JPH04247048A - 置換フェノール、酸化カプリング反応の検出のための比色分析法およびカプリング成分 - Google Patents
置換フェノール、酸化カプリング反応の検出のための比色分析法およびカプリング成分Info
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- JPH04247048A JPH04247048A JP3235904A JP23590491A JPH04247048A JP H04247048 A JPH04247048 A JP H04247048A JP 3235904 A JP3235904 A JP 3235904A JP 23590491 A JP23590491 A JP 23590491A JP H04247048 A JPH04247048 A JP H04247048A
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- G03C7/32—Colour coupling substances
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- G03C7/346—Phenolic couplers
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- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、置換フェノール、酸化
カプリング反応の検出のための比色分析法およびカプリ
ング成分に関する。
カプリング反応の検出のための比色分析法およびカプリ
ング成分に関する。
【０００２】
【従来の技術】分析化学にとっても、また医学的診断に
とっても、酸化カプリングと呼ばれる検出法は重要であ
る。この場合、カプリング成分を現像剤成分と酸化剤の
存在で反応させて色素にする。特に、適当な発色物質を
用いる過酸化水素の検出はより高度な意義がある。これ
は、特に、過酸化水素が基質と相応する基質オキシダー
ゼおよび酸素との反応の中間生成物として生成し、引き
続き、適当な発色反応成分の存在で、主に触媒としてペ
ルオキシダーゼ（ＰＯＤ）の存在で、光学的に確認可能
な化合物、つまり色素に変換し、その際、生じる色素の
量は、生成する過酸化水素に対して定量的な関係にある
ような数多くの検出法にとって当てはまる。さらに、ペ
ルオキシダーゼは、免疫試験における酵素標識として頻
繁に使用され、過酸化水素および適当な発色反応成分を
添加することにより検出される。この酸化カプリング反
応において、カプリング成分は、現像剤成分の存在で色
素に変換される。過酸化水素／ペルオキシダーゼの検出
については、既に数多くの発色系もしくは指示薬系が挙
げられる。最も公知のものの一つは、Ｔｒｉｎｄｅｒ（
Ａｎｎ． Ｃｌｉｎ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ６， ２４
（１９６９））により記載された指示薬系であり、こ
の指示薬系においては、カプリング成分としてのフェノ
ールを、現像剤成分としての４−アミノアンチピリンと
、ペルオキシダーゼの存在で、Ｈ２Ｏ２の作用下にカプ
リングさせて色素にしている。現像剤成分として４−ア
ミノアンチピリンは、例えばアミノアンチピリンの誘導
体、フェニレンジアミンによって、またはメチルベンゾ
チアゾリンヒドラゾンを用いて置き換えることもできる
。現像剤としてメチルベンゾチアゾリンヒドラゾン（Ｍ
ＢＴＨ）を用いる例は、Ｎ． Ｇｏｃｈｍａｎ ｅｔ
ａｌ． （Ｃｌｉｎ． Ｃｈｅｍ． １７， １１５４
（１９７１） ） 、Ｔ． Ｔ． Ｎｇｏ ｅｔ ａ
ｌ．（Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． １０５， ３８
９（１９８０） ） 、Ｊ． Ｓｉｅｄｅｌ ｅｔ ａ
ｌ．， （Ａｎａｌ． Ｌｅｔｔ． ２１， １００９
（１９８８） ） に記載されている。
とっても、酸化カプリングと呼ばれる検出法は重要であ
る。この場合、カプリング成分を現像剤成分と酸化剤の
存在で反応させて色素にする。特に、適当な発色物質を
用いる過酸化水素の検出はより高度な意義がある。これ
は、特に、過酸化水素が基質と相応する基質オキシダー
ゼおよび酸素との反応の中間生成物として生成し、引き
続き、適当な発色反応成分の存在で、主に触媒としてペ
ルオキシダーゼ（ＰＯＤ）の存在で、光学的に確認可能
な化合物、つまり色素に変換し、その際、生じる色素の
量は、生成する過酸化水素に対して定量的な関係にある
ような数多くの検出法にとって当てはまる。さらに、ペ
ルオキシダーゼは、免疫試験における酵素標識として頻
繁に使用され、過酸化水素および適当な発色反応成分を
添加することにより検出される。この酸化カプリング反
応において、カプリング成分は、現像剤成分の存在で色
素に変換される。過酸化水素／ペルオキシダーゼの検出
については、既に数多くの発色系もしくは指示薬系が挙
げられる。最も公知のものの一つは、Ｔｒｉｎｄｅｒ（
Ａｎｎ． Ｃｌｉｎ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ６， ２４
（１９６９））により記載された指示薬系であり、こ
の指示薬系においては、カプリング成分としてのフェノ
ールを、現像剤成分としての４−アミノアンチピリンと
、ペルオキシダーゼの存在で、Ｈ２Ｏ２の作用下にカプ
リングさせて色素にしている。現像剤成分として４−ア
ミノアンチピリンは、例えばアミノアンチピリンの誘導
体、フェニレンジアミンによって、またはメチルベンゾ
チアゾリンヒドラゾンを用いて置き換えることもできる
。現像剤としてメチルベンゾチアゾリンヒドラゾン（Ｍ
ＢＴＨ）を用いる例は、Ｎ． Ｇｏｃｈｍａｎ ｅｔ
ａｌ． （Ｃｌｉｎ． Ｃｈｅｍ． １７， １１５４
（１９７１） ） 、Ｔ． Ｔ． Ｎｇｏ ｅｔ ａ
ｌ．（Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． １０５， ３８
９（１９８０） ） 、Ｊ． Ｓｉｅｄｅｌ ｅｔ ａ
ｌ．， （Ａｎａｌ． Ｌｅｔｔ． ２１， １００９
（１９８８） ） に記載されている。
【０００３】さらに、酵素による反応の場合に遊離する
芳香族アミンを測定するために、酸化カプリング反応を
使用することができる。γ−グルタミルトランスペプチ
ダーゼ（γ−ＧＴ）およびロイシンアミノペプチダーゼ
（ＬＡＰ）の検出ならびにトロンビンの検出は、診断的
目的のために特に重要である。この場合、そのアミノ酸
配列がそれぞれの酵素の分割位置に相当し、かつそのア
ミド部分が、酸化カプリングの現像剤成分として役立つ
芳香族アミン、特にフェニレンジアミンまたはアミノフ
ェノールまたはこれらの誘導体である「ペプチドアミド
」は、最初に酵素により分割され、次いでカプリング成
分を用いて酸化剤により酸化され色素にされる（参照
ドイツ連邦共和国特許出願公開第３３３１５８８号お
よび欧州特許出願公開第００７６０４２号明細書）。
芳香族アミンを測定するために、酸化カプリング反応を
使用することができる。γ−グルタミルトランスペプチ
ダーゼ（γ−ＧＴ）およびロイシンアミノペプチダーゼ
（ＬＡＰ）の検出ならびにトロンビンの検出は、診断的
目的のために特に重要である。この場合、そのアミノ酸
配列がそれぞれの酵素の分割位置に相当し、かつそのア
ミド部分が、酸化カプリングの現像剤成分として役立つ
芳香族アミン、特にフェニレンジアミンまたはアミノフ
ェノールまたはこれらの誘導体である「ペプチドアミド
」は、最初に酵素により分割され、次いでカプリング成
分を用いて酸化剤により酸化され色素にされる（参照
ドイツ連邦共和国特許出願公開第３３３１５８８号お
よび欧州特許出願公開第００７６０４２号明細書）。
【０００４】酸化カプリング反応の検出の感度は、特に
、使用するカプリング成分に依存する。
、使用するカプリング成分に依存する。
【０００５】文献からは、酸化カプリングのためのカプ
リング成分として多様なフェノール誘導体が記載されて
おり、これを用いて４−アミノアンチピリンまたは置換
ベンゾチアゾリノンヒドラゾンのような現像剤成分を用
いた縮合により過酸化水素に対して感受性の検出系を提
供している（Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ １５ （１９７７） ６９９， Ａｎａｌ．
Ｃｈｉｍ． Ａｃｔａ １３６（１９８２） １２１，
Ａｎａｌ． Ｌｅｔｔ． ２１， １００９ （１９
８８）， 欧州特許出願公開第０１０８５２６号明細書
）。カプリング生成物として生じた色素は、高い分子吸
光係数を示し、この高い分子吸光係数はこのカプリング
成分が酸化カプリング反応の検出のために良く適してい
るように思わせている。しかし、血清成分に対してこの
カプリング生成物の高い障害発生が生じ、ならびに部分
的に反応成分またはカプリング生成物の不十分な安定性
を示すことが不利である。
リング成分として多様なフェノール誘導体が記載されて
おり、これを用いて４−アミノアンチピリンまたは置換
ベンゾチアゾリノンヒドラゾンのような現像剤成分を用
いた縮合により過酸化水素に対して感受性の検出系を提
供している（Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ １５ （１９７７） ６９９， Ａｎａｌ．
Ｃｈｉｍ． Ａｃｔａ １３６（１９８２） １２１，
Ａｎａｌ． Ｌｅｔｔ． ２１， １００９ （１９
８８）， 欧州特許出願公開第０１０８５２６号明細書
）。カプリング生成物として生じた色素は、高い分子吸
光係数を示し、この高い分子吸光係数はこのカプリング
成分が酸化カプリング反応の検出のために良く適してい
るように思わせている。しかし、血清成分に対してこの
カプリング生成物の高い障害発生が生じ、ならびに部分
的に反応成分またはカプリング生成物の不十分な安定性
を示すことが不利である。
【０００６】カプリング成分としての使用に適したフェ
ノール誘導体は、欧州特許出願公開第０１０８５２６号
明細書に記載されている。しかし、ここで開示されたフ
ェノール誘導体、例えば２，４−ジブロモ−３−ヒドロ
キシ安息香酸は、再現可能な結果が得られない。その他
にここに開示されたフェノール性のカップラー、例えば
２，４，６−トリブロモ−３−ヒドロキシ安息香酸は、
血清または尿中での非特異的に還元する物質（例えばビ
リルビン、アスコルビン酸）および薬剤（例えばα−メ
チルドーパ、Ｃａ−ドベシレート）により、酸化カプリ
ングを著しく妨げてしてしまう。
ノール誘導体は、欧州特許出願公開第０１０８５２６号
明細書に記載されている。しかし、ここで開示されたフ
ェノール誘導体、例えば２，４−ジブロモ−３−ヒドロ
キシ安息香酸は、再現可能な結果が得られない。その他
にここに開示されたフェノール性のカップラー、例えば
２，４，６−トリブロモ−３−ヒドロキシ安息香酸は、
血清または尿中での非特異的に還元する物質（例えばビ
リルビン、アスコルビン酸）および薬剤（例えばα−メ
チルドーパ、Ｃａ−ドベシレート）により、酸化カプリ
ングを著しく妨げてしてしまう。
【０００７】従って、従来の技術の欠点、特にわずかな
安定性および非特異的反応性が少なくとも部分的に排除
されるような酸化カプリング反応のためのカプリング成
分についての高い需要が生じる。
安定性および非特異的反応性が少なくとも部分的に排除
されるような酸化カプリング反応のためのカプリング成
分についての高い需要が生じる。
【０００８】ドイツ連邦共和国特許出願公開第２３２０
９６７号明細書には、一般式：
９６７号明細書には、一般式：
【０００９】
【化９】
【００１０】［式中、Ｒ１は、水素原子、塩素原子また
は臭素原子を表し、Ｈａｌは塩素原子または臭素原子を
表し、Ｒ３は、水素原子、メチル基またはエチル基を表
し、Ｒ６はシクロヘキシル基、ヒドロキシシクロヘキシ
ル基またはモルホリノカルボニルメチル基を表し、ｌは
１または２を表す］で示される新規ベンジルアミンおよ
び無機または有機酸とそれとの生理学的に認容性の塩が
開示されている。この化合物は、界面活性剤または抗肺
拡張不全因子の産生に関する向上する作用、特に、分泌
分解および鎮咳作用のほかに、薬理学的特性が書き添え
られている。
は臭素原子を表し、Ｈａｌは塩素原子または臭素原子を
表し、Ｒ３は、水素原子、メチル基またはエチル基を表
し、Ｒ６はシクロヘキシル基、ヒドロキシシクロヘキシ
ル基またはモルホリノカルボニルメチル基を表し、ｌは
１または２を表す］で示される新規ベンジルアミンおよ
び無機または有機酸とそれとの生理学的に認容性の塩が
開示されている。この化合物は、界面活性剤または抗肺
拡張不全因子の産生に関する向上する作用、特に、分泌
分解および鎮咳作用のほかに、薬理学的特性が書き添え
られている。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明の対象は、一般式
Ｉ：
Ｉ：
【００１２】
【化１０】
【００１３】［式中、Ｘは、ＢｒまたはＣｌを表し、ｎ
は、１から３を表し、Ｙは、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＮＲＲ′、
ＳＯ３Ｒ、ＳＯ２ＮＲＲ′またはＯＲを表し、およびＲ
、Ｒ′は、相互に無関係に、ＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキ
ルを表す］で示される化合物である。
は、１から３を表し、Ｙは、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＮＲＲ′、
ＳＯ３Ｒ、ＳＯ２ＮＲＲ′またはＯＲを表し、およびＲ
、Ｒ′は、相互に無関係に、ＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキ
ルを表す］で示される化合物である。
【００１４】意想外に、本発明による２，６−ジハロゲ
ン−３−アルキルフェノールにおいて、すべての要求を
満たすカプリング成分が見出された。この化合物は安定
で、自己酸化に対して不感受性である。本発明の化合物
を使用するこの酸化カプリング反応は、体液中に含有し
ていることがある障害物質により影響を受けない。これ
により得られた色素は安定であり、良好な吸収極大およ
び高い吸光係数を有する。試験において、空値−安定性
および線形性が与えられる。
ン−３−アルキルフェノールにおいて、すべての要求を
満たすカプリング成分が見出された。この化合物は安定
で、自己酸化に対して不感受性である。本発明の化合物
を使用するこの酸化カプリング反応は、体液中に含有し
ていることがある障害物質により影響を受けない。これ
により得られた色素は安定であり、良好な吸収極大およ
び高い吸光係数を有する。試験において、空値−安定性
および線形性が与えられる。
【００１５】本発明による化合物において、有利にＹは
ＣＯ２Ｒ、特に有利にＣＯ２Ｈを表す。ｎ＝１が有利で
ある。
ＣＯ２Ｒ、特に有利にＣＯ２Ｈを表す。ｎ＝１が有利で
ある。
【００１６】さらに、本発明は、一般式Ｉ：
【００１７
】
】
【化１１】
【００１８】［式中、Ｘは、ＢｒまたはＣｌを表し、ｎ
は、１から３を表し、Ｙは、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＮＲＲ′、
ＳＯ３Ｒ、ＳＯ２ＮＲＲ′またはＯＲを表し、およびＲ
、Ｒ′は、相互に無関係に、ＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキ
ルを表す］で示される化合物の製造する方法も包含し、
その際、一般式ＩＩ：
は、１から３を表し、Ｙは、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＮＲＲ′、
ＳＯ３Ｒ、ＳＯ２ＮＲＲ′またはＯＲを表し、およびＲ
、Ｒ′は、相互に無関係に、ＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキ
ルを表す］で示される化合物の製造する方法も包含し、
その際、一般式ＩＩ：
【００１９】
【化１２】
【００２０】［式中、ｎ、Ｙは前記したものを表す］で
示される化合物を、この芳香環の６位のニトロ化により
一般式ＩＩＩ：
示される化合物を、この芳香環の６位のニトロ化により
一般式ＩＩＩ：
【００２１】
【化１３】
【００２２】で示される化合物に変換し、この一般式Ｉ
ＩＩの化合物を芳香環の２および４位の臭素化または塩
素化により一般式ＩＶ：
ＩＩの化合物を芳香環の２および４位の臭素化または塩
素化により一般式ＩＶ：
【００２３】
【化１４】
【００２４】［式中Ｘは、ＢｒまたはＣｌを表す］で示
される化合物に変換し、芳香環の６位のニトロ基を除去
して、最終生成物（Ｉ）を得る。
される化合物に変換し、芳香環の６位のニトロ基を除去
して、最終生成物（Ｉ）を得る。
【００２５】本発明による方法の第１工程は、芳香環の
６位での出発化合物ＩＩのニトロ化であり、その際、化
合物ＩＩＩが得られる。このニトロ化は、当業者に公知
の方法で、出発化合物と、ＨＮＯ３、ニトロ化酸（濃Ｈ
ＮＯ３および濃Ｈ２ＳＯ４との混合物）、テトラフルオ
ロホウ酸ニトロニウム等とを反応させることにより得る
ことができる。
６位での出発化合物ＩＩのニトロ化であり、その際、化
合物ＩＩＩが得られる。このニトロ化は、当業者に公知
の方法で、出発化合物と、ＨＮＯ３、ニトロ化酸（濃Ｈ
ＮＯ３および濃Ｈ２ＳＯ４との混合物）、テトラフルオ
ロホウ酸ニトロニウム等とを反応させることにより得る
ことができる。
【００２６】本発明による方法の第２工程は、芳香環の
２位および４位での化合物ＩＩＩの化合物ＩＶへの臭素
化または塩素化である。芳香環の２位および４位でのハ
ロゲン化は、当業者に公知の方法により行われる。化合
物ＩＩＩの臭素化は、所望のように、ＩＩＩをアルカリ
性水溶液中で臭素と反応させることにより行う。塩素化
は、所望のようにＩＩＩを水溶液中で次亜塩素酸塩で処
理することにより行う。
２位および４位での化合物ＩＩＩの化合物ＩＶへの臭素
化または塩素化である。芳香環の２位および４位でのハ
ロゲン化は、当業者に公知の方法により行われる。化合
物ＩＩＩの臭素化は、所望のように、ＩＩＩをアルカリ
性水溶液中で臭素と反応させることにより行う。塩素化
は、所望のようにＩＩＩを水溶液中で次亜塩素酸塩で処
理することにより行う。
【００２７】本発明による化合物の製造方法の最後の工
程は、芳香環の６位のニトロ基の除去である。これは、
特に、ＩＶのニトロ基を還元してアミノ基にし、これを
ジアゾニウム基に変換し、このジアゾニウム基を還元除
去するように行う。ニトロ基のアミノ基への還元は、た
とえばアルカリ性溶液中で、ジチオナイトまたはスズお
よび塩酸を用いて行うことができる。この際得られた生
成物のジアゾ化は、有利に０℃で鉱酸の存在で、硝酸ナ
トリウムと反応させることにより行われる。生じたジア
ゾニウム塩の還元は、たとえば次亜リン酸または亜リン
酸、その塩、亜スズ酸ナトリウムまたはギ酸と一緒に加
熱することにより行うことができ、その際、ジアゾニウ
ム塩は、亜リン酸ナトリウムと一緒に加熱するのが有利
である。
程は、芳香環の６位のニトロ基の除去である。これは、
特に、ＩＶのニトロ基を還元してアミノ基にし、これを
ジアゾニウム基に変換し、このジアゾニウム基を還元除
去するように行う。ニトロ基のアミノ基への還元は、た
とえばアルカリ性溶液中で、ジチオナイトまたはスズお
よび塩酸を用いて行うことができる。この際得られた生
成物のジアゾ化は、有利に０℃で鉱酸の存在で、硝酸ナ
トリウムと反応させることにより行われる。生じたジア
ゾニウム塩の還元は、たとえば次亜リン酸または亜リン
酸、その塩、亜スズ酸ナトリウムまたはギ酸と一緒に加
熱することにより行うことができ、その際、ジアゾニウ
ム塩は、亜リン酸ナトリウムと一緒に加熱するのが有利
である。
【００２８】このように、式Ｉに該当するすべての化合
物が得られる。２，４−ジハロゲン−３−ヒドロキシフ
ェニル−カルボン酸または−スルホン酸のエステルまた
はアミドは、文献公知および従来の方法により酸から製
造される。
物が得られる。２，４−ジハロゲン−３−ヒドロキシフ
ェニル−カルボン酸または−スルホン酸のエステルまた
はアミドは、文献公知および従来の方法により酸から製
造される。
【００２９】さらに、本発明の対象は、酸化カプリング
反応を検出するための比色分析法であり、その際、カプ
リング成分として、式Ｉ′：
反応を検出するための比色分析法であり、その際、カプ
リング成分として、式Ｉ′：
【００３０】
【化１５】
【００３１】［式中、ＸはＢｒまたはＣｌを表し、ｎは
１から３を表し、ＹはＣＯ２Ｒ、ＣＯＮＲＲ′、ＳＯ３
Ｒ、ＳＯ２ＮＲＲ′、ＮＲＲ′、ＯＲまたはＮＲＲ′Ｒ
″＋を表し、Ｒ、Ｒ′、Ｒ″は、相互に無関係に、Ｈま
たはＣ１〜Ｃ３アルキルを表す］を使用する。
１から３を表し、ＹはＣＯ２Ｒ、ＣＯＮＲＲ′、ＳＯ３
Ｒ、ＳＯ２ＮＲＲ′、ＮＲＲ′、ＯＲまたはＮＲＲ′Ｒ
″＋を表し、Ｒ、Ｒ′、Ｒ″は、相互に無関係に、Ｈま
たはＣ１〜Ｃ３アルキルを表す］を使用する。
【００３２】ＹはＣＯ２Ｒ、有利にＣＯ２Ｈを表し、お
よびｎ＝１を表すカプリング成分が特に有利である。Ｙ
＝ＮＲＲ′、ＮＲＲ′Ｒ″＋を表す場合、カプリング成
分の製造は、有利に、ドイツ連邦共和国特許出願公開第
２３２０９６７号明細書に記載された方法により行う。
よびｎ＝１を表すカプリング成分が特に有利である。Ｙ
＝ＮＲＲ′、ＮＲＲ′Ｒ″＋を表す場合、カプリング成
分の製造は、有利に、ドイツ連邦共和国特許出願公開第
２３２０９６７号明細書に記載された方法により行う。
【００３３】酸化カプリング反応において、本発明によ
るカプリング成分のほかに、酸化剤の存在で反応して色
素になる現像剤成分が必要である。現像剤成分として、
通常のアミノアンチピリン誘導体、フェニレンジアミン
誘導体またはメチルベンゾチアゾリノンヒドラジン誘導
体が適している。スルホン化したメチルベンゾチアゾリ
ノンヒドラジン（ＳＭＢＴＨ）を使用するのが有利であ
る。
るカプリング成分のほかに、酸化剤の存在で反応して色
素になる現像剤成分が必要である。現像剤成分として、
通常のアミノアンチピリン誘導体、フェニレンジアミン
誘導体またはメチルベンゾチアゾリノンヒドラジン誘導
体が適している。スルホン化したメチルベンゾチアゾリ
ノンヒドラジン（ＳＭＢＴＨ）を使用するのが有利であ
る。
【００３４】酸化カプリング反応のための酸化剤として
、Ｈ２Ｏ２／過酸化物活性剤の系を使用するのが有利で
ある。過酸化物活性剤として、ペルオキシダーゼを使用
するのが有利である。他の過酸化物活性剤は、たとえば
タングステン酸およびモリブテン酸およびその塩または
ヨウ化物とこれらの化合物との混合物および鉄イオン、
銅イオン、セリウムイオンおよびバナジン酸である。酸
化剤として、過酸化物、たとえば過硫酸塩または過酢酸
塩ならびに過ヨウ素酸塩、クロロアミン−Ｔおよび特に
、シアノフェリ錯体、たとえばＫ３Ｆｅ（ＣＮ）６が挙
げられる。ドイツ連邦共和国特許出願公開第３３３１５
８８号明細書によるとオキシダーゼも使用することがで
きる。
、Ｈ２Ｏ２／過酸化物活性剤の系を使用するのが有利で
ある。過酸化物活性剤として、ペルオキシダーゼを使用
するのが有利である。他の過酸化物活性剤は、たとえば
タングステン酸およびモリブテン酸およびその塩または
ヨウ化物とこれらの化合物との混合物および鉄イオン、
銅イオン、セリウムイオンおよびバナジン酸である。酸
化剤として、過酸化物、たとえば過硫酸塩または過酢酸
塩ならびに過ヨウ素酸塩、クロロアミン−Ｔおよび特に
、シアノフェリ錯体、たとえばＫ３Ｆｅ（ＣＮ）６が挙
げられる。ドイツ連邦共和国特許出願公開第３３３１５
８８号明細書によるとオキシダーゼも使用することがで
きる。
【００３５】本発明による酸化カプリングの検出方法の
場合、多くの原則的変法がある。
場合、多くの原則的変法がある。
【００３６】ａ）現像剤成分またはｂ）酸化剤あるいは
酸化剤成分を検出することもできる。双方の場合さらに
、直接的検出でも間接的検出でも可能であり、つまり、
直接的検出において、試料中に存在する現像剤成分ある
いは酸化剤の濃度もしくは量を測定するが、間接的検出
は、現像剤成分もしくは酸化剤成分を試料中に製造する
系を測定することができる。
酸化剤成分を検出することもできる。双方の場合さらに
、直接的検出でも間接的検出でも可能であり、つまり、
直接的検出において、試料中に存在する現像剤成分ある
いは酸化剤の濃度もしくは量を測定するが、間接的検出
は、現像剤成分もしくは酸化剤成分を試料中に製造する
系を測定することができる。
【００３７】従って、第１の有利な変法における本発明
は、酸化カプリングのための現像剤成分として機能する
ことができる芳香族アミンまたはそのようなアミンを遊
離する系を検出する方法を包括する。芳香族アミンを遊
離する系とは、特に酵素による分割が可能である基質で
あり、それにより現像剤成分として機能する芳香族アミ
ンを形成する。
は、酸化カプリングのための現像剤成分として機能する
ことができる芳香族アミンまたはそのようなアミンを遊
離する系を検出する方法を包括する。芳香族アミンを遊
離する系とは、特に酵素による分割が可能である基質で
あり、それにより現像剤成分として機能する芳香族アミ
ンを形成する。
【００３８】基質として合成ペプチドアミドを使用する
のが有利である。ペプチドアミドの分割およびそれに関
連する現像剤成分の遊離により、たとえばタンパク質分
解酵素、γ−グルタミルトランスペプチダーゼ、ロイシ
ンアミノペプチダーゼまたはトロンビンを検出すること
ができる。トロンビンの分割のために、たとえば基質と
して合成ペプチドアミド、トシル−グリシル−プロリル
−アルギニン−ｐ−フェニレンジアミン、または、ベー
リンガー マンハイム社から市販されているＣｈｒｏ
ｍｏｚｙｍ（登録商標）を使用することができる。この
検出のための酸化剤として、たとえば［Ｆｅ（ＣＮ）６
］３−、Ｈ２Ｏ２／ペルオキシダーゼ、過ヨウ素塩また
は過硫酸塩、有利に［Ｆｅ（ＣＮ）６］３−またはＨ２
Ｏ２／ペルオキシダーゼが使用される。その他のプロテ
アーゼの測定は、相応して、適当な合成ペプチドアミド
（たとえば多様な市販されているＣｈｒｏｍｏｚｙｍ誘
導体）を使用することができる。
のが有利である。ペプチドアミドの分割およびそれに関
連する現像剤成分の遊離により、たとえばタンパク質分
解酵素、γ−グルタミルトランスペプチダーゼ、ロイシ
ンアミノペプチダーゼまたはトロンビンを検出すること
ができる。トロンビンの分割のために、たとえば基質と
して合成ペプチドアミド、トシル−グリシル−プロリル
−アルギニン−ｐ−フェニレンジアミン、または、ベー
リンガー マンハイム社から市販されているＣｈｒｏ
ｍｏｚｙｍ（登録商標）を使用することができる。この
検出のための酸化剤として、たとえば［Ｆｅ（ＣＮ）６
］３−、Ｈ２Ｏ２／ペルオキシダーゼ、過ヨウ素塩また
は過硫酸塩、有利に［Ｆｅ（ＣＮ）６］３−またはＨ２
Ｏ２／ペルオキシダーゼが使用される。その他のプロテ
アーゼの測定は、相応して、適当な合成ペプチドアミド
（たとえば多様な市販されているＣｈｒｏｍｏｚｙｍ誘
導体）を使用することができる。
【００３９】本発明による方法の第２の有利な変法では
、酸化カプリング反応のための酸化剤またはその成分を
直接検出する。「酸化剤の成分」の概念は、酸化剤とし
て、過酸化水素を過酸化物活性化物質と一緒に使用する
ことができることに関連する。従って、Ｈ２Ｏ２ならび
に過酸化物活性化物質を酸化剤の成分として検出するこ
とができる。直接検出法において、ペルオキシダーゼの
酵素的活性を測定するのが有利である。さらに、この反
応バッチにＨ２Ｏ２、本発明によるカプリング成分なら
びに適当な現像剤成分が添加される。有利に他のポリペ
プチド、特に有利に抗体または抗体フラグメントと結合
しているペルオキシダーゼが検出され、その結果、ペル
オキシダーゼ活性は、免疫テストの定量化のための本発
明によるカプリング成分を用いて測定することができる
。
、酸化カプリング反応のための酸化剤またはその成分を
直接検出する。「酸化剤の成分」の概念は、酸化剤とし
て、過酸化水素を過酸化物活性化物質と一緒に使用する
ことができることに関連する。従って、Ｈ２Ｏ２ならび
に過酸化物活性化物質を酸化剤の成分として検出するこ
とができる。直接検出法において、ペルオキシダーゼの
酵素的活性を測定するのが有利である。さらに、この反
応バッチにＨ２Ｏ２、本発明によるカプリング成分なら
びに適当な現像剤成分が添加される。有利に他のポリペ
プチド、特に有利に抗体または抗体フラグメントと結合
しているペルオキシダーゼが検出され、その結果、ペル
オキシダーゼ活性は、免疫テストの定量化のための本発
明によるカプリング成分を用いて測定することができる
。
【００４０】本発明による方法のもう一つの有利な変法
では、間接的に、酸化カプリングのための酸化剤または
酸化剤成分を遊離する系を検出する。特にこれは、過酸
化水素を産生する系、たとえば臨床での診断において重
要な基質／基質オキシダーゼペアーであると理解される
、その際、基質は空気酸素の存在で酸化しＨ２Ｏ２を産
生する。従って、どの成分が試薬に添加されるかどうか
によって、基質または基質オキシダーゼを検出すること
ができる。基質／基質オキシダーゼペアーの例は、次の
過酸化水素形成系が挙げられる：グルコース／グルコー
スオキシダーゼ、ガラクトース／ガラクトースオキシダ
ーゼ、Ｌ−アミノ酸／Ｌ−アミノ酸オキシダーゼ、コレ
ステリン／コレステリンオキシダーゼ、尿酸／ウリケー
ゼ、サルコシン／サルコシンオキシダーゼ、グリセリン
／グリセリンオキシダーゼ、グリセリンホスフェート／
グリセリンホスフェートオキシダーゼおよびピルビン酸
／ピルビン酸オキシダーゼ。
では、間接的に、酸化カプリングのための酸化剤または
酸化剤成分を遊離する系を検出する。特にこれは、過酸
化水素を産生する系、たとえば臨床での診断において重
要な基質／基質オキシダーゼペアーであると理解される
、その際、基質は空気酸素の存在で酸化しＨ２Ｏ２を産
生する。従って、どの成分が試薬に添加されるかどうか
によって、基質または基質オキシダーゼを検出すること
ができる。基質／基質オキシダーゼペアーの例は、次の
過酸化水素形成系が挙げられる：グルコース／グルコー
スオキシダーゼ、ガラクトース／ガラクトースオキシダ
ーゼ、Ｌ−アミノ酸／Ｌ−アミノ酸オキシダーゼ、コレ
ステリン／コレステリンオキシダーゼ、尿酸／ウリケー
ゼ、サルコシン／サルコシンオキシダーゼ、グリセリン
／グリセリンオキシダーゼ、グリセリンホスフェート／
グリセリンホスフェートオキシダーゼおよびピルビン酸
／ピルビン酸オキシダーゼ。
【００４１】本発明による検出法は、キュベット中でも
、または乾燥試薬支持体上でも実施することができる。 酸化カプリング反応の定量化は、この場合、光度計を用
いて透過測定を介して、規約反射光度計を用いて規約反
射測定を介してまたは比色を用いて視覚的比較により行
う。
、または乾燥試薬支持体上でも実施することができる。 酸化カプリング反応の定量化は、この場合、光度計を用
いて透過測定を介して、規約反射光度計を用いて規約反
射測定を介してまたは比色を用いて視覚的比較により行
う。
【００４２】さらに、本発明の対象は、カプリング成分
と現像剤成分とが酸化剤の存在で反応して色素になる酸
化カプリング反応の検出のためのカプリング成分として
の一般式Ｉ′（前記参照）の化合物の用途である。本発
明によるカプリング成分を、過酸化水素または過酸化水
素を遊離する系の検出のため、またはペルオキシダーゼ
またはその他の過酸化物活性化剤の検出のため、または
現像剤成分として適当である芳香族アミン、もしくはこ
のようなアミンを遊離することができる系の検出のため
に使用するのが有利である。
と現像剤成分とが酸化剤の存在で反応して色素になる酸
化カプリング反応の検出のためのカプリング成分として
の一般式Ｉ′（前記参照）の化合物の用途である。本発
明によるカプリング成分を、過酸化水素または過酸化水
素を遊離する系の検出のため、またはペルオキシダーゼ
またはその他の過酸化物活性化剤の検出のため、または
現像剤成分として適当である芳香族アミン、もしくはこ
のようなアミンを遊離することができる系の検出のため
に使用するのが有利である。
【００４３】さらに、本発明の対象は、カプリング成分
として一般式Ｉ′の化合物、適当な緩衝液および場合に
より湿潤剤、活性剤またはその他の公知の助剤を含有す
るカプリング成分と、現像剤成分とを酸化剤の存在で反
応させて色素にする酸化カプリング反応の検出のための
試薬である。
として一般式Ｉ′の化合物、適当な緩衝液および場合に
より湿潤剤、活性剤またはその他の公知の助剤を含有す
るカプリング成分と、現像剤成分とを酸化剤の存在で反
応させて色素にする酸化カプリング反応の検出のための
試薬である。
【００４４】本発明による試薬を用いて、キュベット中
で測定されるテスト系を製造することができる。このた
め、本発明によるカプリング成分は、それぞれのパラメ
ータの検出のために必要な物質（酵素または他の試薬）
、緩衝液ならびに場合により湿潤剤、活性剤および他の
助剤と一緒に粉末として混合し、錠剤にプレス加工する
か、または水に溶かし、再び乾燥させるかまたは凍結乾
燥させる。こうして得られた試薬混合物は、使用する前
に、水または他の適当な溶剤に溶かし、このようにして
試薬溶液が準備される。試料（基質溶液、酵素溶液、血
清または血漿）と、試薬溶液もしくは試薬混合物のアリ
コートとを混合した後、酸化カプリングにより生じた色
素の色を光度計で測定した。分子吸光係数および添加し
た試薬−もしくは試料容量を介して検出すべきパラメー
タのそれぞれの濃度を計算する。この場合、動的でも、
終点測定も可能である。
で測定されるテスト系を製造することができる。このた
め、本発明によるカプリング成分は、それぞれのパラメ
ータの検出のために必要な物質（酵素または他の試薬）
、緩衝液ならびに場合により湿潤剤、活性剤および他の
助剤と一緒に粉末として混合し、錠剤にプレス加工する
か、または水に溶かし、再び乾燥させるかまたは凍結乾
燥させる。こうして得られた試薬混合物は、使用する前
に、水または他の適当な溶剤に溶かし、このようにして
試薬溶液が準備される。試料（基質溶液、酵素溶液、血
清または血漿）と、試薬溶液もしくは試薬混合物のアリ
コートとを混合した後、酸化カプリングにより生じた色
素の色を光度計で測定した。分子吸光係数および添加し
た試薬−もしくは試料容量を介して検出すべきパラメー
タのそれぞれの濃度を計算する。この場合、動的でも、
終点測定も可能である。
【００４５】同様に、本発明によるカプリング成分は、
酸化可能な現像剤成分と関係して、ペルオキシダーゼ、
それぞれのパラメータの検出に必要な試薬もしくは酵素
、緩衝液系、場合により湿潤剤および活性剤ならびに他
の助剤と一緒に、吸収性の試薬支持体、たとえば紙、フ
リース等に含浸させることができる。これについて、１
種以上の含浸溶液は、試薬または助剤の溶解性に応じて
必要な水溶液または有機溶液もしくは混合溶液の形で製
造することができる。この溶液を用いて、吸収性または
膨潤性支持体、有利に濾紙または吸収性ガラスフリース
またはプラスチックフリースに含浸させるかまたは吹き
付けられる。引き続き乾燥する。こうして製造した試薬
支持体は、液体（たとえば血液、尿または唾液のような
体液、または果汁、牛乳等のような食品）の内容物の直
接的な測定のための急速診断剤として使用することがで
きる。その際、測定すべき液体をこの試薬支持体と接触
させる。半定量は、こうして生じた色を基準比較するこ
とにより行うことができる。定量評価は、規約反射測光
により（ｒｅｍｉｓｓｉｏｎｓｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｓ
ｃｈ）行うのが有利である。この規約反射測光評価は、
指示薬が残りの必要な試薬および助剤および被膜形成プ
ラスチック（たとえばドイツ連邦共和国特許第１５９８
１５３号明細書）と一緒に試薬被膜に加工される場合、
特に良好に実施することができる。
酸化可能な現像剤成分と関係して、ペルオキシダーゼ、
それぞれのパラメータの検出に必要な試薬もしくは酵素
、緩衝液系、場合により湿潤剤および活性剤ならびに他
の助剤と一緒に、吸収性の試薬支持体、たとえば紙、フ
リース等に含浸させることができる。これについて、１
種以上の含浸溶液は、試薬または助剤の溶解性に応じて
必要な水溶液または有機溶液もしくは混合溶液の形で製
造することができる。この溶液を用いて、吸収性または
膨潤性支持体、有利に濾紙または吸収性ガラスフリース
またはプラスチックフリースに含浸させるかまたは吹き
付けられる。引き続き乾燥する。こうして製造した試薬
支持体は、液体（たとえば血液、尿または唾液のような
体液、または果汁、牛乳等のような食品）の内容物の直
接的な測定のための急速診断剤として使用することがで
きる。その際、測定すべき液体をこの試薬支持体と接触
させる。半定量は、こうして生じた色を基準比較するこ
とにより行うことができる。定量評価は、規約反射測光
により（ｒｅｍｉｓｓｉｏｎｓｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｓ
ｃｈ）行うのが有利である。この規約反射測光評価は、
指示薬が残りの必要な試薬および助剤および被膜形成プ
ラスチック（たとえばドイツ連邦共和国特許第１５９８
１５３号明細書）と一緒に試薬被膜に加工される場合、
特に良好に実施することができる。
【００４６】本発明による試薬もしくは本発明による方
法にとって適当な緩衝液系は、有利に６〜１０、特に有
利に６．５〜７．５のｐＨ値を有する。最も頻繁に、ア
ルカリ−またはアンモニウム対イオンを有するリン酸塩
−、クエン酸塩−、ホウ酸塩−またはＧＯＯＤ−緩衝液
が使用される。しかし、他の系も同様に使用することが
できる。湿潤剤は特に、本発明による化合物とイオン性
の相互作用を生じることができるようなアニオン性およ
びカチオン性湿潤剤である。しかし、酵素を活性化する
ことができる非イオン性湿潤剤も同様に使用することが
できる。ナトリウムラウリルスルフェート、ジオクチル
ナトリウムスルホスクシネートおよびアルキルアリール
ポリエーテルアルコールが有利である。活性化剤として
、それぞれの基質反応に対して公知の活性剤を使用する
ことができる。この酸化カプリングはそれ自体、付加的
活性化が必要ないように思われるほど急速に進行する。 その他の助剤として、他のカプリング成分を用いた相応
するテストにおいて公知であるような常用の増粘剤、乳
化剤、蛍光増白剤、コントラスト剤など、場合により使
用することができる。
法にとって適当な緩衝液系は、有利に６〜１０、特に有
利に６．５〜７．５のｐＨ値を有する。最も頻繁に、ア
ルカリ−またはアンモニウム対イオンを有するリン酸塩
−、クエン酸塩−、ホウ酸塩−またはＧＯＯＤ−緩衝液
が使用される。しかし、他の系も同様に使用することが
できる。湿潤剤は特に、本発明による化合物とイオン性
の相互作用を生じることができるようなアニオン性およ
びカチオン性湿潤剤である。しかし、酵素を活性化する
ことができる非イオン性湿潤剤も同様に使用することが
できる。ナトリウムラウリルスルフェート、ジオクチル
ナトリウムスルホスクシネートおよびアルキルアリール
ポリエーテルアルコールが有利である。活性化剤として
、それぞれの基質反応に対して公知の活性剤を使用する
ことができる。この酸化カプリングはそれ自体、付加的
活性化が必要ないように思われるほど急速に進行する。 その他の助剤として、他のカプリング成分を用いた相応
するテストにおいて公知であるような常用の増粘剤、乳
化剤、蛍光増白剤、コントラスト剤など、場合により使
用することができる。
【００４７】このカプリング反応は、通常、室温で行う
が、たとえば先行する酵素による反応の反応速度に対し
て有効である場合に、高めた温度で、たとえば３７℃で
容易に実施することができる。基質、たとえば酵素との
通常の生じる反応のために、次の濃度のテスト溶液が有
利である：カプリング成分：０．０５〜１００ｍｍｏｌ
／ｌ、有利に０．１〜３ｍｍｏｌ／ｌ現像剤成分：０．
０５〜５０ｍｍｏｌ／ｌ、有利に０．１〜１ｍｍｏｌ／
ｌ緩衝液：０．０５〜１ｍｏｌ／ｌ、有利に０．１〜０
．５ｍｏｌ／ｌ湿潤剤：０〜１ｍｏｌ／ｌ、有利に０．
０５〜０．１ｍｏｌ／ｌテスト試薬にペルオキシダーゼ
を添加する場合、これは１．０〜５０００ｋＵ／ｌの濃
度で行うのが有利である。この試薬にＨ２Ｏ２もしくは
Ｈ２Ｏ２産生基質または基質オキシダーゼを添加する場
合、これは０．１〜１０ｍｍｏｌ／ｌの濃度で行うのが
有利である。その他の助剤は、０〜５ｍｏｌ／ｌの濃度
で存在するのが有利である。
が、たとえば先行する酵素による反応の反応速度に対し
て有効である場合に、高めた温度で、たとえば３７℃で
容易に実施することができる。基質、たとえば酵素との
通常の生じる反応のために、次の濃度のテスト溶液が有
利である：カプリング成分：０．０５〜１００ｍｍｏｌ
／ｌ、有利に０．１〜３ｍｍｏｌ／ｌ現像剤成分：０．
０５〜５０ｍｍｏｌ／ｌ、有利に０．１〜１ｍｍｏｌ／
ｌ緩衝液：０．０５〜１ｍｏｌ／ｌ、有利に０．１〜０
．５ｍｏｌ／ｌ湿潤剤：０〜１ｍｏｌ／ｌ、有利に０．
０５〜０．１ｍｏｌ／ｌテスト試薬にペルオキシダーゼ
を添加する場合、これは１．０〜５０００ｋＵ／ｌの濃
度で行うのが有利である。この試薬にＨ２Ｏ２もしくは
Ｈ２Ｏ２産生基質または基質オキシダーゼを添加する場
合、これは０．１〜１０ｍｍｏｌ／ｌの濃度で行うのが
有利である。その他の助剤は、０〜５ｍｏｌ／ｌの濃度
で存在するのが有利である。
【００４８】前記の濃度範囲は、それぞれキュベット中
での測光テストに対して下方範囲が有利であり、急速テ
ストおよび固体支持体上でのテストに対して上方の範囲
が有利である。
での測光テストに対して下方範囲が有利であり、急速テ
ストおよび固体支持体上でのテストに対して上方の範囲
が有利である。
【００４９】アミダーゼとして作用する酵素の検出のた
めに、前記のリストにおいて、現像成分は、相応する量
のペプチドアミド基質により置き換えられ、場合により
Ｈ２Ｏ２の代わりに相応する量のほかの酸化剤、たとえ
ばＫ３ＦｅＣＮ６が使用される。
めに、前記のリストにおいて、現像成分は、相応する量
のペプチドアミド基質により置き換えられ、場合により
Ｈ２Ｏ２の代わりに相応する量のほかの酸化剤、たとえ
ばＫ３ＦｅＣＮ６が使用される。
【００５０】次に、本発明を実施例につき詳説する。
【００５１】例１
２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−フェニル酢酸の製
造 ａ）３−ヒドロキシ−６−ニトロ−フェニル酢酸３−ヒ
ドロキシフェニル酢酸１５．２ｇ（１００ｍｍｏｌ）を
、水１５ｍｌ中に懸濁させ、冷却しながらゆっくりと６
５％の硝酸１７．５ｍｌを滴加した。引き続き室温で１
時間撹拌し、氷上に注いだ。沈殿物を濾取し、わずかな
酢酸エステルで洗浄した。さらに生成物を濾液から得る
ことができた。これをｐＨ１に調節し、クロロホルムで
洗浄し、引き続きｐＨ５．５に調節し、酢酸エステルで
数回振出した。合わせた酢酸エステル相を水で洗浄し、
濃縮した。冷却後に沈殿物が生じ、これを濾取し、わず
かな酢酸エステルで洗浄した。収量：６．８（３４％）
ＤＣ：Ｒｆ＝０．４２（シリカゲル；クロロホルム／メ
タノール６：１＋１％氷酢酸）融点：１９４℃ ｂ）２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−６−ニトロ−
フェニル酢酸１ａ）からの生成物１０ｇ（５０ｍｍｏｌ
）を水１００ｍｌおよび２Ｎ苛性ソーダ液５０ｍｌに溶
かし、次に２０分間に臭素６ｍｌを滴加した。短時間後
に、沈殿物が生じ、水で洗浄した。 収量：１６．５ｇ（９２％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．４（シリカゲル；クロロホルム／メタ
ノール６：１＋１％氷酢酸） ｃ）６−アミノ−２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−
フェニル酢酸１ｂ）からの生成物１６．２ｇ（４６ｍｍ
ｏｌ）を水１４０ｍｌに収容し、２Ｎ苛性ソーダ液２７
７ｍｌを添加した。氷冷しながら、Ｎａ２Ｓ２Ｏ４５７
．６ｇを少しずつ添加し、次に酸性にし、酢酸エステル
で数回振出した。合わせた酢酸エステル相を水で洗浄し
、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶剤を除去した後、所望
の生成物が残留した。 収量：８ｇ（５４％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．３１（シリカゲル；クロロホルム／メ
タノール１：１＋１％氷酢酸） ｄ）２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−フェニル酢酸
１ｃ）からの生成物８ｇ（２４．６ｍｍｏｌ）を１０％
の硫酸１５５ｍｌ中に収容し、冷却しながら水３０ｍｌ
中のＮａＮＯ２７．５ｇの溶液を滴加した。生じた懸濁
液をなお２０分間後撹拌し、次に水１５．４ｍｌ中の次
亜リン酸ナトリウム３８ｇの７０℃に加熱した溶液に添
加した。引き続き、７０℃で１時間放置し、次に冷却し
た。沈殿物を濾別し、シリカゲルクロマトグラフィーに
より精製した（展開剤：酢酸エステル／石油エーテル６
：２）。引き続き、単離した生成物を酢酸エステル／ヘ
キサンから再結晶させた。 収量：１．６ｇ（２２％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．２７（シリカゲル；酢酸エステル／石
油エーテル６：１）融点：１８６℃ 例２ ２，４−ジクロロ−３−ヒドロキシ−フェニル酢酸の製
造 ａ）２，４−ジクロロ−３−ヒドロキシ−６−ニトロ−
フェニル酢酸 １ａ）からの生成物１０．８ｇ（５５ｍｍｏｌ）を水３
３０ｍｌに溶かし、ジ亜塩素酸ナトリウム溶液１８０ｍ
ｌを添加した。１時間撹拌した後、濃ＨＣｌでｐＨ１に
酸性化した。生じた沈殿物をＨＣｌおよび水で洗浄した
。この母液から酢酸エステルを用いて振出することによ
りなおさらに生成物を単離した。 収量：１０．４ｇ（７１％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．４（シリカゲル；クロロホルム／メタ
ノール６：１＋１％氷酢酸） ｂ）６−アミノ−２，４−ジクロロ−３−ヒドロキシ−
フェニル酢酸 例１ｃ）と同様。２ａ）からの生成物９．５ｇ（３６ｍ
ｍｏｌ）、ナトリウムジチオナイト４７ｇ、水６６ｍｌ
および２Ｎ苛性ソーダ液１３７ｍｌから。 収量：６．６ｇ（７８％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．３８（シリカゲル；クロロホルム／メ
タノール６：１＋１％氷酢酸） ｃ）２，４−ジクロロ−３−ヒドロキシ−フェニル酢酸
例１ｄ）と同様。２ｂ）からの生成物７ｇ（３０ｍｍｏ
ｌ）、１０％の硫酸１９０ｍｌ、ＮａＮＯ２５．３ｇ、
次亜リン酸ナトリウム６０ｇから。カラムクロマトグラ
フィーを酢酸エステル／石油エーテル１：１を用いて実
施した。 収量： ＤＣ：Ｒｆ＝０．４４（シリカゲル；酢酸エステル／石
油エーテル１：１） 例３ クレアチニンの測定 テストの実施： 日立７０４の自動分析装置でのクレアチニンイミノヒド
ロラーゼ、Ｎ−メチルヒダントイナーゼ、Ｎ−カルバモ
イルサルコシンアミドヒドロラーゼおよびサルコシンオ
キシダーゼを介する酵素によるクレアチニン測定（Ｊ．
Ｓｉｅｄｅｌｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ
Ｌｅｔｔｅｒｓ ２１， １００９−１０１７， １９
８８参照）。
造 ａ）３−ヒドロキシ−６−ニトロ−フェニル酢酸３−ヒ
ドロキシフェニル酢酸１５．２ｇ（１００ｍｍｏｌ）を
、水１５ｍｌ中に懸濁させ、冷却しながらゆっくりと６
５％の硝酸１７．５ｍｌを滴加した。引き続き室温で１
時間撹拌し、氷上に注いだ。沈殿物を濾取し、わずかな
酢酸エステルで洗浄した。さらに生成物を濾液から得る
ことができた。これをｐＨ１に調節し、クロロホルムで
洗浄し、引き続きｐＨ５．５に調節し、酢酸エステルで
数回振出した。合わせた酢酸エステル相を水で洗浄し、
濃縮した。冷却後に沈殿物が生じ、これを濾取し、わず
かな酢酸エステルで洗浄した。収量：６．８（３４％）
ＤＣ：Ｒｆ＝０．４２（シリカゲル；クロロホルム／メ
タノール６：１＋１％氷酢酸）融点：１９４℃ ｂ）２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−６−ニトロ−
フェニル酢酸１ａ）からの生成物１０ｇ（５０ｍｍｏｌ
）を水１００ｍｌおよび２Ｎ苛性ソーダ液５０ｍｌに溶
かし、次に２０分間に臭素６ｍｌを滴加した。短時間後
に、沈殿物が生じ、水で洗浄した。 収量：１６．５ｇ（９２％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．４（シリカゲル；クロロホルム／メタ
ノール６：１＋１％氷酢酸） ｃ）６−アミノ−２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−
フェニル酢酸１ｂ）からの生成物１６．２ｇ（４６ｍｍ
ｏｌ）を水１４０ｍｌに収容し、２Ｎ苛性ソーダ液２７
７ｍｌを添加した。氷冷しながら、Ｎａ２Ｓ２Ｏ４５７
．６ｇを少しずつ添加し、次に酸性にし、酢酸エステル
で数回振出した。合わせた酢酸エステル相を水で洗浄し
、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶剤を除去した後、所望
の生成物が残留した。 収量：８ｇ（５４％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．３１（シリカゲル；クロロホルム／メ
タノール１：１＋１％氷酢酸） ｄ）２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−フェニル酢酸
１ｃ）からの生成物８ｇ（２４．６ｍｍｏｌ）を１０％
の硫酸１５５ｍｌ中に収容し、冷却しながら水３０ｍｌ
中のＮａＮＯ２７．５ｇの溶液を滴加した。生じた懸濁
液をなお２０分間後撹拌し、次に水１５．４ｍｌ中の次
亜リン酸ナトリウム３８ｇの７０℃に加熱した溶液に添
加した。引き続き、７０℃で１時間放置し、次に冷却し
た。沈殿物を濾別し、シリカゲルクロマトグラフィーに
より精製した（展開剤：酢酸エステル／石油エーテル６
：２）。引き続き、単離した生成物を酢酸エステル／ヘ
キサンから再結晶させた。 収量：１．６ｇ（２２％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．２７（シリカゲル；酢酸エステル／石
油エーテル６：１）融点：１８６℃ 例２ ２，４−ジクロロ−３−ヒドロキシ−フェニル酢酸の製
造 ａ）２，４−ジクロロ−３−ヒドロキシ−６−ニトロ−
フェニル酢酸 １ａ）からの生成物１０．８ｇ（５５ｍｍｏｌ）を水３
３０ｍｌに溶かし、ジ亜塩素酸ナトリウム溶液１８０ｍ
ｌを添加した。１時間撹拌した後、濃ＨＣｌでｐＨ１に
酸性化した。生じた沈殿物をＨＣｌおよび水で洗浄した
。この母液から酢酸エステルを用いて振出することによ
りなおさらに生成物を単離した。 収量：１０．４ｇ（７１％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．４（シリカゲル；クロロホルム／メタ
ノール６：１＋１％氷酢酸） ｂ）６−アミノ−２，４−ジクロロ−３−ヒドロキシ−
フェニル酢酸 例１ｃ）と同様。２ａ）からの生成物９．５ｇ（３６ｍ
ｍｏｌ）、ナトリウムジチオナイト４７ｇ、水６６ｍｌ
および２Ｎ苛性ソーダ液１３７ｍｌから。 収量：６．６ｇ（７８％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．３８（シリカゲル；クロロホルム／メ
タノール６：１＋１％氷酢酸） ｃ）２，４−ジクロロ−３−ヒドロキシ−フェニル酢酸
例１ｄ）と同様。２ｂ）からの生成物７ｇ（３０ｍｍｏ
ｌ）、１０％の硫酸１９０ｍｌ、ＮａＮＯ２５．３ｇ、
次亜リン酸ナトリウム６０ｇから。カラムクロマトグラ
フィーを酢酸エステル／石油エーテル１：１を用いて実
施した。 収量： ＤＣ：Ｒｆ＝０．４４（シリカゲル；酢酸エステル／石
油エーテル１：１） 例３ クレアチニンの測定 テストの実施： 日立７０４の自動分析装置でのクレアチニンイミノヒド
ロラーゼ、Ｎ−メチルヒダントイナーゼ、Ｎ−カルバモ
イルサルコシンアミドヒドロラーゼおよびサルコシンオ
キシダーゼを介する酵素によるクレアチニン測定（Ｊ．
Ｓｉｅｄｅｌｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ
Ｌｅｔｔｅｒｓ ２１， １００９−１０１７， １９
８８参照）。
【００５２】試薬１ ３５０μｌ（クレアチニンイミ
ノヒドロラーゼ１５Ｕ／ｌ、Ｎ−メチルヒダントイナー
ゼ０．５Ｕ／ｍｌ、サルコシンオキシダーゼ５Ｕ／ｍｌ
、ペルオキシダーゼ３Ｕ／ｍｌならびにＴＲＩＳ Ｈ
Ｃｌ １００ｍｍｏｌ／ｌ ｐＨ７．９中のそれぞ
れ調査したフェノール性の銅を含有）を、血清試料７μ
ｌにピペットで添加した。５分間の前インキュベートの
後、試薬２ ７０μｌ（カルバモイルサルコシンアミ
ドヒドロラーゼ１５Ｕ／ｍｌ、ＭＢＴＨ−Ｓ（３−メチ
ル−２−ベンゾ−（２′−スルホ）チアゾリノンヒドラ
ゾン）０．９ｍｍｏｌ／ｌ、ＴＲＩＳ ＨＣｌ １
００ｍｍｏｌ／ｌ ｐＨ７．９中のＡＴＰ３０ｍｍｏ
ｌ／ｌを含有）をピペットで添加し、６〜１０分の５４
６ｎｍでの吸光度の増加を測定した。フェノール性色素
カプラーとして、それぞれ最大の感度に最適化された量
の２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−フェニル酢酸（
２．４ｍｍｏｌ／ｌ）を使用した。
ノヒドロラーゼ１５Ｕ／ｌ、Ｎ−メチルヒダントイナー
ゼ０．５Ｕ／ｍｌ、サルコシンオキシダーゼ５Ｕ／ｍｌ
、ペルオキシダーゼ３Ｕ／ｍｌならびにＴＲＩＳ Ｈ
Ｃｌ １００ｍｍｏｌ／ｌ ｐＨ７．９中のそれぞ
れ調査したフェノール性の銅を含有）を、血清試料７μ
ｌにピペットで添加した。５分間の前インキュベートの
後、試薬２ ７０μｌ（カルバモイルサルコシンアミ
ドヒドロラーゼ１５Ｕ／ｍｌ、ＭＢＴＨ−Ｓ（３−メチ
ル−２−ベンゾ−（２′−スルホ）チアゾリノンヒドラ
ゾン）０．９ｍｍｏｌ／ｌ、ＴＲＩＳ ＨＣｌ １
００ｍｍｏｌ／ｌ ｐＨ７．９中のＡＴＰ３０ｍｍｏ
ｌ／ｌを含有）をピペットで添加し、６〜１０分の５４
６ｎｍでの吸光度の増加を測定した。フェノール性色素
カプラーとして、それぞれ最大の感度に最適化された量
の２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−フェニル酢酸（
２．４ｍｍｏｌ／ｌ）を使用した。
【００５３】試薬組成物：
試薬１ ＴＲＩＳ ＨＣｌ，ｐＨ（室温）７．９
１００ｍｍｏｌ／ｌ
ＫＣｌ
２００ｍｍｏｌ／ｌ ＭｇＣｌ２
５ｍｍｏｌ／ｌ
ＮＨ４Ｃｌ
１０ｍｍｏｌ／ｌ Ｋ４Ｆｅ（
ＣＮ）６
１０μｍｏｌ／ｌ
クレアチニンイミノヒドロラーゼ
１５Ｕ／ｍｌ
１−メチルヒダントイナーゼ
０．５Ｕ
／ｍｌ サルコシンオキシダーゼ
５Ｕ／ｍｌ アスコルベートオキシ
ダーゼ
１０Ｕ／ｍｌ ペルオキシダーゼ
３Ｕ／ｍｌ ２
，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−フェニル酢酸
（テス
ト中２ｍｍｏｌ／ｌ） ２．４ｍｍｏ
ｌ／ｌ試薬２ ＴＲＩＳ ＨＣｌ，ｐＨ（室温）７
．９ １００ｍｍｏｌ／ｌ
ＡＴＰ
３０ｍｍｏｌ／ｌ カルバ
モイルサルコシンヒドロラーゼ
１５Ｕ／ｍｌ ＭＢＴＨ−
Ｓ（テスト中０．１５ｍｍｏｌ／ｌ）
０．９ｍｍｏｌ／ｌ テストの実施： 日立７０４光度計での測定 試薬１ ３５０μｌ試料
７μｌインキュベーシ
ョン ５分 試薬２ ７０μｌ６分から
１０分までの測定 測定温度：３７℃ 測定波長：５４６ｎｍ 基準波長：７００ｎｍ 酵素によるクレアチニンテストにおける障害酸化カプリ
ング反応を、血清中のクレアチンの測定のために実施し
た。カプリング成分として、２，４，６−トリブロモ−
３−ヒドロキシ安息香酸（欧州特許出願公開第０１０８
５２６号明細書による）および２，４−ジブロモ−３−
ヒドロキシ−フェニル酢酸（本発明の例１による）を比
較した。現像剤成分として、メチルベンゾチアゾリンヒ
ドラゾン−スルホネートを使用した。
１００ｍｍｏｌ／ｌ
ＫＣｌ
２００ｍｍｏｌ／ｌ ＭｇＣｌ２
５ｍｍｏｌ／ｌ
ＮＨ４Ｃｌ
１０ｍｍｏｌ／ｌ Ｋ４Ｆｅ（
ＣＮ）６
１０μｍｏｌ／ｌ
クレアチニンイミノヒドロラーゼ
１５Ｕ／ｍｌ
１−メチルヒダントイナーゼ
０．５Ｕ
／ｍｌ サルコシンオキシダーゼ
５Ｕ／ｍｌ アスコルベートオキシ
ダーゼ
１０Ｕ／ｍｌ ペルオキシダーゼ
３Ｕ／ｍｌ ２
，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−フェニル酢酸
（テス
ト中２ｍｍｏｌ／ｌ） ２．４ｍｍｏ
ｌ／ｌ試薬２ ＴＲＩＳ ＨＣｌ，ｐＨ（室温）７
．９ １００ｍｍｏｌ／ｌ
ＡＴＰ
３０ｍｍｏｌ／ｌ カルバ
モイルサルコシンヒドロラーゼ
１５Ｕ／ｍｌ ＭＢＴＨ−
Ｓ（テスト中０．１５ｍｍｏｌ／ｌ）
０．９ｍｍｏｌ／ｌ テストの実施： 日立７０４光度計での測定 試薬１ ３５０μｌ試料
７μｌインキュベーシ
ョン ５分 試薬２ ７０μｌ６分から
１０分までの測定 測定温度：３７℃ 測定波長：５４６ｎｍ 基準波長：７００ｎｍ 酵素によるクレアチニンテストにおける障害酸化カプリ
ング反応を、血清中のクレアチンの測定のために実施し
た。カプリング成分として、２，４，６−トリブロモ−
３−ヒドロキシ安息香酸（欧州特許出願公開第０１０８
５２６号明細書による）および２，４−ジブロモ−３−
ヒドロキシ−フェニル酢酸（本発明の例１による）を比
較した。現像剤成分として、メチルベンゾチアゾリンヒ
ドラゾン−スルホネートを使用した。
【００５４】テスト中に使用した血清を、ビリルビン、
ヘモグロビン、アスコルビン酸、Ｃａ−ドベシレートお
よびメチルドーパで増量した。第Ｉ表は、それぞれの際
に、本発明のカプリング成分を使用した場合、公知のト
リブロモヒドロキシ安息香酸を使用した場合よりもクレ
アチニン−再検出がより良好であることを示した。
ヘモグロビン、アスコルビン酸、Ｃａ−ドベシレートお
よびメチルドーパで増量した。第Ｉ表は、それぞれの際
に、本発明のカプリング成分を使用した場合、公知のト
リブロモヒドロキシ安息香酸を使用した場合よりもクレ
アチニン−再検出がより良好であることを示した。
【００５５】第Ｉ表：
増量したヒト血清中のクレアチニン再検出［％］ 障
害 トリブロモヒドロ
キシ ジブロモヒドロキシ（増量）
安息香酸
フェニル酢酸
（ＥＰ−Ａ０１
０８５２６）ビリルビン２５ｍｇ／ｄｌ
６４．７
９２．１ヘモリーゼ３００ｍｇ／ｄｌ
Ｈｂ １０３．８
１０１．８Ｃａ−ドベシレ
ート５０ｍｇ／ｌ ９５．８
９６．５メチ
ルドーパ２０ｍｇ／ｌ ８９．７
９
６．３アスコルビン酸３０ｍｇ／ｄｌ ９７
．２
１００．０ 例４ ２，６−ジブロモ−３−ヒドロキシエチル−フェノール
の製造 ａ）３−ヒドロキシエチル−４−ニトロフェノール例１
ａ）と同様に、２−（ｍ−ヒドロキシフェニル）−エタ
ノール１７．５ｇおよび４０％の硝酸４２ｍｌから収量
：６．９ｇ（３０％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．２６（シリカゲル；トルエン／酢酸エ
ステル１：４） 融点：１６７℃ ｂ）２，６−ジブロモ−３−ヒドロキシエチル−４−ニ
トロフェノール例１ｂ）と同様に、４ａ）からの生成物
１０ｇ、水１１０ｍｌ、２Ｎ苛性ソーダ液５０ｍｌおよ
び臭素７．２ｍｌから 収量：１７．１ｇ（９３％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．１（シリカゲル；トルエン／酢酸エス
テル１：４） 融点：１３７℃ ｃ）４−アミノ−２，６−ジブロモ−３−ヒドロキシエ
チル−フェノール例１ｃ）と同様に、４ｂ）からの生成
物２１．８ｇ、水２００ｍｌ、２Ｎ苛性ソーダ液３８８
ｍｌおよびＮａ２Ｓ２Ｏ４８１ｇから 収量：１５．１ｇ（７６％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．８３（シリカゲル；クロロホルム／メ
タノール１：１） ｄ）２，６−ジブロモ−３−ヒドロキシエチル−フェノ
ール 例１ｄ）と同様に、４ｃ）からの生成物１５．１ｇ、１
０％の硫酸３００ｍｌ、ＮａＮＯ２７．５ｇおよび次亜
リン酸ナトリウム７４ｇから。
害 トリブロモヒドロ
キシ ジブロモヒドロキシ（増量）
安息香酸
フェニル酢酸
（ＥＰ−Ａ０１
０８５２６）ビリルビン２５ｍｇ／ｄｌ
６４．７
９２．１ヘモリーゼ３００ｍｇ／ｄｌ
Ｈｂ １０３．８
１０１．８Ｃａ−ドベシレ
ート５０ｍｇ／ｌ ９５．８
９６．５メチ
ルドーパ２０ｍｇ／ｌ ８９．７
９
６．３アスコルビン酸３０ｍｇ／ｄｌ ９７
．２
１００．０ 例４ ２，６−ジブロモ−３−ヒドロキシエチル−フェノール
の製造 ａ）３−ヒドロキシエチル−４−ニトロフェノール例１
ａ）と同様に、２−（ｍ−ヒドロキシフェニル）−エタ
ノール１７．５ｇおよび４０％の硝酸４２ｍｌから収量
：６．９ｇ（３０％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．２６（シリカゲル；トルエン／酢酸エ
ステル１：４） 融点：１６７℃ ｂ）２，６−ジブロモ−３−ヒドロキシエチル−４−ニ
トロフェノール例１ｂ）と同様に、４ａ）からの生成物
１０ｇ、水１１０ｍｌ、２Ｎ苛性ソーダ液５０ｍｌおよ
び臭素７．２ｍｌから 収量：１７．１ｇ（９３％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．１（シリカゲル；トルエン／酢酸エス
テル１：４） 融点：１３７℃ ｃ）４−アミノ−２，６−ジブロモ−３−ヒドロキシエ
チル−フェノール例１ｃ）と同様に、４ｂ）からの生成
物２１．８ｇ、水２００ｍｌ、２Ｎ苛性ソーダ液３８８
ｍｌおよびＮａ２Ｓ２Ｏ４８１ｇから 収量：１５．１ｇ（７６％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．８３（シリカゲル；クロロホルム／メ
タノール１：１） ｄ）２，６−ジブロモ−３−ヒドロキシエチル−フェノ
ール 例１ｄ）と同様に、４ｃ）からの生成物１５．１ｇ、１
０％の硫酸３００ｍｌ、ＮａＮＯ２７．５ｇおよび次亜
リン酸ナトリウム７４ｇから。
【００５６】沈殿物を水から再結晶させた。
収量：５００ｍｇ
ＤＣ：Ｒｆ＝０．６８（シリカゲル；トルエン／酢酸エ
ステル１：３） 例５ ２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシフェニル−プロピオ
ン酸の製造 ５ａ）３−ヒドロキシフェニル−プロピオン酸３−ヒド
ロキシケイ皮酸１５ｇを水／エタノール混合物（１：１
）３００ｍｌに溶かし、パラジウム／活性炭０．７５ｇ
でもはや消耗が確認されなくなるまで水素化した。触媒
を濾別した後、溶剤を留去した。 収量：１４．７ｇ（９７％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．６３（シリカゲル；クロロホルム／メ
タノール４：１） 次の合成工程を前記した例と同様に製造した。このデー
タは下記した表にまとめた。
ステル１：３） 例５ ２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシフェニル−プロピオ
ン酸の製造 ５ａ）３−ヒドロキシフェニル−プロピオン酸３−ヒド
ロキシケイ皮酸１５ｇを水／エタノール混合物（１：１
）３００ｍｌに溶かし、パラジウム／活性炭０．７５ｇ
でもはや消耗が確認されなくなるまで水素化した。触媒
を濾別した後、溶剤を留去した。 収量：１４．７ｇ（９７％） ＤＣ：Ｒｆ＝０．６３（シリカゲル；クロロホルム／メ
タノール４：１） 次の合成工程を前記した例と同様に製造した。このデー
タは下記した表にまとめた。
【００５７】５ｂ）３−ヒドロキシ−６−ニトロフェニ
ル−プロピオン酸（例１ａ）と同様） ５ｃ）２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−６−ニトロ
フェニル−プロピオン酸（例１ｂ）と同様）５ｄ）６−
アミノ−２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−フェニル
プロピオン酸（例１ｃ）と同様）５ｅ）２，４−ジブロ
モ−３−ヒドロキシフェニルプロピオン酸（例１ｄ）と
同様） 表 試料 収率 ＤＣ＝Ｒ
ｆ 展開剤 ［％］
［シリカゲル］ ５ｂ） １９
０．５３ クロロホルム
／メタノール７：１＋
１％酢酸 ５ｃ） ５０
０．１５ クロロホルム／メタノール４
：１ ５ｄ） ４９ ０．２３
クロロホルム／メタノール４：１ ５ｅ
） １０ ０．２８
酢酸エステル／石油エーテル６：１例６ ２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシフェニル−エチルス
ルホン酸 ６ａ）３−ヒドロキシフェニル−エチレンスルホン酸こ
の製造は、３−ヒドロキシベンズアルデヒドおよびスル
ホ酢酸から、Ｇ． Ｊｏｎｅｓ， Ｏｒｇ． Ｒｅａｃ
ｔｉｏｎｓ １５， ２０４（６７）と同様にクネベナ
ーゲル縮合（Ｋｎｏｅｖｅｍａｇｅｌ Ｋｏｎｄｅｎｓ
ａｔｉｏｎ）により行った。
ル−プロピオン酸（例１ａ）と同様） ５ｃ）２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−６−ニトロ
フェニル−プロピオン酸（例１ｂ）と同様）５ｄ）６−
アミノ−２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−フェニル
プロピオン酸（例１ｃ）と同様）５ｅ）２，４−ジブロ
モ−３−ヒドロキシフェニルプロピオン酸（例１ｄ）と
同様） 表 試料 収率 ＤＣ＝Ｒ
ｆ 展開剤 ［％］
［シリカゲル］ ５ｂ） １９
０．５３ クロロホルム
／メタノール７：１＋
１％酢酸 ５ｃ） ５０
０．１５ クロロホルム／メタノール４
：１ ５ｄ） ４９ ０．２３
クロロホルム／メタノール４：１ ５ｅ
） １０ ０．２８
酢酸エステル／石油エーテル６：１例６ ２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシフェニル−エチルス
ルホン酸 ６ａ）３−ヒドロキシフェニル−エチレンスルホン酸こ
の製造は、３−ヒドロキシベンズアルデヒドおよびスル
ホ酢酸から、Ｇ． Ｊｏｎｅｓ， Ｏｒｇ． Ｒｅａｃ
ｔｉｏｎｓ １５， ２０４（６７）と同様にクネベナ
ーゲル縮合（Ｋｎｏｅｖｅｍａｇｅｌ Ｋｏｎｄｅｎｓ
ａｔｉｏｎ）により行った。
【００５８】次の合成工程は前記の例と同様に製造した
。
。
【００５９】６ｂ）３−ヒドロキシフェニル−エチルス
ルホン酸（例５ａ）と同様） ６ｃ）３−ヒドロキシ−６−ニトロフェニル−エチルス
ルホン酸（例１ａ）と同様） ６ｄ）２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−６−ニトロ
フェニル−エチルスルホン酸（例１ｂ）と同様）６ｅ）
６−アミノ−２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシフェニ
ル−エチルスルホン酸（例１ｃ）と同様）６ｆ）２，４
−ジブロモ−３−ヒドロキシフェニル−エチルスルホン
酸（例１ｄ）と同様）
ルホン酸（例５ａ）と同様） ６ｃ）３−ヒドロキシ−６−ニトロフェニル−エチルス
ルホン酸（例１ａ）と同様） ６ｄ）２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシ−６−ニトロ
フェニル−エチルスルホン酸（例１ｂ）と同様）６ｅ）
６−アミノ−２，４−ジブロモ−３−ヒドロキシフェニ
ル−エチルスルホン酸（例１ｃ）と同様）６ｆ）２，４
−ジブロモ−３−ヒドロキシフェニル−エチルスルホン
酸（例１ｄ）と同様）
Claims (6)
- 【請求項１】 一般式Ｉ： 【化１】 ［式中、Ｘは、ＢｒまたはＣｌを表し、ｎは、１から３
を表し、Ｙは、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＮＲＲ′、ＳＯ３Ｒ、Ｓ
Ｏ２ＮＲＲ′またはＯＲを表し、およびＲ、Ｒ′は、相
互に無関係に、ＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキルを表す］で
示される化合物。 - 【請求項２】 一般式Ｉ： 【化２】 ［式中、Ｘは、ＢｒまたはＣｌを表し、ｎは、１から３
を表し、Ｙは、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＮＲＲ′、ＳＯ３Ｒ、Ｓ
Ｏ２ＮＲＲ′またはＯＲを表し、およびＲ、Ｒ′は、相
互に無関係に、ＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキルを表す］で
示される化合物の製造方法において、一般式ＩＩ：【化
３】 ［式中、ｎ、Ｙは前記したものを表す］で示される化合
物を、芳香環の６位のニトロ化により、一般式ＩＩＩ：
【化４】 で示される化合物に変換し、一般式ＩＩＩの化合物を芳
香環の２位および４位の臭素化または塩素化により、一
般式ＩＶ： 【化５】 ［式中、Ｘは、ＢｒまたはＣｌを表す］で示される化合
物に変換し、芳香環の６位のニトロ基を除去して最終生
成物（Ｉ）を得ることを特徴とする一般式Ｉの化合物の
製造方法。 - 【請求項３】 一般式ＩＶのニトロ基を還元してアミ
ノ基にし、これをジアゾニウム基に変換し、引き続きこ
のジアゾニウム基を還元により除去する請求項２記載の
方法。 - 【請求項４】 カプリング成分を現像剤成分と酸化剤
の存在で反応させて色素にする酸化カプリング反応を検
出する比色分析法において、カプリング成分として一般
式Ｉ′： 【化６】 ［式中、Ｘは、ＢｒまたはＣｌを表し、ｎは、１から３
を表し、Ｙは、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＮＲＲ′、ＳＯ３Ｒ、Ｓ
Ｏ２ＮＲＲ′、ＯＲ、ＮＲＲ′またはＮＲＲ′Ｒ″＋を
表し、Ｒ、Ｒ′、Ｒ″は、相互に無関係にＨまたはＣ１
〜Ｃ３アルキルを表す］で示される化合物を使用するこ
とを特徴とする酸化カプリング反応を検出する比色分析
法。 - 【請求項５】 現像剤成分と酸化剤の存在で反応させ
て色素にする酸化カプリング反応を検出するための一般
式Ｉ′： 【化７】 ［式中、Ｘは、ＢｒまたはＣｌを表し、ｎは、１から３
を表し、Ｙは、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＮＲＲ′、ＳＯ３Ｒ、Ｓ
Ｏ２ＮＲＲ′、ＯＲ、ＮＲＲ′またはＮＲＲ′Ｒ″＋を
表し、Ｒ、Ｒ′、Ｒ″は、相互に無関係にＨまたはＣ１
〜Ｃ３アルキルを表す］で示される化合物からなるカプ
リング成分。 - 【請求項６】 カプリング成分として一般式Ｉ′：【
化８】 ［式中、Ｘは、ＢｒまたはＣｌを表し、ｎは、１から３
を表し、Ｙは、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＮＲＲ′、ＳＯ３Ｒ、Ｓ
Ｏ２ＮＲＲ′、ＯＲ、ＮＲＲ′またはＮＲＲ′Ｒ″＋を
表し、Ｒ、Ｒ′、Ｒ″は、相互に無関係にＨまたはＣ１
〜Ｃ３アルキルを表す］で示される化合物、適当な緩衝
液および場合により湿潤剤、活性剤またはそのほか常用
の助剤を含有する、現像剤成分と酸化剤の存在で反応さ
せて色素にする酸化カプリング反応を検出するための試
薬。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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