JPH0427393A - 植物細胞への遺伝子導入法 - Google Patents
植物細胞への遺伝子導入法Info
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- JPH0427393A JPH0427393A JP2132043A JP13204390A JPH0427393A JP H0427393 A JPH0427393 A JP H0427393A JP 2132043 A JP2132043 A JP 2132043A JP 13204390 A JP13204390 A JP 13204390A JP H0427393 A JPH0427393 A JP H0427393A
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- Japan
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- target dna
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- Pending
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Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、植物の品種改良の際の遺伝子導入法に関する
。
。
（従来の技術）
エレクトロポレーションにより遺伝子を導入するには、
細胞壁が邪魔であるので、細胞をプロトプラストにして
からエレクトロポレーションにより遺伝子を導入してい
た。
細胞壁が邪魔であるので、細胞をプロトプラストにして
からエレクトロポレーションにより遺伝子を導入してい
た。
（発明が解決しようとする課題）
このため、細胞をプロトプラストにする操作が必要にな
るうえ、プロトプラストを植物体に再生するための培地
や温度等の条件か厳しく、再生するのが非常に困難であ
った。さらに、プロトプラストにする際に細胞を傷めて
しまうという欠点もあった。
るうえ、プロトプラストを植物体に再生するための培地
や温度等の条件か厳しく、再生するのが非常に困難であ
った。さらに、プロトプラストにする際に細胞を傷めて
しまうという欠点もあった。
（課題を解決するための手段）
上記課題を解決するために本発明は、緩衝溶液にターゲ
ットＤＮＡを混入しこれに植物細胞を浸漬して原形質分
離を起こさせた状態で、この細胞にエレクトロポレーシ
ョンにより前記ターゲットＤＮＡを導入しすることとし
た。
ットＤＮＡを混入しこれに植物細胞を浸漬して原形質分
離を起こさせた状態で、この細胞にエレクトロポレーシ
ョンにより前記ターゲットＤＮＡを導入しすることとし
た。
（作用）
細胞は原形質分離を起こしているので、細胞壁を通りタ
ーゲットＤＮＡが容易に入る。こうして次に、エレクト
ロポレーションにより遺伝子を細胞膜内に導入すれば、
プロトプラストにしてから導入するのと同様の操作で遺
伝子導入ができる。
ーゲットＤＮＡが容易に入る。こうして次に、エレクト
ロポレーションにより遺伝子を細胞膜内に導入すれば、
プロトプラストにしてから導入するのと同様の操作で遺
伝子導入ができる。
（実施例）
本発明実施例につき図面を参照して説明する。
タバコの葉片の細胞１を、通常の緩衝溶液にマンニトー
ルを０．４〜０．６Ｍ加えた溶液に浸す（第１図参照）
。この際、前記緩衝溶液にターゲットＤＮＡ４を混入し
ておく。
ルを０．４〜０．６Ｍ加えた溶液に浸す（第１図参照）
。この際、前記緩衝溶液にターゲットＤＮＡ４を混入し
ておく。
すると、前記細胞は細胞壁２から細胞膜３が離れ、原形
質分離を起こす。この時、細胞壁２からターゲットＤＮ
Ａ４が入る（第２図参照）。
質分離を起こす。この時、細胞壁２からターゲットＤＮ
Ａ４が入る（第２図参照）。
次に、細胞１にエレクトロポレーションの条件を、電圧
０． ５〜０． ８ｋＶ／ｃｍ 、パルスの持続時間６
ＬＬ５〜１０ ｍｓ、パルス間隔０．５〜１０ｓ、パ
ルス印加回数１〜１０回としてターゲットＤＮＡ４を遺
伝子導入する（第３図参照）。
０． ５〜０． ８ｋＶ／ｃｍ 、パルスの持続時間６
ＬＬ５〜１０ ｍｓ、パルス間隔０．５〜１０ｓ、パ
ルス印加回数１〜１０回としてターゲットＤＮＡ４を遺
伝子導入する（第３図参照）。
次に、薄い緩衝溶液に入れて原形質分離した細胞１を元
に戻す（第４図、第５図参照）。
に戻す（第４図、第５図参照）。
こうしてなる細胞を第６図に示すように試験管６内の培
地７に植付ける。萌芽後フラスコ８内の培地９に移植し
、培養して植物体１０に再生する（第７図参照）。
地７に植付ける。萌芽後フラスコ８内の培地９に移植し
、培養して植物体１０に再生する（第７図参照）。
（発明の効果）
細胞壁を酵素処理して除去する従来のプロトプラストを
用いた方法に比べて、細胞壁を除去する必要がないため
、より簡単にエレクトロポレーションによる遺伝子導入
ができる。しかも酵素により細胞が破壊される危険もな
いので、植物体に再生しやすくなるという効果を奏する
。
用いた方法に比べて、細胞壁を除去する必要がないため
、より簡単にエレクトロポレーションによる遺伝子導入
ができる。しかも酵素により細胞が破壊される危険もな
いので、植物体に再生しやすくなるという効果を奏する
。
第１図は植物細胞を緩衝溶液に浸した状態の図、第２図
は原形質分離を起こした状態の図、第３図はエレクトロ
ポレーションを行っている状態の図、第４図は遺伝子を
導入した状態の図、第５図は原形質分離を起こしていた
細胞を元に戻した状態の図、第６図はこの細胞を培地に
植付けて培養した状態の図、第７図は植物体に再生した
状態の図である。 １は植物細胞、２は細胞壁、３は細胞膜、４はターゲッ
トＤＮＡ、５は核、６は試験管、７，９は培地、８はフ
ラスコ、１０は植物体。 特許出願人 弁間農機 株式会社 代 理 人 牧 舌部（ほか３名）
は原形質分離を起こした状態の図、第３図はエレクトロ
ポレーションを行っている状態の図、第４図は遺伝子を
導入した状態の図、第５図は原形質分離を起こしていた
細胞を元に戻した状態の図、第６図はこの細胞を培地に
植付けて培養した状態の図、第７図は植物体に再生した
状態の図である。 １は植物細胞、２は細胞壁、３は細胞膜、４はターゲッ
トＤＮＡ、５は核、６は試験管、７，９は培地、８はフ
ラスコ、１０は植物体。 特許出願人 弁間農機 株式会社 代 理 人 牧 舌部（ほか３名）
Claims (1)
- 緩衝溶液にターゲットＤＮＡを混入し、これに植物細胞
を浸漬して原形質分離を起こさせた状態で該細胞にエレ
クトロポレーションにより前記ターゲットＤＮＡを導入
することを特徴とする植物細胞への遺伝子導入法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2132043A JPH0427393A (ja) | 1990-05-22 | 1990-05-22 | 植物細胞への遺伝子導入法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2132043A JPH0427393A (ja) | 1990-05-22 | 1990-05-22 | 植物細胞への遺伝子導入法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0427393A true JPH0427393A (ja) | 1992-01-30 |
Family
ID=15072179
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2132043A Pending JPH0427393A (ja) | 1990-05-22 | 1990-05-22 | 植物細胞への遺伝子導入法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0427393A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5720921A (en) * | 1995-03-10 | 1998-02-24 | Entremed, Inc. | Flow electroporation chamber and method |
| US6074605A (en) * | 1995-03-10 | 2000-06-13 | Entremed, Inc. | Flow electroporation chamber and method |
| US6773669B1 (en) | 1995-03-10 | 2004-08-10 | Maxcyte, Inc. | Flow electroporation chamber and method |
| US7029916B2 (en) | 2001-02-21 | 2006-04-18 | Maxcyte, Inc. | Apparatus and method for flow electroporation of biological samples |
| US7141425B2 (en) | 2001-08-22 | 2006-11-28 | Maxcyte, Inc. | Apparatus and method for electroporation of biological samples |
| JP2008000659A (ja) * | 2006-06-21 | 2008-01-10 | Hugle Electronics Inc | クリーニングヘッド |
| US7771984B2 (en) | 2004-05-12 | 2010-08-10 | Maxcyte, Inc. | Methods and devices related to a regulated flow electroporation chamber |
| JPWO2020183984A1 (ja) * | 2019-03-14 | 2020-09-17 |
-
1990
- 1990-05-22 JP JP2132043A patent/JPH0427393A/ja active Pending
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5720921A (en) * | 1995-03-10 | 1998-02-24 | Entremed, Inc. | Flow electroporation chamber and method |
| US6074605A (en) * | 1995-03-10 | 2000-06-13 | Entremed, Inc. | Flow electroporation chamber and method |
| US6773669B1 (en) | 1995-03-10 | 2004-08-10 | Maxcyte, Inc. | Flow electroporation chamber and method |
| US7029916B2 (en) | 2001-02-21 | 2006-04-18 | Maxcyte, Inc. | Apparatus and method for flow electroporation of biological samples |
| US7141425B2 (en) | 2001-08-22 | 2006-11-28 | Maxcyte, Inc. | Apparatus and method for electroporation of biological samples |
| US7186559B2 (en) | 2001-08-22 | 2007-03-06 | Maxcyte, Inc. | Apparatus and method for electroporation of biological samples |
| US7771984B2 (en) | 2004-05-12 | 2010-08-10 | Maxcyte, Inc. | Methods and devices related to a regulated flow electroporation chamber |
| JP2008000659A (ja) * | 2006-06-21 | 2008-01-10 | Hugle Electronics Inc | クリーニングヘッド |
| JPWO2020183984A1 (ja) * | 2019-03-14 | 2020-09-17 | ||
| WO2020183984A1 (ja) * | 2019-03-14 | 2020-09-17 | 株式会社ベックス | エレクトロポレーションによるプロトプラストまたは藻類への物質導入方法、および、エレクトロポレーター用電源装置 |
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