JPH0366614B2 - - Google Patents
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- JPH0366614B2 JPH0366614B2 JP58036736A JP3673683A JPH0366614B2 JP H0366614 B2 JPH0366614 B2 JP H0366614B2 JP 58036736 A JP58036736 A JP 58036736A JP 3673683 A JP3673683 A JP 3673683A JP H0366614 B2 JPH0366614 B2 JP H0366614B2
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
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- C12Q1/001—Enzyme electrodes
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/42—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving phosphatase
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
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- G01N27/28—Electrolytic cell components
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- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/28—Electrolytic cell components
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- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)
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- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)
- G01N2333/906—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.7)
- G01N2333/90688—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.7) acting on other nitrogen compounds as donors (1.7)
- G01N2333/90694—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.7) acting on other nitrogen compounds as donors (1.7) with oxygen as acceptor (1.7.3), e.g. uricase (1.7.3.3)
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- G01N2333/91—Transferases (2.)
- G01N2333/91091—Glycosyltransferases (2.4)
- G01N2333/91142—Pentosyltransferases (2.4.2)
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Description
本発明は複数の成分の迅速な分析方法に関す
る。更に詳しくは、本発明は例えばアミノ酸、核
酸、糖類、脂質などの生体成分あるいは食品成分
の生物電気化学的分析方法に関する。 従来、アミノ酸、核酸、糖類、脂質、ビタミン
などの分離分析方法としては、クロマトグラフ法
が知られている。しかし、この方法は各成分の分
離に多くの時間と試薬と高度の技術を必要とする
欠点があつた。その方法に用いる装置は複雑で高
価なものである。 また近年、酸素電極や過酸化水素電極等の電気
化学センサーと、酸素、微生物等の生体触媒を用
いて複数の成分の内の特定の成分だけを簡易、迅
速かつ選択的に定量する方法が提案されている
（千畑一郎編、固定化酵素、講談社サイエンテイ
フイツク、1977年）。しかし、この方法では複数
の成分を同時に分析することができない。 本発明の目的は前記したような複数の成分を同
時に迅速かつ簡易に分析することのできる分析方
法を提供するにある。 本発明は、外気の酸素の侵入のないようにした
反応槽にPH緩衝剤及び被検液を入れ、溶存酸素の
吸収反応を生起させる複数の生体触媒を順次添加
し、複数の成分を選択的かつ段階的に酸化し、そ
の酸化反応に伴う溶存酸素量の低下を電気化学的
溶存酸素量濃度センサーにより検出し自動記録し
て溶存酸素のステツプダウン曲線を求め、添加触
媒の種類及び添加順序から成分を定性し、溶存酸
素の減少幅から定量をおこなうことを特徴とする
複数の成分の迅速な分析方法を提供する。 本発明を実施するためには、溶存酸素（以下
DOと略記）の連続測定記録装置が必要であり、
そのための電気化学的溶存酸素濃度センサー（以
下、DCセンサーと称する）としては、クラーク
電極、すなわちポーラログラフ式隔膜被覆電極や
ガルバニ電池式DO電極、最近Conneryの発明に
よる酸素圧平衡式DO電極等の任意のものが用い
られる。 次に、上記のDOセンサーを挿入あるいは固定
し、外気の酸素の侵入なしに反応液のDOの変化
を正確に測定でき、かつ反応の制御用の試薬、触
媒等を随時添加できる反応槽が必要である。第１
図はその一例で、容積約２mlの小槽１の側壁に
DOセンサー２を固定し、さらに上方を細穴３を
うがつた栓４でフタをして外気から酸素の侵入を
防止し、かつこの穴を通じて前記した反応制御剤
をマイクロシリンヂ等で注入できるようにしてあ
る。反応温度はジヤケツト５に恒温水６を循環し
て制御し、マグネチツクスターラー７で反応液の
混合、撹拌をおこなうことができる。なお具体的
デザインはこの事例に限定されるものでない。 次に本発明に用いる生体触媒としては、例えば
糖類の分析には、インベルターゼやアミラーゼの
ような加水分解酵素や、グルコース酸化酵素
（GOD）のような酸化酵素が用いられ蛋白、アミ
ノ酸の分析にはプロテアーゼ、ペプチダーゼ、ア
ミノ酸酸化酵素が用いられ、コレステロールの分
析には、コレステロールエステラーゼ、コレステ
ロール酸化酵素が用いられ、核酸関連物質、例え
ばATP分解物のイノシシ酸（IMP）の定量には、
ヌクレオチダーゼ、ヌクレオシドホスホリラー
ゼ、キサンチンオキシダーゼ等が用いられる。 なお、直接的には酸素吸収をしない脱水素酵素
例えば乳酸脱水素酵素（LDH）やアルコール脱
水素酵素（ADH）等も助酵素（NAD）および水
素転移剤（hydrogen transfer agent）のフエナ
ジン メタサルフエート（phenazine
methasulfate）等の助剤と併用すれば、乳酸、
アルコール等の分析に用いられる。また、時には
微生物菌体も用いられる。 なお、本発明による分析対象成分の濃度は反応
槽における初濃度が0.1μmol／ml程度であること
が望ましい。その理由は本法に用いられるDOの
空気による飽和濃度が0.2μmol／mlのオーダーで
あることによる。濃度の調整は反応槽中でおこな
うことができる。 本発明の方法によつて前記した複数の成分を最
も能率的に分析する操作は種々工夫できるが、そ
の準備のために、その成分が分つている場合は
各々の標品について単一成分についての反応特性
を本発明の反応槽を用いてしらべておくことが有
効である。即ち、例えば酵素量、反応液のPH、緩
衝液の組成、温度等を変え、所望の酸化反応が迅
速に進行する条件を酸素吸収曲線の勾配の比較に
より確かめる。 なお、期待されるいくつかの成分の酸化酵素
次々と添加してみて、どの酵素により酸素吸収が
生起するかを曲線の下降現象の有無から判断して
定性分析をおこなうことができる。 また、触媒を添加する前と酸素吸収反応（DO
の減少）が停止した時点との出力の減少幅はその
触媒の機能にレスポンスする成分の濃度に対応す
るものであるから、定性分析と同時に定量分析が
できる。 なお、空気を飽和した緩衝液を反応槽に満た
し、センサーの出力を測定すれば、測定温度に対
する酸素溶解度を表（例えばJIS K0101，0102
工場用水、同排水試験法、溶存酸素の項参照）か
ら求めることにより、出力の減少幅をDO値に換
算することができる。そして濃度既知の標品につ
いてその濃度とDO減少量を対比すれば標品単位
量の酸素吸収量が分る。かくして、その成分につ
いては酸素吸収量から標準液を用いないで直ちに
成分の濃度を知ることが可能となる。 なお、そのままでは酸化酵素の作用を受けない
ため、DO減少のみられない成分、例えばスクロ
ースにおいては、これを反応性に変えるための加
水分解酵素であるインベルターゼを作用させ、グ
ルコースを生成させてGODにより酸化させるよ
うな予備反応を選択して用いる。 そして、グルコース、スクロースの混合液につ
いては、（GOD）→（インベルターゼ）の順で酵
素添加をおこなうことにより、二段のDOステツ
プダウン曲線を求め、第一段の降下幅からグルコ
ース濃度を、第二段の降下順からスクロースを求
めることができる。こうした予備反応は必要に応
じて加水分解酵素や転移酵素等で二段、三段と分
けておこなうことができる。 また、酸化酵素も複数に用いることができこう
した反応の組み合わせによりより多くの成分の定
性と定量ができる。 以下、実施例について具体的な説明をおこな
う。 実施例 １ ヒポキサンチン（Hx）とキサンチン(X)の混合
液の分析 １ 分析の基礎となる反応 ただし、XO：キサンチンオキシダーゼ、 UO：ウリカーゼ ２ 装置と材料 (1) DOセンサー：白金カソード（直径３mm）、
厚さ1/1000インチのFEP被
膜覆のクラーク電極（オリエ
ンタル電気製）；加電圧−
0.7V.D.C (2) 記 録 計：島津製作所製 100ｍＶ フルスケール、
記録速度１cm／minで使用 (3) 反 応 槽：37℃に調整、容積2000μl (4) 酵 素：XO……ベーリンガーマンハ
イム製 0.4I.U／ml3.2M硫安
サスペンジヨン UO……オリエンタル酵母
工業製 0.4I.U／ml50ｍＭ
ホウ酸緩衝液 (5) 基 礎 液 37℃で空気飽和した1/15Ｍリン酸緩衝液
（P.B.S） DO濃度：0.214μmol／ml（37℃） (6) 被 検 液 Hx：10μmol（1.36mg）／ml Ｘ：10μmol（1.52mg）／ml Hx，Ｘ：混合液 ３ 操作（第２〜３図参照） 第１図の反応槽に2000μよりやや多いP.B.
Sを入れ栓をし（液の一部が細穴までくるよう
にする）、ＸおよびHxの被検液（５又は10μ
）をマイクロシリンヂに採り、撹拌しながら
細穴から注入、次に酵素XO 20μを注入、
DOセンサーの出力の減少d1を見守り、それが
停止した時点で第２図中に示したようにUO
20μをすばやく添加しDOの２段のステツプ
ダウン（d2）曲線を得た。 第３図は上記液単独および混合液についての
組成比とステツプダウン比、即ちd1／d2比との
関係を示したもので、Ｘはd1／d2＝１であるの
にHxは２の値でその混合液は混合比による直
線関係がある。 なお、DOの減少と基質濃度との関係をみる
と、Ｘ，Hx何れもUO添加によるO2吸収molと
基質濃度が等しい関係にある。
る。更に詳しくは、本発明は例えばアミノ酸、核
酸、糖類、脂質などの生体成分あるいは食品成分
の生物電気化学的分析方法に関する。 従来、アミノ酸、核酸、糖類、脂質、ビタミン
などの分離分析方法としては、クロマトグラフ法
が知られている。しかし、この方法は各成分の分
離に多くの時間と試薬と高度の技術を必要とする
欠点があつた。その方法に用いる装置は複雑で高
価なものである。 また近年、酸素電極や過酸化水素電極等の電気
化学センサーと、酸素、微生物等の生体触媒を用
いて複数の成分の内の特定の成分だけを簡易、迅
速かつ選択的に定量する方法が提案されている
（千畑一郎編、固定化酵素、講談社サイエンテイ
フイツク、1977年）。しかし、この方法では複数
の成分を同時に分析することができない。 本発明の目的は前記したような複数の成分を同
時に迅速かつ簡易に分析することのできる分析方
法を提供するにある。 本発明は、外気の酸素の侵入のないようにした
反応槽にPH緩衝剤及び被検液を入れ、溶存酸素の
吸収反応を生起させる複数の生体触媒を順次添加
し、複数の成分を選択的かつ段階的に酸化し、そ
の酸化反応に伴う溶存酸素量の低下を電気化学的
溶存酸素量濃度センサーにより検出し自動記録し
て溶存酸素のステツプダウン曲線を求め、添加触
媒の種類及び添加順序から成分を定性し、溶存酸
素の減少幅から定量をおこなうことを特徴とする
複数の成分の迅速な分析方法を提供する。 本発明を実施するためには、溶存酸素（以下
DOと略記）の連続測定記録装置が必要であり、
そのための電気化学的溶存酸素濃度センサー（以
下、DCセンサーと称する）としては、クラーク
電極、すなわちポーラログラフ式隔膜被覆電極や
ガルバニ電池式DO電極、最近Conneryの発明に
よる酸素圧平衡式DO電極等の任意のものが用い
られる。 次に、上記のDOセンサーを挿入あるいは固定
し、外気の酸素の侵入なしに反応液のDOの変化
を正確に測定でき、かつ反応の制御用の試薬、触
媒等を随時添加できる反応槽が必要である。第１
図はその一例で、容積約２mlの小槽１の側壁に
DOセンサー２を固定し、さらに上方を細穴３を
うがつた栓４でフタをして外気から酸素の侵入を
防止し、かつこの穴を通じて前記した反応制御剤
をマイクロシリンヂ等で注入できるようにしてあ
る。反応温度はジヤケツト５に恒温水６を循環し
て制御し、マグネチツクスターラー７で反応液の
混合、撹拌をおこなうことができる。なお具体的
デザインはこの事例に限定されるものでない。 次に本発明に用いる生体触媒としては、例えば
糖類の分析には、インベルターゼやアミラーゼの
ような加水分解酵素や、グルコース酸化酵素
（GOD）のような酸化酵素が用いられ蛋白、アミ
ノ酸の分析にはプロテアーゼ、ペプチダーゼ、ア
ミノ酸酸化酵素が用いられ、コレステロールの分
析には、コレステロールエステラーゼ、コレステ
ロール酸化酵素が用いられ、核酸関連物質、例え
ばATP分解物のイノシシ酸（IMP）の定量には、
ヌクレオチダーゼ、ヌクレオシドホスホリラー
ゼ、キサンチンオキシダーゼ等が用いられる。 なお、直接的には酸素吸収をしない脱水素酵素
例えば乳酸脱水素酵素（LDH）やアルコール脱
水素酵素（ADH）等も助酵素（NAD）および水
素転移剤（hydrogen transfer agent）のフエナ
ジン メタサルフエート（phenazine
methasulfate）等の助剤と併用すれば、乳酸、
アルコール等の分析に用いられる。また、時には
微生物菌体も用いられる。 なお、本発明による分析対象成分の濃度は反応
槽における初濃度が0.1μmol／ml程度であること
が望ましい。その理由は本法に用いられるDOの
空気による飽和濃度が0.2μmol／mlのオーダーで
あることによる。濃度の調整は反応槽中でおこな
うことができる。 本発明の方法によつて前記した複数の成分を最
も能率的に分析する操作は種々工夫できるが、そ
の準備のために、その成分が分つている場合は
各々の標品について単一成分についての反応特性
を本発明の反応槽を用いてしらべておくことが有
効である。即ち、例えば酵素量、反応液のPH、緩
衝液の組成、温度等を変え、所望の酸化反応が迅
速に進行する条件を酸素吸収曲線の勾配の比較に
より確かめる。 なお、期待されるいくつかの成分の酸化酵素
次々と添加してみて、どの酵素により酸素吸収が
生起するかを曲線の下降現象の有無から判断して
定性分析をおこなうことができる。 また、触媒を添加する前と酸素吸収反応（DO
の減少）が停止した時点との出力の減少幅はその
触媒の機能にレスポンスする成分の濃度に対応す
るものであるから、定性分析と同時に定量分析が
できる。 なお、空気を飽和した緩衝液を反応槽に満た
し、センサーの出力を測定すれば、測定温度に対
する酸素溶解度を表（例えばJIS K0101，0102
工場用水、同排水試験法、溶存酸素の項参照）か
ら求めることにより、出力の減少幅をDO値に換
算することができる。そして濃度既知の標品につ
いてその濃度とDO減少量を対比すれば標品単位
量の酸素吸収量が分る。かくして、その成分につ
いては酸素吸収量から標準液を用いないで直ちに
成分の濃度を知ることが可能となる。 なお、そのままでは酸化酵素の作用を受けない
ため、DO減少のみられない成分、例えばスクロ
ースにおいては、これを反応性に変えるための加
水分解酵素であるインベルターゼを作用させ、グ
ルコースを生成させてGODにより酸化させるよ
うな予備反応を選択して用いる。 そして、グルコース、スクロースの混合液につ
いては、（GOD）→（インベルターゼ）の順で酵
素添加をおこなうことにより、二段のDOステツ
プダウン曲線を求め、第一段の降下幅からグルコ
ース濃度を、第二段の降下順からスクロースを求
めることができる。こうした予備反応は必要に応
じて加水分解酵素や転移酵素等で二段、三段と分
けておこなうことができる。 また、酸化酵素も複数に用いることができこう
した反応の組み合わせによりより多くの成分の定
性と定量ができる。 以下、実施例について具体的な説明をおこな
う。 実施例 １ ヒポキサンチン（Hx）とキサンチン(X)の混合
液の分析 １ 分析の基礎となる反応 ただし、XO：キサンチンオキシダーゼ、 UO：ウリカーゼ ２ 装置と材料 (1) DOセンサー：白金カソード（直径３mm）、
厚さ1/1000インチのFEP被
膜覆のクラーク電極（オリエ
ンタル電気製）；加電圧−
0.7V.D.C (2) 記 録 計：島津製作所製 100ｍＶ フルスケール、
記録速度１cm／minで使用 (3) 反 応 槽：37℃に調整、容積2000μl (4) 酵 素：XO……ベーリンガーマンハ
イム製 0.4I.U／ml3.2M硫安
サスペンジヨン UO……オリエンタル酵母
工業製 0.4I.U／ml50ｍＭ
ホウ酸緩衝液 (5) 基 礎 液 37℃で空気飽和した1/15Ｍリン酸緩衝液
（P.B.S） DO濃度：0.214μmol／ml（37℃） (6) 被 検 液 Hx：10μmol（1.36mg）／ml Ｘ：10μmol（1.52mg）／ml Hx，Ｘ：混合液 ３ 操作（第２〜３図参照） 第１図の反応槽に2000μよりやや多いP.B.
Sを入れ栓をし（液の一部が細穴までくるよう
にする）、ＸおよびHxの被検液（５又は10μ
）をマイクロシリンヂに採り、撹拌しながら
細穴から注入、次に酵素XO 20μを注入、
DOセンサーの出力の減少d1を見守り、それが
停止した時点で第２図中に示したようにUO
20μをすばやく添加しDOの２段のステツプ
ダウン（d2）曲線を得た。 第３図は上記液単独および混合液についての
組成比とステツプダウン比、即ちd1／d2比との
関係を示したもので、Ｘはd1／d2＝１であるの
にHxは２の値でその混合液は混合比による直
線関係がある。 なお、DOの減少と基質濃度との関係をみる
と、Ｘ，Hx何れもUO添加によるO2吸収molと
基質濃度が等しい関係にある。
【表】
したがつてＸ，Hx混合液のd2から（Hx＋
Ｘ）のmol濃度が求まり、さらに第３図からそ
の量比がわかるので、夫々の濃度がわかること
になる。 これらの成分は、動物体内においてATPが
分解され尿酸として排泄される中間代謝物で、
これらの分離定量は医学、生化学、食品化学お
よび関連産業における高度の利用価値を有する
ものである。これらはクロマトグラフ法でも従
来の酵素法（光学的検出定量による）でも分別
定量が仲々困難なものであつたが、本発明によ
れば第２図から分るように５分以内の短時間に
きわめて簡単にしかも標準液がなくても正確に
各成分の定量ができる。 実施例 ２ ATP分解物の定量 イノシン酸（IMP），イノシン（HxR），ヒポ
キサンチン（Hx）の分別定量例をのべる。 １ 分析の基礎となる反応式 但し、 AP：アルカリフオスフアターゼ NP：ヌクレオシド ホスホリラーゼ UA：尿酸 ２ 装置と材料 (1) DOセンサー (2) 記 録 計 (3) 反 応 槽 実施例１と同じ条件で使用 (4) 酵 素 AP：3.2M硫安サスペンジヨン，65I.U／ml
（37℃） NP：3.2M硫安サスペンジヨン，20I.U／ml
（25℃） XO：3.2M硫安サスペンジヨン，0.4I.U／ml 何れもベーリンガーマンハイム社製品を使
用した。 (5) 基 礎 液 Ａ液：1/15Ｍ グリシン−NaOH緩衝液
（PH10.5） 上記２mlに対し、0.1M ZnCl22μl，0.1M
MgCl22μを添加したもの Ｂ液：1/15Ｍ P.B.S（前出） (6) 被 検 液 IMP，HxR，Hxの等量混合液
（10μmol／ml）4μを使用 ３ 操 作（第４図参照） 各種の操作手順が工夫できるが酵素の使用量
が少なく操作も簡単な方法の一例をフローシー
トで示す
Ｘ）のmol濃度が求まり、さらに第３図からそ
の量比がわかるので、夫々の濃度がわかること
になる。 これらの成分は、動物体内においてATPが
分解され尿酸として排泄される中間代謝物で、
これらの分離定量は医学、生化学、食品化学お
よび関連産業における高度の利用価値を有する
ものである。これらはクロマトグラフ法でも従
来の酵素法（光学的検出定量による）でも分別
定量が仲々困難なものであつたが、本発明によ
れば第２図から分るように５分以内の短時間に
きわめて簡単にしかも標準液がなくても正確に
各成分の定量ができる。 実施例 ２ ATP分解物の定量 イノシン酸（IMP），イノシン（HxR），ヒポ
キサンチン（Hx）の分別定量例をのべる。 １ 分析の基礎となる反応式 但し、 AP：アルカリフオスフアターゼ NP：ヌクレオシド ホスホリラーゼ UA：尿酸 ２ 装置と材料 (1) DOセンサー (2) 記 録 計 (3) 反 応 槽 実施例１と同じ条件で使用 (4) 酵 素 AP：3.2M硫安サスペンジヨン，65I.U／ml
（37℃） NP：3.2M硫安サスペンジヨン，20I.U／ml
（25℃） XO：3.2M硫安サスペンジヨン，0.4I.U／ml 何れもベーリンガーマンハイム社製品を使
用した。 (5) 基 礎 液 Ａ液：1/15Ｍ グリシン−NaOH緩衝液
（PH10.5） 上記２mlに対し、0.1M ZnCl22μl，0.1M
MgCl22μを添加したもの Ｂ液：1/15Ｍ P.B.S（前出） (6) 被 検 液 IMP，HxR，Hxの等量混合液
（10μmol／ml）4μを使用 ３ 操 作（第４図参照） 各種の操作手順が工夫できるが酵素の使用量
が少なく操作も簡単な方法の一例をフローシー
トで示す
【表】
↓
NP8μ注入(d２を計測)
NP8μ注入(d２を計測)
Claims (1)
- １ 外気の酸素の侵入のないようにした反応槽に
PH緩衝剤及び被検液を入れ、溶存酸素の吸収反応
を生起させる複数の生体触媒を順次添加し、複数
の成分を選択的かつ段階的に酸化し、その酸化反
応に伴う溶存酸素量の低下を電気化学的溶存酸素
濃度センサーにより検出し自動記録して溶存酸素
のステツプダウン曲線を求め、添加触媒の種類及
び添加順序から成分を定性し、溶存酸素の減少幅
から定量をおこなうことを特徴とする複数の成分
の迅速な分析法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58036736A JPS59163555A (ja) | 1983-03-08 | 1983-03-08 | 複数成分の迅速な分析方法 |
| US06/584,347 US4725539A (en) | 1983-03-08 | 1984-02-28 | Method for analyzing plural oxidizable components in a liquid |
| DE3408502A DE3408502C2 (de) | 1983-03-08 | 1984-03-08 | Verfahren zur Schnellanalyse von mehreren in einem flüssigen System vorhandenen Bestandteilen |
| US07/616,766 US5175088A (en) | 1983-03-08 | 1990-11-20 | Rapid analysis of plural components |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58036736A JPS59163555A (ja) | 1983-03-08 | 1983-03-08 | 複数成分の迅速な分析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59163555A JPS59163555A (ja) | 1984-09-14 |
| JPH0366614B2 true JPH0366614B2 (ja) | 1991-10-18 |
Family
ID=12478015
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58036736A Granted JPS59163555A (ja) | 1983-03-08 | 1983-03-08 | 複数成分の迅速な分析方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
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| JP (1) | JPS59163555A (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| JPS57177699A (en) * | 1981-04-28 | 1982-11-01 | Fuji Electric Co Ltd | Determination of alpha-amylase by means of enzyme electrode method |
| JPS5948097A (ja) * | 1982-09-14 | 1984-03-19 | Amano Pharmaceut Co Ltd | ポリアミン及びアセチルポリアミンの分別定量方法 |
| IT1179354B (it) * | 1984-03-22 | 1987-09-16 | Miles Italiana | Composizione e dispositivo per la determinazione enzimatica di fosfati inorganici in campioni di fluidi quali urina e sangue |
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- 1983-03-08 JP JP58036736A patent/JPS59163555A/ja active Granted
-
1984
- 1984-02-28 US US06/584,347 patent/US4725539A/en not_active Expired - Fee Related
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4725539A (en) | 1988-02-16 |
| DE3408502C2 (de) | 1986-11-13 |
| DE3408502A1 (de) | 1984-09-20 |
| JPS59163555A (ja) | 1984-09-14 |
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