JPH04248986A - 化合物ｔａｎ−１４６０およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は抗腫瘍剤として有用な新
規物質であるＴＡＮ−１４６０、その製造法および用途
に関する。

【０００２】

【従来の技術】以下に記載するところから明らかなごと
く、ＴＡＮ−１４６０は本発明者らが見出した新規物質
で、ＴＡＮ−１４６０ＡおよびＢの２種が見出されてい
る（以下、これらを総称して、単にＴＡＮ−１４６０と
称する場合もある）。ＴＡＮ−１４６０は物性データよ
り、フトラマイシン（ｐｈｔｈｏｒａｍｙｃｉｎ、天然
有機化合物討論会講演要旨集、Ｐ．３０８、１９８８年
）、カイモノライドＡ（ＫａｉｍｏｎｏｌｉｄｅＡ、天
然有機化合物討論会講演要旨集、Ｐ．６５６、１９８９
年）およびＳＳ４９（天然有機化合物討論会講演要旨集
、Ｐ．３１６、１９８９年）などに化学構造が類似して
いると推定されるが、ＣＭＲスペクトラムが明らかに異
なっており、ＴＡＮ−１４６０はこれらの化合物とは別
物質である。また、これらの化合物の抗腫瘍性について
は未だ報告されていない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】近年、種々の腫瘍形成
によって死亡する人々は益々増加しているが、未だこの
疾病にたいして信頼性のある薬剤は殆ど認められず、常
に新しい型の抗腫瘍剤が求められている。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らはかかる状況
に鑑み、強い抗腫瘍性を示す新規化合物を新たに微生物
代謝産物中に探索した結果、強力な腫瘍細胞増殖阻害作
用を示すＴＡＮ−１４６０を見出し、本発明を完成する
に至った。すなわち、本発明は１）化合物ＴＡＮ−１４
６０ＡまたはＢ、２）ストレプトミセス属に属し、化合
物ＴＡＮ−１４６０ＡまたはＢを生産する能力を有する
微生物を培地に培養し、培養物中に化合物ＴＡＮ−１４
６０ＡまたはＢを生成蓄積せしめ、これを採取すること
を特徴とする化合物ＴＡＮ−１４６０ＡまたはＢの製造
法、および３）ＴＡＮ−１４６０ＡまたはＢを含有して
なる抗腫瘍剤に関する。

【０００５】本発明の製造法で使用されるＴＡＮ−１４
６０を生産する微生物としてはストレプトミセス属に属
し、ＴＡＮ−１４６０ＡまたはＢあるいは両者を産生す
る能力を有する微生物であればいずれのものでもよい。 その例としては、インドで採取した土壌より分離された
ＡＬ−８９２０株が挙げられ、本菌株の菌学的性質は下
記のとおりである。なお、各種培地上の性質はとくに指
示しない限り、２８℃で１４日間培養し、常法に従って
観察したものであり、色調はカラー・ハーモニー・マニ
ュアル（Ｃｏｌｏｒ　　Ｈａｒｍｏｎｙ　　Ｍａｎｕａ
ｌ）第４版［コンティナー・コーポレーション・オブ・
アメリカ（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ　　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉ
ｏｎ　　ｏｆ　　Ａｍｅｒｉｃａ）、１９５８年発行］
によった。

【０００６】１．形態 気菌糸および胞子の形成は、イースト・麦芽寒天、オー
トミール寒天、グルコース・アスパラギン寒天、グリセ
ロール・アスパラギン寒天、スターチ・無機塩寒天、栄
養寒天等の培地で中程度ないし貧弱に認められる。気菌
糸の分枝は単純分枝で、車軸分枝は認められず、この先
端には開放したらせん状胞子の連鎖が認められる。菌束
糸、菌核、胞子のう等の特殊な構造は認められない。電
子顕微鏡による観察では、胞子の表面は平滑であり、胞
子の形は楕円形ないし円筒形であり、それらの大きさは
０．５〜０．８×０．９〜１．２ミクロンで、通常１０
個以上連鎖する。また、これらの胞子は運動性を示さな
い。

【０００７】２．各種分類培地上の性質（２８℃、１４
日間培養） １）　　シュークロース硝酸塩寒天培地生　　　　　　
育：貧弱 気　　菌　　糸：貧弱、白色 裏面の色　　：象牙色（２ｃａ） 可溶性色素：なし ２）　　イースト・麦芽寒天培地 生　　　　　　育：良好 気　　菌　　糸：なし 裏面の色　　：淡黄褐色（２ｇａ） 可溶性色素：なし ３）　　オートミール寒天培地 生　　　　　　育：中程度ないし良好 気　　菌　　糸：極めて貧弱、白色ないし暗灰黒色（２
ｍｌ）、湿潤化 裏面の色　　：象牙色（２ｅａ） 可溶性色素：なし ４）　　スターチ無機塩寒天培地 生　　　　　　育：良好 気　　菌　　糸：貧弱ないし中程度、淡灰色ないし暗灰
黒色（３ｂａ〜２ｍｌ）、湿潤化 裏面の色　　：淡黄褐色（２ｇａ） 可溶性色素：なし ５）　　グリセロール・アスパラギン寒天培地生　　　
　　　育：良好 気　　菌　　糸：貧弱ないし中程度、淡灰色（３ｂａ）
裏面の色　　：淡黄褐色（２ｇａ） 可溶性色素：なし ６）　　グルコース・アスパラギン寒天培地生　　　　
　　育：良好 気　　菌　　糸：極めて貧弱、白色ないし暗灰黒色（２
ｉｈ）、湿潤化 裏面の色　　：淡黄褐色（２ｇａ） 可溶性色素：なし ７）　　ペプトン・イースト・鉄寒天培地生　　　　　
　育：中程度ないし良好 気　　菌　　糸：なし 裏面の色　　：淡黄灰色（２ｇｃ） 可溶性色素：産生、暗褐灰色（２ｌｇ）８）　　チロシ
ン寒天培地 生　　　　　　育：貧弱ないし中程度 気　　菌　　糸：極めて貧弱、淡灰色ないし灰色（３ｃ
ｂ〜３ｉｈ） 裏面の色　　：淡黄灰色ないし黄灰色（２ｇｃ〜２ｉｃ
）可溶性色素：産生、黄灰色（２ｌｅ） ９）　　栄養寒天培地 生　　　　　　育：中程度ないし良好 気　　菌　　糸：極めて貧弱、白色ないし淡灰色（３ｃ
ｂ）裏面の色　　：象牙色（２ｃａ） 可溶性色素：なし

【０００８】３．生理的性質 １）　　生育温度：　１６℃〜４４℃ 至適温度：　２６℃〜３３℃ ２）　　ゼラチンの液化：　　陰性 ３）　　澱粉の加水分解：　　陽性 ４）　　ミルクのペプトン化：陰性 ５）　　ミルクの凝固：　　陰性 ６）　　硝酸塩の還元：　　陽性 ７）　　メラニン様色素の生成：　　陰性８）　　炭素
源の利用性 Ｄ−グルコース　　　　　　　　　　＋＋Ｄ−キシロー
ス　　　　　　　　　　＋Ｌ−アラビノース　　　　　
　　　＋＋Ｌ−ラムノース　　　　　　　　　　＋＋Ｄ
−フラクトース　　　　　　　　＋＋ラフィノース　　
　　　　　　　　　　＋＋Ｄ−マンニトール　　　　　
　　　− ｉ−イノシトール　　　　　　　　　＋＋シュークロー
ス　　　　　　　　　　＋＋無添加　　　　　　　　　
　　　　　　　　　−基礎培地：プリードハムとゴット
リーブ寒天培地

【０００９】４．全菌体の加水分解中の
ジアノピメリン酸の分析 本菌は、全菌体の加水分解物中に、ＬＬ−ジアミノピメ
リン酸を含有する。以上の分類的性質を要約すると、Ａ
Ｌ−８９２０株は１）気菌糸先端がらせん状を呈し、連
鎖する胞子を形成する。胞子表面は平滑である。２）菌
束糸を形成せず、運動性胞子を生成しない。３）発育色
調は淡黄色ないし、象牙色を示し、気菌糸は通常白色な
いし灰色で時に湿潤化して灰黒色を呈する。４）メラニ
ン様色素生成が認められない。５）菌体よりＬＬ−ジア
ミノピメリン酸が検出される、などである。

【００１０】以上の性質をもとにアール・イー・ブッフ
ァナン・アンド・エヌ・イー・ギボンス編、バージーズ
・マニュアル・オブ・デタミネーティブ・バクテリオロ
ジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　　Ｍａｎｕａｌ　　ｏｆ　　
Ｄｉｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏ
ｇｙ）第８版、１９７４年に従って検索を行った結果、
上記ＡＬ−８９２０株はストレプトミセス属に属するこ
とが判明したので、本菌をストレプトミセス　　エス・
ピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｓｐ．）ＡＬ−８
９２０と命名した。ＡＬ−８９２０株は、平成３年１月
９日財団法人・発酵研究所（ＩＦＯ）に受託番号ＩＦＯ
１５１２３として寄託され、また、平成３年１月２８日
にブタペスト条約の下、通商産業省工業技術院微生物工
業技術研究所（ＦＲＩ）に受託番号ＦＥＲＭ　　ＢＰ−
３２４６として寄託されている。

【００１１】ストレプトマイセス属に属するＴＡＮ−１
４６０の生産菌は、他の放線菌の場合と同様に、たとえ
ば紫外線、エックス線、放射線などの照射、単胞子分離
、種々の変異処理、その他の手段で変異させることが出
来、このような変異株あるいは自然に得られる突然変異
株であっても、上記した分類学的性状との比較において
実質的に別種とするに足らず、しかも当該化合物を生産
する性質を有するものは、すべて本発明方法に利用し得
る。

【００１２】ＴＡＮ−１４６０生産菌の培養に用いられ
る培地は該菌が利用し得る栄養源を含むものなら、液状
でも固状でもよいが、大量に処理するときには液体培地
を用いるのがより適当である。培地には、当該生産菌が
同化し得る炭素源、窒素源、無機物質、微量栄養源が適
宜配合される。炭素源としては、たとえばグルコース、
ラクトース、シュークロース、マルトース、デキストリ
ン、スターチ、グリセリン、マンニトール、ソルビトー
ル、油脂類（例、大豆油、ラード油、チキン油など）、
ｎ−パラフィンその他が、窒素源としては、たとえば肉
エキス、酵母エキス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・ステ
ィープ・リカー、ペプトン、棉実粉、廃糖蜜、尿素、ア
ンモニウム塩類（例、硫酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウムなど）その
他が用いられる。さらに、ナトリウム、カリウム、カル
シウム、マグネシウムなどを含む塩類、鉄、マンガン、
亜鉛、コバルト、ニッケルなどの金属塩類、リン酸、ホ
ウ酸などの塩類や酢酸、プロピオン酸などの有機酸の塩
類が適宜用いられる。その他、アミノ酸（例、グルタミ
ン酸、アスパラギン酸、アラニン、リジン、メチオニン
、プロリンなど）、ペプチド（例、ジペプチド、トリペ
プチドなど）、ビタミン類（例、Ｂ１、Ｂ２、ニコチン
酸、Ｂ１２、Ｃなど）、核酸類（例、プリン、ピリミジ
ン、その誘導体など）等を含有させてもよい。もちろん
、培地のｐＨを調節する目的で無機または有機の酸また
はアルカリ類、緩衝剤等を加え、あるいは消泡の目的で
油脂類、界面活性剤等の適量を添加して差し支えない。 液体培養に際しては、培地のｐＨは中性付近、特にｐＨ
５．５〜７が好ましい。培養温度は約２４℃〜３０℃、
培養時間は約４８時間〜１６８時間が好ましい。

【００１３】培養物から目的とする化合物ＴＡＮ−１４
６０を採取するには、ＴＡＮ−１４６０が中性で脂溶性
を示す化合物であるから、この性質を利用する一般的手
段で採取することができる。培養物中、ＴＡＮ−１４６
０は菌体および濾液中に含まれるので、先ず、培養液に
水と混和する有機溶媒、すなわちメタノール、アセトン
などを加え、濾過後、有機溶媒を留去し、水層をｐＨ３
〜８、好ましくはｐＨ５〜７に調整後、水と混和しない
有機溶媒、たとえばジクロロメタン、酢酸エチル、メチ
ルイソブチルケトンあるいはイソブタノールなどを加え
、活性物質を抽出する方法が用いられる。かくして得ら
れた抽出液を減圧下で濃縮すると、ＴＡＮ−１４６０を
含有する粗物質が得られる。

【００１４】粗物質をさらに精製し、純粋なＴＡＮ−１
４６０ＡおよびＢを得るには種々のクロマトグラフィー
法が有利に用いられる。担体としてはシリカゲル、セル
ロース、セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製
、スウェーデン）または吸着性樹脂などが用いられ、こ
れらは通常カラムクロマトグラフィー法で行われる。 カラムから活性物質を溶出するには適当な有機溶媒、た
とえばヘキサン、トルエン、酢酸エチル、ジクロロエタ
ン、アセトン、メタノール、水などの単独あるいは混合
溶媒が用いられる。また、分取用高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）によってもＴＡＮ−１４６０Ａおよ
びＢを精製することができる。担体としてはオクタデシ
ルシラン（ＯＤＳ）系およびシリカゲル系のものが有利
に用いられる。移動相は担体によって異なるが、たとえ
ばＯＤＳの場合、メタノールあるいはアセトニトリルと
塩類含有水溶液の混合溶液が有利に用いられる。

【００１５】分画された画分はそのまま濃縮するか、あ
るいは有機溶媒で抽出後、抽出液を濃縮し、濃縮液にエ
ーテルなどを加えると、ＴＡＮ−１４６０ＡあるいはＢ
が粉末固体として得られる。下記の実施例２で得られた
ＴＡＮ−１４６０の物理化学的性状を第１表に示す。

【００１６】

【表１】第１表 ＴＡＮ−１４６０　　Ａ 　　（１）外観：白色粉末 （２）融点：１２８〜１３６℃ （３）比旋光度：［α］Ｄ−１１°（ｃ　　１．０，Ｍ
ｅＯＨ） （４）呈色反応： 陽性；リンモリブデン酸、ヨウ素、濃硫酸、エールリッ
ヒ（酸性） 陰性；ニンヒドリン、ドラーゲンドルフ、坂口、エール
リッヒ（塩基性）、グレイグ．リーバック（５）高速液
体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体；　　ＯＤＳ
、ＹＭＣ−Ｐａｃｋ　　Ａ−３１２移動相；７０％アセ
トニトリル／０．０１Ｍ　　リン酸緩衝液（ｐＨ６．３
） 流速；２ｍｌ／ｍｉｎ 検出法；ＵＶ（２１４ｎｍ） 溶出時間；５．１（ｍｉｎ） （６）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体シリカ
ゲル６０Ｆ２５４（メルク社製、ドイツ）展開溶媒；ｎ
−ヘキサン：アセトン（１：１）Ｒｆ値；０．４９ （７）性質：中性脂溶性物質 （８）元素分析値：（％） 実測値；Ｃ，６４．３０；Ｈ，９．４４計算値；Ｃ，６
４．８４；Ｈ，９．２５；Ｏ，２５．９１ （９）分子量：ｍ／ｚ７４０（Ｍ＋）、（ＥＩマス　　
スペクトルより） （１０）分子式：Ｃ４０Ｈ６８Ｏ１２ 　　（１１）ＵＶスペクトル：メタノール中、極大値：
２１５ｎｍ（ε１０，６００）（１２）ＩＲスペクトル
：ＫＢｒ錠剤中、主に波数を示す（ｃｍ−１）；第１図
参照、 ３４５０、２９４０、２８８０、１７１０、１６５０、
１４６０、１３９０、１２８０、１２４０、１１９０、
１１２０、１０８０、１０２０、９８０、８８０（１３
）１３Ｃ　　ＮＭＲスペクトル：７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ
３中、δｐｐｍ；第２図参照、 １６４．９９（Ｑ）、１５０．９６（ＣＨ）、１３２．
７５（ＣＨ）、１３２．１１（ＣＨ）、１１９．３５（
ＣＨ）、９８．２５（Ｑ）、９６．９８（Ｑ）、７９．
９９（ＣＨ）、７７．９４（ＣＨ）、７７．３６（ＣＨ
）、７５．２４（Ｑ）、７５．１７（Ｑ）、６９．１５
（ＣＨ）、６８．５１（ＣＨ）、６７．３７（ＣＨ）、
６６．２８（ＣＨ）、６６．２５（ＣＨ２）、５０．７
６（ＣＨ）、４１．３６（ＣＨ２）、３９．５６（ＣＨ
２）、３９．１６（ＣＨ）、３７．３３（ＣＨ２）、３
５．２８（ＣＨ２）、３４．９３（ＣＨ２）、３４．５
７（ＣＨ）、３４．１６（ＣＨ２）、３２．７３（ＣＨ
２）、３０．６７（ＣＨ）、３０．４３（ＣＨ）、３０
．１３（ＣＨ２）、２９．０５（ＣＨ２）、２７．２６
（ＣＨ３）、２６．８４（ＣＨ２）、２２．３７（ＣＨ
２）、１９．２３（ＣＨ３）、１６．９２（ＣＨ３）、
１１．２６（ＣＨ３）、１０．２６（ＣＨ３）、６．１
６（ＣＨ３）、５．１１（ＣＨ３）ＴＡＮ−１４６０　
　Ｂ 　　（１）外観：白色粉末 （２）融点：１１５〜１２３℃ （３）比旋光度：［α］Ｄ−２．５°（ｃ　　１．０，
ＭｅＯＨ） （４）呈色反応： 陽性；リンモリブデン酸、ヨウ素、濃硫酸、エールリッ
ヒ（酸性） 陰性；ニンヒドリン、ドラーゲンドルフ、坂口、エール
リッヒ（塩基性）、グレイグ．リーバック（５）ＨＰＬ
Ｃ： 担体；　　ＯＤＳ、ＹＭＣ−Ｐａｃｋ　　Ａ−３１２移
動相；７０％アセトニトリル／０．０１Ｍ　　リン酸緩
衝液（ｐＨ６．３） 流速；２ｍｌ／ｍｉｎ 検出法；ＵＶ（２１４ｎｍ） 溶出時間；７．２（ｍｉｎ） （６）ＴＬＣ： 担体シリカゲル６０Ｆ２５４ 　　　　　　　　展開溶媒；ｎ−ヘキサン：アセトン（
１：１）Ｒｆ値；０．５８ （７）性質：中性脂溶性物質 （８）元素分析値：（％） 実測値；Ｃ，６５．８２；Ｈ，９．８３計算値；Ｃ，６
６．２７；Ｈ，９．４５；Ｏ，２４．２８ （９）分子量：ｍ／ｚ７２４（Ｍ＋）、（ＥＩマス　　
スペクトルより） （１０）分子式：Ｃ４０Ｈ６８Ｏ１１ 　　（１１）ＵＶスペクトル：メタノール中、極大値：
２１０（ε１３，０００） （１２）ＩＲスペクトル：ＫＢｒ錠剤中、主な波数を示
す（ｃｍ−１）；第３図参照、 ３４７０、２９４０、２８９０、１７２０、１６５０、
１４６０、１３９０、１２９０、１２４０、１１９０、
１１３０、１０８０、１０２０、９８０、８８０（１３
）１３Ｃ　　ＮＭＲスペクトル：７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ
３中、δｐｐｍ；第４図参 照、１６４．９３（Ｑ）、１５１．６１（ＣＨ）、１３
２．６９（ＣＨ）、１３２．１４（ＣＨ）、１２１．８
９（ＣＨ）、９８．２７（Ｑ）、９６．９７（Ｑ）、８
０．８０（ＣＨ）、７７．８４（ＣＨ）、７７．２８（
ＣＨ）、７５．１３（Ｑ）、６９．３４（ＣＨ）、６８
．４８（ＣＨ）、６７．３７（ＣＨ）、６６．２８（Ｃ
Ｈ）、６６．２４（ＣＨ２）、５０．７８（ＣＨ）、４
１．３８（ＣＨ２）、４１．２２（ＣＨ）、３９．６１
（ＣＨ２）、３９．３４（ＣＨ）、３７．４０（ＣＨ２
）、３５．３７（ＣＨ２）、３５．２８（ＣＨ２）、３
４．５８（ＣＨ）、３４．１９（ＣＨ２）、３２．９１
（ＣＨ２）、３０．６８（ＣＨ）、３０．４５（ＣＨ）
、３０．１５（ＣＨ２）、２９．０７（ＣＨ２）、２６
．８５（ＣＨ２）、２２．３４（ＣＨ２）、２０．００
（ＣＨ３）、１７．３１（ＣＨ３）、１６．９２（ＣＨ
３）、１１．２７（ＣＨ３）、１０．２５（ＣＨ３）、
６．０５（ＣＨ３）、３．８４（ＣＨ３）

【００１７】
次に、ＴＡＮ−１４６０ＡおよびＢの生物活性について
説明する。まず、ＴＡＮ−１４６０ＡおよびＢのマウス
由来の腫瘍細胞に対する増殖阻害作用を第２表に示す。 該増殖阻害作用は以下のとおり測定した。 マウス腫瘍細胞２×１０４／ｍｌ（Ｂ１６黒色腫細胞の
み１×１０５／ｍｌ）、５μＭ　　２−メルカプトエタ
ノール、２ｍＭ　　Ｌ−グルタミン、２０μｇ／ｍｌゲ
ンタマイシン（フロー・ラボラトリーズ社製、スコット
ランド）、１０％牛胎児血清（ウィッタカー・エム・エ
ー・バイオプロダクツ社製、米国）を含むＲＰＭＩ　　
１６４０培地（ウィッタカー・エム・エー・バイオプロ
ダクツ社製、米国）にＴＡＮ−１４６０ＡまたはＢを適
宜加え、３７℃、５％炭酸ガス下で３日間培養した後、
ＭＴＴ還元法［多田ら、ジャーナル・オブ・イミュノロ
ジカル・メソード（Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　　Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　　Ｍｅｔｈｏｄ）第９３巻、１
５７頁、１９８６年］で腫瘍細胞の増殖を測定した。

【表２】

【００１８】次に、ＴＡＮ−１４６０ＡおよびＢのマウ
ス・リンパ球幼若化反応の増強作用を第３表に示す。該
増強作用は以下のとおり測定した。ＢＡＬＢ／ｃマウス
脾細胞３×１０６／ｍｌ、フィトヘムアグルチニン（Ｐ
ＨＡ；ディフコ社製、米国）１５μｇ／ｍｌ、５μＭ　
　２−メルカプトエタノール、２ｍＭＬ−グルタミン、
２０μｇ／ｍｌゲンタマイシン、１０％牛胎児血清を含
むＲＰＭＩ　　１６４０培地にＴＡＮ−１４６０Ａまた
はＢを適宜加え、３７℃、５％炭酸ガス下で３日間培養
した後、ＭＴＴ還元法でリンパ球の幼若化反応を測定し
た。

【表３】

【００１９】以上から明らかなように、ＴＡＮ−１４６
０ＡおよびＢは、マウス腫瘍細胞の増殖を強力に抑制す
るので、抗腫瘍剤として有用な化合物である。また、Ｔ
ＡＮ−１４６０ＡおよびＢにはマウス・リンパ球のＰＨ
Ａ刺激によって惹起される幼若化反応を増強する作用も
認められるので免疫調節剤としても有用な化合物である
。ＴＡＮ−１４６０ＡおよびＢの急性毒性を調べるため
、マウスを用いた腹腔内投与による試験を行なった結果
、投与量５ｍｇ／ｋｇで死亡は観察されなかった。これ
らの化学的、生物学的性質より、ＴＡＮ−１４６０Ａお
よびＢは新規化合物であることが判明した。ＴＡＮ−１
４６０ＡまたはＢは、経口投与の他、非経口的に注射あ
るいは外用剤として局所的に用いられる。

【００２０】ＴＡＮ−１４６０ＡまたはＢを人に用いる
場合の投与量は対象の疾患、投与経路、治療する患者個
々の年齢および疾病の程度によって変動し得るが、通常
、有効成分１日約０．１〜２００ｍｇ、とりわけ１〜１
００ｍｇが疾患の治療に用いられる。経口投与に当たっ
ては、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、シロップ剤、散剤等
の剤形とし、ＴＡＮ−１４６０ＡまたはＢと共に添加剤
、たとえば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、
矯味剤、安定剤などが含まれていてもよい。それらの中
には、デンプン、白糖、果糖、乳糖、ブドウ糖、マンニ
トール、ソルビトール、沈降炭酸カルシウム、結晶セル
ロース、カルボキシメチルセルロース、デキストリン、
ゼラチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム、
タルク、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどが挙
げられる。

【００２１】非経口投与に当たっては、活性成分を慣用
の希釈剤（水性または非水性担体）中に溶解または懸濁
し、液剤、エマルジョン、懸濁液、坐剤およびその他の
適切な剤形として用いることができる。希釈剤としては
、生理食塩水、リンゲル液、ブドウ糖水溶液、アルコー
ル、グリコール類、グリセリン、脂肪酸グリセリド、植
物、動物由来の油類、パラフィン類などが含まれる。 その他、医薬製剤には、添加剤として、乳化剤、懸濁化
剤、溶解補助剤、安定剤、保存剤、無痛化剤、等張化剤
、緩衝剤、ｐＨ調整剤、着色剤、被覆剤などが含まれて
いてもよい。また、これらの製剤は通常の方法で製造す
ることができる。

【００２２】

【実施例】以下に実施例を挙げて、本発明をさらに具体
的に説明するが、これによって本発明が限定されるもの
ではない。なお、培地におけるパーセント（％）は、と
くにことわりのない限り、重量／容量パーセントを表わ
す。 実施例１ 酵母エキス・麦芽エキス斜面寒天培地に培養したストレ
プトミセス・エス・ピーＡＬ−８９２０株を２００ｍｌ
容三角フラスコ内のグルコース２％、可溶性澱粉３％、
生大豆粉１％、コーン・スティープ・リカー１％、ペプ
トン０．５％、ＮａＣｌ　　０．３％、ＣａＣＯ３　　
０．５％を含む４０ｍｌの種培地（ｐＨ７．０）に接種
し、２８℃、４８時間回転振盪機上で培養し、前培養液
を得た。得られた前培養液の５ｍｌを２０００ｍｌ容坂
口フラスコ内の５００ｍｌの種培地に移植し、２８℃、
４８時間往復振盪機上で培養し種培養液を得た。この種
培養液５００ｍｌを５０リットル容ステンレス・スチー
ル・タンク種培地（上記種培地と同一組成）３０リット
ルに移植し、通気３０リットル／分、撹拌２００回転／
分、内圧１ｋｇ／ｃｍ２の条件で培養した。得られた培
養液の５リットルを２００リットル容ステンレス・スチ
ール・タンク内のデキストリン５％、コーンスティープ
・リカー３％、ポリペプトン０．１％、ＣａＣＯ３　　
０．５％を含む１２０リットルの主培地（ｐＨ７．０）
に移植し、２８℃、通気１２０リットル／分、撹拌１８
０回転／分、内圧１ｋｇ／ｃｍ２の条件で５日間培養し
た。

【００２３】実施例２ 実施例１で得られた培養液（１０５リットル）にメタノ
ール（１０５リットル）を加え、４５分間撹拌抽出した
後、ラヂオライト（３．５ｋｇ）を用いて濾過し、抽出
濾液（１８０リットル）を得た。この抽出濾液を濃縮し
、メタノールを除去した濃縮液（４０リットル）をｐＨ
７．６に調整し、酢酸エチル（１５リットル×２）で抽
出、抽出液をＮ／２０塩酸（１５リットル×１）、２％
炭酸水素ナトリウム（１５リットル×１）で洗い、さら
に水洗後、酢酸エチル層を濃縮すると、オイル状物質（
４７．０ｇ）が得られた。このオイル状物質（４７．０
ｇ）をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（５００
ｇ）に付し、ｎ−ヘキサン−アセトンの混合溶媒、８：
２（６リットル）、７：３（６リットル）および５：５
（４リットル）で順次展開した。ｎ−ヘキサン−アセト
ン（８：２）の２〜６リットルで溶出されるＴＡＮ−１
４６０Ｂを含む画分（１４．４ｇ）および（７：３）の
１〜６リットルと（５：５）の０〜１リットルで溶出さ
れるＴＡＮ−１４６０Ａを含む画分（５．３０ｇ）を得
た。

【００２４】ＴＡＮ−１４６０Ａを含む画分（５．３０
ｇ）をシリカゲル（１００ｇ）のカラムクロマトグラフ
ィーに付し、ｎ−ヘキサン−アセトンの混合溶媒（６：
４）で溶出される画分を濃縮乾固し、粉末（２．５３ｇ
）を得た。これをさらにシリカゲル（１００ｇ）のカラ
ムクロマトグラフィーに付し、トルエン−アセトンの混
合溶媒（８：２）で溶出される画分を濃縮し、エーテル
−ｎ−ヘキサンで粉末化しＴＡＮ−１４６０Ａを主成分
とする粉末（２．０１ｇ）を得た。得られた粉末（２．
０１ｇ）を分取用ＨＰＬＣ［カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ
　　Ｓ−３６３（山村化学研究所）、溶媒：６５％アセ
トニトリル／０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．３）］
に付した。得られた活性画分をアセトニトリル除去後、
酢酸エチルで抽出し、水洗後、抽出液を濃縮し、エーテ
ル−ｎ−ヘキサンで粉末化し、ＴＡＮ−１４６０Ａの白
色粉末（７２７ｍｇ）を得た。

【００２５】また、ＴＡＮ−１４６０Ｂを含む画分（１
４．４ｇ）をシリカゲル（１００ｇ）のカラムクロマト
グラフィーに付し、ｎ−ヘキサン−アセトンの混合溶媒
（７：３）で溶出される画分を濃縮乾固し粉末（３．６
５ｇ）を得た。これをさらにシリカゲル（１００ｇ）の
カラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム−メタ
ノールの混合溶媒（９５：５）で溶出される画分を濃縮
し、エーテル−ｎ−ヘキサンで粉末化し、ＴＡＮ−１４
６０Ｂを主成分とする粉末（３．５０ｇ）を得た。この
粉末全量を分取用ＨＰＬＣ［カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ
　　Ｓ−３６３、溶媒：６８％アセトニトリル／０．０
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．３）］に付した。得られた
ＴＡＮ−１４６０Ｂ画分を、アセトニトリル除去後、酢
酸エチルで抽出し、水洗後、抽出液を濃縮し、エーテル
−ｎ−ヘキサンで粉末化し、ＴＡＮ−１４６０Ｂの白色
粉末（５１３ｍｇ）を得た。

【００２６】

【発明の効果】本発明によれば、抗腫瘍剤および免疫調
節剤として有用な新規化合物であるＴＡＮ−１４６０Ａ
およびＢが提供される。

【図面の簡単な説明】

【図１】　　ＴＡＮ−１４６０ＡのＩＲスペクトルであ
る。

【図２】　　ＴＡＮ−１４６０Ａの１３Ｃ　　ＮＭＲス
ペクトルである。

【図３】　　ＴＡＮ−１４６０ＢのＩＲスペクトルであ
る。

【図４】　　ＴＡＮ−１４６０Ｂの１３Ｃ　　ＮＭＲス
ペクトルである。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　次の物理化学的性状を有する化合物Ｔ
   ＡＮ−１４６０ＡまたはＢ： ＴＡＮ−１４６０　　Ａ 　　（１）外観：白色粉末 （２）分子式：Ｃ４０Ｈ６８Ｏ１２ 　　（３）紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル：メタノール
   中、極大値：２１５±３ｎｍ（ε１０，６００±１，０
   ００） （４）赤外部吸収（ＩＲ）スペクトル：ＫＢｒ錠剤中、
   主な波数を示す（ｃｍ−１）；３４５０、２９４０、２
   ８８０、１７１０、１６５０、１４６０、１３９０、１
   ２８０、１２４０、１１９０、１１２０、１０８０、１
   ０２０、９８０、８８０ （５）１３Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：７５Ｍ
   Ｈｚ、ＣＤＣｌ３中、δｐｐｍ；１６５．０、１５１．
   ０、１３２．８、１３２．１、１１９．４、９８．３、
   ９７．０、８０．０、７７．９、７７．４、７５．２、
   ７５．２、６９．２、６８．５、６７．４、６６．３、
   ６６．３、５０．８、４１．４、３９．６、３９．２、
   ３７．３、３５．３、３４．９、３４．６、３４．２、
   ３２．７、３０．７、３０．４、３０．１、２９．１、
   ２７．３、２６．８、２２．４、１９．２、１６．９、
   １１．３、１０．３、６．２、５．１ （６）性質：中性脂溶性物質 ＴＡＮ−１４６０　　Ｂ 　　（１）外観：白色粉末 （２）分子式：Ｃ４０Ｈ６８Ｏ１１ 　　（３）ＵＶスペクトル：メタノール中、極大値：２
   １０±３ｎｍ（ε１３，０００±１，０００）（４）Ｉ
   Ｒスペクトル：ＫＢｒ錠剤中、主な波数を示す（ｃｍ−
   １）；３４７０、２９４０、２８９０、１７２０、１６
   ５０、１４６０、１３９０、１２９０、１２４０、１１
   ９０、１１３０、１０８０、１０２０、９８０、８８０ （５）１３ＣＮＭＲスペクトル：７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ
   ３中、δｐｐｍ；１６４．９、１５１．６、１３２．７
   、１３２．１、１２１．９、９８．３、９７．０、８０
   ．８、７７．８、７７．３、７５．１、６９．３、６８
   ．５、６７．４、６６．３、６６．２、５０．８、４１
   ．４、４１．２、３９．６、３９．３、３７．４、３５
   ．４、３５．３、３４．６、３４．２、３２．９、３０
   ．７、３０．５、３０．２、２９．１、２６．９、２２
   ．３、２０．０、１７．３、１６．９、１１．３、１０
   ．３、６．０、３．８ （６）性質：中性脂溶性物質
2. 【請求項２】　　ストレプトミセス属に属し、化合物Ｔ
   ＡＮ−１４６０ＡまたはＢを生産する能力を有する微生
   物を培地に培養し、培養物中に化合物ＴＡＮ−１４６０
   ＡまたはＢを生成蓄積せしめ、これを採取することを特
   徴とする化合物ＴＡＮ−１４６０ＡまたはＢの製造法。
3. 【請求項３】　　ＴＡＮ−１４６０ＡまたはＢを含有し
   てなる抗腫瘍剤。