JPH04320681A - 動物細胞の培養方法 - Google Patents
動物細胞の培養方法Info
- Publication number
- JPH04320681A JPH04320681A JP3088283A JP8828391A JPH04320681A JP H04320681 A JPH04320681 A JP H04320681A JP 3088283 A JP3088283 A JP 3088283A JP 8828391 A JP8828391 A JP 8828391A JP H04320681 A JPH04320681 A JP H04320681A
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- JP
- Japan
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- cells
- culture
- ascorbic acid
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- Pending
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、接着依存性動物細胞の
培養方法に関する。
培養方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】二倍体細胞、腫瘍細胞や遺伝子組み換え
動物細胞を用いて有用物質が産生されている。培養方法
としてルー瓶もしくはローラー瓶を用いる方法が知られ
ているが、この方法では大量培養することは極めて困難
と考えられている。すなわち、この方法では、細胞はル
ー瓶の底面もしくはローラー瓶の内側面に単層に増殖す
るだけであるため、大量培養には多量の瓶を必要とし適
さない。また、ｐＨや培地中の溶存酸素濃度等を一定に
制御することはほとんど不可能である。そのため大量で
かつ培養条件を一定に制御することが可能となる方法が
開発されている。接着依存性動物細胞をマイクロキャリ
ヤーもしくは中空糸に接着培養、あるいはマイクロカプ
セルに固定化培養する方法等がある。これらの方法は、
スケールアップする場合増殖速度が低下し種細胞数が不
足するため本培養の到達細胞数が低下することがしばし
ば生じる。
動物細胞を用いて有用物質が産生されている。培養方法
としてルー瓶もしくはローラー瓶を用いる方法が知られ
ているが、この方法では大量培養することは極めて困難
と考えられている。すなわち、この方法では、細胞はル
ー瓶の底面もしくはローラー瓶の内側面に単層に増殖す
るだけであるため、大量培養には多量の瓶を必要とし適
さない。また、ｐＨや培地中の溶存酸素濃度等を一定に
制御することはほとんど不可能である。そのため大量で
かつ培養条件を一定に制御することが可能となる方法が
開発されている。接着依存性動物細胞をマイクロキャリ
ヤーもしくは中空糸に接着培養、あるいはマイクロカプ
セルに固定化培養する方法等がある。これらの方法は、
スケールアップする場合増殖速度が低下し種細胞数が不
足するため本培養の到達細胞数が低下することがしばし
ば生じる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、動物
細胞を大量培養する場合、増殖促進と到達細胞数の向上
を図ることにより、培養系を安定させひいては有用物質
の産生を向上させる培養法を提供することにある。
細胞を大量培養する場合、増殖促進と到達細胞数の向上
を図ることにより、培養系を安定させひいては有用物質
の産生を向上させる培養法を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】上記目的は、以下の本発
明により達成される。すなわち本発明は、接着依存性動
物細胞を、マイクロキャリヤーもしくは中空糸に接着培
養、あるいはマイクロカプセルに固定化培養する際に、
アスコルビン酸またはその誘導体を添加することを特徴
とする動物細胞の培養方法である。接着依存性細胞とは
ヒトあるいは動物由来の線維芽細胞、血管内皮細胞、上
皮細胞および各種ガン細胞をさす。また、接着依存性細
胞の遺伝子組み換え体も含まれる。これらのなかで特に
線維芽細胞が好ましい。
明により達成される。すなわち本発明は、接着依存性動
物細胞を、マイクロキャリヤーもしくは中空糸に接着培
養、あるいはマイクロカプセルに固定化培養する際に、
アスコルビン酸またはその誘導体を添加することを特徴
とする動物細胞の培養方法である。接着依存性細胞とは
ヒトあるいは動物由来の線維芽細胞、血管内皮細胞、上
皮細胞および各種ガン細胞をさす。また、接着依存性細
胞の遺伝子組み換え体も含まれる。これらのなかで特に
線維芽細胞が好ましい。
【０００５】本発明で使用するマイクロキャリアーは、
マトリックス素材はコラーゲン、ゼラチン、セルロース
、架橋デキストラン、ポリスチレンのような合成樹脂か
らなり、荷電基としてジメチルアミノプロピル、ジメチ
ルアミノエチル、トリメチルハイドロキシアミノプロピ
ル、負荷電が付加されているものが好ましい。また、マ
トリックス素材をコラーゲンやゼラチンでコートしたも
のも使用される。市販品として、架橋デキストランにジ
メチルアミノエチルを付加した“Ｃｙｔｏｄｅｘ−１”
（ファルマシア社）、架橋デキストランに変性コラーゲ
ンをコートした“Ｃｙｔｏｄｅｘ−３”（ファルマシア
社）がある。中空糸としては、修飾セルロースを使用し
た物がある。市販品は、“Ｖｉｔａｆｉｂｅｒ”（アミ
コン社）がある。マイクロカプセルは、水透過性のある
ゲルを形成するコラーゲンやアルギン酸ソーダを用いて
、内部に細胞を包埋して作成する（Ａ．Ｋｌａｕｓｎｅ
ｒ，Ｂｉｏ／ｔｅｃｈｎｏｌ．，１，７３６（１９８３
）。
マトリックス素材はコラーゲン、ゼラチン、セルロース
、架橋デキストラン、ポリスチレンのような合成樹脂か
らなり、荷電基としてジメチルアミノプロピル、ジメチ
ルアミノエチル、トリメチルハイドロキシアミノプロピ
ル、負荷電が付加されているものが好ましい。また、マ
トリックス素材をコラーゲンやゼラチンでコートしたも
のも使用される。市販品として、架橋デキストランにジ
メチルアミノエチルを付加した“Ｃｙｔｏｄｅｘ−１”
（ファルマシア社）、架橋デキストランに変性コラーゲ
ンをコートした“Ｃｙｔｏｄｅｘ−３”（ファルマシア
社）がある。中空糸としては、修飾セルロースを使用し
た物がある。市販品は、“Ｖｉｔａｆｉｂｅｒ”（アミ
コン社）がある。マイクロカプセルは、水透過性のある
ゲルを形成するコラーゲンやアルギン酸ソーダを用いて
、内部に細胞を包埋して作成する（Ａ．Ｋｌａｕｓｎｅ
ｒ，Ｂｉｏ／ｔｅｃｈｎｏｌ．，１，７３６（１９８３
）。
【０００６】接着依存性動物細胞を培養するには、種細
胞を、マイクロキャリアービーズや中空糸に接種し、ま
たはマイクロカプセル固定化細胞を作成し培養する。培
地組成、血清濃度等は、培養すべき細胞の種類、細胞濃
度等に応じて適当に選ばれる。調製した培地にアスコル
ビン酸もしくはアスコルビン酸誘導体を添加する。本発
明で用いる培地は、通常のものが使用できる。細胞に適
した培地を、適当に選択することが好ましい。培養中、
アスコルビン酸もしくはアスコルビン酸誘導体を含む培
地で適宜交換を行い、数日間〜２０日間培養する。細胞
がコンフルエントになるまで培養を続ける。アスコルビ
ン酸は、中性溶液中、３７℃、酸素条件下ではすみやか
に酸化分解される。したがって、アスコルビン酸を培養
に用いる場合は、毎日添加するなど頻回添加が好ましい
。培養に用いるアスコルビン酸としは、培養条件下で安
定かつアスコルビン酸作用をもつ誘導体が好ましい。 たとえば、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルや（畑ら
、１９８８ 第３５回コラーゲン研究会抄録 ｐ８
５〜８９）、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドが挙げられ
る。添加する濃度は、アスコルビン酸、もしくはその誘
導体を０．０５〜１０ｍＭの範囲で使用する。好ましく
は、０．５〜３ｍＭで使用する。それぞれの誘導体につ
いては、培養に適した濃度を適宜選択することが好まし
い。
胞を、マイクロキャリアービーズや中空糸に接種し、ま
たはマイクロカプセル固定化細胞を作成し培養する。培
地組成、血清濃度等は、培養すべき細胞の種類、細胞濃
度等に応じて適当に選ばれる。調製した培地にアスコル
ビン酸もしくはアスコルビン酸誘導体を添加する。本発
明で用いる培地は、通常のものが使用できる。細胞に適
した培地を、適当に選択することが好ましい。培養中、
アスコルビン酸もしくはアスコルビン酸誘導体を含む培
地で適宜交換を行い、数日間〜２０日間培養する。細胞
がコンフルエントになるまで培養を続ける。アスコルビ
ン酸は、中性溶液中、３７℃、酸素条件下ではすみやか
に酸化分解される。したがって、アスコルビン酸を培養
に用いる場合は、毎日添加するなど頻回添加が好ましい
。培養に用いるアスコルビン酸としは、培養条件下で安
定かつアスコルビン酸作用をもつ誘導体が好ましい。 たとえば、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルや（畑ら
、１９８８ 第３５回コラーゲン研究会抄録 ｐ８
５〜８９）、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドが挙げられ
る。添加する濃度は、アスコルビン酸、もしくはその誘
導体を０．０５〜１０ｍＭの範囲で使用する。好ましく
は、０．５〜３ｍＭで使用する。それぞれの誘導体につ
いては、培養に適した濃度を適宜選択することが好まし
い。
【０００７】
【実施例】以下実施例を挙げて本発明を具体的に説明す
るが、これらにより本発明が限定されるものではない。 実施例１ 胎児牛血清５％、ジエチルアミノエチル基を有する架橋
デキストランマイクロキャリア（“Ｃｙｔｏｄｅｘ−１
”（ファルマシア社））５ｇ／Ｌを含むイーグルＭＥＭ
系培地 ２Ｌにアスコルビン酸リン酸エステル０．５
ｍＭを添加、または無添加とし、ヒト線維芽細胞を約３
×１０５ 個／ｍｌの割合で接種したスピナーフラスコ
でゆるく撹拌しながら、３７℃、ｐＨ７．２、２０％飽
和酸素濃度で６日間培養した。途中、１日目、３日目、
５日目に培地交換を行った。到達細胞数は、無添加の場
合３．２×１０６ 個／ｍｌ、０．５ｍＭ添加の場合３
．９×１０６ 個／ｍｌであった。
るが、これらにより本発明が限定されるものではない。 実施例１ 胎児牛血清５％、ジエチルアミノエチル基を有する架橋
デキストランマイクロキャリア（“Ｃｙｔｏｄｅｘ−１
”（ファルマシア社））５ｇ／Ｌを含むイーグルＭＥＭ
系培地 ２Ｌにアスコルビン酸リン酸エステル０．５
ｍＭを添加、または無添加とし、ヒト線維芽細胞を約３
×１０５ 個／ｍｌの割合で接種したスピナーフラスコ
でゆるく撹拌しながら、３７℃、ｐＨ７．２、２０％飽
和酸素濃度で６日間培養した。途中、１日目、３日目、
５日目に培地交換を行った。到達細胞数は、無添加の場
合３．２×１０６ 個／ｍｌ、０．５ｍＭ添加の場合３
．９×１０６ 個／ｍｌであった。
【０００８】
【発明の効果】本発明によれば、マイクロキャリヤー、
中空糸やマイクロカプセルを用いた接着依存性動物細胞
培養において、細胞増殖を促進させ、到達細胞数を上げ
ることができる。したがって、工業生産規模にスケール
アップする際の培養系の安定化を図る事ができ、ひいて
は有用物質の産生を向上させることができる。
中空糸やマイクロカプセルを用いた接着依存性動物細胞
培養において、細胞増殖を促進させ、到達細胞数を上げ
ることができる。したがって、工業生産規模にスケール
アップする際の培養系の安定化を図る事ができ、ひいて
は有用物質の産生を向上させることができる。
Claims (1)
- 【請求項１】 接着依存性動物細胞を、マイクロキャ
リヤーもしくは中空糸で接着培養、あるいはマイクロカ
プセルで固定化培養する際に、アスコルビン酸またはそ
の誘導体を添加し培養することを特徴とする動物細胞の
培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3088283A JPH04320681A (ja) | 1991-04-19 | 1991-04-19 | 動物細胞の培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3088283A JPH04320681A (ja) | 1991-04-19 | 1991-04-19 | 動物細胞の培養方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04320681A true JPH04320681A (ja) | 1992-11-11 |
Family
ID=13938579
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3088283A Pending JPH04320681A (ja) | 1991-04-19 | 1991-04-19 | 動物細胞の培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04320681A (ja) |
-
1991
- 1991-04-19 JP JP3088283A patent/JPH04320681A/ja active Pending
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