JPH0416134A - 不定胚の置床方法及びその装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、農業一般における苗生産の技術分野に属する
もので、カルスから培養された幼植物を含む不定胚を育
苗床へ置床する方法及びその装置に関するものである。

〔従来の技術〕

従来における上記不定胚（幼植物を含む）の培養とその
置床は、ます外植体からのカルス誘導体を増殖用培地に
より培養・増殖し、次に再分化用培地に移動させて胚原
細胞を発生させ、これらから得られた不定胚をピペット
等の器具で取り出して育苗床に置床するようにしており
、これらの一連の操作を全て手作業にて行なっていた。

〔発明が解決しようとする課題〕

上記従来の不定胚の培養及びその置床において、特にこ
れの育苗床への置床を手作業で行なっているので、これ
の実施には多額の人件費を要する。また全ての操作を無
菌環境にて行う必要があり、このため、無菌環境用のク
リーンベンチやクリーンルームも作業者が中に入って作
業するに十分な大きさにしなければならず、これらのこ
とはいずれも育苗コストを上昇させる原因となり、培養
菌の価格を高騰させてその実用性を失わしめる原因とな
っていた。

本発明は上記のことにかんがみなされたもので、大量に
培養されて培養液等の液体中に浮遊している不定胚を手
作業によることなく極めて簡単に、かつ能率よく育苗床
へ置床でき、また上記置床する不定胚の大きさをそろえ
ることができるようにした不定胚の置床方法及びその装
置を提供することを目的とするものである。

Ｃ課題を解決するための手段〕 上記目的を達成するために、本発明に係る不定胚の置床
方法は、幼植物を含む不定胚が浮遊している培養液等の
懸濁液中に、小径の吸込み穴を多数有する管体を浸漬し
、ついでこの管体内を負圧にして吸込み穴より上記懸濁
液を吸引してこの吸込み穴に不定胚を吸着固定し、その
後管体を懸濁液中より引き出し、育苗床部分まで移動し
てから管体内を正圧にして吸込み穴より不定胚を離脱さ
せて育苗床上に置床する。

また上記不定胚の置床方法において、懸濁液中に不定胚
を供給する際にふるい分けして不定胚の大きさをそろえ
る。

さらに上記不定胚の置床方法を実施する装置は、少なく
とも下側面に小径の吸込み穴を多数個する管体と、この
管体に接続され、かつこの管体内を負圧と正圧の双方に
切換え可能にした流体回路と、上記管体を上下動及び水
平動する移動装置と、管体の水平移動方向一方に位置す
る懸濁液槽と、他方に位置する育苗床とから構成されて
いる。

また上記懸濁液槽にふるい分け装置を介して不定胚培養
装置を接続した構成となっている。

〔作　用〕

管体の上下動及び水平移動により、懸濁液槽内に浮遊し
ている不定胚が管体に吸着されて取り出され、ついで育
苗床上に順次置床される。

懸濁液槽に供給される不定胚は所定の大きさにふるい分
けられる。

〔実　施　例〕

本発明の実施例を図面に基づいて説明する。

第１図は不定胚の培養工程から置床工程に至る全体の配
管構成を示すもので、図中１はカルス培養部、２は胚原
細胞培養部、３は置床部である。

上記カルス培養部１と胚原細胞培養部２とは略同−構成
となっていて、それぞれ培養タンク４．５とふるい分け
装置６，７とからなっており、カルス培養部１の下流端
が胚原細胞培養部２の培養タンク５に接続されており、
また胚原細胞培養部２の下流端が置床部３の懸濁槽８に
接続されている。

以下に上記カルス培養部１と胚原細胞培養部２の構成を
これの作用と共に説明する。

カルス培養部１の培養タンク４には第１、第２の供給管
９ａ、９ｂより、バルブ１０ａ。

１０ｂ、１０ｃを介して所定の培養液１１が供給され、
この培養タンク４内で外植体よりカルス誘導体が大量に
懸濁培養される。

次に、供給管９ａ、９ｂに介装したバルブ１０ａ、１０
ｂを閉、タンク側のバルブ１０ｃを開にした状態でポン
プ１２を駆動して培養タンク４内の懸濁液をふるい分け
装置６に供給し、ここで、懸濁液中のカルス誘導体を大
きさ別にふるい分け、所定の大きさのカルス誘導体だけ
を再分化部２へ供給する。

上記ふるい分け装置６は３個のふるい分け器６ａ、６ｂ
、６ｃとからなり、それぞれのふるい網は、例えば３７
，６４．１４００メツシユとなっている。

胚原細胞培養部２へ供給するカルス誘導体の大きさは６
４メツシユのふるい分け器６ｂを通り、３７メツシユの
ふるい分け器６ａを通らない大きさにする。

すなわち、ポンプ１２の吐出側回路内のバルブ１３を閑
、バルブ１４を開にし、さらに各ふるい分け器６ａ、６
ｂ、６ｃのバルブを操作して、上記懸濁液を第２のふる
い分け器６ｂより第１のふるい分け器６ａを通して培養
タンク４へ戻す。

これにより、懸濁液中のカルス誘導体のうち、３７〜６
４メツシユの大きさのカルス誘導体が第１のふるい分け
器６ａにためられる。

ついで、ポンプ１２の吐出側回路内のバルブ１３．１４
の開閉を逆にすると共に、培養タンク４側のバルブ１０
ｃを閉、供給管９ａ、９ｂ側の１個のバルブ１０ａを開
として、この１個の供給管９ａより再分化培養液を供給
してこれを上記第１のふるい分け器６ａを逆流させ、出
口側の回路１５を経て再分化部２の培養タンク５へ送る
。このとき、この出口側の回路１５中のドレン用のバル
ブ１６を閉、途中のバルブ１７を開にしておく。

胚原細胞培養部２の培養タンク５に供給されたカルス誘
導体は、ここで、供給管１８．１９より供給される再分
化培養液にて再分化培養されて幼植物状の不定胚に生長
される。

ついで、幼植物状の不定胚は上記カルス培養部１の場合
と同様に、ポンプ２０にて培養液ごとふるい分け装置７
に送られて、上記カルス培養部１と同様にして各ふるい
分け器７ａ、７ｂ。

７ｃにて所定の大きさにふるい分けられ、その後置床部
Ｂの懸濁液槽８に懸濁液と共に送られる。

次に置床部３の構成及び作用を説明する。

懸濁液槽８内の懸濁液はポンプ２１にて循環されている
。

懸濁液槽８には、置床アーム２２が上下方向に出し入れ
可能に浸漬しである。この置床アーム２２は中空に形成
され、かつ下面に多数個の吸込み穴２３が設けである。

そしてこの置床アーム２２の中空部の一端はポンプ２４
の吐出回路２５に、また他端はポンプ２４の吸入回路２
６に接続されている。この両回路２５．２６にはバルブ
２７．２８が介装しである。ポンプ２４の吐出回路２５
のバルブ２７の上流側及び下流側は第１、第２の流量調
整バルブ２９．３０を介してそれぞれ排液回路３１、吸
液回路３２に接続されている。その吸液回路３２はフィ
ルタ３３を介して排液タンク３４に接続しである。

またポンプ２４の吸入回路２６のバルブ２８の上流側は
バルブ３５を介して上記排液回路３１に接続されており
、またこの吸入回路２６のバルブ２８の下流側がバルブ
３６を介して排液回路３２に接続されている。

上記構成の置床部３において、バルブ２７３５．３６を
閉じた状態でポンプ２４を駆動すると、この吸入回路２
６、置床アーム２２の中空部、吐出回路２５のバルブ２
７の下流側、第２の流量調整バルブ３０、吸液回路３２
、フィルタ３３を経て排液タンク３４が吸液され、また
これの吐出液は第１の流量調整バルブ２９、排液回路３
１を経て排液タンク３４へ排出される。

このとき、第１の流量調整バルブ２つの絞り開度に対し
て第２の流量調整バルブ３０の絞り開度を絞ると、この
両流全調整バルブ２９３゜の間は負圧になり、従って、
置床アーム２２の中空部も負圧になり、この中空部内へ
穴２３よ＼ り懸濁槽８の懸濁液か吸引される。これにより、懸濁液
中に混入されている不定胚か吸込み穴２３に吸着される
。

その後置床アーム２２を懸濁液槽８より取り出して育苗
床の上方に移動し、バルブ操作により置床アーム２２内
の液を逆流させると共に、この置床アーム２２内を正圧
にし、置床アーム２２の穴２３に吸着されていた不定胚
を液と共に排出落下させて育苗床上に置床する。

上記置床アーム２２内の液の逆流及び正圧化は、バルブ
２８を閉じ、バルブ２５，３５３８を開とし、側流量調
整バルブ２９．３０絞り開度を共に絞ることによってな
される。

上記置床部２での作動を繰り返し行うことにより、順次
育苗床に不定胚が置床されていく。

３７は液補給用のポンプ、３８はドレン回路である。

第２図から第７図は不定胚の置床装置を示すもので、図
中４０は滅菌室、４１は置床室であり、この両室４０．
４１はドア４２を介して連通しており、かつこのドア４
２を通して両室４０゜４１にわたってコンベア装置４３
が設けである。

滅菌室４０には滅菌液タンク４４にポンプ４５を介して
接続したノズル４６が下方へ向けて設けてあり、またイ
ンタロックドア４７が設けである。４８は育苗床を有す
る本体４８ａと蓋体４８ｂとからなる育苗箱で、この育
苗箱４８はインタロックドア４７より滅菌室４０内のコ
ンベア装置４３上に載置され、コンベア装置４３により
ドア４２を通って置床室４１へ移動されるようになって
いる。

置床室４１の上部には、この置床室４１側に位置した育
苗箱４８の蓋体４８．を開ける蓋開は装置４９が設けで
ある。二の蓋開は装置４９はシリンダ装置５０の先端に
ノ１キュームカップ５１を取付けた構成となっている。

置床室４１内で、上記コンヘア装置４３の下流端より奥
側に上記第１図で説明した懸濁槽８が配置されており、
これの上方に、この懸濁槽８の上方からコンベア装置４
３上に位置する育苗箱４８の本体４８ａの上方にわたっ
て移動可能にして置床装置５２か設けである。

置床装置５２は第５図から第７図に示すようになってい
て、懸濁液槽８内に浸漬する置床アーム２２はスライド
本体５３に取付けられている。このスライド本体５３は
、置床室４１の側壁に設けたレール５４にコンベア装置
４３の走行方向に移動自在に懸架されたサドル５５に上
下方向にスライド自在に取付けである。そしてこのサド
ル５５とスライド本体５３とはシリンダ装置ら６にて連
結されている。またサドル５５とレール５４とは複数の
ローラ５７ａ、５−７ｂ。

５７ｃ・・・て転動連結しており、そのうちの一つのロ
ーラ５７ａかスライド本体５３に搭載したモータ５８に
連結されている。スライド本体５３内には１、第１図で
示した置床部３の回路構成、すなわち、吸排用のポンプ
２４、各バルブ２２゜２８．３５，３６、流量調整バル
ブ２９，３０、排液タンク３４、フィルタ３３及びこれ
らに接続する回路が内装されている。

上記置床装置５２における置床アーム２２はこの下面形
状は細長い帯状に形成され、この下面壁に多数個の吸込
み穴２３が規則正しく配設されている。またこの置床ア
ーム２２内は仕切り板５９にて先端部で連通ずる２つの
通路８０ａ。

６０ｂが上下に設けてあり、これの下側の通路６０ｂが
上記スライド本体５３に内装された回路の吐出回路２５
に、また上側の通路６０ａが吸入回路２６にそれぞれ接
続されている。

第２図、第３図において、６１は回路用ラックであり、
これに第１図で示したカルス培養部１と胚原細胞培養部
２の各培養タンク４．５及びふるい分け装置６，７及び
これらに接続する培養液タンク６２，６３、ドレンタン
ク６４等が取付けである。

滅菌室４０と置床室４１の上部にはへバフイルタロ５．
６５を有する換気装置６６が設けである。

上記構成において、育苗箱４８は蓋体４８ｂを閉した状
態でインクロックドア４７より滅菌室４０へ入れられ、
ここでノズル４６より噴出する滅菌液にて滅菌される。

ついてコンベア装置４３を駆動して育苗箱４８を置床室
４１に移動し、蓋開は装置４９で蓋体４８ｂを開ける。

この状態で、置床装置５２を作動して懸濁液槽８内の不
定胚を育苗箱４８の本体４８ａに設けた苗床に順次置床
する。

すなわち、サドル５５を懸濁液槽８側へ移動した状態で
、スライド本体５３を下動してこれに固着した置床アー
ム２２を懸濁液槽８内に浸漬し、ついで、置床アーム２
２の下側の通路６０ｂを負圧にしてこれの吸込み穴２３
に懸濁液中の不定胚を吸着固定する。その後、スライド
本体５３を上動して置床アーム２２を懸濁液槽８内より
上昇させ、ついでサドル５５を育苗箱４８側へ移動し、
置床アーム２２を育苗箱４８の育苗床の上面に近接させ
る。この状態で置床アーム２２の下側の通路を正圧にし
て吸込み穴２３に吸着固定されていた不定胚を育苗床上
に置床する。この動作を順次繰り返して育苗箱４８の育
苗床の全面に不定胚を置床する。

上記作業が完全したら、蓋開は装置４９にて蓋体４８ｂ
を閉じ、滅菌室４０を経て育苗箱４８を取り出す。

上記コンベア装置４３は室外に設けた図示しないハンド
ルにて手動にて作動してもよく、あるいはモータにて作
動するようにしてもよい。

上記したような不定胚の置床装置を用いた場合、最終的
な不定胚の収率が問題となるが、ます負圧によって吸引
することによる細胞塊の傷みについては約７４％の健全
な塊が得られ、実用上問題かなかった。また１回の吸引
作動による不定胚の吸引の収率は約６８％であり、さら
に収率をあげたい場合には吸引を繰り返せばよい。

〔発明の効果〕

本発明によれば、大量に培養されて培養液等の懸濁液中
にｌ♀遊している不定胚を手作業によることなく極めて
簡単に、かつ能率よく育苗床へ置床することかできる。

また上記置床する不定胚の大きさをそろえることができ
る。そしてさらに本発明によれば、従来必要とされた大
きなりリーンベンチやクリーンルーム等の培養関連施設
の大半が不要となり、このため苗の安価な生産が可能に
なり、広範な普及が望まれる。

【図面の簡単な説明】

図面は本発明の実施例を示すもので、第１図は全体の配
管構成図、第２図から第７図は不定胚の置床装置の実施
例を概略的に示すもので、第２図は縦断正面図、第３図
は横断平面図、第４図は第２図のルール線に沿う断面矢
視図、第５図は要部の側面図、第６図は要部の断面図、
第７図は置床アームの下面図、第８図は第７図の■−■
線に沿う断面図である。 １はカルス培養部、２は胚原細胞培養部、３は置床部、
４，５は培養タンク、６．７はふるい分け装置、８は懸
濁液槽、２２は置床アーム、２３は吸込み穴、４０は滅
菌室、４１は置床室、４３はコンベア装置、４８は育苗
箱、５２は置床装置。 出願人　　農林水産省野菜・茶業試験場長生　　　川　
　　邦　　　夫

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）幼植物を含む不定胚が浮遊している培養液等の懸
   濁液中に、小径の吸込み穴を多数有する管体を浸漬し、
   ついでこの管体内を負圧にして吸込み穴より上記懸濁液
   を吸引してこの吸込み穴に不定胚を吸着固定し、その後
   管体を懸濁液中より引き出し、育苗床部分まで移動して
   から管体内を正圧にして吸込み穴より不定胚を離脱させ
   て育苗床上に置床することを特徴とする不定胚の置床方
   法。
2. （２）懸濁液中へ不定胚を供給する際にふるい分けして
   不定胚の大きさをそろえることを特徴とする請求項１記
   載の不定胚の置床方法。
3. （３）少なくとも下側面に小径の吸込み穴を多数有する
   管体と、この管体に接続され、かつこの管体内を負圧と
   正圧の双方に切換え可能にした流体回路と、上記管体を
   上下動及び水平動する移動装置と、管体の水平移動方向
   一方に位置する懸濁液槽と、他方に位置する育苗床から
   なることを特徴とする不定胚の置床装置。
4. （４）懸濁液槽にふるい分け装置を介して不定胚培養装
   置を接続したことを特徴とする請求項３記載の不定胚の
   置床装置。