JPH0423979A - メタン生成細菌およびそれを利用するビタミンｂ↓１↓２の製造法 - Google Patents
メタン生成細菌およびそれを利用するビタミンｂ↓１↓２の製造法Info
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- JPH0423979A JPH0423979A JP12692090A JP12692090A JPH0423979A JP H0423979 A JPH0423979 A JP H0423979A JP 12692090 A JP12692090 A JP 12692090A JP 12692090 A JP12692090 A JP 12692090A JP H0423979 A JPH0423979 A JP H0423979A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、温泉噴出口付近の土壌から新たに分離したメ
サノバクテリウム属菌及びそれを用いるビタミンＢ１２
の新規工業的製造方法に関するものである。
サノバクテリウム属菌及びそれを用いるビタミンＢ１２
の新規工業的製造方法に関するものである。
（従来の技術および本発明が解決しようとする問題点）
一般に、産業的に微生物を利用する場合、使用する微生
物の性質、特に、増殖能および有用物質の生成能が重要
な要素となる。発明者らは、このうちの、有用物質の生
成能、すなわち、微生物を産業的に利用する場合、増殖
能がある程度高く。
一般に、産業的に微生物を利用する場合、使用する微生
物の性質、特に、増殖能および有用物質の生成能が重要
な要素となる。発明者らは、このうちの、有用物質の生
成能、すなわち、微生物を産業的に利用する場合、増殖
能がある程度高く。
かつ生成能が高ければ高いほど、原料費を削減でき、ま
た培養時間も短縮でき、さらに必要な培養装置も小さく
することができることに着目した。
た培養時間も短縮でき、さらに必要な培養装置も小さく
することができることに着目した。
また、微生物を培養する場合、ＮａＣ１などの塩濃度は
、装置の腐食防止あるいは副原料費の削減からも低いほ
ど望ましく、ＮａＣ１要求性の微生物は産業上、有利と
は言い難い。
、装置の腐食防止あるいは副原料費の削減からも低いほ
ど望ましく、ＮａＣ１要求性の微生物は産業上、有利と
は言い難い。
一方、産業廃棄物として、また副産物として多量のガス
が排出されており、一部がエネルギー源として回収され
ている程度で、その利用度は必ずしも高いとは言えない
。ガスの中には、微生物の炭素源になりうる二酸化炭素
やエネルギー源になる水素あるいは一酸化炭素などが含
まれている。
が排出されており、一部がエネルギー源として回収され
ている程度で、その利用度は必ずしも高いとは言えない
。ガスの中には、微生物の炭素源になりうる二酸化炭素
やエネルギー源になる水素あるいは一酸化炭素などが含
まれている。
従って、その有効利用は、地球境環への負担を減らす意
味からも大きな課題である。発明者らは、微生物を利用
したガスの有効利用を図るために。
味からも大きな課題である。発明者らは、微生物を利用
したガスの有効利用を図るために。
メタン生成細菌に着目した。この微生物群には、二酸化
炭素、水素、−酸化炭素からメタンを生成することがで
きるものが存在するので、有用な微生物の取得のために
、二酸化炭素と水素を基質に増殖するガス資化性メタン
生成菌の探索を行った。
炭素、水素、−酸化炭素からメタンを生成することがで
きるものが存在するので、有用な微生物の取得のために
、二酸化炭素と水素を基質に増殖するガス資化性メタン
生成菌の探索を行った。
メタン生成細菌は、有用物質の１つであるビタミンＤ２
．を、他の微生物にくらべて、その含有量が高イコとが
知られている（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、
。
．を、他の微生物にくらべて、その含有量が高イコとが
知られている（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、
。
３、２４３（１９１１１０））。
従来、二酸化炭素と水素を資化し、メタンを生成する。
いわゆるガス資化性メタン生成細菌としては、メサノバ
クテリウム（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、
メサノブレビバクター（Ｍｅｔｈａｎｏｂｒｅｖｉｂａ
ｃｔｅｒ）属、メサノサーマス（Ｍｅｔｈａｎｏｔｈｅ
ｒｍｕｓ）属、メサノコッカス（Ｍｅｔｈａｎｏｃｏｃ
ｃｕｓ）属、メサノミクロビウム（Ｍｅｔｈａｎｏｍｉ
ｃｒｏｂｉｕｍ）属、メサノスピリラム（阿ｅｔｈａｎ
ｏｓ ｉｒｉｌｌｕｍ）属、メサノゲニウム（ム肋ｙ四
圃状肥）属、メサノカルブス力ラム（Ｍｅｔｈａｎｏｃ
ｏｒｐｕｓｃｕｌｕｍ）属、メサノサルシする（Ｉｎｔ
、 Ｊ、 ５ｙｓｔ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、 ３８
．２１２−２１９（１９８８）） 。
クテリウム（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、
メサノブレビバクター（Ｍｅｔｈａｎｏｂｒｅｖｉｂａ
ｃｔｅｒ）属、メサノサーマス（Ｍｅｔｈａｎｏｔｈｅ
ｒｍｕｓ）属、メサノコッカス（Ｍｅｔｈａｎｏｃｏｃ
ｃｕｓ）属、メサノミクロビウム（Ｍｅｔｈａｎｏｍｉ
ｃｒｏｂｉｕｍ）属、メサノスピリラム（阿ｅｔｈａｎ
ｏｓ ｉｒｉｌｌｕｍ）属、メサノゲニウム（ム肋ｙ四
圃状肥）属、メサノカルブス力ラム（Ｍｅｔｈａｎｏｃ
ｏｒｐｕｓｃｕｌｕｍ）属、メサノサルシする（Ｉｎｔ
、 Ｊ、 ５ｙｓｔ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、 ３８
．２１２−２１９（１９８８）） 。
しかしながら、これらは、増殖速度が高いものでも、最
適ＮａＣ１濃度が高い場合あるいは、低濃度のＮａＣ１
では生育できない場合、逆に最適ＮａＣ１濃度が低いが
増殖速度が低いなどの欠点を有している（醗酵工学、
６４．２．１１５−１３７（１９８６）。さらに、ビタ
ミン８１２生成能が高くても、増殖速度が極めて低いも
のや、増殖速度は高いが、 ビタミンＢ１２生成量が高
くないなどの問題があった（ＣｕｒｒｅｎｔＭｉｃｒｏ
ｂｉｏｌ、、 ３．２４３（１９８０））。
適ＮａＣ１濃度が高い場合あるいは、低濃度のＮａＣ１
では生育できない場合、逆に最適ＮａＣ１濃度が低いが
増殖速度が低いなどの欠点を有している（醗酵工学、
６４．２．１１５−１３７（１９８６）。さらに、ビタ
ミン８１２生成能が高くても、増殖速度が極めて低いも
のや、増殖速度は高いが、 ビタミンＢ１２生成量が高
くないなどの問題があった（ＣｕｒｒｅｎｔＭｉｃｒｏ
ｂｉｏｌ、、 ３．２４３（１９８０））。
ビタミンＢ１□は、悪性貧血などの治療薬、および動物
の成長促進物質として飼料添加剤等に利用される重要な
化合物である。しかしながら現在、その複雑な構造のた
めに、グルコースを原料に発酵法により生産されている
。使用される微生物は、プロピオン酸菌すなわちプロピ
オニバクテリウム属や、バチルス属のものが使われてい
る。
の成長促進物質として飼料添加剤等に利用される重要な
化合物である。しかしながら現在、その複雑な構造のた
めに、グルコースを原料に発酵法により生産されている
。使用される微生物は、プロピオン酸菌すなわちプロピ
オニバクテリウム属や、バチルス属のものが使われてい
る。
メタン生成細菌を用いるビタミンＢ１□の製法に関する
ものとして、メタノールを原料に、メサノサルシナ・バ
ーケリ（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ ｂａｒｋｅｒ
ｉ）によるものが報告されている（特開昭６３−９１０
９４．特開昭６３−９１０１５、ＢＩＯＩＮＤＵＳＴＲ
Ｙ、 ５．３．１９０（１９８８）、ビタミン、暮、
１２．６５７（１９８８））が、この微生物は、ガスを
利用することができるものの、その増殖速度は極めて低
く、産業的には向かない。ガス資化性メタン生成細菌に
よるビタミンＢ１□の生産もメサノバクテリウム・サー
モオートトロフィヵム（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ ｔｈｅｒｍ＋＋ｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃｕｍ）
ΔＨ（ＤＳＭ １０５３）で報告されている（昭和６３
年度日本発酵工学会大会講演要旨集、ｐ１３７ （１９
８８））が、そのビタミン８１２生成能が低いために、
その生産性は低い。
ものとして、メタノールを原料に、メサノサルシナ・バ
ーケリ（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ ｂａｒｋｅｒ
ｉ）によるものが報告されている（特開昭６３−９１０
９４．特開昭６３−９１０１５、ＢＩＯＩＮＤＵＳＴＲ
Ｙ、 ５．３．１９０（１９８８）、ビタミン、暮、
１２．６５７（１９８８））が、この微生物は、ガスを
利用することができるものの、その増殖速度は極めて低
く、産業的には向かない。ガス資化性メタン生成細菌に
よるビタミンＢ１□の生産もメサノバクテリウム・サー
モオートトロフィヵム（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ ｔｈｅｒｍ＋＋ｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃｕｍ）
ΔＨ（ＤＳＭ １０５３）で報告されている（昭和６３
年度日本発酵工学会大会講演要旨集、ｐ１３７ （１９
８８））が、そのビタミン８１２生成能が低いために、
その生産性は低い。
このように従来技術においては、工業的にビタミンＤ２
２を製造する方法は確立されていなかったのである。
２を製造する方法は確立されていなかったのである。
（問題点を解決するための手段）
本発明は上記した技術の現状に鑑み、ますますその需要
が増大しているビタミンＢ１□を安定供給する目的でな
されたものである。
が増大しているビタミンＢ１□を安定供給する目的でな
されたものである。
上記目的を達成してビタミンＢ１□ を工業的に製造す
る方法について有機合成、天然物からの抽出等各方面か
ら検討したけれども成功するに至らず。
る方法について有機合成、天然物からの抽出等各方面か
ら検討したけれども成功するに至らず。
微生物を使用する発酵法に再度着目することとした。
そこでビタミンＢ１□生成菌としても知られているメタ
ン生成菌について、先ずその工業的見地から、ＮａＣ１
要求性が低く、増殖速度が高いガス資化性メタン生成菌
の探索を広く行った結果、これまでにないすぐれた性質
を有するメタン生成細菌を温泉噴出口付近の土壌から新
たに分離することに成功した。
ン生成菌について、先ずその工業的見地から、ＮａＣ１
要求性が低く、増殖速度が高いガス資化性メタン生成菌
の探索を広く行った結果、これまでにないすぐれた性質
を有するメタン生成細菌を温泉噴出口付近の土壌から新
たに分離することに成功した。
そしてこれらのメタン生成細菌について更に詳しく検討
したところ、全く予期せざることに、従来にない高いビ
タミンＢ１□生成能を有するという新知見を得、しかも
これらを培養することによって培養物からビタミンＤ２
２を工業的に採取しうることを併せ確認し、本発明の完
成に至ったのである。
したところ、全く予期せざることに、従来にない高いビ
タミンＢ１□生成能を有するという新知見を得、しかも
これらを培養することによって培養物からビタミンＤ２
２を工業的に採取しうることを併せ確認し、本発明の完
成に至ったのである。
以下１本発明の詳細な説明する。
（１）ガス資化性メタン生成細菌の分離ガス資化性メタ
ン生成細菌の分離には、Ｂａ１ｃｈらの＆１培地（Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ、 Ｒｅｖ、、 ４３．２６０−２９６
（１９７９））を改変した培地を用いた（表１）。国内
各地より採取した試料を分離用培地に嫌気的に接種し、
振どう培養を行い、増殖が認められたものを、次の新し
い培地に無菌的にかつ嫌気的に接種することにより、目
的とするガス資化性メタン生成菌の集積を図り、次にロ
ールチューブ法（使用培地は表１に寒天を加えたもの、
寒天濃度２．０％）によりコロニーを形成させ、最終的
に単一コロニーより目的菌株を単離した。培養温度は、
先述のガス資化性メタン生成菌の中では、ＮａＣ１要求
性が低く増殖速度が高い菌株の最適温度（５０〜７０℃
）をもとに、６０℃に設定した。また、メタン生成細菌
のような偏性嫌気性菌の扱い方は常法に従った。
ン生成細菌の分離には、Ｂａ１ｃｈらの＆１培地（Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ、 Ｒｅｖ、、 ４３．２６０−２９６
（１９７９））を改変した培地を用いた（表１）。国内
各地より採取した試料を分離用培地に嫌気的に接種し、
振どう培養を行い、増殖が認められたものを、次の新し
い培地に無菌的にかつ嫌気的に接種することにより、目
的とするガス資化性メタン生成菌の集積を図り、次にロ
ールチューブ法（使用培地は表１に寒天を加えたもの、
寒天濃度２．０％）によりコロニーを形成させ、最終的
に単一コロニーより目的菌株を単離した。培養温度は、
先述のガス資化性メタン生成菌の中では、ＮａＣ１要求
性が低く増殖速度が高い菌株の最適温度（５０〜７０℃
）をもとに、６０℃に設定した。また、メタン生成細菌
のような偏性嫌気性菌の扱い方は常法に従った。
Ｂａ１ｃｈらの魔１改変培地
表１
に２１（ＰＯ４
にＨ２ＰＯ４
ＣＮＨ４）２ ｓｏ４
Ｈ４Ｃｌ
ａＣＩ
ＭｇＳＯ，・７Ｈ２０
ＣａＣＬ ” ２Ｈ２０
ＭｎＳＯ４・２Ｈ２０
ＦｅＳ０４・７Ｈ２０
ｏＣ１ｚ
ＺｎＳＯ。
ＣｕＳＯ４・５Ｈ２０
ＡＩＫ（Ｓｏ、）。
ＨｌＢＯ。
Ｎａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ
ＮｉＣ１，・６Ｈ２Ｏ
Ｎａ２Ｓｅａ。
Ｎａ２１０． ・２）１２Ｏ
Ｎｉｔｒｉｌｏｔｒｉａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄＮａＨＣ
Ｏ□ Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ（Ｄｉｆｃｏ）Ｔｒｙｐｔ
ｉｃａｓｅ （ＢＢＬ） Ｌ−ｃｙｓｔｅｉｎ−ＨＣＩ−Ｈ２Ｏ Ｎａ２Ｓ・９Ｈ２０ ０，３ｇ／Ｑ Ｃ０３ ０，３ １，０ ０，６１ ０゜１６ ０．００９ ｏ、ｏｏｓ ０．００３ ０．００１ ０．００１ ０．０００１ ０．０００１ ０．０００１ ０．０００１ ０．００１ ０．００１７ ０．００１ ０．０１５ ５．０ ０．０５ ０．０５ ０．５ ０．５ ■）微量ビタミン類の組成 葉酸 ２ ピリドキシン・ＨＣＩ １０チアミン・Ｈ
ＣＩ ５リボフラビン
５ ニコチン酸 ５ パントテン酸カルシウム ５ ビタミンＢ１２０．１ アミノ安息香酸 ５ （２）比増殖速度の測定方法およびビタミンＢｉ２の測
定方法比増殖速度の測定に用いた培地には、表１に記載
した培地成分中の酵母エキス（ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａ
ｃｔ（Ｄｉｆｃｏ））およびトリプチケース（Ｔｒｙｐ
ｔｉｃａｓｅ （ＢＢＬ） ）を各々２ｇ／Ｉｌにした
ものを用いた。培地２０ｍ１２を入れた１２５社容０パ
イアルビンに、予め培養していたメタン生成細菌の培養
液（６６０ｎｍの吸光度（Ａ、、ｏ）が０．５〜０．８
のもの）を無菌的かつ嫌気的に接種し、所定温度で振ど
う培養（１６０ｒｐｍ） Ｌ、た。菌体濃度増加の追跡
のために経時的に培養液を抜取ってＡＧＧＯを測定し、
グラフにプロットすることにより比増殖速度μを求めた
。なお、ガスを補うために、培とから、メタン生成細菌
の検索表（醗酵工学、６４゜２．１１５−１３７（１９
８６））及び文献（Ｉｎｔ、 Ｊ、 ５ｙｓｔ。
Ｏ□ Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ（Ｄｉｆｃｏ）Ｔｒｙｐｔ
ｉｃａｓｅ （ＢＢＬ） Ｌ−ｃｙｓｔｅｉｎ−ＨＣＩ−Ｈ２Ｏ Ｎａ２Ｓ・９Ｈ２０ ０，３ｇ／Ｑ Ｃ０３ ０，３ １，０ ０，６１ ０゜１６ ０．００９ ｏ、ｏｏｓ ０．００３ ０．００１ ０．００１ ０．０００１ ０．０００１ ０．０００１ ０．０００１ ０．００１ ０．００１７ ０．００１ ０．０１５ ５．０ ０．０５ ０．０５ ０．５ ０．５ ■）微量ビタミン類の組成 葉酸 ２ ピリドキシン・ＨＣＩ １０チアミン・Ｈ
ＣＩ ５リボフラビン
５ ニコチン酸 ５ パントテン酸カルシウム ５ ビタミンＢ１２０．１ アミノ安息香酸 ５ （２）比増殖速度の測定方法およびビタミンＢｉ２の測
定方法比増殖速度の測定に用いた培地には、表１に記載
した培地成分中の酵母エキス（ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａ
ｃｔ（Ｄｉｆｃｏ））およびトリプチケース（Ｔｒｙｐ
ｔｉｃａｓｅ （ＢＢＬ） ）を各々２ｇ／Ｉｌにした
ものを用いた。培地２０ｍ１２を入れた１２５社容０パ
イアルビンに、予め培養していたメタン生成細菌の培養
液（６６０ｎｍの吸光度（Ａ、、ｏ）が０．５〜０．８
のもの）を無菌的かつ嫌気的に接種し、所定温度で振ど
う培養（１６０ｒｐｍ） Ｌ、た。菌体濃度増加の追跡
のために経時的に培養液を抜取ってＡＧＧＯを測定し、
グラフにプロットすることにより比増殖速度μを求めた
。なお、ガスを補うために、培とから、メタン生成細菌
の検索表（醗酵工学、６４゜２．１１５−１３７（１９
８６））及び文献（Ｉｎｔ、 Ｊ、 ５ｙｓｔ。
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、 ３８．２１２−２１９（１９
８８））をもとに検索した結果、メサノバクテリウム（
Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属または、メサノ
サーマス（Ｍｅｔｈａｎｏｔｈｅｒｉｎｕｓ）属に属す
るものと考られた。
８８））をもとに検索した結果、メサノバクテリウム（
Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属または、メサノ
サーマス（Ｍｅｔｈａｎｏｔｈｅｒｉｎｕｓ）属に属す
るものと考られた。
次に、 Ｈ１１７−１−２及びＫＮ−１５は、増殖最適
温度がそれぞれ６０℃及び６５℃にあることから、最終
的には、これらの菌株は、メサノサーマス属ではなく。
温度がそれぞれ６０℃及び６５℃にあることから、最終
的には、これらの菌株は、メサノサーマス属ではなく。
メサノバクテリウム属に属する微生物であると考えられ
た。−表２に示すように、メサノバクテリウム属に属し
、増殖最適温度が５０〜７０℃にある２株との比較を行
った。
た。−表２に示すように、メサノバクテリウム属に属し
、増殖最適温度が５０〜７０℃にある２株との比較を行
った。
Ｈ１１７−１−２
ＫＮ−１５
郵眩四墾
ＤＳＭ １１０５
３ｔｉｏｌｆｅ
ｉＤＳ ２９７０
形
態
生育間
ＭｉｐＦＩ
メタン基質
Ｈ，／四
Ｃ００Ｈ
ＣＨ３ｃｏＤＨ
ＣＩ（３０Ｈ
αを鴇
μｍ、（ｈ−１）
ＧＣ含量（％）
運動性
６．０〜８．５ ６．０〜８．８
７．４〜７．５ ７．４〜７．８
０．４５ （６０℃）
０．６２（６５℃）
７．２〜７．６
０．４３率
４８〜５２
７．０〜７．７
拳）比増殖速度測定時に用いた培地では、ｏ、４ｈ−１
であった。
であった。
表２の比較の結果、Ｈ１１７−１−２は、メサノバクテ
リウム（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属のサー
モオートトロフイカム（ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐ
ｈｉｃｕｍ）、およびウオルフェイ（ｔｙｏｌｆｅｉ）
に基質資化性や最適温度、最適ｐＨなどで類似している
が、比増殖速度が、ウオルフェイ（％１ｏｌｆｅｉ）に
比較してかなり高いことから、メサノバクテリウム・サ
ーモオートトロフイカム（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕ＋ｓ ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃｕｎ＋
）に近いものと考えられる。しかし、細胞形態や増殖最
適温度が６０℃であることなどからメサノバクテリウム
・サーモオートトロフィカムＤＳＭ １０５３とは異な
るものと考えられる。
リウム（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属のサー
モオートトロフイカム（ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐ
ｈｉｃｕｍ）、およびウオルフェイ（ｔｙｏｌｆｅｉ）
に基質資化性や最適温度、最適ｐＨなどで類似している
が、比増殖速度が、ウオルフェイ（％１ｏｌｆｅｉ）に
比較してかなり高いことから、メサノバクテリウム・サ
ーモオートトロフイカム（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕ＋ｓ ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃｕｎ＋
）に近いものと考えられる。しかし、細胞形態や増殖最
適温度が６０℃であることなどからメサノバクテリウム
・サーモオートトロフィカムＤＳＭ １０５３とは異な
るものと考えられる。
また、ＫＮ−１５は、増殖速度が０．６２ｈ−”を示し
、メサノバクテリウム・ウオルフェイの増殖速度より、
はるかに高いという、明らかに異なる性質を有している
。また、メサノバクテリウム・サーモオートトロフィカ
ムとの比較では、増殖速度や細胞形態が明らかに異なる
。
、メサノバクテリウム・ウオルフェイの増殖速度より、
はるかに高いという、明らかに異なる性質を有している
。また、メサノバクテリウム・サーモオートトロフィカ
ムとの比較では、増殖速度や細胞形態が明らかに異なる
。
増殖速度は、細胞の総括代謝の表現型として、特にメタ
ン生成細菌では重要である。以上のことから、Ｈ１１７
−１−２及びにＮ−１５を、メサノバクテリウム属に属
し、メサノバクテリウム・サーモオートトロフィカムに
近い新種であると同定した。これらの菌の生理学的性質
を表３及び表４に示した。
ン生成細菌では重要である。以上のことから、Ｈ１１７
−１−２及びにＮ−１５を、メサノバクテリウム属に属
し、メサノバクテリウム・サーモオートトロフィカムに
近い新種であると同定した。これらの菌の生理学的性質
を表３及び表４に示した。
これらの菌は、工業技術院微生物工業技術研究所に［微
生物受託番号、微工研菌寄第１１３５６号（ＦＥＲＭ
Ｐ−１１３５６）及び微工研菌寄第１１４２０号（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１１４２０）Ｊのもとにそれぞれ微生物保管
を委託した。
生物受託番号、微工研菌寄第１１３５６号（ＦＥＲＭ
Ｐ−１１３５６）及び微工研菌寄第１１４２０号（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１１４２０）Ｊのもとにそれぞれ微生物保管
を委託した。
１（１１７−１−２は、ＮａＣ１濃度が高い（２％以上
）の培地では増殖が認められず、高い増殖速度は、低い
ＮａＣ１濃度（０，１％以下）で得られている。
）の培地では増殖が認められず、高い増殖速度は、低い
ＮａＣ１濃度（０，１％以下）で得られている。
ＫＮ−１５株の高い増殖速度は、表１に示すような低Ｎ
ａＣ１濃度培地で得られ、高ＮａＣ１濃度培地では、得
られず、ＫＮ−１５の増殖は阻害される。
ａＣ１濃度培地で得られ、高ＮａＣ１濃度培地では、得
られず、ＫＮ−１５の増殖は阻害される。
表３ ８１１７−１−２の生理学的性質１．形態的性質
：培地組成は肉汁および肉汁寒天を基準とするが、これ
に生育しないものについては、適当な培地を用いてもよ
い。どなっているので、別途示したＢａ１ｃｈ Ｎａ
１改変培地を用いた。
：培地組成は肉汁および肉汁寒天を基準とするが、これ
に生育しないものについては、適当な培地を用いてもよ
い。どなっているので、別途示したＢａ１ｃｈ Ｎａ
１改変培地を用いた。
■形；長桿菌（対数増殖期）、鞭毛なし大きさ；０．３
〜０．５Ｘ１〜３ ■細胞の多形性；なし ■運動性；なし ■胞子形成；なし ■ダラム染色性：陽性 ２、培養的性質；以下の培地に生育しないものについて
は他の生育に適当な培地における生育状態を記載する。
〜０．５Ｘ１〜３ ■細胞の多形性；なし ■運動性；なし ■胞子形成；なし ■ダラム染色性：陽性 ２、培養的性質；以下の培地に生育しないものについて
は他の生育に適当な培地における生育状態を記載する。
どなっているので、別途に示したＢａ ｌｃｈ＆１改変
培地を基本培地とし、コロニー観察にはロールチューブ
法によってコロニーを形成させた。
培地を基本培地とし、コロニー観察にはロールチューブ
法によってコロニーを形成させた。
■肉汁培地；生育しない
■改変Ｂａ１ｃｈ Ｎａ １寒天培地（培養温度６０℃
、培養時間５日間）；生育良好、周縁がスムース、緑色
がかった薄乳色、直径２〜４ｍｍ、色素生成なし ３、生理的性質： ■無機窒素源の利用；アンモニウム塩を利用する。
、培養時間５日間）；生育良好、周縁がスムース、緑色
がかった薄乳色、直径２〜４ｍｍ、色素生成なし ３、生理的性質： ■無機窒素源の利用；アンモニウム塩を利用する。
■色素の生成；培養後液体培地はメタン生成細菌特有の
黄緑色になる。
黄緑色になる。
■生育範囲温度：４０〜７０℃、４０℃以下７５℃以上
では生育しない 生育最適温度；６０℃ ■生育範囲ｐＨ； ６．０〜８．５ 生育最適ｐＨ； ７．４〜７．５ ■酸素要求；絶対嫌気性 ■ガスの発生； （１）Ｌ−アラビノース、（２）Ｄ−キシロース、（３
）Ｄ−グルコース、（４）Ｄ−マンノース、 （５）Ｄ
−フラクトース、（６）Ｄ−ガラクトース、（７）マル
トース、（８）シュクロース、（９）ラクトース、（１
０） ）−レバロース、（１１）Ｄ−ソルビット、（１
２）Ｄ−マンニット、（１３）イノジット、（１４）グ
リセリン、（１５）澱粉から酸化も発酵も行わない。
では生育しない 生育最適温度；６０℃ ■生育範囲ｐＨ； ６．０〜８．５ 生育最適ｐＨ； ７．４〜７．５ ■酸素要求；絶対嫌気性 ■ガスの発生； （１）Ｌ−アラビノース、（２）Ｄ−キシロース、（３
）Ｄ−グルコース、（４）Ｄ−マンノース、 （５）Ｄ
−フラクトース、（６）Ｄ−ガラクトース、（７）マル
トース、（８）シュクロース、（９）ラクトース、（１
０） ）−レバロース、（１１）Ｄ−ソルビット、（１
２）Ｄ−マンニット、（１３）イノジット、（１４）グ
リセリン、（１５）澱粉から酸化も発酵も行わない。
■食塩耐性；２％まで生育する。
■炭素源の利用性；ＣＯ□（Ｈ２存在下）を利用しメタ
ンを生成するが、 ぎ酸、 酢酸、 メタノール、 メチルアミンは利用 しない。
ンを生成するが、 ぎ酸、 酢酸、 メタノール、 メチルアミンは利用 しない。
４、分離源；温泉噴出口付近の土壌
表４ ＫＮ−１５の生理学的性質
１、形態的性質：培地組成は肉汁および肉汁寒天を基準
とするが、これに生育しないものについては、適当な培
地を用いてもよい。どなっているので、別途示したＢａ
１ｃｈ Ｎα１改変培地を用いた。
とするが、これに生育しないものについては、適当な培
地を用いてもよい。どなっているので、別途示したＢａ
１ｃｈ Ｎα１改変培地を用いた。
■形；長桿菌（対数増殖期）、鞭毛なし大きさ；０．３
〜０．５Ｘ１〜１０ ■細胞の多形性：なし ■運動性；なし ■胞子形成；なし ■ダラム染色性；陽性 ２、培養的性質；以下の培地に生育しないものについて
は他の生育に適当な培地における生育状態を記載する。
〜０．５Ｘ１〜１０ ■細胞の多形性：なし ■運動性；なし ■胞子形成；なし ■ダラム染色性；陽性 ２、培養的性質；以下の培地に生育しないものについて
は他の生育に適当な培地における生育状態を記載する。
どなっているので、別途に示したＢａ１ｃｈ＆１改変培
地を基本培地とし、コロニー観察にはロールチューブ法
によってコロニーを形成させた。
地を基本培地とし、コロニー観察にはロールチューブ法
によってコロニーを形成させた。
■肉汁培地；生育しない
■改変Ｂａ１ｃｈ Ｎａ １寒天培地（培養温度６０℃
、培養時間５日間）；生育良好、周縁がスムース、緑色
がかった薄乳色、直径２〜５ｍｍ、色素生成なし ３．生理的性質： ■無機窒素源の利用；アンモニウム塩を利用する。
、培養時間５日間）；生育良好、周縁がスムース、緑色
がかった薄乳色、直径２〜５ｍｍ、色素生成なし ３．生理的性質： ■無機窒素源の利用；アンモニウム塩を利用する。
■色素の生成；培養後液体培地はメタン生成細菌特有の
黄緑色になる。
黄緑色になる。
■生育範囲温度；４０〜７０℃、４０℃以下７５℃以上
では生育しない 生育最適温度；６５℃ ■生育範囲ｐＨ； ６．０〜８．８ 生育最適ｐＨ； ７．４〜７．８ ■酸素要求；絶対嫌気性 ■ガスの発生； （１）Ｌ−アラビノース、（２）Ｄ−キシロース、（３
）Ｄ−グルコース、（４）Ｄ−マンノース、（５）Ｄ−
フラクトース、（６）Ｄ−ガラクトース、（７）マルト
ース、（８）シュクロース、（９）ラクトース、（１０
） ）−レバロース、（１１）Ｄ−ソルビット、（１２
）Ｄ−マンニット、（１３）イノジット、（１４）グリ
セリン、 （ｔＳ）澱粉から酸化も発酵も行わない。
では生育しない 生育最適温度；６５℃ ■生育範囲ｐＨ； ６．０〜８．８ 生育最適ｐＨ； ７．４〜７．８ ■酸素要求；絶対嫌気性 ■ガスの発生； （１）Ｌ−アラビノース、（２）Ｄ−キシロース、（３
）Ｄ−グルコース、（４）Ｄ−マンノース、（５）Ｄ−
フラクトース、（６）Ｄ−ガラクトース、（７）マルト
ース、（８）シュクロース、（９）ラクトース、（１０
） ）−レバロース、（１１）Ｄ−ソルビット、（１２
）Ｄ−マンニット、（１３）イノジット、（１４）グリ
セリン、 （ｔＳ）澱粉から酸化も発酵も行わない。
■食塩耐性；２％まで生育する。
■炭素源の利用性； ｃｏ−（ｕｚ存在下）を利用しメ
タンを生成するが、 ぎ酸、酢酸、 メタノール、 メチルアミンは利用 しない。
タンを生成するが、 ぎ酸、酢酸、 メタノール、 メチルアミンは利用 しない。
４、分離源；温泉噴出口付近の土壌
これら旧１７−１−２及び／又はに〜Ｉ５を上記により
充分培養した後、培養物からビタミン８□２を採取する
。それには常法が適宜使用され、例えば、菌体について
は、これを直接溶媒で抽呂するほか、超音波、酵素等既
知の物理ないし化学的方法によって破砕した後抽出し、
また、培養液についてはこれをそのまま溶媒で抽出する
。ただ、溶媒抽呂の前及び／又は後に減圧濃縮、限外濾
過等の方法で濃縮して濃縮液としてもよい。抽出液は、
更にクロマトグラフィー、溶媒による沈澱、再結晶等既
知の分離、精製手段によって、適宜処理される。
充分培養した後、培養物からビタミン８□２を採取する
。それには常法が適宜使用され、例えば、菌体について
は、これを直接溶媒で抽呂するほか、超音波、酵素等既
知の物理ないし化学的方法によって破砕した後抽出し、
また、培養液についてはこれをそのまま溶媒で抽出する
。ただ、溶媒抽呂の前及び／又は後に減圧濃縮、限外濾
過等の方法で濃縮して濃縮液としてもよい。抽出液は、
更にクロマトグラフィー、溶媒による沈澱、再結晶等既
知の分離、精製手段によって、適宜処理される。
ビタミン８１２は、上記のように精製して用いるほか、
飼料添加物等として用いる場合には、菌体、培養液、又
はこれらの混合物、あるいは上記した濃縮液等未精製の
ままでも使用することができる。
飼料添加物等として用いる場合には、菌体、培養液、又
はこれらの混合物、あるいは上記した濃縮液等未精製の
ままでも使用することができる。
次に、本発明に係る菌が既知のガス資化性菌よりもビタ
ミンＢ１□生成能が優れていることおよびビタミンＢ□
２の製造法について実施例で説明する。
ミンＢ１□生成能が優れていることおよびビタミンＢ□
２の製造法について実施例で説明する。
（実施例１）
まず、比較のために、既知のガス資化性メタン生成細菌
による二酸化炭素と水素からのビタミンＢ１２生成を調
べた。ドイツの微生物保存機関のＤＳＭに保存されてい
るガス資化性菌の中から代表的な菌株を選び、表１の培
地に生育するものについては、表１の培地と０５Ｍ指定
の保存培地で、表１の培地で生育しないものは、０５Ｍ
指定の保存培地にて、所定温度で７日間または３日間静
置培養し、菌体濃度（Ａ−Ｓ。）およびビタミンＢ１□
濃度を先述の方法にて測定した。その結果を表４−１お
よび表４−２に示す。 ビタミンＢ１２生成量および菌
体の増殖量から、明らかにＤＳＭ １０５３のメサノバ
クテリウム・サーモオートトロフィカム （Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕ＋ｉ ｔｈｅｒｍｏ
ａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃｕｍ）が最もビタミン生成能が
高い菌株であることがわかる。
による二酸化炭素と水素からのビタミンＢ１２生成を調
べた。ドイツの微生物保存機関のＤＳＭに保存されてい
るガス資化性菌の中から代表的な菌株を選び、表１の培
地に生育するものについては、表１の培地と０５Ｍ指定
の保存培地で、表１の培地で生育しないものは、０５Ｍ
指定の保存培地にて、所定温度で７日間または３日間静
置培養し、菌体濃度（Ａ−Ｓ。）およびビタミンＢ１□
濃度を先述の方法にて測定した。その結果を表４−１お
よび表４−２に示す。 ビタミンＢ１２生成量および菌
体の増殖量から、明らかにＤＳＭ １０５３のメサノバ
クテリウム・サーモオートトロフィカム （Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕ＋ｉ ｔｈｅｒｍｏ
ａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃｕｍ）が最もビタミン生成能が
高い菌株であることがわかる。
ＤＳＭ ： Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖ
ｏｎ ＭｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎＧｅｓｅｌｌｓ
ｃｈａｆｔ ｆｉｉｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｓ
ｃｈｅ Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇｍ、 ｂ、 Ｈ，（国際寄
託機関、ブダペスト通報覧２２）。
ｏｎ ＭｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎＧｅｓｅｌｌｓ
ｃｈａｆｔ ｆｉｉｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｓ
ｃｈｅ Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇｍ、 ｂ、 Ｈ，（国際寄
託機関、ブダペスト通報覧２２）。
次に、Ｈ１１７−１−２株（ＦＥＲＮ Ｐ−１１３５６
）とＤＳＭ １０５３株とを比較した。
）とＤＳＭ １０５３株とを比較した。
使用培地は、表１の培地成分中の酵母エキス（Ｙｅａｓ
ｔ ｅｘｔｒａｃｔ（Ｄｉｆｃｏ））およびトリプチケ
ース（Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ （ＢＢＬ））濃度を各々
２ ｇＩＱにしたものを用いた。２０ｍｆｆの培地に入
れた１ ２５ｍ１２容バイアルビンに、予め培養してい
たガス資化性メタン生成細菌）１１１７−１−２の懸濁
液（６６０ｎｍの吸光度Ａ。。が０．５〜０．８）を０
．５ａ＋Ｑ接種し、６０℃で振どう培養液（１６０ｒｐ
ｍ）した。菌体濃度増加を追跡するために、経時的に培
養液を抜取り、Ａｓ５ｏを測定するとともに、基質ガス
（ＣＯ２／Ｈ２＝ １ ／４）をバイアルビン内部のガ
ス圧力が１．８ｋｇ／ ｃｘｌになるように供給加圧し
た。
ｔ ｅｘｔｒａｃｔ（Ｄｉｆｃｏ））およびトリプチケ
ース（Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ （ＢＢＬ））濃度を各々
２ ｇＩＱにしたものを用いた。２０ｍｆｆの培地に入
れた１ ２５ｍ１２容バイアルビンに、予め培養してい
たガス資化性メタン生成細菌）１１１７−１−２の懸濁
液（６６０ｎｍの吸光度Ａ。。が０．５〜０．８）を０
．５ａ＋Ｑ接種し、６０℃で振どう培養液（１６０ｒｐ
ｍ）した。菌体濃度増加を追跡するために、経時的に培
養液を抜取り、Ａｓ５ｏを測定するとともに、基質ガス
（ＣＯ２／Ｈ２＝ １ ／４）をバイアルビン内部のガ
ス圧力が１．８ｋｇ／ ｃｘｌになるように供給加圧し
た。
定時間培養後、培養液中のビタミンＬｘ をシアノ型に
変換した後、常法により、大腸菌Ｅ、 ｃｏｌｉ２１５
株を用いるバイオアッセイ法で測定した。比較のために
、メサノバクテリウム・サーモオートトロフィカム（Ｍ
ｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｈｅｒｍｏａｕｔｏ
ｔｒｏｐｈｉｃｕｍ）のビタミンＥｌｚｚ生成の検討を
同−実験系で行った。吸光度Ａｓ５ｏの経時変化を第１
図に、またビタミンＢ１２濃度については、その結果を
表５に示した。
変換した後、常法により、大腸菌Ｅ、 ｃｏｌｉ２１５
株を用いるバイオアッセイ法で測定した。比較のために
、メサノバクテリウム・サーモオートトロフィカム（Ｍ
ｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｈｅｒｍｏａｕｔｏ
ｔｒｏｐｈｉｃｕｍ）のビタミンＥｌｚｚ生成の検討を
同−実験系で行った。吸光度Ａｓ５ｏの経時変化を第１
図に、またビタミンＢ１２濃度については、その結果を
表５に示した。
表５ ガス資化性メタン生成菌によるビタミンＢ１２の
生成Ｈ１１７−１−２Ｍ、 ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒ
ｏｐｈｉｃｕｍＤＳＭ １０５３ 接種時のＡ６６ｏＯ３０２７０，０３０７時間後のＡ、
、、 ０．６９５ ０．５７１
Ｂ１２濃度（ｍｇ／１２） ０．１３９
０．０９９Ｂ１２生成能（ｍｇ／Ｑ／ＡＧＧ
、） ０．２００ ０．１７３比増殖速
度（ｈ−１） ０．４２ ０．
３９表５の結果から明らかなように、Ｈ１１７−１−２
株の方が、ビタミンＢ１２濃度および菌体当りのビタミ
ンＬｘ生成量（ビタミンＢ１２濃度／菌体濃度（ＡＧ、
。））、さらに増殖速度も高いことが示された。すなわ
ち、Ｈ１１７−１−２株を用いることにより、低ＮａＣ
１濃度の培地で、短時間に、より高濃度に、かつ高収率
でビタミンＢ１□を生産できることが判明した。
生成Ｈ１１７−１−２Ｍ、 ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒ
ｏｐｈｉｃｕｍＤＳＭ １０５３ 接種時のＡ６６ｏＯ３０２７０，０３０７時間後のＡ、
、、 ０．６９５ ０．５７１
Ｂ１２濃度（ｍｇ／１２） ０．１３９
０．０９９Ｂ１２生成能（ｍｇ／Ｑ／ＡＧＧ
、） ０．２００ ０．１７３比増殖速
度（ｈ−１） ０．４２ ０．
３９表５の結果から明らかなように、Ｈ１１７−１−２
株の方が、ビタミンＢ１２濃度および菌体当りのビタミ
ンＬｘ生成量（ビタミンＢ１２濃度／菌体濃度（ＡＧ、
。））、さらに増殖速度も高いことが示された。すなわ
ち、Ｈ１１７−１−２株を用いることにより、低ＮａＣ
１濃度の培地で、短時間に、より高濃度に、かつ高収率
でビタミンＢ１□を生産できることが判明した。
（実施例２）
にＮ−１５株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１４２０）を用い、培
養温度を６５℃としたほかは実施例１と同様にしてビタ
ミンＢ１□を生産せしめた。吸光度Ａ、＆。の経時変化
を第２図に、またビタミンＳｔＺ濃度については、その
結果を表６に示した。
養温度を６５℃としたほかは実施例１と同様にしてビタ
ミンＢ１□を生産せしめた。吸光度Ａ、＆。の経時変化
を第２図に、またビタミンＳｔＺ濃度については、その
結果を表６に示した。
表６ ガス資化性メタン生成菌によるビタミン８１２の
生成ＫＮ−１５Ｍ、ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉ
ｃｕｍＤＳＭ １０５３ 接種時のＡ、Ｇ、 ０１０２８
０．０３０６時間後のＡ１゜ ０．５９１
０．２６３Ｂ１２濃度（ｍｇ／１２）
０．１００ ０．０４６比増殖速度（
ｈ−１） ０．６１８ ０．３８９
表６から明らかなように、ＫＮ−１５株の方が。
生成ＫＮ−１５Ｍ、ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉ
ｃｕｍＤＳＭ １０５３ 接種時のＡ、Ｇ、 ０１０２８
０．０３０６時間後のＡ１゜ ０．５９１
０．２６３Ｂ１２濃度（ｍｇ／１２）
０．１００ ０．０４６比増殖速度（
ｈ−１） ０．６１８ ０．３８９
表６から明らかなように、ＫＮ−１５株の方が。
ビタミンＢ工、濃度および増殖速度も高いことが示され
た。つまり、ＫＮ−１５株を用いれば、従来のガス資化
性菌よりも、二酸化炭素と水素からビタミンＤ２２ を
効率的に製造できることが明らかになった・ （発明の効果） 本発明によって、低食塩培地において非常に高い速度で
増殖ししかもビタミンＬａ生成能にすぐれたメタン生成
細菌を新たに分離することができた。そしてこれらの細
菌を培養することによって培養物からビタミンＤ２２を
工業的に得ることに成功した。
た。つまり、ＫＮ−１５株を用いれば、従来のガス資化
性菌よりも、二酸化炭素と水素からビタミンＤ２２ を
効率的に製造できることが明らかになった・ （発明の効果） 本発明によって、低食塩培地において非常に高い速度で
増殖ししかもビタミンＬａ生成能にすぐれたメタン生成
細菌を新たに分離することができた。そしてこれらの細
菌を培養することによって培養物からビタミンＤ２２を
工業的に得ることに成功した。
すなわち、培養した後、培養液は常法により抽出処理を
行い、菌体についてはこれを直接抽出したりあるいは超
手波等既知の手段によって菌体を破砕した後これを抽出
し１次いで常法にしたがって分離精製することにより多
量のビタミンＤ２２を得ることができる。
行い、菌体についてはこれを直接抽出したりあるいは超
手波等既知の手段によって菌体を破砕した後これを抽出
し１次いで常法にしたがって分離精製することにより多
量のビタミンＤ２２を得ることができる。
つまり、本発明によってはじめて、ビタミンＢ１□の工
業的製法の開発に成功したのである。
業的製法の開発に成功したのである。
第１回及び第２図は、本発明に係る微生物について、そ
の吸光度の経時変化を図示したグラフである。 代理人 弁理士 戸 １）親 男 第 図 培養時間（ｈ）
の吸光度の経時変化を図示したグラフである。 代理人 弁理士 戸 １）親 男 第 図 培養時間（ｈ）
Claims (5)
- （１）メタン生成細菌ＫＮ−１５。
- （２）メタン生成細菌Ｈ１１７−１−２。
- （３）細菌Ｈ１１７−１−２及び／又はＫＮ−１５を有
効菌とすることを特徴とするビタミンＢ＿１＿２生産菌
。 - （４）細菌Ｈ１１７−１−２及び／又はＫＮ−１５を培
養することを特徴とするビタミンＢ＿１＿２の製造法。 - （５）細菌Ｈ１１７−１−２及び／又はＫＮ−１５を培
養し、培養物からビタミンＢ＿１＿２を採取することを
特徴とするビタミンＢ＿１＿２の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12692090A JPH0423979A (ja) | 1990-05-18 | 1990-05-18 | メタン生成細菌およびそれを利用するビタミンｂ↓１↓２の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12692090A JPH0423979A (ja) | 1990-05-18 | 1990-05-18 | メタン生成細菌およびそれを利用するビタミンｂ↓１↓２の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0423979A true JPH0423979A (ja) | 1992-01-28 |
Family
ID=14947176
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12692090A Pending JPH0423979A (ja) | 1990-05-18 | 1990-05-18 | メタン生成細菌およびそれを利用するビタミンｂ↓１↓２の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0423979A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997036996A3 (en) * | 1996-03-28 | 1998-01-22 | Gist Brocades Bv | Process for the preparation of a granular microbial biomass and isolation of valuable compounds therefrom |
| WO2001057231A1 (en) * | 2000-02-01 | 2001-08-09 | Japan Science And Technology Corporation | Process for producing vitamin b12 from hydrogen-metabolizing methane bacterium |
| EP1506996A3 (en) * | 1996-03-28 | 2006-06-14 | DSM IP Assets B.V. | Preparation of microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass |
-
1990
- 1990-05-18 JP JP12692090A patent/JPH0423979A/ja active Pending
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997036996A3 (en) * | 1996-03-28 | 1998-01-22 | Gist Brocades Bv | Process for the preparation of a granular microbial biomass and isolation of valuable compounds therefrom |
| JP2002502233A (ja) * | 1996-03-28 | 2002-01-22 | ヒスト―ブロカデス・ベスローテン・フェンノートシャップ | 顆粒状微生物バイオマスの製造法とそのバイオマスからの貴重化合物の単離法 |
| EP1369474A1 (en) * | 1996-03-28 | 2003-12-10 | DSM IP Assets B.V. | Process for the preparation of a granular microbial biomass and isolation of valuable compounds therefrom |
| EP1506996A3 (en) * | 1996-03-28 | 2006-06-14 | DSM IP Assets B.V. | Preparation of microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass |
| JP2008054691A (ja) * | 1996-03-28 | 2008-03-13 | Dsm Anti-Infectives Bv | 顆粒状微生物バイオマスの製造法とそのバイオマスからの貴重化合物の単離法 |
| JP2010099075A (ja) * | 1996-03-28 | 2010-05-06 | Dsm Ip Assets Bv | 顆粒状微生物バイオマスの製造法とそのバイオマスからの貴重化合物の単離法 |
| JP2011004765A (ja) * | 1996-03-28 | 2011-01-13 | Dsm Ip Assets Bv | 顆粒状微生物バイオマスの製造法とそのバイオマスからの貴重化合物の単離法 |
| JP2013252148A (ja) * | 1996-03-28 | 2013-12-19 | Dsm Ip Assets Bv | 顆粒状微生物バイオマスの製造法とそのバイオマスからの貴重化合物の単離法 |
| WO2001057231A1 (en) * | 2000-02-01 | 2001-08-09 | Japan Science And Technology Corporation | Process for producing vitamin b12 from hydrogen-metabolizing methane bacterium |
| US6972188B2 (en) | 2000-02-01 | 2005-12-06 | Japan Science And Technology Corporation | Process for producing vitamin B12 from hydrogen-metabolizing methane bacterium |
| US7018815B2 (en) | 2000-02-01 | 2006-03-28 | Japan Science And Technology Corporation | Method for producing vitamin B12 from hydrogen-metabolizing methane bacterium |
| CN1298861C (zh) * | 2000-02-01 | 2007-02-07 | 科学技术振兴事业团 | 用氢代谢甲烷细菌生产维生素b12的方法 |
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