JPH038401A - リパーゼを用いてドライクリーニング溶剤から汚れを除去する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は、リパーゼを用いて、ドライクリーニングに
用いた溶剤から汚れ、特に中性脂質汚れを除去する方法
に関する。

〔従来の技術〕

従来、ドライクリーニングに使用した後の溶剤は、フィ
ルター、吸着剤などによって汚れを除去した後、再使用
されている。しかしながら、汚れの中でも、非極性の中
性脂質は、吸着剤に吸着されにくく、しかも、溶剤への
溶解度が高いため除去するのは困難であった。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明の目的は、ドライクリーニングに使用した溶剤か
ら、非極性の中性脂質を含む汚れを容易に除去すること
ができる浄化方法を提供するにある。

〔課題を解決するための手段〕

上記の目的は、ドライクリーニングに用いた溶剤を、該
溶剤中で安定で活性を示すリパーゼもしくはそれを固定
化した固定化リパーゼと吸着剤とに接触せしめることを
特徴とする浄化方法によって達成される。

リパーゼとしては、リパーゼがカンジダ属、フミコーラ
属、シュドモナス属またはムコール属に属する微生物が
生産したリパーゼ、または該リパーゼの構造遺伝子を他
の微生物に組み込んだ組換え体が生産したリパーゼが有
利に使用される。

−船釣に、酵素は有機溶媒中では変性してしまうため活
性を示さない。しかしながら、驚くべきことに、いくつ
かのリパーゼはドライクリーニング用の溶剤中でも活性
を示すことがわかった。例えば、カンジダ、アンターク
チ力、フミコーラ、ラヌギノーサ、シュドモナス、フル
オレッセンス由来のリパーゼは、ドライクリーニング用
の溶剤中でも活性を示す。本発明はこのような知見に基
づくものである。溶剤中に溶出している中性脂質汚れは
リパーゼによって分解され、その分解産物である脂肪酸
とグリセリドは容易に吸着される。

リパーゼは、水溶液の形態でドライクリーニング後の溶
剤に加えることができるが、洗濯物への再汚染の危険が
ある。従って、リパーゼとしては、固定化したリパーゼ
を用いるのが望ましい。リパーゼの固定化方法としては
、現在−船釣に知られているどの方法を用いてもよい。

例えば、ポリアクリルアミド、アルギン酸などのゲル内
への包括、シリカ、アルミナなどへの吸着およびグルタ
ルアルデヒドによる架橋、イオン交換樹脂への吸着など
による固定化方法を採ることができる（固定化方法の詳
細は、例えば、千畑一部著、固定化酵素、１９７５年講
談社刊に記載されている。）また、リパーゼは、本来の
生産菌によって生産されたものでもよいし、リパーゼの
構造遺伝子を他の微生物に組み込んだ組換え体によって
生産されたものでもいい。遺伝子組換え体の製造は現在
−船釣に知るれている方法を用いればよい（詳しくは、
例えば、微生物学基礎講座、８　遺伝子光学、安藤忠彦
／坂ロ健二編、１９８７年共立出版株式会社刊、および
続生化学実験講座、１　遺伝子研究法■、日本生化学全
編、１９８６年、株式会社東京化学同人刊に記載されて
いる。）。

本発明において使用できるリパーゼのいくつかは市販さ
れており、その例としては下記のものが挙げられる。

（イ）固定化ムコール・マイヘイリパーゼ（デンマーク
国、ノボインダストリーＡ／Ｓ製、商品名リポザイム７
）ｌ）。

（ロ）フミコーラ・ラヌギノーサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａし
ａｎｕｇｉ’ｎｏｓａ）由来のリパーゼ（デンマーク国
、ノボインダストリーＡ／Ｓ製、５Ｐ−４００）。この
リパーゼは特開昭６３−６８６９７に記載されている。

（ハ）カンジダ・アンタークチ力（Ｃａｎｄｉｄａａｎ
ｔａｒｃｔ　ｉｃａ　）由来のリパーゼ。このリパーゼ
は１！１０８８１０２７７５に記載されている。

（ニ）シュドモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）由来のリパーゼ
（大野製薬製）。

（ホ）シュドモナス・セパシア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓｃｅｐａｃｉａ）由来のリパーゼ。このリパーゼは特
開昭６２−３４９９７に記載されている。その固定化リ
パーゼ３Ｂ−１０（デンマーク国、ノボインダストリー
Ａ／Ｓ製）。

ドライクリーニング用溶剤としては、一般に、トリクロ
ロエタン、テトラクロロエチレン、石油系溶剤（例えば
、工業用ガソリン５号）およびフッ化炭化水素（例えば
、フレオンＦ−１１およびＦ−１１３）が用いられてい
るが、これらのいずれを用いる場合にも本発明方法は有
効である。

リパーゼもしくは固定化リパーゼと吸着剤とをドライク
リーニングに用いた溶剤と接触せしめる方法自体は、格
別限定されるものではなく、従来用いられている吸着剤
による吸着方法においてリパーゼもしくは固定化リパー
ゼを併用すればよい。

一つの有利な方法は、固定化リパーゼを単独で、または
固定化リパーゼと吸着剤とを容器に封入したカートリッ
ジを溶剤タンクに投入する方法である。

使用される吸着剤も格別限定されることはなく、例えば
活性炭およびアルミナシリカゲルが有利に用いられる。

リパーゼもしくは固定化リパーゼの使用量は溶剤の１〜
５０重量％、吸着剤の使用量は溶剤の１０〜５０重量％
の範囲で選ばれ、また、リパーゼもしくは固定化リパー
ゼと吸着剤の比率は１／１〜１／１００の範囲で選ばれ
る。

〔実施例〕

以下、実施例について本発明の浄化方法を具体的に説明
する。

実施例１ セピオライトを焼結して得た多孔質セラミック２０グラ
ムに、全体が没するように過剰のフミコーラ・ラヌギノ
ーサ由来リパーゼ（ノボインダストＩＪ−Ａ／Ｓ製５Ｐ
４００）を加えて一夜放置し、酵素をセラミック上に吸
着固定化した。水洗を繰り返すことによって過剰の酵素
を除き、さらにエタノールで洗浄したのち真空乾燥して
固定化酵素をえた。

赤外線水分計を用いて測定した固定化酵素中の水分含量
は０．５重量％以下であった。合成基質を用いた測定法
によると、この固定化酵素の活性は１ｇ当たり４０．９
ユニツトであった。なお、固定化酵素の活性測定は以下
の方法で行った。５０ミリモルのトリス塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ８，５）３ミリリツターに１０ミリグラムの固定化酵
素と１ミリモルのバラニトロフェニルカプロン酸のエタ
ノール溶液ヲｏ、４５ミリリッターを加え、波長４００
ナノメーターでの吸光度の増加を測定した。１ユニツト
は１分間に１マイクロモルのパラニトロフェノールをａ
ｎする酵素量と定義した。

この固定化酵素を用いてトリクロロエタン中でのオリー
ブオイルの加水分解反応をおこなった。

ここで、水は一方の基質であるためある程度の水の供給
が必要である。このため固定化酵素にあらかじめ５５重
量％の水を加えて一夜水和したものを用いた。試料とし
てオリーブオイル１０グラムにトリクロロエタン７０ミ
リリツターを加えたものを用意し、これを１０ミリリツ
ターずつ４本の密栓試験管に分注して使用した。試験管
３と４には、固定化酵素１グラムずつを加え、緩やかに
攪拌しながら１９時間反応を行った。試験管１と２は対
照としてそのまま放置した。１９時間後に試験管２と４
に市販のドライクリーニング用吸着剤（アルミナシリカ
ゲル、「セカード」品用化成社製）２グラムを加えて更
に３時間攪拌を行った。それぞれの試験管から１ミリリ
ツターを分取し、内部標準として１．５重量％のリトコ
ール酸を含むクロロホルム酸をイアトロスキャン（ヤト
ロン社製）を用いて定量した。

結果を第１図に示す。図中の１は無処理の試料（比較例
）を、２，３．４はそれぞれ吸着剤のみ（比較例）、固
定化酵素のみ（比較例）、及び固定化酵素と吸着剤の両
方で処理したもの（本発明）を示している。第１図から
明らかなように、吸着剤のみをオリーブオイル溶液に加
えた場合にはトリグリセリドの吸着はまったくＳ忍めら
れない。固定化酵素を加えた場合にはジグリセリドと脂
肪酸の量が増加しており、加水分解反応が進行している
ことがＳ忍められる。反応率がそれほど高くないのは、
反応生成物であるジグリセリドと脂肪酸のトリクロエタ
ンへの、溶解度が低いため平衡に達したためと考えられ
る。吸着剤と固定化酵素を共に用いると分解生成物が吸
着されて平衝が加水分解側に片寄るため加水分解が著し
く進行すると共に溶剤中の脂質が顕著に減少した。

実施例２ リボザイムＴＸ　（固定化ムコール・マイヘイリパーゼ
、ノボインダスト！Ｊ−Ａ／Ｓ製）を用いて、トリクロ
ロエチレン中でオリーブオイルの加水分解を行った。加
水分解反応において水は一方の基噴であるためある程度
の水の供給が必要である。

このため固定化酵素にあらかじめ６０重量％の水を加え
て一夜水和したものを用いた。試料としてオリーブオイ
ル１グラムにトリクロロエチレン１００ミリリッターを
加えたものを用意し、これを２０ミリリツタ一宛２本の
密栓試験管に分注して使用した。試験管１には、リポザ
イムＴＸＩグラムを加え、２４時間静置して反応を行っ
た。試験管２には、リボザイムＴ）１１グラムと市販の
ドライクリーニング用吸着剤（七カード、品川化成社製
）１グラムを加え２４時間静置して反応を行った。それ
ぞれの試験管から１ミリリツターを分取し、内部標準と
して０．５％のりトコール酸を含むクロロホルム１０ミ
ＩＪ　ＩＪフッタを加えて分析用試料とした。これらの
試料中のトリグリセリド、ジグリセリドおよび脂肪酸を
イアトロスキャン（ヤトロン社製）を用いて定量した。

結果を表１に示す。

表１ （試料１０ｍｊ！中の含有量） 試　　　　料　　　　　　トリグリセリド　　（ｍｇ）
　　　　　　脂肪酸　（ｍｇ）未処理　　　　　　６８
．４　　　　　　３３．４酵素処理　　　　　３６．４
　　　　　　４６．５（酵素＋吸着　　　１８．１　　
　　　　３４．６剤）処理 脂肪酸の量が増加しているが、これはりポザイムＴ８に
用いられている固定化担体が陰イオン交換樹脂であるた
め加水分解反応で生成した脂肪酸の一部が吸着されたた
めと思われる。トリグリセリドと脂肪酸の合計量では未
処理のものの約８０％に減少している。酵素に吸着剤を
併用した本発明の系では、トリグリセリドと脂肪酸の合
計量が未処理のものの約５０％近くまで低減している。

実施例３ 市販のリパーゼＰ「アマノ」　（シュドモナス・フルオ
レッセンス由来のリパーゼ、大野製薬製）を用いて、フ
レオン１１３中でオリーブオイルの加水分解を行った。

５０ミリリツターのフレオン１１３に１グラムのオリー
ブオイルを加えて試料溶液とした。この試料溶液２０ミ
リリツターにリパーゼＰ「アマノ」の５重量％水溶液１
ミリリツターと市販のドライクリーニング用吸着剤（セ
カード、品川化成社製〉４グラムを加え１６時間静置し
て反応を行った。１ミリリツターを分取し、内部標準と
して０．５％のリトコール酸を含むクロロホルム１０ミ
リリツターを加えて分析用試料とした。これらの試料中
のトリグリセリド、ジグリセリドおよび脂肪酸をイアト
ロスキャン（ヤトロン社製）を用いて定量した。結果を
第２図に示す。第２図（イ）は未処理の試料の分析結果
であり、図中のピーク１．２および３はそれぞれトリグ
リセリド、脂肪酸および内部標準を表す。第２図（ロ）
は処理後の試料の分析結果であり、図中のビーク１およ
び２はそれぞれ脂肪酸および内部標準を表す。

第２図（イ）および（ロ）から明らかなように、処理後
の試料からはトリグリセリドが完全に消失しており、ま
た脂肪酸量も始めに存在したトリグリセリドと脂肪酸と
の合計量と比較すると１０％以下に減少している。

〔発明の効果〕

実施例から明らかなように、本発明の方法によれば、ド
ライクリーニング溶剤中の中性脂質は脂肪酸とジグリセ
リドに分解され、これらの分解生成物は容易に吸着剤に
よって吸着除去される。特に、注目すべきは、吸着剤と
リパーゼとが相剰的に作用することである。すなわち、
吸着剤とリパーゼを共に用いると、分解生成物が吸着さ
れて平衡が加水分解側に片寄るため、加水分解がますま
す進行し、溶剤中の脂質は顕著に減少する。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明方法（固定化リパーゼと吸着剤を使用）
による中性脂質除去効果を示すグラフである。 第２図（イ）は未処理物の分析結果を示す図であり、ま
た、第２図（ロ）は加水分解生成物の分析結果を示す図
である。 第 ２ 図（イ） 第 図（０） 手 続 補 正 書 （方式） 事件の表示 平成１年特許願第３３６２０４号 ２゜ 発明の名称 リパーゼを用いてドライクリーニング溶剤から汚れを除
去する方法 ３゜ 補正をする者 事件との関係

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）ドライクリーニングに用いた溶剤を、該溶剤中で
   安定で活性を示すリパーゼもしくはそれを固定化した固
   定化リパーゼと吸着剤とに接触せしめることを特徴とす
   るドライクリーニングに用いた溶剤を浄化する方法。
2. （２）固定化リパーゼを単独でまたは吸着剤とともに容
   器に封入してなるカートリッジを溶剤中に投入する手法
   によって浄化する請求項１記載の方法。
3. （３）リパーゼがカンジダ属、フミコーラ属、シュドモ
   ナス属またはムコール属に属する微生物が生産したリパ
   ーゼ、または該リパーゼの構造遺伝子を他の微生物に組
   み込んだ組換え体が生産したリパーゼである請求項１ま
   たは２記載の方法。
4. （４）固定化リパーゼを単独でまたは吸着剤とともに容
   器に封入してなるドライクリーニング用カートリッジ。