JPH04213056A - 物質分画法および分画装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、物質分画法に関し、さ
らに詳しくは、従来レベルの分画（１０μｌまたは１０
μｇオーダー）はもちろんのこと、より微量物質（ｎｇ
オーダー）の分画も可能とする物質の分画法および分画
装置に関する。本発明は、タンパク質などの生体物質の
微量分析や精製に特に好適である。

【０００２】

【従来の技術】従来、混合成分を含む試料から目的物質
を溶液中で分離する方法としては、例えば、液体クロマ
トグラフィーの技術がある。液体クロマトグラフィーは
、多孔質ゲルなどの固定相を充填したカラム中を溶出液
などの移動相を流しつつ、分離したい試料（複数の溶質
）を注入し、カラム中を通過する間に分離する方法であ
り、ゲルパーミエイションクロマトグラフィー（ＧＰＣ
）、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグ
ラフィー、クロマトフォーカシング、アフィニティクロ
マトグラフィー、分配クロマトグラフィーなど多種類の
方法がある。

【０００３】最近では、微小化、均一化したクロマト剤
を耐圧カラムに充填し、高い圧力をかけて液を流過させ
、分離時間を大幅に短縮する高速液体クロマトグラフィ
ー（ＨＰＬＣ）が分析用、大量分取用として広く普及し
ている。

【０００４】液体クロマトグラフィーは、分離モードに
より大別すると、（ａ）溶質（物質）のサイズによって
分離するクロマトグラフィーと、（ｂ）溶質と固定相と
の間の相互作用を利用するクロマトグラフィーがある。 例えば、ＧＰＣは、多孔質粒子をつめたカラムを用い、
粒子中の細孔またはネットワークを利用して分離するも
ので、物質（分子）の大きさ（サイズ）の差をふるい分
ける形で分離する。イオン交換クロマトグラフィーでは
、溶質のイオン性部位と、固定相のイオン交換基とのイ
オン的相互作用を利用しており、例えば、タンパク質の
電気的性質の相違に基づく分離、特に、酵素の精製に有
効な方法である。また、アフィニティクロマトグラフィ
ーは、溶質と固定相との間の特異的な親和性を利用する
ものであり、例えば、酵素と基質間の特異的な複合体形
成を利用したクロマトグラフィー、抗原−抗体反応を利
用した免疫アフィニティクロマトグラフィーなどがある
。

【０００５】これらの液体クロマトグラフィーでは、通
常、カラムに分子ふるい剤（多孔質ゲル）やイオン交換
剤、アフィニティ・クロマト剤などを充填し、カラム上
部に試料を載せ、溶出液をポンプで送り込むか、あるい
はカラム下部から試料を溶出液とともにポンプで送り込
むと、試料中の成分はカラムを通過する間に分離し、溶
出順序にしたがってフラクションコレクターの試験管等
の複数の容器中に分別採取される。カラムの溶液流出口
から流出する溶液は、ＵＶモニターなどにより、分離さ
れた溶質濃度（例えば、タンパク質濃度）を読み取るこ
とができる。

【０００６】また、混合成分を含む試料から目的物質を
溶液中で分離する他の方法としては、例えば、ショ糖等
で密度勾配をつけた遠心管に試料を添加し、１，０００
〜８０，０００回転／分という回転速度で遠心分離して
、目的物質を密度の差に応じて分離する方法がある。 目的物質は、遠心管の所定箇所の溶液を注射針でシリン
ジ内に取り出すことにより分離する。

【０００７】ところで、このような従来技術では、数１
０μｌ〜ｍｌオーダーの溶液の分取が限界である。しか
も、溶液状態で分取するため、カラム内等で一度分離し
た各成分を試験管や注射器等の中で再び混合してしまう
可能性が高い。

【０００８】例えば、図３は、カラムクロマトグラフィ
ーによるタンパク質の分離において、溶出したタンパク
質濃度をＵＶモニターにより読み取り、各タンパク質の
分離パターンをチャートとして示した模式図である。図
３の縦軸はタンパク質濃度、横軸は溶出液量を示し、各
ピーク位置はタンパク質の種類に対応している。溶出液
は、溶出順序にしたがってフラクションコレクターの複
数の試験管中に順次分取されるが、図３の分離パターン
で、最初の５ｍｌを試験管に分取すると、ピークａに対
応するタンパク質の半分しか採取できないことになる。 次の溶出液量５〜１０ｍｌの部分を分取すると、ピーク
ａに対応するタンパク質の半分とピークｂに対応するタ
ンパク質の半分の混合物が採取されることになる。同様
に、溶出液量１０〜１５ｍｌの部分を分取すると、ピー
クｂに対応するタンパク質の半分とピークｃに対応する
タンパク質の半分の混合物が採取されることになる。し
たがって、カラム中で一度分離したタンパク質が試験管
に分取した段階で再混合してしまい、分離パターンに正
確に対応して目的物質を分画することができない。

【０００９】特に、目的物質が微量である場合、あるい
は分子の大きさや固定相との相互作用が類似している複
数の物質がある場合、従来の方法では、精密に分画する
ことは極めて困難である。溶出液を液滴として微量づつ
分取する方法が考えられるが、微量（例えばμｌオーダ
ー）の場合には液滴の形成が困難であり、しかも液滴と
して回収すると、上記と同様に分離した物質の再混合は
まぬがれない。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、混合
成分を含む試料から目的物質を溶液中で分離する方法に
おいて、分離パターンに対応して物質を精密に分画する
方法および装置を提供することにある。また、本発明の
目的は、極微量の物質であっても、精密に分画を可能と
する方法および装置を提供することにある。

【００１１】本発明者らは、前記従来技術の有する問題
点を克服するために鋭意研究した結果、液体クロマトグ
ラフィーなどにより、溶液中で分離された物質を含む溶
液を流出口から順次または経時的に流出させるとともに
、該流出口に対向して膜状体などの展開体を配置し、例
えば、流出口と展開体の面とを接触させつつ、展開体を
移動させるか、あるいは流出口を移動させることにより
、展開体面上に流出液を展開すると、分離パターンが精
密に展開体の面上に再現できることを見出した。

【００１２】また、この方法によれば、流出口からの溶
液の流出速度、流出口と展開体との相対的な移動速度な
どを調節することにより、従来法では分離が困難であっ
た微量物質や分子サイズ等が類似した複数の物質を容易
に分画することができる。

【００１３】この方法によれば、膜状体などの展開体面
上に分離された物質を順次固定することができるため、
前記再混合の問題を克服することができ、物質の分離、
精製、分析、分取などを容易に行なうことができる。そ
して、例えば、従来、分画する目的物質がタンパク質の
場合、タンパク質画分を脱塩、凍結乾燥等を行なってか
らアミノ酸分析を行なう必要があったが、この方法によ
れば、膜上に展開したままでアミノ酸分析が可能である
。本発明は、これらの知見に基づいて完成するに至った
ものである。

【００１４】

【課題を解決するための手段】かくして、本発明によれ
ば、溶液中で分離された物質を含む溶液を流出口から流
出させるとともに、該流出口および該流出口に対向して
配置した展開体を相対的に移動させて展開体面上に流出
液を展開することを特徴とする物質分画法が提供される
。

【００１５】また、本発明によれば、溶液中で分離され
た物質を含む溶液を流出させる流出口、該流出口に対向
して配置した展開体、および該流出口と展開体とを相対
的に移動させる手段とを含むことを特徴とする物質分画
装置が提供される。

【００１６】以下、本発明について詳述する。本発明に
おいて、混合成分を含む試料から目的物質を溶液中で分
離する方法としては、前記したＧＰＣ、イオン交換クロ
マトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、クロマト
フォーカシング、アフィニティクロマトグラフィー、分
配クロマトグラフィー、ＨＰＬＣなど各種液体クロマト
グラフィーや遠心分離などの方法が用いられる。これら
の分離方法の中でも、溶出液の経時的な展開の容易さの
観点から、カラムを用いた液体クロマトグラフィーの技
術が好ましい。

【００１７】分画対象物質は、特に限定されず、好まし
くは常温で不揮発性のものである。対象物質の中でも、
例えば、タンパク質（酵素等）などの生体物質の分析や
分取、精製に好適に使用できる。

【００１８】溶液中で分離した物質を展開する展開体は
、好ましくは平面状のものであって、材質は、吸水性、
疎水性、多孔質など、流出液を保持できるものであれば
よい。

【００１９】具体例としては、例えば、ナイロンメンブ
ラン、ニトロセルロースメンブラン、ポリテトラフルオ
ロエチレンメンブラン、ポリエチレンメンブラン等、天
然または合成有機高分子メンブラン（膜状体）を挙げる
ことができる。ニトロセルロースのように有機高分子（
例；セルロース）を化学的に処理し、改質して得たメン
ブランも含む。

【００２０】また、展開体としては、グラファイト、多
孔質ガラス、シリカ等の無機高分子メンブラン（膜状体
）、アルミニウム、アパタイト等の金属メンブラン、ア
ルミナ、窒化珪素等のセラミックスメンブラン、食塩等
の結晶を挙げることが出来る。さらに、これらの表面を
化学的、物理的に表面処理することで改質されたものも
含む。

【００２１】さらに、展開体としては、ナイロン、ニト
ロセルロース、セルロース、ポリテトラフルオロエチレ
ン、ポリエチレン等の有機高分子粒子、またはグラファ
イト、多孔質ガラス、シリカ等の無機高分子粒子、アル
ミニウム、アパタイト等の金属粒子、アルミナ等のセラ
ミックス粒子などを面状にしきつめたものを挙げること
ができ、また、これら有機高分子は、例えば酸化、還元
、加水分解などの化学的処理、例えばプラズマ照射など
の物理的処理で改質したもの、無機高分子粒子、金属粒
子、セラミックス粒子は、例えばイオンプレーティング
などの物理的、化学的に表面処理を行うことで改質され
たものも含む。

【００２２】また、展開体としては、アガロースゲル、
ポリアクリルアミドゲルや各種膜状体に溶液を含ませた
もの等、その性状がゲル状のものを挙げることができる
。また、ゲル状のもの以外に、乾燥状態のもの、高粘度
のものも用いることができる。

【００２３】展開法としては、溶液中で分離された物質
を含む溶液を流出口から流出させるとともに、該流出口
および該流出口に対向して配置した展開体を相対的に移
動させて展開体面上に流出液を展開する方法を採用する
。

【００２４】具体的には、例えば、液体クロマトグラフ
ィーを用いる場合には、溶出液の溶出順序にしたがって
経時的に溶出液の流出口から分離した物質を含む溶出液
を展開体の面上に展開していく方法がある。

【００２５】この場合、 （１）液体流出口を固定しておき、該流出口（例えば、
ノズル）が接触している展開体を水平方向に移動するこ
とにより、展開体の面上に物質を展開していく方法、（
２）膜状の展開体をロールに巻き取っていく上をノズル
が接触することで展開していく方法、（３）展開体面上
をノズルが左右または前後左右に動いて展開していく方
法、 （４）レコード盤状の展開体を回転させ、針のようなノ
ズルの先から分画したい液を出して展開していく方法（
例えば、ノズルを盤状展開体の中心側へ少しずつ移動さ
せる）、など各種の方法、あるいはこれらの方法を組み
合わせた方法などがある。

【００２６】溶液流出口と展開体とは相対的に移動する
ようにして、目的物質を含む溶液を展開体面上に展開で
きる方法であれば、特定の方法に限定されない。高粘度
の展開体を用いる場合は、流出口を展開体内に挿入して
、目的物質を展開体内に保持することができる。

【００２７】本発明の分画法および分画装置について、
図面を参照しながら、さらに具体的に説明する。図１お
よび図２は、物質の分離方法として液体クロマトグラフ
ィーを用いた場合の実施例を示す図である。図１におい
て、溶出液やポンプ、プログラマーなどを備えた高速液
体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置１に試料を注入
し、カラム２で分離された物質を含む溶出液は、ノズル
３から溶出順序にしたがってメンブラン４の上に展開さ
れる。メンブラン４は、移動手段であるロール５、６に
より水平方向に移動させ、ノズル３は、通常、液滴で分
画されない程度に離しておくか、あるいはメンブラン面
上に接触させておく。溶出液の流速およびメンブラン４
の移動速度が大きい場合には、ノズル３は、必ずしもメ
ンブラン面上に接触させる必要はないが、微量物質を精
密に分画するには、液滴を作らないように、液滴で分画
されない程度の微小間隔の非接触状態、または接触させ
て溶出液を展開することが好ましい。図２は、ロール８
に巻いたメンブラン７を、ノズル３から溶出液を線状に
展開１０した後、ロール９に巻き取る態様を示す。

【００２８】ＨＰＬＣにより分離された各成分物質は、
各成分を含む溶出液が経時的にメンブラン面上に展開さ
れるため、溶出液の流出速度やノズル３とメンブランの
相対的な移動速度を適宜調節することにより、メンブラ
ン上にカラムにより分離して得られる物質の分離パター
ンを実質的に再現することができる。

【００２９】流出口は、固定せずに左右にまたは前後左
右に移動させてもよい。また、前記したとおり、レコー
ド盤状の展開体を回転させつつ、ノズルを盤の中心方向
に移動するようにしてもよい。これらの相対的な移動手
段は、当業者であれば適宜選択することができる。

【００３０】流出液を展開するに際し、溶液の流出速度
および流出口と展開体との相対的移動速度は、展開体の
材質、所望の分画精度等にもよるが、溶液の流出速度は
、通常、分析可能な最小量、物質量及び一般分析で扱う
液量から、通常、０．００１μｌ／ｍｉｎ〜１０ｍｌ／
ｍｉｎ、一般のカラムクロマトグラフィー等で扱う量よ
り、好ましくは０．０１μｌ／ｍｉｎ〜５ｍｌ／ｍｉｎ
、ＨＰＬＣ等で分析に扱う量より、さらに好ましくは０
．０１μｌ／ｍｉｎ〜１ｍｌ／ｍｉｎであり、流出口と
展開体との相対的移動速度は、隣接して分離された微量
物質を精度良く分画するため、通常、１０μｍ／ｍｉｎ
〜７０００ｃｍ／ｍｉｎ、好ましくは１００μｍ／ｍｉ
ｎ〜１０００ｃｍ／ｍｉｎ、さらに好ましくは１ｍｍ／
ｍｉｎ〜１００ｃｍ／ｍｉｎの範囲で展開体面上に流出
液を展開することが望ましい。

【００３１】また、流出速度（ｍｌ／ｍｉｎ）／相対的
移動速度（ｃｍ／ｍｉｎ）の比をＡとすると、通常、１
０−１０≦Ａ≦１０４、好ましくは１０−７≦Ａ≦１０
３、さらに好ましくは１０−５≦Ａ≦１００の範囲で操
作することが望ましい。

【００３２】

【実施例】以下に実施例を挙げて、本発明についてさら
に具体的に説明するが、本発明は、これらの実施例のみ
に限定されるものではない。 ［実施例１］ リゾチーム（ｌｙｓｏｚｙｍｅ）タンパク質（八州薬品
製）を以下の条件でＴＯＳＯＨ社製の高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）にかけて分離した。分離試料は
、下記に示す条件でニトロセルロースメンブラン上に展
開した。

【００３３】（１）　　リゾチームタンパク質は、２５
ｍＭ　　リン酸緩衝液（ｐＨ６．４）に１ｍｇ／ｍｌ濃
度で溶かして用いた（以下、「サンプル」という）。分
画条件は、ゲル・カラムとして内径４．５ｍｍ×長さ７
．５ｃｍのＴＫＳｇｅｌ　　ＣＭ−３ＳＷ（ステンレス
製）を用い、１００μｌのサンプルをインジェクション
した。 ＜溶出液＞ Ａ：２５ｍＭ　　リン酸緩衝液（ｐＨ６．４）Ｂ：Ａ＋
０．５Ｍ　　ＮａＣｌ 図４に示すように、ＮａＣｌ濃度勾配が６０分で０から
０．５Ｍとなるようにリニアグラジエント溶出により、
流速０．３ｍｌ／ｍｉｎで溶出液を溶出した。このとき
、カラム中で分離された各成分を含む溶出液は、１．５
ｃｍ／ｍｉｎの速度で水平方向に移動するニトロセルロ
ースメンブラン（アマシャム社製）上に展開した。すな
わち、図１に示すように、ＨＰＬＣ装置１からカラム２
を経て分離された物質を含む溶出液は、水平方向に移動
する幅５ｃｍのニトロセルロースメンブラン４の面上に
、ノズル３を接触させて展開した。ロール５，６は、１
．５ｃｍ／ｍｉｎの回転速度で回転させた。また、ロー
ル５，６間の間隔は約３０ｃｍであった。ニトロセルロ
ースメンブランは、予め１０ｍＭ　　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ
（ｐＨ８．０）と０．１５ＮａＣｌとの混合溶液に浸し
ておき、湿った状態で用いた。また、操作中に乾燥しな
いように、適時噴霧器にて霧を吹き付けて湿らせた。

【００３４】（２）　　溶出液をニトロセルロースメン
ブランに展開した後、濾紙の上に該メンブレンを載せて
余分な水分をとり、その後、メンブレンを２００ｍｌの
１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、０．１５Ｍ
　　ＮａＣｌ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ＴＢＳＴ）
からなる混合液に浸し、洗浄した。

【００３５】（３）　　次いで、１０ｍＭ　　Ｔｒｉｓ
−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、０．１５Ｍ　　ＮａＣｌ、０
．５％Ｔｗｅｅｎ　　２０（ＴＢＳＴ）、０．１％ＢＳ
Ａからなる混合液に３０分間浸した。

【００３６】（４）　　ＴＢＳＴで３回洗浄した。

【００３７】（５）　　その後、ａｎｔｉ−Ｌｙｓｏｚ
ｙｍｅ　　ａｎｔｉｂｏｄｙ（抗リゾチーム抗体；マウ
スハイブリドーマ培養上清液より精製したもの）の１μ
ｇ／ｍｌＴＢＳＴ溶液に３０分間浸した。

【００３８】（６）　　ＴＢＳＴで３回洗浄した。

【００３９】（７）　　アルカリホスファターゼ結合　
　ａｎｔｉ　　ｍｏｕｓｅ　　ＩｇＧ　　ａｎｔｉｂｏ
ｄｙ　　の１μｇ／ｍｌ　　ＴＢＳＴ溶液に３０分間浸
した。

【００４０】（８）　　ＴＢＳＴで５回洗浄した。

【００４１】（９）　　次に、１００ｍＭ　　Ｔｒｉｓ
−ＨＣｌ（ｐＨ９．５）、１００ｍＭ　　ＮａＣｌ、５
ｍＭ　　ＭｇＣｌ２　　に浸し、その後、終濃度５ｍＭ
　　ＮＢＴ、５ｍＭＢＣＩＰになるようにＮＢＴとＢＣ
ＩＰを加え、暗所に１時間放置した。

【００４２】（１０）　　リゾチームの溶出箇所は紫に
変色し、その位置は２２〜２４．５分のところであった
。

【００４３】（１１）　　以上のようにしてメンブラン
に展開して、タンパク質を分画できた。

【００４４】［実施例２］ 被試験タンパク質溶液として、ミオグロビン、α−キモ
トリプシノーゲン、チトクロムＣ、リゾチームを各１ｍ
ｇ／ｍｌで混合したもの（２０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７
．４に溶解）を用い、以下の条件で各タンパク質を分離
した。

【００４５】（１）　　分離条件 ＴＯＳＯＨ社製ＨＰＬＣシステムを使用した。 ＜ゲル・カラム＞ ＴＳＫｇｅｌ　　ＣＭ−３ＳＷ 内径２．１ｍｍ×長さ１０ｃｍ （ステンレス製） ＜溶出液＞ Ａ：２５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）Ｂ：Ａ＋０．
５Ｍ　　ＮａＣｌ 図５に示すように、ＮａＣｌ濃度勾配が３０分で０から
０．５Ｍとなるようにリニアグラジエント溶出により、
流速０．２ｍｌ／ｍｉｎで溶出液を溶出した。上記混合
タンパク質溶液１０μｌをＨＰＬＣシステムに注入し、
上記条件で溶出した。溶出液の流出口は、１０ｃｍ／ｍ
ｉｎで移動するニトロセルロースメンブラン（アマシャ
ム社製）と接触させた。ニトロセルロースメンブランは
、予め１０ｍＭ　　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）と
０．１５Ｍ　　ＮａＣｌからなる混合液で湿らせたもの
を用いた。以上のようにして溶液中で分離したタンパク
質をメンブラン上に展開した（図１）。

【００４６】（２）　　以下、実施例１の（２）　　〜
（９）　　と同様に操作した。

【００４７】（３）　　リゾチームは１９．８〜２０分
のところに発色があった。

【００４８】（４）　　実施例１の（５）のａｎｔｉ−
Ｌｙｓｏｚｙｍｅ　　ａｎｔｉｂｏｄｙのかわりに、α
−キモトリプシノーゲンＡの抗体を用いて行なった。こ
のときは、上のメンブランで実施例１の（４）　　以下
の操作を行なった。

【００４９】（５）　　α−キモトリプシノーゲンは１
４．３〜１４．５分に発色があった。

【００５０】（６）　　チトクロムＣについても、α−
キモトリプシノーゲンと同様に行なうと発色は、１４．
５５〜１４．７５分にあった。

【００５１】以上のように、３成分のタンパク質を明瞭
に分離することができた。また、８０μｌ中に２成分（
α−キモトリプシノーゲンとチトクロムＣ）が出ていて
、従来法では分画はほぼ不可能であったものが、本発明
の方法で可能となった。

【００５２】

【発明の効果】本発明によれば、溶液中で分離した物質
を膜などの展開体面上に展開し、分画することにより、
分離パターン通りに分画できるので、分離したものの再
混合が防止される。また、このため従来では不可能であ
ったμｌオーダーの分画も膜上に経時的に展開すること
で可能となった。

【００５３】分画物がタンパク質の場合、本発明によれ
ば、膜上に展開したものをそのままアミノ酸分析にかけ
られるため、分離したタンバク質を従来のように脱塩、
凍結乾燥等にかけることが不要となり、そのため收率、
操作の面でも非常に有効にアミノ酸配列を決定できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】物質分画法および分画装置の具体例を示す略図
である。

【図２】物質分画法および分画装置の具体例を示す略図
である。

【図３】液体クロマトグラフィーを用いて得られるタン
パク質の分離パターンである。

【図４】実施例１または実施例２で採用している溶出条
件を示す図である。

【図５】実施例１または実施例２で採用している溶出条
件を示す図である。

【符号の説明】

１　　ＨＰＬＣ装置 ２　　カラム ３　　ノズル ４　　メンブラン（膜状体） ５　　ロール ６　　ロール ７　　メンブラン（膜状体） ８　　巻き取りロール ９　　巻き取りロール １０　　展開した流出液。

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　溶液中で分離された物質を含む溶液を
   流出口から流出させるとともに、該流出口および該流出
   口に対向して配置した展開体を相対的に移動させて展開
   体面上に流出液を展開することを特徴とする物質分画法
   。
2. 【請求項２】　　溶液の流出速度０．００１μｌ／ｍｉ
   ｎ〜１０ｍｌ／ｍｉｎ、かつ、流出口と展開体との相対
   的移動速度０．００１〜７０００ｃｍ／ｍｉｎの範囲で
   展開体面上に流出液を展開する請求項１記載の分画方法
   。
3. 【請求項３】　　流出速度（ｍｌ／ｍｉｎ）／相対的移
   動速度（ｃｍ／ｍｉｎ）の比をＡとすると、Ａが１０−
   １０≦Ａ≦１０４の範囲で操作される請求項１記載の物
   質分画法。
4. 【請求項４】　　展開体が、天然または合成有機高分子
   メンブラン（膜状体）、または無機高分子メンブラン（
   膜状体）である請求項１記載の物質分画法。
5. 【請求項５】　　展開体が、天然または合成有機高分子
   粒子、あるいは無機高分子粒子を面状にしきつめたもの
   である請求項１記載の物質分画法。
6. 【請求項６】　　展開体の性状がゲルである請求項１記
   載の物質分画法。
7. 【請求項７】　　流出液を展開体面上に連続的に展開す
   る請求項１記載の物質分画法。
8. 【請求項８】　　流出口と展開体面とが非接触である請
   求項１記載の物質分画法。
9. 【請求項９】　　流出口と展開体面とが接触している請
   求項１記載の物質分画法。
10. 【請求項１０】　　流出液が、液体クロマトグラフィー
    によって分離された物質を含む溶出液である請求項１な
    いし９のいずれか１項記載の物質分画法。
11. 【請求項１１】　　溶液中で分離された物質を含む溶液
    を流出させる流出口、該流出口に対向して配置した展開
    体、および該流出口と展開体とを相対的に移動させる手
    段とを含むことを特徴とする物質分画装置。