JPH04234326A - アルブミン製剤及びその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、アルブミン製剤及びそ
の製法に関する。より詳細には、アルブミン凝集体含量
及び夾雑蛋白質含量が低減された血清アルブミン製剤及
びその製法に関する。

【０００２】

【従来の技術】血清アルブミンは血漿中に最も多く含ま
れている蛋白質で、血液中で浸透圧の維持、栄養物質や
代謝物質と結合してその運搬などの機能を果たしている
。上記血清アルブミンを含有する製剤は、アルブミンの
喪失及びアルブミン合成低下による低アルブミン血症、
出血性ショックなどの治療に用いられている。アルブミ
ン製剤は、そこに混入してくる懸念のあるウイルスを不
活化するために、通常、アルブミン含有水溶液の状態で
の加熱処理が汎用されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】このような方法により
製造される市販のアルブミン製剤をゲル濾過分析法で分
析すると、該製剤中にはアルブミンの凝集体が存在する
ことが知られている。この凝集体（通常、ポリマーと称
されるので、以下、ポリマーという）は上記の加熱処理
前には殆ど存在しないことから、加熱処理により熱に不
安定な夾雑蛋白質の作用でアルブミンが凝集化したもの
と考えられる。市販のアルブミン製剤は安全に広く使用
されていることから、このポリマーが特に人体に害を及
ぼすとは考えられていないが、加熱変性物であることよ
り、製剤中にできるだけ含有しないことが好ましい。

【０００４】また、アルブミン中にはトランスフェリン
などのようにアルブミンと物理化学的性質の比較的よく
似た夾雑蛋白質が含まれており、分画法等の慣用の手段
では効率的に分離することが困難であり、アルブミン製
剤中に夾雑蛋白質が残存するという問題がある。本発明
は上記の課題を解決すべく創案されたもので、本発明は
ポリマー含量及び夾雑蛋白質含量の少ないアルブミン製
剤及びその製法を提供することを目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は、本発明者らが
上記の課題を解決すべく種々検討を重ねた結果、アルブ
ミンを高度に精製することにより、トランスフェリン等
の夾雑蛋白質含量を激減させ得ると共に加熱処理しても
ポリマーが検出されないことを見出して完成したもので
ある。即ち、本発明のアルブミン製剤は、ポリマーを実
質的に含まない製剤、及びトランスフェリンを実質的に
含まない製剤である。

【０００６】また、本発明のアルブミン製剤の製法は、
血清アルブミン含有水溶液を陰イオン交換体処理した後
、陽イオン交換体処理し、次いで加熱処理することを特
徴とするものである。なお、上記の製法中、アルブミン
含有水溶液の処理に用いられる陰イオン交換体及び陽イ
オン交換体としては、それぞれ強陰イオン交換体及び強
陽イオン交換体が好ましい。

【０００７】本発明にかかる製剤の主成分であり又本発
明にかかる製法の出発原料であるアルブミンの由来には
特に制限がなく、具体的には哺乳動物、例えば、ヒト、
ウシ、ウサギ等に由来するものが挙げられ、特にヒト由
来のものが使用される。アルブミンを調製するための出
発原料としては、例えば、コーン氏の冷アルコール分画
によって得られた第Ｖ画分等が例示される。

【０００８】本発明のアルブミン製剤は、上記の血清ア
ルブミンを適当な精製水に溶解したアルブミン含有水溶
液を陰イオン交換体処理した後、陽イオン交換体処理し
、次いで加熱処理することにより得られる。上記の工程
において、アルブミン含有水溶液中のアルブミン含量と
しては、通常、０．１〜３０％（Ｗ／Ｖ、特に明示のな
い限り以下同様）程度、好ましくは約１〜１０％に調整
される。

【０００９】本発明においては、まず、アルブミン含有
水溶液を陰イオン交換体処理に付して精製する。この陰
イオン交換体処理により、ハプトグロビン、α１−酸性
糖蛋白質などのアルブミンより等電点の低い夾雑蛋白質
が除去され精製される。使用される陰イオン交換体とし
ては陰イオン交換基（例えば、ジエチルアミノエチル基
、第四級アンモニウム基等）を有する不溶性担体であれ
ばいずれも使用することができ、より具体的には、この
分野で慣用の陰イオン交換体、例えば、ＤＥＡＥ−セフ
ァロース、Ｑ−セファロース（商品名、ファルマシア社
製）、ＤＥＡＥ−トヨパール、ＱＡＥ−トヨパール（商
品名、いずれも東ソー社製）、Ａ２００セルロファイン
（商品名、生化学工業社製）、陰イオン交換樹脂等が例
示され、夾雑蛋白質除去効率の点からしてＱ−セファロ
ース、ＱＡＥ−トヨパール等の強陰イオン交換体を用い
るのが好ましい。

【００１０】上記の陰イオン交換体を用いる処理は、ア
ルブミン含有水溶液を陰イオン交換体と接触させること
により行われ、陰イオン交換体の使用量はアルブミン含
有水溶液中の夾雑蛋白質含量、陰イオン交換体の交換能
等により適宜調整されるが、アルブミン１ｇ当り、陰イ
オン交換体０．１〜５ｍｌ、通常３ｍｌ程度使用される
。本方法はカラム法、バッチ法のいずれの方法にて行っ
てもよいが、夾雑蛋白質の除去効率の面からカラム法に
て行うのが好ましい。

【００１１】カラム法にて行う場合、前記のアルブミン
含有水溶液をｐＨ３〜６程度、好ましくはｐＨ４．５〜
５．５、塩濃度としては０．００１　〜０．２　Ｍの塩
化ナトリウム程度、好ましくは０．００１　〜０．０５
Ｍに調整し、緩衝液［例えば、０．０２Ｍ酢酸ナトリウ
ム（ｐＨ５．１）］で平衡化した陰イオン交換体カラム
を通過させ、次いで同緩衝液で展開して非吸着分を回収
することにより行われる。上記の操作はアルブミンの変
性を抑制するため、低温（通常、１０℃以下）にて行う
のが好ましい。また、バッチ法にて行う場合、上記条件
に調整したアルブミン含有水溶液に、陰イオン交換体を
添加して接触させ、１０℃以下にて、３０分〜２時間程
度混和した後、遠心分離等の手段により陰イオン交換体
と分離し、上清を回収することにより行われる。

【００１２】上記の陰イオン交換体処理により精製され
たアルブミン含有水溶液は、必要に応じて、ｐＨ調整、
濃度調整等がされた後、陽イオン交換体処理に付してさ
らに精製する。この陽イオン交換体処理により、アルブ
ミンなどよりも高ｐＨに等電点のあるトランスフェリン
などの夾雑蛋白質が除去されて精製される。使用される
陽イオン交換体としては陽イオン交換基（例えば、スル
ホ基、カルボキシ基等）を有する不溶性担体であればい
ずれも使用することができ、より具体的には、この分野
で慣用の陽イオン交換体、例えば、ＳＰ−セファデック
ス（商品名、ファルマシア社製）、ＳＰ−トヨパール、
ＴＳＫｇｅｌＳＰ−５ＰＷ（商品名、いずれも東ソー社
製）、陽イオン交換樹脂等が例示され、夾雑蛋白質除去
効率の点からしてＳＰ−セファデックス、ＳＰ−トヨパ
ール等の強陽イオン交換体を用いるのが好ましい。

【００１３】上記の陽イオン交換体を用いる処理は、前
記陰イオン交換体処理により精製されたアルブミン含有
水溶液を陽イオン交換体と接触させることにより行われ
る。陽イオン交換体の使用量はアルブミン含有水溶液中
の夾雑蛋白質含量、陽イオン交換体の交換能等により適
宜調整されるが、アルブミン１ｇ当り、陽イオン交換体
０．１〜５ｍｌ、通常２ｍｌ程度使用される。本方法は
カラム法、バッチ法のいずれの方法にて行ってもよいが
、夾雑蛋白質の除去効率の面からカラム法にて行うのが
好ましい。

【００１４】カラム法にて行う場合、前記のアルブミン
含有水溶液をｐＨ４〜８程度、好ましくはｐＨ４．５〜
６．５、より好ましくはｐＨ５．５〜６．０、塩濃度と
しては０．００１　〜０．２　Ｍの塩化ナトリウム程度
、好ましくは０．００１　〜０．０５Ｍに調整し、緩衝
液［例えば、０．０２Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５）
］で平衡化した陽イオン交換体カラムを通過させ、次い
で同緩衝液で展開して非吸着分を回収することにより行
われる。上記の操作はアルブミンの変性を抑制するため
、低温（通常、１０℃以下）にて行うのが好ましい。ま
た、バッチ法にて行う場合、上記条件に調整したアルブ
ミン含有水溶液に、陽イオン交換体を添加して接触させ
、１０℃以下にて、３０分〜２時間程度混和した後、遠
心分離等の手段により陽イオン交換体と分離し、上清を
回収することにより行われる。

【００１５】かかる陰イオン交換体処理及び陽イオン交
換体処理により精製されたアルブミン含有水溶液は夾雑
タンパク質含量が著しく低く、トランスフェリン、ハプ
トグロビン及びα１−酸性糖蛋白質含量は検出限界以下
であり、実質的にこれらの夾雑蛋白質を含まないもので
ある。

【００１６】上記の陰イオン交換体処理及び陽イオン交
換体処理により夾雑蛋白質含量が低減されたアルブミン
含有水溶液は適当な濃度に調整し、例えば、バイアルに
充填するなど所望の製剤形態に製剤化された後、加熱処
理されて本発明のアルブミン製剤が得られる。上記の加
熱処理はアルブミン製剤中に混入するおそれのあるウイ
ルスを不活化するもので、アルブミン濃度５〜３０％程
度、通常５又は２０〜２５％程度に調整した水溶液とし
て行われ、加熱温度としては、夾雑ウイルスを不活化す
るに十分な温度及び時間行えばよく、例えば、５０〜７
０℃、好ましくは約６０℃で、５〜２０時間、好ましく
は約１０時間行われる。なお、上記の加熱処理に際して
は、必要に応じてアルブミンの安定化剤、例えばＮ−ア
セチルトリプトファンナトリウム、カプリル酸ナトリウ
ム等を単独で又は混合して添加してもよい。これらアル
ブミンの安定化剤は、製剤中に含有されるアルブミン１
ｇ当り２０〜６０ｍｇ、好ましくは４０ｍｇ程度使用さ
れる。

【００１７】かくして得られたアルブミン製剤は、ポリ
マーが実質的に含まれておらず（例えば、ゲル濾過分析
法により測定した場合、アルブミンに対するポリマー含
量が０．６３重量％未満）、またトランスフェリンも実
質的に含まれていない（例えば、一元免疫拡散法により
測定した場合、アルブミンに対するトランスフェリン含
量が０．００８　重量％未満）。なお、本発明のアルブ
ミン製剤は、従来のアルブミン製剤と同様な用量、用法
にて使用される。

【００１８】

【発明の効果】本発明のアルブミン製剤は、加熱処理に
よりウイルスが不活化されていると共にポリマー含量及
びトランスフェリン等の夾雑蛋白質含量が極めて少なく
、安全性、安定性等に優れた製剤である。また、本発明
のアルブミン製剤の製法は、陰イオン交換体及び陽イオ
ン交換体による処理により、さまざまな等電点を持つ夾
雑蛋白質が除去されたアルブミン含有水溶液を加熱処理
するもので、夾雑蛋白質に起因するポリマー化を抑制す
ることができ、ポリマー含量及び夾雑蛋白質含量が少な
く且つ混入が危惧されるウイルスが不活化されたアルブ
ミン製剤が得られる。

【００１９】

【実施例】以下、本発明をより詳細に説明するため、実
施例を挙げるが、本発明はこれらの実施例によってなん
ら限定されるものではない。

【００２０】実施例１ （ａ）アルブミン含有水溶液の調製 コーン氏の冷アルコール分画によって得られた第Ｖ画分
ペースト（５００ｇ）を冷無菌蒸留水２．０リットルに
溶解し、酢酸を用いてｐＨを４．６に調整した後、約１
時間攪拌した。次いで、約−２℃にて濾過（フィルター
：０．４５μｍ）し、さらに冷無菌蒸溜水２．０リット
ルを加え、１Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ５．１に調整し
、アルブミン含有水溶液を得た。

【００２１】（ｂ）陰イオン交換体処理ＱＡＥ−トヨパ
ール（５８０ｍｌ）をカラム（直径５ｃｍ×長さ１８ｃ
ｍ）に充填し、０．５Ｍ塩化ナトリウムで十分に洗浄し
た後、０．０２Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．１）で平衡
化し、陰イオン交換体カラムを調製した。このカラムに
上記（ａ）のアルブミン含有水溶液を通し、さらに冷０
．０２Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．１、２リットル）で
洗浄した。通過液と洗浄液とを合わせ、０．８Ｍ炭酸水
素ナトリウムにてｐＨを５．５に調整した。

【００２２】（ｃ）陽イオン交換体処理ＳＰ−トヨパー
ル（４００ｍｌ）をカラムに充填し、０．５Ｍ塩化ナト
リウムで十分に洗浄した後、０．０２Ｍ酢酸ナトリウム
（ｐＨ５．５）で平衡化し、陽イオン交換体カラムを調
製した。このカラムに上記（ｂ）で得られたアルブミン
含有水溶液を通し、さらに０．０２Ｍ酢酸ナトリウム（
ｐＨ５．５、１．２リットル）で洗浄した。通過液と洗
浄液とを合わせた後、ペリコンにて透析・濃縮し、Ａ２
８０　＝１４９（アルブミン濃度：２８％）となるよう
に調製した。

【００２３】（ｄ）加熱処理 上記（ｃ）で得られたアルブミン含有水溶液に、該水溶
液１０ｍｌ当り１．２ｍｌの安定化剤溶液（１００ｍｌ
中、Ｎ−アセチルトリプトファン５．５５ｇ及びカプリ
ル酸ナトリウム３．８９ｇ含有）を添加し、１Ｎ水酸化
ナトリウムにてｐＨを６．８５に調整した後、除菌濾過
した。 次いで、アルブミン濃度が２５％となるように調整した
後、所定量をバイアルに分注し、６０℃にて１０時間加
熱処理してアルブミン製剤（以下、本発明製剤という）
を得た。また、比較例として、ＳＰ−トヨパールカラム
処理工程を除外した以外は上記製法と実質的に同様にし
てアルブミン製剤（以下、比較製剤という）を調製した
。

【００２４】（ｉ）　アルブミン製剤中のポリマー含量
の測定 得られた本発明製剤及び比較製剤中のポリマー含量をゲ
ル濾過分析法により測定した。なお、ゲル濾過分析は下
記の条件にて行った。 （ａ）　サンプル：本発明製剤及び比較製剤を、下記の
緩衝液で５０倍に希釈し、濾過（フィルター：０．４５
μｍ）した溶液を２０μｌ注入した。 （ｂ）　カラム：ＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷ（東ソー
社製）を充填したカラム（直径７．８ｍｍ×長さ３０ｃ
ｍ）を使用した。 （ｃ）　緩衝液：０．１Ｍ　　ＫＨ２　ＰＯ４　／０．
３Ｍ　　ＮａＣｌ（ｐＨ６．９） （ｄ）　流速：１ｍｌ／分 （ｅ）　検出波長：λ＝２８０ｎｍ （ｆ）　装置：ウォーターズＨＰＬＣシステム

【００２
５】測定結果を図１（本発明製剤）及び図２（比較製剤
）に示す。図２から明らかなように、比較製剤において
は、明確にポリマーのピークが検出され、アルブミンに
対するポリマー含量は２．６重量％であった。一方、図
１に示されるように、本発明製剤においては、ポリマー
のピークは検出されず、ポリマーは実質的に含まれてい
ないことが判明した。なお、図１において、アルブミン
二量体のアルブミンに対する含量は０．６３重量％であ
り、本ゲル濾過分析法ではこの量の不純物を検出できる
ことが示された。従って、本発明製剤においてはポリマ
ーのピークが検出されないことから、本発明製剤中のポ
リマー含量はアルブミンに対して０．６３重量％未満で
あることが明らかになった。

【００２６】（ｉｉ）アルブミン製剤中の夾雑蛋白質の
測定本発明製剤及び比較製剤中のα１−酸性糖蛋白質（
α１−ＡＧ）、ハプトグロビン（Ｈｐ）及びトランスフ
ェリン（Ｔｆ）含量の測定を行った。その結果を表１に
示す。 なお、夾雑蛋白質の測定は、一元免疫拡散法（Ｍａｎｃ
ｉｎｉ法：Ｍａｎｃｉｎｉ　Ｇ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ，第２巻、第３号、第２３５−２５４　
頁、１９６５年）により行った。この際、用いた抗α１
−酸性糖蛋白質血清、抗ハプトグロビン血清及び抗トラ
ンスフェリン血清は、ウサギを免疫動物として常法によ
り調製したものである。これらの抗血清より作製した一
元免疫拡散用ゲルを用い、それぞれに対応する夾雑蛋白
質に対する沈降輪面積の標準曲線を図３〜図５に示す。 図３〜図５から明らかなように、α１−ＡＧの検出限界
は４ｍｇ／ｄｌであり、Ｈｐの検出限界は６．５ｍｇ／
ｄｌであり、Ｔｆの検出限界は２ｍｇ／ｄｌである。下
記表１に示されるように、本発明のアルブミン製剤はα
１−ＡＧ、Ｈｐ及びＴｆがいずれも検出限界以下であり
、夾雑蛋白質含量は極めて少なく、実質的に含まれてい
ないことが判明した。なお、上記のようにＴｆの検出限
界は２ｍｇ／ｄｌであり、また本発明製剤のアルブミン
含量は２５％であることから、本発明製剤中のＴｆ含量
はアルブミンに対して０．００８　重量％未満であるこ
とが明らかになった。

【００２７】

【表１】

【００２８】実施例２ 実施例１において、（ｂ）の陰イオン交換体処理工程で
の０．８Ｍ炭酸水素ナトリウムによるｐＨ調整をｐＨ５
．２５とすると共に（ｃ）の陽イオン交換体処理工程の
ｐＨ調整を５．２５とする以外は、実施例１と同様にし
て、アルブミン製剤を調製した。得られたアルブミン製
剤について、実施例１と同様な方法でポリマー含量及び
夾雑蛋白質含量を測定した。その結果、ポリマーのピー
クは検出されず実質的に含まれていないことが示され、
またＨｐ、α１−ＡＧ及びＴｆ含量も検出限界以下であ
り、実質的に含まれていないことが判明した。

【００２９】参考例 上記実施例１及び実施例２に示される本発明製剤の調製
並びに比較製剤の調製において、陰イオン交換体処理及
び陽イオン交換体処理並びに濃縮処理後のアルブミン回
収率は表２に示される通りであった。なお、アルブミン
回収率は２８０ｎｍの吸光度により測定した。

【００３０】

【表２】

【００３１】上記表２に示されるように、陰イオン交換
体処理及び陽イオン交換体処理並びに濃縮処理後のアル
ブミンの回収率は高く、特に陽イオン交換体処理をｐＨ
５．５で行った場合には回収率が著しく高いことが判明
した。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明製剤のゲル濾過分析の結果を示す図であ
る。

【図２】比較製剤のゲル濾過分析の結果を示す図である
。

【図３】一元免疫拡散法によるα１−酸性糖蛋白質測定
の標準曲線を示す図である。

【図４】一元免疫拡散法によるハプトグロビン測定の標
準曲線を示す図である。

【図５】一元免疫拡散法によるトランスフェリン測定の
標準曲線を示す図である。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　　　血清アルブミン製剤であって、ア
   ルブミン凝集体を実質的に含まないことを特徴とするア
   ルブミン製剤。
2. 【請求項２】　　　　血清アルブミン製剤であって、ト
   ランスフェリンを実質的に含まないことを特徴とするア
   ルブミン製剤。
3. 【請求項３】　　　　血清アルブミン含有水溶液を陰イ
   オン交換体処理した後、陽イオン交換体処理し、次いで
   加熱処理することを特徴とするアルブミン製剤の製法。