JPH0359460A - 過酸化脂質の高感度検出方法および検出用組成物 - Google Patents
過酸化脂質の高感度検出方法および検出用組成物Info
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- JPH0359460A JPH0359460A JP19571689A JP19571689A JPH0359460A JP H0359460 A JPH0359460 A JP H0359460A JP 19571689 A JP19571689 A JP 19571689A JP 19571689 A JP19571689 A JP 19571689A JP H0359460 A JPH0359460 A JP H0359460A
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野〕
この発明は、脂質クラスレベルでヒドロペルオキシド型
過酸化脂質の検出を高感度でおこなうことができる検出
方法、およびこの方法に使用される検出用組成物に関す
る。
過酸化脂質の検出を高感度でおこなうことができる検出
方法、およびこの方法に使用される検出用組成物に関す
る。
［従来の技術］
リン脂質等脂質の過酸化物は、一般に、脂肪酸、特に不
飽和脂肪酸に分子状酸素、活性酸素あるいは遊離基が作
用して生成する。不飽和脂肪酸の自動酸化反応によりヒ
ドロペルオキシド型過酸化脂質が生成する。脂質ヒドロ
ペルオキシドは、光増感酸化反応によっても生成する。
飽和脂肪酸に分子状酸素、活性酸素あるいは遊離基が作
用して生成する。不飽和脂肪酸の自動酸化反応によりヒ
ドロペルオキシド型過酸化脂質が生成する。脂質ヒドロ
ペルオキシドは、光増感酸化反応によっても生成する。
このような脂質ヒドロペルオキシドを脂質クラスレベル
で検出することの重要性は、本出願人の出願に係る特開
昭６３−２３３３７４号公報に記載されている。この公
報には、脂質類を含有する試料を液体クロマトグラフィ
ーに供して脂質類を個々の脂質クラスに分離し、この分
離された脂質クラスに特定の発光試薬を作用させること
を包含する方法が開示されている。発光試薬は、脂質ク
ラスに含まれる脂質ヒドロペルオキシドと特異的に反応
してその存在量に応答する光を発生する。
で検出することの重要性は、本出願人の出願に係る特開
昭６３−２３３３７４号公報に記載されている。この公
報には、脂質類を含有する試料を液体クロマトグラフィ
ーに供して脂質類を個々の脂質クラスに分離し、この分
離された脂質クラスに特定の発光試薬を作用させること
を包含する方法が開示されている。発光試薬は、脂質ク
ラスに含まれる脂質ヒドロペルオキシドと特異的に反応
してその存在量に応答する光を発生する。
この発生した光は光検出手段で検出される。こうして、
ヒドロペルオキシド型過酸化脂質が定量的に検出できる
。
ヒドロペルオキシド型過酸化脂質が定量的に検出できる
。
［発明が解決しようとする課題］
上記公報に記載された方法は、数μｍ〜数十μｌの試料
中に含まれるナノモルオーダーのｉ ｌｆｆ１ 化脂質
を脂質クラスレベルで感度よく検出できるものであるが
、発生する光の強さがなお微弱であるため、さらに高感
度で過酸化脂質を検出できる方法の開発が望まれている
。
中に含まれるナノモルオーダーのｉ ｌｆｆ１ 化脂質
を脂質クラスレベルで感度よく検出できるものであるが
、発生する光の強さがなお微弱であるため、さらに高感
度で過酸化脂質を検出できる方法の開発が望まれている
。
この発明は、前記従来の技術の改良を図るものであり、
その目的とするところは、上記従来技術の利点を損なう
ことなくヒドロペルオキシド型過酸化脂質を脂質クラス
レベルでより高感度に検出するための方法、およびそれ
に用いる検出用組成物を提供することにある。
その目的とするところは、上記従来技術の利点を損なう
ことなくヒドロペルオキシド型過酸化脂質を脂質クラス
レベルでより高感度に検出するための方法、およびそれ
に用いる検出用組成物を提供することにある。
この発明の第１の態様による、脂質類を含む試料中のヒ
ドロペルオキシド型過酸化脂質を検出するための方法は
、 （ａ）該試料を液体クロマトグラフィーに供して該脂質
類を個々の脂質クラスに分離する工程、 （ｂ）各脂質クラスを、界面活性剤の存在下に、該過酸
化脂質と特異的に反応してその存在量に応答する光を発
生する発光試薬を包含する検出媒と接触させる工程、お
よび （ｃ）波光を光検出手段で光学的に検出する工程 を包含するものである。
ドロペルオキシド型過酸化脂質を検出するための方法は
、 （ａ）該試料を液体クロマトグラフィーに供して該脂質
類を個々の脂質クラスに分離する工程、 （ｂ）各脂質クラスを、界面活性剤の存在下に、該過酸
化脂質と特異的に反応してその存在量に応答する光を発
生する発光試薬を包含する検出媒と接触させる工程、お
よび （ｃ）波光を光検出手段で光学的に検出する工程 を包含するものである。
この発明の第２の態様による、脂質類を含む試料中のヒ
ドロペルオキシド型過酸化脂質を検出するための方法は
、 （ａ）該試料を、溶出剤に両親媒性溶媒を配合した溶出
媒を用いた液体クロマトグラフィーに供して該脂質類を
個々の脂質クラスに分離する工程、 （ｂ）各脂質クラスを、該過酸化脂質と特異的に反応し
てその存在量に応答する光を発生する発光試薬を包含す
る検出媒と接触させる工程、および （ｃ）波光を光検出手段で光学的に検出する工程 を包含するものである。
ドロペルオキシド型過酸化脂質を検出するための方法は
、 （ａ）該試料を、溶出剤に両親媒性溶媒を配合した溶出
媒を用いた液体クロマトグラフィーに供して該脂質類を
個々の脂質クラスに分離する工程、 （ｂ）各脂質クラスを、該過酸化脂質と特異的に反応し
てその存在量に応答する光を発生する発光試薬を包含す
る検出媒と接触させる工程、および （ｃ）波光を光検出手段で光学的に検出する工程 を包含するものである。
溶出媒として両親媒性溶剤を添加した溶出剤を用い、か
つ脂質クラスと発光試薬との接触を界面活性剤の存在下
でおこなうとさらに感度が向上する。
つ脂質クラスと発光試薬との接触を界面活性剤の存在下
でおこなうとさらに感度が向上する。
また、この発明によれば、脂質類を含む試料中のヒドロ
ペルオキシド型過酸化脂質と作用してその存在量に対応
する光を発生する過酸化脂質検出用組成物であって、該
過酸化脂質と特異的に反応してその存在量に応答する光
を発生する発光試薬および界面活性剤を包含する検出用
組成物が提供される。
ペルオキシド型過酸化脂質と作用してその存在量に対応
する光を発生する過酸化脂質検出用組成物であって、該
過酸化脂質と特異的に反応してその存在量に応答する光
を発生する発光試薬および界面活性剤を包含する検出用
組成物が提供される。
［作用］
前記従来技術におけると同様、基本的には、この発明に
おいても、脂質類を含有する試料を、液体クロマトグラ
フィーにより、個々の脂質クラスに分離し、この分離さ
れた脂質クラスを発光試薬と接触させそれにより脂質ク
ラス中に共存するヒドロペルオキシド型過酸化脂質と特
異的に反応させて発光させ、この光を光検出器により検
出するものである。この発明においては、脂質クラスの
発光試薬との接触を界面活性剤の存在下におこなうか、
および（または）溶出剤に両親媒性溶媒を添加した溶出
媒を用いて液体クロマトグラフィによる分離をおこなう
ことによって、発光強度を大幅に増大させ、もって検出
感度をさらに高感度におこなわせるものである。界面活
性剤は、発光試薬に予め混合させ、検出用組成物として
用いることができる。
おいても、脂質類を含有する試料を、液体クロマトグラ
フィーにより、個々の脂質クラスに分離し、この分離さ
れた脂質クラスを発光試薬と接触させそれにより脂質ク
ラス中に共存するヒドロペルオキシド型過酸化脂質と特
異的に反応させて発光させ、この光を光検出器により検
出するものである。この発明においては、脂質クラスの
発光試薬との接触を界面活性剤の存在下におこなうか、
および（または）溶出剤に両親媒性溶媒を添加した溶出
媒を用いて液体クロマトグラフィによる分離をおこなう
ことによって、発光強度を大幅に増大させ、もって検出
感度をさらに高感度におこなわせるものである。界面活
性剤は、発光試薬に予め混合させ、検出用組成物として
用いることができる。
［実施例］
以下、この発明を図面を参照して詳しく説明する。
第１図は、この発明を実施するために用いる検出用装置
の一具体例を示すものであり、その基本構成は、特開昭
６３−２３３３７４号公報に記載の装置と同じである。
の一具体例を示すものであり、その基本構成は、特開昭
６３−２３３３７４号公報に記載の装置と同じである。
すなわち、この装置は、液体クロマトグラフィー好まし
くは高速液体クロマトクラフィーＨＰＬＣを備えている
。このクロマトグラフィーＨＰＬＣは、カラム移動相す
なわち溶出媒（以後詳述する）１を送出する液送出ポン
プ２、この送出された溶出媒に、脂質類を含有する試１
１３を注入するインジェクター４、およびインジェクタ
ー４によって送出される試料が混和した溶出媒を受容す
るカラム５によって構成される。
くは高速液体クロマトクラフィーＨＰＬＣを備えている
。このクロマトグラフィーＨＰＬＣは、カラム移動相す
なわち溶出媒（以後詳述する）１を送出する液送出ポン
プ２、この送出された溶出媒に、脂質類を含有する試１
１３を注入するインジェクター４、およびインジェクタ
ー４によって送出される試料が混和した溶出媒を受容す
るカラム５によって構成される。
カラム５には、吸着剤（図示せず）が充填されている。
カラム５からは、吸着剤の吸着能に応じて、試料３に含
まれる脂質類が、脂質クラスに分離されて溶出する。
まれる脂質類が、脂質クラスに分離されて溶出する。
カラム５の溶出部には、カラム５から分離・溶出される
各脂質クラス成分の紫外吸収を検出するための紫外吸収
検出器６が設けられている（なお、この紫外吸収検出器
６は特に設けなくともよい）。
各脂質クラス成分の紫外吸収を検出するための紫外吸収
検出器６が設けられている（なお、この紫外吸収検出器
６は特に設けなくともよい）。
この検出器６を通った各脂質クラス成分に、液送出ポン
プ７により発光試薬を包含する検出線８（以後詳述する
）が注入される。
プ７により発光試薬を包含する検出線８（以後詳述する
）が注入される。
発光試薬が注入された各成分は、フローセル９に導かれ
る。このフローセル９近傍には、例えば、小−光電子計
数方式による微弱光検出器（ｃｈｓｍｌ−Ｉｕａｉｎｅ
ｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｉｏｒ ） １０が、その光
電子増倍管がフローセル９と対向するように設置されて
いる。フローセル９内を通過する各成分から発生される
光は、微弱光検出器１０によって検出される。この微弱
光検出器１０および紫外吸収検出器６の検出結果は、例
えばペンレコーダーからなる記録器１１によって記録さ
れる。
る。このフローセル９近傍には、例えば、小−光電子計
数方式による微弱光検出器（ｃｈｓｍｌ−Ｉｕａｉｎｅ
ｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｉｏｒ ） １０が、その光
電子増倍管がフローセル９と対向するように設置されて
いる。フローセル９内を通過する各成分から発生される
光は、微弱光検出器１０によって検出される。この微弱
光検出器１０および紫外吸収検出器６の検出結果は、例
えばペンレコーダーからなる記録器１１によって記録さ
れる。
高速液体クロマトグラフィーＨＰＬＣのカラム５に充填
される吸着剤としては、特開昭６３−２３３３７４号公
報に記載のものを使用することができる。この発明にお
いても好ましいカラム５は、オクタデシルシラン処理シ
リカゲルを充填した逆相カラム、または順相シリカゲル
カラムである。
される吸着剤としては、特開昭６３−２３３３７４号公
報に記載のものを使用することができる。この発明にお
いても好ましいカラム５は、オクタデシルシラン処理シ
リカゲルを充填した逆相カラム、または順相シリカゲル
カラムである。
発光試薬は、通常、ヒドロペルオキシド型過酸化脂質に
作用して活性酸素、酸素ラジカル等の活性酸素種を生成
させる触媒と、生成した活性酸素種と反応して発光する
発光剤との組合せからなる。
作用して活性酸素、酸素ラジカル等の活性酸素種を生成
させる触媒と、生成した活性酸素種と反応して発光する
発光剤との組合せからなる。
触媒の例を挙げると、特開昭６３−２３３３７４号公報
に記載されている、２価の陽イオンを生ずる遷移金属の
塩、２価状態の遷移金属の錯体、ヘムタンパク質、ヘム
ペプチド、ヘム酵素等である。
に記載されている、２価の陽イオンを生ずる遷移金属の
塩、２価状態の遷移金属の錯体、ヘムタンパク質、ヘム
ペプチド、ヘム酵素等である。
これら触媒は、特開昭６３−２３３３７４号公報記載の
濃度で使用される。
濃度で使用される。
発光剤の例を挙げると、特開昭６３−２３３３７４号公
報に記載されているポリヒドロキシフェノール類、フタ
ラジン誘導体、インドール誘導体、チアゾリン誘導体、
アクリジン誘導体、シュウ酸誘導体、１，２−ジオキサ
−４，５−アジン誘導体などであり、これらは、特開昭
６３−２３３３７４号公報に記載の濃度で使用される。
報に記載されているポリヒドロキシフェノール類、フタ
ラジン誘導体、インドール誘導体、チアゾリン誘導体、
アクリジン誘導体、シュウ酸誘導体、１，２−ジオキサ
−４，５−アジン誘導体などであり、これらは、特開昭
６３−２３３３７４号公報に記載の濃度で使用される。
発光試薬としては、チトクロームＣとルミノールとの組
合せが特に好ましい。
合せが特に好ましい。
その他、ｉｌ？Ｊ定に際しての発光試薬溶液の液性、測
定雰囲気、分析対象となるヒドロペルオキシド型過酸化
脂質、検量線の作成等についても特開昭６３−２３３３
７４号公報に記載の通りである。
定雰囲気、分析対象となるヒドロペルオキシド型過酸化
脂質、検量線の作成等についても特開昭６３−２３３３
７４号公報に記載の通りである。
さて、この発明の改良に係る第１の態様によれば、高速
液体クロマトグラフィーＨＰＬＣのカラム５から分離さ
れて溶出する各脂質クラス成分を発光試薬と接触させる
際に、界面活性剤を共存させる。溶出媒１は、メタノー
ル、クロロホルム、メタノール−クロロホルム等の従来
の溶出剤でよい。界面活性剤は、発光試薬と別個に試料
３に注入するようにしてもよいが、これを別途発光試薬
と予め混合して検出用組成物を作っておき、これを使用
時に緩衝液に溶かすか、予め緩衝状に溶かしておき検出
器８として用いると都合がよい。
液体クロマトグラフィーＨＰＬＣのカラム５から分離さ
れて溶出する各脂質クラス成分を発光試薬と接触させる
際に、界面活性剤を共存させる。溶出媒１は、メタノー
ル、クロロホルム、メタノール−クロロホルム等の従来
の溶出剤でよい。界面活性剤は、発光試薬と別個に試料
３に注入するようにしてもよいが、これを別途発光試薬
と予め混合して検出用組成物を作っておき、これを使用
時に緩衝液に溶かすか、予め緩衝状に溶かしておき検出
器８として用いると都合がよい。
この発明で用いる界面活性剤は、通常のいわゆる界面活
性剤の範鴫に含まれるものであればよく、ドデシル硫酸
ナトリウムのような硫酸エステル塩やスルホン酸塩等の
陰イオン界面活性剤、アルキルアミン塩、アルキルアン
モニウム塩、ピリジニウム塩等の陽イオン界面活性剤、
多価アルコール脂肪酸エステル等の非イオン界面活性剤
、ベタイン型およびアミノ酸型界面活性剤等の両性界面
活性剤などを使用することができる。ドデシル硫酸ナト
リウムが好ましい。界面活性剤は、０．１〜１０μＭの
濃度で使用される。すなわち、上記検出用組成物は、０
．１ないし１０００μｇ／ｍ＋（好ましくは、１ないし
２００μｇ ／ ｍ １ ）の割合の触媒、０．１μｇ
／ ｍ １以上の割合の発光剤を含みこれに０．１μ
Ｍないし１０μＭの界面活性剤を含む。この第１の態様
において、各脂質クラスと発光試薬との接触を上述の界
面活性剤の存在下になうことを除けば、他の操作は、第
１図に関して説明した操作と同じである。
性剤の範鴫に含まれるものであればよく、ドデシル硫酸
ナトリウムのような硫酸エステル塩やスルホン酸塩等の
陰イオン界面活性剤、アルキルアミン塩、アルキルアン
モニウム塩、ピリジニウム塩等の陽イオン界面活性剤、
多価アルコール脂肪酸エステル等の非イオン界面活性剤
、ベタイン型およびアミノ酸型界面活性剤等の両性界面
活性剤などを使用することができる。ドデシル硫酸ナト
リウムが好ましい。界面活性剤は、０．１〜１０μＭの
濃度で使用される。すなわち、上記検出用組成物は、０
．１ないし１０００μｇ／ｍ＋（好ましくは、１ないし
２００μｇ ／ ｍ １ ）の割合の触媒、０．１μｇ
／ ｍ １以上の割合の発光剤を含みこれに０．１μ
Ｍないし１０μＭの界面活性剤を含む。この第１の態様
において、各脂質クラスと発光試薬との接触を上述の界
面活性剤の存在下になうことを除けば、他の操作は、第
１図に関して説明した操作と同じである。
この発明の改良に係る第２の態様において、試料を高速
液体クロマトグラフィーＨＰＬＣで脂質クラスに分離す
る際に、メタノール、クロロホルム、メタノール−クロ
ロホルム等の従来の溶出剤に両親媒性溶媒を添加し、こ
れを溶出媒１として用いて溶出・分離をおこなう。この
場合、発光試薬に界面活性剤を混合する必要は特になく
、上記発光試薬をそのまま検出器８として用いてよい。
液体クロマトグラフィーＨＰＬＣで脂質クラスに分離す
る際に、メタノール、クロロホルム、メタノール−クロ
ロホルム等の従来の溶出剤に両親媒性溶媒を添加し、こ
れを溶出媒１として用いて溶出・分離をおこなう。この
場合、発光試薬に界面活性剤を混合する必要は特になく
、上記発光試薬をそのまま検出器８として用いてよい。
両親媒性溶媒としては、ピリジンのほか、アセトン等の
ケトン、テトラヒドロフランや１，４−ジオキサンなど
のエーテル、グリコールカーボネート等のエステル、ジ
エチレングリコールなどのエーテルアルコール、グリセ
リン等の多価アルコール、その他アセトニトリル、ホル
ムアミド、ジメチルホルムアミド、二硫化炭素、アニリ
ン等がある。
ケトン、テトラヒドロフランや１，４−ジオキサンなど
のエーテル、グリコールカーボネート等のエステル、ジ
エチレングリコールなどのエーテルアルコール、グリセ
リン等の多価アルコール、その他アセトニトリル、ホル
ムアミド、ジメチルホルムアミド、二硫化炭素、アニリ
ン等がある。
上記両親媒性溶媒は、溶出剤に対して０．０１μＭない
し１００μＭ１好ましくは、０．１μＭないし１０μＭ
の割合で用いられる。この第２の態様において、溶出媒
として、溶出剤と両親媒性溶媒との混合物を使用するこ
とを除けば、他の操作は、第１図に関して説明した操作
と同じである。
し１００μＭ１好ましくは、０．１μＭないし１０μＭ
の割合で用いられる。この第２の態様において、溶出媒
として、溶出剤と両親媒性溶媒との混合物を使用するこ
とを除けば、他の操作は、第１図に関して説明した操作
と同じである。
この発明により、上記従来の方法の利点を損なうことな
く、ヒドロペルオキシド型過酸化脂質の検出感度を向上
させることができる。なお、この発明は、上記第１の態
様と第２の態様とを組み合せて実施する（すなわち、溶
出媒として両親媒性溶剤を添加した溶出剤を用い、かつ
脂質クラスと発光試薬との接触を界面活性剤の存在下で
おこなう）ことができる。これによりさらに検出感度を
向上させることができる。
く、ヒドロペルオキシド型過酸化脂質の検出感度を向上
させることができる。なお、この発明は、上記第１の態
様と第２の態様とを組み合せて実施する（すなわち、溶
出媒として両親媒性溶剤を添加した溶出剤を用い、かつ
脂質クラスと発光試薬との接触を界面活性剤の存在下で
おこなう）ことができる。これによりさらに検出感度を
向上させることができる。
以下、この発明の実施例を記載する。
実施例 １
第１図に示す構成の装置を用いヒドロペルオキシド型過
酸化脂質の検出を行なった。試料として、卵黄ホスファ
チジルコリンをメチレンブルーを用いて光増感酸化した
ホスファチジルコリンヒドロペルオ午シト（ＰＣＯＯＨ
）を４９７ピコモル含有する試料を２０μｌ用いた。
酸化脂質の検出を行なった。試料として、卵黄ホスファ
チジルコリンをメチレンブルーを用いて光増感酸化した
ホスファチジルコリンヒドロペルオ午シト（ＰＣＯＯＨ
）を４９７ピコモル含有する試料を２０μｌ用いた。
溶出媒１は、クロロホルム−メタノール（容量比１；９
）であり、流ｆｉｌ、１ｍｌ／分で流した。
）であり、流ｆｉｌ、１ｍｌ／分で流した。
また、装置の仕様は、以下の通りであった。
送出ポンプ２：
日本分光社製８８０−ＰＵ型ポンプ
試料インジェクター４：
島村計器製作所製ＶＭＤ−ＥＩＥサンプルインジェクタ
ー カラム５： ニュークレオジル１０ Ｃ、ａカラム（ＯＤＳ処理処理
シリカバ５μｍ５０ｘ４．６ｍｍ）紫外吸収検出器６： Ｅ３本分光社製ＵＶ ＩＤＥＣ−１００−ｍＵＶ検出器
（但し、この検出器による測定データは取らなかった） 送出ポンプ７ 協和精密社製ＫＨＤ−５２型ポンプ 微弱光検出器１０： 東北電子産業社製ケミルミネッセンスアナライザ０Ｘ−
７型 記録器１１： ５ＥＫＯＮＩＫ ５Ｓ−２５０Ｆ型２ペンレコーダ 発光試薬としては、チトクロームＣ（１００μｇ ／
ｍ Ｉ ）とルミノール（１μｇ ／ ｍ ｌ ）を溶
解した５０ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ９，３）溶液を用い
、これに以下の表１に示す濃度で界面活性剤ドデシル硫
酸ナトリウム（Ｓ Ｄ Ｓ）を配合した組成物を検出線
８として用い、１．０ｍｌ／分の流速で流した。これら
条件の下でそれぞれｐｃｏ。
ー カラム５： ニュークレオジル１０ Ｃ、ａカラム（ＯＤＳ処理処理
シリカバ５μｍ５０ｘ４．６ｍｍ）紫外吸収検出器６： Ｅ３本分光社製ＵＶ ＩＤＥＣ−１００−ｍＵＶ検出器
（但し、この検出器による測定データは取らなかった） 送出ポンプ７ 協和精密社製ＫＨＤ−５２型ポンプ 微弱光検出器１０： 東北電子産業社製ケミルミネッセンスアナライザ０Ｘ−
７型 記録器１１： ５ＥＫＯＮＩＫ ５Ｓ−２５０Ｆ型２ペンレコーダ 発光試薬としては、チトクロームＣ（１００μｇ ／
ｍ Ｉ ）とルミノール（１μｇ ／ ｍ ｌ ）を溶
解した５０ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ９，３）溶液を用い
、これに以下の表１に示す濃度で界面活性剤ドデシル硫
酸ナトリウム（Ｓ Ｄ Ｓ）を配合した組成物を検出線
８として用い、１．０ｍｌ／分の流速で流した。これら
条件の下でそれぞれｐｃｏ。
Ｈの検出操作をおこなった。結果（ＰＣＯＯＨのカウン
ト数）を、表１に併記する。
ト数）を、表１に併記する。
表 １
ＳＤＳ添加濃度 カウント数（単位万）無添加
８２±３ ０．０１ＨＭ ９３±４ ０．１８Ｍ １０２±３ １．０８Ｍ １２４±３ １０．０８Ｍ １３８±４ 表１に示す結果かられかるように、試料と発光試薬との
接触時に界面活性剤を共存させることにより、過酸化脂
質の検出感度が大幅に向上する。
８２±３ ０．０１ＨＭ ９３±４ ０．１８Ｍ １０２±３ １．０８Ｍ １２４±３ １０．０８Ｍ １３８±４ 表１に示す結果かられかるように、試料と発光試薬との
接触時に界面活性剤を共存させることにより、過酸化脂
質の検出感度が大幅に向上する。
実施例 ２
実施例１で使用した装置と同一仕様の装置を用い、過酸
化脂質の検出をおこなった。試料は、メチレンブルーを
用いた光増感酸化で一重項酸素を発生させこれにα−ト
コフェロールを反応させて生成したトコフェロールヒド
ロペルオキシジエン（Ｔｏｅ−００Ｈ）を５００ピコモ
ル含むメタノール溶液であり、２０μｌ用いた。
化脂質の検出をおこなった。試料は、メチレンブルーを
用いた光増感酸化で一重項酸素を発生させこれにα−ト
コフェロールを反応させて生成したトコフェロールヒド
ロペルオキシジエン（Ｔｏｅ−００Ｈ）を５００ピコモ
ル含むメタノール溶液であり、２０μｌ用いた。
また、検出線８は、界面活性剤を含まない実施例１で用
いた発光試薬であり、これを１，１ｍｌ／分の流速で流
した。これら条件の下で、溶出媒としてピリジンを１重
量％の割合で含有するメタノール、およびメタノール単
独をそれぞれ用い、それぞれ１．Ｏｍｌ／分の流速で流
してＴｏｃ−００ＩＩの検出操作をおこなった。検出結
果を第２図に示す。同図中、曲線ａは、メタノール単独
を溶出媒として用いた結果であり、曲線すは、ピリジン
を添加したメタノールを溶出媒として用いた場合の結果
である。これらの結果から、溶出溶媒として、溶出剤に
両親媒性溶媒を混合すると、溶出剤を単独に用いた場合
よりも、発光量が大幅に（この例の場合、約９．５倍）
向上することが分かる。
いた発光試薬であり、これを１，１ｍｌ／分の流速で流
した。これら条件の下で、溶出媒としてピリジンを１重
量％の割合で含有するメタノール、およびメタノール単
独をそれぞれ用い、それぞれ１．Ｏｍｌ／分の流速で流
してＴｏｃ−００ＩＩの検出操作をおこなった。検出結
果を第２図に示す。同図中、曲線ａは、メタノール単独
を溶出媒として用いた結果であり、曲線すは、ピリジン
を添加したメタノールを溶出媒として用いた場合の結果
である。これらの結果から、溶出溶媒として、溶出剤に
両親媒性溶媒を混合すると、溶出剤を単独に用いた場合
よりも、発光量が大幅に（この例の場合、約９．５倍）
向上することが分かる。
以上、この発明を具体的な態様に即して説明したが、こ
の発明は、それらに限定されるものではない。例えば、
この発明を実施するに当り、第１図に示した装置の代わ
りに、特開昭６３−２３３３７４号公報の第９図に示さ
れている構成の装置を用いることができる。その他、こ
の発明の要旨を変えない範囲で、種々変形実施可能であ
る。
の発明は、それらに限定されるものではない。例えば、
この発明を実施するに当り、第１図に示した装置の代わ
りに、特開昭６３−２３３３７４号公報の第９図に示さ
れている構成の装置を用いることができる。その他、こ
の発明の要旨を変えない範囲で、種々変形実施可能であ
る。
［発明の効果］
以上詳述したように、この発明によれば、ヒドロペルオ
キシド型過酸化脂質を脂質クラスレベルで非常に高い感
度で検出することができる。
キシド型過酸化脂質を脂質クラスレベルで非常に高い感
度で検出することができる。
第１図は、この発明を実施するために使用して好適な装
置の一例を示す構成図、第２図は、この発明による過酸
化脂質の測定結果を比較例とともに示すグラフ図。 ＨＰＬＣ・ ・高速液体クロマトゲラフィート ・溶出
媒、３・ ・試料、 ５・・・カラム、８・ ・検出線、 １０・ ・微弱光検出器
置の一例を示す構成図、第２図は、この発明による過酸
化脂質の測定結果を比較例とともに示すグラフ図。 ＨＰＬＣ・ ・高速液体クロマトゲラフィート ・溶出
媒、３・ ・試料、 ５・・・カラム、８・ ・検出線、 １０・ ・微弱光検出器
Claims (4)
- （１）脂質類を含む試料中のヒドロペルオキシド型過酸
化脂質を検出するための方法であって、（ａ）該試料を
液体クロマトグラフィーに 供して該脂質類を個々の脂質クラスに分離する工程、 （ｂ）各脂質クラスを、界面活性剤の存在 下に、該過酸化脂質と特異的に反応してその存在量に応
答する光を発生する発光試薬を包含する検出媒と接触さ
せる工程、および （ｃ）該光を光検出手段で光学的に検出す る工程 を包含する過酸化脂質の検出方法。 - （２）脂質類を含む試料中のヒドロペルオキシド型過酸
化脂質を検出するための方法であって、（ａ）該試料を
、溶出剤に両親媒性溶媒を 配合した溶出媒を用いた液体クロマトグラフィーに供し
て該脂質類を個々の脂質クラスに分離する工程、 （ｂ）各脂質クラスを、該過酸化脂質と特 異的に反応してその存在量に応答する光を発生する発光
試薬を包含する検出媒と接触させる工程、および （ｃ）該光を光検出手段で光学的に検出す る工程 を包含する過酸化脂質の検出方法。 - （３）脂質クラスと発光試薬との接触を界面活性剤の存
在下で行なう請求項２記載の検出方法。 - （４）脂質類を含む試料中のヒドロペルオキシド型過酸
化脂質と作用してその存在量に対応する光を発生する過
酸化脂質検出用組成物であって、該過酸化脂質と特異的
に反応してその存在量に応答する光を発生する発光試薬
および界面活性剤を包含する検出用組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19571689A JPH0359460A (ja) | 1989-07-28 | 1989-07-28 | 過酸化脂質の高感度検出方法および検出用組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19571689A JPH0359460A (ja) | 1989-07-28 | 1989-07-28 | 過酸化脂質の高感度検出方法および検出用組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0359460A true JPH0359460A (ja) | 1991-03-14 |
Family
ID=16345783
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19571689A Pending JPH0359460A (ja) | 1989-07-28 | 1989-07-28 | 過酸化脂質の高感度検出方法および検出用組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0359460A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20020055637A (ko) * | 2000-12-29 | 2002-07-10 | 이계안 | 자동차용 에어엘리먼트 오염 및 이상 진단 장치 |
| JP2013076692A (ja) * | 2011-09-13 | 2013-04-25 | Taisho Pharmaceutical Co Ltd | リン脂質酸化体を用いた疲労の判定方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57122800A (en) * | 1980-12-08 | 1982-07-30 | Boehringer Mannheim Gmbh | Method and reagent for measuring cholesterine |
| JPS57182144A (en) * | 1981-05-02 | 1982-11-09 | Asama Kasei Kk | Aminoacid analysis device |
| JPS62103542A (ja) * | 1985-07-22 | 1987-05-14 | Fuji Photo Film Co Ltd | 一体型多層分析要素 |
| JPS6450961A (en) * | 1987-08-21 | 1989-02-27 | Tosoh Corp | Method and apparatus for measuring lipoperoxide |
-
1989
- 1989-07-28 JP JP19571689A patent/JPH0359460A/ja active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57122800A (en) * | 1980-12-08 | 1982-07-30 | Boehringer Mannheim Gmbh | Method and reagent for measuring cholesterine |
| JPS57182144A (en) * | 1981-05-02 | 1982-11-09 | Asama Kasei Kk | Aminoacid analysis device |
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| JPS6450961A (en) * | 1987-08-21 | 1989-02-27 | Tosoh Corp | Method and apparatus for measuring lipoperoxide |
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|---|---|---|---|---|
| KR20020055637A (ko) * | 2000-12-29 | 2002-07-10 | 이계안 | 자동차용 에어엘리먼트 오염 및 이상 진단 장치 |
| JP2013076692A (ja) * | 2011-09-13 | 2013-04-25 | Taisho Pharmaceutical Co Ltd | リン脂質酸化体を用いた疲労の判定方法 |
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