JPH04144678A - プソイドモナスの変異株ｙｚｈ株とこの株の応用により８５１ｙｚｈ栄養液の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は大規模な工業的装置を使って、植物蛋白質から
発酵あるいは培養により、単細胞蛋白質を製造すること
に関する。単細胞蛋白質は、植物蛋白質へのプソイドモ
ナスの一変異株の作用により製造する。製造された製品
は、人間や動物が食することが出来る、栄養のある液体
あるいは溶液、またはそれから製造された固形の製品で
ある。

〔発明の背景〕

イースト発酵パン、塩漬はキャベツ、ワイン、ビール等
の発酵は古来より、広く使用されてきた技術である。耕
地が食品以外の目的に使用されることが増大している世
界の各地で、他の食品製造の手段が発酵の技法により求
められている。過去に多くの微生物が研究され１人体に
容易に吸収される蛋白質を、特に単細胞蛋白質を製造す
るために、それらを工業的に発酵方法に適用しようと云
う試みがなされている。

アメリカ特許Ｎｏ、４，８７７，７３９はアゾトバクタ
−・ヴイネランディーから変異された８５１黄と命名さ
れた、−群の抗アンモニア窒素固定の能力を有するアゾ
トバクタ−を発表している。この微生物もまたＳｅ、　
Ｚｎ、ビタミンＥ、Ｄ、に、抗癌および抗老化作用のあ
る強壮医薬品に富んだ単細胞蛋白質を製造するのに使用
し得る。それはまた、細菌肥料、鰻や動物の飼料、添加
物、防腐剤、つなぎ剤等を製造するのにも使用出来る。

〔発明の効果〕

本発明はプソイドモナスの一変異株あるいはこの変異株
から自然あるいは誘導的に変異した株により、植物蛋白
質から単細胞蛋白質を製造するための過程を表している
。栄養液、固形栄養品あるいはこれらから製造された製
品としての発酵製品は人あるいは動物が食することが出
来る。本発明の栄養液は、老化防止、動物の造血の刺激
と改善、動物と人の胃粘膜の保護、特に動物と人の癌の
試験管内および体内での増殖の明らかな阻害、癌細胞を
夫々の正常状態に引き戻す等の効果を有する。

〔課題を解決するための手段〕

（発明の要約） 本発明はプソイドモナスの一変異株あるいはこの変異株
から自然あるいは誘導的に変異した株を用いて通常の工
業的発酵法により、人体に必要とされる２０種類以上の
アミノ酸や種々の微量元素に富む単細胞蛋白質を製造す
る方法を要旨とする。

微生物株、即ちＹＺＨ株と命名したプソイドモナス株は
、澱粉、馬鈴薯、甘藷のような他の植物材料でも使用出
来るが、大豆材料から単細胞蛋白質を製造するのに特に
有用である。本発明にしたがって８５１　　ＹＺＨ株と
保温あるいは発酵させた大豆あるいは大豆蛋白質は人体
に容易に同化され単細胞蛋白質に有効に変換される。典
型的には、この発酵は、８５１　　ＹＺＨ株栄養液ある
いは８５１　　ＹＺＨＮＳと命名した単細胞蛋白質栄養
液の製造は水溶液中で行なう。ここで使用した、溶液、
液体あるいは栄養液は、真の溶液あるいは、流動物よう
な、結果として溶液となる液体中への固体の懸濁または
混合物を意味する。

本発明の微生物はＹＺＨ株と命名したプソイドモナスの
一変異株であり、アメリカ細胞銀行（ＡＩｌｅｒｉｃａ
ｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ
）、１２３０１　Ｐａｒｋｉａｎｎ　Ｄｒｉｖｅ、　Ｒ
ｏｃｋｖｉｌｌｅ＋　Ｍａｒｙｌａｎｄ　２０８５２に
寄託され、Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，寄託番号５３９８０に相当
する試料と全て同一の性質を有する。

本発明はまたプソイドモナスＹＺＨあるいは培養プソイ
ドモナスＹＺＨを、大豆、大豆から得た蛋白質、澱粉溶
液のような製造溶液あるいは単細胞蛋白質の製造に適し
た他の溶液中で単細胞蛋白質を製造する株として使用す
ることも含めて、単細胞蛋白質を製造するための通常の
工業的発酵過程にプソイドモナスＹＺＨ株を使用するこ
とにも関連する。さらに本発明は栄養液の哺乳動物およ
び人への影響にも関連する。

（詳細な説明） 本発明はプソイドモナスＹＺＨと命名したプソイドモナ
スの一変異株であり、アメリカ細胞銀行に寄託されたＡ
、Ｔ、Ｃ，Ｃ，寄託番号５３９８０に相当する試料と全
て同一の性質を有する。ＹＺＨ株は大豆あるいは大豆誘
導物質の中で見出され、分離される。ＹＺＨ株の性質は
、淡黄色平坦桿状であり、少なくとも一個の鞭毛を有し
、葉状体の大きさは０．５〜０．７　Ｘ　１．２〜２．
０μ■であり、化学合成的に従属栄養体であり、水溶性
色素を生産せず、そして細胞内ポリ−β−ヒドロキシブ
チレートを形成する能力やアルギニンジヒドロラーゼ生
産能を有せず、脱窒作用を有せず、硝酸塩還元能やゼラ
チン液化能を有し、絶対好気性であり、生育温度は約１
０〜４１℃、好ましいｐＨは４゜５〜９．０である。本
株のＤＮＡのグアニン、シトシンの含量は６５．４〜６
７．７モル％であり、本株のＤＮＡはＹ断片を有し、そ
れは特殊なＹ断片ＤＮＡプローブで検出８来る。上記全
ての特徴は、ＹＺＨ株がプソイドモナスの他の種とは区
別される特徴である。本発明でわかるように、ＹＺＨ株
が窒素を含む溶液中で使用されると、それは２０種類以
上のアミノ酸と種々のＩ！ｉｆｆ元素ビタミンに富む単
細胞蛋白質を製造することが出来る。

ＹＺＨで製造された栄養液１００ｍ１試料の分析で、以
下の範囲の物質を含有することが見出された。

アミノ酸３５０〜８００■、ビタミンＥＯ，２〜０．５
■、ビタミンＢ−２０，０５〜０．１１ｍｇ、ビタミン
ＰＰまたはニコチン酸０．７〜１．０■、Ｓｓ　０．０
４〜０．Ｏ８ｐｐｍ、Ｚｎ　０．２〜０．５ｐｐｍ−Ｍ
ｏ　０．８〜０．２４ｐｐｍ、Ｃｏ　０．０８〜０．２
４ｐｐｍ、　Ｍｎ　０．０５〜０．０６ｐｐｍ、Ｃｕ　
Ｏ，０７〜Ｑ　、　２　ｐｐｍおよびＦｅ　０．１〜０
．７ｐｐｍ、乾燥物質１．２１〜１．３８　ｇ、蛋白質
１．２１〜２．２ｇ、脂肪０．１１〜０．１３　ｇおよ
びその他の物質。

ＹＺＨプソイドモナスの使用により８５１　ＹＺＨＮＳ
を製造する過程は次の段階を含んでいる。

ＹＺＨを生育する培養液は、通常の発酵タンク中に入れ
、攪拌装置とガスの出入り装置によりタンク内容物が均
一化出来、また培養の間、ＹＺＨや他の共存している微
生物に必要なろ過された無菌空気の導入によるエアレー
ションが必要である。

培養液は、ここに示されるように、大豆あるいは澱粉あ
るいは他の適した材料である。それは３８〜５４時間の
第一、第二の８５１　　ＹＺＨ種培養を用いて二段階過
程で接種される。接種後、製造された葉状体は第三の連
続培養あるいは保温のために、あらかじめ加熱滅菌した
大豆、澱粉あるいは他の適した材料からなる製造液の中
に仕込まれる。製造液は、前記大豆あるいは澱粉に加え
て、栄養的に重要な微量元素のような他の物質を含むこ
とが出来る。葉状体が仕込まれてからは約２４〜７２時
間全体を通じてろ過した無菌空気を通した。保温条件は
次の通り；通気比　１　：　０．６〜１．２（量／空気
）ｖ／ｖ分；攪拌速度１８０〜２６０ｒｐＩＩｌ；温度
２８−３８℃。培養後、得られた培養汁を加熱滅菌して
取り入れる。培養汁（栄養液あるいは液体）は人の使用
に適した製品になるように直接包装することが出来る。

例えば、培養液を遠心分離し、沈澱させ、薄膜あるいは
超ジ濾過によりろ過し、人や動物が直接食することが出
来る製品とすることが出来る。

更に、ろ過した溶液は、アルコール、アセトン。

酢酸エチルのような有機溶媒で抽出したり、あるいはイ
オン交換カラム、多孔性樹脂のカラム等の抽出器で抽出
し、濃縮された栄養成分を含んでいる最終製品を作る。

栄養液は８５１　　ＹＺＨプソイドモナスを含む製品を
製造するのに１食品あるいは薬品に任意に加えることが
出来る。この溶液は乾燥し、固体製品にすることも出来
、またパン、ケーキおよびこれと同等のものを焼くのに
、あるいは他の植物に水や卵の代りに使用することが出
来る。栄養液はまた化粧品に用いることもできる。

上記の方法は次の製造液が使用されている。成分は水に
対して重量で表わしている。これらの溶液に加えて１人
体に必要とされる適当量の微量元素が加えられる。また
安息香酸または安息香酸塩を本溶液に用いることが出来
る。このような要素の量は典型的には１．５〜１０００
ｐｐ＋ｓの範囲である。

１、大豆培地 大豆　　　　　　　　　　　　５〜１０％或は大豆乳あ
るいは圧縮豆 （大豆重量に対して） イーストエキス 或はイースト粉 或はペプトン、 Ｃａ　ＣＯ３ ＫＨ２ＰＯ。

Ｍｇ５Ｏ。

ａＣＩ Ｎａ２ＭｏＯ２ Ｎａ２Ｓｅａ３ ＺｎＳＯ。

ＣｏＣ１□ ２．１６４０培地 よく知られた１６４０培地もまたＹＺＨプソイドモナス
の培養に用いることが出来る。

８５１　　ＹＺＨ栄養液は、このまま使用しても、ある
いはどのような形でも、動物の健康の増進あるいは保護
すること、特に動物および人の癌細胞５〜１５％ ０．０２〜０．５％ ０．０２〜０．５％ ０．０２〜０．３　％ ０．０５〜０．２５％ ０．０２〜０．１％ ０．０１〜０．０５％ ０．０１〜０．０４　％ ５．０−３０ｐｐｎ ２．５〜１５ｐｐｍ ２．５〜４０ｐｐｍ ５．０〜２０ｐｐｍ 牛エキス の増殖を体内および試験管内で阻害するような、健康的
効果を持っている。８５１ＹＺＨＮＳとその誘導体の健
康に有効な効果を最もよく示すために以下の実施例と結
果を示す。

〔実施例〕

実験１（航過酸化脂肪化効果） 人や動物の体内の酸素フリーラジカル、水酸化フリーラ
ジカルおよび過酸化物、特に脂肪の過酸化物は、細胞死
や人や動物の急性、慢性の病気や老衰を引き起す原因の
一つである。直接あるいは間接的に航過酸化脂肪化効果
を持っている、ある種の植物あるいは薬剤は、航過酸化
物の十分の能力がないかあるいは過酸化脂肪の極端な活
性がある人や動物での、癌あるいは腫瘍の予防および老
衰の予防となり得る（Ｄ、バーマン、分子生物学、老化
、病気におけるフリーラジカル、１９８４年、Ｒａｖｅ
ｎ社、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　１〜１２頁）。

１７．８±１．７５ｇのクンミン　マウスを使い、体重
に従って１０匹づつ三群（Ａ、Ｂ、Ｃ）　　に任意組分
けした。一つの群はコントロール群（Ａ）であり、全て
のマウスに同じ試料を与えた。０群のマウスはＡ群、Ｂ
群とは別に８５１　　ＹＺＨ栄養液を連続１３日与え、
Ａ群、Ｂ群には水道水を与えた。１４日目に全てのマウ
スが試験された。

試験の後、Ａ群マウスには午後４時にパラフィンオイル
（四塩化炭素の溶剤）を腹腔内に投与した。

Ｂｅと０群のマウスには１４日目の午後４時に腹腔内凹
塩化炭素を投与した。投与量は１．８７ｍ鵬ｏ１／ｋｇ
であった。

１５日目に動物を解剖して肝臓試料を調整した。

肝臓中のマロンアルデヒド（ＭＤＡ）をオオカワヒロシ
等の方法にしたがって分析した（Ａｎａｌ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　９５；　３５１−３５６（１９７
９））、　１，１，３．３−テトラメトキシプロパン（
日本ＴＣ１，Ｅ、Ｒ，Ｇｒａｄｅ）を過酸化脂肪の分析
の標準として使用した。ＭＤＡはｎｍｏｌ／ｇで比色定
量し１分析値を統計的に解析した（Ｈ±ＳＤ）。結果を
以下に示す。

（以下余白） 表 結果は８５１　　ＹＺＨ栄養液がＭＤＡレベルを相当下
げることによる高い航過酸化脂肪活性を有することを示
している。この性質は老化に打ち勝つのに有益であろう
。

実験２　　（８５１ＹＺＨＮＳの新生マウスのヘモグロ
ビン、全白血球およびＷＢＣの分類に対する影響） １２匹の妊娠クンミン　マウスを通常の飼料と水道水で
飼育した。出産後、１２匹のマウスを夫々新生マウスと
共にコントロール群（Ａ）と８５ＩＹＺＨＮＳテスト群
（Ｂ）に任意に二分した。

上記コントロール群Ａは通常の飼料と水道水で維持し、
Ｂ群のマウスは授乳期、離乳期を通じて８５１　　ＹＺ
ＨＮＳを加えた飼料を与えた。テスト期間は１５日まで
である。１５日間の期間の終りに、新生マウスの血液を
分析のために新生マウスの眼球から採取した。結果は次
の通りである。

表　２　全白血球およびヘモグロビンに対する影響表 ＹＺＨＮＳのＷＢＣ分類に対する影響 車両テスト、コントロール群と比較 上記データは、２０種類のアミノ酸、数種のビタミンと
種々の微量元素を含んでいる８５１　ＹＺＨＮＳを飼料
として投与することにより、新生マウスのリンパ球の増
加を引き起すことを示しており、これはマウスのこれら
の細胞をつくる能力を刺激し、改善したことによるもの
と受は取ることが出来る。

実験３（ラット胃粘膜に対する急性障害への８５１　　
ＹＺＨＮＳの治療効果） 体重２２０±２０ｇの１６匹の雌雄のウィスターラット
をこの実験に使用した。これらのラットを任意にコント
ロール群（Ａ）と８５１　　ＹＺＨＮＳテスト群（Ｂ）
に分けた。Ａ群は通常飼料で飼育し、水道水を与えた。

Ｂ群は８５１　　ＹＺＨＮＳを含んだ飼料を与えた。夫
々のラットには一日約８＋ｓｌの溶液が投与された。１
５日飼育した後、二群のラットを１４時間絶食させた。

夫々のラットに一日一回２．５．のインドメタシンを三
日間与えた。二日後に、ラットを解剖し、胃を取出して
洗浄し、肉眼でｗｔ察した。Ａ群の６匹、Ｂ群の２匹が
胃粘膜に急性の出血があった。Ａ群のラットの出血は明
らかにより重篤であった。６匹のＡ群、２匹のＢ群のラ
ットの胃粘膜での出血は点状であったり、はがれていた
り、引伸ばされていたりして、場所的には限局されてい
た。胃粘膜の広い出血が１匹のＡ群のラットに起ってい
た。しかしながらＡ群は６−１２の点状出血を示してい
たノニ対して８５１　　ＹＺＨＮＳ群はわずか２−５の
点状出血を示していたにすぎなかった。これらの結果は
、８５１　　ＹＺＨＮＳの投与が胃粘膜の出血を有為に
減少させたことを示している。

実験４（ヒト慢性胃炎に対する８５１　　ＹＺＨＮＳの
効果） ２０人の患者が病理検査で慢性胃炎と診断された。彼ら
は２１〜６２才の１０人の男子、１０人の女子であり、
全員が明らかな臨床的症状を持っていた。

全患者を任意にコントロール群とテスト群の二群に分け
た。コントロール群は２１日間ビタミンＣを投与した。

テスト群は一日三回、−回８０ｍ１の８５１　　ＹＺＨ
ＮＳを三週間経口的に投与した。

結果を下に示した。

表４ 上に示したように、コントロール群に比べて、８５１　
ＹＺＨＮＳ群は胃の不調の臨床的症状を改善し、慢性胃
炎を軽減させることが出来る。

実験５（癌細胞の増殖への８５１　　ＹＺＨＮＳの影響
） 本発明の８５１　　ＹＺＨＮＳは、例えばヒト胃腺癌細
胞の増殖に強い阻害作用を持っている。この細胞は夫々
１０％、１５％、２０％、８５１ＹＺＨＮＳで処理され
ると、よい結果を与えた（第１図および第２図参照）。

実験６（電子顕微鏡下で観察したヒト癌細胞への８５１
　　ＹＺＨＮＳの影響） ヒト胃腺癌細胞、ＭＧＣ−８０−３を１５％８５１　　
ＹＺＨＮＳで処理し、Ｈ，Ｅ、染色して位相差顕微鏡で
ＩＲ察した細胞には明らかな形態的変化が表れていた（
第３図と第４図）。第５図と第６図のＭＧＣ−８０−３
細胞の走査型電子顕＊＊写真では、細胞辺縁には多くの
糸状仮定があり、また細胞表面は微絨毛で密に覆われて
いる。しかし２０％、８５１　　ＹＺＨＮＳの処理後は
細胞表面の微絨毛は消失していた。この細胞は細胞辺縁
に長い細胞質突起と層状仮定を持ち、巻貝様の構造とブ
レツブが出現していた。

第７図と第８図の透過型電子顕微鏡写真は１ＭＧＣ−８
０−３細胞が高い核−細胞質比、不規則な核の形、大き
な核小体、増大した異質染色質、細胞質中の未発達の小
器官などの特徴を持つことを示している。２０％、８５
１　　ＹＺＨＮＳで７〜９日間処理後には、ＭＧＣ−８
０−３細胞は第８図に示したように、核（Ｎ）の形の規
則化、核小体（Ｎｕ）が縮小、異質染色質の減少と真性
染色質の増加、ゴルジ装置（Ｇ）と糸粒体（Ｍ）の発達
、粗面小胞体（ＲＥＲ）の増加のような、対応する正常
細胞によく似た一連の超微構造的変化を引き起していた
。上記の結果は、８５１　　ＹＺＨＮＳが試験管内で癌
細胞を阻害し、殺す効果を持つ上に更に、癌細胞を正常
細胞に転換する効果を持つことを示している。癌細胞へ
の阻害、殺傷作用は、上記栄養液処理１２〜２４時間で
起きる。死ななかった細胞を栄養液中で引続いて約７〜
９日培養する。細胞は除々に対応する正常細胞にかわる
。

実験７　（ＭＧＣ−８０−３細胞と１５％８５１ＹＺＨ
ＮＳで処理した細胞のマウス異種移植の結果） ３０匹の体重１７．５±１．６５　ｇのクンミンマウス
を任意の二群（Ａ、Ｂ、Ｃ）に分けた。

群は１０匹である。Ａ、Ｂ、Ｃ群の全マウスの左前肢に
ＭＧＣ−８０−３細胞を移植した。１４日間飼育後、マ
ウスを解剖した。全群のマウスの左前肢の腋窩に腫瘍を
含む病巣があった。

しかし、Ａ群、Ｃ群のマウスの左前肢に、三日間１５％
ＮＳで処理したＭＧＣ−８０−３細胞を移植した。全マ
ウス（２０）を三日間飼育すると１０匹のマウスは右前
肢腋窩に小結節を持っていた。

更に、Ｃ群のマウスの右前肢に、１５％ＮＳで１０日間
処理したＭＧＣ−８０−３細胞を移植した。どのマウス
にも腫瘍は出来なかった。

結果は８５１　　ＹＺＨＮＳが動物体内での癌あるいは
腫瘍の増殖に強い阻害効果を持つことを示している。

実施例１ ５トンの攪拌および通気装置付の発酵タンクを４０％容
量まで満たした。発酵液は重量で、選択し、洗浄し、粉
砕して残渣を除去した２００−の大豆、８００ｇのイー
ストエキス、１０００ｇ（７）Ｋ１００Ｏ，，１００ｇ
Ｍｇ５ｏ、、５ｋｇＣａＣＯ３゜４００）（ＮａＣ１，
２０ｇＮａ２ＭｏＯ２，５ｇＮａ、＋５ｅａＩ、　　２
０　ｇＺｎＳＯ４，２０ｇＣｏＣＬ２．　　Ｌｋｇ安息
香酸および水とからなる１０％大豆培地である。接種液
は１０％で、上記培地の１０分の１で、２００ｋｇを満
たした０、５トンの種発酵タンク中で、４８時間培養し
たプソイドモナスＹＺＨからなっている。プソイドモナ
スＹＺＨは約４８時間の第一、第二種培養として二段階
で加えられた。接種液は、３０℃、２６Ｏｒｐｍの回転
速度で攪拌し、１　：　０．８Ｖ／Ｖ分（量／空気）の
割合でエアレーションして培養した。種培養が完了した
後、接種液を第三の連続保温のために、５トン発酵タン
クに加えた。発酵液と接種液は発酵タンク内で約４８時
間の間反応させた。製造された培養汁（栄養液）は次に
９０℃、所定の圧力で半時間加熱滅菌し、集合ラインで
瓶詰めにし、最終製品にするために更に高温で半時間再
び加熱滅菌した。

上記の最終製品である溶液は固形製品に乾燥することが
出来る。１００ｍ１の培養汁の分析の結果、表５に示し
たように、これが２．２％乾燥物質、１．３８％蛋白質
、 ０．１３％脂肪。

０．０９％炭 水化物およびビタミンおよび無機物を含むことを示して
いる。

実施例２ 実施例１のタンクを使用した。発酵液は２５０ｇＭｇ５
Ｏ，，４ｇＣａＣ０，，４３０ｇＮａＣ１，３０ｇＮａ
２Ｍｏｂ、、５ｇＮａ２５ｅａ３．ｌ　５ｇＺｎＳ○４
　ｔ　１５　ｇ　ＣＯＣ１２−１ｋｇ安息香酸ナトリウ
ムおよび水とからなる１５％大豆乳液である。接種液は
約５０時間第一、第二接種液として二段階で加えられた
。接種液は、２７℃、２０Ｏｒｐｍの回転速度で攪拌し
、１　：　ＩＶ／Ｖ分（量／空気）の割合でエアレーシ
ョンして培養した。種培養が完了した後、接種液は第三
の連続保温のために、５トン発酵タンクに加えた。発酵
液と接種液は発酵タンク内で約６５時間の間反応させた
。製造された培養汁は１１０℃、所定の圧力で１時間加
熱滅菌し、取り入れ、最終製品にするために更に１２０
℃、周知の圧力で、再び２時間加熱滅菌した。これが我
々の製品である。

【図面の簡単な説明】

第１図は８５１　　ＹＺＨ栄養液の効果によるヒト胃腺
癌細胞、ＭＧＣ８０−３細胞の試験管内での増殖図であ
り、％は溶液の濃度である。 第２図は８５１　　ＹＺＨ栄養液の効果によるＭＧＣ８
０−３細胞の試験管内での細胞分裂指数の図である。 第３図はＭＧＣ８０−３細胞の位相差顕微鏡下での像で
ある。 第４図は１５％８５１　　ＹＺＨ液で処理し、ヘマトキ
シリン−エオシン（Ｈ，Ｅ、）染色したＭＧＣ８０−３
細胞の位相差顕微鏡下での像である。 第５図はＭＧＣ８０−３細胞の走査型電子顕微鏡写真で
ある。 第６図は２０％８５１　　ＹＺＨ栄養液で処理したＭＧ
Ｃ８０−３細胞の走査型電子顕微鏡写真である。 第７図はＭＧＣ８０−３細胞の透過型電子顕微鏡写真で
ある。 ここでは Ｎ：核、　　Ｎｕ：核小体、　Ｇ：ゴルジ装置Ｍ：ミト
コンドリャ　ＥＲ：小胞体 第８図は２ｏ％　ＹＺＨ栄養液で処理したＭＧＣ８０−
３細胞の透過型電子顕微鏡写真である。 代 理 人 宇 佐 見 忠 男 時間（日数） 図面の浄書 第５図 図面カ浄書 第６ 図 図面の浄書 第７ 図面の（％杏 第８ 図 手続補正書 （方式） ％式％ 事件の表示 平成２年特　許　＠第１８９２５２号 発明の名称 プソイドモナスの変異株　ＹＺＨ株とこの株の応用によ
り８５１　　ＹＺＨ栄養液の製造方法３、補正をする者 事件との関係　　　特許出願人 住　所　　中華人民共和国　フウチイエン　ブロヒンス
フウチオつ、ホウトウオン　ロート　１０１氏　名　　
ヤン　チェンホア 国　籍　　中華人民共和国 ４代理人 住　所　　〒４６７　名古屋市瑞穂区弥富町月見ケ丘平
成２年１０月１５日（同年同月３０日発送）補正の対像 代理権を証明する書面、明細書の「図面の簡単な説明」
７、補正の内容 １、　ｒ図面の簡単な説明」を次の如く補正する。 「第１図は８５１　　ＹＺＨ栄養液の効果によるヒト胃
腺癌細胞、ＭＧＣ８０−３細胞の試験管内での増殖図で
あり、％は溶液の濃度である。 第２図は８５１　　ＹＺＨ栄養液の効果によるＭＧＣ８
０−３細胞の試験管内での細胞分裂指数の図である。 第３図は生物の形態にかかる位相差顕微鏡写真であり、
ＭＧＣ８０−３細胞の位相差顕微鏡下での像である。 第４図は生物の形態にかかる位相差顕微鏡写真であり、
１５％８５１　　ＹＺＨ液で処理し、ヘマトキシリン−
エオシン（Ｈ，Ｅ、）染色したＭＧＣ８０−３細胞の位
相差顕微鏡下での像である。 第５図は生物の形態にかかる走査型電子顕微鏡写真であ
り、ＭＧＣ８０−３細胞の走査型電子顕微鏡写真である
。 第６図は生物の形態にかかる走査型電子Ｉｌｌｌｌ耳鏡
写真り、 ２０％８ ＹＺＨ栄養液で 処理したＭＧＣ８ ０−３細胞の走査型電子釦微 鏡写真である。 子顕微鏡写真である。 ここては ：核、 ｕ ：核小体、 Ｇ　： ゴルジ複合 体　Ｍ：ミトコンドリャ ＥＲ・小胞体 たＭＧＣ８ ０−３細胞の透過型電子顕微鏡写真 である。 」 ２、図面第３〜８図を別紙の通り補正する。 以 上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ＹＺＨと命名され、植物蛋白質を単細胞蛋白質に変
   換する能力があるプソイドモナス変異株であって、本株
   は淡黄色平坦桿状であり、少なくとも一個の鞭毛を有し
   、化学合成的に従属栄養体であり、絶対好気性であり、
   水溶性色素を生産せず、そして細胞内ポリヒドロキシブ
   チレートを形成し、そしてアルギニンヒドラーゼ生産能
   を有せず、硝酸塩還元能を有し、そしてゼラチン液化能
   を有し、そして脱窒作用を有し、約１０〜４０℃の生育
   温度であり、好ましいｐＨは４．５〜９．０であり、本
   株のＤＮＡ中のグアニンとシトシンの含量は６５．４〜
   ６７．７モル％であり、そして本株のＤＮＡはＹ断片を
   含んでいることを特徴とするプソイドモナスの変異株 ２、上記株のＤＮＡ中のＹ断片は特殊なＹ断片ＤＮＡプ
   ローブによって検知される特許請求の範囲１に記載のプ
   ソイドモナスの変異株 ３、上記プソイドモナスの変異株はＡ．Ｔ．Ｃ．Ｃ．１
   ２３０１パークローンドライブ，ロックビル，メリーラ
   ンド，２０８５２に寄託されＡ．Ｔ．Ｃ．Ｃ．寄託番号
   ５３９８０が割当てられたサンプルの同定された特性を
   有する特許請求の範囲１に記載のプソイドモナスの変異
   株 ４、特許請求の範囲１に記載のプソイドモナスの変異株
   ＹＺＨを溶液生産株として用い、発酵過程において大豆
   のような植物蛋白質を用いて８５１ＹＺＨ栄養液を製造
   することを特徴とする単細胞蛋白質栄養液の製造方法 ５、容器中の植物蛋白質培地を所定の発酵温度で所定の
   発酵時間で、エアレイションによって、上記植物蛋白質
   培地を上記栄養液に変換する能力を有するプソイドモナ
   スの種付け物または培養された種付け物によって発酵さ
   せ、得られた栄養液を加圧滅菌し、 （ａ）加圧滅菌された栄養液を包装するか、 または（ｂ）上記栄養液を濃縮してから得られた濃縮物
   を包装するか、または （ｃ）上記栄養液を遠心分離しかつろ過して沈澱物から
   上澄液を分離し、そして食用物質を添加するか添加する
   ことなくそのまゝ上記上澄液を包装するか、または （ｄ）ろ過された上澄液から樹脂カラム抽出器によって
   抽出して濃縮製品を製造することを特徴とする植物蛋白
   質を含む培地から単細胞蛋白質栄養液の製造方法 ６、上記プソイドモナスは淡黄色平坦桿状であり、少な
   くとも一個の鞭毛を有し、化学合成的に従属栄養体であ
   り、絶対好気性であり、水溶性色素を生産せず、そして
   細胞内ポリヒドロキシブチレートを形成し、そしてアル
   ギニンヒドラーゼ生産能を有せず、硝酸塩還元能を有し
   、そしてゼラチン液化能を有し、そして脱窒作用を有し
   、約１０〜４０℃の生育温度であり、好ましいｐＨは４
   ．５〜９．０であり、本株のＤＮＡ中のグアニンとシト
   シンの含量は６５．４〜６７．７モル％であり、そして
   本株のＤＮＡはＹ断片を含んでいるとして特徴づけられ
   ているプソイドモナスのＹＺＨ変異株である特許請求の
   範囲４および５に記載の単細胞蛋白質栄養液の製造方法 ７、人間または動物にそのまゝ、または人間や動物の食
   品または医薬品に添加剤または置換物として用いられる
   に適した８５１ＹＺＨ栄養液またはＹＺＨプソイドモナ
   スの変異株を含有する製品 ８、上記植物蛋白質培地は 大豆培地 大豆５〜１０％ 或は大豆乳あるいは圧縮豆５〜１５％ （大豆重量に対して） イーストエキス０．０２〜０．５％ 或はイースト粉０．０２〜０．５％ 或はペプトン、牛エキス０．０２〜０．３％ＣａＣＯ＿
   ３０．０５〜０．２５％ ＫＨ＿２ＰＯ＿４０．０２〜０．１％ ＭｇＳＯ＿４０．０１〜０．０５％ ＮａＣｌ０．０１〜０．０４％ Ｎａ＿２ＭｏＯ＿４５．０〜３０ｐｐｍ Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３２．５〜１５ｐｐｍ ＺｎＳＯ＿４２．５　〜４０ｐｐｍ ＣｏＣｌ＿２５．０〜２０ｐｐｍ からなる水溶性培地である特許請求の範囲６に記載の単
   細胞蛋白質栄養液の製造方法 ９、単細胞蛋白質の水溶液と痕跡の元素からなり、ＹＺ
   Ｈと命名されたプソイドモナスの変異株とともに窒素源
   をもつ植物蛋白質培地で発酵により生成されることを特
   徴とする栄養液 １０、哺乳動物に対して耐老化効果を有する特許請求の
   範囲９に記載の栄養液 １１、哺乳動物の造血機能を刺激し、そして改良効果を
   有する特許請求の範囲９に記載の栄養液１２、哺乳動物
   と人に対して胃病治療効果を有する特許請求の範囲９に
   記載の栄養液 １３、哺乳動物と人に対して癌細胞の成長を抑制し、そ
   して癌細胞を正常細胞に変換する効果を有する特許請求
   の範囲９に記載の栄養液 １４、哺乳動物の胃粘膜急性出血に対して治療効果を有
   する特許請求の範囲９に記載の栄養液