JPH04230687A - ４２−オキソラパマイシン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はラパマイシン（ｒａｐａ
ｍｙｃｉｎ）の酸化誘導体、その製造方法、および移植
拒絶反応、宿主対移植片疾患（ｈｏｓｔ　ｖｓ．　ｇｒ
ａｆｔ　ｄｉｓｅａｓｅ）、自己免疫疾患、炎症疾患お
よび真菌感染の治療におけるその使用方法に関する。

【０００２】

【従来技術および課題】ラパマイシンは、ｉｎ　ｖｉｔ
ｒｏ　および　ｉｎ　ｖｉｖｏ　の両方において、特に
カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃ
ａｎｓ）に対して抗真菌活性を有することが判明した、
ストレプトミセス・ヒグロスコピカス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）によって産
生される大環状トリエン系抗生物質である［シー・ベジ
ナ（Ｃ．Ｖｅｚｉｎａ）ら、ジェイ・アンチバイオト（
Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．）２８，７２１（１９７５）；
エス・エヌ・セガル（Ｓ．Ｎ．Ｓｅｈｇａｌ）ら、ジェ
イ・アンチバイオト，２８，７２７（１９７５）；エッ
チ・エイ・ベーカー（Ｈ．Ａ．Ｂａｋｅｒ）ら、ジェイ
・アンチバイオト，３１．５３９（１９７８）；米国特
許第３９２９９９２号および米国特許第３９９３７４９
号］。

【０００３】ラパマイシンは、単独で（米国特許第４８
８５１７１号）またはピシバニル（ｐｉｃｉｂａｎｉｌ
）と組み合わせて（米国特許第４４０１６５３号）、抗
腫瘍活性を有することがわかった。アール・マーテル（
Ｒ．Ｍａｒｔｅｌ）ら［カナディアン・ジャーナル・オ
ブ・フィジオロジカル・ファーマコロジー（Ｃａｎ．Ｊ
．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）５５，４８
（１９７７）］は、ラパマイシンが、多発性硬化症モデ
ルの実験的アレルギー性脳脊髄炎モデルにおいて、リウ
マチ様関節炎モデルのアジュバント関節炎モデルにおい
て効果的であり、ＩｇＥ様抗体形成を効果的に抑制する
と開示している。

【０００４】ラパマイシンの免疫抑制作用がＦＡＳＥＢ
３，３４１１（１９８９）に開示されており、ラパマイ
シンは移植拒絶反応を効果的に抑制すると示されている
（米国特許出願番号第３６２５４４号）。さらに、シク
ロスポリンＡおよびＦＫ−５０６、他の大環状分子も免
疫抑制剤として効果的であり、したがって移植拒絶反応
を予防するのに有用であると示されている［ＦＡＳＥＢ
３，３４１１（１９８９）；ＦＡＳＥＢ３，５２５６（
１９８９）；およびアール・ワイ・カルネ（Ｒ．Ｙ．Ｃ
ａｌｎｅ）ら、ランセット（Ｌａｎｃｅｔ）１１８３（
１９７８）］。

【０００５】ラパマイシンのモノ−およびジ−アシル化
誘導体（２８および４３位にてエステル化）が抗真菌剤
として有用であり（米国特許第４３１６８８５号）、ラ
パマイシンの水溶性プロドロッグを製造するのに用いら
れる（米国特許第４６５０８０３号）と示されている。 最近、ラパマイシンの番号付けの慣習が変わったため、
ケミカル・アブストラクト命名法によれば、前記のエス
テルは３１−および４２−位にある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、４２−位にお
けるヒドロキシル基が対応するケトンに酸化されたラパ
マイシンの一般式を有する抗真菌剤として有用なラパマ
イシン誘導体を提供する。

【化１】

【０００７】医薬上許容される塩は、ナトリウム、カリ
ウム等の無機性陽イオンから形成することができる。

【０００８】アルコールのケトンへの酸化は文献記載の
多くの方法により実施することができるが、官能基の反
応性は容易に予測できないため、ポリヒドロキシル化巨
大環におけるこの変換は自明ではない［アール・ビー・
ウッドワード（Ｒ．Ｂ．Ｗｏｏｄｗａｒｄ）ら、ジャー
ナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイエティー（
Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）１０３，３２１５（１
９８１）］。 ラパマイシンは１３−、３１−および４２−位にてヒド
ロキシル基を有するため、選択性および反応性の問題が
生じる。クロム、マンガン、銀、鉄、三酸化硫黄−ピリ
ジン、メタクロロ過安息香酸、ジメチルスルホキシド含
有の試薬を包含する多くの酸化方法は４２−オキソラパ
マイシンを生成できなかった。これらの反応性および選
択性の問題を解決するために、ルテニウムを基材とした
試薬を用いる４２−オキソラパマイシンの合成方法が開
発された。

【０００９】免疫抑制活性を、リンパ球増殖（ＬＡＦ）
を測定する　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　標準薬理試験方法にて
、および２種の　ｉｎ　ｖｉｖｏ　標準薬理試験方法に
て評価した。第１の　ｉｎ　ｖｉｖｏ　方法は、混合リ
ンパ球反応における本発明の化合物の効果を測定する膝
窩リンパ節（ＰＬＮ）試験方法であり、第２の　ｉｎ　
ｖｉｖｏ　方法でピンチ（ｐｉｎｃｈ）皮膚移植片の生
存期間を評価した。

【００１０】代表的化合物の免疫抑制作用の　ｉｎ　ｖ
ｉｔｒｏ　測定としてコミトゲン誘発の胸腺細胞増殖方
法（ＬＡＦ）を用いた。簡単には、正常なＢＡＬＢ／ｃ
マウスの胸腺からの細胞を、ＰＨＡおよびＩＬ−１と一
緒に７２時間培養し、最後の６時間はトリチウムチミジ
ンを適用した。細胞を種々の濃度のラパマイシン、シク
ロスポリンＡまたは試験化合物と共にまたはなしで培養
する。細胞を回収し、取り込まれた放射能を測定する。 リンパ球増殖の抑制を、非薬剤処理対照からの１分間当
たりの総数における％変化として検定する。結果を以下
の割合により表す：（３Ｈ−対照胸腺細胞−Ｈ３−ラパ
マイシン処理胸腺細胞）／（３Ｈ−対照胸腺細胞−Ｈ３
−試験化合物処理細胞）

【００１１】遺伝学的に異なる動物からのリンパ球様細
胞を組織培養にて合すると混合リンパ球反応（ＭＬＲ）
が起こる。各々が他方を刺激して、トリチウムチミジン
の合体により定量可能なＤＮＡ合成の増加をもたらす幼
若転換を受ける。ＭＬＲ刺激は主要組織適合性抗原での
不均衡と相関関係にあるため、ｉｎ　ｖｉｖｏ　膝窩リ
ンパ節（ＰＬＮ）試験方法は宿主対移植片疾患と密接に
関連する。簡単には、ＢＡＬＢ／ｃドナーからの照射脾
臓細胞を受容者Ｃ３Ｈマウスの右後足蹠に注射する。薬
剤を第０日から第４日まで毎日経口投与する。第３日お
よび第４日に、トリチウムチミジンを１日に２回腹腔内
投与する。第５日に、後足膝窩リンパ節を摘出し、溶解
させて放射能を測定する。対応する左ＰＬＮを注射した
後足のＰＬＮ対照として用いる。同種異型対照として非
薬剤処理の動物を用いて％抑制を算定する。６ｍｇ／ｋ
ｇの経口投与量でラパマイシンは８６％抑制を付与する
のに対して、シクロスポリンＡは同投与量で４３％抑制
を付与した。結果を次の比率にて示す：（３Ｈ−ＰＬＮ
細胞対照Ｃ３Ｈマウス−３Ｈ−ＰＬＮ細胞パラマイシン
処理Ｃ３Ｈマウス）／（３Ｈ−ＰＬＮ細胞対照Ｃ３Ｈマ
ウス−３Ｈ−ＰＬＮ細胞試験化合物処理Ｃ３Ｈマウス）

【００１２】第２の　ｉｎ　ｖｉｖｏ　試験方法は、雄
のＢＡＬＢ／ｃ受容者に移植した雄のＤＢＡ／２ドナー
からのピンチ皮膚移植片の生存期間を測定するようデザ
インする。該方法は、ビリンガム・アール・イー（Ｂｉ
ｌｌｉｎｇｈａｍ　Ｒ．Ｅ．）およびメダワー・ピー・
ビー（Ｍｅｄａｗａｒ　Ｐ．Ｂ．）、ジャーナル・オブ
・エクスペリメンタル・バイオロジー（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂ
ｉｏｌ）２８：３８５〜４０２（１９５１）より適合さ
せる。簡単には、同種移植片としてドナーからのピンチ
皮膚移植片を受容者の背に移植し、対照として自己移植
片を同一部位にて用いる。受容者を試験対照として種々
の濃度のシクロスポリンＡまたは試験化合物のいずれか
で腹腔内処理する。非処理受容者を拒絶反応対照として
用いる。移植片を毎日モニター観察し、移植片が乾燥し
、黒色痂皮を形成するまで観察を記録する。これを拒絶
反応日と考える。薬剤処理群の平均移植片生存期間（日
数±Ｓ．Ｄ．）を対照群と比較する。

【００１３】以下の表はこれら３種の標準試験方法にお
ける４２−オキソラパマイシンの結果を要約する。

【表１】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　ＬＡＦ１　　　　　　ＰＬＮ１　　　　　　　　
皮膚移植片　　　　　　　　化合物　　　　　　　　　
　　　　（比率）　　　　　（比率）　　　　　　（日
数＋ＳＤ）４２−オキソラパマイシン　　　　０．２２
　　　　−０．９３　　　　１０．１７±０．４１ラパ
マイシン　　　　　　　　　　　　　　　　１．０　　
　　　　　　１．０　　　　　　１２．０　　±１．７
１　：比率の計算は前記した。

【００１４】これら標準薬理試験方法の結果は、４２−
オキソラパマイシンが、ｉｎ　ｖｉｔｒｏおよび　ｉｎ
　ｖｉｖｏ　の両方にて免疫抑制活性であることを示す
。ＬＡＦ試験方法における正比率はＴ細胞増殖の抑制を
示す。免疫抑制剤を使用することなく、移植したピンチ
皮膚移植片は典型的には６〜７日以内に拒絶反応を示す
ので、４２−オキソラパマイシンで処理した場合の皮膚
移植片の生存期間の増加は、それらがさらに免疫抑制剤
として有用であることを示す。４２−オキソラパマイシ
ンはＰＬＮ試験方法にてＴ細胞増殖をもたらすと思われ
るが、皮膚移植片試験方法にて観察された生存期間の増
加と組み合わせると、この試験方法における負比率は免
疫応答の抑制に関連するＴサプレッサー細胞の増殖を意
味すると考えられる（アイ・ロイット（Ｉ．Ｒｏｉｔｔ
）ら、イムノロジー（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、シー・
ヴィー・モセビー（Ｃ．Ｖ．Ｍｏｓｅｂｙ　Ｃｏ．）１
９８９、ｐ１２．８〜１２．１１参照）。

【００１５】４２−オキソラパマイシンおよびラパマイ
シンの抗真菌活性を、抑制測定用のプレート検定を用い
、５個のカンジダ・アルビカンス株について測定した。 以下に、用いた典型的検定操作を示す。試験すべき化合
物を滅菌乾燥した１／４”プレートディスク上に置き、
乾燥させた。寒天プレートに真菌を接種し、固形化した
。含浸ディスクを接種した寒天表面に置き、個々の培養
について必要な期間中、インキュベートした。結果を増
殖を抑制するＭＩＣ（μｇ／ｍｌ）にて表す。

【表２】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　カンジダ・アルビカンス株　　　　化合物　
　　　　　　　ＡＴＣＣ１０２３１　　ＡＴＣＣ３８２
４６　　ＡＴＣＣ３８２４７　　ＡＴＣＣ３８２４８　
　　　３６６９４２−オキソ 　　ラパマイシン　　　　０．００６　　０．０５　　
　　０．１２５　　０．０２５　　０．０５ラパマイシ
ン　　　　　　０．００３　　０．０２５　　０．００
３　　０．００６　　０．０２５ＭＩＣ（μｇ／ｍｌ）
として

【００１６】これらの標準薬理試験方法の結果に基づい
て、該化合物は、心臓、腎臓、肝臓、骨髄、皮膚移植等
の移植拒絶反応；狼瘡、リウマチ様関節炎、真性糖尿病
、重症性筋無力症、多発性硬化症等の自己免疫疾患；お
よび乾癬、皮膚炎、湿疹、脂漏症、炎症性腸疾患等の炎
症疾患；および真菌感染の治療に有用である。

【００１７】本発明の化合物はそのままで、または医薬
担体と組み合わせてその必要とする哺乳動物に投与して
もよい。該医薬担体は固体または液体であってもよい。

【００１８】固体担体は、フレーバー剤、滑剤、可溶化
剤、沈澱防止剤、充填剤、潤滑剤、圧縮助剤、結合剤ま
たは錠剤−崩壊剤として作用しうる１種以上の物質を包
含し、さらにはカプセル化物質とすることができる。粉
末の場合、担体は微細化固体であり、微細化した活性成
分と混合したものである。錠剤の場合、活性成分を適当
な割合にて必須の圧縮特性を有する担体と混合し、所望
の形状および大きさに圧縮する。粉末および錠剤は、好
ましくは、９９％までの活性成分を含有する。適当な固
体担体は、例えば、リン酸カルシウム、ステアリン酸マ
グネシウム、タルク、ショ糖、乳糖、デキストリン、澱
粉、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、カルボ
キシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリジ
ン、低融点ワックスおよびイオン交換樹脂を包含する。

【００１９】液体担体は、溶液、懸濁液、エマルジョン
、シロップ、エリキシルおよび加圧組成物の製造に用い
られる。活性成分は水、有機溶媒、その混合物または医
薬上許容される油脂のような医薬上許容される液体担体
に溶解させるかまたは懸濁させることができる。液体担
体は、可溶化剤、乳化剤、緩衝剤、防腐剤、甘味剤、フ
レーバー剤、沈澱防止剤、増粘剤、着色剤、粘度調節剤
、安定化剤または浸透度調節剤のような他の適当な医薬
添加剤を含有していてもよい。経口および非経口投与用
の液体担体の適当例は、水（前記添加剤、例えば、セル
ロース誘導体、好ましくは、カルボキシメチルセルロー
スナトリウム溶液を一部に含有する）、アルコール（一
価アルコールおよび多価アルコール、例えば、グリコー
ルを包含する）およびその誘導体、および油類（例えば
、分別ココナッツ油および落花生油）を包含する。 非経口投与の場合、該担体は、さらにオレイン酸エチル
およびミリスチン酸イソプロピルのような油状エステル
とすることができる。滅菌液体担体は、非経口投与用の
滅菌液体形組成物にて有用である。加圧組成物用の液体
担体は、ハロゲン化炭化水素または他の医薬上許容され
る噴射剤とすることができる。

【００２０】滅菌溶液または懸濁液である液体医薬組成
物は、例えば、筋肉内、腹腔内または皮下内注射を介し
て利用することができる。滅菌溶液はまた、静脈内に投
与することもできる。該化合物は、液体または固体組成
物形のいずれにおいても経口投与することができる。

【００２１】好ましくは、医薬組成物は、例えば、錠剤
またはカプセルのような単位投与形である。かかる形態
において、組成物を適量の活性成分を含有する単位用量
に細分割し、単位投与形は、例えば、包装した粉末、バ
イアル、アンプル、予め充填したシリンジまたは液体含
有サシェー剤のような包装組成物とすることができる。 単位投与形は、例えば、カプセルまたは錠剤そのもので
あってもよく、あるいはパッケージ形における適当数の
かかるいずれの組成物であってもよい。治療において用
いられる投与量は、客観的に顧問医により決定されなけ
ればならない。

【００２２】加えて、４２−オキソラパマイシンは、０
．１〜５％、好ましくは２％の４２−オキソラパマイシ
ンを含有する医薬上許容されるビヒクルとの処方により
、溶液、クリームまたはローションとして用い、真菌感
染部位に投与してもよい。

【００２３】

【実施例】次に実施例を挙げて４２−オキソラパマイシ
ンの製造を説明する。 実施例１ Ｎ−メチルモルホリンＮ−オキシド０．２６ｇ（２．０
当量）、つづいてトリス（トリフェニルホスフィン）ル
テニウムジクロリド６０ｍｇを、３Å粉末のモレキュラ
ーシーブを介して、無水ジメチルホルムアミド１０ｍｌ
中のラパマイシン１．０ｇに加えた。酸化剤および触媒
を４８時間で８時間毎に（酸化剤０．２６ｇおよび触媒
６０ｍｇ）加える間中、反応混合物を室温にて撹拌した
。 室温にて２日後、反応物を酢酸エチルで希釈し、セライ
トを介して濾過して濾液を蒸発させた。４２−オキソラ
パマイシンおよび未反応のラパマイシン含有の残渣を、
ダイナマックス・カラム（Ｄｙｎａｍａｘ　ｃｏｌｕｍ
ｎ）を用いる逆相クロマトグラフィーに付し、移動相と
して７５％アセトニトリル／水を用いて分離し、ラパマ
イシン０．２５ｇおよび灰白色固体の４２−オキソラパ
マイシン０．２５ｇを得た。

【００２４】ＩＲ（ＫＢｒ）３４２５、１７２０ｃｍ−
１； １Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ３．４６（３Ｈ，ｓ）
、３．３５（３Ｈ，ｓ）、３．１４（３Ｈ，ｓ）、１．
７５（３Ｈ，ｓ）、１．６６（３Ｈ，ｓ）、１．２６（
３Ｈ，ｓ）； １３Ｃ　ＮＭＲ　　１６６．６、１６９．２３、２０７
．９８；ＭＳ（陰イオンＦＡＢ）９１１（Ｍ−）、８７
９、５９０、２９７および１４８

【００２５】実施例２ ルテニウム（ＩＶ）オキシド・モノ水和物１．０ｇを、
３Å粉末のモレキュラーシーブを介して、ジクロロメタ
ン３０ｍｌ中のラパマイシン１．０ｇに加えた。反応混
合物を８０℃にて一夜撹拌した。さらに、大部分の出発
物質が消費されるまで、ルテニウム（ＩＶ）オキシド０
．５０ｇを第２日および再度第３日に加えた。第４日に
反応混合物を酢酸エチルで希釈し、セライトを介して濾
過した。濾液を蒸発させて黄色油を得た。ダイナマック
ス・カラムおよび移動相として７５％アセトニトリル／
水を用いる逆相クロマトグラフィーにより、４２−オキ
ソラパマイシンから未反応ラパマイシンを分離した。 この分離により未反応ラパマイシン１００ｍｇおよび灰
白色固体の４２−オキソラパマイシン１００ｍｇを得た
。ＭＳ（陰イオンＦＡＢ）９１１。

【００２６】実施例３ アセトニトリル２００ｍｌ中、ラパマイシン１０ｇ（１
１ミリモル）の溶液に、Ｎ−メチルモルホリン　Ｎ−オ
キシド３．８ｇ（３当量）を、ついで過ルテニウム酸テ
トラ−ｎ−プロピルアンモニウム１９３ｍｇ（０．５５
ミリモル、０．０５当量）を加えた。１５分後および２
時間後、さらに過ルテニウム酸塩１９３ｍｇを加えた。 最終添加から１時間後、アセトニトリルを真空除去し、
残渣を溶出媒体として酢酸エチルを用いて６０〜２００
メッシュのシリカゲルを介して濾過した。溶出液として
ヘキサン／酢酸エチルを用いる６０〜２００メッシュの
シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーに付し、
エチルエーテルでトリチュレートして４２−オキソラパ
マイシン７４０ｍｇおよびラパマイシン８２０ｍｇを得
た。

【００２７】主にラパマイシンおよび４２−オキソラパ
マイシンを含有する残りのフラクションを合し、２回（
連続的に）酸化し、粗標記化合物を得た。溶出液として
酢酸エチルを用いる６０〜２００メッシュシリカゲル上
のグラビティークロマトグラフィーに付し、適当なフラ
クションから溶媒を除去し、さらに４２−オキソラパマ
イシン１．０ｇを得、エチルエーテルでトリチュレート
した。融点２００〜２０５℃。 　　元素分析 　　計算値（％）：Ｃ，６７．１５；Ｈ，８．５１；Ｎ
，１．５４　　測定値（％）：Ｃ，６６．９０；Ｈ，８
．３２；Ｎ，１．６５

【００２８】

【発明の効果】本発明によれば、４２−位のヒドロキシ
ル基を対応するケトンに酸化することで、ラパマイシン
構造を有する抗真菌剤として有用なラパマイシン誘導体
を得ることができる。

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　４２−オキソラパマイシンまたはその
   医薬上許容される塩。
2. 【請求項２】　　有効量の４２−オキソラパマイシンま
   たはその医薬上許容される塩を投与することを特徴とす
   る哺乳動物における移植拒絶反応、宿主対移植片疾患、
   自己免疫疾患および炎症疾患の治療方法。
3. 【請求項３】　　有効量の４２−オキソラパマイシンま
   たはその医薬上許容される塩を投与することを特徴とす
   る真菌感染の治療方法。
4. 【請求項４】　　酸化剤としてルテニウム触媒を用いて
   ラパマイシンの４２−位を酸化することからなることを
   特徴とする、ラパマイシンからの４２−オキソラパマイ
   シンの製造方法。
5. 【請求項５】　　酸化剤としてトリス（トリフェニルホ
   スフィン）ルテニウムを用いる請求項４記載の方法。
6. 【請求項６】　　酸化剤としてルテニウム（ＩＶ）オキ
   シドを用いる請求項４記載の方法。
7. 【請求項７】　　酸化剤として過ルテニウム酸テトラ−
   ｎ−プロピルアンモニウムを用いる請求項４記載の方法
   。
8. 【請求項８】　　請求項１記載の化合物またはその医薬
   上許容される塩と、医薬上許容される担体とからなる医
   薬組成物。
9. 【請求項９】　　単位投与形における請求項８記載の組
   成物。