JPH0361649B2 - - Google Patents
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- JPH0361649B2 JPH0361649B2 JP58136794A JP13679483A JPH0361649B2 JP H0361649 B2 JPH0361649 B2 JP H0361649B2 JP 58136794 A JP58136794 A JP 58136794A JP 13679483 A JP13679483 A JP 13679483A JP H0361649 B2 JPH0361649 B2 JP H0361649B2
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- JP
- Japan
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- medium
- human renal
- serum
- cell carcinoma
- molecular weight
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- Expired - Lifetime
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
- C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/91—Cell lines ; Processes using cell lines
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
この発明は、ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞の増
殖抑制剤の濃縮方法に関する。 本出願人は、すでに動物の悪性腫瘍細胞の培養
後培地より悪性腫瘍細胞を除いて抽出したものか
らなる動物の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤を特願昭57
−143340号（特開昭59−33223号）として提案し
た。この悪性腫瘍細胞増殖抑制剤は、正常細胞に
対して致死効果がなく、悪性腫瘍細胞に対して増
殖抑制や致死効果を特異に有している。 この発明の目的は、より少ない投与量でヒト腎
細胞癌由来樹立株細胞に対し、より著しい増殖抑
制効果を有す増殖抑制剤を得るためにこれを濃縮
することにある。 本発明のヒト腎細胞癌由来樹立株細胞抑制剤の
濃縮方法は、ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞を10％
新生仔牛血清を添加したベイサルメデイアムイー
グル（Basal Medium Eagle）を成長用培地と
して飽和状態になるまで増殖させ、 (a) その後血清を除いて牛血清を添加したベイサ
ルメデイアムイーグル抽出培地に移し、30℃〜
37℃で一週間培養するか、または (b) そのまま、牛血清または牛アルブミンを添加
し、４℃に24時間放置し、 その後、分子量10000のフイルタで限外濾過し、
分子量１万以上の分画を採取することを特徴とす
る。 この発明によれば、ヒト腎細胞癌由来樹立株細
胞に対する増殖抑制物質が血清またはアルブミン
と結合し、結合体としてして高分子化でき、先に
提案した悪性腫瘍細胞の増殖抑制剤と比べ、十数
倍に濃縮したヒト腎細胞癌由来樹立株細胞に対す
る増殖抑制剤を得ることができる。 そして、この発明により得られたヒト腎細胞癌
由来樹立株細胞の増殖抑制剤は十数倍に濃縮して
いるので、僅かの投与量でヒト腎細胞癌由来樹立
株細胞に対し著しい増殖抑制効果を得ることがで
きる。 次に、この発明の実施例について述べる。 （実施例 １） １ 使用した細胞 ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞HRC ２ 培養方法 まず、10％新生仔牛血清を添加したBasal
Medium Eagle（BME）を成長用培地として用
い、ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞HRCを加え、
培養器に飽和状態になるまで、この悪性腫瘍細胞
を増殖させる。その後１回洗つて血清を除き、こ
れを抽出培地に移し、10％牛新生児血清を添加し
たBMEにて、30゜〜37℃の温度条件の下で１週間
培養を行なう。 ３ 採取方法 培養した培地を3000rpm、10minにて遠沈した
後、0.45μのミリポアフイルタにて濾過し、悪性
腫瘍細胞成分を除去する。次にアミコン社製の分
子量104のフイルタを用い１万以上の分画（fr≧
104）と１万未満の分画（fr＜104）とにわけて採
取する。 次に、実施例１の効果を確認するための実験に
ついて述べる。 １ 悪性腫瘍細胞増殖抑制剤の検定法 15mm径のプラスチツクシヤーレに入れた10％新
生仔牛血清を添加したBEMの培地にヒト腎細胞
癌由来樹立株細胞HRCを104個植え込み、24時間
培養した後、前記実施例１の方方法で製造された
物質を含む培地等の実験用培地と交換し、１日お
きに同培地で培地交換を行ない、細胞の増殖状態
を６日目に測定する。 限外濾過において、分子量１万以上の分画（fr
≧104）に存在する物質を含む培地は、分子量１
万以上の分画に存在する物質がかなり濃縮されて
いるので、元の濃度に補正するために10％または
20％の新生仔牛血清を添加した。この発明の対照
とする分子量１万未満の分画（fr＜104）より採
取したものを含む培地は、抽出培養時に消費され
た栄養を補う意味でBMEに含有されているのと
同じ成分、濃度のアミノ酸ビタミン、グルコース
を添加して栄養的に補正したものに10％または20
％新生仔牛血清を添加したものを用いた。 また、この発明の効果を未処理のものや分子量
１万未満の分画より採取したものと比べるため
に、６日目の培養した悪性腫瘍細胞の生存数を数
え、検定の始めに植えた細胞数に基づき、生存率
を百分比で示した。また、比活性は100から生存
率を引いて死亡率を求め、死亡率を投与量で割つ
た単位投与量当りの死亡率を算出し、未処理のも
のを１として比較したものである。 ２ 実験結果
殖抑制剤の濃縮方法に関する。 本出願人は、すでに動物の悪性腫瘍細胞の培養
後培地より悪性腫瘍細胞を除いて抽出したものか
らなる動物の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤を特願昭57
−143340号（特開昭59−33223号）として提案し
た。この悪性腫瘍細胞増殖抑制剤は、正常細胞に
対して致死効果がなく、悪性腫瘍細胞に対して増
殖抑制や致死効果を特異に有している。 この発明の目的は、より少ない投与量でヒト腎
細胞癌由来樹立株細胞に対し、より著しい増殖抑
制効果を有す増殖抑制剤を得るためにこれを濃縮
することにある。 本発明のヒト腎細胞癌由来樹立株細胞抑制剤の
濃縮方法は、ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞を10％
新生仔牛血清を添加したベイサルメデイアムイー
グル（Basal Medium Eagle）を成長用培地と
して飽和状態になるまで増殖させ、 (a) その後血清を除いて牛血清を添加したベイサ
ルメデイアムイーグル抽出培地に移し、30℃〜
37℃で一週間培養するか、または (b) そのまま、牛血清または牛アルブミンを添加
し、４℃に24時間放置し、 その後、分子量10000のフイルタで限外濾過し、
分子量１万以上の分画を採取することを特徴とす
る。 この発明によれば、ヒト腎細胞癌由来樹立株細
胞に対する増殖抑制物質が血清またはアルブミン
と結合し、結合体としてして高分子化でき、先に
提案した悪性腫瘍細胞の増殖抑制剤と比べ、十数
倍に濃縮したヒト腎細胞癌由来樹立株細胞に対す
る増殖抑制剤を得ることができる。 そして、この発明により得られたヒト腎細胞癌
由来樹立株細胞の増殖抑制剤は十数倍に濃縮して
いるので、僅かの投与量でヒト腎細胞癌由来樹立
株細胞に対し著しい増殖抑制効果を得ることがで
きる。 次に、この発明の実施例について述べる。 （実施例 １） １ 使用した細胞 ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞HRC ２ 培養方法 まず、10％新生仔牛血清を添加したBasal
Medium Eagle（BME）を成長用培地として用
い、ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞HRCを加え、
培養器に飽和状態になるまで、この悪性腫瘍細胞
を増殖させる。その後１回洗つて血清を除き、こ
れを抽出培地に移し、10％牛新生児血清を添加し
たBMEにて、30゜〜37℃の温度条件の下で１週間
培養を行なう。 ３ 採取方法 培養した培地を3000rpm、10minにて遠沈した
後、0.45μのミリポアフイルタにて濾過し、悪性
腫瘍細胞成分を除去する。次にアミコン社製の分
子量104のフイルタを用い１万以上の分画（fr≧
104）と１万未満の分画（fr＜104）とにわけて採
取する。 次に、実施例１の効果を確認するための実験に
ついて述べる。 １ 悪性腫瘍細胞増殖抑制剤の検定法 15mm径のプラスチツクシヤーレに入れた10％新
生仔牛血清を添加したBEMの培地にヒト腎細胞
癌由来樹立株細胞HRCを104個植え込み、24時間
培養した後、前記実施例１の方方法で製造された
物質を含む培地等の実験用培地と交換し、１日お
きに同培地で培地交換を行ない、細胞の増殖状態
を６日目に測定する。 限外濾過において、分子量１万以上の分画（fr
≧104）に存在する物質を含む培地は、分子量１
万以上の分画に存在する物質がかなり濃縮されて
いるので、元の濃度に補正するために10％または
20％の新生仔牛血清を添加した。この発明の対照
とする分子量１万未満の分画（fr＜104）より採
取したものを含む培地は、抽出培養時に消費され
た栄養を補う意味でBMEに含有されているのと
同じ成分、濃度のアミノ酸ビタミン、グルコース
を添加して栄養的に補正したものに10％または20
％新生仔牛血清を添加したものを用いた。 また、この発明の効果を未処理のものや分子量
１万未満の分画より採取したものと比べるため
に、６日目の培養した悪性腫瘍細胞の生存数を数
え、検定の始めに植えた細胞数に基づき、生存率
を百分比で示した。また、比活性は100から生存
率を引いて死亡率を求め、死亡率を投与量で割つ
た単位投与量当りの死亡率を算出し、未処理のも
のを１として比較したものである。 ２ 実験結果
【表】
表１より、この発明により得られたものは先に
提案した未処理のものと比べ、十数倍に濃縮する
ことができ、十数分の一の僅かの投与量で、同様
に悪性腫瘍細胞の増殖抑制効果を得ることができ
ることがわかる。 （実施例 ２） １ 使用した細胞 ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞HRC ２ 培養方法 まず、10％新生仔牛血清を添加したBasal
Medium Eagle（BME）にヒト腎細胞癌由来樹立
株細胞HRCを加え、培養器に飽和状態になるま
でこの悪性腫瘍細胞を増殖させる。次に、この培
養後培地に適当量の牛血清または牛アルブミンを
添加し、４℃の温度条件下で24hrs放置する。 ３ 採取方法 実施例１と同様である。 また、検定法及び実験結果の考察についても実
施例１と同様であり、以下に実験結果を表２に示
す。
提案した未処理のものと比べ、十数倍に濃縮する
ことができ、十数分の一の僅かの投与量で、同様
に悪性腫瘍細胞の増殖抑制効果を得ることができ
ることがわかる。 （実施例 ２） １ 使用した細胞 ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞HRC ２ 培養方法 まず、10％新生仔牛血清を添加したBasal
Medium Eagle（BME）にヒト腎細胞癌由来樹立
株細胞HRCを加え、培養器に飽和状態になるま
でこの悪性腫瘍細胞を増殖させる。次に、この培
養後培地に適当量の牛血清または牛アルブミンを
添加し、４℃の温度条件下で24hrs放置する。 ３ 採取方法 実施例１と同様である。 また、検定法及び実験結果の考察についても実
施例１と同様であり、以下に実験結果を表２に示
す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞を10％新生仔牛
血清を添加したベイサルメデイアムイーグル
（Basal Medium Eagle）を成長用培地として飽
和状態になるまで増殖させ、 (a) その後血清を除いて牛血清を添加したベイサ
ルメデイアムイーグル抽出培地に移し、30℃〜
37℃で一週間培養するか、または (b) そのまま、牛血清又は牛アルブミンを添加
し、４℃に24時間放置し、 その後、分子量10000のフイルタで限外濾過し、
分子量１万以上の分画を採取することを特徴とす
るヒト腎細胞癌由来樹立株細胞増殖抑制剤の濃縮
方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58136794A JPS6028931A (ja) | 1983-07-28 | 1983-07-28 | ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞の増殖抑制剤の濃縮方法 |
| EP84305099A EP0133029B1 (en) | 1983-07-28 | 1984-07-26 | A process for producing inhibiting agents against proliferation of malignant tumour cells, and agents produced thereby |
| DE8484305099T DE3483855D1 (de) | 1983-07-28 | 1984-07-26 | Verfahren zur herstellung von die vermehrung von malignen krebszellen hemmenden mitteln, und so hergestellte mittel. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58136794A JPS6028931A (ja) | 1983-07-28 | 1983-07-28 | ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞の増殖抑制剤の濃縮方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6028931A JPS6028931A (ja) | 1985-02-14 |
| JPH0361649B2 true JPH0361649B2 (ja) | 1991-09-20 |
Family
ID=15183665
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58136794A Granted JPS6028931A (ja) | 1983-07-28 | 1983-07-28 | ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞の増殖抑制剤の濃縮方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0133029B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6028931A (ja) |
| DE (1) | DE3483855D1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59162889A (ja) * | 1983-03-07 | 1984-09-13 | Koken Kk | 人の悪性腫瘍細胞の増殖抑制剤の製造方法 |
| JPS6028930A (ja) * | 1983-07-28 | 1985-02-14 | Koken Kk | 人の癌由来細胞の増殖抑制剤の精製方法 |
| CA3078175C (en) * | 2017-10-05 | 2023-06-20 | Medical Corporation Ichikawa Clinic | Method for preparing cell extract component or composition having cytocidal activity |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58138383A (ja) * | 1982-02-13 | 1983-08-17 | Nippon Shinyaku Co Ltd | 生理活性物質の製法 |
| JPS5933223A (ja) * | 1982-08-20 | 1984-02-23 | Koken Kk | 人の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤 |
| JPS59162889A (ja) * | 1983-03-07 | 1984-09-13 | Koken Kk | 人の悪性腫瘍細胞の増殖抑制剤の製造方法 |
| JPS59204122A (ja) * | 1983-05-06 | 1984-11-19 | Koken Kk | 人の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤の製造方法 |
| JPS6028930A (ja) * | 1983-07-28 | 1985-02-14 | Koken Kk | 人の癌由来細胞の増殖抑制剤の精製方法 |
| JPS6043386A (ja) * | 1983-08-20 | 1985-03-07 | Koken Kk | ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞の増殖抑制剤の製造方法 |
-
1983
- 1983-07-28 JP JP58136794A patent/JPS6028931A/ja active Granted
-
1984
- 1984-07-26 DE DE8484305099T patent/DE3483855D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-07-26 EP EP84305099A patent/EP0133029B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6028931A (ja) | 1985-02-14 |
| EP0133029B1 (en) | 1990-12-27 |
| DE3483855D1 (de) | 1991-02-07 |
| EP0133029A3 (en) | 1986-08-13 |
| EP0133029A2 (en) | 1985-02-13 |
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