JPH0420140B2 - - Google Patents
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- JPH0420140B2 JPH0420140B2 JP58102599A JP10259983A JPH0420140B2 JP H0420140 B2 JPH0420140 B2 JP H0420140B2 JP 58102599 A JP58102599 A JP 58102599A JP 10259983 A JP10259983 A JP 10259983A JP H0420140 B2 JPH0420140 B2 JP H0420140B2
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- JP
- Japan
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- electrophoresis
- zone
- gel
- support
- buffer solution
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- Expired - Lifetime
Links
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44704—Details; Accessories
- G01N27/44717—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
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- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は、核酸の塩基配列決定法の装置化に係
り、特にその自動化、迅速化に好適な分離、分取
技術に関する。
り、特にその自動化、迅速化に好適な分離、分取
技術に関する。
従来、核酸の塩基配列決定は、専ら、マキサ
ム・ギルバート法（Methods Engymology
Vol.65、pp.495−701）により行われて来た。こ
の方法では、放射性同位体で標識された核酸を化
学的に断片化した後、電気泳動法にて、長さの異
なる断片をゲル支持体中で分子量順に整列後、ゲ
ル支持体をガラス板よりはがし、このオートラジ
オグラムを撮る事で放射性断片を含む泳動帯の検
出を行い、配列を決定するが、このゲル支持体の
取り扱いには熟練が必要であり、分離、検出工程
の装置化が望まれている。
ム・ギルバート法（Methods Engymology
Vol.65、pp.495−701）により行われて来た。こ
の方法では、放射性同位体で標識された核酸を化
学的に断片化した後、電気泳動法にて、長さの異
なる断片をゲル支持体中で分子量順に整列後、ゲ
ル支持体をガラス板よりはがし、このオートラジ
オグラムを撮る事で放射性断片を含む泳動帯の検
出を行い、配列を決定するが、このゲル支持体の
取り扱いには熟練が必要であり、分離、検出工程
の装置化が望まれている。
一方、特開昭57−10447号公報には泳動による
分離が終了したゲル支持体にシリンジ針を突き差
して泳動分離層を分取し、分取した試料のPHを測
定する技術が示されるが、この分取の手法を核酸
塩基配列決定装置に応用しても手動操作に手間が
かかり、連続的検出ができない。
分離が終了したゲル支持体にシリンジ針を突き差
して泳動分離層を分取し、分取した試料のPHを測
定する技術が示されるが、この分取の手法を核酸
塩基配列決定装置に応用しても手動操作に手間が
かかり、連続的検出ができない。
本発明の目的は、ゲル支持体に対し、手動操作
を施す事なく、電気泳動分離された核酸断片の連
続的検出を可能とする手段を提供することにあ
る。
を施す事なく、電気泳動分離された核酸断片の連
続的検出を可能とする手段を提供することにあ
る。
本発明では、検出同定すべき核酸断片に対し、
電気泳動方向と垂直な方向に電場をかけ、泳動支
持体より、これを連続的に流出させ、個別に定量
することを特徴とする。
電気泳動方向と垂直な方向に電場をかけ、泳動支
持体より、これを連続的に流出させ、個別に定量
することを特徴とする。
以下、本発明の一実施例を第１図により説明す
る。本装置は、２枚のガラス板３に挾まれた泳動
分離用ゲル２、その両端を浸す電極液槽１、高電
圧直流電源９、泳動帯溶出用緩衝液槽７及び同緩
衝液に電位勾配を与える低圧直流電源１０と放射
能検出器６を構成手段とする。
る。本装置は、２枚のガラス板３に挾まれた泳動
分離用ゲル２、その両端を浸す電極液槽１、高電
圧直流電源９、泳動帯溶出用緩衝液槽７及び同緩
衝液に電位勾配を与える低圧直流電源１０と放射
能検出器６を構成手段とする。
放射性同位体で標識された核酸試料をゲル２の
負極側に乗せ、ゲルの両端を電極液１に接しさせ
50V／cm（ゲル長）程度の電圧９で泳動すると、
同一分子量を持つ成分はそれぞれ泳動帯４を形成
しつつ負極より正極（図では上方より下向）に向
かい、分子量の対数にほゞ反比例した移動度で泳
動する。一方、ゲル正極端よりいく分負極端側に
寄つた付近のガラス板の穴１１を通じ、ゲル内液
と同じ組成の泳動帯溶出用緩衝液７をゆつくりと
流すと共に、これに泳動方向の電位勾配を大きく
は乱さない程度の電圧１０をかける。その結果、
分離された泳動帯４は回収され５、放射能検出器
６を通過し、放射線量が測定された後、廃液とし
て貯蔵される８。
負極側に乗せ、ゲルの両端を電極液１に接しさせ
50V／cm（ゲル長）程度の電圧９で泳動すると、
同一分子量を持つ成分はそれぞれ泳動帯４を形成
しつつ負極より正極（図では上方より下向）に向
かい、分子量の対数にほゞ反比例した移動度で泳
動する。一方、ゲル正極端よりいく分負極端側に
寄つた付近のガラス板の穴１１を通じ、ゲル内液
と同じ組成の泳動帯溶出用緩衝液７をゆつくりと
流すと共に、これに泳動方向の電位勾配を大きく
は乱さない程度の電圧１０をかける。その結果、
分離された泳動帯４は回収され５、放射能検出器
６を通過し、放射線量が測定された後、廃液とし
て貯蔵される８。
本発明は従来法に比し、次の４長所を有す。
１ 一般に電気泳動法では、本発明の場合も含め
ゲル両端は電極液に対し開放状態にあるので、
配列決定用DNA変性ゲルに含まれる高濃度
（８モル程度）尿素は電極液中に拡散すると共
に、多少負極側に泳動される。これにより生ず
るゲル正極端付近の尿素濃度低下により、その
付近の電位勾配が急になる等の結果、泳動帯の
圧縮が起こり、分離が悪くなる。この現象に対
し、従来法では防ぐ手立が無かつたが、本発明
では、ゲル正極端より少し負極端に寄つた所か
らゲル内組成と同じ組成を持つ緩衝液で泳動帯
を溶出するので、泳動帯圧縮の影響を避けら
れ、分離能が向上した。
ゲル両端は電極液に対し開放状態にあるので、
配列決定用DNA変性ゲルに含まれる高濃度
（８モル程度）尿素は電極液中に拡散すると共
に、多少負極側に泳動される。これにより生ず
るゲル正極端付近の尿素濃度低下により、その
付近の電位勾配が急になる等の結果、泳動帯の
圧縮が起こり、分離が悪くなる。この現象に対
し、従来法では防ぐ手立が無かつたが、本発明
では、ゲル正極端より少し負極端に寄つた所か
らゲル内組成と同じ組成を持つ緩衝液で泳動帯
を溶出するので、泳動帯圧縮の影響を避けら
れ、分離能が向上した。
２ 従来法では泳動後、ゲルをガラス板よりはが
し、オートラジオグラムを撮るため、低分子量
成分が充分展開する泳動条件下では、高分子量
成分は、泳動距離不足からゲルの負極端側に圧
縮されたまま残り、塩基配列決定不能となる。
逆に、高分子量成分の分離を良くするために長
時間泳動すると、低分子量成分は正極端より流
出してしまうので検出できない。これは試料の
浪費であり、かつ必要以上の放射能汚染の原因
となる。これに対し本発明では、泳動を継続し
つつ、ゲル末端で泳動帯を検出するので、一回
の試行で低分子量成分から高分子量成分に至る
巾広い分子量領域（１〜1000塩基）の泳動帯の
検出が可能となり、試料の浪費も防げた。
し、オートラジオグラムを撮るため、低分子量
成分が充分展開する泳動条件下では、高分子量
成分は、泳動距離不足からゲルの負極端側に圧
縮されたまま残り、塩基配列決定不能となる。
逆に、高分子量成分の分離を良くするために長
時間泳動すると、低分子量成分は正極端より流
出してしまうので検出できない。これは試料の
浪費であり、かつ必要以上の放射能汚染の原因
となる。これに対し本発明では、泳動を継続し
つつ、ゲル末端で泳動帯を検出するので、一回
の試行で低分子量成分から高分子量成分に至る
巾広い分子量領域（１〜1000塩基）の泳動帯の
検出が可能となり、試料の浪費も防げた。
３ 従来法では泳動終了後、オートラジオグラム
を撮つていたが、本発明では泳動分離と並行し
て、検出するため、配列決定に要する時間の短
縮ができた。
を撮つていたが、本発明では泳動分離と並行し
て、検出するため、配列決定に要する時間の短
縮ができた。
４ 本装置では、実験者の放射線被曝を最小限に
抑えられると共に、放射性標識物を溶液の形で
回収できるので、廃棄物の後処理も簡便であ
る。
抑えられると共に、放射性標識物を溶液の形で
回収できるので、廃棄物の後処理も簡便であ
る。
第１図は本発明の一実施例の構成を示す側断面
図である。 １……泳動用緩衝液、２……アクリルアミドゲ
ル、３……ガラス板、４……分離泳動帯、５……
回収された泳動帯、６……放射能検出器、７……
溶出用緩衝液、８……廃液回収槽、９……高電圧
直流電源、１０……低電圧直流電源、１１……泳
動帯溶出用緩衝液流出口。
図である。 １……泳動用緩衝液、２……アクリルアミドゲ
ル、３……ガラス板、４……分離泳動帯、５……
回収された泳動帯、６……放射能検出器、７……
溶出用緩衝液、８……廃液回収槽、９……高電圧
直流電源、１０……低電圧直流電源、１１……泳
動帯溶出用緩衝液流出口。
Claims (1)
- １ 両端にそれぞれ溶液槽が設けられた電気泳動
支持体と、前記のそれぞれの溶液槽の溶液の間に
泳動用電圧を印加する手段を有し、泳動速度の差
により前記電気泳動支持体中で核酸断片を泳動帯
に分離する装置において、前記電気泳動支持体の
途中に前記泳動用電圧による泳動方向と交差する
方向に泳動帯溶出用の緩衝液を供給し、かつ導出
する配管と、前記電気泳動支持体をはさんで前記
泳動帯溶出用の緩衝液の上流側と下流側の間に泳
動帯溶出用の電位勾配を与える手段を備え、前記
緩衝液に溶出された泳動帯を検出することを特徴
とする核酸塩基配列自動決定装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58102599A JPS59228156A (ja) | 1983-06-10 | 1983-06-10 | 核酸塩基配列自動決定装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58102599A JPS59228156A (ja) | 1983-06-10 | 1983-06-10 | 核酸塩基配列自動決定装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59228156A JPS59228156A (ja) | 1984-12-21 |
| JPH0420140B2 true JPH0420140B2 (ja) | 1992-03-31 |
Family
ID=14331698
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58102599A Granted JPS59228156A (ja) | 1983-06-10 | 1983-06-10 | 核酸塩基配列自動決定装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59228156A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4729947A (en) * | 1984-03-29 | 1988-03-08 | The Board Of Regents Of The University Of Nebraska | DNA sequencing |
-
1983
- 1983-06-10 JP JP58102599A patent/JPS59228156A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS59228156A (ja) | 1984-12-21 |
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