JPH04117299A - 細菌検出方法 - Google Patents
細菌検出方法Info
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- JPH04117299A JPH04117299A JP23540190A JP23540190A JPH04117299A JP H04117299 A JPH04117299 A JP H04117299A JP 23540190 A JP23540190 A JP 23540190A JP 23540190 A JP23540190 A JP 23540190A JP H04117299 A JPH04117299 A JP H04117299A
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- JP
- Japan
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- bacteria
- agar medium
- colonies
- coloring reagent
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、細菌を寒天培地上で培養し、還元系発色試薬
を用いて検出する方法に関する。
を用いて検出する方法に関する。
［従来技術］
食品及び医療業界等において、細菌の生菌数を測定する
ことは食品及び関連設備等環境全般の細菌による汚染状
況を知ると共に、食中毒の予防ならびに衛生管理、指導
の上で重要である。
ことは食品及び関連設備等環境全般の細菌による汚染状
況を知ると共に、食中毒の予防ならびに衛生管理、指導
の上で重要である。
従来、細菌の生菌数を測定する方法としては、標準寒天
培地等の固形培地を用いて検体がら採取した細菌を培養
し、出現したコロニーを肉眼で測定する方法等がある。
培地等の固形培地を用いて検体がら採取した細菌を培養
し、出現したコロニーを肉眼で測定する方法等がある。
また、コロニーの測定を容易にするために培地中に還元
系発色試薬、例えば２．３．５− トリフェニルテトラ
ゾリウムクロライド（ＴＴＣ）等を添加して、細菌の産
生する脱水素酵素により発色試薬が還元されコロニーが
出現した部分を赤紫色に呈色させてコロニーを測定する
方法も知られている。
系発色試薬、例えば２．３．５− トリフェニルテトラ
ゾリウムクロライド（ＴＴＣ）等を添加して、細菌の産
生する脱水素酵素により発色試薬が還元されコロニーが
出現した部分を赤紫色に呈色させてコロニーを測定する
方法も知られている。
しかしながら、従来用いられている検査用固形培地では
、細菌の培養に２０〜４８時間の長時間を要するために
、迅速な検査が要求される実際の検査には十分対応でき
ないという大きな問題点があった。また、細菌の検出を
より容易にするために添加されている発色試薬の中には
、細菌の増殖を阻害する作用があるものや色調変化が鮮
明でないものもあり、迅速な測定には余り好ましくない
ことも分かっている。例えば、ＴＴＣは、培地に添加し
た場合コロニーが赤紫色を呈して測定し易い利点がある
が、反面細菌の増殖を若干阻害する作用がある。特に、
ブドウ球菌等のグラム陽性球菌に対して阻害作用が著し
いことが分かっている。
、細菌の培養に２０〜４８時間の長時間を要するために
、迅速な検査が要求される実際の検査には十分対応でき
ないという大きな問題点があった。また、細菌の検出を
より容易にするために添加されている発色試薬の中には
、細菌の増殖を阻害する作用があるものや色調変化が鮮
明でないものもあり、迅速な測定には余り好ましくない
ことも分かっている。例えば、ＴＴＣは、培地に添加し
た場合コロニーが赤紫色を呈して測定し易い利点がある
が、反面細菌の増殖を若干阻害する作用がある。特に、
ブドウ球菌等のグラム陽性球菌に対して阻害作用が著し
いことが分かっている。
［発明が解決しようとする問題点］
従って、本発明の目的は、細菌の培養が短時間で行なえ
、かつ簡便で高感度に細菌を検出することができる細菌
の検査方法を提供することである。
、かつ簡便で高感度に細菌を検出することができる細菌
の検査方法を提供することである。
［問題点゛を解決するための手段コ
本発明者らは、鋭意研究の結果、トリブチケースソイ寒
天培地及び肉汁加寒天培地の混合培地で検体中の細菌を
培養させると、短時間で増殖させることができることを
見出し、本発明を完成した。
天培地及び肉汁加寒天培地の混合培地で検体中の細菌を
培養させると、短時間で増殖させることができることを
見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、トリプチケースソイ寒天培地及び
肉汁加寒天培地から成る寒天培地で細菌を培養した後、
還元系発色試薬を含有する支持体を該寒天培地上に重層
し、還元系発色試薬の色調の変化により細菌を検出する
ことを特徴とする細菌検出方法を提供する。
肉汁加寒天培地から成る寒天培地で細菌を培養した後、
還元系発色試薬を含有する支持体を該寒天培地上に重層
し、還元系発色試薬の色調の変化により細菌を検出する
ことを特徴とする細菌検出方法を提供する。
［発明の効果］
本発明の細菌検査方法により、細菌を簡便、迅速にかつ
高感度に検出することができる。また、広範囲の種類の
細菌を検出することが可能であるので一般的な検査には
非常に有用である。
高感度に検出することができる。また、広範囲の種類の
細菌を検出することが可能であるので一般的な検査には
非常に有用である。
［発明の詳細な説明］
本発明の細菌検出方法において用いる寒天培地（以下２
本寒天培地と言う）は、トリプチケースソイ寒天培地と
肉汁加寒天培地とを混合比９：ｌ〜４：６、好ましくは
６．４〜５：５で混合したものを用いることができる。
本寒天培地と言う）は、トリプチケースソイ寒天培地と
肉汁加寒天培地とを混合比９：ｌ〜４：６、好ましくは
６．４〜５：５で混合したものを用いることができる。
従来−射的に用いられている標準寒天培地と細菌の増殖
性を比較した場合、トリプチケースソイ寒天培地はコロ
ニー数は多いが個々のコロニーが小さいという欠点があ
り、肉汁加寒天培地は個々のコロニーは大きいがその数
が少ないという欠点を有していた。
性を比較した場合、トリプチケースソイ寒天培地はコロ
ニー数は多いが個々のコロニーが小さいという欠点があ
り、肉汁加寒天培地は個々のコロニーは大きいがその数
が少ないという欠点を有していた。
しかしながら、両培地を上記の割合で混合して得られる
本寒天培地は、コロニーの増殖性、大きさ共に細菌の検
出には十分なものである。
本寒天培地は、コロニーの増殖性、大きさ共に細菌の検
出には十分なものである。
さらに、本寒天培地には、細菌の増殖をさらに促進させ
て培養時間を短縮し、迅速に検査を行なうために細菌増
殖促進効果を有する物質を添加することができる。増殖
促進物質としては、従来用いられているビタミン類、Ｔ
ＣＡ回路関連物質、各種アミノ酸等を用いることができ
るが、本発明においてはピルビン酸ナトリウム、Ｌ−グ
ルタミンを用いることが特に好ましい。ピルビン酸ナト
リウムを添加する場合、添加濃度は好ましくは０００１
〜０．０５重量％、より好ましくは０．００５〜０．０
１重量％である。添加濃度が０．００７５重量％より高
くなると若干の増殖阻害が認められる。ピルビン酸ナト
リウムは寒天培地を調製する時に一緒に加えてから滅菌
することができる。また、Ｌ−グルタミンを添加する場
合は、添加濃度は好ましくは０．０７５〜０．１重量％
である。添加量が０．１重量％を越えるとＬ−グルタミ
ンが瀉解しにく（なるので好ましくない。し−グルタミ
ンは滅菌済の培地に無菌的に加えることができる。
て培養時間を短縮し、迅速に検査を行なうために細菌増
殖促進効果を有する物質を添加することができる。増殖
促進物質としては、従来用いられているビタミン類、Ｔ
ＣＡ回路関連物質、各種アミノ酸等を用いることができ
るが、本発明においてはピルビン酸ナトリウム、Ｌ−グ
ルタミンを用いることが特に好ましい。ピルビン酸ナト
リウムを添加する場合、添加濃度は好ましくは０００１
〜０．０５重量％、より好ましくは０．００５〜０．０
１重量％である。添加濃度が０．００７５重量％より高
くなると若干の増殖阻害が認められる。ピルビン酸ナト
リウムは寒天培地を調製する時に一緒に加えてから滅菌
することができる。また、Ｌ−グルタミンを添加する場
合は、添加濃度は好ましくは０．０７５〜０．１重量％
である。添加量が０．１重量％を越えるとＬ−グルタミ
ンが瀉解しにく（なるので好ましくない。し−グルタミ
ンは滅菌済の培地に無菌的に加えることができる。
本寒天培地は３７〜３８℃で７〜８時間培養することが
好ましい。８時間以上培養してもコロニー数にはほとん
ど変化が見られない。
好ましい。８時間以上培養してもコロニー数にはほとん
ど変化が見られない。
本発明において、本寒天培地で増殖し、目視で確認でき
ないコロニーを高感度に検出するために還元発色試薬を
含有させた支持体を培地上に載せ、細菌の産生ずる脱水
素酵素で還元発色試薬が還元され色調が変化することで
コロニーをより正確に測定することができる０本発明に
用いられる還元系試薬としては、ＴＴＣ、レザズリンナ
トリウム、３−（ｐ−ヨードフェニル）−２−（ｐ−ニ
トロフェニル）−５−フェニル−２Ｈテトラゾリウムク
ロライド（ＩＮＴ）等を挙げることができる。中でもＩ
ＮＴは色調変化（無色から赤紫色に変化する）が明瞭で
検出感度に優れているので最も好ましく用いられる。
ないコロニーを高感度に検出するために還元発色試薬を
含有させた支持体を培地上に載せ、細菌の産生ずる脱水
素酵素で還元発色試薬が還元され色調が変化することで
コロニーをより正確に測定することができる０本発明に
用いられる還元系試薬としては、ＴＴＣ、レザズリンナ
トリウム、３−（ｐ−ヨードフェニル）−２−（ｐ−ニ
トロフェニル）−５−フェニル−２Ｈテトラゾリウムク
ロライド（ＩＮＴ）等を挙げることができる。中でもＩ
ＮＴは色調変化（無色から赤紫色に変化する）が明瞭で
検出感度に優れているので最も好ましく用いられる。
還元系試薬は、吸水性のある支持体に適当な溶媒に溶解
して含浸させるかあるいは粉末状のものを接着剤で塗沫
して用いることができる。支持体としては、吸水性のあ
ろ紙又は合成樹脂性のフィルムが好ましく用いられるが
、これらに限定されるものではない。例えば、ＩＮＴを
用いる場合、ＩＮＴを０．１〜５ ｍｇ／＋１の濃度に
水又は適当な緩衝液に溶解し、ろ紙に染み込ませた後乾
燥させて用いることができる。特に、ＩＮＴをＭ／１０
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，Ｏ）に濃度０．８ｍｇ／ｗ
＋１で溶解して用いる時、最も高感度に細菌を検出する
ことができる。また、ＩＮＴは粉末のまま乳鉢等で細か
くすりつぶした後、接着剤で合成樹脂性フィルムに塗沫
して用いることもできる。この場合、フィルム及び接着
剤の材質は還元性物質に対して不活性であれば構わない
が、アクリル系の接着剤や塩化ビニル系のフィルムを使
用し、フィルム当たり１０〜１００ ｔｃｇ７ｃｍ”
、好ましくは３０ｕｇ／ｃｍ”塗沫するのが望ましい。
して含浸させるかあるいは粉末状のものを接着剤で塗沫
して用いることができる。支持体としては、吸水性のあ
ろ紙又は合成樹脂性のフィルムが好ましく用いられるが
、これらに限定されるものではない。例えば、ＩＮＴを
用いる場合、ＩＮＴを０．１〜５ ｍｇ／＋１の濃度に
水又は適当な緩衝液に溶解し、ろ紙に染み込ませた後乾
燥させて用いることができる。特に、ＩＮＴをＭ／１０
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，Ｏ）に濃度０．８ｍｇ／ｗ
＋１で溶解して用いる時、最も高感度に細菌を検出する
ことができる。また、ＩＮＴは粉末のまま乳鉢等で細か
くすりつぶした後、接着剤で合成樹脂性フィルムに塗沫
して用いることもできる。この場合、フィルム及び接着
剤の材質は還元性物質に対して不活性であれば構わない
が、アクリル系の接着剤や塩化ビニル系のフィルムを使
用し、フィルム当たり１０〜１００ ｔｃｇ７ｃｍ”
、好ましくは３０ｕｇ／ｃｍ”塗沫するのが望ましい。
本発明の細菌検査方法は、検体として食品関連では食材
、調理した食品、加工品、調理に使用する器具、器材、
調理に従事する人の手指等を対象として行なうことがで
きる。また、医療関連では、院内の机、床、患者、医療
従事者の手指等が挙げられる。検体が固体の場合、寒天
培地を直接密着させるか或は寒天培地を滑らせて細菌を
採取し、検体が液体状の場合は至適量を寒天に滴下した
後コンラージ棒で均一に拡散させて細菌を採取すること
ができる。
、調理した食品、加工品、調理に使用する器具、器材、
調理に従事する人の手指等を対象として行なうことがで
きる。また、医療関連では、院内の机、床、患者、医療
従事者の手指等が挙げられる。検体が固体の場合、寒天
培地を直接密着させるか或は寒天培地を滑らせて細菌を
採取し、検体が液体状の場合は至適量を寒天に滴下した
後コンラージ棒で均一に拡散させて細菌を採取すること
ができる。
次に、本発明の細菌検査方法を具体的に説明するが、こ
れに限られるものではない。
れに限られるものではない。
まず、トリプチケースソイ寒天培地、肉汁加寒天培地及
び細菌増殖促進物質としてピルビン酸ナトリウムを精製
水に加えて加熱滅菌した後、Ｌ−グルタミン溶液を無菌
的に添加してシ々−レに分注、放冷して固化する。寒天
培地は検体から細菌を採取し３７〜３８℃で７〜８時間
培養した後、シャーレを取り出してＩＮＴを含有させた
ろ紙を寒天培地上に重層して５分間放置する。シャーレ
の底からＩＮＴの色調変化を観察する。細菌が存在すれ
ばろ紙が無色から赤紫色に発色する。
び細菌増殖促進物質としてピルビン酸ナトリウムを精製
水に加えて加熱滅菌した後、Ｌ−グルタミン溶液を無菌
的に添加してシ々−レに分注、放冷して固化する。寒天
培地は検体から細菌を採取し３７〜３８℃で７〜８時間
培養した後、シャーレを取り出してＩＮＴを含有させた
ろ紙を寒天培地上に重層して５分間放置する。シャーレ
の底からＩＮＴの色調変化を観察する。細菌が存在すれ
ばろ紙が無色から赤紫色に発色する。
定量する場合は、細菌の存在を示す赤紫色の斑点を計数
し、コロニー数とする。
し、コロニー数とする。
「実施例コ
以下、本発明を実施例を挙げて具体的に説明するが、本
発明の実施例はこれらに限られるものではない。
発明の実施例はこれらに限られるものではない。
叉１１１ニ
トリプチケースソイ寒天培地（ＢＢＬマイクロバイオロ
ジーシステム社製）２０ｇ及び肉汁加寒天培地（オクソ
イド社製）２０ｇを精製水ＩＰ！に加え１２１℃で１５
分間加熱滅菌した後、シャーレ（直径３．５ｃ＋ｓ ）
に４．５ｗ＋１ずつ分注し、放冷固化させた。比較培地
として標準寒天培地（日水製薬株式会社製）３５ｇを精
製水ｌＩ２に加え同様にして滅菌、分注した。３６人の
両手指をそれぞれの寒天培地に擦り付けて菌を採取した
後、３７℃で８時間培養した。シャーレを取り出し培地
上にＩＮＴ含有フィルムを重層し５分間放置した後、出
現したコロニー数を数えた。シャーレ当たり１０個以上
のコロニーが出現したものを陽性として各培地の歯検出
の陽性率を求めた。同様の試験を２度行なった。その結
果を表１に示す。
ジーシステム社製）２０ｇ及び肉汁加寒天培地（オクソ
イド社製）２０ｇを精製水ＩＰ！に加え１２１℃で１５
分間加熱滅菌した後、シャーレ（直径３．５ｃ＋ｓ ）
に４．５ｗ＋１ずつ分注し、放冷固化させた。比較培地
として標準寒天培地（日水製薬株式会社製）３５ｇを精
製水ｌＩ２に加え同様にして滅菌、分注した。３６人の
両手指をそれぞれの寒天培地に擦り付けて菌を採取した
後、３７℃で８時間培養した。シャーレを取り出し培地
上にＩＮＴ含有フィルムを重層し５分間放置した後、出
現したコロニー数を数えた。シャーレ当たり１０個以上
のコロニーが出現したものを陽性として各培地の歯検出
の陽性率を求めた。同様の試験を２度行なった。その結
果を表１に示す。
なお、ＩＮＴ含有フィルムは日東電工社製白色フィルム
にＩＮＴを３０μｇ／ｃｍ”の割合で塗沫したものを用
いた。
にＩＮＴを３０μｇ／ｃｍ”の割合で塗沫したものを用
いた。
表１から明らかなように、本発明による方法での歯検出
陽性率は約５６％、標準寒天培地を用いた場合は約３５
％であり、本発明の方法が優れていることが分かる。
陽性率は約５６％、標準寒天培地を用いた場合は約３５
％であり、本発明の方法が優れていることが分かる。
表
叉ＩＵ九２
実施例１の本寒天培地に、ピルビン酸ナトリウムをそれ
ぞれ０．０．００１．０．０（１２５，０，（１０５０
、００７５，０，０１，０，０５重量％添加する以外は
実施例１と同様にして寒天培地を作製した。次に、予め
菌のコロニー形成単位ｆｃＦＵ／ｆｆ１ｌｌを約５００
ＣＦＩＩ／ｍｌに滅菌食塩水で調整した指標菌１ （黄
色ブドウ球菌）、２（表皮ブドウ球菌）、３（表皮ブド
ウ球菌）を各々滅菌ろ紙（直径３ ｃｍ）に０２ｍ１ず
つ滴下し、該ろ紙を各寒天培地に密着させて菌を接種し
た後、３７℃で８時間培養した。培養後、シャーレを取
り出し実施例１と同様にして出現したコロニー数を数え
、シャーレ３枚の平均値を求めた。その結果を表２に示
す。
ぞれ０．０．００１．０．０（１２５，０，（１０５０
、００７５，０，０１，０，０５重量％添加する以外は
実施例１と同様にして寒天培地を作製した。次に、予め
菌のコロニー形成単位ｆｃＦＵ／ｆｆ１ｌｌを約５００
ＣＦＩＩ／ｍｌに滅菌食塩水で調整した指標菌１ （黄
色ブドウ球菌）、２（表皮ブドウ球菌）、３（表皮ブド
ウ球菌）を各々滅菌ろ紙（直径３ ｃｍ）に０２ｍ１ず
つ滴下し、該ろ紙を各寒天培地に密着させて菌を接種し
た後、３７℃で８時間培養した。培養後、シャーレを取
り出し実施例１と同様にして出現したコロニー数を数え
、シャーレ３枚の平均値を求めた。その結果を表２に示
す。
表２からピルビン酸ナトリウムを添加することにより菌
の検出率が高くなることが分かる０反面ピルビン酸ナト
リウム濃度が０．０７５％より高くなると菌の増殖が若
干悪くなる傾向が見られた。
の検出率が高くなることが分かる０反面ピルビン酸ナト
リウム濃度が０．０７５％より高くなると菌の増殖が若
干悪くなる傾向が見られた。
表
叉１１引旦
実施例１と同様にして調製、滅菌した寒天培地を５５℃
に保温しておき、Ｌ−グルタミンを無菌的に０．０．０
７５．０，０１．００５．０．１重量％ずつ添加、溶解
した後、各々シャーレ（直径３．５ｃｍ ）に分注し放
冷同化した。得られた寒天培地は実施例２と同様にして
指標菌を接種、培養し、出現したコロニー数を数え、シ
ャーレ３枚の平均値を求めた。その結果を表３に示す。
に保温しておき、Ｌ−グルタミンを無菌的に０．０．０
７５．０，０１．００５．０．１重量％ずつ添加、溶解
した後、各々シャーレ（直径３．５ｃｍ ）に分注し放
冷同化した。得られた寒天培地は実施例２と同様にして
指標菌を接種、培養し、出現したコロニー数を数え、シ
ャーレ３枚の平均値を求めた。その結果を表３に示す。
表３より、Ｌ−グルタミンを添加することにより細菌の
増殖が促進されることが分かる。
増殖が促進されることが分かる。
表
実ｍ
指標菌ｌのみを接種することを除いて実施例１と同様に
して寒天培地にて培養した。培養５．６．７．８．１０
．１５．２４．４８時間後にシャーレを取り出し、ＩＮ
Ｔ、ＴＴＣ又はレザズリンナトリウム含有ろ紙を重層し
５分間放置した後、還元系発色試薬の色の変化又は目視
で判定してコロニー数を数え、シャーレ３枚の平均値を
求めた。なお、ＩＮＴ、ＴＴＣ及びレザズリンナトリウ
ム含有ろ紙の調製は次のように行なった。
して寒天培地にて培養した。培養５．６．７．８．１０
．１５．２４．４８時間後にシャーレを取り出し、ＩＮ
Ｔ、ＴＴＣ又はレザズリンナトリウム含有ろ紙を重層し
５分間放置した後、還元系発色試薬の色の変化又は目視
で判定してコロニー数を数え、シャーレ３枚の平均値を
求めた。なお、ＩＮＴ、ＴＴＣ及びレザズリンナトリウ
ム含有ろ紙の調製は次のように行なった。
すなわち、Ｍ／１０トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）に
ＩＮＴを０．８＋ｎｇ／ｍｌ 、ＴＴＣを０．８■ｇ／
ｍｌ 、レザズリンナトリウムを０．３２ｍｇ／＋ｏｌ
の濃度で溶解した各液にろ紙を浸漬した。
ＩＮＴを０．８＋ｎｇ／ｍｌ 、ＴＴＣを０．８■ｇ／
ｍｌ 、レザズリンナトリウムを０．３２ｍｇ／＋ｏｌ
の濃度で溶解した各液にろ紙を浸漬した。
結果を表４に示す。
還元系発色試薬としてＩＮＴを用いる時、細菌の検出感
度が最も良いことが分かる。
度が最も良いことが分かる。
表
叉Ｊｌ旦
実施例１で調製した寒天培地にピルビン酸ナトリウム０
．０７５％及びＬ−グルタミン０．１％を加えることを
除いて実施例４と同様にして指標菌ｌを接種、培養した
。比較寒天培地として実施例１で用いた標準寒天培地を
用いた。培養５．６．７．８．１Ｏ１１５，２４，４８
時間後にシャーレを取り出し、実施例１で使用したＩＮ
Ｔ含有フィルムを重層し５分間放置した後、コロニーの
数を数え、シャーレ３枚の平均値を求めた。結果を表５
に示す。
．０７５％及びＬ−グルタミン０．１％を加えることを
除いて実施例４と同様にして指標菌ｌを接種、培養した
。比較寒天培地として実施例１で用いた標準寒天培地を
用いた。培養５．６．７．８．１Ｏ１１５，２４，４８
時間後にシャーレを取り出し、実施例１で使用したＩＮ
Ｔ含有フィルムを重層し５分間放置した後、コロニーの
数を数え、シャーレ３枚の平均値を求めた。結果を表５
に示す。
本発明の検出方法を用いた方が細菌の増殖が早く、迅速
に細菌の検出ができることが分かる。
に細菌の検出ができることが分かる。
表
塞ＪＪＬ旦
実施例５で調製した本寒天培地及び標準寒天培地で３６
人の両手から菌を採取し、３７℃で８時間培養した。培
養後、シャーレを取り出し実施例５で用いたＩＮＴ含有
フィルムを重層して５分間放置した。出現したコロニー
の数を数え、シャーレ当たり１０個以上のコロニーが出
現したものを陽性とした。同様の検査を２度行なった。
人の両手から菌を採取し、３７℃で８時間培養した。培
養後、シャーレを取り出し実施例５で用いたＩＮＴ含有
フィルムを重層して５分間放置した。出現したコロニー
の数を数え、シャーレ当たり１０個以上のコロニーが出
現したものを陽性とした。同様の検査を２度行なった。
その結果を表６に示す。
本発明の検出方法での陽性率は６７〜６８％、標準寒天
培地を用いた方法での陽性率は３３〜３６％であり、本
発明の検出方法の方が細菌の検出率が高いことが分かる
。
培地を用いた方法での陽性率は３３〜３６％であり、本
発明の検出方法の方が細菌の検出率が高いことが分かる
。
表
実１１引ユ
実施例５で調製した本寒天培地及び標準寒天培地に表７
に示す市販の各種食材を検体として菌を採取し３７℃で
８時間培養した。培養後、シャーレを取り出し、実施例
５で用いたＩＮＴ含有フィルムを重層して５分間放置し
た。出現したコロニーの数を数えた。結果を表７に示す
。
に示す市販の各種食材を検体として菌を採取し３７℃で
８時間培養した。培養後、シャーレを取り出し、実施例
５で用いたＩＮＴ含有フィルムを重層して５分間放置し
た。出現したコロニーの数を数えた。結果を表７に示す
。
表７から、本発明の検出方法の方がより細菌数を正確に
検出できることが分かる。
検出できることが分かる。
表
衷１ｕ九旦
実施例６で調製した本寒天培地に表８に示す各種好気性
菌をブイヨンで培養し、シャーレ当たり１００個程度の
菌数になるように希釈して接種した。３７℃で８時間培
養した後、シャーレを取り出し、実施例５で用いたＩＮ
Ｔ含有フィルムを重層して５分間放置した。出現したコ
ロニーの数を数えた。結果を表８に示す、なお、検出さ
れたコロニーの数により次のように検出感度を評価した
。
菌をブイヨンで培養し、シャーレ当たり１００個程度の
菌数になるように希釈して接種した。３７℃で８時間培
養した後、シャーレを取り出し、実施例５で用いたＩＮ
Ｔ含有フィルムを重層して５分間放置した。出現したコ
ロニーの数を数えた。結果を表８に示す、なお、検出さ
れたコロニーの数により次のように検出感度を評価した
。
＋十＋：コロニー数５０以上
＋＋：コロニー数２数階５〜
４９ココロー数１１〜２４
一：コロニー数１０以下
表８から、本発明の検出方法は一般的に検査対象となる
好気性菌全てについて検出が可能であり、検出感度も高
い優れた方法であることが分かる。
好気性菌全てについて検出が可能であり、検出感度も高
い優れた方法であることが分かる。
Claims (5)
- （１）トリプチケースソイ寒天培地及び肉汁加寒天培地
から成る寒天培地で細菌を培養した後、還元系発色試薬
を含有する支持体を該寒天培地上に重層し、還元系発色
試薬の色調の変化により細菌を検出することを特徴とす
る細菌検出方法。 - （２）上記寒天培地中に細菌の増殖を促進する物質を含
有することを特徴とする請求項１記載の細菌検出方法。 - （３）細菌を増殖する物質がピルビン酸ナトリウム及び
Ｌ−グルタミンであり、添加濃度がそれぞれ０．００１
〜０．０５％、０．０７５〜０．１％であることを特徴
とする請求項２記載の細菌検出方法。 - （４）還元系発色試薬が３−（ｐ−ヨードフェニル）−
２−（ｐ−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈテト
ラゾリウムクロライドであることを特徴とする請求項１
ないし３のいずれか１項に記載の細菌検出方法。 - （５）還元系発色試薬を含有する支持体が吸水性のある
紙又は合成樹脂性フィルムであることを特徴とする請求
項１ないし４のいずれか１項に記載の細菌検出方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23540190A JPH04117299A (ja) | 1990-09-05 | 1990-09-05 | 細菌検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23540190A JPH04117299A (ja) | 1990-09-05 | 1990-09-05 | 細菌検出方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04117299A true JPH04117299A (ja) | 1992-04-17 |
Family
ID=16985548
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23540190A Pending JPH04117299A (ja) | 1990-09-05 | 1990-09-05 | 細菌検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04117299A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6265203B1 (en) | 1995-12-27 | 2001-07-24 | Chisso Corporation | Microorganism culture material containing a water-soluble polymer layer and a porous matrix layer |
| US6331429B1 (en) | 1996-07-17 | 2001-12-18 | Chisso Corporation | Culture medium for microorganisms |
| DE19602345C2 (de) * | 1996-01-24 | 2002-12-12 | Biotest Ag | Verfahren zur Verbesserung des Wachstums und des kolorimetrischen Nachweises von Bakterien, Hefen, Pilzen oder Kokken |
| JP2010529861A (ja) * | 2007-06-15 | 2010-09-02 | マイクロファージ・インコーポレーテッド | バクテリオファージ増幅を向上させた微生物の検出方法 |
| WO2011132480A1 (ja) | 2010-04-19 | 2011-10-27 | Jnc株式会社 | 微生物検出用テトラゾリウム化合物、微生物検出用試薬および微生物の検出方法 |
-
1990
- 1990-09-05 JP JP23540190A patent/JPH04117299A/ja active Pending
Cited By (6)
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| WO2011132480A1 (ja) | 2010-04-19 | 2011-10-27 | Jnc株式会社 | 微生物検出用テトラゾリウム化合物、微生物検出用試薬および微生物の検出方法 |
| US11022556B2 (en) | 2010-04-19 | 2021-06-01 | Jnc Corporation | Tetrazolium compound for detecting microorganisms, reagent for detecting microorganisms and method for detecting microorganisms |
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