JPH04312535A - 造影剤内包リポソームおよび造影用懸濁液 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、画像診断に用いられる
造影剤内包リポソームおよび造影用懸濁液に関するもの
である。さらに詳しくは、本発明は、肝臓、脾臓等の細
網内皮系組織の画像診断に特に好適に用いられる造影剤
内包リポソームおよびこれを含有する造影用懸濁液に関
するものである。

【０００２】

【従来の技術】従来より、Ｘ線撮影に用いられる造影剤
としては、有機ヨード化合物を主成分とするものが用い
られている。しかしながら、この有機ヨード化合物は、
血管注入時の灼熱感、経口投与時の口中灼熱感、苦味感
、全身熱感、紅潮、嘔吐、腹痛、心悸亢進、胸内圧迫感
、発疹等の副作用が発生する虞れの高いものであった。 これらの副作用を解決するものとして、有機ヨード化合
物をリポソーム化することが検討されている（野島　　
庄七、砂本　　順三、井上　　圭三；リポソーム、２５
７、１９８８）。すなわち、有機ヨード化合物をリポソ
ーム化することにより、有機ヨード化合物由来の副作用
をマスキングし、さらに臓器からの消失時間を延長させ
て、診断を確実に行うことを可能にすることができる。 また、脂質からなるリポソームが、肝臓、脾臓等の細網
内皮系組織に集中しやすいので、これらの臓器の画像診
断に特に好適に用いることができる。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記の
有機ヨード化合物内包リポソームは、細網内皮細胞組織
へ到達するまでに、リポソーム表面に血漿中の蛋白質が
付着し、その結果、リポソームが血漿中で凝集し、この
リポソーム凝集塊が毛細血管内の栓塞を引き起こし、さ
らには全身的な血管内凝固症状を生起させるという問題
があった。しかも、このようなリポソームを生体血管内
に投与すると、凝集が発生することによって投与量に対
して有効量が減少してしまうために、十分な造影効果を
得られないという問題もあった。

【０００４】従って、本発明は、有効量が減少すること
が少なく、かつ血漿中での凝集が生起する虞れのない安
全性の高い造影剤内包リポソーム、およびこれを含有す
る造影用懸濁液を提供することを目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するた
めに、本発明に係る造影剤内包リポソームおよび造影用
懸濁液は以下（１）〜（３）の構成を有する。（１）脂
質からなる膜を有するリポソーム内に、造影剤水溶液を
取り込んでなる造影剤内包リポソームであって、一端に
疎水性部を有し、かつ他端に親水性高分子鎖部を有する
蛋白質吸着抑制剤が、前記疎水性部が膜表面に固定され
、前記親水性高分子鎖部が外方向に伸びてなるようにリ
ポソーム表面に修飾されてなることを特徴とする造影剤
内包リポソーム。（２）前記造影剤水溶液の造影剤濃度
が３０〜９５（Ｗ／Ｖ）％である前記１記載の造影剤内
包リポソーム。（３）前記１記載の造影剤内包リポソー
ムを溶媒に懸濁させた懸濁液であって、浸透圧が２５０
〜３５０ｍｍｏｌ／ＫｇＨ２Ｏ、粘度が４ｃＰ（３７℃
、ずり速度３８３ｓｅｃ−１）以下に調整されてなるこ
とを特徴とする造影用懸濁液。

【０００６】

【作用】本発明に係る造影剤内包リポソームは、一端に
疎水性部を有し、かつ他端に親水性高分子鎖部を有する
蛋白質吸着抑制剤が、前記疎水性部が膜表面に固定され
、前記親水性高分子鎖部が外方向に伸びてなるようにリ
ポソーム表面に修飾されてなるので、血漿中での凝集が
好適に抑制され、安全性が高く、しかも有効量が減少す
る虞れが少ない。さらに、リポソームに内包される造影
剤水溶液の造影剤濃度が３０〜９５（Ｗ／Ｖ）％である
と、より少量の膜脂質で多量の造影剤を内包させること
ができるので、リポソーム懸濁液の粘性を低下させるこ
とができ、従って安全性が高まる。また、本発明に係る
造影用懸濁液は、浸透圧が２５０〜３５０ｍｍｏｌ／Ｋ
ｇＨ２Ｏ、粘度が４ｃＰ（３７℃、ずり速度３８３ｓｅ
ｃ−１）以下に調整されてなるので、生体血液との浸透
圧差に起因する副作用が少なく、しかも十分な流動性を
有するので、血管内投与が円滑に行える。

【０００７】以下、本発明を詳細に説明する。

【０００８】本発明において用いられる造影剤としては
、特に、肝臓、脾臓、骨髄等の細網内皮系組織を撮影す
ることが可能なＸ線不透過能を有するものが好ましく、
具体的には有機ヨード化合物が好適である。有機ヨード
化合物としては、メトリゾエートナトリウム、ジアトリ
ゾエートナトリウム、ジアトリゾエートメグルカミン塩
、メチオダールナトリウム、ヨードピラセットジエタノ
ールアミン塩、ヨードピラセットメグルカミン塩、アセ
トリゾエートナトリウム、アイオサラメートナトリウム
、アイオサラメートメグルカミン塩、ヨーダミドメグル
カミン塩等があげられる。

【０００９】これらの造影剤は、通常有機ヨード化合物
のナトリウム塩、メチルグルカミン塩またはそれらの混
合塩の水溶液として提供される。この造影剤水溶液のヨ
ード含量は５０〜１０００ｍｇ／ｍｌであることが好ま
しく、とくに１００〜５００ｍｇ／ｍｌであることが好
ましい。また、造影剤濃度は、３０〜９５（Ｗ／Ｖ）％
であることが好ましい。

【００１０】本発明におけるリポソーム膜形成脂質は特
に制限はなく、リポソームを形成するものであれば天然
または合成の脂質が使用可能であるが、特に飽和のリン
脂質が好適に使用される。その例としては、レシチン（
ホスファチジルコリン）、ホスファチジルエタノールア
ミン、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリン、ホス
ファチジルイシノトール、ホスファチジルグリセロール
、スフィンゴミエリン等を常法に従って水素添加したも
のが挙げられ、これらを組み合わせて用いることもでき
る。特に、水素添加率が５０％以上とされた、卵黄ある
いは大豆由来の水素添加天然リン脂質が好ましい。また
、さらに膜安定化剤としてコレステロール、コレスタノ
ール等のステロール類や、荷電物質としてホスファチジ
ン酸、ジセチルホスフェート、高級脂肪酸等を添加して
もよい。

【００１１】次に蛋白質吸着抑制剤について説明する。

【００１２】本発明において、蛋白質吸着抑制剤を構成
する疎水性部としては、長鎖脂肪族アルコール、ステロ
ール、ポリオキシプロピレンアルキルまたはグリセリン
脂肪酸エステルのアルコール性残基、およびリン脂質が
あげられる。親水性高分子鎖部としては、ポリエチレン
グリコールがあげられる。

【００１３】本発明における蛋白質吸着防止剤としては
、特に、ポリエチレングリコール（以下、ＰＥＧという
）と、上記疎水性部アルコール性残基とがエーテル結合
したＰＥＧ付加型非イオン界面活性剤、またはＰＥＧと
リン脂質とが共有結合したＰＥＧ結合リン脂質が好まし
い。

【００１４】ＰＥＧ結合リン脂質は、水素添加リン脂質
の親水部にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を共有結
合させた構造を有し、１分子中に１又は複数のＰＥＧ鎖
を含有する。ＰＥＧ鎖のリン脂質と結合していない側の
末端は、水酸基あるいはメチル、エチル等の短鎖のエー
テル、酢酸、乳酸等の短鎖のエステルであってもよい。

【００１５】ここで、天然リン脂質としては、大豆レシ
チン、卵黄レシチン、ホスファチジルエタノールアミン
等を用いることが好ましい。

【００１６】本発明の目的のためには、ＰＥＧ結合天然
リン脂質分子中のＰＥＧ鎖長は、平均重合度で５〜１０
００モルが望ましく、より望ましくは４０〜２００モル
である。この範囲を下まわる場合には、血漿中における
蛋白質吸着防止効果が発現され難く、この範囲を上まわ
る場合にはＰＥＧ結合天然リン脂質の水溶性が高くなり
、リポソーム膜中に固定され難くなる。

【００１７】ＰＥＧとリン脂質を共有結合するには、リ
ン脂質の極性部に反応活性を有する官能基が必要である
。この官能基としては、ホスファチジルエタノールアミ
ンのアミノ基、ホスファチジルグリセロールの水酸基、
ホスファチジルセリンのカルボキシル基等があり、ホス
ファチジルエタノールアミンのアミノ基が好ましく利用
される。

【００１８】リン脂質の官能基とＰＥＧを共有結合させ
るには、塩化シアヌルを用いる方法、カルボジイミドを
用いる方法、酸無水物を用いる方法、グルタルアルデヒ
ドを用いる方法等がある。ホスファチジルエタノールア
ミンのアミノ基とＰＥＧとを結合させるには、塩化シア
ヌル（２，４，６　−　トリクロロ−　ｓ　−　トリア
ジン）を用いる方法が好ましい。例えば、モノメトキシ
ポリエチレングリコールと塩化シアヌルを公知の反応操
作で結合させることにより、２　−　Ｏ　−　メトキシ
ポリエチレングリコール　−　４，６　−　ジクロロ　
−　ｓ　−　トリアジン（活性化ＰＥＧ１）または　２
，４　−　ビス　（Ｏ　−　メトキシポリエチレングリ
コール）　−　６　−　クロロ　−　ｓ　−　トリアジ
ン（活性化ＰＥＧ２）が得られる。これらとアミノ基を
脱塩酸縮合反応により結合させることで、ホスファチジ
ルエタノールアミンの極性頭部にＰＥＧを共有結合させ
たリン脂質が得られる。ここで、活性化ＰＥＧ１を用い
た場合には、一分子中のリン脂質に１本のＰＥＧ鎖を、
活性化ＰＥＧ２を用いた場合には、２本のＰＥＧ鎖を含
有することになる。また、モノメトキシＰＥＧと無水コ
ハク酸を反応させてＰＥＧ末端にカルボキシル基を導入
し、これとホスファチジルエタノールアミンをカルボジ
イミド存在下で反応させることにより、アミド結合を介
したＰＥＧ結合天然リン脂質が得られる。

【００１９】また、リポソーム形成脂質とＰＥＧ結合天
然リン脂質の混合比は、主成分であるリン脂質に対して
、モル比で０．１〜５０モル％、好ましくは０．５〜２
０モル％、より好ましくは１〜５モル％とされる。この
範囲を下まわる場合には、蛋白質吸着防止効果が不十分
となり、この範囲を上まわる場合には、ＰＥＧ結合天然
リン脂質の可溶化能により、リポソームの膜構造が不安
定となる。

【００２０】リポソーム膜中におけるＰＥＧ結合天然リ
ン脂質の存在状態は明らかではないが、ＰＥＧ結合天然
リン脂質の疎水性部がリポソーム膜中の疎水性領域内に
あって、親水性のＰＥＧ鎖が親水性領域から膜外の水性
媒体中にかけて存在しているものと推定される。

【００２１】上記のように本発明の造影剤内包リポソー
ムは、表面が蛋白質吸着抑制剤によって修飾されている
ので、血管内での凝集が好適に防止され、優れた安全性
を発揮するとともに、投与量に対して有効量が減少する
ことが少ないので、十分な造影性を発揮する。

【００２２】本発明の造影剤内包リポソームを得るには
、通常公知の薬剤内包リポソームの製造方法に従えばよ
い。しかしながら、内包させる有機ヨード化合物の粘度
が高い場合には、高速撹拌法または高圧吐出法を採用す
ることが望まれる。すなわち、両方法とも処理対象とな
る液体の粘度が高いほど、かかるエネルギーが大きくな
り、リポソーム形成能が高まるために、均一で、良質な
リポソームが得られる。従って、高速撹拌法または高圧
吐出法を採用することにより、高濃度の有機ヨード化合
物の水溶液をリポソーム化することができる。このよう
なリポソームを用いることにより、生体への負担を高め
ることなく、十分な造影性を発揮することが可能になる
。しかしながら、これらの方法以外の超音波照射法、逆
相法、凍結融解法でもリポソーム形成は可能である。

【００２３】次に、本発明の造影用懸濁液について説明
する。

【００２４】本発明の造影用懸濁液は、前述したリポソ
ームを溶媒に懸濁させた懸濁液であって、浸透圧が２５
０〜３５０ｍｍｏｌ／ＫｇＨ２Ｏ、粘度が４ｃＰ（ずり
速度３８３ｓｅｃ−１）以下に調整されてなることを特
徴とするものである。

【００２５】すなわち、本発明に係る造影用懸濁液は、
有機ヨード化合物をリポソーム膜によってマイクロカプ
セル化し、このマイクロカプセルを水溶液中に懸濁させ
ているから、有機ヨード化合物由来の過敏症が好適に抑
制されるとともに、浸透圧は内包する有機ヨード化合物
の影響を受けない。このため、浸透圧の調整は比較的容
易である。具体的には、浸透圧は、２５０〜３５０ｍｍ
ｏｌ／ＫｇＨ２Ｏ、より望ましくは２８０〜３１０ｍｍ
ｏｌ／ＫｇＨ２Ｏの範囲で選択される。すなわち、２５
０ｍｍｏｌ／ｋｇＨ２Ｏを下回ると、血管外組織へ懸濁
液中の水分が移行して浮腫を発生させる虞れがあり、一
方３５０ｍｍｏｌ／ＫｇＨ２Ｏを越えると血管内への水
分の流入が過剰となり、血管外の細胞が脱水状態になる
虞れがあるとともに、高浸透圧に起因する抹消循環障害
が発生する虞れが生じる。リポソームを懸濁させる溶媒
としては、浸透圧が２５０〜３５０ｍｍｏｌ／ＫｇＨ２
Ｏであり、さらに電界質組成が、生体血液、またはリン
ゲル液、乳酸リンゲル液、クレブスーリンゲル液等の電
界質溶液と近似するか実質的に等しく調整された電解質
溶液を採用することが好ましい。

【００２６】さらに、本発明に係る造影用懸濁液は、粘
度が４ｃＰ（３７℃、ずり速度３８３ｓｅｃ−１）以下
に調整されてなるものである。粘度が４ｃＰを越えると
、流動性が不足し、血管内投与を円滑に行えず、しかも
抹消血管における循環不良によってリポソーム同士の凝
集を誘発する虞れがある。

【００２７】次に実施例を示して本発明をさらに具体的
に説明する。

【００２８】

【実施例】水素添加率９０重量％以上の精製大豆ホスフ
ァチジルコリン（ＳＢＰＣ）、コレステロール（ＣＨＯ
Ｌ）、ミリスチン酸（ＭＡ）、ビタミンＥ（ＶＥ）の均
一混合粉末（商品名：プレソーム、日本精化、ＳＢＰＣ
：ＣＨＯＬ：ＭＡ：ＶＥ＝７．０：７．０：２．０：０
．２８（ｍｏｌ））５．４ｇに等量の蒸留水を加え、６
０℃、６０分間の水和処理を行った。この水和脂質に、
水溶性ヨード造影剤であるメトリジアミド（アルドリッ
チケミカル社製）の９０％（Ｗ／Ｖ）濃厚水溶液１５ｍ
ｌを加え、５℃に冷却しながら高速撹拌機（ワーリング
ブレンダー、ワーリングブレンダー社製）を用いて、１
５，０００ｒｐｍ、１６０分間の撹拌処理を行った。得
られた処理液に、生理食塩水を加え、１２０００Ｇの遠
心加速度で３０分間遠心した。遠心後、デカンテーショ
ンにより上澄みを除去し、これに生理食塩水を加え、リ
ポソームを再浮遊させた。このリポソーム懸濁液を０．
４５μｍのフィルター（ミリポア社製）により濾過し、
濾液を限外濾過により濃縮し、ヨード濃度１５ｍｇＩ／
ｍｌの造影剤内包リポソーム懸濁液１００ｍｌを得た。

【００２９】モノメトキシポリエチレングリコール５，
０００（ＰＥＧ５Ｋ，ユニオンカーバイド社製）１００
ｇを１．２ージクロロエタン５００ｍｌに溶解し、さら
に無水コハク酸１０ｇとピリジン８ｍｌを加えて、窒素
気流下にて３日間沸点還流した。濾通、エバポレーショ
ン後、２００ｍｌの蒸留水に溶解し、エーテルで水相を
洗浄した後、クロロホルム２００ｍｌに抽出した。エバ
ポレーション後、エタノール４００ｍｌに溶解し、ヘキ
サン９ｌに再沈精製した。濾集、真空乾燥して片末端カ
ルボキシＰＥＧ５Ｋを８５．６ｇ得た。これを３０ｇと
、水素添加大豆ホスファチジルエタノールアミン７ｇ、
さらにジシクロヘキシルカルボジイミド１．８ｇを蒸留
直後のクロロホルム５０ｍｌに加熱溶解し、５０℃で終
夜反応させた。濾通後、エバポレーションしてエタノー
ルに溶解、不溶物を濾去して、溶液をヘキサンに再沈し
た。濾集、真空乾燥して、ＰＥＧ結合水素添加大豆リン
脂質（ＨＳＰＥ−ＰＥＧ５Ｋ）３４ｇを得た。得られた
蛋白質吸着抑制剤を、造影剤水溶液内包リポソーム懸濁
液中のＳＢＰＣ濃度４．６％（Ｗ／Ｖ）あたり０．１重
量％となるように、前記造影剤内包リポソーム懸濁液に
添加後、３７℃、インキュベーションを３時間行い、リ
ポソームの表面を蛋白質吸着防止剤で修飾した造影剤内
包リポソーム懸濁液（造影用懸濁液）を得た。このリポ
ソームの平均粒径は２８０ｎｍであった。

【００３０】［実験１］実施例で得られた造影用懸濁液
０．１ｍｌとクエン酸加ヒト血漿０．５ｍｌを混合し、
光学顕微鏡（４００倍）により１μｍを越えるリポソー
ム凝集塊を観察したところ、凝集塊は観察されなかった
。

【００３１】［実験２］実施例で得られた造影用懸濁液
のヨード濃度を１５ｍｇＩ／ｍｌ、浸透圧を２９０ｍｍ
ｏｌ／ＫｇＨ２Ｏ、粘度を１．５ｃＰ（３７℃、ずり速
度３８３ｓｅｃ−１に調整した。投与に先立ち、腹部領
域の対照Ｘ線ＣＴスキャンを行った後、前述のようにし
て調整された造影用懸濁液２．５ｍｌをラットの尾静脈
血管内に投与した。なお、断面性スライス画像の再現性
を確実にするため、ラットは位置を変えないで固定した
まま投与を行った。投与後５、１５、３０、４５、６０
分後に、それぞれラットの腹部領域のＸ線ＣＴスキャン
を行った。その結果、いずれの例においても、明らかに
強調された脾臓の画像が得られた。特に、投与後６０分
後の画像では、対照に比べて約１３０ｈｏｕｎｓｆｉｅ
ｌｄ単位の鮮明な画像が得られた。また、いずれの例に
おいても、ヨード過敏症による副作用は観察されなかっ
た。また、１２０分後にラットを犠牲死させ、病理組織
学的検索を行ったところ、リポソーム凝集に起因する血
管内凝固は観察されなかった。

【００３２】

【発明の効果】本発明に係る造影剤内包リポソームは、
一端に疎水性部を有し、かつ他端に親水性高分子鎖部を
有する蛋白質吸着抑制剤が、前記疎水性部が膜表面に固
定され、前記親水性高分子鎖部が外方向に伸びてなるよ
うにリポソーム表面に修飾されてなるので、血漿中にお
ける凝集が好適に抑制される。従って、安全性が高く、
しかも有効量が減少する虞れがないので、生体への負担
を高めることなく、十分な造影効果を得ることが可能で
ある。さらに、リポソームに内包される造影剤水溶液の
造影剤濃度が３０〜９５（Ｗ／Ｖ）％であるから、より
少量の膜脂質で多量の造影剤を内包させることができる
ので、リポソーム懸濁液の粘性を低下させることができ
る。また、本発明に係る造影用懸濁液は、浸透圧が２５
０〜３５０ｍｍｏｌ／ＫｇＨ２Ｏ、粘度が４ｃＰ（３７
℃、ずり速度３８３ｓｅｃ−１）以下に調整されてなる
ので、生体血液との浸透圧差に起因する副作用が少なく
、しかも十分な流動性を有するので、血管内投与が円滑
に行える。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】脂質からなる膜を有するリポソーム内に、
   造影剤水溶液を取り込んでなる造影剤内包リポソームで
   あって、一端に疎水性部を有し、かつ他端に親水性高分
   子鎖部を有する蛋白質吸着抑制剤が、前記疎水性部が膜
   表面に固定され、前記親水性高分子鎖部が外方向に伸び
   てなるようにリポソーム表面に修飾されてなることを特
   徴とする造影剤内包リポソーム。
2. 【請求項２】前記造影剤水溶液の造影剤濃度が３０〜９
   ５（Ｗ／Ｖ）％である請求項１記載の造影剤内包リポソ
   ーム。
3. 【請求項３】請求項１または２記載の造影剤内包リポソ
   ームを溶媒に懸濁させた懸濁液であって、浸透圧が２５
   ０〜３５０ｍｍｏｌ／ＫｇＨ２Ｏ、粘度が４ｃＰ（３７
   ℃、ずり速度３８３ｓｅｃ−１）以下に調整されてなる
   ことを特徴とする造影用懸濁液。