JPH04158792A - ウラシル系化合物の製造法 - Google Patents

ウラシル系化合物の製造法

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JPH04158792A
JPH04158792A JP28507790A JP28507790A JPH04158792A JP H04158792 A JPH04158792 A JP H04158792A JP 28507790 A JP28507790 A JP 28507790A JP 28507790 A JP28507790 A JP 28507790A JP H04158792 A JPH04158792 A JP H04158792A
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JP
Japan
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uracil
based compound
compounds
compound
brevibacterium
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JP28507790A
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English (en)
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Takeshi Marumo
剛 丸茂
Yoshiomi Yamamoto
山本 佳臣
Yuichiro Midorikawa
緑川 祐一朗
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Yamasa Shoyu KK
Original Assignee
Yamasa Shoyu KK
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 [産業上の利用分野] 本発明は、医薬品原料、生化学試薬などとして有用なウ
ラシル、ウリジンまたは5゛ −ウ1ノジルM(以下、
こられの化合物を総称して「ウラシル系化合物」と略称
する)の発酵法による製造法および該製造法に使用する
ブレビバクテリウム属に厘する微生物に関するものであ
る。
[従来の技術] 従来、ブレビバクテリウム属に属する微生物を用いて発
酵法によりウラシル系化合物を製造する方法としては、
プリンアナログ耐性の微生物を用いる方法が唯一報告さ
れている(特公昭57−3047θ号公報参照)。
[発明が解決しようとする課題] しかし、上記従来法はウラシル系化合物の生産量が低く
、実用上満足できるものではなかった。
したがって1本発明はブレビバクテリウム属に属する微
生物を用いるウラシル系化合物の実用的な製造法の提供
を目的とするものである。
CSaを解決するための手段] 本発明者らは、ウラシル系化合物を発酵法により製造す
る方法に関し、種々研究を重ねた結果、ブレビバクテリ
ウム属に属し、ピリミジンアナログ耐性を有し、かつウ
ラシル系化合物を特異的に生成蓄積する能力を有する微
生物群を育種することに成功し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、ブレビバクテリウム属に1し、ピ
リミジンアナログ耐性を有し、かつウラシル系化合物を
生成蓄積する能力を有する微生物を培養してウラシル系
化合物を生成蓄積せしめ、生成蓄積したウラシル系化合
物を採取することを特徴とするウラシル系化合物の製造
法に関するものである。
また、本発明は、上記ウラシル系化合物の製造に使用す
るブレビバクテリウム属に属し、ピリミジンアナログ耐
性を有し、かつウラシル系化合物を生成蓄積する能力を
有する微生物に関するものである。
以下、本発明を詳述する。
本明細書において、 「ウラシル系化合物」とは前述の
ようにウラシル、ウリジンまたは5°−ウリジル酸を総
称するものであり、本発明ではこれら例示の化合物の少
なくとも一種以上が培養液中に蓄積されれば、ウラシル
系化合物が蓄積されたものとする。
[ピリミジンアナログJとは、ウラシル、シトシン、4
チミンなどのピリミジン塩基と類似の構造を有する物質
、たとえば5−フルオロウラシル、8−アザウラシル、
2−チオウランルなど、あるいはこられのりボサイドお
よびリボタイドを意味する。
「ピリミジンアナログ耐性」とは、親株が生育できない
ような濃度のピリミジンアナログを少なくとも一種以上
含有する培地でも生育できる特徴を有する変異株の性質
を意味する。
本発明で使用する微生物は、下記のA−Cの特徴を有す
るものであれば特に制限されない。
A: ブレビバクテリウム属に属する B: ピリミジンアナログ耐性を有するC: ウラシル
系化合物をW積する能力な有するこのような特徴を充足
する具体的な微生物としてはブレビバクテリウム・アン
モニアゲネス(Brevibacteriui amm
oniagenes) 214−17、同14−27な
どを例示することができる。
上記微生物は、たとえばブレビバクテリウム・アンモニ
アゲネスATCC8872を親株とし、該親株に通常の
変異処理(たとえば、紫外線照射処理、N−メチル−N
゛−二トローN−ニトロソグアニジン(N T G)処
理など)を施すことにより得られる変異株中からピリミ
ジンアナログ耐性を有し、かつウラシル系化合物を蓄積
する能力を宵する菌株をスクリーニングする方法にて取
得することができる。上記微生物の具体的な取得方法に
ついては後述の実施例1に示す。
このようにして得られるウラシル系化合物生産能を有す
る微生物を、それ自体公知の方法にて培養し、培養後の
培養物中からウラシル系化合物を採取すればよい。
培養に使用する培地としては、炭素源、窒素源、各種金
属イオンなどを含有し、さらに必要にfじて各種アミノ
lI類、核酸類、ビタミン類などの微量栄養素を含有さ
せたものを使用できる。具体的には、炭素源としては、
グルコース、マルトース、ガラクトース、廃糖蜜、澱粉
加水分解物など、窒1gとしてはアンモニ乙 塩化アン
モニウム、硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウムなどの
各種無機アンモニウム化合物、もしくは尿素、コーンヌ
ティーブリカー、酵母エキスなどの各種有機態窒素など
も使用することができる。
微生物の培養は、通常振盪培養もしくは通気撹拌培養な
どの好気条件下での液体培III法を採用すればよい。
培養条件はpH5,0〜8.5で23〜40℃の温度範
囲から適宜選定すればよい。
培養時間は上記培養条件下で通常3〜6日程度であるが
、最終的にはウラシル系化合物の蓄積量をもって判断す
ればよい。
培1!軒了後、培養物からのウラシル系化合物の採取法
は、ウラシル系化合物の単離精蜆法として常用されてい
る方法(たとえば、沈澱法、膜濾過法、イオン交換クロ
マトグラフィー、吸着クロマトグラフィーなと)を適宜
組み合わせて行えばよい。
以下、実施例を示し、本発明を具体的に説明す実施例 
l ブレビバクテリウム・アンモニアゲネスATCC887
2を300μg/mlのNTOで5分間処理した後、下
記の基本培地にlOOμg/slの5−フルオロウラシ
ルを添加した寒天平板培地に塗抹し、30℃で5日間培
養した。出現してきたコロニーを分離し、下記の生産培
地10m1を分注した試験管に接種し、28℃で6日間
振盪培養を行った。培養終了後、培養液の遠心上清液の
分析を行い、ウラシル系化合物生産能の高い微生物とし
てブレビバクテリウム・アンモニアゲネス214−17
およびブレビバクテリウム・アンモニアゲネス14=2
7を選択した。これらの微生物の微生物学的特徴はピリ
ミジンアナログ耐性を有し、かつウラシル系化合物を生
成蓄積する点を除いては親株と同じであった。各種ピリ
ミジンアナログに対する耐性を表1に、また、生産培地
101を含む試験管に接種して28℃で6日間振盪培養
した場合のウラシル系化合物の生産量を表■に示した。
表I ※ +:生育あり、−:生育なし 表■ 基n風 グルコース              10gビタミ
ンアッセイカザミノアンド(Difco社製)1g 塩化アンモニウム           3g硫酸マグ
ネンウム       lXl0−’g硫酸第一鉄  
        lXl0−2g硫酸マンガン    
     lXl0−2g硫酸銅          
  lXl0−”gパントテン酸カルノウム    1
xlO−2gサイアミン塩酸塩       5X10
−”gビオチン           5X10−5g
25cMリン酸カリウム緩衝液(pH7)000m1 寒  天                     
     20gUム グルコ−ス         1.OOg(別full
)コーンスチーブリカ−20g 酵母エキス          2g 尿  素                     
10g硫酸マグネノウム       Ig O,1Mリン酸カリウム緩衝液(pH7)000ii 実施例 2 グルコース4 g/dl、ペプトン2 g/dl、酵母
エキス0. 5 g/dl、原票0. 3 g/dl、
KH2POa0、 15g/dl、K2HP Ox  
0. 05g/dl、Mg5O+・7820 0. 0
5g/dl (殺菌前の培地のpH7,0)の組成の橿
培地10+1を含んだ試験管にブレビバクテリウム・ア
ンモニアゲネス14−27を接種して30℃で24時間
振盪培養した。
この種培II液を、下記の示す発酵培地201を含んだ
バッフル板付きの3001客二角フラスコに接種して3
0℃でロータリーシェーカ(200rpin)上で72
時間培養した結果、培養液中に平均5. 7mg/ml
のウラノル、0. 3q/rllウリジン、8. 1x
/mlの5′ −ウリジル酸が生成した。
立IL坦Jと1虞よ グルコース12 g/dl、  (N Ha)aS 0
 4 g/di。
Fe5Oa   7H200,001g/di、  M
nSO4・ 4H200,0001g/dl、  KH
2PO40、2g/dI、  KH2O40,Ig/d
i、  尿素0、 2 g/dl、  チアミン・HC
l2.5■/d1゜ビオチン 200μg/dl、  
M g S Oa・7H200、05g/i11.  
β−アラニン 100μg/ml、  L−システィン
・HCI  20月g/ml、  肉エキス0、 2g
#11.  Ca C033g/di、  (殺菌前の
培地のpHはアンモニア水を用いて7.2に調整)培養
液1リツトルを塩酸でpH5,0とし、80℃で20分
間加熱処理し、3000rpmで10分間遠心分離して
得られた上澄み液をダウエックス1x2(200〜40
0メツンニ)(クロル型レジン、ダウケミカル社製)を
充填したカラムに通液した。水洗後、0.0IN塩Wi
溶液、0.05N塩酔溶液を順次通液し、各画分を集め
て減圧濃縮した。、!#縮液を活性炭で脱色して更に減
圧濃縮し、ウラノル4.2g、  ウリジン0.2g、
5′ −ウリジルl116gの粗結晶をそれぞれ得た。
なお、対照として同様に培養したブレビバクテリウム・
アンモニアゲネスATCCE3872 (親株)の培養
液中にはウラシル系化合物の生成は認められなかった。
[発明の効果] 実施例2で行った培養は、従来法である特公昭57−3
0476号に記載されている実施例1と全く同一の条件
で行ったものである。本実施例におけるウラシル系化合
物の生産性と特公昭57−30478中の実施例1に記
載されているウラシル系化合物の生産性とを培地中への
生成モル数で比較すると、下記表■に示すように本発明
方法は特公昭57〜30478号の実施例1に記載の従
来法に比べて2.8倍の生産性を示し、きわめて有用な
方法である。この生産性の違いは、使用する微生物に起
因するものであり、本発明の微生物はウラシル系化合物
の発酵法による製造に有益なものである。
表■ 〔微生物の寄託] 実施例1で得られたブレビバクテリウム・アンモニアゲ
ネス214−17および同14−27は平成2年10月
11日に工業技術院微生物工業技術研究所に受託され、
受託番号としてそれぞれ微工研菌寄第11759号およ
び同第11760号が与えられている。
特許出願人(677)ヤマサ醤油株式会社手続補正書(
自発) 平成2年 11月 27日 1、本件の表示 平成2年特許願第285077号 2、発明の名称 郵便番号 288        \−・住所 千葉県
銚子市新生町2丁目10番地の1電話 0479−22
−0095 (代表)4、補正の対象 願書の発明者の欄の「白木」及び「縁周」の住所、及び
明細書の特許請求の範囲の欄 5、補正の内容 1)願書を別紙のとおり訂正する。
2、特許請求の範囲を別紙のとおり訂正する。
別紙 −2、特許請求の範囲 1)ブレビバクテリウム属に属し、ピリミジンアナログ
耐性を有し、かつウラシル系化合物を生成蓄積する能力
を有する微生物を培養してウラシル系化合物を生成蓄積
せしめ、生成蓄積したウラシル系化合物を採取すること
を特徴とするウラシル系化合物の製造法。
2)請求項1記載のウラシル系化合物の製造に使用する
ブレビバクテリウム属に属し、ピリミジンアナログ耐性
を有し、かつウラシル系化合物を生成蓄積する能力を有
する微生物。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1)ブレビバクテリウム属に属し、ピリミジンアナログ
    耐性を有し、かつウラシル系化合物を生成蓄積する能力
    を有する微生物を培養してウラシル系化合物を生成蓄積
    せしめ、生成蓄積したウラシル系化合物を採取すること
    を特徴とするウラシル系化合物の製造法。 2)請求項1記載のウラシル系化合物の製造に使用する
    ブレビバクテリウム属に属し、ピリミジンアナログ耐性
    を有し、かつウラシル系化合物を生成蓄積する能力を有
    する微生物。
JP28507790A 1990-10-22 1990-10-22 ウラシル系化合物の製造法 Pending JPH04158792A (ja)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6344344B1 (en) 1999-10-28 2002-02-05 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing uridine-5'-monophosphate by fermentation using mutant strains of coryneform bacteria

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6344344B1 (en) 1999-10-28 2002-02-05 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing uridine-5'-monophosphate by fermentation using mutant strains of coryneform bacteria

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