JPH04134048A - 化合物ｔａｎ―１４１５誘導体、その製造法およびエンドセリン受容体拮抗剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、エンドセリン受容体拮抗剤および該拮抗作用
を有する新規化合物ならびにその製造法に関する。

従来の技術 心筋梗塞治療剤として一般に用いられる薬剤は血管拡張
剤および血栓溶解剤などである。これらは軽症患者には
適用されるが重症患者には手術、すなわち、冠動脈測道
移植術（ｃｏｒｏｎａｒｙ　　ａｒｔｅｒｙｂｙｐａｓ
ｓ　　ｇｒａｆＬｉｎｇ　）および経皮経管冠動脈形成
術（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ　　ｔｒａｎｓｌｕｍｉ
ｎａｌ　　ｃｏｒｏｎａｒｙａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ）
などが施される。

一方急性腎不全に対する効果的な薬剤は今のところ存在
セず、アデノシンｉ・リフオスフェート（ＡＴＰ）なと
をエネルギー賦活剤として投与するのみである。

発明か解決しようとする課題 上述したように心筋梗塞あるいは急性腎不全に対する治
療法としては対症療法のみであるが、最近、血管内皮細
胞に存在する血管収縮因子であるエンドセリン（Ｅｎｄ
ｏＬｈｅｌｉｎ　）が発見された［ＭＹａｎａｇｉｓａ
ｗａら、ネイチャー　（Ｎａｔｕｒｅ）、第３３２巻４
１１ページ（１９８８）］。エエンドセリンは２１個の
アミノ酸からなるペプチドで、強力な血管収縮活性、血
圧」二昇活性、心筋に対する収縮力増強作用なとを示す
。さらに、エンドセリンは心筋梗塞［Ｔ、　Ｗａｔａｎ
ａｂｅら、ネイチャー　（Ｎａｔｕｒｅ）、　３４４巻
１１４ページ（１９９０）］あるいは急性腎不全［ＹＳ
ｈｉｂｏｕｔａら、ライフ・サイエンス（Ｌｉｆｅ　　
５ｃｉｅｎｃｅｓ　）、　４６巻１６１１ページ（１９
９０）］などの］メチイエータの一つと考えられている
。

課題を解決するための手段 発明者らは」二連した状況に鑑み、エンドセリン受容体
を選択的に阻害する薬剤を見出すことか出来るならば、
上述した疾病の根本的な予防、治療剤が得られると確信
し、その起源を微生物代謝産物の中に求めた。後述する
方法で鋭意探索の結果、化合物ＴＡＮ−１，４１５Ａお
よびＢを培養液中より単離し、これらか強力なエンドセ
リン受容体拮抗作用を示すことを見出た。その後さらに
研究した結果後述するようにＴＡＮ−１４１５Ａはアス
チルリン酸と、ＴＡＮ−１４１５Ｂは４−クロロアステ
ルリン酸であると同定すると共に、これら化合物の新規
誘導体も合成し、本発明を完成した。

すなわち本発明は、 １）一般式（１） ［式中、Ｒ，およびＲ４は水素原子または置換されてい
てもよい低級アルキル基を、Ｒ３およびＲ５は水素原子
またはメチル基を、Ｒ３は水素原子または塩素原子を示
す。ただし、Ｒ３か水素原子のとき、ＲＩおよびＲ４は
少なくともいずれか一方は置換されていてもよい炭素数
２〜６の低級アルキル基を示し、Ｒ３が塩素原子のとき
Ｒ５が水素で且っＲ４がメチルである場合を除く。］で
示される化合物またはその塩、 ２）一般式（２） ［式中、Ｒ３およびＲ５は水素原子またはメチル基を、
Ｒ３は水素原子または塩素原子を示す。］で示される化
合物のカルボキシル基を低級アルキル化反応に付すこと
を特徴とする一般式１）の化合物の製造法、および ３）一般式（３） ［式中、Ｒ′１およびＲ′４は水素原子または置換され
ていてもよい低級アルキル基を、Ｒ′、およびＲ′５は
水素原子またはメチル基を、Ｒ′３は水素原子または塩
素原子を示す。］で示される化合物またはその塩を有効
成分とするエンドセリン受容体拮抗剤である。

一般式（３）においてＲ′１またはＲ′４て示される置
換されていてもよい低級アルキル基におけるアルキル基
としては、ＣＩ−８アルキル（例、メチルエチル、プロ
ピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ペンチル、
インペンチル、ヘキシルイソヘキシル等）が、該置換基
としては、たとえばＣ３−８シクロアルキル（例、シク
ロプロピル　シクロブチルシクロペンチル、シクロヘキ
シル等）、ｉｔ［１４有していてもよいフェニル（例、
フェニル、０−ヒドロキシフェニル、ｍ−ヒドロキシフ
ェニル、ｐ−ヒドロキシフェニル等）、ヒドロキシ、メ
ルカプト。

Ｃ１−３アルキルチオ（例、メチルチオ、エチルチオプ
ロピルチオ等）、カルボキシ、グアニジノ、アミノ。

イミダゾリル等が挙げられる。該置換されていてもよい
アルキルの具体例としては、メチル、エチル、プロピル
、イソプロピル、ブチル、イソブチル。

シクロヘキシルメチル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシベン
ジル、ヒドロキシメチル、メルカプトメチル１−ヒドロ
キシエチル、２−メチルチオエチル、カルボキシメチル
、２−カルボキシエチル、３−グアニジノプロピル、４
−アミノブチル、４−イミダゾリルメチルなどが挙げら
れる。−殺人（１）において、Ｒ，およびＲ４が置換さ
れていてもよい低級アルキル基も」―記と同意義を示し
、また置換されていてもよい炭素数２〜６の低級アルキ
ル基とはメチル基を除き」二記と同意義のものをいう。

上記−殺人（３）においてＲＺ＋　Ｒ’、、　Ｒ’３お
よびＲ′５が水素原子でＲ／４がメチル基を示す化合物
は、文献［Ｈ，ＮｉＮ１５ｈｉｋａら；ブレタン・オブ
・アグリカルチュラル・ケミカル・ソサエティ・ジャパ
ン（Ｂｕｌｌ、　Ａｇｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　　
Ｊａｐａｎ　）＋　１８巻１３ページ、１９４２年］に
記載された公知化合物、アステルリン酸（Ａｓｔｅｒｒ
ｉｃ　ａｃｉｄ：　１　）である。また、−殺人（３）
でＲ’　ｌ　＋　Ｒ’　２およびＲ′、が水素原子、Ｒ
′３が塩素原子、Ｒ′４がメチル基を示す化合物は、公
開特許公報　昭６０−１８８０８４号に記載された公知
化合物、４−クロロアステルリン酸（２）である。

化合物１および２は、大分県の土壌から新たに分離され
たー菌株ＦＬ−８５５６によっても生産することが出来
る。

本菌株は以下の性質を示す。

ａ）形態的特徴 本菌株　ＦＬ−８５５６は麦芽エキス寒天培地、バレイ
ショ・ブドウ糖寒天培地や合成ムコール寒天培地等で良
好に生育し、分生子も豊富に形成する。菌糸は透明で、
隔壁を有しており、分生子柄は基底菌糸及び気菌糸より
直生じている。分生子柄はほとんど分岐せず、１００μ
ｍ以上の長さを示し、その表面は平滑である。その先端
部に３〜５本のメトμ（ｍｅｔｕｌａ）が−ケ所で分岐
するか、しばしばそのすぐ下に別のメトμが認められる
場合が多い。それぞれのメトμの先端には数本の毛筆状
のほぼ均一の長さの（７〜１０μｍ）のフィアライド（
ｐｈｉａｌｉｄｅｓ）があり、数十個の連鎖した分生子
が箒状に認められ、箒状体（ｐｅｎ　ｉｃ　ｉ　ｌ　ｌ
　＋）を形成している。分生子はほぼ球形に近く、２．
０〜３゜０μｍの直径を有し、その表面は平滑である。

また、調べた寒天培地上では、菌核や菌束等は認められ
ない。

ｂ）寒天培地上の性状 ■ツアペック寒天培地：２４°Ｃにおける生育は、初期
には非常に制限され、７日目ではコロニー直径は２５ｍ
ｍで、円形には生育せず、不定形であるが、次第に生育
は旺盛になり、１４４日目は５８ｍｍに達しほぼ円形に
生育する。生育初期には、気中菌糸はほとんど無く、革
状であるが、次第に比較的長い気菌糸がコロニー全体を
覆うようになる。

その色調も灰白色から次第に灰黄緑色から暗褐色になる
。裏面は、淡黄褐色から暗褐色に変化する。

１０日以降には、淡黄色の色素が寒天培地に観察される
。

■麦芽エキス寒天培地：２４°Ｃで生育は良好で、７日
目には３５ｍｍに達する。表面はベルベット状で、灰色
ないし灰緑色から１４４日目は暗黄緑色となり、ペニシ
リウム属に典型的な色調を呈する。

分生子は非常に豊富に形成される。裏面の色調は、初期
には周辺部は黄緑色で、中央部は暗緑色であるが、次第
に、全体が暗緑色に変わる。可溶性色素は、初期には認
められないか、１４０後には淡黄色の色素か認められる
。菌核形成は認められない。

■ＹｐＳｓ寒天培地；２４°Ｃにおける生育は良好で７
白目にはコロニーサイズは３５ｍｍに達する。

菌糸は拡散せず、その表面はフェルト状からベルベット
状に変化し、分生子の色調は深緑から青緑色で、周縁部
は白色である。裏面は黄褐色ないし明るいオレンジ色を
呈する。黄色の可溶性色素が認められる。

Ｃ）生理学的性状 本菌株の生育条件をバレイショ・ブドウ糖寒天培地で調
べた。生育最適温度は２０〜２８°Ｃ５最適ｐＨは２〜
７で、また生育温度は９〜３０°Ｃで、ｐＨ２〜ｐＨ８
，５のｐＨ生育範囲を示した。

以」二の結果、主に形態的特徴を基にして、ア・マニュ
アル・オブ・ザ・ベニシリア（Ａ　Ｍａｎｕａｌｏｆｔ
ｈｅ　Ｐｅｎ１ｃｉｌｌｉａ　　ｂｙ　Ｂ、　Ｒａｐｐ
ｅｒ　ａｎｄ　Ｃ，Ｔｈｏｍ１９４９年）、ザ・ウィリ
アムス・アンド・ウイリキンス・カンパニー（Ｔｈｅ　
Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ａｎｄ　Ｗｉｔｋｉｎｓ　Ｃｏｍｐ
ａｎｙ　）刊、および、ア・ラボラトリ−・ガイド・ツ
ウ・コモン・ペニシリウム・スベシイズ（Ａ　Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｙ　Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　Ｃｏｍｍｏｎ　Ｐｅｎ
ｉｃｉｌｌｉｕｍＳｐｅｃｉｅｓ、　ｂｙ　Ｊｈｏｎ　
Ｉ、Ｐｉｔｙ、　Ｉ　９８８年）、コモンウエルス・サ
イエンティフィック・アンド・インダストリアル・リサ
ーチ・オーガニセイゾヨン（Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ
　　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　　ａｎｄ　　Ｉｎｄｕｓｔ
ｒｉａｌＲｅｓｅａｃｈ　Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ　
）刊を参照して、本菌株をペニシリウム　シトリナム（
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｃｉｔｒｉｎｕｍ　）と同定
した。

本菌株は、平成２年９月３日に財団法人発酵研究所（Ｉ
　ＦＯ）に受託番号　ＩＦＯ３２３２／ｌとして、また
平成２年９月１０口に通商産業省工業技術院微生物工業
技術研究所（ＦＲＩ）に受託番号ＦＥＲＭ　　ＢＰ−３
０９３としてそれぞれ寄託されている。

当該化合物生産菌の培養に用いられる培地は該閑か利用
し得る栄養源を含むものなら、液状でも固状でもよいが
、大量に処理するときには液体培地を用いるのがより適
当である。培地には、当該化合物生産菌が同化し得る炭
素源、窒素源、無機物質、微量栄養源か適宜配合される
。炭素源としては、たとえばブドウ糖、乳糖、ショ糖、
麦芽糖、デキストリン、澱粉、グリセリン、マンニト−
ル、ソルビトール、油脂類（例、大豆油、ラード油、チ
キン油なと）、ｎ−パラフィンその他が、窒素源として
は、たとえば肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、大豆粉
、コーン・ステイープ・リカー、ペプトン、綿実粉、廃
糖蜜、尿素、アンモニウム塩類（例、硫酸アンモニウム
、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニ
ウムなと）ソの他が用いられる。さらにナトリウム、カ
リウム、カルシウム、マグネシウムなどを含む塩類、鉄
、マンガン、亜鉛、コバルト、ニッケルなどの金属塩類
、リン酸、ホウ酸などの塩類や酢酸、プロピオン酸など
の有機酸の塩類が適宜用いられる。その他、アミノ酸（
例、グルタミン酸、アスパラギン酸、アラニン、リジン
、メチオニン、プロリンなど）、ペプチド（例、ジペプ
チド、トリペプチドなど）、ビタミン類（例、Ｂ１、Ｂ
２、ニコチン酸、Ｂ１２、Ｃなど）、核酸類（例、プリ
ン、ピリミジン、その誘導体など）等を含をさせてもよ
い。もちろん、培地のｐＨを調節する目的で無機または
有機の酸またはアルカリ類、緩衝剤等を加え、あるいは
消泡の目的で油脂類、界面活性剤等の適量を添加して差
し支えない。液体培養に際しては、培地のｐＨは中性付
近、特にｐＨ５〜８が好ましい。培養温度は約２０’Ｃ
〜３０’Ｃ，培養時間は約４８時間〜１６８時間が好ま
しい。

培養液から活性物質を単離する方法としては一般に知ら
れている脂溶性物質の単離法か適用されるか、参考例に
示したように溶媒抽出法、吸着性樹脂によるクロマトグ
ラフィー法などか有利に用いられる。また分画された成
分を濃縮、晶出あるいは凍結乾燥なとの操作により、所
望の化合物が固体として得られる。

かくして得られた化合物１および２を用いて公知文献［
Ｒ８Ｐ、ＣｕｒＬｉｓら、ジャーナル・オブ・ケミカル
・ソサエティー（Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　１９６
０年４８３８ページ］に従い、後述するメチル誘導体を
調製できる。

さらに一般にカルボン酸あるいはフェノールなどの酸性
基へのアルキル基導入の例としてはたとえば下記の方法
などが知られており、本発明化合物の製造法に充分適用
できる。

１）原料化合物をジアゾアルカン（例、ジアゾメタン）
と溶媒（例、エチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジ
オキサン、メタノールなど）の中で約０°Ｃないし還流
温度で約２分ないし１０時間反応させる。

２）原料化合物を活性化アルキルハライド（たとえば、
ヨウ化メチル、ｎ−ブチルクロリドなど）と反応させる
。適当な反応条件としては溶媒（たとえば、ジメチルホ
ルムアミド、ジメチルアセトアミドなど）を使用し、約
Ｏ℃ないし６０℃、約２分から２０時間反応させる。こ
の反応液にアルカリ金属塩（例、炭酸ナトリウム、炭酸
カリウム）あるいはアンモニア、トリエチルアミンなど
を共存させても反応の進行には差しつかえない。

３）原料化合物をアルコールたとえばメタノールなどと
反応させる。この反応は縮合剤として鉱酸たとえば塩酸
、硫酸またはｐ−トルエンスルフォン酸などが用いられ
る。反応条件は約０’Ｃないし還流温度で、１５分ない
し２０時間行ない、溶媒としては対応するアルコールあ
るいはそれらとクロロフォルム、ジクロロメタン、ジオ
キサンなどとの混合液も用いられる。

一般式（１）および（３）で示される化合物の薬理学的
に許容される塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、
カルシウム塩、あるいはアンモニウム塩等があげられ、
これら塩を調製するには自体公知の方法によって行われ
る。

一般式（３）で示される化合物として、具体的には下記
の化合物例を挙げることが出来る。

（以　下　余　白） 上記化合物の１〜４は、後述の参考例で、またＩＯおよ
び１１は後述゛の実施例で得られており、ざらに化合物
５〜９は前記文献［Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ。

１９６０年、４８３８ページ］に記載されている。

作　　　用 次に一般式（３）の化合物の生物活性について述べる。

（ａ）ラジオ・レセプター測定 エンドセリン・ラジオ・レセプター測定にはブタ心臓を
用いたが、心臓は大動脈、心房および脂肪を取り除き、
心室（２００〜２５０ｇ）を使用した。心室は洗浄後、
細断し、１０倍容のＣ溶液（２０ｍＭ　　Ｎ　ａＨＣＯ
ａ、０．１ｍＭ　　ＰＭＳＦ（Ｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈｙ
ｌｓｕｌｆｏｎｙｌ　　Ｆｌｕｏｌｉｄｅ　）、１ｍＭ
Ｅ　Ｄ　Ｔ　Ａ　（Ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔ
ｅｔｒａａｃｅｔｉｃ　　ａｃｉｄ））の中でポリトロ
ン・ホモゲナイザーを用いてホモゲナイズした。ガーゼ
で濾過後、１，５００ｇで１５分遠心し、その上清（５
００ｍｌ）を更に４００００ｇで２０分遠心した。沈澱
物をＴＰＥ緩衝液（５０ｍＭ　　トリス緩衝液（ｐＨ７
，４）、Ｏ，１ｍＭＰＭＳＦ、１ｍＭ　　ＥＤＴＡ）で
２度洗浄し、粗レセプター膜画分として一８０度で保存
し、必要に応じてＴＰＥ緩衝液に懸濁して用いた。

ラジオ・リガンドとして目５Ｉ−エンドセリン］　（８
１，４Ｔ　Ｂｑ／ｍｍｏｌ、デュポン社製、米国）を３
７０Ｂｑ添加し、粗膜画分く１．４μｇ蛋白量〉および
サンプルを加えた。

非特異的結合量は］　Ｘ　Ｉ　Ｏ−’Ｍのエンドセリン
−１を添加して測定した。反応は０２ｍ１のＴＰＥ緩衝
液中で、３７°Ｃ１９０分間行った。反応後、セルバー
ヘスター（２９０ＰＨＤ、ケンブリッヂ・テクノロジー
社製、英国）を用いて、グラスフィルター（ＣＦ／Ｂ、
ワットマン社製、米国）上に急速濾過して反応を止め、
１０ｍＭＮａＫ−リン酸緩衝液（ｐＨ７，４）で３回洗
浄し、フィルター」二に残存する放射活性をガンマ・カ
ウンターで測定した。

結果を第１表に示す。

第１表　ラジオ・レセプター　結合阻害活性エンドセリ
ン−１結合阻害 化合物　　　　　　　　Ｉ　Ｃ５ｏ　　（μｇ／　ｍｌ
）（ｂ）モルモット回腸収縮阻害作用測定１昼夜断食さ
せたモルモッｈ　（Ｓ　ｔｄ　　１ｌａｒｔｌｅｙ雄、
２５０ｇ、日本ニスエルシー）から、脳震盪後、頚動脈
より放血し、回腸を取り出した。約３ｃｍの断片を、２
０ｍ１のタイロード緩衝液で満たしたマグヌス管中に、
０．５ｇの張力をかけて懸垂した。

この間、３７°Ｃに保温し、混合ガス（９５％０２．５
％ＣＯ，）を小泡にして通気した。サンプルを加えて５
分間安定させ、ｌＸｌ０−８Ｍのエンドセリン−１を添
加して回腸を収縮させ、サンプル無添加の収縮を阻害す
る程度を百分率で示した。収縮は等張カドランスジュー
サ（ＭＥ−／１０１３、駿河電子社製）を用い、記録計
（レクチホｌ）　−８Ｋ　。

日本電子三栄社製）」二に記録した。サンプルの活性は
最大収縮の５０％阻害を示す濃度をＥＤ、、値として示
した。

結果を第２表に示す。

］　　　　　Ｘｌ０−’ ２　　　　　Ｘｌ０−５ １　　　　×　１０ ｏ、ｓｘｉ。

Ｏ，８Ｘ］０ （ｃ）エンドセリン １のラット昇圧反応に対す る拮抗作用 雄性ウィスターラット（体重２５０〜３００ｇ）をペン
ドパルビタール麻酔下に用いた。右頚動脈に挿入したカ
ニユーレより血圧を測定した。エンドセリン−１の０　
、３　ｍｍｏｌ／　ｋｇを静脈内投与し胃圧に対する作
用を調へた。１時間後に化合物３（５０ｍｇ／ｋｇ）を
静脈内投与して、１０分後にエンドセリン−１を同用量
静脈内投与し血圧に対する作用を調べた。

結果を第３表に示す。

第３表　エンドセリン−１の昇圧反応に被検薬物 数字はエンドセリン−１投与前に対する％変化（ｎ＝３
） 化合物３は、エンドセリン−１の昇圧反応を４７％抑制
し、拮抗作用を有することか明らかである。

−殺伐（３）の化合物、たとえば化合物１は、マウスを
用いた急性毒性試験において、４００ｍｇ／ｋｇの腹腔
内投与では回答異常は認められなかった。

以上の結果は、−殺伐（３）の化合物またはその塩がイ
ンビトロ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　）およびインビボ（１ｎ
ｖｉｖｏ　）のいずれの系においてもエンドセリン受容
体を介して、エンドセリンの作用を阻害したことを明示
している。これらの事実は一般式（３）の化合物または
その塩がエンドセリン受容体拮抗剤であることを示して
いる。

一般式（３）の化合物またはその塩を有効成分とするエ
ンドセリン受容体拮抗剤は、は乳動物の心筋梗塞や急性
腎不全の治療または予防薬として有用であり、該化合物
またはその塩を薬理学的に許容される担体と混合するこ
とにより得られる。本則は、たとえば、点滴剤、注射剤
、カプセル剤、錠剤、廃剤、液剤、懸濁液およびその他
の医薬として適切な剤型て提供できる。

非経口剤、例えば注射剤を製造する際には、等張化剤（
例、グルコース、Ｄ−ソルビトール、Ｄマンニトール、
塩化ナトリウム等）、保存剤（例、ベンジルアルコール
、クロロブタノール、パラヒドロキシ安息香酸メチル、
バラヒドロキシ安息香酸、プロピル等）、抗凝固剤（例
、デキストラン硫酸、ヘパリン等）および緩衝剤（例、
リン酸緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液等）等が用いられ
ていてもよい。

経口剤としては、カプセル剤、錠剤、シロップ剤、散剤
、顆粒剤等の剤型とし、−殺伐（３）の化合物またはそ
の塩と共に添加剤、例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑
沢剤、着色剤、矯味剤、安定剤等が含まれてもよい。

投与法については、例えば−殺伐（３）の化合物または
その塩を注射剤として非経口的に皮下、静脈内または筋
肉内に約０．１ないし１００　ｍｇ／　ｋｇ／日、好ま
しくは０．５ないし５０　ｍｇ／　ｋｇ／日投与する。

経口剤としては約０．１ないし４００ｍｇ／ｋｇ／日、
好ましくは０．５ないし２００　ｍｇ／　ｋｇ／日投与
されることが望ましい。

以下に参考例および実施例を挙げて本発明を更に具体的
に説明するが、これによって本発明が限定されるもので
はない。なお、培地に於けるパーセント（％）は、特に
断わりのない限り、重量／容量パーセントを表示する。

参考例１ ポテト・デキストローズ・ブロス（デイフコ社。

米国）２４ｇ、寒天２０ｇと水ＩＬから成る斜面培地上
で、２８℃で、７日間培養したペニシリウム　シトリナ
ムＦＬ−８５５６（Ｉ　ＦＯ３２３２４、ＦＥＲＭ　　
ＢＰ−３０９３）を２％ブドウ糖、３％麦芽糖、１．５
％生大豆粉、１．０％コーン・ステイープ・リカー（Ｃ
３Ｌ）、０．５％ペプトン、０．３％酵母エキス、０．
３％ＮａＣ（！を含む４０ｍ１の種培地（ｐＨ，６，５
）に接種し、２００ｍ１容三角フラスコ中で、２８°Ｃ
１４８時間回転振とう機上で培養し、種培養を得た。得
られた種培養液、１ｍｌを２００ｍ１容フラスコ内の４
０ｍ１の１．０％ブドウ糖、３．０％麦芽糖、２．０％
綿実粉、１．０％Ｃ８Ｌ、０．５％乾燥酵母、０．５％
炭酸カルシラムを含む醗酵培地に移植し、２８℃、５日
間回転振とう機上で培養した。

参考例２ 参考例１で得られた培養液（４，１りを３Ｎ塩酸でｐＨ
３に調整し、酢酸エチル（３，５Ｃ）で抽出後ハイフロ
スーパーセル（ジョン・マンピル社ｙ、米国）で濾過、
酢酸エチル抽出液（３，２ｆ２）が得られた。これを２
％炭酸水素ナトリウム水溶液で転溶し、転溶液（４Ｑ）
を３Ｎ塩酸でｐＨ３に調整後、酢酸エチルで再転溶し、
得られた再転溶液（３Ｑ）を水で洗浄、無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥後減圧留去すると、粗油状物質（３ｇ）が得
られた。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（
１３０ｇ）に付シ、溶媒系トルエン−アセトン（１０〜
５：ｌ。

１．５Ｑ−画分Ｉ）、（３〜１：１．２１りおよび（ｌ
。

５．７００ｍ１−画分■）で溶出画分１（９３０ｍｇ）
と画分１１（１，１５ｇ）が得られた。画分Ｉについて
はメタノールから結晶化すると、化合物１の無色針状結
晶（３１０ｍｇ）が得られた。母液濃縮物（６２０ｍｇ
）をシリカゲル力ラムクロマトグラフイ−（３０ｇ）に
付し、溶媒系、ヘキサン−酢酸エチル（５〜３　：　１
，８００ｍ１）、１％になるように酢酸添加、で活性区
分を溶出すると化合物１（３７５ｍｇ）が得られた。

画分■をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（５０ｇ
）に付し、溶媒系、ヘキサン−酢酸エチル（５〜３　：
　１．１．１）、　１％になるように酢酸添加、て溶出
すると、化合物１（１４７ｍｇ）、化合物１および２の
混合物（１４５ｍｇ）、化合物２（１２３ｍｇ）が得ら
れた。化合物２をアセトンから再結晶すると無色針状晶
（３８ｍｇ）が得られた。

化合物１ ｍ、ｐ、　　２０８〜２１０°Ｃ（分解）ｅＯＨ ＵＶ　　λ　　　（ε）＋　３１０ｎｍ（７，Ｔｏｏ）
、　２４５ｎｍ（１３，６００）ａｘ ２１２ｎｍ（５４，６００） Ｉ　Ｒ（ｃｍ　　’、ＫＢｒ）＋　　３３００．　１７
１０．　１６６０　１６２０１５９５、　１１９０　　
１０５０ Ｅ　Ｉ　−ＭＳ　：　　ｍ／ｚ　　３４８　（Ｍ＋）元
素分析：計算値Ｃ、、Ｈ，８０，としてＣ５８，６２，
Ｈ４，６３，０３６，７５測定値　Ｃ５８，２９，Ｈ４
，９２ ’ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、重アセトン、δｐｐｍ）７
、０５（ＩＨ，ｄ、　Ｊ＝　２．８１１ｚ）、　６．９
２（ＩＨ，ｄ、　Ｊ＝　２．８１１ｚ）６、４５（ＩＩ
Ｉ、　ｓ）、　５．９０（ＩＨ，ｓ）、　３．８１（３
１１，ｓ）、　３．７４（３ＩＩ、　ｓ）、　２．１６
（３Ｈ，ｓ）”ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＤＭＳＯｄｏ、
δｐｐｍ）１７０．６（Ｑ）、　１６５．０（Ｑ）、　
１６０．５（Ｑ）、　１５８．７（Ｑ）１５５．１（Ｑ
）、　１５３．２（Ｑ）、　１４３．５（Ｑ）、　１３
４．０（Ｑ）１２５．２（Ｑ）、　　　１０９．９（Ｃ
Ｉ）、　　　１０７．６（Ｃ１１）、　　　１０４．９
（ＣＩ＋）１０４．７（ＣＩ＋）、　１０３．３（Ｑ）
、　５６．０（ＣＨ３）、　５１．９（Ｃ１＋３）２１
、４（Ｃ１ｌ、） （但し、Ｑ　は四級炭素、　ＣＨはメチン、　ＣＨ、は
メチレン、ＣＨ８はメチル基を示す） 化合物２゜ ｍ、ｐ、　　２３３〜２３５°Ｃ（分解）ＭｅＯＩ＋ ＵＶ　　　λ　　　　　　（ｅ　　）：３１５ｎｍ（１
３，８００）、　　　２４３ｎｍ（２２，９００）ａｘ 、　　２１３ｎｍ（８６，３００） Ｉ　Ｒ（ｃｍ−’、　Ｋ　Ｂｒ）：　３４３０．　３２
８０．　１７２０．　１６９０゜１６００、　１１９０
．　１０７０．　１０６０Ｅ　Ｉ　−ＭＳ　：　　ｍ／
ｚ　　３８２　（Ｍ＋）元素分析、計算値ＣＩ７Ｈｌｆ
ｉ○６０ρとしてＣ５３，３５，Ｈ３，９５０３３，４
４Ｃｆ！９．２６ 測定値　Ｃ５３，２９，Ｈ３，９＋ ＨＮＭＲ（３００ＭＨ２，ＣＤＣｌ２３−重メタノール
、δｐｐｍ）：　７．００（１１１，ｄ、Ｊ＝２．８Ｈ
ｚ）、　　６．７９（ＩＩＬｄ。

Ｊ＝２．８Ｈｚ）、　５．９２（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝０．４
Ｈｚ）、　３．７９（３Ｈ，ｓ）。

３、７８（３Ｈ，ｓ）、　　２．２６（３１１，ｄ、　
Ｊ　＝　０．４Ｈｚ）Ｉ３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＤＭ
ＳＯ−ｄｏ、δｐｐｍ）１７０．９（Ｑ）、　１６４．
８（Ｑ）、　１５７．２（Ｑ）、　　１５６．６（Ｑ）
１５５．２（Ｑ）、　１５３．１（Ｑ）、　１４１．５
（Ｑ）、　１３３．６（Ｑ）。

１２５．１（Ｑ）、　１１３．３（Ｑ）、　１０７．６
（ＣＨ）、　１０６．１（ＣＩ）１０５．０（Ｃ）Ｉ）
、　１０４．１（Ｑ）、　５６．０（ＣＨ３）、　５２
．０（ＣＩｌ！１）２０、５（ＣＩ＋３） 参考例３ 化合物１（］、５５ｇを酢酸エチル（１５０ｍｌ）に溶
解し、２％炭酸水素す）　ＩＪウム水溶液（１５０ｍｌ
）で抽出した。抽出液を１００ｍ１まで濃縮後、アンバ
ーライトＸＡＤ−１１（２００ｍ１．ローム・アンド−
ハース社製、米国）を充填したカラムを通過させた。水
（６００ｍｌ）で洗浄後、５０％メタノール水（１ので
溶出した。溶出液を濃縮後、凍結乾燥して化合物３（１
，２４ｇ）を得た。

ＩＩ、Ｏ ＵＶ　　λ　　　（ε）：　３１６ｎｍ（８，１４０）
、　２５１ｎｍ（１４，１００）ａｘ 、２１２ｎｍ（４８，ｔｏｏ） Ｉ　　Ｒ（ａｍ−’、ＫＢｒ）：　　３４００．　　１
７２０．　　１５８０．　　１４３０元素分析：計算値
Ｃ，７Ｈ，，０８Ｎａ−ＨｔＯとしてＣ５３，５８，Ｈ
４，４１，０３７，０８゜Ｎａ　　５．９２ 測定値　Ｃ５２，６８，Ｈ４，２２，Ｎａ　６．４参考
例４ 化合物２（７７ｍｇ）に炭酸水素ナトリウム（１７ｍｇ
）を含む水（１０ｍｌ）を加え溶解した。得られた溶液
を濃縮後、凍結乾燥して化合物４　（８ｉＩ　ｍｇ）を
得た。

ｕｖλＨ，１２ＦＡ。ｘ（ｅ　）：　３１５ｎｍ（７，
３００）、　２５０ｎｍ（１０，５００）２１２ｎｍ（
４８，５００） Ｉ　Ｒ（ｃｍ−’、Ｋ　Ｂｒ）：　　３４００．　１７
１０．　１５８０．　１４４０゜元素分析：計算値ＣＩ
？Ｈ１４０８ＣＩ２Ｎ　ａ　・ｔ　、　５Ｈ，Ｏとして Ｃ１，２９，Ｈ３，９７，Ｏ３５，２０ＣＱ　　８．２
１　　　Ｎａ５．３２ 測定値　Ｃ４７，５９，Ｈ４，２６ 実施例１ 化合物２（５０ｍｇ）をエーテル（３ｍｌ）に懸濁させ
、ジアゾメタンのエーテル溶液を固体が溶解するまで加
えた。得られた溶液を室温で１０分間撹拌後、溶媒を減
圧留去した。残渣をシリカゲルクロマト［シリカゲル（
２，５ｇ）、溶媒、ヘキサン−酢酸エチル（５：１→３
：１）］で精製して、化合物ｌＯ（４５ｍｇ）が得られ
た。

、　　２０８ｎｍ（４６，０００） Ｉ　Ｒ（ｃｍ””’、Ｋ　Ｂｒ）：　　３４００．　１
７００．　１６５０．　１６００１４３０、　１２００
　　１０９０　　１０６０元素分析、計算値Ｃ＋ｅＨ１
７０ａｃ　ＱとしてＣ５４，４９Ｈ４，３２０３２２６ （１８，９４ 測定値　Ｃ５４，２４，Ｈ４，６２ ’ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ２＋、δｐｐｍ）
　：　６．９８（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ）、　８．
７２（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝２．９１１ｚ）、　５．８８（Ｉ
Ｈ，ｓ）、　３．９７（３１１，ｓ）、　３．７５（３
１１，ｓ）、　３．７１（３１１，ｓ）。

２、２３（３Ｂ、　ｓ） 実施例２ 化合物３（１０３ｍｇ）をジメチルホルムアミド（２ｍ
ｌ）に溶解し、ヨウ化エチル（４５μＱ）を加え、室温
で８時間撹拌した。反応液にヨウ化エチル（４５μＱ）
を加え、さらに１６時間撹拌した。反応液を溶媒留去し
、残液に水を加え酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和
食塩水で洗浄し芒硝で脱水後、濃縮乾固して組物質（１
１０ｍｇ）を得た。得られた組物質をシリカゲルカラム
クロマト［シリカゲル（５ｇ）、溶１：ヘキサンー酢酸
エチル（５：１→３：１）］で精製して、化合物１１（
８９ｍｇ）が得られた。

ｅＯＨ ＵＶ　　λ　　　（ε）　：　　３１５ｎｍ（７，２０
０）、　　２５０ｎｍ（１２，８００）ＴｈａＸ 、　　２１０ｎｍ（４７，４００） Ｉ　Ｒ（ａｍ””、Ｋ　Ｂｒ）＋　　３４３０．　２９
８０．　１７１０．　１６２０１４３０、　１２００．
　１０６０ 元素分析：計算値Ｃ，８Ｈ、。０８・０．５Ｈ，Ｏとし
て Ｃ５９，２２，Ｈ５，４９０３５，２９測定値　Ｃ５９
，５３，Ｈ５，３３ ’ＨＮＭＲ（３００ＭＨ２，ＣＤＣｌ２３．δｐｐｍ）
　：　６．９８（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝２．８１１ｚ）、　　
６．７１（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ）、　　６．４１
（ｉｔ（、ｄ、Ｊ＝０．６１１ｚ）、　　５．７７（Ｉ
Ｉ（、ｄ、Ｊ＝０．６Ｈｚ）、　　４．４１（２Ｈ，ｑ
、　Ｊ＝　７．１Ｈｚ）、　　３．７３（３８，ｓ）、
　　３．６９（３Ｈ，ｓ）、　　２１３（３Ｈ，ｓ）、
　　１．３４（３Ｈ，ｔ、　Ｊ＝　７．１Ｈｚ）実施例
３ 化合物３（１００ｇ）を蒸留水１１、に溶かし、これに
マンニトール（２５ｇ）を加えて溶かし、滅菌濾過して
、アンプルに５ｍｌずつ分注する。これを凍結乾燥機に
入れて乾燥後対をすると使用時溶解用のアンプルが得ら
れる。使用に際しては、該アンプルを開封し、５ｍｌの
生理食塩水に溶解し、皮下、静脈内または筋肉内投与用
注射剤とする。

実施例４ 化合物３（］ＯＯｍｇ）をコーンスターチ（５０ｍｇ）
および乳糖（５０ｍｇ）と混和し、常法に従って顆粒化
する。常法に従ってこれをゼラチンカプセルに封入し、
カプセル剤とスル。

発明の効果 一般式（３）の化合物は、エンドセリン受容体拮抗作用
を有し、心筋梗塞あるいは腎不全の予防または治療剤と
して有効である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＿１およびＲ＿４は水素原子または置換され
   ていてもよい低級アルキル基を、Ｒ＿２およびＲ＿５は
   水素原子またはメチル基を、Ｒ＿３は水素原子または塩
   素原子を示す。ただし、Ｒ＿３が水素原子のとき、Ｒ＿
   １およびＲ＿４は少なくともいずれか一方は置換されて
   いてもよい炭素数２〜６の低級アルキル基を示し、Ｒ＿
   ３が塩素原子のとき、Ｒ＿１が水素で且つＲ＿４がメチ
   ルである場合を除く。］で示される化合物またはその塩
   。 ２）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＿２およびＲ＿５は水素原子またはメチル基
   を、Ｒ＿３は水素原子または塩素原子を示す。］で示さ
   れる化合物のカルボキシル基を低級アルキル化反応に付
   すことを特徴とする請求項１）の化合物の製造法。 ３）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ′＿１およびＲ′＿４は水素原子または置換
   されていてもよい低級アルキル基を、Ｒ′＿２およびＲ
   ′＿５は水素原子またはメチル基を、Ｒ′＿３は水素原
   子または塩素原子を示す。］で示される化合物またはそ
   の塩を有効成分とするエンドセリン受容体拮抗剤。