JPH04273000A

JPH04273000A - 作用酵素としてプロテアーゼを含有する、界面活性剤不含の粉末状又は顆粒状酵素製剤及びこれらを含有する酵素的柔軟剤及び酵解剤

Info

Publication number: JPH04273000A
Application number: JP3291064A
Authority: JP
Inventors: Juergen Christner; ユルゲン　クリストナー; Guenter Partheil; ギュンター　パルトハイル; Hermann Plainer; ヘルマン　プライナー; Roland Reiner; ローラント　ライナー
Original assignee: Roehm GmbH Darmstadt
Current assignee: Roehm GmbH Darmstadt
Priority date: 1990-11-10
Filing date: 1991-11-07
Publication date: 1992-09-29
Also published as: GB2250289A; DK177791A; GB9123714D0; DK177791D0; ITTO910815A1; NL9101869A; ES2037603A1; GB2250289B; ITTO910815A0; IT1250027B; ES2037603B1; DE4035839A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、皮革製造で皮の柔軟化
、酵解及び脱毛用の作用酵素としてのプロテアーゼを含
有する、界面活性剤不含の固体酵素製剤に関し、これは
タンニン沈澱により得られる。

【０００２】

【従来の技術】タンニン沈澱法は、かなり前から溶液、
例えば植物液汁又は水性培地から酵素を単離する場合に
しばしば使用されている方法である。これには、比較的
広い範囲の公知技術が存在する［例えば、英国特許（Ｇ
Ｂ−Ｃ）第１１５６９００号明細書、西ドイツ特許（Ｄ
Ｅ−Ａ）第１６４２６１９号明細書］。その際、その目
的は一般に、酵素の精製である。良好な沈澱のための保
証手段としては、ゼラチンの添加又は酸性ｐＨ範囲（ｐ
Ｈ３〜５）における操作が挙げられる。しかし、タンニ
ンは続く酵素精製で破壊される（最後には一緒に沈澱さ
せられる酵素と不溶性の複合体を形成する）ので、再び
除去せねばならず、これは大抵は沈澱を有機溶剤、例え
ばアセトン又はエタノールで処理することによって行わ
れるか又は界面活性剤の添加によってか又はタンニン沈
澱でｐＨ値を高めることによって行われる：これらの手
段は一般に実験室規模でだけ著しい複雑さなしに行うこ
とができるにすぎない。

【０００３】タンニン複合体自体の工業的使用は、若干
の場合に少し記載されている。即ち、タンニン複合体を
脱脂乳と一緒に乾燥させることによって、安定なα−ア
ミラーゼ−製剤に加工する（ＣＳ１４１２３３）。医学
的に使用するために、膵臓をタンニン酸で沈澱させるこ
とによって製造された不溶性膵臓製剤が準備されている
。この製剤は酸性の胃液中に不溶性であるが、アルカリ
性の胃部分でその作用を発揮する（西ドイツ特許第１２
８４１９号明細書）。

【０００４】その他に、西ドイツ特許（ＤＥ−Ａ）第２
１４３９４５号明細書には、特にタンニン複合体の形の
“水に不溶の、皮膚に相容性の乾燥酵素−付加物”が記
載されている。実際に使用するためには、例えば、タン
ニン沈澱法から得られた細菌−プロテイナーゼの付加物
を直接洗浄剤粉末中に配合混入する。タンニン−複合体
は十分に洗浄作用を有するので、使用時に、即ち洗浴中
で“消失（ａｕｆｇｅｇａｎｇｅｎ）”しうる。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】前記公知技術から、水
性環境中からの酵素のタンニン沈澱法は使用可能な沈澱
方法ではあるが、この沈澱した酵素−タンニン−複合体
を工業的に使用することは、−前記例外は除いて−予想
される使用条件下での相対的安定性が邪魔になっている
と思われる。

【０００６】皮革製造で固体の酵素製剤、特に酵解−及
び柔軟製剤として使用するためのプロテイナーゼ含有の
製剤を製造するために、これまで主として膵臓搾出汁又
は細菌培養液からの硫酸アンモニウム又は硫酸ナトリウ
ムを用いる沈澱が使用された［Ｕｌｌｍａｎｎｓ　　Ｅ
ｎｃｙｃｌｏｐａｄｉｅ　　ｄｅｒ　　ｔｅｃｈｎｉｓ
ｃｈｅｎ　　Ｃｈｅｍｉｅ、第４版、第１０巻、４７５
〜５６１頁、４９５頁以降、Ｖｅｒｌａｇ　　Ｃｈｅｍ
ｉｅ、１９７５年、西ドイツ特許（ＤＥ−Ａ）第２２３
４４１２号明細書参照］。

【０００７】しかし、この方法は−特に生態学的見地か
ら−決して理想的でなく、一般に廃水の非常に著しい負
荷を必然的に伴う。これは、酵素含有液１００１当り沈
澱させるために硫酸アンモニウム５０ｋｇが必要である
ことを意味する、常用の大ざっぱな原則から明かである
。このような塩量は、硫酸塩負荷をできる限り制限する
廃水管理の現在の潮流に反する。特に皮革工業が極めて
厳しい費用面の制限下で操業することを考えに入れて、
むしろ、廃水負荷が実質的に僅かであり、つまり費用の
面からも有利であるような効率のよい酵素−沈澱法の開
発に努められている。

【０００８】

【課題を解決するための手段】さて、本発明によるプロ
テイナーゼ製剤ＥＰが技術の前記の要求を極めてよく満
たすことが判明した。本発明は、作用酵素としてプロテ
アーゼを含有する（主として）界面活性剤不含の固体の
、即ち粉末状又は顆粒状の酵素製剤ＥＰに関し、この製
剤は、水性環境中に存在する作用酵素を、酵素製剤が１
種又は数種の増量剤として常用の塩少なくとも５０重量
％、有利には８０重量％〜９９．９重量％までから成る
ような程度でタンニンを添加することにより沈澱させる
ことによってタンニン複合体として得られるものである
。

【０００９】本発明による“タンニン”とは、一般に天
然起源のこの名称で総括されるポリフェノール類、特に
タンニン酸である。詳細は、“ウルマンのエンツィクロ
ペディー　　デル　　テヒニッシェン　　ヒェミー（Ｕ
ｌｌｍａｎｎ　　Ｅｎｃｙｃｌｏｐａｅｄｉｅ　　ｄｅ
ｒ　　Ｔｅｃｈｎｉｓｃｈｅｎ　　Ｃｈｅｍｉｅ）第３
版、第１１巻、５９３〜５９４頁；カーク−オスマー（
Ｋｉｒｋ−Ｏｔｈｍｅｒ）のエンサイクロペディア　　
オブ　　ケミカル　　テクノロジー（Ｅｎｃｙｃｌｏｐ
ａｅｄｉａ　　ｏｆ　　ＣｈｅｍｉｃａｌＴｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ）第２版、第１２巻、３１９〜３２５頁、Ｊ．
Ｗｉｌｅｙ、１９６７年、ツエヒマイスター（Ｚｅｃｈ
ｍｅｉｓｔｅｒ）のＨｅｒｓｇ．Ｆｏｒｔｓｃｈｒｉｔ
ｔｅ　　ｄｅｒ　　Ｃｈｅｍｉｅ　　ｏｒｇａｎｉｓｃ
ｈｅｒ　　Ｎａｔｕｒｓｔｏｆｆｅ、第４１巻、４〜４
６（ＳｐｒｉｎｇｅｒＶｅｒｌａｇ）に記載されている
。

【００１０】“プロテアーゼ”とは、Ｅ．Ｃ．３．４．
に総括されている酵素である。

【００１１】（Ｋｉｒｋ−Ｏｔｈｍｅｒ、Ｅｎｃｙｃｌ
ｏｐａｅｄｉｅ　　ｏｆ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　　Ｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｙ、第３版、第９巻、１７３−２２３；
Ｊ．Ｗｉｌｅｙ１９８０；Ｅ．Ｐｆｌｅｉｄｅｒｅｒ、
Ｒ．Ｒｅｉｎｅｒ　　ｉｎ　　Ｈ．Ｊ．Ｒｅｈｍ　　＆
　　Ｇ．Ｒｅｅｄ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、６ｂ
巻、７２９−７４２、ＶＣＨ１９８８；Ｋ．Ａｕｎｓｔ
ｒｕｐ、Ｂ．Ｓｐｅｎｃｅｒ　　Ｅｄ．Ｉｎｄｕｓｔｒ
ｉａｌ　　Ａｓｐｅｃｔｓｏｆ　　ｏｆ　　Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ、第３０巻（Ｉ）、ｐｐ．２３−４６、
Ｎｏｒｔｈ　　Ｈｏｌｌａｎｄ、１９７４参照）。

【００１２】種々の分類基準があるが、その中には起源
による分類がある：ａ）　　動物起源、例えば、 α）　　レンニン（Ｅ．Ｃ．３．４．２３．４）β）　
　膵臓−プロテアーゼパンクレアチン、特にトリプシン、キモトリプシン（ｐ
Ｈ−作用範囲約７〜１０）、ペプシン（Ｅ．Ｃ．３．４
．２３．１）（ｐＨ−作用範囲約１．５〜４．０）、カ
セプシン（Ｅ．Ｃ．３．４．２３．５）（作用範囲約４
．０〜５．０）ｂ）　　植物起源 α）　　パパイン（Ｅ．Ｃ．３．４．２２．１）ｐＨ−
作用範囲約５．０〜８．０ β）　　フィチン（Ｅ．Ｃ．３．４．２２．３）ｐＨ−
作用範囲約４．０〜９．０ γ）　　ブロメライン（Ｅ．Ｃ．３．４．２２．４及び
３．４．２２．５）ｐＨ−作用範囲約５．０〜７．０ｃ
）　　微生物起源（Ｌ．Ｋｅａｙ　　“Ｐｒｏｃｅｓｓ
　　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”１９７１年；１７〜２
１年） α）　　桿菌類例えば、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｂ．レヒェ
ニホルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、Ｂ．
アルカロフィルス（Ｂ．ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、
Ｂ．セレウス（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）Ｂ．ナットー（Ｂ．
Ｎａｔｔｏ）、Ｂ．ブルガッス（Ｂ．ｖｕｌｇａｔｕｓ
）、根状菌（Ｂ．ｍｙｃｏｉｄｅｓ） β）　　連鎖球菌 γ）　　ストレプトマイセス類例えば、ストレプトマイセス　　フラジアエ（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｆｒａｄｉａｅ）、Ｓ．グリセウ
ス（Ｓ．ｇｒｉｓｅｕｓ）、Ｓ．レクッス（Ｓ．ｒａｃ
ｔｕｓ） δ）　　アスペルギルス類例えば、アスペルギルス　　フラブス−オリザエ（Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　　ｆｌａｖｕｓ−ｏｒｙｚａｅ）
、黒色こうじ菌（Ａ．ｎｉｇｅｒ）、クロカビ（Ａ．ｓ
ａｉｔｏｉ）、Ａ．ウサミイ（Ａ．ｕｓａｍｉｉ） ε）　　ケカビ類及びクモノスカビ類例えばムコル　　プシルス（Ｍｕｃｏｒ　　ｐｕｓｉｌ
ｌｕｓ）、Ｍ．ミエヘイ（Ｍ．ｍｉｅｈｅｉ） ζ）　　エンドシア類例えばエンドシア　　パラシチカ（Ｅｎｄｏｔｈｉａ　
　ｐａｒａｓｉｔｉｃａ） η）　　トラメテス類例えばトラメテス　　サングイニア（Ｔｒａｍｅｔａｓ
　　ｓａｎｇｕｉｎｅａ）起源による相違の他に、攻撃場所による相違（外−対内
酵素）及びプロテアーゼの“作用場所”による相違（Ｄ
ＦＰにより抑制される血清−プロテアーゼ、スルフヒド
リル酵素）も使用される。

【００１３】更に、酵素活性のｐＨ依存性は実施する上
で非常に重要である。従って、特に実施上の観点から下
記のように分類する：ｉ）　　ｐＨ７．５〜１３の範囲で最適作用を有するア
ルカリ性プロテアーゼ、特にアルカリ性細菌プロテアー
ゼ（Ｅ．Ｃ．３．４．２１．）（大抵はセリン−タイプ
に属する）及びアルカリ性真菌プロテアーゼｉｉ）　　
ｐＨ６．０〜９．０の範囲で最適作用を有する、中性プ
ロテアーゼ、特に中性細菌プロテアーゼ（Ｅ．Ｃ．３．
４．２４）（メタロ酵素に属する）及び真菌プロテアー
ゼ、例えばバシルス−プロテアーゼ（Ｂａｓｉｌｌｕｓ
−Ｐｒｏｔｅａｓｅｎ）、プソイドモナス−プロテアー
ゼ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ−Ｐｒｏｔｅａｓｅｎ）、
ストレプトマイセス−プロテアーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ−Ｐｒｏｔｅａｓｅｎ）、アスペルギルス−プ
ロテアーゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ−Ｐｒｏｔｅａｓ
ｅｎ）。

【００１４】ｉｉｉ）　　ｐＨ２．０〜５．０の範囲で
最適作用を有する、酸性プロテアーゼ（Ｅ．Ｃ．３．４
．２３）特に酸性真菌プロテアーゼ、例えばリゾプスｓ
ｐｐ．（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ　　ｓｐｐ．）、アスペルギ
ルスｓｐｐ．（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　　ｓｐｐ．）
、ペニシリウムｓｐｐ．（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎｍ　　
ｓｐｐ．）、ムコルｓｐｐ．（Ｍｕｃｏｒ　　ｓｐｐ．
）及びイムペックス　　ラクテウス（Ｉｍｐｅｘ　　Ｉ
ａｃｔｅｕｓ）及びエンドシチア　　パラシチカ（Ｅｎ
ｄｏｔｈｉｔｉａ　　ｐａｒａｓｉｔｉｃａ）。

【００１５】アルカリ性プロテアーゼとしては特に、ｐ
Ｈ範囲９〜１０で安定であり、過ほう酸塩に対してかな
り安定であるセリン−タイプのアルカリ性細菌プロテイ
ナーゼであるサブチリシンが挙げられる。

【００１６】蛋白質分解酸素の使用は、約８０年前にオ
ット−レーム（Ｏｔｔｏ　　Ｒｏｅｈｍ）博士によりオ
ロボン（ＯＲＯＰＯＮ）（商品名）中に酵素酵解剤（膵
臓のトリプシン消化酵素）（西ドイツ特許第２００５１
９号明細書）が導入されて以来、皮革製造、特に水処理
場の確定成分である：酵解剤中での使用（西ドイツ特許
第９２７４６４号明細書；西ドイツ特許第９７６１０７
号明細書；西ドイツ特許第９４１８１１号明細書；西ド
イツ特許第９７４８１３号明細書；西ドイツ特許第９７
５０９５号明細書；西ドイツ特許第９７６９２８号明細
書；西ドイツ特許第１１２００６６号明細書；西ドイツ
特許第１１３４４７４号明細書；西ドイツ特許第１２１
９６２０号明細書；西ドイツ特許第１２８２８３７号明
細書；米国特許第３９３９０４０号明細書；米国特許第
４２７３８７６号明細書）の他に、酵素製剤は、柔軟剤
中でも（西ドイツ特許第２８８０９５号明細書；西ドイ
ツ特許第９７６６６２号明細書；西ドイツ特許第１０２
２７４８号明細書；西ドイツ特許第１０３４３１７号明
細書；西ドイツ特許第１２８２８２８号明細書；西ドイ
ツ特許第２０５９４５３号明細書；米国特許第４２７８
４３２号明細書；米国特許第４３４４７６２号明細書）
、更に毛弛緩（Ｈａａｒｌｏｃｋｅｒｕｎｇ）及び皮膨
脹（米国特許第４２９４０８７号明細書）に使用される
。

【００１７】酵素の蛋白分解作用は、通常アンソン−ヘ
モグロビン（Ａｎｓｏｎ−Ｈａｅｍｏｇｌｏｂｉｎ）法
（Ｍ．Ｌ．Ａｎｓｏｎ　　Ｊ．Ｇｅｎ．Ｐｈｙｓｉｏｌ
．第２２巻、７９頁、１９３９年）又はレーライン−フ
ォルハード（Ｌｏｅｈｌｅｉｎ−Ｖｏｌｈａｒｄ）法（
ｄｉｅ　　Ｌｏｅｈｌｅｉｎ−Ｖｏｌｈａｒｄ′ｓｃｈ
ｅ　　Ｍｅｔｈｏｄｅ　　ｚｕｒ　　Ｂｅｓｔｉｍｍｕ
ｎｇ　　ｄｉｅ　　Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｓｈｅｎ　　
Ａｋｔｉｖｉｔａｔ．Ｇｅｒｂｅｒｅｉｃｈｅｍ．Ｔａ
ｓｃｈｅｎｂｕｃｈ　　Ｄｒｅｓｄｅｎ−Ｌｅｉｐｚｉ
ｇ、１９５５）により“ＬＶＥ”［レーライン−フォル
ハード（Ｌｏｅｈｌｅｉｎ−Ｖｏｌｈａｒｄ）単位］と
して測定される。レーライン−フォルハード単位とは、
この方法の特定条件下でカゼイン１７２５ｍｇが消費さ
れるような酵素量である（Ｒ．Ｊ．Ｂｅｙｎｏｎ、Ｊ．
Ｓ．Ｂｏｎｄ、Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ　　Ｅｎｚｙｍ
ｅｓＩＲＬ　　ｐｒｅｓｓ参照）。

【００１８】更に、下記で活性測定用に、アンソン法か
ら誘導される酸性範囲で作用を有する酵素単位を使用す
る。これらは、“プロテイナーゼ単位”（ヘモグロビン
”Ｕнь）と称される。１Ｕньは、３７℃で１分当り
にトリプシン１μモルに相応するヘモグロビンのトリク
ロル酢酸可溶性の部分の遊離を接触する（２８０ｎｍで
測定して）酵素量に相応する

【００１９】

【外１】

【００２０】既に記載したように、本発明によるプロテ
イナーゼ製剤ＥＰの製造は、有利には直接水性培地又は
酵素含有の液から出発して行う。

【００２１】その際、製剤ＥＰを膵臓から製造すること
が特に有利である。

【００２２】Ａ．膵臓複合体からの製造本発明による方
法は、部分的には公知方法の単離法による（Ｕｌｌｍａ
ｎｎ、第４版、第１０巻、上記引用文中５３６〜５３７
頁参照）。

【００２３】単離は有利には、主として豚又は牛の膵臓
から屠殺後直ちに行う。

【００２４】例えば、屠殺後直ちに腺から脂肪及び結合
組織をできる限りよく除去し、次いで例えば肉挽器を用
いて腺組織をホモジュネートすることによって、約１０
０個の膵臓を１つのバッチに加工する。

【００２５】その後直ちに、引き続いて、有利には約３
倍の容量（約６０ｌ）の０．２５Ｎの硫酸で５℃で１８
〜２４時間抽出する。フィルターフロックの添加後に、
有利には包装用圧縮機で圧縮する。圧縮プレートは破棄
することができる。

【００２６】こうして得られた十分に脂肪不含の圧搾酵
母汁はプロテイナーゼ製剤を製造するための出発物質で
ある。

【００２７】Ｂ．その他のプロテイナーゼ含有水性粗抽
出物からの製造膵臓−圧搾酵母汁の代わりに、例えば真菌又は細菌培養
からのその他のプロテイナーゼ含有培養液を使用するこ
とができる（酵素起源に関する前記記載並びにＵｌｌｍ
ａｎｎ、第４版、第１０巻、５１８〜５２２頁、Ｈ．Ｊ
．Ｒｅｈｍ、Ｇ．Ｒｅｅｄ　　Ｅｄ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ第７ａ巻、１５６〜１６８頁、ＶＣＨ１９８
７参照）。

【００２８】培養液は−おおよその目安として−蛋白質
０．０１〜３重量％を含有する。本発明による、作用酵
素としてのプロテイナーゼを含有する、界面活性剤不含
の粉末状又は顆粒形の固体酵素製剤ＥＰの製造は、下記
のようにして行うことができる：先ず、沈澱剤の正しい
添加が重要であると判明した。タンニンの使用が不十分
である場合には、沈澱は不完全であり、過剰に使用する
場合には、生成されたタンニン複合体は消散しにくい。上澄み液中になお０．５〜３％の酵素活性が存在するよ
うな量の沈澱剤を使用することが有利な技術的原則であ
ると実証された。即ち、例えば膵臓−圧縮液（活性蛋白
質約２重量％を含有する）から沈澱させる場合には、有
利にミモザ−なめし剤４重量％を使用する。一般に、タ
ンニン複合体中の蛋白質含量は、１０〜８０重量％であ
る。

【００２９】詳細には、低いｐＨ値の水性液を製造する
のが有利である（その際、もちろん当該プロテアーゼの
安定性に留意する）。目安としては約３〜６のｐＨ値が
挙げられ、培養液又は膵臓は大抵約６のｐＨ値を有する
。ｐＨ＝７より上での沈澱はあまり有利ではない。どの
場合でも低い温度（＜２０℃）の使用が有利である。更にＨＬＢ値＜６を有する水に不溶性の界面活性剤の添
加が有利であると実証された。この種の界面活性剤は、
例えば長鎖のエステル、例えばソルビタン脂肪酸エステ
ルの群から選択される。例えば、ソルビタンモノオクタ
デカネート等が挙げられる。この種の界面活性剤は市販
されており、例えば、アトラスヒェミー社（Ｆａ．ＡＴ
ＬＡＳ　　Ｃｈｅｍｉｅ、Ｅｓｓｅｎ）のＴｙｐ　　Ｓ
ＰＡＮ（商品名）の製品を参照にされたい。

【００３０】定義によれば、酵素製剤の塩含量は、少な
くとも５０重量％が増量剤として常用の１種又は数種の
塩から成る。これらの塩には有利には硫酸アンモン又は
硫酸ナトリウムが該当する。

【００３１】有利な作用有利な作用は、本発明による酵素製剤ＥＰの使用はもち
ろんのこと、既に製造及び取扱上の観点にもあてはまる
。

【００３２】タンニン複合体の製造は、非常に効果的で
同時に選択的な沈澱法であるので、資源を非常に良好に
利用するものである。主に実施されている塩沈澱法に比
べて、“母液”による環境汚染が著しく僅かであること
が際だっている。酵素製剤はほこりがでず、皮膚に対し
てアレルギー作用を示さないので、作業衛生的にも“改
善”として評価される。

【００３３】使用上の観点で、本発明による酵素製剤は
、伝統的な工業的取扱内で使用することができ、即ち、
水処理場での工程の根本的な変更を必要としない。本発明による酵素製剤ＥＰの使用は、特に、伝統的な酵
素により助成される柔軟剤及び酵解剤中で有効であるこ
とが実証された。その際、タンニン複合体の“消散（Ａ
ｎｆｇｅｈｅｎ）”を助成するので、使用ｐＨ値が高い
こと（ｐＨ＞８）が特に有利である。

【００３４】使用：柔軟剤の実施塩蔵時に起こる皮の硬化を元に戻すための皮材料の柔軟
化は、一般にｐＨ＞７．０〜１０．０で実施される。酵
素、特に蛋白質分解酵素を一緒に使用することにより、
この柔軟化作用は、皮のコラーゲン繊維組織に属さない
水溶性のその他の蛋白体の“消化”によって助成される
。一般に、柔軟剤中でｐＨ７．０〜１０．０で作用範囲
（又は蛋白質分解作用の最適ｐＨ値）を有する酵素を使
用する。非コラーゲン蛋白質の除去に伴って、皮膚の迅
速で強力な湿潤が保証される。有利には、柔軟水をアル
カリ性に調製する（前記参照）が、ｐＨ値は常に＜１２
に保つべきである。更に、柔軟助剤（例えば非イオン性
及び陰イオン性界面活性剤）を、置換されたフェノール
又はジチオカルバメートと常用の濃度範囲（０．１〜１
０ｇ／ｌ）で組み合わせることが有利である。本発明に
よる酵素製剤中の酵素添加物としては、例えば前記プロ
テアーゼ、特にｃ）に挙げたプロテアーゼが挙げられる
：特に作用範囲７〜１１．０の微生物プロテアーゼ、特
にバチルスプロテアーゼ、ストレプトマイセスプロテア
ーゼ並びに菌プロテアーゼ、例えばアスペルギルス類、
例えばＡ．サイトイ（Ａ．ｓａｉｔｏｉ）及びＡ．ウサ
ミイ（Ａ．ｕｓａｍｉｉ）、更に例えばｐＨ作用範囲７
．０〜９．５を有するＡ．オリザエ（Ａ．ｏｒｙｚａｅ
）、更にｐＨ作用範囲９．５〜１１．０を有するＡ．ニ
ゲル（Ａ．ｎｉｇｅｒ）及びＡ．フラブス（Ａ．ｆｌａ
ｖｕｓ）からのもの。

【００３５】一般に、使用されるプロテイナーゼの蛋白
質分解作用の濃度は、柔軟汁１ｌ当り０．０１〜０．０
３アンソン単位又は１０００〜３０００レーライン−フ
ォルハード単位である。従って、酵素製剤ＥＰの使用量
は、その酵素含量の程度によりこれらの濃度に相応する
。最後に、柔軟汁はアミラーゼを含有することができる
。アミラーゼは例えば菌プロテイナーゼの随伴酵素であ
る。アミラーゼは、皮膚のプロテオグリカン及びグリコ
プロテインでグリコシド結合の分解を助成する。

【００３６】柔軟化に引き続いて、水処理場の工程では
、一般に石灰液処理、次いで脱灰及び−主として酵素に
よる−酵解を行う。

【００３７】この工程でも、酵素製剤ＥＰを有利に使用
することができる。

【００３８】使用：酵解脱灰は伝統的に、生皮のアルカリ度を１３〜１４のｐＨ
値から７〜８の範囲のｐＨ値に下げるために役立つ。脱
灰するために、有利には例えばジカルボン酸の種類の強
く解離したものではなく、弱い有機酸又は弱酸性の塩を
使用する。酵解時に、表皮−、毛−及び色素残分を除去
し、付加的な皮溶解を起こすべきである。更に、非コラ
ーゲンの蛋白質成分を除去する（Ｕｌｌｍａｎｎ、第４
版、第１６巻、前記参照、１１９〜１２０頁）。酵解時
には、一般にｐＨ７．５〜８．５で操作する。西ドイツ
特許（ＤＥ−Ａ）第３１０８４２８号明細書から環式カ
ルボネートを脱灰で使用することが公知である。

【００３９】同時に酵解時には、ｐＨ７．０〜９．０で
作用範囲を有するリパーゼ、例えば膵臓−リパーゼを使
用することができる。ｐＨ５．５〜８．５で作用範囲を
有するＢ．によるアミラーゼ、例えば膵臓−アミラーゼ
（これらは酵解でグリコシド結合の分解を助成する）も
、（特にトリプシン及びキモトリプシンの随伴酵素とし
て）酵解に対して有利な影響を与える。

【００４０】次に本発明を実施例につき詳説する。

【００４１】

【実施例】例　　１膵臓からの製剤の製造脂肪除去した膵腺からの蛋白質０．４％を含有する濾液
１００ｋｇに、撹はん下、室温で、水２０ｋｇ中のネム
リグサからのなめし剤５ｋｇの溶液を加える。直ちに生
じた蛋白質の沈澱を２時間室温（２０℃）で更に撹はん
し、次いで濾過する。フィルターケーキをパックプレス
（Ｐａｃｋｐｒｅｓｓ）で圧縮し、次いで前粉砕する。次いで温度６０〜８０℃で注意深く乾燥させ、１：１０
で硫酸アンモニウムと混合する。

【００４２】得られた混合物は、直ちに、革柔軟剤、革
酵解剤中に、脱毛するために及びウェットブルー（Ｗｅ
ｔｂｌｕｅｓ）の弛緩のために使用することができる。

【００４３】例　　２Ａ．オリザエ酵母からの製剤の製造菌培養から限外濾過により蛋白質約２％を含有するプロ
テイナーゼ濃縮物を得、＋１５℃に冷却する。沈澱性を
改善するために、濃縮物にＳＰＡＮ　　４０（Ａｔｌａ
ｓＣｈｅｍｉｅ、Ｅｓｓｅｎの製品の商品名）１００ｇ
、引き続いて水１６ｋｇ中のネムリグサ−なめし剤４ｋ
ｇを加える。直ちに蛋白質の沈澱が起こる。１時間放置
後、バッチをパーライトを基礎とした濾過助剤（ＤＩＣ
ＡＬＩＴＥ　　４４０８、Ｆａ．Ｄｉｃａｌｉｔｅ、Ｎ
ｅｕβ）２ｋｇの添加下で濾過する（１時間及びフィル
ター面積１ｍ２当り６０〜８０ｌ）。圧縮したフィルタ
ーケーキを注意深く乾燥させ（６０〜８０℃）、１：３
０の比で硫酸ナトリウム及び硫酸アンモニウムから成る
混合物を加える。

【００４４】得られた混合物は直ちに革柔軟剤、革酵解
剤中に、脱毛するために及びエウェットブルーの弛緩の
ために使用することができる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】　　酵素製剤ＥＰ中に、プロテアーゼがタ
ンニン複合体として、この酵素製剤ＥＰが、増量剤とし
て自体慣用の１種又は数種の塩少なくとも５０重量％及
び９９．９重量％までから成るような程度で存在するこ
とを特徴とする、作用酵素としてのプロテアーゼを含有
することを特徴とする、界面活性剤不含の粉末状又は顆
粒状酵素製剤。
【請求項２】　　増量剤が硫酸アンモニウム又は硫酸ナ
トリウムから成ることを特徴とする、請求項１に記載の
酵素製剤ＥＰ。
【請求項３】　　請求項１に記載の酵素製剤ＥＰを含有
することを特徴とする、酵素的柔軟剤。
【請求項４】　　請求項１に記載の酵素製剤ＥＰを含有
することを特徴とする、酵素的酵解剤。
【請求項５】　　請求項３に記載の酵素製剤ＥＰを出発
−ｐＨ値＞７〜１１で使用することを特徴とする酵素的
柔軟剤。
【請求項６】　　請求項５に記載の酵素製剤ＥＰを出発
−ｐＨ値＞８〜１１で使用することを特徴とする酵素的
柔軟剤。
【請求項７】　　請求項４に記載の酵素製剤ＥＰを出発
−ｐＨ値＞５〜１１で使用することを特徴とする酵素的
酵解剤。
【請求項８】　　請求項７に記載の酵素製剤ＥＰを出発
−ｐＨ値６〜９で使用することを特徴とする酵素的酵解
剤。