JPH0361648B2 - - Google Patents
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- JPH0361648B2 JPH0361648B2 JP58136793A JP13679383A JPH0361648B2 JP H0361648 B2 JPH0361648 B2 JP H0361648B2 JP 58136793 A JP58136793 A JP 58136793A JP 13679383 A JP13679383 A JP 13679383A JP H0361648 B2 JPH0361648 B2 JP H0361648B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- derived
- cells
- medium
- extraction
- cell carcinoma
- Prior art date
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- Expired - Lifetime
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
- C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
この発明は、人の癌由来細胞の増殖抑制剤の精
製方法に関する。 本出願人は、すでに動物の悪性腫瘍細胞の培養
後培地より悪性腫瘍細胞を除いて抽出したものか
らなる動物の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤を特願昭57
−143340号（特開昭59−33223号）として提供し
た。この悪性腫瘍細胞増殖抑制剤は、正常細胞に
対して致死効果がなく、悪性腫瘍細胞に対して増
殖抑制や致死効果を特異に有している。 この発明の目的は、より少ない投与量で人の癌
由来細胞に対し、より著しい増殖抑制効果を有す
る増殖抑制剤を得るための精製方法を提供するこ
とにある。 本発明の人の癌由来細胞の増殖抑制剤の精製方
法はヒト腎細胞癌由来樹立株細胞を成長用培地で
飽和状態になるまで培養した、次にこれを無血清
の抽出培地に写し、抽出培養完了後、分子量103
で分画して前記ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞を除
き、さらに凍結乾燥を行つたものをPH７〜PH９で
ｎ−ブタノール抽出し、蒸発乾固することとを特
徴とする。 この発明によれば、必要に応じて溶解して使用
することのできる固型物とした人の癌由来細胞に
対する増殖抑制剤を得ることができる。 そして、この発明により得られた悪性腫瘍細胞
の増殖抑制剤は、ヒト腎由来樹立株細胞HRCの
細胞増殖（cell growth）に対し、投薬反応
（dose response）を持つ抑制効果を有している。
また、形態的にも、ヒト腎由来樹立株細胞HRC
に対する特徴的な形態変化が認められ、この発明
により得られた物質は、ブタノールにより抽出さ
れていることがわかる。なお、ヒト皮膚線維芽細
胞に対しての効果は、今回のものではほとんど認
められず、増殖抑制効果は、ヒト癌由来細胞に特
有のものと考えられる。 （実施例 １） １ 使用した細胞 ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞HRC ２ 培養 まず、ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞HRCを成
長用培地にて培養器に飽和状態になるまで増殖
し、次にこれを無血清の抽出培地に移し、抽出培
養を行なつた。 ３ 抽出 抽出培養完了後、ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞
HRCを取除くため、分子量103で分画するフイル
ターを用いて限外濾過を行なつた。次に凍結乾燥
を行ない、さらに10倍濃度で再び溶解したものに
ついて、ｎ−ブタノール，ヘキサン及びメチルア
セートによる有機溶媒で抽出を行なつた。 抽出法は、等量抽出で１回行ない、培地のPH
は、３，７，９に設定した。なお、対照として未
使用の培地に対し、同様の操作を行なつた。 次に、実験群及び対照群の有機溶媒の抽出分画
を45゜に加温し、エヴアポレーターにて蒸発乾固
させた。 次に実施例１の効果を確認するための実験につ
いて述べる。 １ 人の癌由来細胞増殖抑制剤の検定法 この実験において、各抽出グループとも元の培
地量に換算して60ml分について抽出を行ない、蒸
発乾固して得たものを0.6mlのDimethyl
Sulphoxide（DMSO）にて再び溶解し、各検定の
グループにおいて、培地1.5mlに対し、15μlずつ
投与した。また、対照群には同様のDimethyl
Sulphoxide（DMSO）のみ投与した。 増殖を検定する細胞はヒト腎細胞癌由来樹立株
細胞HRCを用い、24holeの多孔皿（multi well
plate）に104個植え込み、実験群の各々を10％新
生仔牛血清を添加したBasal Medium Eagle
（BME）に混合したものを培地として、一日おき
に培地交換を行なつた。こうして、凍結乾燥前の
未処理抽出培地，ｎ−ブタノール等による抽出を
行なわない凍結乾燥後のもの、ｎ−ブタノール抽
出によるもので培地がPH３のもの、PH５のもの、
PH７のもの、ヘキサン抽出によるもので培地がPH
３のもの、PH７のもの、PH９のもの及びエチルア
セテート抽出群について、６日間培養しヒト腎細
胞癌由来樹立株細胞HRC数を数えて生存率を調
べた。 ２ 実験結果 前記実験結果を表１に示す。
製方法に関する。 本出願人は、すでに動物の悪性腫瘍細胞の培養
後培地より悪性腫瘍細胞を除いて抽出したものか
らなる動物の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤を特願昭57
−143340号（特開昭59−33223号）として提供し
た。この悪性腫瘍細胞増殖抑制剤は、正常細胞に
対して致死効果がなく、悪性腫瘍細胞に対して増
殖抑制や致死効果を特異に有している。 この発明の目的は、より少ない投与量で人の癌
由来細胞に対し、より著しい増殖抑制効果を有す
る増殖抑制剤を得るための精製方法を提供するこ
とにある。 本発明の人の癌由来細胞の増殖抑制剤の精製方
法はヒト腎細胞癌由来樹立株細胞を成長用培地で
飽和状態になるまで培養した、次にこれを無血清
の抽出培地に写し、抽出培養完了後、分子量103
で分画して前記ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞を除
き、さらに凍結乾燥を行つたものをPH７〜PH９で
ｎ−ブタノール抽出し、蒸発乾固することとを特
徴とする。 この発明によれば、必要に応じて溶解して使用
することのできる固型物とした人の癌由来細胞に
対する増殖抑制剤を得ることができる。 そして、この発明により得られた悪性腫瘍細胞
の増殖抑制剤は、ヒト腎由来樹立株細胞HRCの
細胞増殖（cell growth）に対し、投薬反応
（dose response）を持つ抑制効果を有している。
また、形態的にも、ヒト腎由来樹立株細胞HRC
に対する特徴的な形態変化が認められ、この発明
により得られた物質は、ブタノールにより抽出さ
れていることがわかる。なお、ヒト皮膚線維芽細
胞に対しての効果は、今回のものではほとんど認
められず、増殖抑制効果は、ヒト癌由来細胞に特
有のものと考えられる。 （実施例 １） １ 使用した細胞 ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞HRC ２ 培養 まず、ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞HRCを成
長用培地にて培養器に飽和状態になるまで増殖
し、次にこれを無血清の抽出培地に移し、抽出培
養を行なつた。 ３ 抽出 抽出培養完了後、ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞
HRCを取除くため、分子量103で分画するフイル
ターを用いて限外濾過を行なつた。次に凍結乾燥
を行ない、さらに10倍濃度で再び溶解したものに
ついて、ｎ−ブタノール，ヘキサン及びメチルア
セートによる有機溶媒で抽出を行なつた。 抽出法は、等量抽出で１回行ない、培地のPH
は、３，７，９に設定した。なお、対照として未
使用の培地に対し、同様の操作を行なつた。 次に、実験群及び対照群の有機溶媒の抽出分画
を45゜に加温し、エヴアポレーターにて蒸発乾固
させた。 次に実施例１の効果を確認するための実験につ
いて述べる。 １ 人の癌由来細胞増殖抑制剤の検定法 この実験において、各抽出グループとも元の培
地量に換算して60ml分について抽出を行ない、蒸
発乾固して得たものを0.6mlのDimethyl
Sulphoxide（DMSO）にて再び溶解し、各検定の
グループにおいて、培地1.5mlに対し、15μlずつ
投与した。また、対照群には同様のDimethyl
Sulphoxide（DMSO）のみ投与した。 増殖を検定する細胞はヒト腎細胞癌由来樹立株
細胞HRCを用い、24holeの多孔皿（multi well
plate）に104個植え込み、実験群の各々を10％新
生仔牛血清を添加したBasal Medium Eagle
（BME）に混合したものを培地として、一日おき
に培地交換を行なつた。こうして、凍結乾燥前の
未処理抽出培地，ｎ−ブタノール等による抽出を
行なわない凍結乾燥後のもの、ｎ−ブタノール抽
出によるもので培地がPH３のもの、PH５のもの、
PH７のもの、ヘキサン抽出によるもので培地がPH
３のもの、PH７のもの、PH９のもの及びエチルア
セテート抽出群について、６日間培養しヒト腎細
胞癌由来樹立株細胞HRC数を数えて生存率を調
べた。 ２ 実験結果 前記実験結果を表１に示す。
【表】
以上のことにより、PH７，９のｎ−ブタノール
抽出分画に存在する物質は、未処理抽出培地より
得られたものに比べ、百分の一の僅かな投与量で
同様に人の癌由来細胞に対する増殖抑制効果を得
ることができる。 なお、回収率は、100から生存率を引いて死亡
率を求め、各実験群の死亡率を未処理抽出培地よ
り得たものの死亡率で割つた数の百分比である。
このことから、増殖抑制効果力のある物質は、ｎ
−ブタノールに良く解けることがわかる。 ３ ブタノール抽出物の効果の検定法 さらに、ブタノール抽出物の効果を確認するた
めに、500mlの培地のPHを７及び９に設定し、ブ
タノールの溶媒の下で抽出を１回行ない、蒸発乾
固させ、乾固したものを２mlのDimethyi
Sulphoxide（DMSO）にて再溶解して効果を調べ
た。なお、これは逆算すると１mlの培地に相当す
るDMSO溶液は4μとなる。 増殖を検定する細胞は、ヒト腎細胞癌由来樹立
株細胞HRCを用い、直径15mmの多孔培養皿
（multi well cuture dish）の一つの孔に対し、
104個植え込む。培地は、10％新生仔牛血清添加
のBME1.5mlを用い、24時間後に各種の濃度の
DMSO溶液を添加した10％血清添加のBMEと培
地交換し、以後１日おきに同様の培地にて交換を
行ない、７〜８日目に細胞数を数え、増殖を調べ
た。 ４ 対照群におけるDMSOの細胞増殖に及ぼす
影響 対照群も実験群と同様に、ヒト腎細胞癌由来樹
立株細胞HRCを10％新生仔牛血清添加のBMEに
て培養した。 この結果は表２に示される。
抽出分画に存在する物質は、未処理抽出培地より
得られたものに比べ、百分の一の僅かな投与量で
同様に人の癌由来細胞に対する増殖抑制効果を得
ることができる。 なお、回収率は、100から生存率を引いて死亡
率を求め、各実験群の死亡率を未処理抽出培地よ
り得たものの死亡率で割つた数の百分比である。
このことから、増殖抑制効果力のある物質は、ｎ
−ブタノールに良く解けることがわかる。 ３ ブタノール抽出物の効果の検定法 さらに、ブタノール抽出物の効果を確認するた
めに、500mlの培地のPHを７及び９に設定し、ブ
タノールの溶媒の下で抽出を１回行ない、蒸発乾
固させ、乾固したものを２mlのDimethyi
Sulphoxide（DMSO）にて再溶解して効果を調べ
た。なお、これは逆算すると１mlの培地に相当す
るDMSO溶液は4μとなる。 増殖を検定する細胞は、ヒト腎細胞癌由来樹立
株細胞HRCを用い、直径15mmの多孔培養皿
（multi well cuture dish）の一つの孔に対し、
104個植え込む。培地は、10％新生仔牛血清添加
のBME1.5mlを用い、24時間後に各種の濃度の
DMSO溶液を添加した10％血清添加のBMEと培
地交換し、以後１日おきに同様の培地にて交換を
行ない、７〜８日目に細胞数を数え、増殖を調べ
た。 ４ 対照群におけるDMSOの細胞増殖に及ぼす
影響 対照群も実験群と同様に、ヒト腎細胞癌由来樹
立株細胞HRCを10％新生仔牛血清添加のBMEに
て培養した。 この結果は表２に示される。
【表】
５ ブタノール抽出物の細胞増殖に及ぼす影響
各投与群における７日目の細胞数を数え、
DMSOを等量投与して対照群の細胞数に対する
割合を生存率として百分比で算出した。 この結果を表３に示す。
DMSOを等量投与して対照群の細胞数に対する
割合を生存率として百分比で算出した。 この結果を表３に示す。
【表】
表２，表３及び図よりPH７及びPH９の培地にて
ブタノールを溶媒として抽出し、これを蒸発乾固
して得られた固型物は、投与量が増すにつれ、人
の癌由来細胞に対し増殖抑制効果が増大すること
がわかる。
ブタノールを溶媒として抽出し、これを蒸発乾固
して得られた固型物は、投与量が増すにつれ、人
の癌由来細胞に対し増殖抑制効果が増大すること
がわかる。
図はブタノールの抽出物の細胞増殖に及ぼす影
響を示したものである。
響を示したものである。
Claims (1)
- １ ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞を成長用培地で
飽和状態になるまで培養し、次にこれを無血清の
抽出培地に移し、抽出培養完了後、分子量103で
分画して前記ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞を除
き、さらに凍結乾燥を行つたものをPH７〜PH９で
ｎ−ブタノール抽出し、蒸発乾固することを特徴
とする人の癌由来細胞の増殖抑制剤の精製方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58136793A JPS6028930A (ja) | 1983-07-28 | 1983-07-28 | 人の癌由来細胞の増殖抑制剤の精製方法 |
| EP84305098A EP0133358B1 (en) | 1983-07-28 | 1984-07-26 | Processes for the production of agents for inhibiting the proliferation of malignant tumour cells, and agents produced thereby |
| DE8484305098T DE3484410D1 (de) | 1983-07-28 | 1984-07-26 | Verfahren zur herstellung von die vermehrung von malignen krebszellen hemmenden mitteln, und so erhaltene mittel. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58136793A JPS6028930A (ja) | 1983-07-28 | 1983-07-28 | 人の癌由来細胞の増殖抑制剤の精製方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6028930A JPS6028930A (ja) | 1985-02-14 |
| JPH0361648B2 true JPH0361648B2 (ja) | 1991-09-20 |
Family
ID=15183643
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58136793A Granted JPS6028930A (ja) | 1983-07-28 | 1983-07-28 | 人の癌由来細胞の増殖抑制剤の精製方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0133358B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6028930A (ja) |
| DE (1) | DE3484410D1 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59162889A (ja) * | 1983-03-07 | 1984-09-13 | Koken Kk | 人の悪性腫瘍細胞の増殖抑制剤の製造方法 |
| JPS6028931A (ja) * | 1983-07-28 | 1985-02-14 | Koken Kk | ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞の増殖抑制剤の濃縮方法 |
| CA3078175C (en) * | 2017-10-05 | 2023-06-20 | Medical Corporation Ichikawa Clinic | Method for preparing cell extract component or composition having cytocidal activity |
| KR102526678B1 (ko) * | 2021-04-19 | 2023-04-27 | 가천대학교 산학협력단 | 세포 배양 시 인체 환경적 모사가 가능한 세포 배양 칩 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58138383A (ja) * | 1982-02-13 | 1983-08-17 | Nippon Shinyaku Co Ltd | 生理活性物質の製法 |
| JPS5933223A (ja) * | 1982-08-20 | 1984-02-23 | Koken Kk | 人の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤 |
| JPS59162889A (ja) * | 1983-03-07 | 1984-09-13 | Koken Kk | 人の悪性腫瘍細胞の増殖抑制剤の製造方法 |
| JPS59204122A (ja) * | 1983-05-06 | 1984-11-19 | Koken Kk | 人の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤の製造方法 |
| JPS6028931A (ja) * | 1983-07-28 | 1985-02-14 | Koken Kk | ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞の増殖抑制剤の濃縮方法 |
| JPS6043386A (ja) * | 1983-08-20 | 1985-03-07 | Koken Kk | ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞の増殖抑制剤の製造方法 |
-
1983
- 1983-07-28 JP JP58136793A patent/JPS6028930A/ja active Granted
-
1984
- 1984-07-26 DE DE8484305098T patent/DE3484410D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-07-26 EP EP84305098A patent/EP0133358B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6028930A (ja) | 1985-02-14 |
| EP0133358A2 (en) | 1985-02-20 |
| EP0133358B1 (en) | 1991-04-10 |
| EP0133358A3 (en) | 1986-08-13 |
| DE3484410D1 (de) | 1991-05-16 |
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