JPH0367589A - ２８ｋ ｉｇｆ 結合タンパク質に対して低結合性のヒトインシユリン様成長因子アナログ及びそれらの酵母内産生 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ｔｃｐ−を中へのインシュリン分子断片の組込みは、２
本鎖ジスルフィド結合インシュリン様構造の形で以前試
みられた。これらの分子はＩＧＦ−１と比較して著しく
低い生物活性を有し、血清キャリアタンパク質結合性は
かかる化合物のインビトロ活性をなお有意にインビボで
はほとんど効用のないものにしている。ジョーク（Ｊｏ
ｓｈｉ）ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ第２４巻、第４
２０８−４２頁、１９８５年；デブローデ（Ｄｅｖｒｏ
ｅｄｅ）　　ら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、
　Ｓｃｉ。

υ、Ｓ、Ａ、第８２巻、第３０１０−１４頁、１９８５
年；及びジョークら、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　ａｎｄ　Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ。

Ｒｅｓ、　ＣｏａＩｌｌ、第１３３巻、第４２３−４２
９頁。

１９８５年参照。本発明で記載されたＩＧＰ−１アナロ
グは、Ｉ型ＩＣＦレセプターにおいてＩＧＩＩ−１と同
等の効力をもつ一本鎖［ＧＦ−１様分子として得られ、
しかも２８Ｋ　ＩＧＦ結合タンパク質に対する結合性が
低いためかかるアナログを有意に効果的なインビボ効用
性にしている。

ヒトインシュリン様成長因子１　（ｈＩＧＦ−１；ソマ
トメジンＣとも呼ばれる）は、ヒト血清から精製される
７０ア≧ノ酸タンパク質である。多数の成長ホルモンの
効果を媒介すると考えられており、特にそれは下垂体切
除ラットにおいて成長を促進することが証明された。加
えて、ＩＧＦ−１は様々なタイプの細胞の細胞増殖及び
分化を促進することが示された。

ヒトＩＧＦ−１は、インシュリンに対して著しいアミノ
酸配列相同性を示す。この相同性がｈＩＧＦ−１に関す
るコンピューター形成三次元構造モデルの基礎である〔
ブランデル（Ｂｌｕｎｄｅｌｌ）　ら、　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ｌＪ、ｓ、Ａ、第
７５巻、第１８０−１８４頁、１９７８年及びブランデ
ルら、　　Ｆｅｄ。

Ｐｒｏｃ、　Ａｍ、　Ｓｏｃ、　Ｅｘｐ、　Ｂｉｏｌ、
　、第４２巻、第２５９２−２５９７頁、１９８３年〕
。このモデルはインシュリンレセプター結合領域の一部
がＩＧＦ−１分子内に保存されていることを予測し、イ
ンシュリンレセプターと結合しうるｈＩＧＦ−１の能力
について説明している。本モデルは、血清キャリアタン
パク質との結合に関与しうるｈＩＧＦ−１分子の領域に
ついても示唆している。

ｈＩＧＦ−Ｉ及びインシュリン間における大きな差異の
１つは、正常ヒト血液中において９９％以上のＩＣＦ−
１が毛細血管バリヤを容易に通過しえない血液キャリア
タンパク質と結合することである。このため血清中のほ
とんどのＩＣＦは不活性である。

加えて、インシュリンではなくてＩＧＦ−１は、血清及
び羊水中に存在しほとんどの細胞から分泌される２８Ｋ
ＩＧＦ結合タンパク質に対して高い親和性を有する。Ｉ
ＧＦ−１結合タンパク質複合体の生理学的重要性は明ら
かでない。しかしながら、結合タンパク質はＩＣＦの活
性を調節することで明らかに役割を果たしている。血清
結合タンパク質の存在は、外部から投与されたＩＧＦ−
１の生物活性及び生物学的利用能に対する障害である。

ＩＧＦ−１の生物活性に関するこれら２８に結合タンパ
ク質の役割についての研究で、重要な生物活性化合物に
到達しうる可能性がある。我々のアプローチは、Ｉ型レ
セプターに対して有効な結合性を留めているが但しこれ
らの２８に結合タンパク質に対して低い結合性を有する
ＩＧＦ−１アナログを作出することであった。これらア
ナログのデザインは、インシュリンがこれらのタンパク
質と結合しないという観察に基づいている。ヒトＩＧＦ
−Ｉに関する合成遺伝子は、ｈＩＧＦ−１の残基４２〜
５８がヒトインシュリンＡ鎖の最初の１７アミノ酸で置
き換えられ及びｈＩＧＦ−１の残基４９−５１がヒトイ
ンシュリンＡ鎖の残基８〜ｌＯで置き換えられた２種の
ＩＧＦ−１アナログについてコードするように修正、さ
れた。次いで合成遺伝子は酵母Ｍ換えＤＮＡ発現系中に
おかれ、修正酵母細胞で産生されたペプチドアナログは
そこから抽出され、精製される。

このように、ＩＧＦ−１アナログについてコードする合
成遺伝子の製造について記載しかつ微生物中へのかかる
遺伝子の導入について記載することが本発明の目的であ
る。もう１つの目的は、遺伝的に修正された微生物を培
養することによるＩＧＦ−１アナログの製造について記
載することである。本発明の更にもう１つの目的は、こ
うして製造されるＩＧＦ−１アナログの性質及び用法に
ついて記載することである。更に他の目的は、以下の記
載を読めば明らかになるであろう。

我々は、ヒトＩＧＦ−１の２種の７０アミノ酸アナログ
についてコードする合成遺伝子に関して示してきた。こ
れらのアナログＩＧＰＩ５０及びＩＧＦ１２５は各々、
ｈＩＧＦ−１の残基４２〜５８に代わりヒトインシュリ
ンＡＩＭの最初の１７アミノ酸及びｈＩＧＦ−１の残基
４９〜５１に代わりインシュリンＡ鎖の残基８〜１０を
含んでいる。これらのアナログは、正常ヒトＩＣＦ−１
と比較しＩ型ＩＣＦレセプターに対してほぼ同等の親和
性を有している（第１表）。しかしながら、アナログＩ
ＧＦ１５０及びＩＧＦ１２５はヒト及びラット双方の２
８Ｋ　ＩＧＦ結合タンパク質に対し低い結合性を有して
いる（第２表）。このように、これらの新規タンパク質
はＩ型ＩＣＦレセプターにおいてほぼ完全な活性を留め
ているが、但し２８Ｋ　ＩＧＦ結合タンパク質に対して
低い結合性を有している。これらのアナログは、正常Ｉ
ＣＦ−ｌよりもインビボにおいて更に有効であろうと予
測される。

ｒＧＦ１５０は、３Ｔ３細胞中ＤＮＡ合戒を刺激する点
で正常ＩＧＦ−１よりも１００倍強力である（第４図）
。

本発明の合成遺伝子は、ヒトインシュリン様戒長因子（
ｈｌＣＰ−１）のアナログであってかつ構成アミノ酸に
関する文字表記が下記定義の下記構造を有するペプチド
についてコードしている：ＩＧＦ（１−４０）−Ａ、−
ＧＩＶ−＾、−Ａｔ−Ｃ−Ｃ−＾４−Ａ５−Ａｔ−Ｃ−
Ａｔ−Ｌ；Ａ５−Ａｔ−ＬＨ−Ｒ 上記式中： Ａ１はＴ又は！である； Ａ８はＤ又はＥである； Ａ５はＥ又はＱである； Ａ４はＴである； Ａ、はＳである； Ａ＆はＩである： ；Ａ７はＤ又はＳである； Ａ５はＲ又はＹである； Ａ９はＲ又はＱである；及び Ｒは下記のような１２アミノ酸からなるｈＩＧＦ−Ｉペ
プチドの残部である： ＭＹＣＡＰＬＫＰＩＫＳＡ 但し野生型ｈＩＧＰ−１である下記遺伝子：ＩＧＦ　（
１−４０）−ＴＧＶＩＤＥＣＣＦＲＳＣＤＬＲＲＬＥ−
Ｒは前記定義から除外される。

アミノ酸の文字表記は当業者に通常周知であるが、明確
化の目的から本明細書で用いられる定義は下記のとおり
である： Ａ−アラニン Ｃ−システィン Ｄ−アスパラギン酸 Ｅ−グルタミン酸 Ｆ−フェニルアラニン Ｇ−グリシン Ｈ−ヒスチジン ■−イソロイシン に−リジン Ｌ−ロイシン Ｍ−メチオニン Ｎ−アスパラギン Ｐ−プロリン Ｑ−グルタ果ン Ｒ−アルギニン Ｓ−セリン Ｔ−トレオニン ■−バリン Ｙ−チロシン 前記ペプチドアナログの好ましいバリエーションは下記
のとおりである： Ａ、はＴ又は１である； Ａ２はＥである Ａ３はＱである Ａ４はＴである Ａ、はＳである Ａ６は■である Ａ、はＳである ；Ａ５はＹである；及び Ａ５はＱである。

更に、このような化合物の具体例は下記のとおりである
： ＩＧＦ（１−４０）ｌＧＩＶＩｉＱＣＣＴＳＩＣＳＩＪ
ＱＬＥ−Ｒ（化合物Ａ又はＩＧＦ１５０） ＩＧＦ（１−４０）ＴＧＩＶＤＥＣＣＴＳＩＣＤＬＲＲ
ＬＥ−Ｒ（化合物Ｂ又はＩＧＦ１２５＞ ペプチドアナログは、天然ｈ［ＧＦ−１ペプチドの製造
に関する方法と類似した操作及び当業者に周知のその修
正法によって得ることができる。具体的には、これらの
アナログは、ヒトＩＣＰ−１に関して開発された操作を
用いて化学的に合成される。リ−（Ｌｉ）　　ら、　Ｐ
ｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、
Ａ、第８０巻、第２２１６−２２２０頁、１９８３年参
照。本発明によれば、ＩＧＦ−１アナログは、ＩＧＦ−
１アナログの発現を指示しうるＤＮＡ配列を含んだ組換
えプラスごドによる感受性細菌、酵母又は組織培養細胞
宿主の形質転換によっても得られる。

ＤＮＡ配列は、合成的に、染色体的に、組換えＤＮＡ技
術で又はそれらの組合せによって製造してもよい。ＩＣ
Ｆ−１アナログの発現について指示しうるＤＮＡ配列は
、ＩＧＦ−１アナログを内部産生する形質転換動物を産
生ずるため動物の生殖系中に又は外部染色体的に導入し
てもよい。

本発明の合成遺伝子は、当業者に周知の組換えＤＮＡバ
イオテクノロジー技術を用いて製造される。第１図は、
プラスミドｐα２及びｐ　ＪＹ２〔ベイン（Ｂａｙｎｅ
）ら、　Ｇｅｎｅ＋第６６巻、第２３５−２４４頁、１
９８８年〕を組合せて本発明の合成遺伝子を導入する工
程について示している。

本合成遺伝子は、実質的活性を有するが、但し２８Ｋ　
ＩＧＦ結合タンパク質と結合しないためモル又は重量ベ
ースでみた場合に野生型ｈＩＧＦ−ｌよりも著しく活性
な活性レベルを有するｈＩＧＦ−１のアナログを産生ず
る。このため、本化合物は動物、特に牛のような反すう
動物の乳産生の収量及び効率を高める物質として高度に
活性である。本化合物は、増加率、飼料効率及び肉質を
高めることにより食肉産生動物における成長促進剤とし
ても有用である。本化合物は、創傷治癒を促進しかつ血
球増生（赤血球の産生）を刺激する物質としても更に有
用である。

乳産生を高めるため又は動物成長促進剤として用いられ
る場合、本化合物は例えば皮下、筋肉内もしくは静脈内
注射により又は徐放性皮下植込みによって非経口的に投
与される。皮下、筋肉内及び静脈内注射の場合、活性成
分は液体担体ビヒクル中に溶解又は分散される。非経口
投与の場合、活性物質は好ましくはピーナツ油、綿実油
等のような様々な植物油の許容しうるビヒクルと適切に
混合される。ゾルケタール、グリセロール、ホルマール
を用いた有機製剤及び水性非経口処方剤のような他の非
経ロビしクルも用いられる。活性化合物は投与用の非経
口処方剤中に溶解又は懸濁され、このような処方剤は通
常ｏ、ｏｏｓ〜５重量％の活性化合物を含有している。

本化合物は、０．１〜１００．／ｋｇ動物体重、好まし
くは１〜ｌＯ■／ｋｇのレベルで投与された場合に乳産
生レベル、重量増加率又は飼料効率を有意に高めること
により有効である。本化合物が皮下植込み剤の形で投与
される場合、本化合物は当業者に公知の徐分散性物質中
に懸濁又は溶解されるか、又は浸透ポンプのような一定
駆動力の使用で活性物質を徐々に放出する装置から投与
される。

このような場合、２０〜１２０日間にわたる一定の投与
が可能であり、活性成分は０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日
で放出される。

ｈＩＧＦ−１アナログは、血小板由来成長因子（ＰＤＧ
Ｆ）又はヒト繊維芽細胞においてＤＮＡ合或台底細胞複
製を刺激する繊維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）のような他
のコンビテンス（ｃｏｓｐｅ　ｔｅｎｃｅ）因子と相乗
的に作用するため、このようなアナログは特に内在ｈＩ
ＧＦレベルが低い場合に創傷治癒を促進する上で有用で
ある。このため、本ＩＧＦ−１アナログはＰＤＧＦ又は
ＦＧＦと組合せて投与してもよい。

本化合物は、前記のような薬学上許容される非経口処方
成分を用い皮下、筋肉内又は静脈内のいずれかで非経口
的に投与することができる。本化合物は、０．１−１０
０■／ｋｇ、好ましくは１−１０■／ｋｇの用量で投与
される。しかしながら好ましくは、本化合物は創傷治癒
を促進する物質として用いられる場合局所的に投与され
る。局所適用のための代表的処方剤は、液体、ペースト
、軟膏及びスプレー処方剤である。本処方剤は、創傷部
位に適用されるドレッシング中に配合してもよい。

ドレッシングは、要治療部位に直接化合物を徐々に放出
する。

本化合物は０．００３〜ｌＯ重量％の濃度で局所処方剤
中に配合されるが、はとんどの処方剤は０．３〜３％を
要する。濃度は、１日１０．０６〜２■の活性化合物を
与えていずれか特定の期間中に多数回の適用を可能にす
るように調整される。

本化合物は、後期赤芽球前駆体の分化を刺激しうるそれ
らの能力のおかげでおそらく血球増生剤として有用であ
ろう。このような場合、本化合物は前記のようにして非
経口的に投与される。化合物は、赤血球の産生を促進す
るため単独で又はエリトロポエチンと組合せて投与され
る。かかる用法の場合、化合物は０．１〜１００■／ｋ
ｇ、好ましくは１−１０■／ｋｇの用量で投与される。

このような用量は１日ベースであるが、必要であれば用
量は１日量を複数回に分けてもよい。

実施例 ＩＧＦ１５０アナログ遺伝子の組立て ｈＩＧＦ−１の７０アミノ酸についてコードする合成遺
伝子を集め、ｐＢＲ３２２に組込んでクローニングし、
プラスミドｐｈＩＧＦを得た。プラスごドｐｈＩＧＦを
修正し、プラスミドｐＪＹ２を形成した（ベインら。

Ｇｅｎｅ、第６６巻、第２３５−２４４頁、１９８８年
）。プラスミドｐＪＹ２を第１図で記載されたように修
正した。２種のオリゴヌクレオチド、即ちＩＧＦ１５０
−５’　ＣＴＡＣＡＣＧＴ　ＧＣＴ　ＣＣＧ　ＣＡＧ　
ＡＣＴ　ＧＧＧ　ＡＴＣＧＴＴ　ＧＡＧ　ＣＡＧ　ＴＧ
ＣＴＧＣＡＣＡ　ＴＣＧ　ＡＴＣＴＧＣＴＣＴ　ＣＴＧ
ＴＡＣＣＡＧＣ３’及び５’　−ＴＣＧＡ　ＧＣＴ　Ｇ
ＧＴ　ＡＣＡ　ＧＡＧＡＧＣＡＧＡ　ＴＣＧ　ＡＴＧ　
ＴＧＣＡＧＣＡＣＴ　ＧＣＴ　ＣＡＡ　ＣＧＡ　ＴＣＣ
ＣＡＧ　ＴＣＴ　ＧＧＣＧＧＡ　ＧＣＡ　ＣＧＴ−３’
をアニーリングして、Ｘｂａｌ／ＸｈｏＩ置換断片を形
成した。この断片をエンドヌクレアーゼＸｈａｌ及びＸ
ｈｏｌで切断されたｐＪＹ２中に挿入した。結合混合物
による大腸菌の形質転換で、プラス箋ドｐＪＹ１５０を
有する細菌を得る。ＤＮＡ配列及びそれがコードするア
ナログ夏ＣＦは第２Ａ図で示されている。

アナログＩＧＦ１５０の プラスミドｐＪＹ１５０由来Ｂａ−旧ＩＧＦ１５０遺伝
子カセットを第１図で示されたようにＢａ＋ｓ　Ｈｌで
切断されたｐα２中に結合した。ｐα２中適切な向きで
ＩＧＦ１５０カセットを有するプラスミドはｐα２ＩＧ
Ｆ１５０と命名された。このプラスごドを酵母株ＢＪ１
９９５中に導入した。ｐα２　ＩＧＦ１５０プラス５ド
を有する酵母株は、増殖培地中にタンパク質ＩＧＦ１５
０を分泌する。

ｈＩＧＦ−１ペプチドの　　　び　製 サツカロ５セス・セレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏａ＋
ｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）株ＢＪ　１９９５　（
ＭＡＴ　ａ、　ｌｅｕ　２．　ｔｒｐ　１゜ｕｒａ　３
．　ｐｒｂｌ−１１２２，ｐｅＰ　４−３．　ｃｉｒｏ
）を適切な発現プラスミドで形質転換し、形質転換株を
ロイシン（−）プレート上で選択した。アミノ酸及び硫
酸アンモニウムのない０．８５％酵母窒素塩基を含有し
４％グルコース、１％硫酸アンモニウム、０．６％水酸
化ナトリウム、０．０３％Ｌ−イソロイシン、０．０３
％Ｌ−フェニルアラニン、０．０２５％Ｌ−チロシン、
０．０２％Ｌ−リジン、０．０２％Ｌ−）リプトファン
、０．０２％ウラシル、０．０２％アデニン、０．Ｏ１
％Ｌ−アルギニン、ｏ、ｏｏｓ％メチオニン、ｏ、ｏｏ
ｓ％Ｌ−ヒスチジン、２０μＨ塩化第二鉄、２５μＨ硫
酸亜鉛及び１％コハク酸で補充されたｐＨ４，８の５Ｘ
ｌｅｕ（−）培地ｌｌ中で細胞を飽和するまで増殖させ
た。細胞を３０００　ｘｇで遠心除去した。清澄化され
た上澄をｐＨ４，８の１％コハク酸で平衡化されたバイ
オレックス７０（Ｂｉ。

Ｒｅｘ　７０）　　１０　ｇと混合した。４℃で３時間
撹拌後、樹脂を２．５　ｃｒａカラム中に注ぎ、ｐＨ４
，８の１％コハク酸Ｉｆで洗浄した。ペプチドをｐＨ８
の１Ｍ酢酸アンモニウムで溶離した。レセプター活性物
質をプールし、４ｍに濃縮し、しかる後ＩＮ酢酸で平衡
化された２、　５　Ｘ　９０　ｃｍバイオゲル（Ｂｉｏ
ｇｅｌ）Ｐｌｏ（２００〜４００メツシユ）に適用した
。ゲル濾過を３０ａＮ／時で行なった。１２ＩＩｉ分画
を集め、ラジオレセプターアッセイによりＩＧＦ様活性
に関して調べた。活性分画をプールし、凍結乾燥した。

活性成分を０．０５％トリフルオロ酢酸、１５％アセト
ニトリルの０．２　ｄで再調製し、ＣＩ８μボンダパッ
ク（Ｃ１８μＢｏｎｄａｐａｋ）　　（０，４６Ｘ２５
ｃ＋＋＋、１０ミクロン、ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ
）　）逆相ＨＰＬＣカラム上においた。ペプチドを０．
０５％トリフルオロ酢酸中１５〜５０％アセトニトリル
勾配でカラムからｆ？Ｊ離させた。流速は１Ｉ１１／分
であって、１分間の分画を集め、レセプターアッセイに
より調べた。活性分画をプールし、凍結乾燥した。精製
ペプチドをアミノ酸分析により定量し、０．　Ｉ　Ｎ酢
酸中濃度０．１ｍＭで一２０℃にて貯蔵した。

ＩＣＦアナログの 定量アミノ酸分析が精製アナログの濃度を調べるために
用いられた。アミノ酸Ｍｉ或はアナログに関して予測さ
れた組成と一致する。

Ｉ型ＩＣＦレセプターに対するアナログの親和性は第１
表で示されている。アナログＡ　（ＩＧＦ１５０）及び
Ｂ　（ＩＧＦ１２５）は、野生型組換えｈＩＧＦ−１の
場合の４．９　ｎＭと比較して各々ＩＣ５ｏ　３．２　
ｎＭ及び７．０ｎＭでヒト胎盤膜に対する”’Ｉ−ｈＩ
ＧＦ−１の結合を阻害する。ヒト及びネズミ２８Ｋ　Ｉ
ＧＦ結合タンパク質に関するアナログＡ及びＢの親和性
は第２表で示されている。組換え野生型ｈＩＧＦ−ｌは
、２８にヒト及びネズミＩＣＦ結合タンパク賞に対する
”’Ｉ−ｈｌＧＰ−Ｉの結合を各々ｒｃｓｏｏ、　２３
　ｎＭ及び１１．２ｎＭで阻害する。アナログＩＧＦ１
５０は、この結合を各々ＩＣｓ。〉１．５ｎＭ及び７１
ｎＭで阻害する。アナログＩＧＦ１２５は、この結合を
各々ｔＣＳ。＞　１．５　ｎＭ及び５０１ｎＭで阻害す
る。

ＩＧＦ−１はマウス３Ｔ３細胞においてＤＮＡ合或台底
激する。第４図で示されているように、ＩＧＦ１５０は
これらの細胞において野生型ＩＧＦ−ｌよりも約１００
倍高い効力でＤＮＡ合或台底激する。

第１表は、ヒト胎盤Ｉ型ＩＣＦレセプターに関するＩＧ
Ｆ−１、アナログＡ　ＣＩＧＦ１５０）及びＢ　（Ｉｃ
Ｆ１２５）の結合親和性について記載している。

第１表 ヒト胎盤由来Ｉ型ｒＧＦレセプターに関するＩＧＦ−１
、ＩＧＦ１５０及びＩＧＦ１２５の親和性ペプチド ＩＧＦ−Ｉ ＧＦ１５０ ＧＦ１２５ ■型ＩＧＦレセプター ＩＣｓ。（ｎＭ） ４．９±２ ３．２±１．１ ７、０±０．２ 第２表は、ヒト及びネズξ３Ｔ３細胞２８Ｋ　ＩＧＦ結
合タンパク質に関するＩＧＦ−１、アナログＡ（ＩＧＦ
１５０）及びＢ　（ＩＧＦ１２５）の結合親和性につい
て記載している。

第２表 ヒト羊水及びネズミ３Ｔ３細胞ならし培地由来２８ｋＤ
　ＩＣＰ結合タンパク質に関する［ＧＦ−１、ＩＧＦ１
５Ｑ及びＩＧＦ１２５の親和性ペプチド　　　ヒト２８
　ｋ［） ＩＣｓゆ（ｎＭ） ＩＣＰ−１０，２３ １ＧＩ１１５０　　　　　＞　１．５ ＩＧＦ１２５　　　　　＞　１．５ ３Ｔ３２８　ｋｎ ＩＣｓｏ（ｎＭ １１．２ １ ０１

【図面の簡単な説明】

本発明について更に記載かつ説明する図面で本明細書に
添付されている。 第１図は、選択的開裂及び組換えによるプラスミドｐα
２及びプラスミドｐＪＹ１５０からの組換えプラスミド
ｐα２ＩＧＦ１５０の製造について記載している。本プ
ラスミドはヒトＩＧＦ−１の７０アミノ酸アナログにつ
いてコードしている。 第２Ａ図は、プラスミドｐα２ＩＧＦ１５０中への結合
によって挿入されたＤＮＡ遺伝子配列及びそれがコード
するアナログについて記載している。 第２Ｂ図は、ＩＧＰ１２５に関するＤＮＡ遺伝子配列及
びアナログについて同様に記載している。 第３図は、バイオゲルＰＩＯ及び高圧液体クロマトグラ
フィー精製後のＩＧＦ−１（Ａ）　、［ＧＦ１２５（Ｂ
）及びＩＧＦ１５０　（Ｃ）　ノ５ＤＳ−ＰＡＧＥ後ニ
オケル銀染色ゲルについて記載している。 第４図は、３Ｔ３細胞においてＤＮＡ合戒合成激しうる
能力に関するＩＧＦ−１の生物活性とアナログＡ　（Ｉ
ＧＦ１５０）の場合との比較について記載している。ア
ナログＡは野生型ＩＧＦ−１よりも１００倍強力である
ことが観察される。 ｒ；３面の浄書（内容に変更なし） ＦＩＧ、　７ ：、＝） ｊ　　ｊｉ　　５ δ　３　し ｍ　　３　　乙 よ　と　８ ：！　し　さ 菰　）　＝ ５３８： 、Ｅ　　Ｈ）　　３ ｉ　に　） ；　３　乙 蟇　３　し ：！　　ＬＪ　　３ □　）　＝ ｊ　　ｉ：ｌ　３ Ｇ　　３　　ｅ 二　巳　さ １０”　　　１０°８１０°６ ベプチト（Ｍ） ＦＩＧ、４

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記構造を有するｈＩＧＦ−Ｉの合成ポリペプチド
   アナログ： ＩＧＦ（１−４０）−Ａ＿１−ＧＩＶ−Ａ＿２−Ａ＿３
   −ＣＣ−Ａ＿４−Ａ＿５−Ａ＿６−Ｃ−Ａ＿７−Ｌ−Ａ
   ＿８−Ａ＿９−ＬＥ−Ｒ 〔上記式中： Ａ＿１はＴ又はｌである； Ａ＿２はＤ又はＥである； Ａ＿３はＥ又はＱである； Ａ＿４はＴである； Ａ＿５はＳである； Ａ＿６はＩである； Ａ＿７はＤ又はＳである； Ａ＿８はＲ又はＹである； Ａ＿９はＲ又はＱである；及び ＲはｈＩＧＦ−Ｉペプチドの残部である； 但しＡ＿１〜Ａ＿９基及び他のアミノ酸はＩＧＦ（１−
   ４０）−ＴＧＶＩＤＥＣＣＦＲＳＣＤＬＲＲＬＥ−Ｒを
   構成しない〕。 ２、Ａ＿１はＴ又はＩである； Ａ＿２はＥである； Ａ＿３はＱである； Ａ＿４はＴである； Ａ＿５はＳである； Ａ＿６はＩである； Ａ＿７はＳである； Ａ＿６はＹである； Ａ＿９はＱである； 請求項１記載のペプチド。 ３、ＩＧＦ（１−４０）−ＩＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳ
   ＬＹＱＬＥ−Ｒである、請求項１記載のペプチド。 ４、ＩＧＦ（１−４０）−ＴＧＩＶＤＥＣＣＴＳＩＣＤ
   ＬＲＲＬＥ−Ｒである、請求項１記載のペプチド。 ５、請求項１記載のポリペプチドについてコードする合
   成遺伝子。 ６、請求項３記載のポリペプチドについてコードする合
   成遺伝子。 ７、【遺伝子配列があります。】 である、請求項６記載の合成遺伝子。 ８、請求項４記載のポリペプチドについてコードする合
   成遺伝子。 ９、【遺伝子配列があります。】 である、請求項８記載の合成遺伝子。 １０、請求項１記載の合成遺伝子の製造方法であって、 ａ）適切な構成オリゴヌクレオチドの合成；ｂ）遺伝子
   断片への上記オリゴヌクレオチドのアニーリング及び結
   合；及び ｃ）組換えＤＮＡプラスミド中への合成遺伝子のクロー
   ニング； からなることを特徴とする方法。 １１、細菌、酵母又は組織培養細胞宿主の組換えＤＮＡ
   発現系による請求項１記載のポリペプチドアナログの製
   造方法であって、 ａ）発現カセットを形成するため発現ベクター中への適
   切な合成遺伝子の挿入； ｂ）細菌、酵母又は組織細胞培養宿主中への発現カセッ
   トの導入； ｃ）形質転換された発現宿主の増殖；及び ｄ）上記宿主から所望のポリペプチドアナログの精製； からなることを特徴とする方法。 １２、動物における泌乳促進方法であって、泌乳動物に
   請求項１記載のｈＩＧＦ−Ｉの合成ポリペプチドアナロ
   グを投与することを特徴とする方法。 １３、動物において泌乳促進に有用な組成物であって、 不活性な担体及び請求項１記載のｈＩＧＦ−Ｉの合成ポ
   リペプチドアナログを含むことを特徴とする組成物。 １４、動物における成長及び飼料効率の促進方法であっ
   て、 かかる動物に請求項１記載のｈＩＧＦ−Ｉの合成ポリペ
   プチドアナログを投与することを特徴とする方法。 １５、動物において成長及び飼料効率の促進に有用な組
   成物であって、 不活性な担体及び請求項１記載のｈＩＧＦ−Ｉの合成ポ
   リペプチドアナログを含むことを特徴とする組成物。 １６、食肉産生動物の赤身を増加させかつ脂肪含有率を
   減少させるための方法であって、 かかる動物に請求項１記載のｈＩＧＦ−Ｉの合成ポリペ
   プチドアナログを投与することを特徴とする方法。 １７、食肉産生動物の赤身を増加させかつ脂肪含有率を
   減少させるために有用な組成物であって、 不活性な担体及び請求項１記載のｈＩＧＦ−Ｉの合成ポ
   リペプチドアナログを含むことを特徴とする組成物。 １８、動物における創傷治癒の促進方法であって、創傷
   動物に請求項１記載のｈＩＧＦ−Ｉの合成ポリペプチド
   アナログを投与することを特徴とする方法。 １９、動物において創傷治癒の促進に有用な組成物であ
   って、 不活性な担体及び請求項１記載のｈＩＧＦ−Ｉの合成ポ
   リペプチドアナログを含むことを特徴とする組成物。 ２０、動物における血球増生の刺激方法であって、血球
   増生の必要な動物に請求項１記載のｈＩＧＦ−Ｉの合成
   ポリペプチドアナログを投与することを特徴とする方法
   。 ２１、動物において血球増生の刺激に有用な組成物であ
   って、 不活性な担体及び請求項１記載のｈＩＧＦ−Ｉの合成ポ
   リペプチドアナログを含むことを特徴とする組成物。