JPH0367579A - 微生物細胞壁溶解酵素とその生産微生物 - Google Patents
微生物細胞壁溶解酵素とその生産微生物Info
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- JPH0367579A JPH0367579A JP2090252A JP9025290A JPH0367579A JP H0367579 A JPH0367579 A JP H0367579A JP 2090252 A JP2090252 A JP 2090252A JP 9025290 A JP9025290 A JP 9025290A JP H0367579 A JPH0367579 A JP H0367579A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は微生物の細胞壁に反応し、微生物を溶解する微
生物細胞壁溶解酵素（Ｌｙｔｉｃ ｅｎｚｙｍｅ）とそ
の生産微生物に関するものである。
生物細胞壁溶解酵素（Ｌｙｔｉｃ ｅｎｚｙｍｅ）とそ
の生産微生物に関するものである。
（従来の技術と発明が解決しようとする課題〉微生物細
胞壁の主要な成分であるペプチドグリカンは、Ｎ−アセ
チルグルコサミンとＮ−アセチルムラミン酸のペプチド
がムラミン酸の乳酸残基とペプチド結合を行い、そのペ
プチド鎖の間でペプチド架橋が形成され、強い結合とな
っている。
胞壁の主要な成分であるペプチドグリカンは、Ｎ−アセ
チルグルコサミンとＮ−アセチルムラミン酸のペプチド
がムラミン酸の乳酸残基とペプチド結合を行い、そのペ
プチド鎖の間でペプチド架橋が形成され、強い結合とな
っている。
ペプチド鎖のアミノ酸配列は、菌類によって若干異なる
。
。
このような細胞壁のペプチドグリカンを分解する微生物
細胞壁溶解酵素は３種類に分類され、ペプチドグリカン
のポリサンカライド鎖を切断するグリコシダーゼ、ポリ
サッカライドとペプチド結合を分解するアセチルムラξ
ルーＬ−アラニンアξダーゼ、ポリペプチド鎖そのもの
を切断するエンドペプチダーゼ等がある。
細胞壁溶解酵素は３種類に分類され、ペプチドグリカン
のポリサンカライド鎖を切断するグリコシダーゼ、ポリ
サッカライドとペプチド結合を分解するアセチルムラξ
ルーＬ−アラニンアξダーゼ、ポリペプチド鎖そのもの
を切断するエンドペプチダーゼ等がある。
これらの酵素に関する研究は、今までは主として、リゾ
チームに耐性があるスタフィロコソカスー〇±狭石＋ｌ
ｏｔこ仝逮幻−属微生物を溶解する酵素とカビ及び酵母
を溶解する酵素等に対して行われていた。
チームに耐性があるスタフィロコソカスー〇±狭石＋ｌ
ｏｔこ仝逮幻−属微生物を溶解する酵素とカビ及び酵母
を溶解する酵素等に対して行われていた。
ストレプトブイセスμ浪工当り旦ジ四至り一部の微生物
の中で、ストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅ
ｔｏｌＩＩｃｅｓ ｒｉｓｅｕｓ）、ストレプトマイ
セス・アルプス（Ｓｔｒｅ ｔｏｍ ｃｅｓ ａｌｂｕ
ｓ）、ストレプトマイセス０エリスレウス（Ｓｔｒｅ
ｔｏｍ ｃｅｓ ｅｒ ｔｈｒｅｕｓ）、ストレプトマ
イセス・ルテルゼネシス困扛址蝕ｍ ｃｅｓ ｒｕｔｅ
ｒ ｅｎｅｓｉｓ） 、ストレプトマイセス・オリエン
タリス（Ｓｔｒｅ ｔｏｍ ｃｅｓ ｏｒｉｅｎｔａｌ
ｉｓ）等とスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａ
ｈ ｌｏｃｏｃｃｕｓ（Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｘａｎ
ｔｕｓ） ｓシュウトモナス６アエロピノサ（Ｐｓｅｕ
ｄｏｓ＋ｏｎａｓ ａｅｕｒｏ １ｎｏｓａ） Ｓクロ
ラピスｑ）属等が、この溶解酵素を生産することが知ら
れている。
の中で、ストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅ
ｔｏｌＩＩｃｅｓ ｒｉｓｅｕｓ）、ストレプトマイ
セス・アルプス（Ｓｔｒｅ ｔｏｍ ｃｅｓ ａｌｂｕ
ｓ）、ストレプトマイセス０エリスレウス（Ｓｔｒｅ
ｔｏｍ ｃｅｓ ｅｒ ｔｈｒｅｕｓ）、ストレプトマ
イセス・ルテルゼネシス困扛址蝕ｍ ｃｅｓ ｒｕｔｅ
ｒ ｅｎｅｓｉｓ） 、ストレプトマイセス・オリエン
タリス（Ｓｔｒｅ ｔｏｍ ｃｅｓ ｏｒｉｅｎｔａｌ
ｉｓ）等とスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａ
ｈ ｌｏｃｏｃｃｕｓ（Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｘａｎ
ｔｕｓ） ｓシュウトモナス６アエロピノサ（Ｐｓｅｕ
ｄｏｓ＋ｏｎａｓ ａｅｕｒｏ １ｎｏｓａ） Ｓクロ
ラピスｑ）属等が、この溶解酵素を生産することが知ら
れている。
微生物細胞壁溶解酵素は、微生物細胞壁の構造を究明す
る為に広く利用され、微生物の汚染から食品を保護する
食品保存料として、チーズ、ソーセージ、ポテトサラダ
、酒等に添加して使用されるばかりでなく、細胞内物質
を溶解、分離する等の目的に使用されている。
る為に広く利用され、微生物の汚染から食品を保護する
食品保存料として、チーズ、ソーセージ、ポテトサラダ
、酒等に添加して使用されるばかりでなく、細胞内物質
を溶解、分離する等の目的に使用されている。
本発明者等は、これまでに知られた微生物細胞壁溶解酵
素とは物理化学的性質が異なる新規の微生物細胞壁溶解
酵素を生産する好アルカリ性微生物を土壌から分離し、
バシルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ、）微生物と同定
して、菌株の性質と酵素的特性を検討した結果、既存の
生産菌株と異なった特性を持っている事を見出し、これ
に基づいて本発明を完成した。
素とは物理化学的性質が異なる新規の微生物細胞壁溶解
酵素を生産する好アルカリ性微生物を土壌から分離し、
バシルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ、）微生物と同定
して、菌株の性質と酵素的特性を検討した結果、既存の
生産菌株と異なった特性を持っている事を見出し、これ
に基づいて本発明を完成した。
従って、本発明の目的は微生物細胞壁に反応し、微生物
を溶解する微生物細胞壁溶解酵素及び、この酵素を生産
する微生物を提供することである。
を溶解する微生物細胞壁溶解酵素及び、この酵素を生産
する微生物を提供することである。
（課題を解決するための手段）
本発明は微生物細胞壁溶解酵素を生産する好アルカリ性
バシルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ、） ＫＦＣＣ１
０６７１（微工研条寄第２８４１号）の微生物である。
バシルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ、） ＫＦＣＣ１
０６７１（微工研条寄第２８４１号）の微生物である。
また本発明は、前記微生物をｐＨ７，５〜１１．５の栄
養培地で培養し、培養液から微生物細胞壁溶解酵素を回
収することを特徴とする微生物細胞壁溶解酵素の製造方
法である。
養培地で培養し、培養液から微生物細胞壁溶解酵素を回
収することを特徴とする微生物細胞壁溶解酵素の製造方
法である。
以下、本発明の詳細な説明する。
酵素活性を有する菌株の分離
土壌からアルカリ条件（ｐＨ１Ｏ，２）で育成する微生
物の中、微生物細胞壁溶解活性のある菌株を分離する為
に、菌体を懸濁させた寒天培地の上に培養上澄液を滴下
し、その部位で円形の透明ゾーン（ｃｌｅａｒ ｚｏｎ
ｅ） を生じた菌株を、細胞壁溶解活性がある菌株と
して分離した。又、細胞壁溶解酵素の確認方法として好
アルカリ性バシルス属（Ｂａｃｉ−１１ｕｓ ｓｐ、）
（Ａ）と、バシルス・メガテリウム（Ｂａ−ｃｉｌｌｕ
ｓ ｍｅ ａｔｅｒｉｕｍ） （Ｂ）の微生物細胞壁に
、本酵素を４５℃で８０分間反応させながら、２０分毎
にサンプリングし、６６０間での吸光度と反応生成物中
の遊離アミノ酸及び還元力等を測定した。その結果を第
１図に示した。
物の中、微生物細胞壁溶解活性のある菌株を分離する為
に、菌体を懸濁させた寒天培地の上に培養上澄液を滴下
し、その部位で円形の透明ゾーン（ｃｌｅａｒ ｚｏｎ
ｅ） を生じた菌株を、細胞壁溶解活性がある菌株と
して分離した。又、細胞壁溶解酵素の確認方法として好
アルカリ性バシルス属（Ｂａｃｉ−１１ｕｓ ｓｐ、）
（Ａ）と、バシルス・メガテリウム（Ｂａ−ｃｉｌｌｕ
ｓ ｍｅ ａｔｅｒｉｕｍ） （Ｂ）の微生物細胞壁に
、本酵素を４５℃で８０分間反応させながら、２０分毎
にサンプリングし、６６０間での吸光度と反応生成物中
の遊離アミノ酸及び還元力等を測定した。その結果を第
１図に示した。
本酵素は反応時間が経過するに従って、６６０ｎｍでの
細胞壁の吸光度が減少し、Ｍｉｌｄアξノ酸が増加する
反面、還元力の変化はみられなかった。本酵素は、微生
物細胞壁の主要構成取分であるペプチドグリカンのペプ
チド結合を切断するエンドペプチダーゼとして推定され
る微生物細胞壁溶解酵素である。
細胞壁の吸光度が減少し、Ｍｉｌｄアξノ酸が増加する
反面、還元力の変化はみられなかった。本酵素は、微生
物細胞壁の主要構成取分であるペプチドグリカンのペプ
チド結合を切断するエンドペプチダーゼとして推定され
る微生物細胞壁溶解酵素である。
微生物の菌株の同定
本発明の菌株はダラム陽性であり、第２図の顕微鏡写真
に示したように、形態は桿菌（０，４ｐＸ１．７／／ａ
）である好気性と運動性を有し、カタラーゼ陽性と胞子
を形成する特徴からベシルス属の微生物と同定した。そ
の他、種々の培養及び、生理的特性を実験し検討した結
果を表１に示す。
に示したように、形態は桿菌（０，４ｐＸ１．７／／ａ
）である好気性と運動性を有し、カタラーゼ陽性と胞子
を形成する特徴からベシルス属の微生物と同定した。そ
の他、種々の培養及び、生理的特性を実験し検討した結
果を表１に示す。
表１
１、形態的特性
形態 桿菌
運動性 陽性
ダラム染色
陽性
２、培養特性
栄養培地 ｐＨ７，０
ｐＨ１０，０
グルコース栄養培地 ｐＨ７，０
ｐｔｌ １０．０
基本培地（ｐＨ１０，２）
基本培地（１０％ＮａＣｌ含有）
生育可能最高温度
＋
＋
＋ ＋
＋
４２℃
：生育できない、＋：生育する、
＋＋：よく生育する。
３、生化学的特性
澱粉加水分解
カゼイン加水分解
ゼラチン加水分解
νＰテスト
カタラーゼ
オキシダーゼ
陽性
陽性
陽性
陰性
陽性
陽性
インドールテスト
ゼラチン分解
陽性
陽性
このような菌株の微生物特性を、微生物細胞壁溶解酵素
の生産菌株として知られるストレプトマイセス、スタフ
ィロコッカス、アクロモナス、ミクソコツカス、シュウ
トモナス等の微生物の特性と比較した結果、本発明の菌
株は既知の微生物細胞壁溶解酵素の生産採苗とは異なる
特性を持ち、ｐＨが７．５〜１１．５で生育する好アル
カリ性バシルス属であることがわかった。
の生産菌株として知られるストレプトマイセス、スタフ
ィロコッカス、アクロモナス、ミクソコツカス、シュウ
トモナス等の微生物の特性と比較した結果、本発明の菌
株は既知の微生物細胞壁溶解酵素の生産採苗とは異なる
特性を持ち、ｐＨが７．５〜１１．５で生育する好アル
カリ性バシルス属であることがわかった。
従って本発明者等は、この新規な微生物細胞壁溶解酵素
を生産する菌株をバシルス属ＭＦＣＣ１０６７１と命名
した。
を生産する菌株をバシルス属ＭＦＣＣ１０６７１と命名
した。
この菌株は、通商産業省工業技術院微生物工業技術研究
所に微工研条寄第２８４１号で、また韓国種菌協会にＭ
ＦＣＣ１０６７１の受託番号で寄託されている。
所に微工研条寄第２８４１号で、また韓国種菌協会にＭ
ＦＣＣ１０６７１の受託番号で寄託されている。
上記の菌株バシルス属ＫＦＣＣ１０６７１を培養する為
の炭素源としては、澱粉、グルコース、砂糖、糖蜜、ガ
ラクトース、フルクトース、マルトース、アラビノース
、ラフィノース等が利用される。
の炭素源としては、澱粉、グルコース、砂糖、糖蜜、ガ
ラクトース、フルクトース、マルトース、アラビノース
、ラフィノース等が利用される。
窒素源としては尿素、硝酸塩、アンモニウム塩、アンモ
ニア、蛋白質、アミノ酸、ペプトン、酵母、酵母エキス
等が利用できる。それ以外にも燐酸塩、炭酸塩、硫酸塩
等の無機塩が使用できる。培地のｐＨは７．０−１２．
０が適当であり、培養温度は２０〜４５℃である。
ニア、蛋白質、アミノ酸、ペプトン、酵母、酵母エキス
等が利用できる。それ以外にも燐酸塩、炭酸塩、硫酸塩
等の無機塩が使用できる。培地のｐＨは７．０−１２．
０が適当であり、培養温度は２０〜４５℃である。
本発明の菌株を可溶性澱粉２％、酵母エキス０．５％、
ポリペプトン０．５％、燐酸水素二カリウム０．１％、
硫酸マグネシウム・七水塩０．２％、炭酸ナトリウム１
％を水に溶解させたｐＨ１０，２の培地で３０℃の好ア
ルカリ性条件で培養する際に酵素生産が良かった。
ポリペプトン０．５％、燐酸水素二カリウム０．１％、
硫酸マグネシウム・七水塩０．２％、炭酸ナトリウム１
％を水に溶解させたｐＨ１０，２の培地で３０℃の好ア
ルカリ性条件で培養する際に酵素生産が良かった。
本発明のバシルス属ＫＦＣＣ１０６７１が生産する細胞
壁溶解酵素は、下記の実施例３と４で示した如＜、分子
量が約２７．０００ダルトンの単一のサブユニノドを持
つ酵素であり、最適反応ｐＨが１０付近の耐アルカリ生
微生物細胞壁溶解酵素である。
壁溶解酵素は、下記の実施例３と４で示した如＜、分子
量が約２７．０００ダルトンの単一のサブユニノドを持
つ酵素であり、最適反応ｐＨが１０付近の耐アルカリ生
微生物細胞壁溶解酵素である。
この酵素はシュウトモナス属゛までも微生物細胞壁を溶
解する作用があって、既存の微生物細胞壁溶解酵素と物
理化学的性質が異なる新規な酵素である。
解する作用があって、既存の微生物細胞壁溶解酵素と物
理化学的性質が異なる新規な酵素である。
この酵素を生産する微生物は好アルカリ性バシルス属で
あり、菌株の性質と酵素の条件が既知の微生物酵素とは
異なる特性がある事から見ても、本発明の酵素は新規性
があるものである。
あり、菌株の性質と酵素の条件が既知の微生物酵素とは
異なる特性がある事から見ても、本発明の酵素は新規性
があるものである。
（実施例）
以下、本発明の菌株と、この菌株によって生産された微
生物細胞壁溶解酵素について、下記の実施例に基づき詳
細に説明する。
生物細胞壁溶解酵素について、下記の実施例に基づき詳
細に説明する。
実施例１
本発明の菌株を澱粉、糖類等の炭素源、尿素、アンモニ
ウム塩、蛋白質、アくノ酸等の窒素源、ビタミン、核酸
、酵母エキス、ペプトン、モルトエキスのような栄養源
及び燐酸塩、炭酸塩、硫酸塩等の無機塩で構成された培
地で培養すると、新規な微生物細胞壁溶解酵素が得られ
る。例えば、可溶性澱料）２％、酵母エキス０．５％、
ポリペプトン０．５％、Ｋ１２Ｐ０．０．１％、Ｍｇ５
Ｏ＜・７１１２００．０２％、Ｎａ、ＣＯ，１％を水に
溶解した培地（ｐＨ１０，２）で、本発明の菌株を３０
℃の好気的条件下で、３０時間振湯培養する。この際、
培養液から１．２０ Ｘ １０３Ｕ ／ ＋ｄの酵素が
得られる。
ウム塩、蛋白質、アくノ酸等の窒素源、ビタミン、核酸
、酵母エキス、ペプトン、モルトエキスのような栄養源
及び燐酸塩、炭酸塩、硫酸塩等の無機塩で構成された培
地で培養すると、新規な微生物細胞壁溶解酵素が得られ
る。例えば、可溶性澱料）２％、酵母エキス０．５％、
ポリペプトン０．５％、Ｋ１２Ｐ０．０．１％、Ｍｇ５
Ｏ＜・７１１２００．０２％、Ｎａ、ＣＯ，１％を水に
溶解した培地（ｐＨ１０，２）で、本発明の菌株を３０
℃の好気的条件下で、３０時間振湯培養する。この際、
培養液から１．２０ Ｘ １０３Ｕ ／ ＋ｄの酵素が
得られる。
又、可溶性澱粉１．０％、酵母エキス０．５％、ポリペ
プトン０．５％、にＪＰＯ４０，１％、Ｍｇ５Ｏ，・７
Ｈ２００，０２％を含んでいる培地に、ＮａｇＣＯｉ或
いはＮａＨＣＯ。
プトン０．５％、にＪＰＯ４０，１％、Ｍｇ５Ｏ，・７
Ｈ２００，０２％を含んでいる培地に、ＮａｇＣＯｉ或
いはＮａＨＣＯ。
の濃度を０．２５％、０．５％、１．０％、２．０％で
変化させながら加えて、初期ｐｌ＋を異なるように調節
後、３７℃で２４時間振盪培養し、その活性を測定した
。
変化させながら加えて、初期ｐｌ＋を異なるように調節
後、３７℃で２４時間振盪培養し、その活性を測定した
。
酵素活性の測定結果を表２に示す。
表２
溶解酵素生産に対する炭酸塩濃度と
培養初期のｐＨの効果
塩 濃度 初期 終期
（Ｘ ｗ／ｖ） ｐＨｐＨ
ＮａｚＣ０３０，２５９，０８，８
０，５０９，６９，１
１，００１０，２９，１
２，００１０，４９，２
ＮａＨＣＯｚ Ｏ，２５７，８８，５２Ｂ０．５０
８．３ ９．０ ３１１．００
Ｂ、８ ９．２ ８０２．００
９．１ ９．３ ９７細胞壁溶解酵素生産量
は、炭酸塩を低濃度で添加した場合よりも２．０％加え
た方が良い結果が得られた。
８．３ ９．０ ３１１．００
Ｂ、８ ９．２ ８０２．００
９．１ ９．３ ９７細胞壁溶解酵素生産量
は、炭酸塩を低濃度で添加した場合よりも２．０％加え
た方が良い結果が得られた。
培養初期のｐＨは中性側よりもｐＨ１０の方が良かった
。ＮａｚＣＯｚを２．０％濃度で加えたｐ旧０．４での
酵素生産量は、炭素塩を０．２５％濃度で加えた中性側
よりも３倍以上高かった。
。ＮａｚＣＯｚを２．０％濃度で加えたｐ旧０．４での
酵素生産量は、炭素塩を０．２５％濃度で加えた中性側
よりも３倍以上高かった。
上記の酵素の活性を測定する為に基質と使用する菌体を
製造した。
製造した。
基質と用いる好アルカリ性バシルス属微生物を液体培地
に接種し、３７℃で１６時間培養を行った後に遠心分離
し、合体を集めた後に０．９％ＮａＣｌで２回洗い、緩
衝液（ｐｌ＋ １０．０）でＯＤ ＆６０ ＝ １．０
になるように菌体を懸濁させた。
に接種し、３７℃で１６時間培養を行った後に遠心分離
し、合体を集めた後に０．９％ＮａＣｌで２回洗い、緩
衝液（ｐｌ＋ １０．０）でＯＤ ＆６０ ＝ １．０
になるように菌体を懸濁させた。
０Ｄｉｉｏ＝１．０の菌体２ｄに酵素液０．１−を加え
て、４５℃で１０分間反応させた後、吸光度の減少を６
６０ｎｍで測定した。この時、酵素活性１ユニツトは、
与えられた条件下で１分間反応させＯＤ、、。
て、４５℃で１０分間反応させた後、吸光度の減少を６
６０ｎｍで測定した。この時、酵素活性１ユニツトは、
与えられた条件下で１分間反応させＯＤ、、。
＝１．０の吸光度を０．００１減少させる酵素量と定義
した。
した。
実施例２
可溶性澱粉２％、酵母エキス０．５％、ポリペプトン０
．５％、燐酸カリウム０．１％、Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ２０
０，０２％、ＮａｚＣＯ３１％を蒸留水に溶かした培地
で本発明のバシルス属にＦＣＣ１０６７１を培養した。
．５％、燐酸カリウム０．１％、Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ２０
０，０２％、ＮａｚＣＯ３１％を蒸留水に溶かした培地
で本発明のバシルス属にＦＣＣ１０６７１を培養した。
菌株の生育と酵素生産及びｐＨ変化を経時的に観察した
結果を第３図に示す。
結果を第３図に示す。
第３図に示すように、菌の生育は接種１８時間まで増加
し、正常期になった。また１８時間後から徐々に減少し
た。培地のｐＨは最初１Ｏ０２から徐々に減少し、２４
時間でＰＨ８，６まで下降した後、それ以後は増加した
。６０時間以後からはｐＨ９，４の好アルカリ細菌の発
酵現象を示した。酵素の生産は１２時間後から徐々に増
加し、３６時間で活性が最大になった（１．２Ｘ１０３
Ｕ／ｍｆｆ）が、その後は活性が減る現象を示した。
し、正常期になった。また１８時間後から徐々に減少し
た。培地のｐＨは最初１Ｏ０２から徐々に減少し、２４
時間でＰＨ８，６まで下降した後、それ以後は増加した
。６０時間以後からはｐＨ９，４の好アルカリ細菌の発
酵現象を示した。酵素の生産は１２時間後から徐々に増
加し、３６時間で活性が最大になった（１．２Ｘ１０３
Ｕ／ｍｆｆ）が、その後は活性が減る現象を示した。
実施例３
本菌株が生産する酵素の特性を検討した結果、５ＤＳ−
ポリアクリルアミドゲル電気泳動で、本酵素は分子量が
約２７，０００ダルトンの単一サブユニットをもってい
る一種類の酵素であり、最適ｐＨは１０．０付近であっ
た。この実験結果を第４図に示した。
ポリアクリルアミドゲル電気泳動で、本酵素は分子量が
約２７，０００ダルトンの単一サブユニットをもってい
る一種類の酵素であり、最適ｐＨは１０．０付近であっ
た。この実験結果を第４図に示した。
Ａは（ＮＨ４） ｚｓＯ４分取後、Ｂは０Ｍセルロース
カラムクロマトグラフ後、ＣはセファデックスＧ−１０
０ゲル濾過後、Ｄはヒドロキシルアパタイトカラムクロ
マトグラフ後、Ｅは標準プロティン分子量マーカーであ
る。
カラムクロマトグラフ後、ＣはセファデックスＧ−１０
０ゲル濾過後、Ｄはヒドロキシルアパタイトカラムクロ
マトグラフ後、Ｅは標準プロティン分子量マーカーであ
る。
これは、微生物細胞壁生産菌株として報告されたストレ
プトマイセス・エリスレウス、ストレプトマイセス・ル
テルゼネシス、ストレプトマイセス・オリエンタリス、
アクロモバクタ−・ルナトス、シュウトモナス・アエロ
ビノサ等の分子量が、各１８．５００．２２，０００．
３３，０００．１６，０００．２４ 、５００であるの
とは若干差があり、最適ｐＨについても、ストレプトマ
イセス・ルテルゼネシスが６．０、アクロモバクター・
ルナトスが８．５、ミクソコツカス・キサントスが７．
５、シュウトモナス・アエロピノサが６．４であるのと
比較し、アルカリ性の高い最適ｐＨを示す結果が見られ
、本酵素は他の細胞壁溶解酵素とは異なる性質を持って
いる新規な性質の酵素であることを確認した。
プトマイセス・エリスレウス、ストレプトマイセス・ル
テルゼネシス、ストレプトマイセス・オリエンタリス、
アクロモバクタ−・ルナトス、シュウトモナス・アエロ
ビノサ等の分子量が、各１８．５００．２２，０００．
３３，０００．１６，０００．２４ 、５００であるの
とは若干差があり、最適ｐＨについても、ストレプトマ
イセス・ルテルゼネシスが６．０、アクロモバクター・
ルナトスが８．５、ミクソコツカス・キサントスが７．
５、シュウトモナス・アエロピノサが６．４であるのと
比較し、アルカリ性の高い最適ｐＨを示す結果が見られ
、本酵素は他の細胞壁溶解酵素とは異なる性質を持って
いる新規な性質の酵素であることを確認した。
実施例４
本菌株が生産する細胞壁溶解酵素の作用範囲を検討する
為に、本実験で使用した検定菌株を、マルトエキス０．
５％、ヘプトン１％、ＮａＣ１０，５％の培地で３０℃
で正常期まで培養した後、緩衝液（ｐＨ１０，０）でＯ
Ｄ＆＆。＝１．０と調節した後、この菌体２−に酵素液
０．１ｍを加え、４５℃で１５分間、反応させ６６０ｒ
ｕ＋＋の吸・光度の減少を測定し、％で換質した結果を
表３に示した。
為に、本実験で使用した検定菌株を、マルトエキス０．
５％、ヘプトン１％、ＮａＣ１０，５％の培地で３０℃
で正常期まで培養した後、緩衝液（ｐＨ１０，０）でＯ
Ｄ＆＆。＝１．０と調節した後、この菌体２−に酵素液
０．１ｍを加え、４５℃で１５分間、反応させ６６０ｒ
ｕ＋＋の吸・光度の減少を測定し、％で換質した結果を
表３に示した。
実験に使用した検定菌株の中でバシルス属の微生物はバ
シルス・メガテリウム、バシルス・ブレヴイス（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）、バシルス・アミロリフフ
ァシェンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍ Ｉｏｌｉ ｕｅ
ｆａｃｉｅｎｓ）等が本酵素によって溶解された。シュ
ウトモナス属とそれ以外の微生物が溶解されることが認
められた。
シルス・メガテリウム、バシルス・ブレヴイス（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）、バシルス・アミロリフフ
ァシェンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍ Ｉｏｌｉ ｕｅ
ｆａｃｉｅｎｓ）等が本酵素によって溶解された。シュ
ウトモナス属とそれ以外の微生物が溶解されることが認
められた。
微生物の細胞壁は、純粋なグリコペプチドでないばかり
でなく、ペプチドグリカンの重合、架橋程度と電荷に従
って、細胞壁溶解酵素の特性を示すことが知られている
。
でなく、ペプチドグリカンの重合、架橋程度と電荷に従
って、細胞壁溶解酵素の特性を示すことが知られている
。
既知の細胞壁溶解酵素は、シュウトモナス属の微生物を
溶解することができないが、本酵素はシュウトモナス属
の微生物を溶解することが確認された。
溶解することができないが、本酵素はシュウトモナス属
の微生物を溶解することが確認された。
表３
Ｓｐ・
００
（発明の効果）
本発明の微生物によって、新規な微生物細胞壁溶解酵素
を大量に生産することができる。これにより微生物細胞
壁の構造を究明するために、また細胞内物質を溶解、分
離するための新しい材料としての利用が期待される。
を大量に生産することができる。これにより微生物細胞
壁の構造を究明するために、また細胞内物質を溶解、分
離するための新しい材料としての利用が期待される。
第１図は、微生物細胞壁に本菌株の酵素を反応させ、得
られた反応生成物の反応時間〈分）の経過に対する６６
０ｎｍでの吸光度（・〉と遊離アご）酸（μモル／−）
（ロ）及び還元力（μモル／−）（黒いΔ〉の変化を示
したグラフであり、（Ａ）は好アルカリ性バシルス属（
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ、）ＶＣ−３３５、（Ｂ）はバ
シルス・メガテリウムμ±１吐り」咀腿ｔｅｒｉｕｍ）
ＫＦＣＣ３２３２０の場合を示す。 第２図は本発明による微生物細胞壁溶解酵素を生産する
微生物の形態を示す図面代用の電子顕微鏡写真（Ｘ４．
０００）である。 第３図は本菌株の生育と酵素生産及びｐＨ変化を経時的
に観察した結果を示すグラフであり、横軸は培養時間（
時）、○は乾燥細胞重量（ｇへ０、・は活性度（Ｕ／ｄ
）ｘｌＯ’、ΔはｐＨを示す。 第４図は精製された酵素蛋白質の５ＤＳ−ポリアクリル
アミドゲル電気泳動の結果を示す図であり、Ａは（ＮＨ
４） ｔＳ０４分取後、８はＣＭ全セルロースカラムク
ロマトグラフ後ＣはセファデックスＧ−１００ゲル濾過
後、Ｄはヒドロキシルアパタイトカラムクロマトグラフ
後、Ｅは標準プロティン分子量マーカーである。 還元力（μｍｏｌｅ／ｍｌ Ｉ ｉム）第 図 培養時間（時） 図面の浄書 手続補正書、７よ。 平ｒｆｃ２年８月１３日
られた反応生成物の反応時間〈分）の経過に対する６６
０ｎｍでの吸光度（・〉と遊離アご）酸（μモル／−）
（ロ）及び還元力（μモル／−）（黒いΔ〉の変化を示
したグラフであり、（Ａ）は好アルカリ性バシルス属（
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ、）ＶＣ−３３５、（Ｂ）はバ
シルス・メガテリウムμ±１吐り」咀腿ｔｅｒｉｕｍ）
ＫＦＣＣ３２３２０の場合を示す。 第２図は本発明による微生物細胞壁溶解酵素を生産する
微生物の形態を示す図面代用の電子顕微鏡写真（Ｘ４．
０００）である。 第３図は本菌株の生育と酵素生産及びｐＨ変化を経時的
に観察した結果を示すグラフであり、横軸は培養時間（
時）、○は乾燥細胞重量（ｇへ０、・は活性度（Ｕ／ｄ
）ｘｌＯ’、ΔはｐＨを示す。 第４図は精製された酵素蛋白質の５ＤＳ−ポリアクリル
アミドゲル電気泳動の結果を示す図であり、Ａは（ＮＨ
４） ｔＳ０４分取後、８はＣＭ全セルロースカラムク
ロマトグラフ後ＣはセファデックスＧ−１００ゲル濾過
後、Ｄはヒドロキシルアパタイトカラムクロマトグラフ
後、Ｅは標準プロティン分子量マーカーである。 還元力（μｍｏｌｅ／ｍｌ Ｉ ｉム）第 図 培養時間（時） 図面の浄書 手続補正書、７よ。 平ｒｆｃ２年８月１３日
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、微生物細胞壁溶解酵素を生産する好アルカリ性バシ
ルス属（￥Ｂａｃｉｌｌｕｓ￥ｓｐ．）ＫＦＣＣ１０６
７１（微工研条寄第２８４１号）の微生物。 ２、好アルカリ性バシルス属（￥Ｂａｃｉｌｌｕｓ￥ｓ
ｐ．）ＫＦＣＣ１０６７１（微工研条寄第２８４１号）
の微生物をｐＨ７．５〜１１．５の栄養培地で培養し、
培養液から微生物細胞壁溶解酵素を回収することを特徴
とする微生物細胞壁溶解酵素の製造方法。 ３、好アルカリ性バシルス属（￥Ｂａｃｉｌｌｕｓ￥ｓ
ｐ．）ＫＦＣＣ１０６７１（微工研条寄第２８４１号）
の微生物が生産する次の特性を持つ微生物細胞壁溶解酵
素。 分子量：約２７，０００ａダルトン 最適活性：ｐＨ１０付近 反応温度：４０〜８０℃ 最適反応温度：５０℃ 安定ｐＨ：ｐＨ５〜１１ 最適安定ｐＨ：ｐＨ１０ 耐アルカリ性
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR4661 | 1989-04-08 | ||
| KR1019890004661A KR910004363B1 (ko) | 1989-04-08 | 1989-04-08 | 미생물 세포벽 용해 효소와 그의 생산 미생물 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0367579A true JPH0367579A (ja) | 1991-03-22 |
Family
ID=19285213
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2090252A Pending JPH0367579A (ja) | 1989-04-08 | 1990-04-06 | 微生物細胞壁溶解酵素とその生産微生物 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0367579A (ja) |
| KR (1) | KR910004363B1 (ja) |
| DK (1) | DK88090A (ja) |
-
1989
- 1989-04-08 KR KR1019890004661A patent/KR910004363B1/ko not_active Expired
-
1990
- 1990-04-06 DK DK088090A patent/DK88090A/da unknown
- 1990-04-06 JP JP2090252A patent/JPH0367579A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR910004363B1 (ko) | 1991-06-26 |
| DK88090A (da) | 1990-10-09 |
| DK88090D0 (da) | 1990-04-06 |
| KR900017052A (ko) | 1990-11-15 |
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