JPH04187643A - 血圧降下剤 - Google Patents
血圧降下剤Info
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- JPH04187643A JPH04187643A JP2316117A JP31611790A JPH04187643A JP H04187643 A JPH04187643 A JP H04187643A JP 2316117 A JP2316117 A JP 2316117A JP 31611790 A JP31611790 A JP 31611790A JP H04187643 A JPH04187643 A JP H04187643A
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- pro
- hydrolyzed
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、血圧降下剤に関するものであり、特に近年増
加の傾向が著しく、対策が望まれている高血圧症の予防
及び治療に有効な医薬品または食品への利用か期待され
る血圧降下剤に関するものである。
加の傾向が著しく、対策が望まれている高血圧症の予防
及び治療に有効な医薬品または食品への利用か期待され
る血圧降下剤に関するものである。
（従来の技術）
高血圧症は近年増加の傾向にあり、対策が望まれている
。従来、高血圧症の予防、治療に有効な物質は数多く知
られている。また、一方、日常の食物の摂取を通して病
気の予防に役立てようとする機能性食品に対する関心か
高まっている。
。従来、高血圧症の予防、治療に有効な物質は数多く知
られている。また、一方、日常の食物の摂取を通して病
気の予防に役立てようとする機能性食品に対する関心か
高まっている。
こうした観点から安全性の高い食品またはそれらの加水
分解物から血圧降下作用を有する物質を見い出す研究か
、最近とみに盛んに行われている。
分解物から血圧降下作用を有する物質を見い出す研究か
、最近とみに盛んに行われている。
その例は枚挙に暇のないほとであるか、例えば、牛乳カ
ゼインのトリプシン加水分解物由来のＡＣＥ（アンノオ
テンノン変換酵素）阻害物質を単離し、あるいは更にペ
プチダーゼで処理しｆこ血圧降下剤（特公昭６０−２３
０８５号、同６０−２３０８６号、同６０−２３０８７
号、特開昭６１−３６２２６号、同６１−３６２２７号
）、魚類蛋白質または大豆蛋白質をバチルス属細菌由来
のセリンプロテアーゼ、バチルス属由来の金属プロテア
ーゼまたは植物由来のチオールプロテアーゼで加水分解
して得たペプチドを有効成分とする血圧降下剤、とうも
ろこし蛋白質の一成分であるγ−ゼイン中に含まれる
Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒ。
ゼインのトリプシン加水分解物由来のＡＣＥ（アンノオ
テンノン変換酵素）阻害物質を単離し、あるいは更にペ
プチダーゼで処理しｆこ血圧降下剤（特公昭６０−２３
０８５号、同６０−２３０８６号、同６０−２３０８７
号、特開昭６１−３６２２６号、同６１−３６２２７号
）、魚類蛋白質または大豆蛋白質をバチルス属細菌由来
のセリンプロテアーゼ、バチルス属由来の金属プロテア
ーゼまたは植物由来のチオールプロテアーゼで加水分解
して得たペプチドを有効成分とする血圧降下剤、とうも
ろこし蛋白質の一成分であるγ−ゼイン中に含まれる
Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒ。
を基本単位とする繰り返し構造部分からサーモライノノ
による加水分解後、更に酵素的まｆコは酸で分解して得
られる、Ｃ末端アミノ酸配列かＬｅｕ −Ｐｒｏ−Ｐｒ
ｏであるアミノ酸重合度３〜５のペプチドを有効成分と
するＡＣＥ阻害剤、等々数多くの提案かなされている。
による加水分解後、更に酵素的まｆコは酸で分解して得
られる、Ｃ末端アミノ酸配列かＬｅｕ −Ｐｒｏ−Ｐｒ
ｏであるアミノ酸重合度３〜５のペプチドを有効成分と
するＡＣＥ阻害剤、等々数多くの提案かなされている。
一方、小麦蛋白質中にはグルテンを形成する成分として
グルテニンとグリアンンが存在すること、グルテニンは
エタノールに不溶、希酸に溶解する性質を有し、これを
酵素キモトリプシンで加水分解するとき、Ｓｅｒ−Ｇｌ
ｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ
なるオクタペプチドが多量生成することが知られている
（ Ｚ、 Ｌｅｂｅｎｓｍ ｔｌｎｔｅｒｓ Ｆｏｒｓ
ｃｈ １８７： ２７−３４゜（１９８８乃。
グルテニンとグリアンンが存在すること、グルテニンは
エタノールに不溶、希酸に溶解する性質を有し、これを
酵素キモトリプシンで加水分解するとき、Ｓｅｒ−Ｇｌ
ｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ
なるオクタペプチドが多量生成することが知られている
（ Ｚ、 Ｌｅｂｅｎｓｍ ｔｌｎｔｅｒｓ Ｆｏｒｓ
ｃｈ １８７： ２７−３４゜（１９８８乃。
（発明が解決しようとする課題）
本発明は優れた血圧降下作用を有し、安全性が極めて高
く、安価かつ大量に供給でき、医薬品としてのみならず
機能性食品としても有用な血圧降下剤を提供することを
目的とする。
く、安価かつ大量に供給でき、医薬品としてのみならず
機能性食品としても有用な血圧降下剤を提供することを
目的とする。
（課題を解決するための手段）
本発明者らは、血圧降下剤作用を有する物質を種々検索
した結果、安価で最も一般的な食品用蛋白質の−っであ
る小麦蛋白質中のグルテニンを酵素キモトリプシンで加
水分解して得られる一定のペプチド、更には該加水分解
処理において、最も収量が多く得られる成分であるＳｅ
ｒ−Ｇｉｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ８Ｇｉｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ
−Ｐｈｅなるオクタペプチドか特に強い血圧降下作用を
有することを見い出し、本発明を完成し１こ。
した結果、安価で最も一般的な食品用蛋白質の−っであ
る小麦蛋白質中のグルテニンを酵素キモトリプシンで加
水分解して得られる一定のペプチド、更には該加水分解
処理において、最も収量が多く得られる成分であるＳｅ
ｒ−Ｇｉｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ８Ｇｉｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ
−Ｐｈｅなるオクタペプチドか特に強い血圧降下作用を
有することを見い出し、本発明を完成し１こ。
すなわち、請求項１記載の本発明は小麦グルテニンをキ
モトリプシンて加水分解して得られる特定分子量範囲の
ペプチドを有効成分とする血圧降下剤であり、請求項２
記載の本発明は上記加水分解液中に多量に生成するＳｅ
ｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ
−Ｐｈｅなるオクタペプチドを有効成分とする血圧降下
剤である。
モトリプシンて加水分解して得られる特定分子量範囲の
ペプチドを有効成分とする血圧降下剤であり、請求項２
記載の本発明は上記加水分解液中に多量に生成するＳｅ
ｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ
−Ｐｈｅなるオクタペプチドを有効成分とする血圧降下
剤である。
以下、本発明の詳細な説明する。
本発明に使用する小麦グルテニンは、例えば、グルテン
の細粉を５０〜７０％（Ｖ／Ｖ）エタノール水溶液に懸
濁して放置した後、遠心分離等の適宜の手段で分離した
不溶解物を ０２％水酸化ナトリウムて抽出し、次いで
酢酸で中和して沈澱させる、等の公知の方法により調製
することかできる。
の細粉を５０〜７０％（Ｖ／Ｖ）エタノール水溶液に懸
濁して放置した後、遠心分離等の適宜の手段で分離した
不溶解物を ０２％水酸化ナトリウムて抽出し、次いで
酢酸で中和して沈澱させる、等の公知の方法により調製
することかできる。
使用する酵素キモトリプシンは、を推動物の膵臓から小
腸に分泌される酵素であり、ウソ膵臓等を起源とする市
販製品をそのまま用いることかできる。
腸に分泌される酵素であり、ウソ膵臓等を起源とする市
販製品をそのまま用いることかできる。
グルテニンのキモトリプシンによる加水分解は、通常、
単に水中または緩衝液（例えばトリス塩酸緩衝液、リン
酸緩衝液）中で行う。処理液中のグルテニンの濃度は、
反応特捜はん混合ができる範囲内であればいずれでもよ
いが、撹はんが容易な２〜２０％（ｗ／ｖ）の範囲で行
うのが望ましい。
単に水中または緩衝液（例えばトリス塩酸緩衝液、リン
酸緩衝液）中で行う。処理液中のグルテニンの濃度は、
反応特捜はん混合ができる範囲内であればいずれでもよ
いが、撹はんが容易な２〜２０％（ｗ／ｖ）の範囲で行
うのが望ましい。
酵素キモトリプシンの添加量は、その力価により異なる
が、通常は蛋白質当たり ０．０１重量％以上、好まし
くは ０６１〜１０重量％が適当である。反応液のｐ［
（、温度はキモトリプシンの至適ｐＨ１至適温度付近を
用いればよく、ｐＨは６〜１０より好ましくは７〜８、
温度は２０〜７０℃より好ましくは３０〜５０℃がそれ
ぞれ適当である。反応中のＩ）Ｆｌの調整は必要に応じ
水酸化ナトリウム水溶液、塩酸等により行う。
が、通常は蛋白質当たり ０．０１重量％以上、好まし
くは ０６１〜１０重量％が適当である。反応液のｐ［
（、温度はキモトリプシンの至適ｐＨ１至適温度付近を
用いればよく、ｐＨは６〜１０より好ましくは７〜８、
温度は２０〜７０℃より好ましくは３０〜５０℃がそれ
ぞれ適当である。反応中のＩ）Ｆｌの調整は必要に応じ
水酸化ナトリウム水溶液、塩酸等により行う。
反応時間は、基質濃度、酵素の添加量、反応温度、反応
ｐＨ１等の要因により異なるため一定ではないが、通常
は１〜５０時間程度である。
ｐＨ１等の要因により異なるため一定ではないが、通常
は１〜５０時間程度である。
加水分解反応の停止は、加水分解物の加熱あるいはクエ
ン酸、リンゴ酸等の有機酸、または塩酸、リン酸等の無
機酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ
の添加によるｐＨの変化等による酵素の失活、限外ろ過
膜等による酵素のる別など、公知の方法に従って行うこ
とかできる。
ン酸、リンゴ酸等の有機酸、または塩酸、リン酸等の無
機酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ
の添加によるｐＨの変化等による酵素の失活、限外ろ過
膜等による酵素のる別など、公知の方法に従って行うこ
とかできる。
本発明でいう小麦グルテニンのキモトリプシン加水分解
物であって、分子量か１０，０００以下の画分の含有量
が固形分基準で３０重量％以上である加水分解物として
は、小麦グルテニンを上述のようにして加水分解して得
られる加水分解液もしくはこれを必要に応じ固液分離（
例えば遠心分離、ろ過等）して得られる液を、分別（例
えば限外ろ過、ゲルろ過等による）して得られる分子量
が１０，０００以下の画分を含有する液またはその濃縮
物（例えば濃縮液、噴霧乾燥物、凍結乾燥物、流動床乾
燥物等）を包含する。なお、本発明でいう固形分基準に
おける固形分とは水分を蒸発、乾燥させた乾燥物という
意味であるか、より詳しくいえば１０５℃で４時間乾燥
したものをいう。
物であって、分子量か１０，０００以下の画分の含有量
が固形分基準で３０重量％以上である加水分解物として
は、小麦グルテニンを上述のようにして加水分解して得
られる加水分解液もしくはこれを必要に応じ固液分離（
例えば遠心分離、ろ過等）して得られる液を、分別（例
えば限外ろ過、ゲルろ過等による）して得られる分子量
が１０，０００以下の画分を含有する液またはその濃縮
物（例えば濃縮液、噴霧乾燥物、凍結乾燥物、流動床乾
燥物等）を包含する。なお、本発明でいう固形分基準に
おける固形分とは水分を蒸発、乾燥させた乾燥物という
意味であるか、より詳しくいえば１０５℃で４時間乾燥
したものをいう。
本発明の上記加水分解物は、経口または非経口的（静脈
注射、腹腔内注射等）に投与することによって、優れｆ
二面圧降下作用を発揮するが、本加水分解物中に多量存
在し、これから分別するなとして得られるＳｅｒ−Ｇｉ
ｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ
なるオクタペプチド及びその塩は、特に強い血圧降下作
用を示す。
注射、腹腔内注射等）に投与することによって、優れｆ
二面圧降下作用を発揮するが、本加水分解物中に多量存
在し、これから分別するなとして得られるＳｅｒ−Ｇｉ
ｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ
なるオクタペプチド及びその塩は、特に強い血圧降下作
用を示す。
グルテニン加水分解物から上記オクタペプチドを分別す
る一法としては、分解物をゲルろ過（例えばセファデッ
クスＧ−２５使用）、及び陽イオン交換樹脂（例えばＤ
ＯＷＥＸ ５０ＷＸ２使用）を行っていくつかのフラク
ションに分画し、上記オクタペプチドを含む画分を陰イ
オン交換樹脂（例えば、ＤｕｒｒｕＩｌｌＤＡＸ２−２
０ 使用）等に付して単一のオクタペプチドを分別す
る。
る一法としては、分解物をゲルろ過（例えばセファデッ
クスＧ−２５使用）、及び陽イオン交換樹脂（例えばＤ
ＯＷＥＸ ５０ＷＸ２使用）を行っていくつかのフラク
ションに分画し、上記オクタペプチドを含む画分を陰イ
オン交換樹脂（例えば、ＤｕｒｒｕＩｌｌＤＡＸ２−２
０ 使用）等に付して単一のオクタペプチドを分別す
る。
また、有機化学的合成法としては液相法、固相法の２Ｎ
があり、前者ではＢｏｃ（ターンヤリーブヂルオキシカ
ルボニル）基などで保護したアミノ酸をＤＭＦ （ジ
メチルホルムアミド）に溶解し、ＤＣＣ（ノノクロヘキ
ノルカルホノイミト）及びＨＯＢｔ（１−ヒドロキノベ
ンゾトリアゾール）の存在下で一昼夜反応させ、カルボ
キノ末端側から順次結合させる。また、後者ではアプラ
イド・バイオノステムズ社製ペプチド合成装置（４３０
Ａ型）などで、ＰＡＭ（フェニルアセタミドメチル）樹
脂にアミノ酸を順次伸長させ、フッ化水素などにより樹
脂及び各種保護基を切断し、目的とするオクタペプチド
を得る。
があり、前者ではＢｏｃ（ターンヤリーブヂルオキシカ
ルボニル）基などで保護したアミノ酸をＤＭＦ （ジ
メチルホルムアミド）に溶解し、ＤＣＣ（ノノクロヘキ
ノルカルホノイミト）及びＨＯＢｔ（１−ヒドロキノベ
ンゾトリアゾール）の存在下で一昼夜反応させ、カルボ
キノ末端側から順次結合させる。また、後者ではアプラ
イド・バイオノステムズ社製ペプチド合成装置（４３０
Ａ型）などで、ＰＡＭ（フェニルアセタミドメチル）樹
脂にアミノ酸を順次伸長させ、フッ化水素などにより樹
脂及び各種保護基を切断し、目的とするオクタペプチド
を得る。
本発明の請求項１の小麦グリアジン加水分解物及び請求
項２のペプチド （以下、両者を合わせて「本発明の物
質」と総称することがある）は、いずれもそのまま、あ
るいは通常少なくとも１つの製薬補助剤を加え、製薬組
成物として使用する。
項２のペプチド （以下、両者を合わせて「本発明の物
質」と総称することがある）は、いずれもそのまま、あ
るいは通常少なくとも１つの製薬補助剤を加え、製薬組
成物として使用する。
これらははいずれも非経口的（静脈注射、直腸投与等）
または経口的にヒトを初めとするは乳類に投与し、各投
与方法に適した形態に製剤することができる。
または経口的にヒトを初めとするは乳類に投与し、各投
与方法に適した形態に製剤することができる。
本発明の物質の急性毒性はいずれもＬ Ｄ ５ｏ（ラッ
ト経口投与）＞５９／に９である。
ト経口投与）＞５９／に９である。
また、本発明の物質は多量に摂取しても生体に悪影響を
与えないことから、そのまま、あるいは種々の栄養分等
を加えて、もしくは飲食物中に含有させて血圧降下作用
、高血圧予防の機能をもたせｒ二機能性食品、健康食品
として食してもよい。
与えないことから、そのまま、あるいは種々の栄養分等
を加えて、もしくは飲食物中に含有させて血圧降下作用
、高血圧予防の機能をもたせｒ二機能性食品、健康食品
として食してもよい。
（実施例）
次に本発明を実施例により説明する。
実施例１
小麦グルテン（関東化学（株）製）を２０倍８の６０％
（ｖ／ｖ）エタノール水溶液に分散し、時々撹はんしな
がら５時間放置した。遠心分離により上澄液を除き、更
に不溶解物には ６０％（ν／ｖ）エタノール水溶液５
偕容を加え１時間撹はんした。この操作をもう１度繰り
返した後、分離した不溶解物に ｌＯ倍８の０，２％水
酸化ナトリウムを加え、２時間撹はん抽出を行った。遠
心分離により不溶物を除去した後、これを酢酸で中和し
た。沈澱物を５８容の水に分散させた後遠心分離を行う
洗浄操作を２回行い、次いで凍結乾燥を行ってグルテニ
ンの乾燥物を得た。
（ｖ／ｖ）エタノール水溶液に分散し、時々撹はんしな
がら５時間放置した。遠心分離により上澄液を除き、更
に不溶解物には ６０％（ν／ｖ）エタノール水溶液５
偕容を加え１時間撹はんした。この操作をもう１度繰り
返した後、分離した不溶解物に ｌＯ倍８の０，２％水
酸化ナトリウムを加え、２時間撹はん抽出を行った。遠
心分離により不溶物を除去した後、これを酢酸で中和し
た。沈澱物を５８容の水に分散させた後遠心分離を行う
洗浄操作を２回行い、次いで凍結乾燥を行ってグルテニ
ンの乾燥物を得た。
上記により得たグルテニンＩＯ０ｇ（固形分）を純水２
Ｑに分散し、これにキモトリプシン（関東化学（株）製
つン膵臓由来）を加え、５０℃で１５時間撹はん反応さ
せた。反応中２Ｎ水酸化ナトリウムを適宜滴下してｐＨ
を８．０ に保った。次いでキモトリプシンを更に１ｇ
追加し、５０℃で２４時間、ｐＨを８．０ に保って反
応させた。反応後、反応液をオートクレーブ中で１０５
℃で５分間加熱し、酵素を失活させた。
Ｑに分散し、これにキモトリプシン（関東化学（株）製
つン膵臓由来）を加え、５０℃で１５時間撹はん反応さ
せた。反応中２Ｎ水酸化ナトリウムを適宜滴下してｐＨ
を８．０ に保った。次いでキモトリプシンを更に１ｇ
追加し、５０℃で２４時間、ｐＨを８．０ に保って反
応させた。反応後、反応液をオートクレーブ中で１０５
℃で５分間加熱し、酵素を失活させた。
得られた加水分解物を５，０００ｒｐＩｌｌで１０分間
遠心分離し上清をアミコン（Ａｉｉｃｏｎ） ＰＭ−１
０（限外ろ過膜、分画分子量１０，０００、アミコン社
）を用いる限外ろ過に付し、ろ液を凍結乾燥して分画画
分濃縮物９４．２９（固形分）を得た。
遠心分離し上清をアミコン（Ａｉｉｃｏｎ） ＰＭ−１
０（限外ろ過膜、分画分子量１０，０００、アミコン社
）を用いる限外ろ過に付し、ろ液を凍結乾燥して分画画
分濃縮物９４．２９（固形分）を得た。
本加水分解物の分子量分布は以下により測定した。すな
わち、セファデックスＧ−２５（ファイン）のカラム（
１，３φＸ ＨＯｃｚ）に予め分子量既知の標準品を施
しく溶媒：０．１Ｍ酢酸アンモニウム）分子量と溶出位
置の関係を決定した。用いた標準品及びその分子量は次
のとおりである。
わち、セファデックスＧ−２５（ファイン）のカラム（
１，３φＸ ＨＯｃｚ）に予め分子量既知の標準品を施
しく溶媒：０．１Ｍ酢酸アンモニウム）分子量と溶出位
置の関係を決定した。用いた標準品及びその分子量は次
のとおりである。
リボヌクレアーゼＡ １３，７００アプロチ
ニン ６．５ＱＯグイノルフイン
２．１４７バシトラシン
１．４１１オキシトンン １，００
７グリシルグリシルアラニン ２０３次に同一条
件下に前記膜透過画分を流して得たゲルろ過パターンか
ら、膜透過画分は実質上分子量２００〜５．ＯＱＯのペ
プチドからなっており、分子量５．０００を越えるペプ
チド、並びに同２００未満のペプチド及びアミノ酸を殆
ど含有していないことか明らかであった。
ニン ６．５ＱＯグイノルフイン
２．１４７バシトラシン
１．４１１オキシトンン １，００
７グリシルグリシルアラニン ２０３次に同一条
件下に前記膜透過画分を流して得たゲルろ過パターンか
ら、膜透過画分は実質上分子量２００〜５．ＯＱＯのペ
プチドからなっており、分子量５．０００を越えるペプ
チド、並びに同２００未満のペプチド及びアミノ酸を殆
ど含有していないことか明らかであった。
実施例２
グルテニン加水分解物からＳｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇ
ｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅの調製実施例１
で得た加水分解物５００■を０．ＩＭＮエチルモルホリ
ノ酢酸（ｐＨ６，５）に溶解し、セファデックスＧ−２
５スーパーフアインのカラムに添加して同一溶媒で溶出
した。血圧降下作用の大きなフラクションを集め減圧濃
縮し１こ。なお、この場合のカラム処理条件は次の通り
である。
ｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅの調製実施例１
で得た加水分解物５００■を０．ＩＭＮエチルモルホリ
ノ酢酸（ｐＨ６，５）に溶解し、セファデックスＧ−２
５スーパーフアインのカラムに添加して同一溶媒で溶出
した。血圧降下作用の大きなフラクションを集め減圧濃
縮し１こ。なお、この場合のカラム処理条件は次の通り
である。
カラム φ３ｘｌＯＯｃ肩
溶出溶媒 ０．１Ｍ Ｎ−エチルモルホリン酢酸（ｐＨ
６，５） 流 速 ２ ５ ＩＱ／ ｈｒ 次に、前記セファデックスＧ−２５で分画した活性フラ
クションを、陽イオン交換樹脂カラム（Ｄｏｗｅｘ５０
ＷＸ２２００〜４００ｍｅｓｈ）のカラムに添加し、以
下により分画を行った。
６，５） 流 速 ２ ５ ＩＱ／ ｈｒ 次に、前記セファデックスＧ−２５で分画した活性フラ
クションを、陽イオン交換樹脂カラム（Ｄｏｗｅｘ５０
ＷＸ２２００〜４００ｍｅｓｈ）のカラムに添加し、以
下により分画を行った。
カラム φ０．９ Ｘ １１０ｃｓ＋溶出溶媒 ００
．２Ｍピリノン−酢酸緩衝液（ｐＨ３，１） １００
＋ｕ２ ■同上緩衝液３００ｘＱと１．０Ｍピリジン−酢酸緩衝
液（ｐＨ４，２）３［１１］ａ＋ｆｆによる直線濃度勾
配溶出 ■１．ＯＭピリジンー酢酸緩衝液 （ｐＨ５，０）１５０峠 流 速 ３２峠／ｈｒ 上記陽イオン交換樹脂クロマトグラフィーで分画した血
圧降下作用の大きなフラクションを濃縮し、更に以下条
件による陰イオン交換樹脂ＤｕｒｒｕｍＤＡＸ２−２０
のカラムに供した。
．２Ｍピリノン−酢酸緩衝液（ｐＨ３，１） １００
＋ｕ２ ■同上緩衝液３００ｘＱと１．０Ｍピリジン−酢酸緩衝
液（ｐＨ４，２）３［１１］ａ＋ｆｆによる直線濃度勾
配溶出 ■１．ＯＭピリジンー酢酸緩衝液 （ｐＨ５，０）１５０峠 流 速 ３２峠／ｈｒ 上記陽イオン交換樹脂クロマトグラフィーで分画した血
圧降下作用の大きなフラクションを濃縮し、更に以下条
件による陰イオン交換樹脂ＤｕｒｒｕｍＤＡＸ２−２０
のカラムに供した。
カラム ０．９φＸ ６０ｃ肩
溶出溶媒 ■Ｎ−エチルモルホリン１５＋Ｑ、αピコリ
ン２Ｇ峠、ピリジンＩＱｘ（ｌ及び水９５５ｘ（ｌから
なる溶液を酢酸 でｐＨ９，４に調整した緩衝液２ｏ峠 ■上記組成の溶液をＰＦ１８．４に調整した緩衝液３０
１ ■上記組成の溶液をｐＨ６，５に調整 した緩衝液４０ｘＱ ００．５Ｍ酢酸６０峠 ■２．ＯＭ酢酸１００１ 流 速 ２０ＩＱ／ｈｒ 次に、前記で得た活性フラクションをセファデックスＬ
Ｈ−２０カラムに添加し、脱塩を行う。
ン２Ｇ峠、ピリジンＩＱｘ（ｌ及び水９５５ｘ（ｌから
なる溶液を酢酸 でｐＨ９，４に調整した緩衝液２ｏ峠 ■上記組成の溶液をＰＦ１８．４に調整した緩衝液３０
１ ■上記組成の溶液をｐＨ６，５に調整 した緩衝液４０ｘＱ ００．５Ｍ酢酸６０峠 ■２．ＯＭ酢酸１００１ 流 速 ２０ＩＱ／ｈｒ 次に、前記で得た活性フラクションをセファデックスＬ
Ｈ−２０カラムに添加し、脱塩を行う。
この場合の処□理条件は以下の通りである。
カラム ２０φＸ ６０ｃｍ
溶出溶媒 純水
流 速 ０．４ｆｆ（！
面記により脱塩した試料を減圧乾固すると、白色粉末物
質が得られる。
質が得られる。
本物質を６Ｎ塩酸に溶かし、真空下でＩＩＯ’Ｃ２４時
間加熱後、アミノ酸分析計により分析したところ、次の
結果が得られた。
間加熱後、アミノ酸分析計により分析したところ、次の
結果が得られた。
アミノ酸 セリンに対するモル比５ｅｔ（セリ
ン） １００Ｇｌｕ（グルタミン酸）
４．２０Ｐｒｏ（プロリン） ２１
５Ｐｈｅ（フェニルアラニン） １１０更に、前記白
色粉末試料をペプチド構造自動解析装置によりエドマン
分解を行った。生成した８個のＰＴＨアミノ酸を高速液
体クロマトグラフィ−で同定し、アミノ酸の一次配列を
決ぬたところ、Ｓｅｒ−Ｇｉｎ−Ｇｉｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌ
ｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅなる構造を有することが確
認されｂｏ 実施例３ 合成法による Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌ
ｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅの調製 アプライド・パイオノステムズ社製ベブヂト合成装置（
４３０Ａ型）に０５ミリモルのＢｏｃ−Ｌ−Ｐｈｅ−０
−ＣＨ，−ＰＡＭ樹脂及び各２ミリモルのＢｏｃ−Ｌ−
Ｐｒｏ、 Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ、 Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｉｎ
、 Ｂｏａ−Ｌ−Ｇｌｎ、 Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ、 Ｂ
ｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ及びＢｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒを装着し、Ｄ
ＣＣによる無水対称法により、Ｌ−３ｅｒ−Ｌ−Ｇｌｎ
−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｐｒｏ−
Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｐｈｅ−０−ＣＨ、−ＰＡＭを合成し
た。次に、ペプチド研究所製フッ化水素処理装置に上記
合成ペプチド樹脂を導入し、アニソール１５峠を添加後
、液体フッ化水素１０ｚ（ｌを導入した。−２０℃３０
分、０°Ｃ３０分の反応後、フッ化水素を減圧下に除去
し、ペプチドを無水エーテルとクロロホルムで交互に３
回洗浄し、次いで２Ｎ酢酸６０峠に溶解して凍結乾燥し
た。この方法によりＳｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−
Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅの白色粉末２１３＋ｙ
を得た。
ン） １００Ｇｌｕ（グルタミン酸）
４．２０Ｐｒｏ（プロリン） ２１
５Ｐｈｅ（フェニルアラニン） １１０更に、前記白
色粉末試料をペプチド構造自動解析装置によりエドマン
分解を行った。生成した８個のＰＴＨアミノ酸を高速液
体クロマトグラフィ−で同定し、アミノ酸の一次配列を
決ぬたところ、Ｓｅｒ−Ｇｉｎ−Ｇｉｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌ
ｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅなる構造を有することが確
認されｂｏ 実施例３ 合成法による Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌ
ｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅの調製 アプライド・パイオノステムズ社製ベブヂト合成装置（
４３０Ａ型）に０５ミリモルのＢｏｃ−Ｌ−Ｐｈｅ−０
−ＣＨ，−ＰＡＭ樹脂及び各２ミリモルのＢｏｃ−Ｌ−
Ｐｒｏ、 Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ、 Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｉｎ
、 Ｂｏａ−Ｌ−Ｇｌｎ、 Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ、 Ｂ
ｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ及びＢｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒを装着し、Ｄ
ＣＣによる無水対称法により、Ｌ−３ｅｒ−Ｌ−Ｇｌｎ
−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｐｒｏ−
Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｐｈｅ−０−ＣＨ、−ＰＡＭを合成し
た。次に、ペプチド研究所製フッ化水素処理装置に上記
合成ペプチド樹脂を導入し、アニソール１５峠を添加後
、液体フッ化水素１０ｚ（ｌを導入した。−２０℃３０
分、０°Ｃ３０分の反応後、フッ化水素を減圧下に除去
し、ペプチドを無水エーテルとクロロホルムで交互に３
回洗浄し、次いで２Ｎ酢酸６０峠に溶解して凍結乾燥し
た。この方法によりＳｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−
Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅの白色粉末２１３＋ｙ
を得た。
本ペプチドの構造解析のため、６Ｎ塩酸による加水分解
後のアミノ酸分析（日立Ｌ−８５００型アミノ酸分析計
による）、質量分析（日本電子ＪＭＸ−ＤＸ ３０３型
による）、アミノ酸配列分Ｆｒ（呂律プロテインノーク
エンサーＰＳＱ−１システムによる）を、それぞれ実施
しｆ二。結果を表１に示す。
後のアミノ酸分析（日立Ｌ−８５００型アミノ酸分析計
による）、質量分析（日本電子ＪＭＸ−ＤＸ ３０３型
による）、アミノ酸配列分Ｆｒ（呂律プロテインノーク
エンサーＰＳＱ−１システムによる）を、それぞれ実施
しｆ二。結果を表１に示す。
Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（４，３） ９
５９ （Ｍ＋Ｈ）Ｐｒｏ−Ｐｈｅ Ｐｒｏ（２
，２）分解分析 試験例！ グルテニンのキモトリプシン加水分解物の血圧降下作用 動物はＩＯ週令の自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）（日
本ラット（株）、♂、体重２４０〜２８ｏ９．１群６匹
）を用いた。試料を生理食塩水に溶解し、有効成分とし
て２９／ ｋｙ一体重を腹腔内に投与した。対照として
は生理食塩水を腹腔内に投与し１ニ。
５９ （Ｍ＋Ｈ）Ｐｒｏ−Ｐｈｅ Ｐｒｏ（２
，２）分解分析 試験例！ グルテニンのキモトリプシン加水分解物の血圧降下作用 動物はＩＯ週令の自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）（日
本ラット（株）、♂、体重２４０〜２８ｏ９．１群６匹
）を用いた。試料を生理食塩水に溶解し、有効成分とし
て２９／ ｋｙ一体重を腹腔内に投与した。対照として
は生理食塩水を腹腔内に投与し１ニ。
血圧はラット・マウス用非観血血圧計ＴＫ−３５ｉ）
（ユニコム社製）を用い、投与前及び投与後任時的にＴ
ａ１ｌ−Ｃｕｆｆ法で測定した。結果を表２に示す。
（ユニコム社製）を用い、投与前及び投与後任時的にＴ
ａ１ｌ−Ｃｕｆｆ法で測定した。結果を表２に示す。
表２
対照区 １９０±６ １９５”５ １９７：７ １９０
＋７ １！ｔｏ：８投与区１）２０（１＋８ １８５ｉ
９＊Ｉｇ４ｉ７＊１８４ｆ１０１Ｆ３８＋５注１）加水
分解物２ｔｉ／ｋｙ一体重投与区単位はｚｘＨｇ （平
拘値士標準偏差）＊印は危険率５％で対照区と有意差あ
り表２に見られるように、グルテニンのキモトリブノン
加水分解物の投与によって、１〜５時間にわたって顕著
な血圧降下作用が認められた。
＋７ １！ｔｏ：８投与区１）２０（１＋８ １８５ｉ
９＊Ｉｇ４ｉ７＊１８４ｆ１０１Ｆ３８＋５注１）加水
分解物２ｔｉ／ｋｙ一体重投与区単位はｚｘＨｇ （平
拘値士標準偏差）＊印は危険率５％で対照区と有意差あ
り表２に見られるように、グルテニンのキモトリブノン
加水分解物の投与によって、１〜５時間にわたって顕著
な血圧降下作用が認められた。
試験例２
ペプチド ｒＳｅｒ−Ｇｉｎ−Ｇｉｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ
−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−ＰｈｅＪの血圧降下作用 ペプチドの投与量をＩ ５０ ｚｇ／ｋｇ一体重とした
以外は、試験例２と同様に試験を行った。結果を表３に
示す。
−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−ＰｈｅＪの血圧降下作用 ペプチドの投与量をＩ ５０ ｚｇ／ｋｇ一体重とした
以外は、試験例２と同様に試験を行った。結果を表３に
示す。
表３
対照区 １９北４２０２±８１９６±８１９７土７１９
０士１０注１）はペプチド１５０Ｒ９／ｋｇ一体重投与
区他は表１に同し 表３に見られるように、ペプチドＳｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌ
ｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅの投与に
よって、投与後１〜５時間にわたって顕著な血圧降下作
用が認められた。
０士１０注１）はペプチド１５０Ｒ９／ｋｇ一体重投与
区他は表１に同し 表３に見られるように、ペプチドＳｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌ
ｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅの投与に
よって、投与後１〜５時間にわたって顕著な血圧降下作
用が認められた。
（発明の効果）
請求項！及び２ ＥＣ！載の本発明によれば、安価な蛋
白原料である小麦グルテニンを原料とする等して、優れ
た効果を有する血圧効果剤が提供される。
白原料である小麦グルテニンを原料とする等して、優れ
た効果を有する血圧効果剤が提供される。
特許出願人 昭和産業株式会社
Claims (2)
- （１）小麦グルテニンのキモトリプシン加水分解物であ
って、分子量が１０，０００以下の画分の含有量が固形
分基準で３０重量％以上である加水分解物を有効成分と
する血圧降下剤。 - （２）ペプチドＳｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌ
ｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ及びその塩類を有効成分と
する血圧降下剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2316117A JP2952830B2 (ja) | 1990-11-22 | 1990-11-22 | 血圧降下剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2316117A JP2952830B2 (ja) | 1990-11-22 | 1990-11-22 | 血圧降下剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04187643A true JPH04187643A (ja) | 1992-07-06 |
| JP2952830B2 JP2952830B2 (ja) | 1999-09-27 |
Family
ID=18073437
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2316117A Expired - Fee Related JP2952830B2 (ja) | 1990-11-22 | 1990-11-22 | 血圧降下剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2952830B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0672352A1 (en) * | 1994-03-16 | 1995-09-20 | Campina Melkunie B.V. | Processes for the preparation of glutamine-rich peptides and food preparations made therewith |
| WO2007119590A1 (ja) * | 2006-03-31 | 2007-10-25 | Nisshin Pharma Inc. | 小麦由来の血圧低下用組成物 |
| JP2014043442A (ja) * | 2012-07-31 | 2014-03-13 | Sunstar Inc | 米糠酵素処理組成物 |
| WO2021107080A1 (ja) * | 2019-11-28 | 2021-06-03 | 国立大学法人京都大学 | ペプチド |
-
1990
- 1990-11-22 JP JP2316117A patent/JP2952830B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0672352A1 (en) * | 1994-03-16 | 1995-09-20 | Campina Melkunie B.V. | Processes for the preparation of glutamine-rich peptides and food preparations made therewith |
| NL9400418A (nl) * | 1994-03-16 | 1995-11-01 | Campina Melkunie Bv | Werkwijzen voor de bereiding van glutaminerijke peptiden en voedingspreparaten daarmee gemaakt. |
| WO2007119590A1 (ja) * | 2006-03-31 | 2007-10-25 | Nisshin Pharma Inc. | 小麦由来の血圧低下用組成物 |
| JPWO2007119590A1 (ja) * | 2006-03-31 | 2009-08-27 | 日清ファルマ株式会社 | 小麦由来の血圧低下用組成物 |
| JP2014043442A (ja) * | 2012-07-31 | 2014-03-13 | Sunstar Inc | 米糠酵素処理組成物 |
| JP2018070632A (ja) * | 2012-07-31 | 2018-05-10 | サンスター株式会社 | 米糠酵素処理組成物 |
| WO2021107080A1 (ja) * | 2019-11-28 | 2021-06-03 | 国立大学法人京都大学 | ペプチド |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2952830B2 (ja) | 1999-09-27 |
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