅｒｃｅ　ＣｈｅＩ！ｌ．ＣＯ．）］を使用してＮａ”
’Ｉにより標識した。遊離Ｎａ”’をゲル枦過により除
去し、続いて徹底的に透析した。”Ｊ−ＢＳＡを標準方
法に従ってｌＯ％ＳＤＳゲルで電気泳動した。放射性ゲ
ルスライスを未固定のゲルから切り出し、マイクロ電気
溶離器ゲルホルダに入れ、計数して“初期”カウントを
得た。水でｌ：１ｖ／ｖに希釈した標準ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅゲルランニング緩衝液中で約４００ボルト一時電気溶
離を行った。電気溶離の後、ゲルスライスを計数して、
“残存“カウントを得た。溶離されたカウントを、セン
トリコン濃縮器で濃縮しそして計数して”溶離された′
゜カウントを得Ｉ；。

艷象 未固定ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルカラノ１２ｓ■一ＢＳＡの
回収率は一般に９　０−９　５％であった。

初期カウントの約２．５％がゲルスライス中に残ってい
た。

初期カウントの約２．５％がセントリコン膜に結合して
いた。

本発明を特に好ましい態様に関して説明してきたが、形
態及び詳細の種々の変更が特許請求の範囲に記載の精神
及び範囲から逸脱することなくなされうろことは当業者
には理解されるであろう。

本発明の主なる特徴及び態様は以下のとおりである。

１，溶離液を保持する上部緩衝液室と、長手方向軸線に
沿って前記上部緩衝液室に鉛直方向に隣接して配置され
ていて、溶離液を保持する下部緩衝液室と、 （ｉ）　　溶離の後所望の分子を遠心濃縮するための濃
縮器管、該濃縮器管は上部緩衝液室の溶離液に浸漬され
た上部と下部緩衝液室の溶離液に浸漬された下部とを有
しそして或る量の溶離液を保持している、及び、 （ｉｉ）試料ゲルピースと溶離液を保持していて、前記
濃縮器管の上部に取り外し可能に保持された試料ホルダ
、該試料ホルダ中の溶離液は上部緩衝液室の溶離液及び
濃縮器管中の溶離液と流体連通している、 を有する管組立体と、 上部緩衝液室と下部緩衝液室中の溶離液を通して電流を
通じるための電気的手段を備え、かくして所望の分子が
重力の方向に前記試料ゲルピースから溶離され、そして
濃縮器管が遠心処理の用意のできた方位Ｊこある状態で
濃縮器管の下部に集められるようにしたことを特徴とす
る試料ゲルピースから所望の分子を溶離する電気泳動装
置。

２、前記濃縮器管が、溶離された分子を保持するための
前記濃縮器管の下部に配置さ、れた低保持率の膜を備え
ている上記ｌに記載の装置。

３．電流を溶離液に通す前に管組立体の下から気泡を除
去するための気泡除去手段を更に備えている上記ｌに記
載の装置。

４．溶離液を保持する上部緩衝液室と、前記上部緩衝液
室に鉛直方向に隣接して配置されていて、溶離液を保持
する下部緩衝液室と、（１）上部緩衝液室の溶離液に浸
漬された上部と下部緩衝液室の溶離液に浸漬された下部
とを有しそして或る量の溶離液を保持している主管、（
Ｕ）試料ゲルピースと溶離液を保持していて、前記主管
の上部に取り外し可能に保持された試料ホルダ、該試料
ホルダ中の溶離液は上部緩衝液室の溶離液及び主管中の
溶離液と流体連通している、及び、 （ｉｉ）　　溶離された分子を保持するための前記主管
の下部に配置された膜、 を有する管組立体と、 上部緩衝液室と下部緩衝液室中の溶離液を通して電流を
通じるための電気的手段を備え、かくして所望の分子が
重力の方向に前記試料ゲルピースから溶離され、そして
更に次のあ理の用意のできた方位において所望の分子を
保持するように主管の下部部分の前記膜に保持されるよ
うにしたことを特徴とする試料ゲルピースから所望の分
子を溶離する電気泳動装置。

５．前記主管が、遠心処理を使用して所望の分子を遠心
分離ｌこより濃縮する濃縮器管である、上記４に記載の
装Ｉｔ． ６．主管の下部部分が、溶離した分子を前記膜に向けて
方向づけて前記膜上ｌこ保持するように前記膜に向かっ
て細くなっていく錐体形状になっている上記４に記載の
装置。

７．前記前記膜が配列決定膜であり、そして配列決定プ
ロセスで直接使用するために主管から取り外し可能であ
る上記４に記載の装置。

８．（ａ） 溶離液を保持する上部緩衝液室と、 前記上部緩衝液室に鉛直方向に隣接して配置されていて
、溶離液を保持する下部緩衝液室と、（ｉ）上部緩衝液
室の溶離液に浸漬された上部と下部緩衝液室の溶離液に
浸漬された下部とを有しそして或る量の溶離液を保持し
ている主管、（ｉｔ）試料ゲルピースと溶離液を保持し
ていて、前記主管の上部に取り外し可能に保持された試
料ホルダ、該試料ホルダ中の溶離液は上部緩衝液室の溶
離液及び主管中の溶離液と流体連通している、及び（ｉ
ｉｉ）溶離された分子を保持するための前記主管の下部
に配置された膜を有する管組立体と、上部緩衝液室と下
部緩衝液室中の溶離液を通して電流を通じるための電気
的手段を備え、かくして所望の分子が重力の方向に前記
試料ゲルピースから溶離されそして主管の下部の前記膜
に保持されるようにした電気泳動装置を設け、（ｂ）　
　前記電気泳動装置中の溶離液に電流を通して、所望の
分子を、前記膜が更に次の処理の用意のできた方位にあ
る状態で試料ゲルピースから前記膜上に溶離させ、該膜
は所望の分子を保持し、（Ｃ）前記膜に保持された所望
の分子を更に処理するために上部緩衝液室及び下部緩衝
液室から少なくとも主管を取り出す工程を含むことを特
徴とする、試料ゲルピースから更に次の処理に使用可能
な標的膜上に所望の分子を溶離する方法。

９．前記主管が、遠心処理を使用して所望の分子を遠心
分離により濃縮する濃縮器管であり、そして、 前記主管を遠心分離にかけて所望の分子を濃縮する工程
を更に含む上記８に記載の方法。

１０．前記膜が配列決定膜でありそして主管から取り外
し可能であり、 配列決定処理が溶離の後直接行なわれるような配列決定
装置において該膜を処理する上記８に記載の方法。

ＩＩ．電気泳動装置において所望の分子を被験ゲルピー
スから溶離するための管組立体であって、下端に保持さ
れた膜に向かって下向きに細くなっていく錐体形状の下
端を有する主管と、前記主管の下端に前記膜を保持する
ための取り外し可能なキャップと、 前記主管の上端に取り外し可能に保持されていて、溶離
されるべき所望の分子を含むゲルピースを保持するため
の試料容器、該試料容器は、電流、溶離緩衝液及び溶離
された分子を通過させるように両端に孔をあけられてお
り、電界の印加中溶離された分子は前記試料容器から前
記主管を通って前記膜へと進んで該膜上に保持され、主
管の下端の錐体形状により溶離された分子が前記膜１こ
濃縮されるようになっている、 を備えていることを特徴とする管組立体。

１２．前記膜が配列決定膜であり、 前記取り外し可能なキヤ・ノブは、溶離されＩ；分子を
保持している膜を配列決定プロセスで直接使用すること
を可能とするように、電気溶離の後前記膜への接近を可
能とする上記ｌ１に記載の管組立体。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明を具体化する電気泳動装置の部分切り
欠き略図である。 第２図は、安全カバーが取り付けられてレ１る第１図の
電気泳動装置の略図である。 第３図は第１図の装置の管組立体の下から気泡を除去す
るための曲がったピペットの使用を説明する略図である
。 第４図は本発明の他の管組立体の部分部品分解図である
。 図において、ｌＯ・・・上部箱状解放室、ｌ２・・・下
部解放箱状室、１４・・・負の電気端子、ｉ６、２４・
・・電流搬送線、２２・・・管組立体、２６・・・遠心
濃縮器、２８・・・試料ホルダ、３０・・・ゲルピース
、３２・・キャップ、３４・・・コニカルチツプ端、３
６・・・安全カバー　３８・・・標的膜、４０、４２・
・・リード線、４８・・・電気溶離装置、５０・・・管
組立体、５２・・・配列決定膜、５４・・・試料容器、
５６・・・主溶離管、７０・・・正の電気端子、８０・
・・バスチュールピペット、である。 Ｆ／６３ １又り外し珂剤１７ ０・リシ７／千ダッフ ＦＩＧ． ４

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、溶離液を保持する上部緩衝液室と、 長手方向軸線に沿って前記上部緩衝液室に鉛直方向に隣
   接して配置されていて、溶離液を保持する下部緩衝液室
   と、 （ｉ）溶離の後所望の分子を遠心濃縮するための濃縮器
   管、該濃縮器管は上部緩衝液室の溶離液に浸漬された上
   部と下部緩衝液室の溶離液に浸漬された下部とを有しそ
   して或る量の溶離液を保持している、及び、 （ｉｉ）試料ゲルピースと溶離液を保持していて、前記
   濃縮器管の上部に取り外し可能に保持された試料ホルダ
   、該試料ホルダ中の溶離液は上部緩衝液室の溶離液及び
   濃縮器管中の溶離液と流体連通している、 を有する管組立体と、 上部緩衝液室と下部緩衝液室中の溶離液を通して電流を
   通じるための電気的手段を備え、 かくして所望の分子が重力の方向に前記試料ゲルピース
   から溶離され、そして濃縮器管が遠心処理の用意のでき
   た方位にある状態で濃縮器管の下部に集められるように
   したことを特徴とする試料ゲルピースから所望の分子を
   溶離する電気泳動装置。 ２、溶離液を保持する上部緩衝液室と、 前記上部緩衝液室に鉛直方向に隣接して配置されていて
   、溶離液を保持する下部緩衝液室と、（ｉ）上部緩衝液
   室の溶離液に浸漬された上部と下部緩衝液室の溶離液に
   浸漬された下部とを有しそして或る量の溶離液を保持し
   ている主管、（ｉｉ）試料ゲルピースと溶離液を保持し
   ていて、前記主管の上部に取り外し可能に保持された試
   料ホルダ、該試料ホルダ中の溶離液は上部緩衝液室の溶
   離液及び主管中の溶離液と流体連通している、及び、 （ｉｉｉ）溶離された分子を保持するための前記主管の
   下部に配置された膜、 を有する管組立体と、 上部緩衝液室と下部緩衝液室中の溶離液を通して電流を
   通じるための電気的手段を備え、 かくして所望の分子が重力の方向に前記試料ゲルピース
   から溶離され、そして更に次の処理の用意のできた方位
   において所望の分子を保持するように主管の下部の前記
   膜に保持されるようにしたことを特徴とする試料ゲルピ
   ースから所望の分子を溶離する電気泳動装置。 ３、（ａ） 溶離液を保持する上部緩衝液室と、 前記上部緩衝液室に鉛直方向に隣接して配置されていて
   、溶離液を保持する下部緩衝液室と、（ｉ）上部緩衝液
   室の溶離液に浸漬された上部と下部緩衝液室の溶離液に
   浸漬された下部とを有しそして或る量の溶離液を保持し
   ている主管、（ｉｉ）試料ゲルピースと溶離液を保持し
   ていて、前記主管の上部に取り外し可能に保持された試
   料ホルダ、該試料ホルダ中の溶離液は上部緩衝液室の溶
   離液及び主管中の溶離液と流体連通している、及び（ｉ
   ｉｉ）溶離された分子を保持するための前記主管の下部
   に配置された膜を有する管組立体と、 上部緩衝液室と下部緩衝液室中の溶離液を通して電流を
   通じるための電気的手段を備え、 かくして所望の分子が重力の方向に前記試料ゲルピース
   から溶離されそして主管の下部の前記膜に保持されるよ
   うにした電気泳動装置を設け、（ｂ）前記電気泳動装置
   中の溶離液に電流を通して、所望の分子を前記膜が更に
   次の処理の用意のできた方位にある状態で試料ゲルピー
   スから前記膜上に溶離させ、該膜は所望の分子を保持し
   、（ｃ）前記膜に保持された所望の分子を更に処理する
   ために上部緩衝液室及び下部緩衝液室から少なくとも主
   管を取り出す工程を含むことを特徴とする、試料ゲルピ
   ースから更に次の処理に使用可能な標的膜上に所望の分
   子を溶離する方法。 ４、電気泳動装置において所望分子を被験ゲルピースか
   ら溶離するための管組立体であって、下端に保持された
   膜に向かって下向きに細くなつていく錐体形状の下端を
   有する主管と、 前記主管の下端に前記膜を保持するための取り外し可能
   なキャップと、 前記主管の上端に取り外し可能に保持されていて、溶離
   されるべき所望の分子を含むゲルピースを保持するため
   の試料容器、該試料容器は、電流、溶離緩衝液及び溶離
   された分子を通過させるように両端に孔をあけられてお
   り、電界の印加中溶離された分子は前記試料容器から前
   記主管を通って前記膜へと進んで前記膜上に保持され、
   主管の下端の錐体形状により溶離された分子が前記膜に
   濃縮されるようになっている、 を備えていることを特徴とする管組立体。