JPH04312598A - β−フコピラノシル燐酸塩およびきわめて高純度のＧＤＰ−フコースの立体選択的調製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、β−フコピラノシル燐
酸塩およびそれから調製され得るきわめて高純度のグア
ノシン二燐酸フコース（ＧＤＰ−フコース）の立体選択
的調製法に関する。

【０００２】

【従来の技術】Ｌ−フコースは、乳および血液群物質の
少糖類の構成成分として知られている（例えば、Ｈａｋ
ｏｍｏｒｉ、　Ｐｒｏｇｒ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｐｈ
ａｒｍａｃｏｌ．　１０　（１９７５）、　１６７）。 デオキシヘキソースは、さらに、細菌のリポ多糖類およ
び哺乳類動物のスフィンゴリピドの合成に関与する（例
えば、Ｆｌｏｗｅｒｓ、　Ａｄｖ．　Ｃａｒｂｏｈｙｄ
ｒｏ．　Ｃｈｅｍ．　３９　（１９８１）、　２９７）
。フコシル化糖脂質は、細胞増殖および細胞分化の調節
において重要な役割を果たす。しかし、フコシル化糖脂
質が腫瘍細胞の表面構造物の構成成分であり、抗原的性
質を示すことは、とくに興味深いことである（例えば、
Ｈａｋｏｍｏｒｉ、　Ａｎｎ．　Ｒｅｖ．　Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．　５０　（１９８１）、　７３３）。したがって
、これらの腫瘍の治療および腫瘍の診断のための重要性
が認められている。少糖類および糖脂質を含むフコース
の合成には、中でも、特異的酵素、フコシルトランスフ
ェラーゼが要求される。これらフコシルトランスフェラ
ーゼの基質は、グアノシン二燐酸フコース（ＧＤＰ−フ
コース）である。

【０００３】フコシル化糖脂質に基づく腫瘍関連抗原の
研究および生産のためには、したがって、比較的多量の
きわめて高純度ＧＤＰ−フコースを入手することが必要
である。比較的長い間その必要性があったにもかかわら
ず、ＧＤＰ−フコースの唯一の化学合成（Ｎｕｎｅｚ　
ら、　Ｃａｎ．　Ｊ．　Ｃｈｅｍ．５９　（１９８１）
、　２０８６）およびいくつかの酵素的合成（例えば、
Ｙａｍａｍｏｔｏ　ら、　Ａｇｒｉｃ．　Ｂｉｏｌ．　
Ｃｈｅｍ．　４８　（１９８４）、　８２３）が知られ
てきたのみである。しかし、例えばフコース−１−燐酸
またはＧＤＰ−マンノースを介して進行する酵素的合成
には、ＧＤＰ−フコースが少量しか得られないという欠
点がある。

【０００４】ＧＤＰ−フコースの化学合成の鍵となる化
合物は、明かにフコース−１−燐酸であり、その適当量
の供給が全体合成の量的限定因子となる。フコース−１
−燐酸は、二つの異なる構造、厳密にはクロロホスホア
ミダート法（例えば、Ｗｅｓｔｅｒｄｕｉｎ　ら、　Ｔ
ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ．２７　（１９８６）
　１２１１）によって比較的容易に調製できるα−フコ
ピラノシル燐酸塩のかたちおよびβ−フコピラノシル燐
酸塩のかたちをとる。β−構造を有する燐酸塩は、ＧＤ
Ｐ−フコースの合成に唯一適している。しかし、β−フ
コピラノシル燐酸塩の既知の化学的合成法（Ｎｕｎｅｚ
　ら、　前出；Ｔｓａｉ　ら、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．
　Ｒｅｓ．　６４　（１９７８）、　２９７）は、低い
立体選択性および／または低い収量で特徴づけられ、場
合によっては加えて高価で複雑であるため、せいぜい研
究室規模での調製に適している。β−フコピラノシル燐
酸塩の従来の調製における難しさは、その顕著な不安定
性、とくに酸に対しての不安定性に起因することは明白
である。

【０００５】さらに、β−フコピラノシル燐酸塩からの
ＧＤＰ−フコースの既知の製造法（Ｎｕｎｅｚ　ら、　
前出）においては、最終産物の精製はイオン交換によっ
てのみ行われるので、さらなる精製、少なくとも産物の
脱塩が多くの生化学的目的のために必要である。しかし
、これもまた収量の低下に関与する。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明の
目的は、高い立体選択性、優れた収量、最終産物の高い
純度および実験方法の簡易性で特徴づけられる、β−フ
コピラノシル燐酸塩およびそれから調製されるＧＤＰ−
フコースの新規の調製法を開発することである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】例えばジベンジルまたは
ジフェニル燐酸などのきわめて高純度の有機燐酸塩との
簡単な反応によって、保護されたＬ−フコースのα−ト
リクロロアセトイミダートからβ−フコピラノシル燐酸
塩が高収率で調製できることが、いま見出された。

【０００８】また、このために必要なα−トリクロロア
セトイミダートが、Ｌ−フコースまたはその２、３、お
よび４位置が保護された型のもののトリクロロアセトニ
トリルとの反応によって、好ましくは塩基としてナトリ
ウム水和物を用いて、立体選択的に高収量で容易に調製
できることも見出された。

【０００９】そして最終的に、β−フコピラノシル燐酸
塩が易溶性の塩、とくにトリ−ｎ−オクチルアンモニウ
ム塩、に変換されている場合には、本発明によって調製
されたβ−フコピラノシル燐酸塩は本発明によるさらな
る製造ステップにおける活性化されたＧＭＰとの反応に
よるＧＤＰ−フコースの生産はとくに有利に進行し、揮
発性溶出液を用いるＨＰＬＣによる精製によって生成さ
れるＧＤＰ−フコースの高純度化を達成するこが可能で
あって、さらに製造法を単純化することが可能であるこ
とが見出された。

【００１０】したがって、本発明はβ−フコピラノシル
燐酸塩の選択的調製法に関し、これは２、３、４位置に
おいて保護されたＬ−フコースを、対応する０−（α−
Ｌ−フコピラノシル）トリクロロアセトイミダートに変
換して、これを一般式ＰＯ（ＯＨ）（ＯＲ）２（式中、
ＲはＣ１−Ｃ４−アルキル、ベンジルまたはフェニル）
の全く酸を含まない有機燐酸塩と反応させて、燐酸基の
Ｒ基およびフコピラノシル環上の保護基を除去して、遊
離のβ−Ｌ−フコピラノシル燐酸を塩として単離するこ
とを特徴とする。

【００１１】本発明はさらに、きわめて高純度のＧＤＰ
−フコースの立体選択的調製法に関し、これはβ−Ｌ−
フコピラノシル燐酸塩を易溶性塩に変換して、これを活
性化したＧＭＰと反応させて、形成されたＧＤＰ−フコ
ースを揮発性緩衝系を溶出液として用いる調製用ＨＰＬ
Ｃによって精製することを特徴とする。

【００１２】本発明は、とくに、用いるβ−フコピラノ
シル燐酸塩を記述される方法の一つによって調製するこ
とを特徴とする、対応する方法に関する。

【００１３】本発明による方法は、また、とくに、テト
ラ−アセチル化化合物からのトリ−Ｏ−アセチルーＬ−
フコースの提供がワンステップ反応、好ましくは酢酸ヒ
ドラジンを用いて行われ得ることに特徴があり、これは
全合成の単純化に貢献する。２、３、４−保護Ｌ−フコ
ースのトリクロロアセトニトリルとの反応において他の
型の塩基が用いられる場合には、α−およびβ−フコピ
ラノシルトリクロロアセトイミダートの異なる混合物が
形成され、これは最初にさらなる使用のために分離され
ねばならない。水素化ナトリウムおよび同様の塩基を用
いる場合には、対応するα−トリクロロアセトイミダー
トがもっぱら形成される。水素化ナトリウムが用いられ
た場合のα−イミダートの収率は、例えばトリ−Ｏ−ア
セチル−Ｌ−フコースに対して、平均７０〜８０％であ
る。

【００１４】フコピラノシル燐酸塩を得るための保護さ
れたＬ−フコースのα−トリクロロアセトイミダートと
の反応において用いられるＰ（ＯＨ）（ＯＲ）２型の燐
酸塩の純度によって、形成されるアノマーについて立体
選択的過程が決定される。比較的少量の例えば三フッ化
ホウ素などの酸が用いる燐酸塩中に存在するかまたは反
応混合物に添加されている場合には、ＧＤＰ−フコース
を得るためのさらなる工程に適しないα−フコピラノシ
ル燐酸塩が選択的に形成される。本発明によって、β−
フコピラノシル燐酸塩がもっぱら所望される場合は、反
応は完全に酸の存在しない条件で行われねばならない。 用いる対応α−トリクロアセトイミダートに対してのβ
−アノマーの収率は、精製後で８５〜９５％、好ましく
は８５〜９０％である。

【００１５】実際にはトリ−Ｏ−アセチル−Ｌ−フコー
スから出発してイミダート化合物を介する本発明による
合成のβ−フコピラノシル燐酸塩の収率を、二つの既知
の化学合成の収率（Ｎｕｎｅｚ　ら、　前出、　Ｔｓａ
ｉ　ら、　前出）と比較すると、既述の方法による所望
の産物は（塩として）平均７０％の収率であり、Ｎｕｎ
ｅｚらの既知の方法によれば約５０％の収率、およびＴ
ｓａｉらの方法（Ｌ−フコースのオルト酢酸塩から出発
）によれば約２０％にすぎない。加えて、本発明による
β−フコピラノシル燐酸塩の調製法は、とくにＮｕｎｅ
ｚらの方法と比較して、より少なくより簡単な製造工程
からなる。

【００１６】本発明による全体プロセスは、高い立体選
択性、より少ない製造ステップ、簡易性、すなわち、例
えば、α−およびβ−アノマーの特別な分離が不要であ
り、かつきわめて優れた収率で特徴づけられる。新規の
精製方法のおかげて、最も繊細な生化学的プロセスにお
ける使用にも適しているきわめて高純度のＧＤＰ−フコ
ースが得られる。この方法は、比較的大きな工業的規模
での適用に最も適している。

【００１７】以下の個々の化合物の後に付された括弧内
の数字は、図面中の数字に対応する。

【００１８】以上および以下において、Ｒ、Ｒ’および
Ｒ１は、他にとくに記載がなければ以下により詳細に説
明される通りである。

【００１９】ＲおよびＲ１は、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、
ベンジルまたはフェニルである。Ｒ／Ｒ１がアルキルで
ある場合は、これらはとくにメチル、エチル、ｎ−プロ
ピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチルまたはｓ
ｅｃ−またはｔｅｒｔ−ブチルで、特にはメチルである
。

【００２０】しかし、ＲまたはＲ１は、好ましくはベン
ジルである。Ｒ’は、Ｒ１ＣＯ−およびＲ１である。β
−Ｌ−フコピラノシル燐酸塩から出発するＧＤＰ−フコ
ースの合成のために、Ｒ’は好ましくはＲ１ＣＯ−であ
る。Ｒ１ＣＯ−基において、Ｒ１は好ましくはＣＨ３−
またはＣ６Ｈ４−である。したがって、Ｒ１は好ましく
はアセチルまたはベンジルであるが、とくにアセチルで
ある。Ｒ１がフェニルまたはベンジルの場合は、芳香環
は単一または複数置換されたものであり得る。適当な置
換基は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨまたはメチルである。し
かし、芳香環は好ましくは非置換物である。Ｋ＋は、無
機または有機陽イオン、好ましくは一般式ＮＨ（Ｒ３）
＋の有機陽イオンであり、式中、Ｒ３は直鎖または分枝
を有するが、好ましくは１〜１０個のＣ原子を有する直
鎖状アルキルである。陽イオン基ＮＨ（Ｃ２Ｈ５）３＋
、およびとくにＮＨ（Ｃ８Ｈ１７）３＋が好ましい。

【００２１】一分子中のある基の意味は同一でも異なる
こともあり得るが、好ましくは同一である。

【００２２】フコースの水酸基の修飾に関連する個々の
ステップ、例えば、エステル化、エーテル化、ハロゲン
化、トランスエステル化、トランスエーテル化、加水分
解、エーテル切断、保護基の導入および除去およびグリ
コシルイミダート形成などは、とくに記載がなければ炭
水化物化学の一般の標準法に準ずる。この標準法の詳細
については、例えば、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ　（Ｊｏｈｎ　Ｆ．　Ｋｅｎｎｅｄｙ編
集、　Ｏｘｆｏｒｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｐｕｂｌｉｃａ
ｔｉｏｎ、　Ｃｌａｒｅｎｄｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、１９８
８）など見出される。

【００２３】本発明の方法は、好ましくは以下のように
して行われる。

【００２４】既知のように、グリコシドのＣ原子または
アノマー性炭素に特異的変化を行わせるためには、保護
基の導入が要求される。所望される反応性によって、こ
の目的のためにはエステルまたはエーテル基が好ましい
。本発明の方法においては、これに関して、保護基とし
てアセチルまたはベンジルが好ましい。しかし、より詳
細に上記した他の物質もまた、問題なく用いることがで
きる。

【００２５】三基置換したＬ−フコースの（１）合成：
２、３、４−トリ−０−ベンジル−Ｌ−フコピラノース
（１）は、Ｌ−フコースから、例えば、Ｗｅｇｍａｎｎ
ら（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．　Ｒｅｓ．　１８４　（１９
８８）、　２５４）またはＤｅｊｔｅｒ−Ｊｕｓｚｙｎ
ｓｋｉら（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．　Ｒｅｓ．　１８　（
１９７１）、　２１９）の方法によって調製することが
できる。しかし、本発明によると、さらなる合成ステッ
プのためにより適していることから、トリアセチル化Ｌ
−フコースが好ましく合成される。

【００２６】２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル−Ｌ−フ
コピラノース（１）を合成するために、本発明によると
、１、２、３、４−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フ
コピラノースを、ワンステップ反応、好ましくはジメチ
ルホルムアミド中の酢酸ヒドラミンとの反応において反
応させる。アノマー性アセチル基の特異的加水分解のた
めに、ベンジルアミン、水酸化カリウム、シアン化カリ
ウムまたは酸化ビス（トリブチルチン）もまた、酢酸ヒ
ドラジンに加えて適している。

【００２７】トリアセチル化産物は、平均３：１のα：
βアノマー比で形成される。しかし、さらなる反応およ
び全プロセスの立体選択性のためにはこの状態は有用で
はない。例えばシリカゲルクロマトグラフィーなどを介
しての精製の後、トリアセチル化されたＬ−フコピラノ
ースのアノマー混合物は、７５〜８５％の収率で得られ
る。一方、対応する産物は従来の技術（Ｎｕｎｅｚら、
前出）の方法においても調製されるが、これは複雑な複
数ステップで、また、さらに精製されることもない。出
発物質、１、２、３、４−テトラ−Ｏ−アセチル−α−
Ｌ−フコピラノースは、市販されていなければ、Ｎｕｎ
ｅｚらまたはＰｒｉｈａｒら（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ　１２　（１９７３）、９９７）の既知の方法によっ
て容易に得られる。

【００２８】三基置換したＬ−フコピラノースのα−お
よびβ−トリクロロアセトイミダート（２、３）の合成
：２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル−Ｌ−フコピラノー
ス（１）または対応してトリベンジル化された誘導体（
１）を、ここで既知のイミダート法（例えば、Ｓｃｈｍ
ｉｄｔ　ら、　Ａｎｇｅｗ．　Ｃｈｅｍ．　９２　（１
９８０）、　７６３）によってトリクロロアセトニトリ
ルと反応させる。アノマー比は、用いる塩基のタイプに
よって調節できる。驚いたことに、ナトリウム水素化物
を用いると、さらなる合成に必要なＯ−（２、３、４−
トリ−Ｏ−アセチル／ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシ
ル）トリクロロアセトイミダート（３）がもっぱら、す
なわちα−アノマーが選択的に、得られる。同じ結果は
、カリウム水素化物または水酸化ナトリウムを用いる場
合にも得られる。一方、ＤＢＵ（１、２−ジアゾビシク
ロ［５．４．０］ｕｎｄｅｃ−７−エン）または炭酸カ
リウムなどの他の塩基を用いる場合には、約７：１〜１
：１の比を有するα−およびβ−トリクロロアセトイミ
ダートのアノマー混合物が得られる。本発明の方法は、
したがって、ナトリウム水素化物のように反応する塩基
で好ましく行われる。α−トリクロロアセトイミダート
は、好ましくはクロマトグラフィーで精製されて、平均
７０〜８０％の収率で純粋なかたちで得られる。

【００２９】三基置換したＬ−フコピラノシル燐酸塩（
４、５）の合成：上記のようにして調製したＬ−フコー
スの三基置換したα−トリクロロアセトイミダートの一
般式ＰＯ（ＯＨ）（ＯＲ）２（式中、ＲはＲ１およびＲ
１は上記の意味を有する）の有機燐酸塩との反応によっ
て、対応する三基置換したＬ−フ２コピラノシル燐酸塩
、好ましくは２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル／ベンジ
ル−α−Ｌ−フコピラノシル燐酸ジベンジル（４）およ
び２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル／ベンジル−β−Ｌ
−フコピラノシル燐酸ジベンジル（５）が高収率で得ら
れる。適当な有機燐酸は、このように、好ましくは燐酸
ジベンジルで、これは一方では入手が容易であるため、
他方ではベンジル基が選択的にとくに容易に除去できる
ためである。

【００３０】もちろん、他の上記の燐酸塩、例えば、燐
酸ジフェニルなども適当である。しかし、反応過程中の
酸の有無がα−またはβ−構造を有する燐酸塩の立体選
択的調製のための適性を決定する。純粋なα−アノマー
（４）は、触媒作用量の酸、例えば三フッ化ホウ素など
、を混合物に加えた場合に得られる。用いられる燐酸塩
が過度に純粋でない場合には、酸の添加さえも不要とす
ることができる。他方、反応が酸の全く存在しない条件
下で行われた場合には、純粋のβ−アノマー（５）が選
択的に得られる。このためには、用いる塩酸塩を少なく
とも１回新たに再結晶するかまたはいかなる酸触媒をも
排除するような適当な手段をとることが一般に必要であ
る。

【００３１】精製後の収量は、用いる保護されたＬ−フ
コースのα−トリクロロアセトイミダートに対して好ま
しくは８５〜９０％である。９０〜９８％の収量が特別
の精製なしで期待され得る。収量は、フコース環上の選
択されたエステル保護基の性質によって必ずしも決定さ
れるものではない。精製は、例えば、シリカゲルなどで
のクロマトグラフィーなどを用いて問題なく行われ得る
。

【００３２】β−Ｌ−フコピラノシルグアノシン５’ー
ピロ燐酸（ＧＤＰ−フコース）（９）の合成：フコース
環上が、エステル基、とくに対応するアセチルまたはベ
ンゾイル誘導体、で保護されたβ−フコピラノシル燐酸
塩は、さらなる合成にとくに適している。燐酸塩保護基
の続いての、好ましくは水素添加分解による、除去にお
いて、これら保護基は保持される。さらなる合成のため
の好ましい基質は、したがって、ジベンジルまたはジフ
ェニル２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｌ−フコ
ピラノシル燐酸塩（５）である。除去、好ましくはジベ
ンジルまたはジフェニル基の除去は、例えばパラジウム
および水素を用いる標準法によって行うことができる。 しかし、例えば白金およびニッケル触媒などの他の触媒
もまた、フコース保護基を加水分解することがなく、こ
のために適している。加水分解はギ酸アンモニウムによ
っても行うことができる。

【００３３】結果として得られる２、３、４−トリ−Ｏ
−アセチル−β−Ｌ−フコピラノシル燐酸塩（６）は、
好ましくは塩として、好ましくはビス−トリエチルアン
モニウム塩として、単離され、任意に既知の方法でクロ
マトグラフィーによって精製される。しかし、単離はま
た、他の塩、たとえばバリウムまたはビスートリ−ｎ−
ブチル−アンモニウム塩としても行い得る。反応の過程
は、便宜上、薄層クロマトグラフィーによってモニター
され得る。次いでフコピラノシル環の三つの保護基、好
ましくはアセチルを、さらなるステップで既知の標準法
で除去して、遊離のβ−Ｌ−フコピラノシル燐酸の対応
する塩（７）を得る。この最後のステップは、一般に定
量的に進行する。本発明の方法の好ましい実施態様にお
いては、このようにして得られるβ−フコピラノシル燐
酸塩は、次いで対応するトリ−ｎ−オクチルアンモニウ
ム塩に変換される。驚いたことに、これは続いての最後
の合成ステップにおいてとくに好ましいことが証明され
、おそらくその好ましい溶解性の性質によるものと思わ
れる。一般式ＮＨ（Ｒ３）＋Ｘ−（式中、Ｒ３は上記に
定義された意味を有し、とくにＲ３は長鎖アルキルであ
る）の他の匹敵するアンモニウム塩もまた、この意味で
とくに適している。最終産物であるＧＤＰ−フコースを
得るための、本発明による合成の好ましく使用されるビ
ス−トリ−ｎ−オクチルアンモニウム−β−Ｌ−フコピ
ラノシル燐酸塩の反応は、グアノシン−１−燐酸を用い
て行われる。ここで、文献に記載されているように、良
好な反応速度を達成するためにはＧＭＰが活性化された
かたちで用いられることが必須である。ＧＭＰ−５’−
ホスホモルホリダートとの縮合は、とくに適しているこ
とが証明された。しかし、既知の方法で活性化されたＧ
ＭＰもまた、例えばＮｕｎｅｚらにおいて記述されてい
るように、用い得る。好ましいプロセスの実施態様にお
いては、４−モルホリノ−Ｎ、Ｎ’−ジシクロヘキシル
カルボクスアミジニウムグアノシン５’−モノホスホロ
モルホリダート（８）が用いられる。Ｌ−ＧＤＰ−フコ
ースのビス−トリ−ｎ−オクチルアンモニウム塩（９）
は、平均収率約７０％で形成される。さらなる精製のた
めに、化合物を、これらの目的により適したビス−トリ
エチルアンモニウム塩に再び変換させる。本発明によれ
ば、次いでＨＰＬＣによる精製を、好ましくは逆相材料
上で行う。さらに、高純度のＧＤＰ−フコースの良好な
最終収量を簡単な方法技術によって達成するためには、
合成最終産物を好ましくは調製用の酸の揮発性緩衝系で
溶出することが重要である。用い得るこのタイプの適当
な溶出液は、とくに炭酸水素トリエチルアンモニウムで
ある。他に、炭酸水素アンモニウムまたはギ酸アンモニ
ウムなども適当である。

【００３４】

【発明の効果】記述された精製方法は、きわめて高純度
のＧＤＰ−フコースをきわめて容易に得ることができる
という長所を有する。従って、経験によって行われ、常
に収量の損失を伴う脱塩を、不要にすることができる。

【００３５】

【実施例】以下の実施例は、本発明をより明確に述べる
ものである。

【００３６】これらの実施例では、以下のクロマトグラ
フィー系を一般に用いる。薄層クロマトグラフィー：　
　ＴＬＣプラスチック膜シリカゲル６０Ｆ２５４（Ｅ．
　Ｍｅｒｃｋ、　Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、　ＦＲＧ）、Ｕ
Ｖ光２５４ｎｍにおいてまたは１０％Ｈ２ＳＯ４で噴霧
して１１０℃に加熱することによって検出。カラムクロ
マトグラフィー：　　シリカゲル６０、粒子サイズ０．
０６３〜０．２００ｎｍ（Ｅ．　Ｍｅｒｃｋ、　Ｄａｒ
ｍｓｔａｄｔ、　ＦＲＧ）。分析用ＨＰＬＣ：　　Ｌｉ
Ｃｈｒｏｓｐｈｅｒ　　ＲＰ−１８、１２５×４ｍｍ、
５μｍ（Ｅ．　Ｍｅｒｃｋ、　Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、　
ＦＲＧ）、緩衝液：０．０５Ｍ炭酸水素トリエチルアン
モニウム（ｐＨ７．１）３．５％アセトニトリル、０．
５ｍｌ／分。Ｒｆ＝３．２４分（ＧＭＰ）、３．８５分
（ＧＤＰ−フコース）、１２．７分（ＧＭＰ−モルホリ
ダート）。調製用ＨＰＬＣ：　　ＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ
　　ＲＰ−１８、２５０×１０ｍｍ、７μｍ（Ｅ．　Ｍ
ｅｒｃｋ、　Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、　ＦＲＧ）緩衝液は
上記。

【００３７】合成される中間／最終産物を、１Ｈ−ＮＭ
Ｒおよび１３Ｃ−ＮＭＲを用いて同定し、それらの純度
を決定した。［例１］２、３、４−トリ−Ｏ−ベンジル
−Ｌ−フコピラノース（例えば、前出のＷｅｇｍａｎｎ
らによって調製）（０．５０ｇ、０．８６ｍｍｏｌ）を
２０ｍｌのドライジクロロメタンおよびさらなる精製処
理をしない市販の燐酸ジベンジル（０．２４ｇ、０．８
６ｍｍｏｌ）に溶解した溶液を、窒素雰囲気下で室温で
約２時間攪拌する。きわめて高純度の燐酸ジベンジルの
場合には、触媒作用量の三フッ化ホウ素を混合物に加え
る。次いで溶液を濃縮して、クロマトグラフィー（トル
エン／アセトン９：１）によって精製する。２、３、４
−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル燐酸ジ
ベンジル（４）が無色のオイルとして収率９０％で得ら
れる（０．５４ｇ）。ＴＬＣ（トルエン／アセトン７：
１）は、０．６０のＲｆ、［α］５７８＝−６８．２（
ｃ＝１、クロロホルム）を示す。［例２］２、３、４−
トリ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−フコピラノース（０．５０ｇ
、０．８６ｍｍｏｌ）を２０ｍｌのドライジクロロメタ
ンおよび新たに再結晶させた燐酸ジベンジル（０．２４
ｇ、０．８６ｍｍｏｌ）に溶解した溶液を、窒素雰囲気
下で室温で約１時間攪拌する。次いで溶液を濃縮して、
クロマトグラフィー（トルエン／アセトン７：１）によ
って精製する。２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル−β−
Ｌ−フコピラノシル燐酸ジベンジル（５）が無色のオイ
ルとして収率９５％で得られる（０．５７ｇ）。ＴＬＣ
（トルエン／アセトン７：１）は、０．４５のＲｆ、［
α］５７８＝−９．７（ｃ＝１、クロロホルム）を示す
。［例３］例えばＮｕｎｅｚら（前出）の方法で調製し
た１、２、３、４−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フ
コピラノース（６．００ｇ、１８ｍｍｏｌ）および酢酸
ヒドラジン（１．９９ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）を２０ｍ
ｌのドライジメチルホルムアミドに溶解した溶液を、５
０℃で約４．５時間攪拌する。酢酸エチルを添加後、混
合物を約２回水性塩化ナトリウム溶液で抽出して、濃縮
した有機抽出物をクロマトグラフする（石油エーテル（
４０〜６０℃）／酢酸エチル１：１）。２、３、４−ト
リ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−フコピラノース（１）がα：β
のアノマー比３：１で収量８０％で得られる。ＴＬＣ分
析（石油エーテル（４０〜６０℃）／酢酸エチル１：１
）は、Ｒｆ＝０．４７を示した。［例４］ａ）　　水素
化ナトリウム（０．２５ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）を、窒
素下で室温で２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル−Ｌ−フ
コピラノース（アノマー混合物）（２．００ｇ、６．８
９ｍｍｏｌ）およびトリクロロアセトニトリル（７．０
ｍｌ、７０ｍｍｏｌ）の２０ｍｌのドライジクロロメタ
ン混合物に加える。混合物を約１２時間攪拌して、次い
で、シリカを通して濾過して、濃縮する。 クロマトグラフ精製（石油エーテル／酢酸エチル３：１
）の後、Ｏ−（２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル−α−
Ｌ−フコピラノシル）トリクロロアセトイミダート（３
）が収量７１％（２．１３ｇ）で得られる。ｂ）　　２
、３、４−トリ−Ｏ−アセチル−Ｌ−フコピラノース（
アノマー混合物）（０．５０ｇ、１．７２ｍｍｏｌ）、
塩化リチウム（７３ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ）、１、８
−ジアゾビシクロ［５．４．０］−ｕｎｄｅｃ−７−エ
ン（０．２０ｍｌ、１．３４ｍｍｏｌ）およびトリクロ
ロアセトニトリル（２．０ｍｌ、２０ｍｍｏｌ）の２０
ｍｌのドライアセトニトリル混合物を窒素下で室温で約
１２時間攪拌する。 クロマトグラフ精製（石油エーテル／ジエチルエーテル
２：５）の後、Ｏ−（２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル
−α−Ｌ−フコピラノシル）トリクロロアセトイミダー
ト（３）およびＯ−（２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル
−β−Ｌ−フコピラノシル）トリクロロアセトイミダー
ト（２）の混合物が収量９２％で得られる（α：β＝６
．５：１）。ｃ）　　２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル
−Ｌ−フコピラノース（アノマー混合物）（０．８５ｇ
、２．９３ｍｍｏｌ）、トリクロロアセトニトリル（３
ｍｌ、３０ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（２．７３ｇ
、１９．７ｍｍｏｌ）のドライジクロロメタン混合物（
１２ｍｌ）を、窒素下で室温で約４時間攪拌する。シリ
カを通して濾過した後に、溶媒を除去する。クロマトグ
ラフ精製（石油エーテル／ジエチルエーテル２：５）の
後、Ｏ−（２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−
フコピラノシル）トリクロロアセトイミダート（３）お
よびＯ−（２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｌ−
フコピラノシル）トリクロロアセトイミダート（２）の
混合物が収量７６％で得られる（α：β＝１：１．３）
。α−アノマー：［α］Ｄ＝−１１６．０（ｃ＝１、ク
ロロホルム）、Ｒｆ＝０．５４（石油エーテル／酢酸エ
チル２：１）、融点１０７〜１０９℃。β−アノマー：
［α］Ｄ＝−２４．５（ｃ＝１、クロロホルム）、Ｒｆ
＝０．３４（石油エーテル／酢酸エチル２：１）、融点
６０〜６３℃。［例５］Ｏ−（２、３、４−トリ−Ｏ−
アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）トリクロロアセト
イミダート（０．２０ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）のドライ
ジクロロメタン溶液（７ｍｌ）およびさらなる精製処理
をしない市販の燐酸ジベンジル（０．１３ｇ、０．４７
ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素下で室温で約２．５時間攪拌
する。きわめて高純度の燐酸ジベンジルの場合には、触
媒作用量の三フッ化ホウ素を混合物に加える。次いで溶
液を濃縮して、クロマトグラフィー（トルエン／アセト
ン７：１）によって精製して、再クロマトグラフ（クロ
ロホルム／ジエチルエーテル２０：０）する。２、３、
４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル燐酸
ジベンジル（４）が無色のオイルとして収率９１％で得
られる（０．２３ｇ）。ＴＬＣ（トルエン／アセトン／
トリエチルアミン８４：１５：１）によって、Ｒｆが０
．３８、［α］Ｄ＝−８３．７（ｃ＝１、クロロホルム
）であることが示される。［例６］Ｏ−（２、３、４−
トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）トリク
ロロアセトイミダート（０．５０ｇ、１．１５ｍｍｏｌ
）のドライジクロロメタン溶液（２５ｍｌ）およびさら
なる精製処理をしない市販のジフェニル燐酸（０．２９
ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素下で室温で約６
．５時間攪拌する。きわめて高純度の燐酸ジベンジルの
場合には、触媒作用量の三フッ化ホウ素を混合物に加え
る。次いで溶液を濃縮して、クロマトグラフィー（石油
エーテル／ジエチルエーテル１：５）によって精製する
。２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラ
ノシル燐酸ジフェニル（４）が無色のオイルとして収率
６３％で得られる（０．３８ｇ）。ＴＬＣ（石油エーテ
ル／ジエチルエーテル１：５）によって、Ｒｆが０．４
１であることが示される。［例７］Ｏ−（２、３、４−
トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）トリク
ロロアセトイミダート（０．３０ｇ、０．６９ｍｍｏｌ
）のドライジクロロメタン溶液（１２ｍｌ）および市販
であるが新たに再結晶させた燐酸ジベンジル（０．１９
ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素下で室温で約１
時間攪拌する。次いで溶液を濃縮して、クロマトグラフ
（トルエン／アセトン７：１）および再クロマトグラフ
（石油エーテル／ジエチルエーテル１：５）する。２、
３、４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｌ−フコピラノシル
燐酸ジベンジル（５）が無色のオイルとして収率８６％
で得られる（０．３６ｇ）。ＴＬＣ（トルエン／アセト
ン７：１）によって、Ｒｆが０．３０、［α］Ｄ＝＋０
．５（ｃ＝１、クロロホルム）であることが示される。 ［例８］２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｌ−フ
コピラノシル燐酸ジベンジル（５）（７２ｍｇ、０．１
３ｍｍｏｌ）およびパラジウム（４ｍｇ）の１０ｍｌの
ドライテトラヒドロフラン／酢酸エチル（１：１）溶液
をＨ２雰囲気下で振盪する。反応の終結をＴＬＣ（Ｒｆ
＝０．１９、クロロホルム／メタノール６０：４０）に
よって決定する。混合物を濾過して、濃縮して、クロマ
トグラフ（クロロホルム／メタノール／トリエチルアミ
ン６０：３９：１）する。ジオキサン中で凍結乾燥した
後、２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｌ−フコピ
ラノシル燐酸ビス−トリエチルアンモニウムを非結晶性
粉末として９０％の収量（６８ｇ）で得る。［例９］０
．５ｍｌのトリエチルアミンを２、３、４−トリ−Ｏ−
アセチル−β−Ｌ−フコピラノシル燐酸ビス−トリエチ
ルアンモニウム（８０．０ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）
の３ｍｌメタノール／水混合溶液に加える。１８時間後
、混合物を濃縮して、水から凍結乾燥する。β−Ｌ−フ
コピラノシル燐酸塩ビス−トリエチルアンモニウム（７
）が吸湿性白色粉末として１００％の収量（７３．８ｇ
）で得られ、さらなる精製は行われない。［例１０］ト
リ−ｎ−オクチルアミン（０．１１７ｍｌ、０．１３５
ｍｍｏｌ）をβ−Ｌ−フコピラノシル燐酸ビス−トリエ
チルアンモニウム（７３．８ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ
）のドライピリジン溶液（５ｍｌ）に加える。混合物を
濃縮して、得られるトリ−ｎ−オクチルアンモニウム塩
をピリジンを用いて１０−２トルの圧力で反復蒸発によ
って乾燥する。ドライピリジン／ミメチルホフムアミド
（１：１）中の４−モルホリノ−Ｎ、Ｎ’−ジシクロヘ
キシルカルボクサミジニウムグアノシン５’−モノホス
ホロモルホリダート（８）（１０９ｍｇ、０．１５ｍｍ
ｏｌ）を加えた後、反応を分析用ＨＰＬＣを用いてモニ
ターする。約５日後、混合物を乾燥するまで濃縮する。 残滓を炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液（ｐＨ７
．４、０．０５Ｍ）に加えて、トリ−ｎ−オクチルアミ
ンをエーエルで抽出除去して、最後に混合物を調製用Ｈ
ＰＬＣ（ｔＲ＝９．４分）を用いて精製して、溶出液と
して用いた緩衝液を蒸発させる。きわめて高純度の（β
−Ｌ−フコピラノシル）グアノシン５’−ピロ燐酸ビス
−トリエチルアンモニウム（９）が比結晶性粉末として
２５％の収量（２３．３ｇ）で得られる。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、対応して保護されたα−およびβ−フ
コピラノシル燐酸塩を各々のα−トリクロロアセトイミ
ダートを介して得るための、三基置換Ｌ−フコースの反
応の合成模式図を示す。図中、１は三基置換のＬ−フコ
ース、２は保護されたＬ−フコースのβ−トリクロロア
セトイミダート燐酸塩、３はＬ−フコースのα−トリク
ロロアセトイミダート、４は２、３、４−保護α−Ｌ−
フコピラノシル燐酸塩、５は２、３、４−保護β−Ｌ−
フコピラノシル燐酸塩で、ここで記号はそれぞれの場合
、Ｒ’＝Ｒ１ＣＯ−、Ｒ１、Ｒ２＝アルキル（Ｃ１−Ｃ
４）、ベンジル、フェニル、Ｒ＝Ｒ１である。

【図２】図２は、ＧＤＰ−フコースを得るためβ−Ｌ−
フコピラノシル燐酸塩の反応の合成模式図を示す。図中
、５は２、３、４−保護β−Ｌ−フコピラノシル燐酸塩
で、６は２、３、４−保護β−Ｌ−フコピラノシル燐酸
の塩、７は非保護β−Ｌ−フコピラノシル燐酸の塩、８
は（活性化された）ＧＭＰモルホリダートの塩、９はＧ
ＤＰ−フコース（塩）、ここで記号はそれぞれの場合、
Ｒ’＝Ｒ１ＣＯ−、Ｒ１＝アルキル（Ｃ１−Ｃ４）、ベ
ンジル、フェニル、Ｒ＝Ｒ１、Ｋ＝好ましくは有機陽イ
オンである。

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　２、３、４位置が保護されたＬ−フコ
   ースを、対応する０−（α−Ｌ−フコピラノシル）トリ
   クロロアセトイミダートに変換させて、これを一般式Ｐ
   Ｏ（ＯＨ）（ＯＲ）２（式中、ＲはＣ１−Ｃ４−アルキ
   ル、フェニルまたはベンジル）の全く酸を含まない有機
   燐酸塩と反応させて、燐酸基のＲ基およびフコピラノシ
   ル環上の保護基を除去して、β−Ｌ−フコピラノシル燐
   酸を塩として単離することを特徴とする、β−Ｌ−フコ
   ピラノシル燐酸塩の立体選択的調製法。
2. 【請求項２】　　アセチルまたはベンジルを保護基とし
   て用いることを特徴とする、請求項１に記載の調製法。
3. 【請求項３】　　保護されたＬ−フコースを選択的に水
   素化ナトリウムと反応させ、対応するα−トリクロロア
   セトイミダートを得ることを特徴とする、請求項１また
   は２に記載の調製法。
4. 【請求項４】　　２、３、４−トリ−Ｏ−アセチル−Ｌ
   −フコースをワンステップ反応においてテトラ−アセチ
   ル化Ｌ−フコースから調製することを特徴とする、請求
   項１〜３のいずれか１項に記載の調製法。
5. 【請求項５】　　テトラ−Ｏ−アセチル−Ｌ−フコース
   のアニマー性アセチル基を酢酸ヒドラジンを用いて除去
   することを特徴とする、請求項４に記載の調製法。
6. 【請求項６】　　β−Ｌ−フコピラノシル燐酸を易溶性
   塩に変換して、これを活性化したグアノシン−１−燐酸
   （ＧＭＰ）と反応させて、形成されたグアノシン二燐酸
   フコース（ＧＤＰ−フコース）を揮発性緩衝系を溶出液
   として用いる調製用ＨＰＬＣによって精製することを特
   徴とする、きわめて高純度のＧＤＰ−フコースの立体選
   択的調製法。
7. 【請求項７】　　β−Ｌ−フコピラノシル燐酸をトリ−
   ｎ−オクチルアンモニウム塩へ変換させることを特徴と
   する、請求項６に記載の調製法。
8. 【請求項８】　　ＧＭＰ−モルホリダートを活性化した
   ＧＭＰとして用いることを特徴とする、請求項６または
   ７に記載の調製法。
9. 【請求項９】　　炭酸水素トリエチルアンモニウムを調
   製的精製のための溶出液として用いることを特徴とする
   、請求項６〜８のいずれか１項に記載の調製法。
10. 【請求項１０】　　用いるβ−Ｌ−フコピラノシル燐酸
    を請求項１〜５のいずれか１項に記載の調製法により調
    製することを特徴とする、請求項６〜９のいずれか１項
    に記載のＧＤＰ−フコースの調製法。