JPH04202139A - 血管新生抑制剤 - Google Patents
血管新生抑制剤Info
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- JPH04202139A JPH04202139A JP2329941A JP32994190A JPH04202139A JP H04202139 A JPH04202139 A JP H04202139A JP 2329941 A JP2329941 A JP 2329941A JP 32994190 A JP32994190 A JP 32994190A JP H04202139 A JPH04202139 A JP H04202139A
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- JP
- Japan
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- cells
- vascularization
- suppressing
- endothelial cells
- culture
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は生理活性物質であるインターロイキン（以下、
ＩＬと記載する）−６を有効成分とする血管新生抑制剤
に関するものである。
ＩＬと記載する）−６を有効成分とする血管新生抑制剤
に関するものである。
（従来の技術）
ＩＬはリンパ球や単球が産生ずる可溶性物質であるが、
その作用についてはいまだ不明な点が多い。その一種で
あるＩ Ｌ−６は、抗原刺激を受けたＢ細胞が抗体産生
細胞へと増殖・分化する際に作用する蛋白質性の因子と
して知られている（ Ｐａｉｇｅ、Ｃ，Ｊ 、 、 ５
ｃｈｒｅｉｅｒ 、 Ｍ、１１． 、Ｓｉｄｍａｎ 、
Ｃ，Ｌ、 、 １９８２ 。
その作用についてはいまだ不明な点が多い。その一種で
あるＩ Ｌ−６は、抗原刺激を受けたＢ細胞が抗体産生
細胞へと増殖・分化する際に作用する蛋白質性の因子と
して知られている（ Ｐａｉｇｅ、Ｃ，Ｊ 、 、 ５
ｃｈｒｅｉｅｒ 、 Ｍ、１１． 、Ｓｉｄｍａｎ 、
Ｃ，Ｌ、 、 １９８２ 。
Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｆｒｏｍ ｃｌｏｎｅｄ Ｔ ｃ
ｅｌｌ １ｉｎｅｓ ｅｆｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｇｌ
ｏｂｌｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ Ｂ ｃｅｌ
ｌ、（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ。
ｅｌｌ １ｉｎｅｓ ｅｆｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｇｌ
ｏｂｌｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ Ｂ ｃｅｌ
ｌ、（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ。
Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ ７９：４７５Ｂ、 Ｔ、Ｋ
ｉｓｈｉｍｏｔｏ、Ｂｌｏｏｄ ｖｏｌ。
ｉｓｈｉｍｏｔｏ、Ｂｌｏｏｄ ｖｏｌ。
７４−１．ｐｉ−１ｏ、１９８９ ）が、その後の研究
により例えば造血作用等をも有する広範囲な生理活性を
有するサイト力インであることが明らかになっている。
により例えば造血作用等をも有する広範囲な生理活性を
有するサイト力インであることが明らかになっている。
近年になって、ＩＬ−６は前記のような免疫系における
作用の他にも、種々の作用を示すことが示唆されるよう
になった。本発明者らは、血管内皮細胞においてもＩ
Ｌ−６が産生されることに注目し、血管内皮細胞に対す
るＩ Ｌ−６の作用について研究を行ったところ、Ｉ
Ｌ−６が血管内皮細胞の遁走等の運動性に示される代謝
を抑制し、アクチンを重合させることによりその収縮を
引き起こし、また細胞同士が接合し難くするという知見
を得るに至り、それに基づき更に研究を行った結果、驚
くべきことにＩ Ｌ−６が血管新生を抑制することを見
出だし、Ｉ Ｌ−６を有効成分とする血管新生抑制剤を
発明するに至った。即ち本発”明は、Ｉ Ｌ−６の血管
内皮細胞による管腔形成を抑制する作用を通して血管新
生を抑制する、血管新生抑制剤である。
作用の他にも、種々の作用を示すことが示唆されるよう
になった。本発明者らは、血管内皮細胞においてもＩ
Ｌ−６が産生されることに注目し、血管内皮細胞に対す
るＩ Ｌ−６の作用について研究を行ったところ、Ｉ
Ｌ−６が血管内皮細胞の遁走等の運動性に示される代謝
を抑制し、アクチンを重合させることによりその収縮を
引き起こし、また細胞同士が接合し難くするという知見
を得るに至り、それに基づき更に研究を行った結果、驚
くべきことにＩ Ｌ−６が血管新生を抑制することを見
出だし、Ｉ Ｌ−６を有効成分とする血管新生抑制剤を
発明するに至った。即ち本発”明は、Ｉ Ｌ−６の血管
内皮細胞による管腔形成を抑制する作用を通して血管新
生を抑制する、血管新生抑制剤である。
（発明の構成）
本発明は、前述したような従来知られていない新知見に
基づき完成されたものであり、Ｉ Ｌ−６を有効成分と
する血管新生抑制剤である。以下、本発明の詳細な説明
する。
基づき完成されたものであり、Ｉ Ｌ−６を有効成分と
する血管新生抑制剤である。以下、本発明の詳細な説明
する。
Ｉ Ｌ−６は、ヒトのみならず例えばマウス等の動物に
おいても産生される蛋白質である。従って本発明は、ヒ
トやマウスをはじめとするＩ Ｌ−６を産生ずる動物種
に対する血管新生抑制剤である。
おいても産生される蛋白質である。従って本発明は、ヒ
トやマウスをはじめとするＩ Ｌ−６を産生ずる動物種
に対する血管新生抑制剤である。
その有効成分であるＩ Ｌ−６は、投与しようとする動
物種に由来するものであることが投与された動物におけ
る抗原抗体反応を勘案した場合には好ましい。
物種に由来するものであることが投与された動物におけ
る抗原抗体反応を勘案した場合には好ましい。
例えばヒトＩ Ｌ−６は、ヒトグリオブラストーマを培
養し、培養上清からこれを取得する方法（特開平１−１
３２３９８号）、ＩＬ−６をコードする遺伝子を調製し
てベクターを作製し、このベクターで形質転換した宿主
細胞を培養して製造する方法（特願昭６３−１６２５５
６号）、ＩＬ−６と特異的に結合する性質を有する抗Ｉ
Ｌ−６抗体やＩ Ｌ−６レセプターを使用して体液か
ら精製する方法等により取得することが出来る。
養し、培養上清からこれを取得する方法（特開平１−１
３２３９８号）、ＩＬ−６をコードする遺伝子を調製し
てベクターを作製し、このベクターで形質転換した宿主
細胞を培養して製造する方法（特願昭６３−１６２５５
６号）、ＩＬ−６と特異的に結合する性質を有する抗Ｉ
Ｌ−６抗体やＩ Ｌ−６レセプターを使用して体液か
ら精製する方法等により取得することが出来る。
Ｉ Ｌ−６はミ例えばヒトＩ Ｌ−６であれば通常は１
８４のアミノ酸残基からなるが、このようないわゆる全
長の蛋白質である必要はない。例えばＮ末端又はＣ末端
等に多少のアミノ酸配列が付加されていたり、Ｎ末端付
近、Ｃ末端付近又は配列の中間の一部のアミノ酸残基が
欠損していたり、更には配列中のアミノ酸残基の一部が
天然のアミノ酸残基から他のアミノ酸残基に置換されて
いたりする誘導体であっても、Ｉ Ｌ−６自体の生理活
性が失われていないものであれば血管新生抑制剤として
使用することが可能である。
８４のアミノ酸残基からなるが、このようないわゆる全
長の蛋白質である必要はない。例えばＮ末端又はＣ末端
等に多少のアミノ酸配列が付加されていたり、Ｎ末端付
近、Ｃ末端付近又は配列の中間の一部のアミノ酸残基が
欠損していたり、更には配列中のアミノ酸残基の一部が
天然のアミノ酸残基から他のアミノ酸残基に置換されて
いたりする誘導体であっても、Ｉ Ｌ−６自体の生理活
性が失われていないものであれば血管新生抑制剤として
使用することが可能である。
本発明においては、動物体内での安定性を向上させるた
め、例えばポリエチレングリコールで修飾されたＩ Ｌ
−６を使用したり、リポソームに封入したＩ Ｌ−６を
使用することに制限はない。
め、例えばポリエチレングリコールで修飾されたＩ Ｌ
−６を使用したり、リポソームに封入したＩ Ｌ−６を
使用することに制限はない。
（発明の作用）
本発明は、Ｉ Ｌ−６が血管内皮細胞の遁走等の運動性
に示される代謝を抑制し、アクチンを重合させることに
よりその収縮を引き起こし、また細胞同士を接合し難く
することに基づいて完成されたものである。Ｉ Ｌ−６
を有効成分とする本発明の血管新生抑制剤は、少なくと
も、その運動性を抑制して血管内皮細胞の会合の機会を
減少させ更に血管内皮細胞が伸長し他の細胞と結合して
血管壁を形成するのを抑制することを通じ、血管新生を
抑制する作用を有するものである。
に示される代謝を抑制し、アクチンを重合させることに
よりその収縮を引き起こし、また細胞同士を接合し難く
することに基づいて完成されたものである。Ｉ Ｌ−６
を有効成分とする本発明の血管新生抑制剤は、少なくと
も、その運動性を抑制して血管内皮細胞の会合の機会を
減少させ更に血管内皮細胞が伸長し他の細胞と結合して
血管壁を形成するのを抑制することを通じ、血管新生を
抑制する作用を有するものである。
（実施例）
以下に本発明を更に詳細に説明するために実施例を記載
するが、これら実施例は一例であって本発明を限定する
ものではない。
するが、これら実施例は一例であって本発明を限定する
ものではない。
なお、本実施例において使用した血管内皮細胞（以下、
単に細胞と記載する）は、ウシ大動脈の血管内腔からメ
スを使用してかき取ったものを培養シャーレに移し、Ｍ
Ｅ Ｍ （Ｇｉｂｃｏ社製、Ｅａｇｌｅ培地）にウシ
胎児血清（Ｆｅ２）を１０％添加した培地中で初代培養
を行った後に継代培養を行ったものを使用した。
単に細胞と記載する）は、ウシ大動脈の血管内腔からメ
スを使用してかき取ったものを培養シャーレに移し、Ｍ
Ｅ Ｍ （Ｇｉｂｃｏ社製、Ｅａｇｌｅ培地）にウシ
胎児血清（Ｆｅ２）を１０％添加した培地中で初代培養
を行った後に継代培養を行ったものを使用した。
また、Ｉ Ｌ−６は、特願昭６３−１６２５５６号に記
載された方法に従い、Ｉ Ｌ−６をコードする遺伝子を
含むベクターにより形質転換した大腸菌を培養して製造
したもの（ＩＸＩＯＵ／ｍｇ）を使用した。ここで、本
実施例で使用する、ＩＬ−６の活性を示す単位は、ＩＵ
−Ｑ’、２自ｇであり、１ＵはＢ細胞セルラインである
５ＫＷ６−ＣＬ−４細胞の抗体産生に対する増強作用（
Ｅ、Ｃ９−５０）で定義されるものである。
載された方法に従い、Ｉ Ｌ−６をコードする遺伝子を
含むベクターにより形質転換した大腸菌を培養して製造
したもの（ＩＸＩＯＵ／ｍｇ）を使用した。ここで、本
実施例で使用する、ＩＬ−６の活性を示す単位は、ＩＵ
−Ｑ’、２自ｇであり、１ＵはＢ細胞セルラインである
５ＫＷ６−ＣＬ−４細胞の抗体産生に対する増強作用（
Ｅ、Ｃ９−５０）で定義されるものである。
実施例 Ｉ
ＢＢＲＣｖｏｌ、１５９ Ｎｏ、２．ｐ５７２−５７８
を参照して、細胞の血管新生がＩ Ｌ−６により抑制さ
れることを観察した。
を参照して、細胞の血管新生がＩ Ｌ−６により抑制さ
れることを観察した。
２種のコラーゲンゲル（Ｃｏ ｌ Ｉ ａｇｅｎ社製、
Ｖｉｔｒｏｇｅｎ １００．９５−１００％ｔｙｐｅ
Ｉ ｃｏｌｌａｇｅｎ、ｔｙｐｅＩＩＩ ｃｏｔＩａ
ｇｅｎ ）の８ｍｌに、１１の１０倍ＭＥＭ液（Ｇｉｂ
ｅＯ社製、１１用ＭＥＭ粉末を１００ｍ１の蒸留水に溶
解した溶液）及び１１１１１の０． ＩＮ ＮａＯＨ
を添加してゲル懸濁液を調製し、プレート（コーニング
社製、１２穴プレート）の穴に０．７５ｍ１ずつ分注し
て３７℃で放置してゲルプレートを調製した。
Ｖｉｔｒｏｇｅｎ １００．９５−１００％ｔｙｐｅ
Ｉ ｃｏｌｌａｇｅｎ、ｔｙｐｅＩＩＩ ｃｏｔＩａ
ｇｅｎ ）の８ｍｌに、１１の１０倍ＭＥＭ液（Ｇｉｂ
ｅＯ社製、１１用ＭＥＭ粉末を１００ｍ１の蒸留水に溶
解した溶液）及び１１１１１の０． ＩＮ ＮａＯＨ
を添加してゲル懸濁液を調製し、プレート（コーニング
社製、１２穴プレート）の穴に０．７５ｍ１ずつ分注し
て３７℃で放置してゲルプレートを調製した。
固まったゲルプレートに、１０％ＦＣ３を含むＭＥＭで
３．５Ｘ１０４ 個の細胞／１に調整した細胞懸濁液の
２１を添加し、３７℃で２４時間培養を行った。
３．５Ｘ１０４ 個の細胞／１に調整した細胞懸濁液の
２１を添加し、３７℃で２４時間培養を行った。
穴から上清を除去した後、前記した様にして調製したゲ
ル懸濁液を０．７５ｍ１ずつ添加し、３７℃で放置して
固まらせた。
ル懸濁液を０．７５ｍ１ずつ添加し、３７℃で放置して
固まらせた。
続いてＯ又は５００Ｕ／ｍｌのＩ Ｌ−６を含む、１０
％ＦＣ８を添加したＭＥＭをそれぞれ３つの穴に２１ず
つ添加し、３７℃で３日間培養し、ゲルプレート中での
血管の新生を観察した。ここで、比較のためにＩ Ｌ−
６を免疫原としてウサギに投与して得られたウサギ抗血
清の２５μｌをＩＬ−６と同時に添加したＭＥＭ及びこ
のウサギ抗血清２５μｍと１０％ＦＣ３のみを添加した
ＭＥＭについてもそれぞれ３穴又は２穴に添加し、同様
に培養を行った。ここで、抗Ｉ Ｌ−６ウサギ抗血清は
、少なくともＩ Ｌ−６のＢ細胞に対する抗体産生増強
作用をほぼ消失させる効果を有することを実験に先立っ
て確認した。
％ＦＣ８を添加したＭＥＭをそれぞれ３つの穴に２１ず
つ添加し、３７℃で３日間培養し、ゲルプレート中での
血管の新生を観察した。ここで、比較のためにＩ Ｌ−
６を免疫原としてウサギに投与して得られたウサギ抗血
清の２５μｌをＩＬ−６と同時に添加したＭＥＭ及びこ
のウサギ抗血清２５μｍと１０％ＦＣ３のみを添加した
ＭＥＭについてもそれぞれ３穴又は２穴に添加し、同様
に培養を行った。ここで、抗Ｉ Ｌ−６ウサギ抗血清は
、少なくともＩ Ｌ−６のＢ細胞に対する抗体産生増強
作用をほぼ消失させる効果を有することを実験に先立っ
て確認した。
その結果、Ｉ Ｌ−６を添加した溶液が共存する場合に
は細胞の血管新生（微小血管様構造体の新生）は著しく
抑制されるが、Ｉ Ｌ−６を添加していない溶液が共存
する場合には順調に血管が新生すること分かった。また
このＩ Ｌ−６の効果は、それ自体では細胞の血管新生
に影響を与えない抗Ｉ Ｌ−６ウサギ抗体により消失す
ることも分かった。
は細胞の血管新生（微小血管様構造体の新生）は著しく
抑制されるが、Ｉ Ｌ−６を添加していない溶液が共存
する場合には順調に血管が新生すること分かった。また
このＩ Ｌ−６の効果は、それ自体では細胞の血管新生
に影響を与えない抗Ｉ Ｌ−６ウサギ抗体により消失す
ることも分かった。
この結果は、Ｉ Ｌ−６が細胞の血管新生を抑制するこ
とを明白に示すものである。
とを明白に示すものである。
実施例 ２
細胞が透過可能な孔径（８μｍ）を有するフィルター（
厚さ１０．ｃｚｍｓ ミリポア社製、Ｎｕｃ Ｉ ｅｏ
ｐ。
厚さ１０．ｃｚｍｓ ミリポア社製、Ｎｕｃ Ｉ ｅｏ
ｐ。
ｒｅフィルター）により上室と下室とに分離された実験
装置（Ｎｅｕｒｏｐｏｂｅ社製、マイクロケモタクシス
チャンバー、上室容量５０μ１１下室容量２８゜５μｍ
）を使用して以下の実験を行い、種々の濃度のＩ Ｌ−
６が細胞の代謝に与える効果をその遊走の減少を通して
観察した。なお、本実験はＢＢＲＣｖｏｌ、１５９．Ｎ
ｏ、２．ｐ５７２−５７８を参照して行った。
装置（Ｎｅｕｒｏｐｏｂｅ社製、マイクロケモタクシス
チャンバー、上室容量５０μ１１下室容量２８゜５μｍ
）を使用して以下の実験を行い、種々の濃度のＩ Ｌ−
６が細胞の代謝に与える効果をその遊走の減少を通して
観察した。なお、本実験はＢＢＲＣｖｏｌ、１５９．Ｎ
ｏ、２．ｐ５７２−５７８を参照して行った。
まず、それぞれ０，５．５０又は５００Ｕ／ｍｌのＩ
Ｌ−６を含む２８．５μｍのＩ Ｌ−６溶液（前容量で
２８．５μｍとなるように２％ＦＣ３を含むＭＥＭにＩ
Ｌ−６を添加した溶液）を下室に加え、フィルター内
部まで当該溶液で満たされた状態とした。続いてフィル
ターで隔てられた上室に１×１０４ 個の細胞を懸濁し
た２％ＦＣ８を含むＭＥＭを加えた。
Ｌ−６を含む２８．５μｍのＩ Ｌ−６溶液（前容量で
２８．５μｍとなるように２％ＦＣ３を含むＭＥＭにＩ
Ｌ−６を添加した溶液）を下室に加え、フィルター内
部まで当該溶液で満たされた状態とした。続いてフィル
ターで隔てられた上室に１×１０４ 個の細胞を懸濁し
た２％ＦＣ８を含むＭＥＭを加えた。
３７℃で２１０分間放置した後、実験装置を解体してフ
ィルターをはずし、上室に接していた面を洗浄して付着
した細胞を除去した。フィルターの孔を通過してその下
室側の面に到達した細胞をアルコールで固定した後、ヘ
マトキシリン（シグマ社製）で細胞核を染色し、位相差
顕微鏡でその細胞数を測定した。
ィルターをはずし、上室に接していた面を洗浄して付着
した細胞を除去した。フィルターの孔を通過してその下
室側の面に到達した細胞をアルコールで固定した後、ヘ
マトキシリン（シグマ社製）で細胞核を染色し、位相差
顕微鏡でその細胞数を測定した。
以上の実験を６回行った結果を表１に、その値をグラフ
化したものを図１に示す。
化したものを図１に示す。
表 １
表１及び図１からは、少なくとも５００Ｕ／ｍｌのＩ
Ｌ−６により細胞のフィルター透過率（遁走性）が低下
することが分かる。
Ｌ−６により細胞のフィルター透過率（遁走性）が低下
することが分かる。
この結果は、実施例１における５００Ｕ／ｍｌ濃度のＩ
Ｌ−６による細胞の血管新生の抑制が、細胞の代謝抑
制を通してのものであることを示すものである。
Ｌ−６による細胞の血管新生の抑制が、細胞の代謝抑
制を通してのものであることを示すものである。
実施例 ３
実施例１の結果が、Ｉ Ｌ−６が細胞の数を減少させた
結果中じたのではないことを確認するため、以下の実験
を行った。
結果中じたのではないことを確認するため、以下の実験
を行った。
実施例１で使用したゲルプレート４種について、上清を
除去した後、ゲル部分のみをプラスチックチューブに取
得して４℃で１２０ Ｏｒｐｍの遠心分離を５分間実施
し、沈殿を回収した。続いて１０μｍ１ｇ１０ｌｌ１と
なるようにＭＥＭに溶解したコラーゲン分解酵素（コラ
−ゲナーゼ、和光純薬（株）製）を０． ５ｍｌ添加し
、３７℃で振盪しながら２０分間反応させ、コラーゲン
を分解した後、４℃で１２０ Ｏｒｐｍの遠心分離を行
って沈殿に細胞を回収した。
除去した後、ゲル部分のみをプラスチックチューブに取
得して４℃で１２０ Ｏｒｐｍの遠心分離を５分間実施
し、沈殿を回収した。続いて１０μｍ１ｇ１０ｌｌ１と
なるようにＭＥＭに溶解したコラーゲン分解酵素（コラ
−ゲナーゼ、和光純薬（株）製）を０． ５ｍｌ添加し
、３７℃で振盪しながら２０分間反応させ、コラーゲン
を分解した後、４℃で１２０ Ｏｒｐｍの遠心分離を行
って沈殿に細胞を回収した。
得られた細胞沈殿に０． ５ｍｌの、０．０５％トリプ
シンと０．０５％ＥＤＴＡを含む溶液を添加して３７℃
で５分間反応させて細胞塊をばらばらにし、更に１０％
ＦＣ８を添加したＭＥＭを０゜５１添加してこの反応を
停止させた後、４℃で１２００ ｒｐｍの遠心分離を５
分間行い解離した細胞の沈殿を回収し、血球計算板を使
用して細胞数を測定した。
シンと０．０５％ＥＤＴＡを含む溶液を添加して３７℃
で５分間反応させて細胞塊をばらばらにし、更に１０％
ＦＣ８を添加したＭＥＭを０゜５１添加してこの反応を
停止させた後、４℃で１２００ ｒｐｍの遠心分離を５
分間行い解離した細胞の沈殿を回収し、血球計算板を使
用して細胞数を測定した。
その結果、Ｉ Ｌ−６を含まない、１０ ％ Ｆ ＣＳ
を添加したＭＥＭの存在下で培養したゲル（３穴分）か
ら得られた細胞数は、それぞれ１．２Ｂ、。
を添加したＭＥＭの存在下で培養したゲル（３穴分）か
ら得られた細胞数は、それぞれ１．２Ｂ、。
１．３５，１．４０ （ＸＩＯ５個）であったのに対し
、５００Ｕ／ｍｌのＩ Ｌ−６を含む、１０％ＦＣ８を
添加したＭＥＭの存在下で培養したゲル（３穴分）から
得られた細胞数は、それぞれ１６２．１．２７，１．２
４ （ＸＩＯ５個）であり、５００Ｕ／＋ｎｌのＩ Ｌ
−６及び２５μｍのウサギ抗血清を含む、１０％ＦＣ３
を添加したＭＥＭの存在下で培養したゲル（３穴分）か
ら得られた細胞数はそれぞれ、１．４６，１，４０，１
．３９（×１０５ 個）であり、２５μｍのウサギ抗血
清を含む、１０％ＦＣ３を添加したＭＥＭの存在下で培
養したゲル（２穴分）から得られた細胞数はそれぞれ、
１．３４，１．２５ （ｘｌＯ” 個）であった。
、５００Ｕ／ｍｌのＩ Ｌ−６を含む、１０％ＦＣ８を
添加したＭＥＭの存在下で培養したゲル（３穴分）から
得られた細胞数は、それぞれ１６２．１．２７，１．２
４ （ＸＩＯ５個）であり、５００Ｕ／＋ｎｌのＩ Ｌ
−６及び２５μｍのウサギ抗血清を含む、１０％ＦＣ３
を添加したＭＥＭの存在下で培養したゲル（３穴分）か
ら得られた細胞数はそれぞれ、１．４６，１，４０，１
．３９（×１０５ 個）であり、２５μｍのウサギ抗血
清を含む、１０％ＦＣ３を添加したＭＥＭの存在下で培
養したゲル（２穴分）から得られた細胞数はそれぞれ、
１．３４，１．２５ （ｘｌＯ” 個）であった。
以上の結果、細胞の成育はＩ Ｌ−６の存在又は非存在
にかかわらないことが分かった。
にかかわらないことが分かった。
この結果は、実施例１及び実施例２で得られた結果はＩ
Ｌ−６によって細胞数が減少して生じたものではない
ことを明白に示すものである。
Ｌ−６によって細胞数が減少して生じたものではない
ことを明白に示すものである。
実施例 ４
Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ ｖｏｌ、７Ｂ、
１）４４９８−４５０２．１９７９に記載された方法を
参照して、Ｉ Ｌ−６が細胞間接合を形成し難くするこ
とを観察した。
１）４４９８−４５０２．１９７９に記載された方法を
参照して、Ｉ Ｌ−６が細胞間接合を形成し難くするこ
とを観察した。
細胞をカバーグラス上にコンフルエントな状態になるま
で培養し、０又は５００Ｕ／ｍｌのＩＬ−＝ １３− ６を含む１０％ＦＣ３を添加した状態で更に２１時間培
養した後、Ｈａｎｋ−ｓ溶液（１１中に、０、８ｇ Ｎ
ａＣｌ、、 ０．４ｇ、ＫＣＩ 、 ０． １２１
ｇ Ｎａ２ＨＰ０ ・１２Ｈ０，０，０６ｇＫＨ２
ＰＯ４，１，００ｇグルコース、 ０． ２ｇ Ｍｇ
ＳＯ４・７Ｈ２０，０，１４ｇＣａＣｌ２．０．３５ｇ
ＮａＨＣＯを含む溶液）で洗浄し、ホルムアルデヒドで
固定した。
で培養し、０又は５００Ｕ／ｍｌのＩＬ−＝ １３− ６を含む１０％ＦＣ３を添加した状態で更に２１時間培
養した後、Ｈａｎｋ−ｓ溶液（１１中に、０、８ｇ Ｎ
ａＣｌ、、 ０．４ｇ、ＫＣＩ 、 ０． １２１
ｇ Ｎａ２ＨＰ０ ・１２Ｈ０，０，０６ｇＫＨ２
ＰＯ４，１，００ｇグルコース、 ０． ２ｇ Ｍｇ
ＳＯ４・７Ｈ２０，０，１４ｇＣａＣｌ２．０．３５ｇ
ＮａＨＣＯを含む溶液）で洗浄し、ホルムアルデヒドで
固定した。
固定物に対して蛍光染色剤（ＦＩＴＣ−ｐｈａｌｌｏｉ
ｄｉｎ、 シグマ社製）を２０ ｔｔ ｇ＃ｎｌとな
るように添加し、３７℃で４０分間静置後、カバーグラ
スをＨａｎｋ−ｓ溶液で洗浄し、蛍光顕微鏡で細胞内ア
クチンの重合度を観察した。
ｄｉｎ、 シグマ社製）を２０ ｔｔ ｇ＃ｎｌとな
るように添加し、３７℃で４０分間静置後、カバーグラ
スをＨａｎｋ−ｓ溶液で洗浄し、蛍光顕微鏡で細胞内ア
クチンの重合度を観察した。
その結果、Ｉ Ｌ−６共存下で培養した場合には、ＩＬ
＝６非共存下で培養した場合と比較して明らかに細胞同
士が接合していないことが分かった。
＝６非共存下で培養した場合と比較して明らかに細胞同
士が接合していないことが分かった。
（発明の効果）
血管新生は、例えば傷の回復時に観察される生理的現象
であるばかりでなく、むしろ、一般に成人では癌、動脈
硬化、炎症時等の病的状態において観察される現象であ
る。
であるばかりでなく、むしろ、一般に成人では癌、動脈
硬化、炎症時等の病的状態において観察される現象であ
る。
例えば固形癌においては、腫瘍内に発生した血管が癌細
胞に酸素や栄養源を供給する結果、その無限ともいえる
増殖が維持され、腫瘍の成長と病状の悪化が引き起こさ
れるのである。また、慢性リュウマチに代表される慢性
炎症等では、患者の関節腔にも血管の新生が観察される
など、血管の新生と炎症の発生、悪化には深い関係があ
ることが分かる。
胞に酸素や栄養源を供給する結果、その無限ともいえる
増殖が維持され、腫瘍の成長と病状の悪化が引き起こさ
れるのである。また、慢性リュウマチに代表される慢性
炎症等では、患者の関節腔にも血管の新生が観察される
など、血管の新生と炎症の発生、悪化には深い関係があ
ることが分かる。
従って、本発明の血管新生抑制剤を癌や炎症等が生じた
部位に投与すれば、当該部位での血管新生が抑制される
結果、これらが悪化することを防止して症状を軽減する
ことが可能となるのである。
部位に投与すれば、当該部位での血管新生が抑制される
結果、これらが悪化することを防止して症状を軽減する
ことが可能となるのである。
図１は本発明の実施例２の結果を示すものである。それ
ぞれのカラムは、対象（Ｉ Ｌ−６濃度が０の場合）を
１００％とした時の値を示し、カラム上の実線はそれぞ
れの結果について統計処理をした場合のスタンダード・
エラー（Ｓ Ｅ）を示すものである。
ぞれのカラムは、対象（Ｉ Ｌ−６濃度が０の場合）を
１００％とした時の値を示し、カラム上の実線はそれぞ
れの結果について統計処理をした場合のスタンダード・
エラー（Ｓ Ｅ）を示すものである。
Claims (1)
- （１）インターロイキン−６を有効成分とする血管新生
抑制剤
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2329941A JPH04202139A (ja) | 1990-11-30 | 1990-11-30 | 血管新生抑制剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2329941A JPH04202139A (ja) | 1990-11-30 | 1990-11-30 | 血管新生抑制剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04202139A true JPH04202139A (ja) | 1992-07-22 |
Family
ID=18226983
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2329941A Pending JPH04202139A (ja) | 1990-11-30 | 1990-11-30 | 血管新生抑制剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04202139A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001017522A1 (en) * | 1999-09-08 | 2001-03-15 | Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority Doing Business As Carolinas Medical Center | Method of treating cancer using tetraethyl thiuram disulfide |
| US6548540B2 (en) | 1998-09-08 | 2003-04-15 | Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority | Method of treating cancer using dithiocarbamate derivatives |
| US6706759B1 (en) | 1998-09-08 | 2004-03-16 | Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority | Method of treating cancer using dithiocarbamate derivatives |
| US7816403B2 (en) | 1998-09-08 | 2010-10-19 | University Of Utah Research Foundation | Method of inhibiting ATF/CREB and cancer cell growth and pharmaceutical compositions for same |
-
1990
- 1990-11-30 JP JP2329941A patent/JPH04202139A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6548540B2 (en) | 1998-09-08 | 2003-04-15 | Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority | Method of treating cancer using dithiocarbamate derivatives |
| US6589987B2 (en) | 1998-09-08 | 2003-07-08 | Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority | Method of treating cancer using tetraethyl thiuram disulfide |
| US6706759B1 (en) | 1998-09-08 | 2004-03-16 | Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority | Method of treating cancer using dithiocarbamate derivatives |
| US7816403B2 (en) | 1998-09-08 | 2010-10-19 | University Of Utah Research Foundation | Method of inhibiting ATF/CREB and cancer cell growth and pharmaceutical compositions for same |
| WO2001017522A1 (en) * | 1999-09-08 | 2001-03-15 | Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority Doing Business As Carolinas Medical Center | Method of treating cancer using tetraethyl thiuram disulfide |
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