JPH04157363A - アンモニア又はアンモニア生成物質定量用一体型多層分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、アナライトとして液体試料中のアンモニアま
たはアンモニアを生成しうる物質を分析するための一体
型多層分析要素に関する物である。

さらに詳しくは本発明は、血液、尿、リンパ液等の生物
体液中に含まれるアンモニアまたはクレアチニン、尿素
等のアンモニア生成物質を定量分析するのに適した一体
型多層分析要素に関するものである。

〔従来の技術〕

成分体液中に含有されているアンモニアまたはタレアチ
ニン、尿素等の定量分析は、腎臓病等の疾患の診断、そ
の疾患の経過コントロールのための検査および腎機能の
検査のために極めて重要である。

アンモニア生成物質の分析方法の例としては、アンモニ
ア生成物質からアンモニアを生成させる操作および生成
されたアンモニアを定量する操作からなる分析方法を代
表例として挙げることができる。このアンモニアへの変
換を利用する分析方法は、従来より湿式法または溶液法
と呼ばれる方法で広く一般に実施されてきた。さらに近
年では一体型多層分析要素に代表される乾式分析器具を
用いる乾式分析法においてもアンモニアへの変換を利用
する分析方法が実施され、あるいは提案されている。

上記のアンモニア生成物質からアンモニアを生成させる
操作としては、酵素の作用によってアンモニアを生成さ
せる方法が一般的に用いられている。たとえば生物体液
中のタレアチニンの定量分析においては、タレアチニン
デイミナーゼ（ＥＣ３、５，４，２１）を用いて体液中
のタレアチニンを特異的にアンモニアとＮ−メチルヒダ
ントインに加水分解する方法が利用されている。また、
生物体液中の尿素窒素（以下ＢＵＮとも記す）の定量分
析においては、ウレアーゼを触媒として用い、尿素をア
ンモニアと二酸化炭素に加水分解する方法が利用されて
いる。これらに方法では、アナライトであるアンモニア
生成物質が酵素の基質であるので、アンモニア生成基質
といわれることがある。これらのアンモニア生成物質の
分析方法は、’Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ」、　４ｆｉ、２４６（１９７４）、ｒｃｌ。

１ｎｉｃａ　Ｃ１１ｎｉｃａ　Ａｃｔａ」、　ｌＪｌ、
　４０９（１９６７）、「臨床化学分析■含窒素成分」
第２版（東京、東京化学同人）１３〜１４頁、６７〜８
７頁（１９７９年発行）、「臨床検査」第５巻（第６号
）３８７〜３９１頁（１９１６年）等の文献に記載され
ている。

アンモニアまたはアンモニア生成基質の分析に用いるこ
とができる一体型分析要素としては特公昭５Ｂ−１９０
６２号公報記載の一体型多層分析要素、特開昭５８−７
７６６０号および同５８−７７６６１号の各公報記載の
アンモニアまたはアンモニア生成基質分析用一体型多層
分析要素などを挙げることができる。

これらの分析要素は、基本的な構成として、光透過性・
液体不透過性支持体の上に、アンモニアとの接触により
検知可能な変化を生じる指示薬を含むアンモニア指示薬
層、液体を透過させることなくガス状アンモニアを透過
させるバリアー層、アンモニア生成基質と反応してアン
モニアを生成させる試薬を含有する反応層および多孔性
展開層がこの順に積層されてなるものである。特開昭６
１−２７８７６１号公報に記載の一体型多層分析要素は
、分析要素自体に、体液中に含まれているアンモニア（
内因性アンモニア）の捕捉機能を有していて、内因性ア
ンモニアの影響を排除したアンモニア生成物質分析用一
体型多層分析要素が記載されている。この多層分析要素
は、アンモニア生成反応によりアンモニアを発生する層
の上方に接触してアンモニア捕捉反応を行う内因性アン
モニア捕捉層を設けたものである。特開昭６３−２５９
４６７号公報に記載の一体型多層分析要素においては、
内因性アンモニア捕捉層とアンモニア生成反応試薬層と
の間にアンモニア捕捉およびアンモニア生成反応のいず
れをも実質的に行わずかつ実質的にアンモニアの拡散防
止能を有する層を設けている。

〔発明が解決しようとする課題〕

指示薬層のバインダーとして、従来はポリ酢酸ビニルと
アクリル酸エステルの共重合体ラテックスを用いていた
が、これには以下の欠点があった。

まず、感度的に充分でなくその結果、精密度（ＣＶ−変
動係数）が不良であった。また、塗布液がラテックスの
ため沈降が起こり、液安定性が悪かった。さらに、ｐＨ
変化を起こすので、ｐｆｌ指示薬を用いるこの系では、
不適であった。

本発明の目的は発色光学濃度がより高く、測定精度のよ
り高いアンモニアまたはアンモニア生成物質分析用一体
型多層分析要素を提供する。ことである。

本発明の他の目的はバックグラウンドの発色光学濃度が
低くそれによって測定精度のさらに向上したアンモニア
またはアンモニア生成基質分析用一体型多層分析要素を
提供することである。

〔課題を解決するための手段〕

本発明は前記目的を達成するべくなされたものであり、
透明支持体上に（ｉ）ガス状アンモニアにより検知可能
な変化を生じる指示薬を含む指示薬層（１１）液体遮断
層（ｉｉｉ）アルカリ性緩衝剤を含有し必要により基質
と反応してアンモニアを生成することの出来る試薬を有
する試薬層、及び（ｉｖ　）展開層がこの順に積層され
た分析要素において、指示薬層がポリビニルアルキルエ
ーテルを含むことを特徴とする液体試料中のアンモニア
またはアンモニア生成物質分析用一体型多層分析要素に
関するものである。

本発明はまた、透明支持体上に（ｉ）ガス状アンモニア
により検知可能な変化を生じる指示薬を含む指示薬層（
ｉｉ　）液体遮断７１（ｉｉ）アルカリ性緩衝剤を含有
し必要により基質と反応してアンモニアを生成すること
の出来る試薬を有する試薬層、及び（ｉｖ）展開層がこ
の順に積層された分析要素におぃて、透明支持体の指示
薬層の面に、アンモニアまたはアンモニウムイオンを実
質的に含まないポリビニルアルキルエーテル、ヒドロキ
シアルキルセルロース、アルキルセルロース、ポリ塩化
ビニリデン、ポリスチレン、ポリアルキルアクリレート
、ポリビニルアルコールまたはポリビニルピロリドンが
下塗りされていることを特徴とする液体試料中のアンモ
ニアまたはアンモニア生成物質分析用一体型多層分析要
素を提供するものである。

本発明の一体型多層分析要素を構成する光透過性・液体
不透過性支持体（以下、支持体と記す）の具体例として
は、ポリエチレンテレフタレート、ビスフェノールＡの
ポリカルボネート、ポリスチレン、セルロースエステル
（例・セルロースジアセテート、セルローストリアセテ
ート、セルロースアセテートプロピオネート等）等のポ
リマーからなる厚さ約５０μｍから約１閣の範囲内、好
ましくは約８０ｎから約３０Ｑｓ＋ｓの範囲内の透明支
持体を挙げることができる。

支持体の表面には特定のポリマーを含む下塗層を設けて
、支持体の上に設けられる指示薬と支持体との接着を強
固なものにすることができる。

本発明の分析要素においては、下塗層としてゼラチンの
代わりにアンモニアまたはアンモニウムイオンを実質的
に含まないポリビニルアルキルエーテル、ヒドロキシア
ルキルセルロース、アルキルセルロース、ポリスチレン
、ポリアルキルメタクリレート、ポリ塩化ビニリデン、
ポリビニルアルコールまたはポリビニルピロリドンを用
いるところに特徴がある。ポリビニルアルキルエーテル
はポリビニルメチルエーテル、ポリビニルエチルエーテ
ル、ポリビニルイソブチ、ルエーエル等であり、ヒドロ
キシアルキルセルロースはヒトしキシメチルセルロース
、ヒドロキシエチルセルロース等であり、アルキルセル
ロースはメチルセルロース、エチルセルロース、プロピ
ルセルロース等である。これらの中で特にポリビニルア
ルキルエーテルが好ましい。

下塗層は上記で列挙したポリマーと必要により添加され
るアンカー剤からなる。アンカー剤としては、支持体を
膨潤または溶解させるような有機溶剤を用いることがで
きる。支持体がポリエチレンテレフタレートからなる場
合、用いられるアンカー剤の例として、フェノール、フ
ェノール誘導体（Ｏ−クロロフェノール、Ｐ−クロロフ
ェノール、クレーゾール等）、２−ニトロプロパツール
、アセトニルアセトン、アセトフェノンがある。下塗層
は、下塗層に用いられるポリマーとアンカー剤をメタノ
ール、エタノール、メチルセロソルブ（β−ヒドロキシ
エチルメチルエーテル）、アセトン等の溶剤に、下塗剤
ポリマー濃度的０．１％〜約２．０％、好ましくは約０
．１〜約１．０％になるようにして熔解し、公知の方法
により塗布し乾燥して設けることができる。下塗層のポ
リマーの被覆量は約５■／ポ〜約５００Ｍ／ポ、好まし
くは約１０■／イ〜約３００■／ポの範囲である。下塗
剤とアンカー剤の量比は、重量比で約１：ｌＯ〜約１：
ｌＯＯの範囲で用いられる。

下塗層に先立って、支持体の表面をグロー放電、紫外線
照射のような物理的活性化処理あるいは化学的な活性化
処理を施してもよい。

支持体の上には、（場合によっては下塗層を介して）本
発明の一体型多層分析要素を構成するガス状アンモニア
により検知可能な変化を住しる指示薬を含むアンモニア
指示薬層（以下指示薬層と記す）が設けられる。指示薬
層には、少なくとも１種の呈色性アンモニア指示薬が含
まれる。呈色性アンモニア指示薬とは、ガス状アンモニ
アにより検知可能な変化（たとえば、吸収波長の変化に
よる発色または変色）を生じるような化合物である。

本発明の一体型多層分析要素に使用することができる呈
色性アンモニア指示薬としては、たとえばロイコシアニ
ン染料、ニトロ置換ロイコ染料およびロイコフタレイン
染料のようなロイコ染料（米国再発行特許第３０２６７
号明細書または特公昭５Ｂ−１９０６２号公報記ｌりニ
ブロムフェノールブルー、ブロムクレゾールグリーン、
ブロムチモールブルー、キノリンブルーおよびロゾール
酸のようなｐＦＩ指示薬（共面出版■、化学大辞典、第
１０巻６３〜６５頁参照）ニトリアリールメタン系染料
前駆体二　ロイコヘンジリデン色素（特開昭５５−３７
９号および特開昭５６−１４５２７３号各公報に記載）
ニジアゾニウム塩とアゾ染料カプラー：塩基漂白可能染
料等を挙げることができる。

指示薬層は、通常これらの呈色性アンモニア指示薬の少
なくとも１種を、有機溶剤熔解性バインダーポリマーあ
るいは水溶性バインダーポリマー−と混合して塗布液を
調製し、これを透明支持体上に塗布・乾燥することによ
り形成する。上記バインダーポリマーとしては、従来は
セルロースモノアセテート、セルロースジアセテート、
セルローストリアセテート、セルロースアセテートブチ
レート、セルロースアセテートプロピオネート等のセル
ロースエステル類−メチルセルロース、エチルセルロー
ス、プロピルセルロース等のアルキルセルロース類：ポ
リメチルメタクリレート、ポリアクリレート、ポリスチ
レン、ポリアクリロニトリル、ポリ酢酸ビニル、ポリビ
ニルブチラール、クロル化ポリ酢酸ビニル、ポリアクリ
ルアミド、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコー
ル等の合成ビニル重合体またはこれらの共重合体等が用
いられていた。本発明の分析要素においてはこのバイン
ダーポリマーとしてポリビニルアルキルエーテルを用い
るところに特徴がある。ポリビニルアルキルエーテルの
例としてはポリビニルメチルエーテル、ポリビニルエチ
ルエーテル、ポリビニルイソブチルエーテル等を挙げる
ことができる。

バインダーの重量に対する呈色性アンモニア指示薬の配
合量は約１〜２０重量％の範囲内であることが好ましい
、また製造中あるいは保存中に、呈色性アンモニア指示
薬が発色または変色するのを防止するために、エタンス
ルホン酸、アスパラギン酸、アゼライン酸、グルタル酸
、コハク酸、グルタコン酸、酒石酸、ピメリン酸、マロ
ン酸、リンゴ酸、３．３−ジメチルグルタル酸、クエン
酸、Ｐ−）ルエンスルホン酸、過塩素酸、塩酸等の有機
酸あるいは無機酸、または水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウム、炭酸二ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等のア
ルカリ等を指示薬層中に加えることで、指示薬層のｐＨ
値が呈色性アンモニア指示薬の呈色域ＯｐＨ値の範囲内
となるように調製することができる。

指示薬層を形成する塗布液は、これらの呈色性アンモニ
ア指示薬、バインダーポリマーおよび必要に応じて加え
られる上記ｐＨｌｉ製用の酸またはアルカリ等の試Ｎ類
を、アセトン、２−メトキシエタノール、メチルエチル
ケトン、ジクロロメタン、ジクロロエタン、メタノール
、エタノール等の有機溶剤あるいは水に、固形分濃度が
約１〜３０重量％、好ましくは約３〜２０重量％となる
ように加えて調製することができる。この塗布液を、乾
燥後の層厚が通常は約１〜３０ｎの範囲内、好ましくは
約２〜２０Ｑの範囲内となるように、前記支持体上に塗
布、乾燥することにより指示薬層を形成することができ
る。

指示薬層の上に、ガス状アンモニアを通過させ得る液体
遮断層（以下バリアー層とも記す）を設ける。このバリ
アー層は、多層分析要素の製造時（具体的には、後述す
る反応層をバリアー層の上に塗布により設ける時）およ
び／または分析繰作時において、塗布液、試料液等の液
体およびこれらの液体に溶解含有されている妨害成分（
たとえば、アルカリ性成分等）を実質的に通過または通
過させず、かつガス状アンモニアが通過できる物質から
なる層であることを意味する。

バリアー層は構造上、２種類の態様に大別される。１つ
の態様は、連続した空隙を有する多孔性材料からなり、
実質的に空気層がバリアー層として作用する空気バリア
ー層（以下、空気バリアー層と記す）であり、他の１つ
の態様は、疎水性（または親水性の乏しい）ポリマーか
らなる均質な非孔貿薄層であるポリマーバリアー層（以
下、ポリマーバリアー層と記す）である。

空気バリアー層を構成する連続した空隙を有する多孔性
材料の例としては、メンプランフィルター：繊維状材料
が相互にからみあわされてなるか、あるいは接着又は結
合されてなる多孔性材料（例・紙、濾紙、フェルト、不
織布等）：および織物生地、編物生地または細網状物か
らなる多孔性材料を挙げることができる。

空気バリアー層として用いることができるメンブランフ
ィルタ−の具体例としては、アセ、テート（ジアセテー
トまたはトリアセテート等）、セルロースニトレート、
再生セルロース、ポリアミド（ナイロン類）、ビスフェ
ノールＡのポリカルボネート、ポリエチレン、ポリプロ
ピレン、ポリテトラフルオロエチレン等の弗素含有ポリ
マー等を用いて製造されているメンブランフィルタ−を
挙げることができる。本発明の一体型多層分析要素に用
いる場合、上記メンブランフィルタ−の厚さは約３０〜
３００μの範囲内、好ましくは約７０〜２００ｎ範囲内
である。メンブランフィルタ−の気孔率（空隙率）は、
約２５〜９０％、好ましくは約６０〜９０％である。ま
たメンブランフィルタ−の平均孔径約０．０１〜２（ｂ
ｎ、好ましくは約０．１〜ｉｏｐｍの範囲内である。上
記の特性を有するメンブランフィルタ−は、たとえば米
国特許第１４２１３４１号明細書、特公昭５３−２１６
７７号公報にそれぞれ記載の方法により製造することが
できる。またメンブランフィルタ−は、既に多くのメー
カーから様々な種類のものが市販されており、これらの
市販品の中から必要に応じて選択して用いることもでき
る。

空気バリアー層として用いることができる繊維状材料が
相互にからみあわされてなるか、接着または結合されて
なる多孔性材料としては、特開昭５８−７７６６０号に
記載の繊維状材料またはその集合体を物理的にからみあ
わせるか、物理的および／または化学的に接着または結
合させた構成からなる連続した空隙を有する多孔性材料
がある。

上記多孔性材料を構成する繊維状材料の具体例としては
、セルロース繊維、綿繊維、麻繊維、絹繊維、羊毛繊維
等の天然繊維性材料、レーヨン繊維、ビニロン繊維、セ
ルロースアセテート繊維等の再生または半合成材料から
なる繊維、グラスウー、ル、ポリエチレン繊維、ポリエ
チレンテレフタレート繊維、ポリアクリロニトリル繊維
状物質およびポリ塩化ビニル繊維等の合成材料からなる
繊維状材料、またこれらを混合してなる繊維状材料を挙
げることができる。また、上記繊維状材料を用いて製造
される多孔性材料の例としては、繊維状材料を抄造する
ことにより製造した半紙、美濃紙や障子紙の和紙、濾紙
、硫酸紙、擬硫酸紙等の紙および繊維状材料から製造し
たフェルトおよび不織布等を挙げることができる。

繊維状材料が相互にからみあわされてなるか、接着また
は結合されてなる多孔性材料の空隙率は、通常的２０〜
９０％の範囲内好ましくは約５０〜８５％の範囲内であ
る。上記多孔性材料の平均空隙サイズは通常的０．０１
〜２Ｏｎの範囲内、好ましくは約０．１〜ｌＯ−の範囲
内である。また上記多孔性材料の厚さは、通常的５０〜
５００　ｎの範囲内、好ましくは約７０〜３００−の範
囲内である。

空気バリアー層として用いることができる織物の例とし
ては、天然繊維からなる織物（例・綿ブロード等）半合
成繊維からなる織物（例・ビスコースレーヨン、舞アン
モニアレーヨン、フォルチサン等の再生セルロース繊維
からなるブロード織物等）合成繊維からなる織物（例・
ポリアミド（ナイロン）、ポリエチレンテレフタレート
、ボリアクリルニトリル等の繊維からなるブロード織物
等）、天然繊維と半合成繊維または合成繊維との混紡織
物（例・組織物とポリエチレンテレフタレート繊維の混
紡糸等からなるブロード織物等）を挙げることができる
。空気バリアー層として用いる頃ができる編物の例とし
ては、前記織物の製造に用いることが出来る繊維と同じ
繊維または繊維の撚り糸からなる編物を挙げることがで
きる。

また、空気バリアー層として用いることができる細網状
物の例としては、合成繊維または糸（例・ポリアミド（
ナイロン）、ポリエチレンテレフタレート、ポリアクリ
ロニトリル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリビニ
ルクロリド等）からなる細ネットまたは細メツシユを挙
げることができる０以上の織物、編物、細網状物の厚さ
は、通常的３０〜３００ｎの範囲内である。また、織物
、編物、細網状物の空隙率は通常的２０〜６０％、好ま
しくは約４０〜６０％である。

以上の連続した空隙を有する多孔性材料からなる空気バ
リアー層は、その内部空隙において、液体、特にアルカ
リ性材料等の妨害物を溶解含有する液体が、毛細管現象
によ、てバリヤー層を通過する危険性がある。したがっ
て、上記毛細管現象による毛細管流を生じない程度に、
空気バリアー層は疎水性または撥水性を有していること
が好ましい。また、連続した空隙を有する多孔性材料の
疎水性また撥水性が弱い場合には、疎水化処理または１
發水化処理を施すことが好ましい、上記多孔性材料の疎
水化処理または撥水化処理は、シリコーン樹脂、シリコ
ーンオイル、弗素樹脂、弗素オイルに代表される一般に
疎水化処理剤または撥水化処理剤として公知の材料をそ
のまま、あるいは必要により溶剤（たとえば、ヘキサン
、シクロヘキサン、石油エーテル等）で固形分含有量が
約０．１〜５重量％の範囲内になるように稀釈し、これ
を含浸、塗布またはスプレー等の方法により、連続した
空隙を有する多孔性材料の少なく、とも−表面およびそ
の近傍に適用することにより実施することができる。

空気バリアー層は、前述した指示薬層のマトリックスを
構成している有機多剤性バインダーポリマーあるいは水
溶性バインダーポリマーに、連続した空隙を有する多孔
性材料を接着することで形成される。上記多孔性材料の
接着は、指示薬層が湿潤状態である時に、多孔性材料を
貼り付けて乾燥させることで接着する方法を用いること
ができる。指示薬層が湿潤状態であるとは、バインダー
を溶解している溶媒が残っているか、あるいは乾燥した
膜が可溶性溶媒（有機溶媒または水）で再び濡らされて
、指示薬層のマトリックスを構成しているバインダーが
湿潤状態、分散状態または溶液状態にあることを意味す
る。また指示薬層のバインダーが、たとえばポリ酢酸ビ
ニルのように粘着性を有する場合には、指示薬層を特に
湿潤状態とすることなく、連続した空隙を有する多孔性
材料を、そのまま指示薬層に圧着することで接着するこ
とができる。

疎水性（または親水性の乏しい）ポリマーからなる均質
な非孔質薄層であるポリマーバリアー層は、ポリマーと
して疎水性または親水性の乏しいポリマーを用いること
が好ましい。疎水性または親水性の乏しいポリマーの具
体例としては、セルロース・アセテート、プロピオネー
ト、セルローど′ ス・アセテート・ブチレート、ビスフェノールＡのポリ
カルボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレ
ン・酢酸ビニルコポリマー、ポリウレタン、ポリスチレ
ン、ポリ塩化ビニル、塩化ビニル・酢酸ビニルコポリマ
ー、ポリアミド（ナイロン）、ポリメチルメタクリレー
トおよびポリビニルブチラール等を挙げることができる
。これらのポリマーは単独でも、これらのポリマー相互
の混合物としても、用いることができる。

ポリマーバリアー層の厚さは通常的０．１〜６μの範囲
内にあり、特に約０．２〜３Ｑの範囲内にあることが好
ましい、ポリマーバリアー層は特公昭５Ｂ−１９０６２
号公報及び特開昭６０−２１４５２号公報にそれぞれ記
載の方法によりポリマーの有機溶媒溶液を塗布し乾燥す
ることにより設けることができる。

バリアー層としては分析操作時間の短さ、高域度、およ
び指示薬層の発色または変色の一様性の良好さの観点か
らポリエチレン、ポリプロピレン等のビニールポリマー
、ポリテトラフルオロエチレン等の弗素含有ビニールポ
リマー等からなるメンブランフィルタ−または撥水処理
したメンブランフィルタ−からなる空気バリアー層が好
ましい。

バリアー層の上に、直接、または後述する粘着性中間層
を介して試薬層を設ける。試薬層は分析要素がアンモニ
ア生成物質定量用の場合にはアンモニア生成物質と反応
してアンモニアを生成させる試薬（一般には酵素または
酵素を含有する試薬）、反応により生成したアンモニア
をガス状アンモニアとして効率良く遊離させるためのア
ルカリ性緩衝剤およびフィルム形成能を有する親水性ポ
リマーバインダーを通常含有する層である０分析要素が
アンモニア定量用の場合には上記のアンモニアを生成さ
せる試薬が不要である。

アンモニア生成物質と反応してアンモニアを生成さセる
試薬は酵素または酵素を含有する試薬であることが好ま
しく、アナライトであるアンモニア生成物質の種類に応
じて、分析に適した酵素を選択して用いることができる
。上記試薬として酵素を用いる場合には、その酵素の特
異性からアンモニア生成物質と試薬の組み合わせが決定
される。

アンモニア生成物質／試薬の組合せの具体例としては、
尿素／ウレアーゼ、タレアチニン／クレアチニンデイミ
ナーゼ、アミノｆａ／アミノ酸デヒドロゲナーゼ、アミ
ノ酸／アミノ酸オキシダーゼ、アミノＭ／アンモニアリ
アーゼ、アミン／アミンオキシダーゼ、ジアミン／アミ
ンオキシダーゼ、グルコースおよびホスホアミダート／
ホスホアミダートヘキソースホスホトランスフェラーゼ
、ＡＤＰ／カルバミン酸塩キナーゼおよび燐酸カルバモ
、ル、酸アミド／アミドヒドロラーゼ、ヌクレオ塩基／
ヌクレオ塩基デアミナーゼ、ヌクレオシド／ヌクレオシ
ドデアミナーゼ、ヌクレオチド／ヌクレオチドデアミナ
ーゼ、グアニン／グアナーゼ等を挙げることができる。

試薬層に用いることができるアルカリ性緩衝剤としては
、ｐｌ＋が７．０〜１２．０．好ましくは７．５〜１１
．５の範囲の緩衝剤を用いることができる。緩衝剤のＭ
体側としては、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ
）、）リス（ヒドロキシメチル）アミノメタ７（Ｔｒｉ
ｓ）、燐酸塩緩Ｉｉ剤、Ｎ、　Ｎ−ビス（２−ヒドロキ
シエチル）、グリシン（Ｂｉｃ　１ｎｅ）、Ｎ−（）リ
ス（ヒドロキシメチル）メチルゴー３−アミノプロパン
スルホン酸（ＴａＰＳ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピ
ペラジン−Ｎ’−２−ヒドロキシプロパン−３−スルホ
ン酸（Ｈｅｐｐｓｏ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペ
ラジン−Ｎ”−３−プロパンスルホン酸（Ｅｐｐｓ）、
Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエ
タンスルホン酸、３−（Ｎ−ビス（ヒドロキシエチル）
アミノコ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（Ｄｉｐ
ｓｏ）、Ｎ−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ゛−エタ
ンスルホン酸（Ｈｅ　ｐ　ｅ　ｓ　）　、ピペラジン−
Ｎ、Ｎ’　−ビス（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸
）２水和物ｊＰｏｐｓｏ）、３−　（Ｎ−トリス（ヒド
ロキシメチル）メチルアミノコ−２−ヒドロキシプロパ
ンスルホン酸（Ｔａｐｓｏ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシ
メチル）メチルアミノエタンスルホン酸（Ｔｅｓ）、Ｎ
−（２−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシメチル
）エチルコグリシン（Ｔｒｉｃｉｎｅ）等またはこれら
のリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ
金属塩、またはアルカリ土類金属塩、四硼酸のアルカリ
金属塩（四硼酸ナトリウム等）、炭酸ニナトリウムー炭
酸水素ナトリウム等を挙げることができる。上記緩衝剤
の詳細は、ｒＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ）＋Ｊ　５Ｓ４６
７〜４７７頁（１９６６年）、ｒＡｎａｌｙｔｉｃａｌ
　Ｂｉｏｃｈｅｓ＋ｅｓｔｒｙ　」１０４巻〜３００〜
３１０頁（１９８０年）、日本化学金線「化学便覧基礎
編」（東京、丸善＠１９６６年発行＞　１３１２−１３
２０頁等に記載されている。

試薬層に用いることができるフィルム形成能を有する親
水性ポリマーバインダーとしては、アンモニアを実質的
に含有せず、ｐＦｌＦｅ１２以上（ｐＨ値≧９．０）に
おいてアンモニアを実質的に発注せず、かつｐＨ約９．
０以上においてバインダー性能が実質的に変化しないバ
インダーを用いることが好ましい。

ｐＨ約９．０とは、ＮＨ，＋をＮ　Ｈｓに充分変換しう
るｐＨ（ＮＨａ”＝ＮＨｓ　：　Ｐ　Ｋ　ａ　＝９．２
）を意味している。ｐＨ約９．０以上においてバインダ
ー性能が実質的に変化しないとは、長時間ｐＨ約９．０
以上の環境に宜かれてもバインダーを含む溶液の粘度が
ほとんど変化しない（例えばｐＨ＝１０．０．４５°Ｃ
１２４時間経過時において粘度変化が１％以内）ことで
ある。

前述の指示薬層に用いることができる水溶性バインダー
ポリマーのうち親水性を有するポリマーから適宜に選択
して用いることができる。その他、試薬層に用いること
ができる親水性ポリマーとしてはゼラチン、ゼラチン誘
導体、アガロース、プルラン、プルラン誘導体、ヒドロ
キシアルキルセルロース、アルキルセルロース、ポリビ
ニルアルコール、ポリアクリルアミド等を挙げることが
できる。これらのポリマーのうちでは、ヒドロキシアル
キルセルロースを用いるのが一般的には好ましい。

試薬層には、アンモニア生成物質と反応してアンモニア
を生成させる試薬、アルカリ性緩衝剤およびフィルム形
成能を有する親水性ポリマーバインダー以外にも必要に
応じて湿潤剤、バインダー架橋剤（硬化剤）、安定剤、
重金属イオントラップ剤（錯化剤）等を含有させること
ができる。重金属イオントラップ剤は、酵素活性を阻害
するような重金属イオンをマスキングするために使用さ
れるものである。重金属イオントラップ剤の具体例とし
ては、ＥＤＴＡ・２Ｎａ、ＥＤＴＡ−４Ｎａ、ニトリロ
トリ酢酸（ＮＴＡ）　、ジエチレンｉ・リアミンペンタ
酢酸のようなコンプレクサン（ＣＯ■ρ１ｅｘａｎｅ）
を挙げることができる。

試薬層は、アンモニア生成物質と反応してアンモニアを
生成させる試薬、アルカリ性緩衝剤おび必要に応じて加
えられる上記の試薬類をフィルム形成能を有するヒドロ
キシアルキルセルロース、ポリビニルアルコール、アガ
ロース等の親水性バインダーと混合して塗布液とし、バ
リアー層または粘着性中間層の上に塗布、乾燥すること
により形成することができる。

試薬層に含まれるアンモニア生成物質と反応してアンモ
ニアを生成させる試薬の量は、バインダーの重量に対し
て通常約０．１〜５０重量％、好ましくは約０．２〜２
０重量％の範囲である。アルカリ性緩衝剤の使用量は、
バインダーの重量に対して１．０〜５０重置％の範囲内
であるのが適当である。

また重金属イオントラップ剤を使用する場合、その使用
量はバインダーの重量に対して約０．５〜２０％の範囲
であるのが適当である。この反葛層の乾燥層厚は通常１
〜３０ｎの範囲内、好ましくは２〜２Ｏｎの範囲内であ
る。

バリアー層と試薬層の間に設けることができる粘着性中
間層は、湿度１０〜８５％、通常の環境温度（約０〜４
０°Ｃ）の大気中で粘着性を示すポリマー組成物からな
る層である。上記粘着性中間層は、特開昭６０−２１４
５２号明細書に記載の素材および方法に従って設けるこ
とができる。粘着性中間層を構成するポリマー組成物は
、ガラス転移点（Ｔｇ）が０℃以下の公知のポリマーの
単一物または２種以上の混合物またはそれに必要に応じ
て公知の粘着付与剤（タッキファイア−）や界面活性剤
等を添加した混合物である。粘着性中間層の厚さは、通
常約０．１〜６ｎの範囲内、好ましくは約１〜４ｎの範
囲内である。

粘着性中間層に用いることができるポリマーの具体例と
しては、酢酸ビニル・ブチルアクリレートコポリマー、
ポリ（エチルアクリレート）、スチレン・ブチルアクリ
レート・アクリル酸・Ｎ−（ヒドロキシメチル）アクリ
ルアミド四元コポリマー、ブチルアクリレート・　（ア
セト酢酸エチル）メタクリレート・２−アクリルアミド
−２−メチルプロパンスルホン酸三元コポリマー等を挙
げることができる。

バリアー層が疎水性（また親水性に乏しい）ポリマーの
均質な非孔質薄層からなるポリマーバリアー層の場合に
は、粘着性中間層を設けることが好ましい。

試薬層の上に、試薬層で生成したアンモニアがアンモニ
ア捕捉層へ拡散することを実質的に防止する機能を有し
、アンモニア捕捉およびアンモニア生成反応のいずれも
実質的に行わないアンモニア拡散防止層を設けることが
好ましい。

アンモニア拡散防止層はアンモニア捕捉およびアンモニ
ア生成反応が実質的に行わない層であれば、他の機能を
有する層で代用することもできる。

他の機能を有する層の例としては、硬化親水性ポリマー
層、光遮蔽層、接着層等がある。

アンモニア拡散防止層に用いることができるポリマーバ
インダーは好ましくは実質的に非孔性で水透過性の被膜
の形成機能があり、反硲層の上に直接または適宜な中間
層を介在させて、塗り重ねができるものであれば任意に
選択することができる。前記指示薬層あるいは反応層に
用いられるポリマーバインダーのうち、実質的に水がｉ
３遇し得るものであれば、いずれも使用可能である。こ
れらのうちで反応層に用いられるのと同様な親水性ポリ
マー、特に水により膨潤するか水可溶性の親水性ポリマ
ーが好ましい。好ましい親水性ポリマーの例としてヒド
ロキシアルキルセルロース、アガロース、ポリビニルア
ルコールが挙げられる。

アンモニア拡散防止層は、ポリマーバインダー単独でも
用いることができるが、アンモニア拡散防止の効率を高
めるために、適宜な緩衝剤によりｐＨ値約７．０〜１２
．０の間に設定するのが好ましい。

さらに、特に好ましいｐＨ値は約８，０〜１１．０の範
囲である。

アンモニア拡散防止層のｇｔＨ値を前記の範囲に維持す
るための緩衝能としては、上記のｐＨ範囲で緩衝能を有
するものであれば任意に選択することができる。アンモ
ニア拡散防止に用いることができる緩衝剤の具体的な例
としては、前述の反応層に用いるのと同様なアルカリ性
緩衝剤およびアルカリ剤がある。

アンモニア拡散防止層は、アンモニア拡散防止の観点か
らは厚いほうが好ましく、水の透過の観点からは薄いほ
うが好ましく、両機能を満たす範囲の層厚が選択される
。

アンモニア拡散防止層は、親水性ポリマーバインダーを
含む実質的に非孔性の層の場合、その厚さは約２〜５０
ｐｍの範囲、好ましくは約４〜３０４の範囲、そのポリ
マーバインダーの被覆量は多層要素１ｒｒｒ当り約１．
５〜４０ｇ、好ましくは約３．０〜２５ｇの範囲である
。

分析要素がアンモニア生成物質定量用の場合にはアンモ
ニア拡散防止層の上に直接または後述する光遮蔽層また
は他の中間層を介して、水性液体試料中にすでに存在す
るアンモニア（内因性アンモニア）に作用して内因性ア
ンモニアを実質的に前記反応層に到達しえない状態に変
化させる試薬を含む内因性アンモニア捕捉層（以下、単
に内因性アンモニア捕捉層と記す）を設けることが好ま
しい。内因性アンモニア捕捉層は、アナライト（被検成
分）であるタレアチニンまたは尿素窒素等のアンモニア
生成物質が反応層に到達してアンモニアが生成する反応
が生起するに先立って、併存する内因性アンモニアを捕
捉する機能を有する層である。

内因性アンモニアを捕捉するとは、内因性アンモニア捕
捉層に含有される試薬系が内因性アンモニアと結合して
内因性アンモニアを分析操作時間内に実質的に解離する
ことができない状態にするか、または内因性アンモニア
捕捉層に含有される試薬系が内因性アンモニアと化学反
応を起こして、内因性アンモニアを他の化学物質（具体
的にはアンモニウム塩、アンモニウムイオンあるいはガ
ス状アンモニアとは異なる化学物質）に変化させること
により内因性アンモニアを内因性アンモニア捕捉層内に
固定して、実質的に反応層に到達させないことを意味す
る。内因性アンモニア捕捉層としては、後者の内因性ア
ンモニアと反応して固定する機能を有する試薬系を含有
することが好ましい、内因性アンモニアと化学反応を起
こして、内因性アンモニアを異なる他の化学物質に変化
させる試薬性を本明細書では内因性アンモニア捕捉試薬
という。

内因性アンモニア捕捉試薬としては、アンモニアを基質
として他の物質に変化させる触媒能を有する酵素を含む
試薬組成物を用いるのが好ましい。

内因性アンモニア捕捉試薬の具体例としては、ＮＡＤＨ
にコチンアミド・アデニン・ジヌクレオチド還元型）、
および／またはＮＡＤＰＨにコチンアミド・アデニン・
ジヌクレオチド・ホスフェート還元型）、グルタミン酸
デヒドロゲナーゼ（ＥＣ１，４，１，３；以下（１，Ｉ
ＤＨと記す）およびα−ケトグルタル酸（またはそのニ
ナトリウム塩：以下、α−ＫＧと記す）を含む試薬組成
物を挙げることができる。また、アスパルターゼ（Ｅ　
Ｃ４，３，１，１）とフマル酸またはフマル酸塩を含む
試薬組成物を用いてもよい０本発明の一体型多層分析要
素においては、ＮＡＤＨ，ＧＩＤ）！およびα−ＫＧを
含む試薬組成物を内因性アンモニア捕捉試薬として用い
ることが好ましい、また、ＧＬＤＨを含む試薬組成物ま
たはアスパルターゼを含む試薬組成物を用いる場合には
、内因性アンモニア捕捉層のｐｆｌ値を通常１０．０以
下、好ましくは７．０〜９．５の範囲内に維持できるよ
うに、適当な緩衝剤を用いることが好ましい。

内因性アンモニア捕捉試薬に用いることができる前述の
ｐＨ値を維持する緩衝剤としては、日本化学合繊「化学
便覧基ｖ！ｋｌａｉ　（東京、丸善■、１９６６年発行
）　１３１２〜１３２０真に記載の緩衝剤、Ｎｏｒｍａ
ｎ　Ｅ。

Ｇｏｏｄ　ｅｔ　ａｌ著、Ｂｉｏｃｈｅ＋＊１ｓｔｒｙ
、　５　（２）、４６７〜４７７（１９６６）、　　Ｈ
ｙｄｒｏｇｅｎ　ｔｏｎ　Ｂｕｆｆｅｒｓ　ｆｏｒ　Ｂ
ｉｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ記載の緩衝剤、Ｒ
，Ｍ、Ｇ、Ｄａｖｓｏｎ　ｅｔ　ａｌｌｉのＤａｔｅ　
ｆｏｒ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ第
２版（Ｏｘｆｏｒｄａｔ　ｔｈｅ　Ｃ１ａｒｅｎｄｏｎ
　Ｐｒｅｓｓ　１９６９年発行）４７６〜５０８頁、Ａ
ｎａｌｙｔｉｃａｌ　ＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＸ１０
４．３００〜３１０（１’１８０）に記載の緩衝剤等を
挙げることができる。また、特公昭５７−２８２７７号
公報記載の一体型多層分析要素に用いられる有機酸類ま
たはそのアルカリ金属（またはアルカリ土類金属）塩類
、特開昭５９−１４３９５９号および特開昭６０−１０
１７１号各公報記載載の一体型多層分析要素に用いられ
る塩基性ポリマー、酸性ポリマー、酸性ポリマーのアル
カリ金属（またはアルカリ土類金属）塩類など、および
これらの混合物等も上記緩衝剤として用いることができ
る。

これらのｐＨ緩衝剤のうちで、特に好ましい緩衝剤の具
体例としては、燐酸水素二ナトリウムと３−モルホリノ
プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ、　ＣＡＳ　Ｒｅｇ。

Ｎｏ　（１１３２−６１−２）　）と水酸化ナトリウム
の組合せ、燐酸二水素カリウムと燐酸水素二ナトリウム
の組合せ、燐酸水素二ナトリウムとクエン酸の組合せ、
ホウ酸と塩化ナトリウムとホウ砂の組合せ、燐酸二水素
カリウムと四ホウ酸ナトリウムの組合せ等を挙げること
ができる。

内因性アンモニア捕捉層は、上記内因性アンモニア捕捉
試薬やｐｉｔ緩衝剤等の試薬類および被膜形成能を有す
る親水性ポリマーバインダーからなる層である。上記親
水性ポリマーバインダーとしては、前述の試薬層に用い
ることができるとして挙げた親木性ポリマーバインダー
と同じものを用いることができる。これらのポリマーの
うちでは、ゼラチン、ゼラチン誘導体、ヒドロキシアル
キルセルロース、ポリビニルアルコール、アガロースを
用いるのが一般的には好ましい。

内因性アンモニア捕捉層の層厚は通常は約１〜３０−１
好ましくは約２〜１０ｍである。

内因性アンモニア捕捉層は、ＮＡＤＰＨまたはＮＡＤｆ
ｌ。

α−ケトグルタル酸（α−ＫＧ）　、およびグルタミン
酸デヒドロゲナーゼ（ＧＩＤＩＩ）を含有することが好
ましい、これらの各成分の特に好ましい含有量（内因性
アンモニア捕捉層Ｉｒｒｒ当り）を次に記す。

含有量の範囲 （／ポ） α−Ｋ　Ｇ　　　　　　　　１００〜１万■ＧＩＤＨ２
０００〜１０万ユニツト なお、内因性アンモニア捕捉層がアスパルターゼとフマ
ルＭ（フマル酸塩であってもよい）を含有する場合のそ
れぞれの含有量の範囲は、アスパルターゼ１０００ユニ
ツト／ホ以上、フマル酸（および／またはフマル酸塩）
２００■／ボ以上である。

内因性アンモニア捕捉層は、前記のようにアンモニア拡
散防止層の上に設けられた、ポリマーバインダーを含む
実質的に非孔質の眉としてのほかに、多孔性展開層又は
多孔性展開層とアンモニア拡散防止層の間に設けられた
微多孔性層の中にアンモニア捕捉試薬、ｐｕｌｌ衝剤及
び所望により併用される親水性ポリマーを含有させた微
多孔性層とすることができる。多孔性展開層中にアンモ
ニア捕捉試薬類を含有させた態様においては、展開層は
内因性アンモニア捕捉層をかねる層として機能する。微
多孔性の内因性アンモニア捕捉層においても、アンモニ
ア捕捉試薬の含有量（被覆量）、ｐｎ緩衝剤の種類、含
有量（被覆量）及びｐＨ値範囲等はポリマーバインダー
を含む実質的に非孔性層の場合と同様である。微多孔性
の内因性アンモニア降去層と多孔性展開層との接着は、
特許ＦＡ６１−４９５９号に記載の多孔性接着技術によ
ることが好ましい。

分析要素がアンモニア定量用の場合には、内因性アンモ
ニア捕捉層を設けないことはいうまでもない。

バリヤー層と内因性アンモニア捕捉層の間に設けること
ができる光遮蔽層は、光遮蔽性または光遮蔽性と光反射
性とを兼ね備えた微粒子または微粉末（以下、単に微粒
子と記す）が、少量の被膜形成能を有する親水性（また
は弱親水性）のポリマーバインダーに分散保持されてい
る水透過性または水浸透性の層である。光遮蔽層は、指
示薬層にて発生した検出可能な変化（色変化、発色緩衝
剤等）を支持体側から反射測光する際に後述する多孔性
展開層に点着供給された水性液体試料の色、特に全血の
場合のヘモグロビンによる赤色等を遮蔽するとともに光
反射層および背景層としても機能する。

光遮蔽性と光反射性とを兼ね備えた微粒子の例としては
、二酸化チタン微粒子、硫酸バリウム微粒子、アルミニ
ウム微粒子または微小フレーク等を挙げることができる
。

被膜形成能を有する親水性（または弱親水性）ポリマー
バインダーの例としてはゼラチン、ゼラチン誘導体、ヒ
ドロキシアルキルセルロース、アガロース、ポリビニル
アルコール等がある。ゼラチン、ゼラチン誘導体は公知
の硬化剤（架橋剤）を混合して用いることができる。

光遮蔽層に含有させる光遮蔽性微粒子とポリマーバイン
ダー（乾燥時）との比は、体積比で通常光遮蔽性微粒子
１０に対しポリマーバインダー（乾燥体積約２．５から
７．５の範囲、好ましくは約３．０から６．５の範囲で
ある。光遮蔽性微粒子が二酸化チタン微粒子の場合には
、重量比で二酸化チタン微粒子１０に対しポリマーバイ
ンダー（乾燥重量）約０．６から１．８の範囲、好まし
くは約０．８から１．５の範囲である。光遮蔽層の乾燥
層厚は、通常３１ｍから３Ｏｎの範囲内、好ましくは約
５μ量から２０μｍの範囲内である。

多孔性展開層としては特開昭５５−１６４３５６、特開
昭５７−６６３５９等に記載の織物展開層（例、ブロー
ド、ボブリン等の平織等）、特開昭６０−２２２７６９
号等に記載の編物展開層（例、トリコツ）！、ダブルト
リコツ）［、ミラニーズ編等）、特開昭５７−１４８２
５０号に記載の有機ポリマー繊維パルプ含有抄造紙から
なる展開層、特公昭５３−２１６７７　、米国特許３、
９９２．’１５８等に記載のメンブランフィルタ（プラ
ッシュポリマー層）、ポリマーミクロビーズ、ガラスミ
クロビーズ、珪藻土が親水性ポリマーバインダーに保持
されてなる連続微空隙含有多孔性層等の非繊維等方的多
孔性展開層、特開昭５５−９０８５９号に記載のポリマ
ーミクロビーズが水で膨潤しないポリマー接着剤で点接
触状に接着されてなる連続微空隙含有多孔性層（三次元
格子状粒状構造物層）からなる非繊維等方的多孔性展開
層等を用いることができる。

多孔性展開層にはアンモニア捕捉試薬、ｐＨ緩衝剤等を
含有させることにより、内因性アンモニア捕捉層を兼ね
ることができるが、その場合には、試薬組成物を展開層
中に含有保持させやすい点で織物展開層、編物展開層に
代表される繊維質展開層が好ましい。

展開層にアンモニア捕捉酵素を含む試薬組成物を含有さ
せる方法の例として特開昭５９−１７１８６４、特開昭
６０−２２２７６９、特開昭６０−２２２７７０号等に
記載のように、塗布層の上に多孔性展開層を設けた後、
展開層の上から酵素含有試薬組成物含有水溶液、または
有機溶媒含有溶液を塗布する方法がある。

多孔性展開層に用いられる織物生地または編物生地は特
開昭５７−６６３５９号に記載のグロー放電処理または
コロナ放電処理に代表される物理的活性化処理を布生地
の少なくとも片面に施すか、または特開昭５５−１６４
３５６．特開昭５７−６６３５９号等に記載の水洗脱脂
処理、親水性ポリマー含浸等親水化処理、またはこれら
の処理工程を適宜に組み合わせて逐次実施することによ
り布生地を親水化し、下側（支持体に近い側）の層との
接着力を増大させることができる。

親水性ポリマーバインダーを含む実質的に非孔性の内因
性アンモニア捕捉層は別に接着層を設けず、そのまま直
接多孔性展開層を接着するための接着層としての機能も
持たせることができるが、展開層を強固に接着一体化す
る目的でゼラチンに代表される親水性ポリマーからなる
公知の接着層を設けることができる。接着層の乾燥時の
厚さは約０．５−から５ｎの範囲である。

指示薬層、試薬層、アンモニア拡散防止層、内因性アン
モニア捕捉層、光反射層、接着層、展開層、アンモニア
捕捉試薬組成物を含有する展開層等には界面活性剤を含
有させることができる。その例としてノニオン性界面活
性剤がある。ノニオン性界面活性剤の具体例として、ｐ
−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、ｐ−ノ
ニルフェノキシポリエトキシエタノール、ポリオキシエ
チレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタ
ンモノラウレート、ｐ−ノニルフェノキシポリグリシド
ール、オクチルグルコシド等がある。ノニオン性界面活
性剤を展開層に含有させることにより水性液体試料の展
開作用（メータリング作用）がより良好になる。ノニオ
ン性界面活性剤を試薬層又は吸水層に含有させることに
より、分析操作時に水性液体試料中の水が試薬層または
吸水層に実質的に一様に吸収されやすくなり、また展開
層との液体接触が迅速に、かつ実質的に一様になる。

本発明の多層分析要素は前述の諸特許明細書に記載の公
知の方法により調製することができる。

本発明の多層分析要素は一辺約１５ｏｎから３０ｍｍの
正方形またはほぼ同サイズの円形等の小片に裁断し、特
公昭５７−２８３３１、実開昭５６−１４２４５４、特
開昭５７−６３４５２、実開昭５８−３２３５０、特表
昭５８−５ＯＮ４４等に記載のスライド枠に収めて化学
分析スライドとして用いることが製造、包装、輸送、保
存、測定操作等諸種の観点で好ましい。使用目的によっ
ては、長いテープ状でカセットまたはマガジンに収めて
用いること、または小片を開口のあるカードに貼付また
は収めて用いることなどもできる。

本発明の多層分析要素は前述の諸特許明細書等に記載の
操作により液体試料中のアナライト（アンモニア生成物
￥ｔ）の分析を実施できる。すなわち約５μＬから３０
μＬ、好ましくは８μＬから１５μＬの範囲の全血、血
漿、血清、尿等の水性液体試料中を展開層に点着し、１
分から１０分の範囲で、約２０℃から４０℃の範囲の実
質的に一定の温度で、好ましくは３７°Ｃ近傍の実質的
に一定の温度でインクベーションし、要素内の発色又は
変色を可視光又は紫外光の吸収極大波長またはその近傍
の波長の光を用いて光透過性支持体側から反射測光し、
予め作成した検量線を用いて比色測定法の原理により液
体試料中のアナライトの含有量を求めることができる。

あるいは、要素内の蛍光の強度を測光し、予め作成した
検量線を用いて液体試料中のアナライト含有量を求める
ことができる０点着する液体試料の量、インクベーショ
ン時間及び温度を一定にすることによりアナライトの定
置分析を高精度で実施できる。測定操作は特開昭６０−
１２５５４３、特開昭６０−２２０８６２、特開昭６１
−２９４３６７、特開昭５８−１６１８６７等に記載の
化学分析装置により極めて容易な操作で高精度の定量分
析を実施できる。

本発明の分析要素は指示薬層のバインダーポリマーと支
持体の下塗層のポリマーに特徴があるものであるが、本
発明の効果はその一方を採用することによって得ること
ができる。

〔作用〕

指示薬層のバインダーとして、従来はポリ酢酸ビニルと
アクリル酸エステルの共重合体ラテックスを用いていた
が、これには感度的に充分でない、ラテックスのため沈
降が起こって塗りむらを生じる、ｐＨ変化を起こすので
ｐＨ指示薬を用いるこの系では不適である等の問題があ
ったが、ポリビニルアルキルエーテルが上記欠点の全て
を解消することが判った。

一方、支持体としては従来よりゼラチンを下塗すること
が一般的であったが、上記のポリビニルアルキルエーテ
ルの指示薬層を塗布すると高感度化のため、下塗のゼラ
チン中のわずかなアンモニアを検出し、そのバックグラ
ウンド光学濃度に影響を及ぼすことが判った。そこで、
ゼラチン下塗に代わるものとしてアンモニアの含まれな
いバインダーポリマーによる下塗りにより処理すること
によって指示薬層の密着性を向上させて、その結果とし
てバックグラウンド光学濃度を低下させ、さらにベース
ラインの安定化によって精密度の向上を達成した。

〔実施例〕

実施例１ 厚さ１８０μｍの透明ポリエチレンテレフタレート（Ｐ
ＥＴ）フィルムの上に下記の被覆量となるよう下塗り層
を塗布・乾燥して、さらに指示薬層をエタノール溶液か
ら塗布・乾燥した。

下塗り層（１ボ当り） ゼラチン　　　　　　　　　　　　　　０．０７ｇｐ−
クロロフェノール　　　　　　　　　０．７ｇ指示薬層
（１ボ当り） ブロムフェノールブルー　　　　　　　　１４０　ｍｇ
水酸化ナトリウム　　　　　　　　　　　２００■次い
で、指示薬層の上に平均孔径０．２ｎ、空隙率７５％、
厚さ１００　Ｈｔａのポリエチレン製メンブランフィル
タ−を均一に圧着して空気バリアー層を設けた。この空
気バリアー層の上に、試薬層を下記のような被覆量とな
るよう水溶液から塗布・乾燥して設けた。

試薬層（１Ｍ当り） ０５１．０〜ｌ、３：平均値モル数ＭＳ　１．８〜２．
５）四硼酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　４ｇ（
塗布液のｐＨＩＯ，０） 上記試薬層を０．２％Ｐ−ノニルフェノキシポリグリシ
ドール水溶液でほぼ均一に湿潤させ、直ちに編物布地（
ゲージ数４０、ＮａＯＨ水溶液にて２５％減量処理した
もの）を密着させつつ、加圧ローラー間を通過させて、
両者を均一にラミネートした。

さらにこの積層物に、展開性を改良する目的で下記の被
覆量となるようポリビニルピロリドンのエタノール溶液
を含浸塗布し、乾燥してアンモニア定量分析用一体型多
層分析要素を調製した。

ポリビニルピロリドン　　　　　　　７．７６ｇ／ｒｄ
（平均分子量　約１２０万） 実施例２ 厚さ１ＢＯｎの透明ＰＥＴフィル“ムの上に下記の被覆
量となるよう下塗り層を塗布・乾燥してさらに、指示薬
層を水溶液から塗布・乾燥した。

下塗り層（１イ当り） 指示薬層（１Ｍ当り） ブロムフェノールブルー　　　　　　　３４０■次いで
、指示薬層の上に平均孔径０．２ｎ、空隙率７５％、厚
さ１００ｎのポリエチレン製メンブランフィルタ−を均
一に圧着して空気バリアー層を設けた。この空気バリア
ー層の上に、試薬層を下記のような被覆量となるよう水
溶液から塗布・乾燥して設けた。

試薬層（ｌイ当り） Ｏ３１，０〜１．３；平均値ｕ数ＭＳ　１．８〜２．５
）四硼酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　４ｇ（塗
布液のρ旧０．０） 上記試薬層を０．２％Ｐ−ノニルフェノキシポリグリシ
ドール水溶液でほぼ均一に湿潤させ、直ちに編物布地（
ゲージ数４０．ＮａＯＨ水溶液にて２５％減量処理した
もの）を密着させつつ、加圧ロー°ラー間を通過させて
、両者を均一にラミネートした。

さらにこの積層物に、展開性を改良する目的で下記の被
覆量となるようポリビニルピロリドンのエタノール溶液
を含浸塗布し、乾燥してアンモニア定量分析用一体型多
層分析要素を調製した。

ポリビニルピロリドン　　　　　　　７．７６ｇ／　ｒ
Ｔｆ（平均分子量　約１２０万） 実施例３ 厚さ１８０μｓの透明ＰＥＴフィルムの上に下記の被覆
量となるよう下塗り層を塗布・乾燥してさらに指示薬層
を水）γ液から塗布・乾燥した。

下塗り層（１Ｍ当り） ｐ−クロロフェノール　　　　　　　　　０．７ｇ指示
薬層（１ボ当り） ブロムフェノールブルー　　　　　　　３４０■次いで
、指示薬層の上に平均孔径０．２ｙｍ、空隙り 率７５％、厚さ１００ｎのポリエチレン製メンブランフ
ィルタ−を均一に圧着して空気バリアー層を設けた。こ
の空気バリアー層の上に、試薬層を下記のような被覆量
となるよう水溶液から塗布・乾燥して設けた。

試薬層（１ボ当り） ｏｓｉ、ｏ〜１．３；平均値モル数ＭＳ　１．８〜２．
５）四硼酸ナトリウム　　　　　　　　　　　４ｇ（塗
布液のｐｏｔｏ、ｏ） 上記試薬層を０．２％Ｐ−ノニルフェノキシポリグリシ
ドール水溶液でほぼ均一に湿潤させ、直ちに編物布地（
ゲージ数４０、ＮａＯＨ水溶液にて２５％減量処理した
もの）を密着させつつ、加圧ローラー間を通過させて、
両者を均一にラミネートした。

さらにこの積層物に、展開性を改良する目的で下記の被
覆量となるようポリビニルピロリドンのエタノール溶液
を含浸塗布し、乾燥してアンモニア定量分析用一体型多
層分析要素を調製した。

ポリビニルピロリドン　　　　　　　１．１６ｇ／Ｍ（
平均分子量　約１２０万） 実施例４ 厚さ１８０ｎの透明ＰＥＴフィルムの上に下記の被覆量
となるよう下塗り層を塗布・乾燥してさらに、指示薬層
をエタノール溶液から塗布・乾燥した。

下塗り層（１Ｍ当り） ｐ−クロロフェノール　　　　　　　　　０．７ｇ指示
薬層（ｌｒｒｒ当り） ブロムフェノールブルー　　　　　　　１４０ＩＩｇ水
酸化ナトリウム　　　　　　　　　　　２００ｇ次いで
、指示薬層の上に平均孔径０．２ｎ、空隙率７５％、厚
さ１００μのポリエチレン製メンブランフィルタ−を均
一に圧着して空気バリアー層を設けた。この空気バリア
ー層の上に、試薬層を下記のような被覆量となるよう水
溶液から塗布・乾燥して設けた。

試薬層（１ボ当り） Ｏ５１，０〜１．３；平均値モル数ＭＳ　１．８〜２．
５）四硼酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　４ｇ（
塗布液のｐ旧０．０） 上記試薬層を０．２％Ｐ−ノニルフエノキシボリグリシ
ドール水溶液でほぼ均一に湿潤させ、直ちに編物布地（
ゲージ数４０、ＮａＯＨ水溶液にて２５％減量処理した
もの）を密着させつつ、加圧ローラー間を通過させて、
両者を均一にラミネートした。

さらにこの積層物に、展開性を改良する目的で下記の被
覆量となるようポリビニルピロリドンのエタノール溶液
を含浸塗布し、乾燥してアンモニア定量分析用一体型多
層分析要素を調製した。

ポリビニルピロリドン　　　　　　　７．７６ｇ／ｎ（
（平均分子量　約１２０万） 比較例１ 指示薬層を下記の被覆量になるように変えた他は実施例
１と同様にしてアンモニア定量分析用−体型多層分析要
素を調製した。

指示薬層（ｌボ当り） ブロムフェノールブルー　　　　　　　３４０■アンモ
ニア定量性能評価 前記の実施例１．２．３および比較例１のアンモニア定
量分析一体型多層分析要素を下記の方法で評価を実施し
た。

硫酸アンモニウムを最終濃度が約５０．１００．１５０
．２００．２５０．５００ｐｇ／ｄ１となるように人全
血に添加溶解し評価試験全血液を調製した。

各分析要素の展開層に脱イオン蒸留水および評価試験全
血液を１０ｕｌずつ点着し、６分後の発色光学濃度を６
００ｎｍにて反射測光した。さらに、ここで求めた光学
濃度と、評価試験全血液をグルタミン酸デヒドロゲナー
ゼ法（Ｇ　ｆ　ＯＨ法）で測定した値で検量線を作製し
た。また、上記評価試験全血液をそれぞれ１０回ずつ点
着し得られた光学濃度を上記検量線でアンモニア濃度に
読み変えた値の変動係数（ＣＶ）を求めた。実施例１．
４および比較例１の結果を第１表に、また実施例２．３
．４および比較例１の結果を第２表に示す。

第１表の結果より実施例１および４に示したアンモニア
定量分析一体型多層分析要素は、指示薬層のポリマーの
違いによる比較例１に示すものより発色光学濃度が高く
、更に測定精度も向上していることが明らかである。

第２表の結果より実施例２．３および４に示したアンモ
ニア定量分析一体型多層分析要素は、支持体の下塗がゼ
ラチンである比較例１に示すものより、脱イオン蒸留水
を点着したときの反射光学濃度（バックグラウンド発色
光学濃度）が低く、更に測定精度も向上していることが
明らかである。

（以下余白） 第１表 第２表 実施例５ 厚さ１８０ｐの透明ＰＥＴフィルムの上に下記の被覆量
となるよう下塗り層を塗布・乾燥してさらに、指示薬層
をエタノール溶液から塗布・乾燥した。

下塗り層（ｌイ当り） ゼラチン　　　　　　　　　　　　　　０．０７ｇｐ−
クロロフェノール　　　　　　　　　０．７ｇ指示薬層
（１Ｍ当り） ブロムフェノールブルー　　　　　　　１４０■水酸化
ナトリウム　　　　　　　　　　　２００■次いで、指
示薬層の上に平均孔径０．２μ、空隙率７５％、厚さ１
００−のポリエチレン製メンブランフィルタ−を均一に
圧着して空気バリアー層を設けた。この空気バリアー層
の上に、試薬層・中間層・内因性アンモニア捕捉層を各
々下記のような被覆量となるよう順次水溶液から塗布・
乾燥して設けた。

試薬層（Ｉｎ（当り） アルカリ処理ゼラチン　　　　　　　　１１．７　ｇ四
硼酸ナトリウム　　　　　　　　　　　１．７ｇＰ−ノ
＝ルフーノキシボリグリシドール　３００ｍｇ（グリシ
ドール単位平均１０） クレアチ３ンイミノセド０ラーゼ　　　　７５０Ｕ（Ｅ
　Ｃ）、　５．　、４２１） （塗布液のｐＨ８，０） アンモニア拡散防止層（１が当り） アルカリ処理ゼラチン　　　　　　　　８．３ｇ四硼酸
ナトリウム　　　　　　　　　　　７５０ｍｇＰ−ノ０
ノ′フーノキシボ゛ツク゛Ｊシドーノ’　　　２００Ｍ
（グリシドール単位平均１０） （塗布液のｐＨ９，０） 内因性アンモニア捕捉Ｎ（ｌｒｒｆ当り）アルカリ処理
ゼラチン　　　　　　　　７．５ｇ四硼酸ナトリウム　
　　　　　　　　　１．３５ｇＰ−ノニルフェノキシポ
リグリシドール　１７０ｍｇ（グリシドール単位平均１
０） α−ケトグルタル６１　　　　　　　２．５ｇＮＡＤＰ
Ｈ１，６ｇ グルタミン酸デヒドロゲナーゼ　　７００００　Ｕ（Ｅ
　Ｃ１，４，１，４） （塗布液のｐＨ８，０） 上記内因性アンモニア捕捉層を０．２％Ｐ−ノニルフェ
ノキシポリグリシドール水溶液でほぼ均一に湿潤させ、
直ちに編物布地（ゲージ数４０、ＮａＯＨ水溶液にて２
５％減量処理したもの）を密着させつつ、加圧ローラー
間を通過させて、両者を均一にラミネートした。

さらにこの積層物に、展開性を改良する目的で下記の被
覆量となるようポリビニルピロリドンのエタノール溶液
を含浸塗布し、乾燥してタレアチニン定量分析用一体型
多層分析要素を調製した。

ポリビニルピロリドン　　　　　　　７　、７６ｇ／　
ｒｄ（平均分子量　約１２０万） 実施例６ 厚す１８０ｍの透明ＰＥＴフィルムの上に下記の被覆量
となるよう下塗り層を塗布・乾燥してさらに、指示薬層
を塗布・乾燥した。

下塗り層（ｌｎｆ当り） ポリビニルメチルエーテル　　　　　０．０３５　ｇ（
重量平均分子量約４万） パラクロルフェノール　　　　　　　　　０．７ｇ指示
薬層（ｌｒｙｆ当り） ブロムフェノールブルー　　　　　　　３４０１ｇＮ−
ボリイ七ジエチレン −Ｎ−オクタンスルホンアミド　　　　　　１００゜次
いで、指示薬層の上に平均孔径０．２ｎ、空隙率７５％
、厚さ１００μのポリエチレン製メンブランフィルタ−
を均一に圧着して空気バリアー層を設けた。この空気バ
リアー層の上に、試薬層・中間層・内因性アンモニア捕
捉層を各々下記のような被覆量となるよう順次水溶液か
ら塗布・乾燥して設けた。

試薬層（１ボ当り） アルカリ処理ゼラチン　　　　　　　　１１．７　ｇ四
硼酸ナトリウム　　　　　　　　　　　１．７ｇＰ−ノ
ニルフェノキシポリグリシドール（グリシドール単位平
均１０）３００ｍ１ｇ（塗布液のｐＨ８，０） アンモニア拡散防止層（１Ｍ当り） アルカリ処理ゼラチン　　　　　　　　８，３ｇ四硼酸
ナトリウム　　　　　　　　　　　７５０１ｇ（塗布液
のｐＨ９，０） 内因性アンモニア捕捉層（Ｉｎ（当り）アルカリ処理ゼ
ラチン　　　　　　　　７．５ｇ四硼酸ナトリウム　　
　　　　　　　　　１．３５ｇα−ケトグルタル酸　　
　　　　　　２．５ｇＮＡＤＪ’ｌｌ　　　　　　　　
　　　　　　　　１．６　ｇグルタミン酸デヒドロゲナ
ーゼ （ＥＣＩ、４，１．４）　　”０００Ｕ（塗布液のｐＨ
９，０） 上記内因性アンモニア捕捉層を０．２％Ｐ−ノニルフェ
ノキシポリグリシドール水溶液でほぼ均一に湿潤させ、
直ちに編物布地（ゲージ数４０．　ＮａＯＨ水溶液にて
２５％減量処理したもの）を密着させつつ、加圧ローラ
ー間を通過させて、両者を均一にラミネートした。

さらにこの積層物に、展開性を改良する目的で下記の被
覆量となるようポリビニルピロリドンのエタノール溶液
を含浸塗布し、乾燥してタレアチニン定量分析用一体型
多層分析要素を調製した。

ポリビニルピロリドン　　　　　　　１．１６ｇ／ｎＴ
（平均分子量　約１２０万） 実施例７ 厚さ１８０ｎの透明ＰＥＴフィルムの上に下記の被覆量
となるよう下塗り層を塗布・乾燥してさらに、指示薬層
を塗布・乾燥した。

下塗り層（ｉｎ？当り） パラクロルフェノール　　　　　　　　　０．７ｇ指示
薬層（ｌイ当り） ブロムフェノールブルー　　　　　　　３４０■Ｎ〜ポ
リイキシ在チレン −Ｎ−オクタンスルホンアミド　　　　　　１００Ｍ次
いで、指示薬層の上に平均孔径０．２ｎ、空隙率７５％
、厚さ１００　ｎのポリエチレン製メンブランフィルタ
−を均一に圧着して空気バリアー層を設けた。この空気
バリアー層の上に、試薬層・中間層・内因性アンモニア
捕捉層を各り下記のような被覆量となるよう順次水溶液
から塗布・乾燥して設けた。

試薬層（１ボ当り） アルカリ処理ゼラチン　　　　　　　　１１．７ｇ四硼
酸ナトリウム　　　　　　　　　　　１．７ｇ（塗布液
のｐＨ８，０） アンモニア拡散防止層（ｌｒｒｆ当り）アルカリ処理ゼ
ラチン　　　　　　　　８．３ｇ四硼酸ナトリウム　　
　　　　　　　　　７５０■（塗布液のｐＨ９，０） 内因性アンモニア捕捉層（１イ当り） アルカリ処理ゼラチン　　　　　　　　７．５ｇ四硼酸
ナトリウム　　　　　　　　　　１．３５ｇα−ケトグ
ルタル酸　　　　　　　　２．５ｇＮＡＤＰ）１　　　
　　　　　　　　　　　　１．６ｇ（塗布液のｐ）１９
．０） 上記内因性アンモニア捕捉層を０．２％Ｐ−ノニルフェ
ノキシポリグリシドール水溶液でほぼ均一に湿潤させ、
直ちに編物布地（ゲージ数４０、ＮａＯＨ水溶液にて２
５％減量処理したもの）を密着させつつ、加圧ローラー
間を通過させて、両者を均一にラミネートした。

さらにこの積層物に、展開性を改良する目的で下記の被
覆量となるようポリビニルピロリドンのエタノール溶液
を含浸塗布し、乾燥してクレアチニン定量分析用一体型
多層分析要素を調製した。

ポリビニルピロリドン　　　　　　　７．７６ｇ／ｒｒ
ｆ（平均分子長量　約１２０万） 実施例８ 厚さ１８０ｎの透明ＰＥＴフィルムの上に下記の被覆量
となるよう下塗り層を塗布・乾燥してさらに、指示薬層
を塗布・乾燥した。

下塗り層（１Ｍ当り） パラクロルフェノール　　　　　　　　　０．７ｇ指示
薬層（ｌｎｆ当り） ブロムフェノールブルー　　　　　　　１４０■水酸化
ナトリウム　　　　　　　　　　　２００■エタノール
　　　　　　　　　　　　　　３６．９ｇ次いで、指示
薬層の上に平均孔径０．２μ層、空隙率７５％、厚さ１
００ｎのポリエチレン製メンブランフィルタ−を均一に
圧着して空気バリアー層を設けた。この空気バリアー層
の上に、試薬層・中間層・内因性アンモニア捕捉層を各
々下記のような被覆量となるよう順次水溶液から塗布・
乾燥して設けた。

試薬層（１ポ当り） アルカリ処理ゼラチン　　　　　　　　１１．７ｇ四硼
酸ナトリウム　　　　　　　　　　　１．７ｇ（塗布液
のｐＨ９，０） アンモニア拡散防止層（ｌＪＴ？当り）アルカリ処理ゼ
ラチン　　　　　　　　８．３ｇ四硼酸ナトリウム　　
　　　　　　　　　７５０■Ｐ−ノニルフェノキシポリ
グリシドール２００■ （グリシドール単位平均１０） （塗布液のｐＨ９，０） 内因性アンモニア捕捉層（１ボ当り） アルカリ処理ゼラチン　　　　　　　　７．５ｇ四硼酸
ナトリウム　　　　　　　　　　１．３５ｇα−ケトグ
ルタル酸　　　　　　　　２．５ｇＮＡＤＰＨ１，６ｇ ＧＩＤＨ７００００Ｕ （塗布液のｐＨ８，０） 上記内因性アンモニア捕捉層を０．２％Ｐ−ノニルフェ
ノキシポリグリシドール水溶液でほぼ均一に湿潤させ、
直ちに編物布地（ゲージ数４０、ＮａＯＨ水溶液にて２
５％減量処理したもの）を密着させつつ、加圧ローラー
間を通過させて、両者を均一にラミネートした。

さらにこの積層物に、展開性を改良する目的で下記の被
覆量となるようポリビニルピロリドンのエタノール溶液
を含浸塗布し、乾燥してタレアチニン定量分析用一体型
多層分析要素を調製した。

ポリビニルピロリドン　　　　　　　７．７６ｇ／ｎ（
（平均分子量　約１２０万） 比較例２ 指示薬層を下記の被覆量になるように変えた他は実施例
５と同様にしてクレアチニン定量分析用一体型多層分析
要素を調製した。

指示薬層（１ｒ＋ｆ当り） ブロムフェノールブルー　　　　　　　３４０■酢酸ビ
ニル・アクリル酸エチル 共重合体ラテックス　　　　８゛５ｇ Ｎ−ポリオキシエチレン　　　　　　　　　１ｏｏ、ｇ
−Ｎ−オクタンスルホンアミド クレアチニン定量性能評価 前記の実施例５．６．７．８及び比較例２のクレアチニ
ン定量分析一体型多層分析要素を下記の方法で評価を実
施した。

クレアチニンを最終濃度が約１゜Ｏ１４，０，１１，Ｏ
ｔｔｇ／ｄ１となるように人全血に添加溶解し評価試験
全血液を調製した。

各分析要素の展開層に脱イオン蒸留水および評価試験全
血液を１０μｒずつ点着し、６分後の発色光学濃度を６
００ｎ−にて反射測光した。さらに、ここで求めた光学
濃度と、評価試験全血液をヤッフエ法で測定した値で検
量線を作製した。また、上記評価試験全血液をそれぞれ
１０回ずつ点着し得られた光学濃度を上記検量線でクレ
アチニン濃度に読み変えた値の変動係数（ＣＶ）を求め
た。実施例５．８及び比較例２の結果を第３表に、また
実施例６．７．８及び比較例２の結果を第４表に示す。

第３表の結果より実施例５及び８に示したクレアチニン
定量分析一体型多層分析要素は、指示薬層のポリマーの
違いによる比較例２に示すものより発色光学濃度が高く
、更に測定精度も向上していることが明らかである。

第４表の結果より実施例６．７および８に示したクレア
チニン定量分析一体型多層分析要素は、支持体の下塗が
ゼラチンである比較例２に示すものより、脱イオン蒸留
水を点着したときの反射光学濃度（バックグラウンド発
色光学濃度）が低く、更に測定精度も向上していること
が明らかである。

第３表 第４表 〔発明の効果〕 本発明の分析要素を用いることにより、アンモニアまた
はアンモニア生成物質を高い発色光学濃度で高精度で分
析できる。また、バックグラウンドの発色濃度が低いこ
とによって測定精度をさらに高めている。

特許出願人　富士写真フィルム株式会社代　理　人　弁
理士　田中　政情　はか１名手続補正書（自発） 平成３年１２月４日

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）透明支持体上に（ｉ）ガス状アンモニアにより検
   知可能な変化を生じる指示薬を含む指示薬層（ｉｉ）液
   体遮断層（ｉｉｉ）アルカリ性緩衝剤を含有し必要によ
   り基質と反応してアンモニアを生成することの出来る試
   薬を有する試薬層、及び（ｉｖ）展開層がこの順に積層
   された分析要素において、指示薬層がポリビニルアルキ
   ルエーテルを含むことを特徴とする液体試料中のアンモ
   ニアまたはアンモニア生成物質分析用一体型多層分析要
   素
2. （２）透明支持体上に（ｉ）ガス状アンモニアにより検
   知可能な変化を生じる指示薬を含む指示薬層（ｉｉ）液
   体遮断層（ｉｉｉ）アルカリ性緩衝剤を含有し必要によ
   り基質と反応してアンモニアを生成することの出来る試
   薬を有する試薬層、及び（ｉｖ）展開層がこの順に積層
   された分析要素において、透明支持体の指示薬層の面に
   、アンモニアまたはアンモニウムイオンを実質的に含ま
   ないポリビニルアルキルエーテル、ヒドロキシアルキル
   セルロース、アルキルセルロース、ポリ塩化ビニリデン
   、ポリスチレン、ポリアルキルメタクリレート、ポリビ
   ニルアルコールまたはポリビニルピロリドンが下塗りさ
   れていることを特徴とする液体試料中のアンモニアまた
   はアンモニア生成物質分析用一体型多層分析要素