JPH04334307A - グラム陽性バクテリアに対する選択された添加剤の組合せにおけるランチバイオチツクとの相乗効果 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明はグラム陽性バクテリアの生長を禁
止する方法に関する。

【０００２】ニシン（Ｎｉｓｉｎ）、即ちランチオニン
・バクテリオシン（ｌａｎｔｈｉｏｎｉｎｅ　ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｃｉｎ）として公知の抗微生物剤群の１員は、
あるラクトコックス・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ　ｌａｃｔｉｓ）［公式にはストレプトコックス・ラ
クチス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ）］
種の産生する抗微生物剤ポリペプチドである。これは上
述のバクテリアの純粋培養発酵、続く精製及び乾燥によ
り製造される。Ｍ．ドイル（Ｄｏｙｌｅ）は、フッド・
テクノル（Ｆｏｏｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌ．）４２（４）、
１６９〜１７１（１９８８）において、Ｌ．モノサイト
ゲネス（ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）の生長及び生存
に対するニシンの禁止作用を記述している。

【０００３】「ランチバイオチクス（ｌａｎｔｉｂｉｏ
ｔｉｃｓ）」という術語は、アミノ酸ランチオニン及び
他の「非蛋白質」アミノ酸を含むニシンを包含するバク
テリオシン群を記述するためのシュネル（Ｓｃｈｎｅｌ
ｌ）ら［ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）３３３、２７６〜
２７８（１９８８）］による造語である。この種のバク
テリオシンは、スブチリン（ｓｕｂｔｉｌｉｎ）、ペプ
（ｐｅｐ）５、エピデルミン（ｅｐｉｄｅｒｍｉｎ）、
ガリデルミン（ｇａｌｌｉｄｅｒｍｉｎ）、シンナマイ
シン、ロ（Ｒｏ）０９−０１９８、デュラマイシン（ｄ
ｕｒａｍｙｃｉｎ）及びアンコベニン（ａｎｃｏｖｅｎ
ｉｎ）を含む。これらのリボソーム的に合成されるペプ
チドのバクテリオシンは、１９〜３４のアミノ酸を含み
、スタフィロコックス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
）種、バチルス（Ｂａｃｉｌｕｓ）種、ストレプトマイ
セス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）種を含む種々の微生
物によって産生される。

【０００４】ニシンの抗微生物活性を高めるための他の
物質との組合せは報告されている。即ち国際特許願ＷＯ
第８９／１２３９９号は、グラム陽性及びグラム陰性バ
クテリアに対して使用するためのニシンのキレート剤及
び／又は表面活性剤との組合せ物を開示している。

【０００５】キャンプデン・フーズ・ドリンク・リサー
チ・アソシェーション（Ｃａｍｐｄｅｎ　Ｆｏｏｄｓ　
Ｄｒｉｎｋ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏ
ｎ）の技術メモ５２０号（１９８９年３月）は、ニシン
の、バチルス種の胞子の生長に対するクエン酸及び酢酸
との組合せにおける効果の向上並びにクエン酸及び乳酸
の存在下における拮抗作用を報告している。

【０００６】ミコライチク（Ｍｉｋｏｌａｊｃｉｋ）ら
は、Ｊ．デイリー・サイ（Ｄａｉｒｙ　Ｓｃｉ．）４８
、１５２２〜１５２４において、バチルス種の胞子の発
芽誘発剤として認識されているＬ−アラニンアミノ酸の
存在下に、ニシンがバチルス種胞子に対する殺胞子剤と
して有効なことを開示している。この性質は胞子をニシ
ンに対してより敏感にするために使用された。

【０００７】シエヘタ（Ｓｈｅｈｅｔａ）は、エイン・
シャムズ（ＡｉｎＳｈａｍｓ）大学の農学部研究報０：
１５５４においてニシン、ソルベート及び安息香酸ナト
リウムの、抗微生物剤としての使用を報告している。

【０００８】ヨーロッパ特許願第３８４，３１９号はニ
シンの、Ｌ．モノサイトゲネスに対するキレート剤との
相乗作用を開示している。この参考文献はある種のアミ
ノ酸及びモノカルボン酸のニシンとの組合せにおける使
用を開示している。

【０００９】本発明は、グラム陽性バクテリアの、生育
が望ましくない環境でその生長を禁止する際に、ランチ
オニン・バクテリオシン及びこれに対する相乗作用剤の
相乗的に有効な組合せ物を該環境に施用することを含ん
でなる、但し該相乗作用剤がアミノ酸、炭素数１〜８の
脂肪族モノ及びジカルボン酸或いはその適当なアルカリ
金属又はアルカリ土類金属塩、フェノール系抗酸化剤抗
微生物剤、安息香酸或いはその適当なアルカリ金属又は
アルカリ土類金属塩、及びカルボキシレート又は改変カ
ルボキシレート食品ゴムの群から選択される、該バクテ
リアの生長を禁止する方法を含む。

【００１０】本発明は、ランチオニン・バクテリオシン
がある添加剤との組合せにおいて、各物質それ自体より
も大きい程度まで望ましくないグラム陽性バクテリアの
生長を禁止する組成物を提供すること、及びこれらの物
質の組合さった効果がランチバイオチック又は他の組成
物それぞれを用いる場合に観察される添加剤の効果より
も大きいという観察に関する。

【００１１】ランチバイオチクスと相乗作用的に作用す
る種々の種類の組成物は同定されてきた。これらの中に
はアミノ酸、特にグリシン、アスパルチン酸、ロイシン
及びリシンの群から選択されるアミノ酸がある。これら
のアミノ酸のランチバイオチクスとの相乗効果は従来の
技術が暗示するように胞子の生長の誘導期に依存しない
。その理由はこの相乗作用が胞子を形成しない微生物Ｌ
．モノサイトゲネスで示されたからである。

【００１２】ランチバイオチックとの組合せにおいて相
乗作用的に抗微生物活性を示すことがわかった他の種類
の試剤は炭素数３〜８の脂肪族モノ及びジカルボン酸で
ある。これらの酸は乳酸、プロピオン酸、アスコルビン
酸、イソアスコルビン酸、酢酸、リンゴ酸、酒石酸、コ
ハク酸、マレイン酸、シュウ酸、及びギ酸を含む。適当
な塩例えばアルカリ及びアルカリ土類金属塩例えばナト
リウム、カリウム及びカルシウムが使用できる。

【００１３】ランチバイオチクスとの組合せにおいて相
乗作用的に抗微生物活性を示すフェノール系抗酸化剤抗
微生物剤はｔｅｒｔ−ブチルヒドロキシアニソール（Ｂ
ＨＡ）、ｐ−ヒドロキシ安息香酸の炭素数１〜７の脂肪
族エステル、特にメチルパラベンとして知られるメチル
エステル、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロキシキノン（ＴＢＨ
Ｑ）及びブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）を含む
。更に安息香酸及びその適当な塩、特にナトリウム塩は
所望の相乗効果を示す。

【００１４】他の種類の相乗作用剤は、炭水化物又は改
変炭水化物食品ゴムを含む。この種類の組成物は、水溶
性の炭水化物重合体及びしばしば正又は負に荷電した側
鎖を含む炭水化物重合体の誘導体であることが特色であ
る。これらの種類の物質には、例えばアルギン酸塩、グ
アゴム、アラビヤゴム、キサンタンゴム、キトサン及び
誘導化された炭水化物重合体例えばプロピレングリコー
ルアルギネート、メチルセルロース及びカルボキシメチ
ルセルロースが含まれる。

【００１５】ランチバイオチクス例えばニシンの作用機
構は解明されていないが、多くの研究者はこれらのペプ
チドの致命性を、敏感な有機体の細胞膜における不可逆
的な変化と関連づけている。いくつかの有機体のニシン
に対する耐性は、物理的な排除或いは適当な受容体分子
の欠如が故にペプチドがその作用部位へ接近できないた
めであると考えられている。本発明のランチバイオチク
ス相乗作用剤は、作用機構を理解することができないけ
れど、この目標の微生物への接近禁止を軽減するように
見える。本発明は、従ってランチバイオチックとある種
の相乗作用剤が組合わさってそれら自体よりも大きい程
度で望ましくないグラム陽性バクテリアの生長を禁止し
、またこれらの物質の一緒になった禁止効果がランチバ
イオチック又は相乗作用剤単独を用いて観察される相加
効果よりも大きいという発見に基づいて予測される。

【００１６】ニシン又は他のランチバイオチックを抗微
生物剤として使用する場合、最大の効果を達成するため
には処置すべき物質ｇ当り２００〜３００国際単位（Ｉ
Ｕ）の使用量が普通推奨される。ランチバイオチクス（
例えばニシン）及び補助成分が相乗作用的にグラム陽性
バクテリアの生長を禁止するという発見は、それらを単
独で使用する時よりも大きい効果と経済性をもってラン
チバイオチック・バクテリオシンを容易に使用せしめう
る。典型的な例において、ランチバイオチック例えばニ
シン及び相乗作用剤を用いて望ましくないグラム陽性バ
クテリアを多数減じ又は排除するためには、ニシンの全
量が好ましくは約０．１　ＩＵ／処置すべき物質ｇ（又
は液体系ではＩＵ／ｍｌ単位）から２０００　ＩＵ／ｇ
又はＩＵ／ｍｌまでの範囲にあるであろう。多くの用途
の場合、５０〜５００　ＩＵ／ｇのニシン濃度は、それ
が相乗作用剤により高揚されるために十分である。本明
細書で使用する如きＩＵとは、トレイマー（Ｔｒａｍｅ
ｒ）及びフォーラー（Ｆｏｗｌｅｒ）、Ｊ．サイ・フー
ド・アンド・アグリク（Ｓｃｉ．Ｆｏｏｄ　＆　Ａｇｒ
ｉｃ．）１５（８）、５２２（１９６４）の方法で決定
される如き国際単位を意味する。使用すべき相乗作用剤
の量は用いる特別な組成物に依存しよう。一般に重量％
で表わした相乗作用剤の量は表Ａに示す範囲内であろう
。

【００１７】

【表１】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　表　　Ａ　　　　　　相乗作用剤の種
類　　　　　　　　　　推奨使用範囲　　　　　　　　
　好適使用範囲　　　アミノ酸　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　０．００１％　　−　　５％　
　　　　　　　０．０３％　　−　０．１％　　脂肪族
モノ及びジカルボン酸　　　　０．００１％　　−　２
５％　　　　　　　　０．０１％　　−　１％　　フェ
ノール系抗酸化剤　　　　　　　　　　０．０００１％
　−　　２％　　　　　　　　０．００５％　−　０．
０２％　　安息香酸、塩及びエステル　　　　　　０．
０００１％　−　　２％　　　　　　　　０．０３％　
　−　０．１％　　炭水化物食品ゴム　　　　　　　　
　　　　　　０．００１％　　−　５０％　　　　　　
　　０．０２％　　−　２．５％ 従ってニシン以外のランチオニン・バクテリオシン及び
相乗作用剤は、最適な相乗作用に対して特別なランチバ
イオチックの濃度を決定するためにある日常的実験が必
要ではあるけれど、上記濃度において有効であると予想
できる。

【００１８】目標の物質の表面処理は、処置すべき物質
をランチオニン／相乗作用剤の溶液中に吊すことによっ
て達成できる。他に物質を溶液に浸してもよく、または
溶液を物質の表面上に噴霧してもよい。ランチオニン／
相乗作用剤の組合せ物をフイルム又はゲル中に混入し、
これを基材の表面に適用することもでき、或いは組合せ
物を例えばチーズの製造に使用するミルクに添加する如
くして処置する環境に直接混入することもできる。浸漬
、フィルム、ゲル又はケーシングの如きコーティングに
よる施用の場合、ランチバイオチックと相乗作用剤の最
初の濃度は、施用及び拡散後に所望の範囲内の残留量の
ランチバイオチック／相乗作用剤を含む最終製品を与え
るようにその溶解限界に近くてよい。基材表面の処理に
は、最も効果的な濃度を確かめるために予備実験が必要
である。

【００１９】本発明の組成物で処置しうる環境は、肉及
び肉製品例えば鶏肉、七面鳥の肉、ハム、ビーフ、サラ
ミ、ソーセージ及びくん製肉製品；マヨネーズ；酪農製
品例えばチーズ、ミルク、ヨーグルト；油、魚及び魚製
品；天然ジュースを含むソフトドリンク；動物の飼料並
びに他の高蛋白質製品のような物質を含むが、これに限
定されるものではない。本発明の組成物は食品に用いる
以外の非食品用例えば口洗浄剤、歯みがき、軟こう、ク
リーム及びシャンプーにも使用できる。

【００２０】問題のグラム陽性バクテリアの中で、Ｌ．
モノサイトゲネスは冷蔵温度で生長することができ且つ
口にした時に重大な結果をもたらす病原性をもつが故に
特別な微生物である。即ちＬ．モノサイトゲネスは近年
特にミルク、コールスロー及び軟い熟成チーズと関連す
るリステロシス（ｌｉｓｔｅｒｏｓｉｓ）の大発生によ
るいくつかの災害に関係があった。生長が本発明の相乗
作用的組合せ物によって禁止できる他の望ましくないグ
ラム陽性バクテリアは、例えばクロストリジア（Ｃｌｏ
ｓｔｒｉｄｉａ）、例えばＣ．ボツリナム（ｂｏｔｕｌ
ｉｎｕｍ）及びＣ．ペルフリゲンス（ｐｅｒｆｒｉｇｅ
ｎｓ）；バチリ（Ｂａｃｉｌｌｉ）、例えばＢ．セレウ
ス（ｃｅｒｅｕｓ）及びＢ．スブチリス（ｓｕｂｔｉｌ
ｉｓ）；ラクトコックス・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ　ｌａｃｔｉｓ）、亜種クレモシス（ｃｒｅｍｏ
ｓｉｓ）、並びにストレプトコックス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ）、スタフイロコックス（Ｓｔａｐｈｙｌ
ｏｃｏｃｃｕｓ）、ペデイオコックス（Ｐｅｄｉｏｃｏ
ｃｃｕｓ）、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）及びミク
ロコックス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）の微生物を含む
。

【００２１】次の実施例は本発明を更に説明する。実施
例中ニシンの国際単位をニシンＵとして表わす。これら
の研究に対するニシンは、ニシン約１×１０６Ｕ／ｍｌ
を含むニサプリン（ＮｉｓａｐｌｉｎＲ）［アプリン・
アンド・バーレット（Ａｐｌｉｎ　＆　Ｂａｒｒｅｔｔ
）、ＮａＣｌ７５重量％及びミルク固体２２．５重量％
から、透析及び限外濾過により調製され、本質的に塩を
含まない調製物とした。

【００２２】

【実施例】

実施例Ｉ ニシン及びグリシンの、Ｌ．モノサイトゲネス・スコッ
ト（Ｓｃｏｔｔ）Ａに対する殺バクテリア活性を、１０
ｍＭクエン酸塩緩衝液（ＣＡＢ）中においてｐＨ３．５
、４．５及び５．５で評価した。ニシンを０．２及び２
　ＩＵ／ｍｌで試験し、一方グリシンの濃度は６．４、
１６、４０、１００及び２５０ｍＭであった。対照例は
ＣＡＢ中で行った。すべての原溶液、培養稀釈液及び処
理液は評価ｐＨ下のＣＡＢ中で準備した。処理液は１ｍ
ｌのミクロ試験管中において０．９ｍｌ量で調製し、処
置を約１×１０７ＣＦＵ／ｍｌのＬ．モノサイトゲネス
・スコットＡ０．１ｍｌの添加によって開始した。３７
℃で６０分間処置した後、試験試料を、ミクロ力価プレ
ートにより燐酸塩緩衝食塩水（０．０１Ｍ、ｐＨ７．０
）中で連続的に希釈した。生存しているバクテリアを、
トリプチック・ソイ・アガー（ｔｒｙｐｔｉｃ　ｓｏｙ
　ａｇａｒ）を広げたプレートを用い且つこれを接種後
３７℃で４８時間培養することにより数えた。試験化合
物及びニシンの組合せ効果が個々の化合物の相加的ｌｏ
ｇ１０減少の効果よりも大きい時相乗効果は顕著であっ
た。次の計算式を用いた：Ｔ＝試験化合物 Ｎ＝ニシン Ｔ＋Ｎ＝組合せ物 ｌｏｇ１０減少Ｔ＋Ｎ＞（ｌｏｇ１０減少Ｔ＋ｌｏｇ１
０減少Ｎ）＝相乗作用。

【００２３】結果を表１（アスパラギン酸）及び２に示
す。ここに相乗作用的組合せ物は、組合せ物の殺バクテ
リア効果が相加的ｌｏｇ減少だけのものより大きいとい
う観察を示すために「＋」で表示する。

【００２４】上記計算のために、いずれか負のｌｏｇ減
少は０であると推定した。以上（＞）又は以下（＜）で
報告される推定は、系の検出限界を越えたものであり、
明らかな場合、例えば起こった最小効果が相乗作用的で
ある場合を除いて相乗作用の計算に対して使用しなかっ
た。

【００２５】

【表２】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　表　　１ニシンのアスパラギン酸（ＡＳ
Ｐ）との組合せにおいてのＬ．モノサイトゲネスに対す
る活性 　　　　　　　　　　処置 　　　　ニシンＵ／ｍｌ／ＡＳＰｍＭ　　　　ｌｏｇ１
０ＣＦＵ／ｍｌ　　　　ｌｏｇ１０減少　　　　相乗作
用／以上％　　　　　　　ｐＨ　３．５ 　　　　　　　０／０　　　　　　　　　　　　　　　
　６．２６　　　　　　　　　　　−−　　　　　　　
０／０．００９６　　　　　　　　　　　６．１１　　
　　　　　　　　　０．１５　　　　　　　０／０．０
２４　　　　　　　　　　　　６．２０　　　　　　　
　　　　０．０６　　　　　　　０／０．０６　　　　
　　　　　　　　　６．３０　　　　　　　　　　−０
．０４　　　　　　　０／０．１５　　　　　　　　　
　　　　６．２０　　　　　　　　　　　０．０６　　
　　　　　０／０．３７５　　　　　　　　　　　　６
．２０　　　　　　　　　　　０．０６　　　　　　　
０．２／０　　　　　　　　　　　　　　６．１５　　
　　　　　　　　　０．１１　　　　　　　０．２／０
．００９６　　　　　　　　　６．０４　　　　　　　
　　　　０．２２　　　　　　　０．２／０．０２４　
　　　　　　　　　６．１５　　　　　　　　　　　０
．１１　　　　　　　０．２／０．０６　　　　　　　
　　　　６．１８　　　　　　　　　　　０．０８　　
　　　　　０．２／０．１５　　　　　　　　　　　５
．９７　　　　　　　　　　　０．２９　　　　　　　
　　　　＋／７０．６　　　　　　　０．２／０．３７
５　　　　　　　　　　５．２６　　　　　　　　　　
　１．００　　　　　　　　　　　＋／４８８　　　　
　　　ｐＨ　４．５ 　　　　　　　０／０　　　　　　　　　　　　　　　
　６．０４　　　　　　　　　　　−−　　　　　　　
０／０．００９６　　　　　　　　　　　６．１５　　
　　　　　　　　−０．１１　　　　　　　０／０．０
２４　　　　　　　　　　　　６．２３　　　　　　　
　　　−０．１９　　　　　　　０／０．０６　　　　
　　　　　　　　　６．３４　　　　　　　　　　−０
．３０　　　　　　　０／０．１５　　　　　　　　　
　　　　６．３８　　　　　　　　　　−０．３４　　
　　　　　０／０．３７５　　　　　　　　　　　　６
．０４　　　　　　　　　　　０．００　　　　　　　
０．２／０　　　　　　　　　　　　　　５．９７　　
　　　　　　　　　０．０７　　　　　　　０．２／０
．００９６　　　　　　　　　６．０４　　　　　　　
　　　　０．００　　　　　　　０．２／０．０２４　
　　　　　　　　　６．００　　　　　　　　　　　０
．０４　　　　　　　０．２／０．０６　　　　　　　
　　　　６．１１　　　　　　　　　　−０．０７　　
　　　　　０．２／０．１５　　　　　　　　　　　６
．０８　　　　　　　　　　−０．０４　　　　　　　
０．２／０．３７５　　　　　　　　　　６．０４　　
　　　　　　　　　０．００　　　　　　　ｐＨ　５．
５ 　　　　　　　０／０　　　　　　　　　　　　　　　
　６．２６　　　　　　　　　　　−−　　　　　　　
０／０．００９６　　　　　　　　　　　６．３８　　
　　　　　　　　−０．１２　　　　　　　０／０．０
２４　　　　　　　　　　　　６．３２　　　　　　　
　　　−０．０６　　　　　　　０／０．０６　　　　
　　　　　　　　　６．３２　　　　　　　　　　−０
．０６　　　　　　　０／０．１５　　　　　　　　　
　　　　６．４０　　　　　　　　　　−０．１４　　
　　　　　０／０．３７５　　　　　　　　　　　　６
．４１　　　　　　　　　　−０．１５　　　　　　　
０．２／０　　　　　　　　　　　　　　６．２６　　
　　　　　　　　　０．００　　　　　　　０．２／０
．００９６　　　　　　　　　６．１８　　　　　　　
　　　　０．０８　　　　　　　０．２／０．０２４　
　　　　　　　　　６．２０　　　　　　　　　　　０
．０６　　　　　　　０．２／０．０６　　　　　　　
　　　　６．２８　　　　　　　　　　−０．０２　　
　　　　　０．２／０．１５　　　　　　　　　　　６
．３４　　　　　　　　　　−０．０８　　　　　　　
０．２／０．３７５　　　　　　　　　　６．２６　　
　　　　　　　　　０．００

【００２６】

【表３】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　表　　２ニシンのグリシンとの組合せに
おいてのＬ．モノサイトゲネスに対する活性　　　　　
　　　　　処置 　　ニシンＵ／ｍｌ／グリシンｍＭ　　　　ｌｏｇ１０
ＣＦＵ／ｍｌ　　　　ｌｏｇ１０減少　　　　相乗作用
／以上％　　　　　　　　ｐＨ　３．５ 　　　　　　　　０／０　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　４．３０　　　　　　　　　　−−　　　　
　　　　０／６．４　　　　　　　　　　　　　　　　
　４．３４　　　　　　　　　−０．０４　　　　　　
　　０／１６　　　　　　　　　　　　　　　　　　４
．６２　　　　　　　　　−０．３２　　　　　　　　
０／４０　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．９
９　　　　　　　　　−０．６９　　　　　　　　０／
１００　　　　　　　　　　　　　　　　　４．７５　
　　　　　　　　−０．４５　　　　　　　　０／２５
０　　　　　　　　　　　　　　　　　４．７４　　　
　　　　　　−０．４４　　　　　　　　０．２／０　
　　　　　　　　　　　　　　　　２．４８　　　　　
　　　　　１．８２　　　　　　　　０．２／６．４　
　　　　　　　　　　　　　　２．６２　　　　　　　
　　　１．６８　　　　　　　　０．２／１６　　　　
　　　　　　　　　　　　２．９６　　　　　　　　　
　１．３４　　　　　　　　０．２／４０　　　　　　
　　　　　　　　　　４．８０　　　　　　　　　−０
．５０　　　　　　　　０．２／１００　　　　　　　
　　　　　　　　４．８３　　　　　　　　　−０．５
３　　　　　　　　０．２／２５０　　　　　　　　　
　　　　　　４．７９　　　　　　　　　−０．４９　
　　　　　　　ｐＨ４．５ 　　　　　　　　０／０　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　５．３４　　　　　　　　　　−−　　　　
　　　　０／６．４　　　　　　　　　　　　　　　　
　５．１８　　　　　　　　　　０．１６　　　　　　
　　０／１６　　　　　　　　　　　　　　　　　　５
．２３　　　　　　　　　　０．１１　　　　　　　　
０／４０　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．１
８　　　　　　　　　　０．１６　　　　　　　　０／
１００　　　　　　　　　　　　　　　　　５．１１　
　　　　　　　　　０．２３　　　　　　　　０／２５
０　　　　　　　　　　　　　　　　　３．６２　　　
　　　　　　　１．７２　　　　　　　　０．２／０　
　　　　　　　　　　　　　　　　４．３８　　　　　
　　　　　０．９６　　　　　　　　０．２／６．４　
　　　　　　　　　　　　　　４．２８　　　　　　　
　　　１．０６　　　　　　　　０．２／１６　　　　
　　　　　　　　　　　　４．１１　　　　　　　　　
　１．２３　　　　　　　　　　　＋／１５．０　　　
　　　　　０．２／４０　　　　　　　　　　　　　　
　　４．００　　　　　　　　　　１．３４　　　　　
　　　　　　＋／１９．６　　　　　　　　０．２／１
００　　　　　　　　　　　　　　　３．８９　　　　
　　　　　　１．４５　　　　　　　　　　　＋／２１
．８　　　　　　　　０．２／２５０　　　　　　　　
　　　　　　　２．８８　　　　　　　　　　２．４６
　　　　　　　　　ｐＨ５．５ 　　　　　　　　０／０　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　５．７２　　　　　　　　　　−−　　　　
　　　　０／６．４　　　　　　　　　　　　　　　　
　５．４８　　　　　　　　　　０．２４　　　　　　
　　０／１６　　　　　　　　　　　　　　　　　　５
．４６　　　　　　　　　　０．２６　　　　　　　　
０／４０　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．４
６　　　　　　　　　　０．２６　　　　　　　　０／
１００　　　　　　　　　　　　　　　　　５．４９　
　　　　　　　　　０．２３　　　　　　　　０／２５
０　　　　　　　　　　　　　　　　　５．４１　　　
　　　　　　　０．３１　　　　　　　　０．２／０　
　　　　　　　　　　　　　　　　５．３８　　　　　
　　　　　０．３４　　　　　　　　０．２／６．４　
　　　　　　　　　　　　　　５．２８　　　　　　　
　　　０．４４　　　　　　　　０．２／１６　　　　
　　　　　　　　　　　　５．４１　　　　　　　　　
　０．３１　　　　　　　　０．２／４０　　　　　　
　　　　　　　　　　５．００　　　　　　　　　　０
．７２　　　　　　　　　　　＋／２０　　　　　　　
　０．２／１００　　　　　　　　　　　　　　　５．
１５　　　　　　　　　　０．５７　　　　　　　　０
．２／２５０　　　　　　　　　　　　　　　４．９２
　　　　　　　　　　０．８０　　　　　　　　　　　
＋／２３ 　　表１及び２は相乗作用の決定に対して用いたデータ
種の例を示す。各の場合、いくつかの条件下において、
ニシンと相乗作用剤を組合せるとバクテリア数の減少（
ｌｏｇ１０減少）がニシン単独及び相乗作用剤単独の効
果の合計をかなり越えた。本質的にイオン性であるグリ
シンのような相乗作用剤を用いれば、時に非常に高濃度
で妨害作用があるように見える。これはニシンのイオン
強度の妨害のためであり、すべてのイオン性化合物を高
濃度で用いた時に起こる。

【００２７】実施例ＩＩ ニシン／有機酸 ニシン−有機酸の相乗作用を最初に拡散プレート分析（
ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ　ｐｌａｔｅ　ａｓｓａｙ）で示す
。この分析は、ミクロコックス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏ
ｃｏｃｃｕｓ　ｌｕｔｅｕｓ）を指示体微生物として用
いるフォウラー（Ｆｏｗｌｅｒ）ら、応用バクテリア学
協会（Ｓｏｃｉｅｔｙ　ｆｏｒ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）のテクニカルシリーズ、８号（
１９７５）に記述された方法で行った。ニシン又はニシ
ン＋相乗作用剤をプレートのウェル中で使用し、得られ
るゾーン（ｚｏｎｅ）の直径を測定した。抗微生物活性
は、ニシン／有機酸混合物を用いた場合及び対照物（ニ
シンだけを含有）をウェルに添加した場合の両方におい
て、ウェルの周囲の生長禁止ゾーンの直径に関係する。 この生長禁止ゾーンの直径を対照物及びニシン／有機酸
を含むウェルの双方に対して測定し、２回反復試験した
。これらの測定から、有効ニシン単位／ｍｌを次の如く
計算した：ニシン＋有機酸相乗作用剤を用いるゾーンの
直径を計算し、ニシン標準曲線に比較した。同等の寸法
のゾーンを与えるニシン単独の量を決定し、この値を「
有効ニシン単位／ｍｌ」として報告した。試験相乗作用
剤のいずれもが測定しうる寸法のゾーンだけを生じさせ
ないから、ゾーンの寸法の増加はいずれもが相乗作用効
果を表わす。相乗作用の程度は「有効ニシン単位」と関
係する。この実験の結果を表３Ａに要約する。

【００２８】

【表４】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　表　３　Ａ　　　　　　　試料　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　ゾーンの直径　　　　
　　有効ニシン単位／ｍｌ　　　　１０　Ｕ／ニシンｍ
ｌ　　　　　　　　　　　　　対照例／試料　　　　　
　　　　　１０　Ｕ／ｍｌ　　　　１０　Ｕ／ニシンｍ
ｌ　　 　　　　　＋　１％クエン酸　　　　　　　　　　　　
　　　１．６３／２．０５　　　　　　　　　　　１８
．１　Ｕ／ｍｌ　　　　　＋　１％乳酸　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　１．６３／１．８８　　　　
　　　　　　　１４．２　Ｕ／ｍｌ　　　　　＋　１％
アスコルビン酸　　　　　　　　　１．６３／１．８９
　　　　　　　　　　　１４．４　Ｕ／ｍｌ　　　　　
＋　１％イソアスコルビン酸　　　　　１．６３／１．
７９　　　　　　　　　　　１２．５　Ｕ／ｍｌ 　　ニシン−有機酸の相乗作用は、リステリア・モノサ
イトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ　ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅ
ｎｅｓ）を用いても決定できた。分析媒体は１％ディフ
コ（Ｄｉｆｃｏ）寒天を含有する脳心臓環流媒体であっ
た。この媒体をｐＨ６．０に調節し、１％のツウィーン
（Ｔｗｅｅｎ）２０を溶解した時に溶融した。これは拡
散プレート媒体の一部であり、記録する実験の各に存在
した。Ｌ．モノサイトゲネスを約２×１０５細胞／ｍｌ
を添加した（各寒天２００ｍｌに細胞１０７／ｍｌを４
ｍｌ）。この接種した媒体を２４３×２４３×１８ｍｍ
の培養プレート中に注ぎ、冷却し、この時７ｍｍの円形
の孔を寒天中に切りとり、円形のウェルを準備した。溶
液を使用前にＮａＯＨ又はＨＣｌでｐＨ６．０に調節し
、ウェルに添加し、そして終夜保温した。種々の有機酸
（そのナトリウム塩形）をニシン１０，０００Ｕ／ｍｌ
と組合せて試験した。この実験の結果を表３Ｂに示す。 表３Ｂを参照すると、２％の乳酸は１５，０００単位／
ｍｌのニシンに等しいゾーンを生ずることにより１０，
０００Ｕ／ｍｌのニシンの効果を５０％向上させ、一方
２％プロピオン酸は１０，０００単位／ｍｌのニシンの
有効活性を２１倍（ニシン単独での２１２，０００Ｕ／
ｍｌに匹敵するゾーンの寸法）に向上させた。

【００２９】

【表５】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　表　３　Ｂ　　　　　　　　　　試料
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ゾーン直径
　　　　　　有効ニシン単位／ｍｌ　　　　１０，００
０　Ｕ／ｍｌニシン　　　　　　　　　　　　対照例／
試料　　　　　　　　　　１０，０００　　　　１０，
０００　Ｕ／ｍｌニシン　　　　　　　　＋　２％クエ
ン酸　　　　　　　　　　　　　　　　２．０１／２．
２０　　　　　　　　　　　　２６，３００　　　　　
　＋　２％乳酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　２．０１／２．１１　　　　　　　　　　　　１５
，０００　　　　　　＋　２％プロピオン酸　　　　　
　　　　　　　２．１７／２．７８　　　　　　　　　
　　２１２，０００　　　　　　＋　２％酢酸　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　２．１７／２．４０
　　　　　　　　　　　　２７，３００　　　　　　＋
　２％リンゴ酸　　　　　　　　　　　　　　　　２．
１７／２．３５　　　　　　　　　　　　２０，８００
　　　　　　＋　２％酒石酸　　　　　　　　　　　　
　　　　　　２．１７／２．３８　　　　　　　　　　
　　２４，５００　　　　　　＋　２％コハク酸　　　
　　　　　　　　　　　　　２．１７／２．３６　　　
　　　　　　　　　２２，０００　　　　　　＋　２％
マレイン酸　　　　　　　　　　　　　　２．０９／２
．２０　　　　　　　　　　　　１６，４００　　　　
　　＋　２％シュウ酸　　　　　　　　　　　　　　　
　２．０９／２．２１　　　　　　　　　　　　１７，
４００　　　　　　＋　２％フマル酸　　　　　　　　
　　　　　　　　２．０９／２．３０　　　　　　　　
　　　　２９，５００ 　　表３から、有機酸のすべてがある程度までニシンと
相乗作用を示すことが決定できる。乳酸、マレイン酸及
びシュウ酸は２倍よりも少ない見かけのニシン１０，０
００単位／ｍｌの活性を与え、一方プロピオン酸を除く
すべての残りの酸は２〜３倍の見かけの活性の向上を示
した。プロピオン酸は、２１倍以上の活性の向上を与え
ることが観察されたから異常な程活性があった。この傾
向はより長い鎖長のモノカルボン酸を用いても続くもの
と予想されよう。従って炭素数３〜約８のモノカルボン
酸例えばプロピオン酸、酪酸、ペンタン酸、ヘキサン酸
、ヘプタン酸及びオクタン酸はニシンのようなランチバ
イオチクスの相乗作用剤として用いるのに好適な有機酸
である。

【００３０】実施例ＩＩＩ 選択した食品ゴムをニシンと組合せて、得られる組合せ
物のＬ．モノサイトゲネスに対する相乗作用活性を決定
した。相乗作用を示す食品ゴムはグアゴム、アルギン及
びプロピレングリコールアルギネートの市販の調製物で
あった。ニシンをそれ自体１０００　ＩＵ／ｍｌ及び１
００　ＩＵ／ｍｌの両方で且つ食品ゴムと組合せて評価
した。

【００３１】食品ゴムをｐＨ６．０のクエン酸塩緩衝液
２５ｍｌに０．１２５（ｖ／ｖ）％で添加し、使用前に
オートクレーブで処理した。ニシン原料溶液をクエン酸
塩緩衝液中で準備し、濾過殺菌した。処理溶液をクエン
酸塩緩衝液で調製した。これはニシン１０００又は１０
０　ＩＵ／ｍｌと組合せて食品ゴム０．１％を含有した
。 対照物はニシンだけ、食品ゴムだけ又は緩衝液だけを含
有するように調製した。Ｌ．モノサイトゲネスを各試験
試料に約５×１０６ＣＦＵ／ｍｌで添加した。処置時間
はニシン１０００　ＩＵ／ｍｌの場合に３０分間、そし
てニシン１００　ＩＵ／ｍｌの場合に１５分間であった
。生存数を脳心臓環流寒天プレート上で３回反復して数
え、そして３５℃で２４時間培養した。ニシン／食品ゴ
ムのｌｏｇ減少が食品ゴム及びニシン対照物のｌｏｇ減
少の合計より大きい場合に相乗作用が顕著であった。

【００３２】これらの実験中に得られたデータを表４に
示す。

【００３３】

【表６】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　表　　４　　　　試行１（ニシン１０
００　ＩＵ／ｍｌ、３０分間）　　　　試料　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　ｌｏｇ１０ＣＦＵ／ｍ
ｌ　　　　対照からのｌｏｇ１０減少　　　　対照例　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．５３
　　　　　　　　　　　　　　　−−　　　　ニシン対
照例　　　　　　　　　　　　　　　　６．４１　　　
　　　　　　　　　　　　０．１２　　　　プロピレン
グリコール 　　　　　　アルギネート（ＰＧＡ）　　　　　　　６
．５８　　　　　　　　　　　　　　−０．０５　　　
　ＰＧＡ＋ニシン　　　　　　　　　　　　　　４．９
７　　　　　　　　　　　　　　　１．５６　　　　グ
アゴム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．
４８　　　　　　　　　　　　　　　０．０５　　　　
グアゴム＋ニシン　　　　　　　　　　　　４．７５　
　　　　　　　　　　　　　　１．７８　　　　アルギ
ン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．１１
　　　　　　　　　　　　　　　０．４２　　　　アル
ギン＋ニシン　　　　　　　　　　　　５．１１　　　
　　　　　　　　　　　　１．４２　　　　試行２（ニ
シン１０００　ＩＵ／ｍｌ、１５分間）　　　　試料　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｌｏｇ１０Ｃ
ＦＵ／ｍｌ　　　　対照からのｌｏｇ１０減少　　　　
対照例　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
６．２８　　　　　　　　　　　　　　　−−　　　　
ニシン対照例　　　　　　　　　　　　　　　　６．１
０　　　　　　　　　　　　　　　０．１８　　　　プ
ロピレングリコール 　　　　　　アルギネート（ＰＧＡ）　　　　　　　６
．３６　　　　　　　　　　　　　　−０．０８　　　
　ＰＧＡ＋ニシン　　　　　　　　　　　　　　５．５
３　　　　　　　　　　　　　　　０．７５　　　　グ
アゴム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．
３０　　　　　　　　　　　　　　−０．０２　　　　
グアゴム＋ニシン　　　　　　　　　　　　５．３０　
　　　　　　　　　　　　　　０．９８　　　　アルギ
ン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．２６
　　　　　　　　　　　　　　　０．０２　　　　アル
ギン＋ニシン　　　　　　　　　　　　５．４３　　　
　　　　　　　　　　　　０．８５ 　　表４のデータから、多くの場合に試験した食品ゴム
がそれ自体殆んど又は全然抗微生物活性を示さないとい
うことが示される。しかしながら、すべてが水溶性の炭
水化物重合体又はその誘導体として特徴づけられる食品
ゴムをニシンと組合せた場合、ニシンと食品ゴムの組合
せの効果がニシン及び食品ゴム単独の効果の合計よりか
なり大きかった。

【００３４】実施例ＩＶ 安息香酸のニシンとの相乗作用を、本質的に実施例１に
記述した如き実験法を用いて決定した。この実験の結果
を表５に要約する。ニシンとの相乗作用はｐＨ３．５及
び４．５で観察され、一方その効果はｐＨ５．５で相加
より小さかった。

【００３５】

【表７】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　表　　５ニシンの安息香酸ナトリウム
との組合せにおいてのＬ．モノサイトゲネスに対する活
性、選択したｐＨの１０ｍＭクエン酸塩緩衝液中　　　
　　　　　　　処置 　ニシンＵ／ｍｌ／安息香酸Ｎａ％　　　　ｌｏｇ１０
ＣＦＵ／ｍｌ　　　　ｌｏｇ１０減少　　　　相乗作用
／以上％　　　　　　　ｐＨ　３．５ 　　　　　　　０／０　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　５．９８　　　　　　　　　　−−　　　　
　　　０／０．００２５６　　　　　　　　　　　　　
　５．９１　　　　　　　　　　０．０７　　　　　　
　０／０．００６４　　　　　　　　　　　　　　　５
．９６　　　　　　　　　　０．２９　　　　　　　０
／０．０１６　　　　　　　　　　　　　　　　５．９
１　　　　　　　　　　０．０７　　　　　　　０／０
．０４　　　　　　　　　　　　　　　　　１．７０　
　　　　　　　　　４．２８　　　　　　　０／０．１
　　　　　　　　　　　　　　　　　＜２．００　　　
　　　　　　＞３．９８　　　　　　　０．２／０　　
　　　　　　　　　　　　　　　　５．４６　　　　　
　　　　　０．５２　　　　　　　０．２／０．００２
５６　　　　　　　　　　　　５．３８　　　　　　　
　　　０．６０　　　　　　　　　　＋／１．６９　　
　　　　　０．２／０．００６４　　　　　　　　　　
　　　５．３２　　　　　　　　　　０．６６　　　　
　　　０．２／０．０１６　　　　　　　　　　　　　
　５．４６　　　　　　　　　　０．５２　　　　　　
　０．２／０．０４　　　　　　　　　　　　　　　５
．１０　　　　　　　　　　０．８８　　　　　　　０
．２／０．１　　　　　　　　　　　　　　　　２．０
６　　　　　　　　　　３．９２　　　　　　　ｐＨ４
．５ 　　　　　　　０／０　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　５．９２　　　　　　　　　　−−　　　　
　　　０／０．００２５６　　　　　　　　　　　　　
　５．９５　　　　　　　　　−０．０３　　　　　　
　０／０．００６４　　　　　　　　　　　　　　　６
．０２　　　　　　　　　−０．１０　　　　　　　０
／０．０１６　　　　　　　　　　　　　　　　５．９
０　　　　　　　　　　０．０２　　　　　　　０／０
．０４　　　　　　　　　　　　　　　　　５．３８　
　　　　　　　　　０．５４　　　　　　　０／０．１
　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．２０　　　
　　　　　　　０．７２　　　　　　　０．２／０　　
　　　　　　　　　　　　　　　　５．８４　　　　　
　　　　　０．０８　　　　　　　０．２／０．００２
５６　　　　　　　　　　　　５．８９　　　　　　　
　　　０．０３　　　　　　　０．２／０．００６４　
　　　　　　　　　　　　５．７１　　　　　　　　　
　０．２１　　　　　　　０．２／０．０１６　　　　
　　　　　　　　　　５．８０　　　　　　　　　　０
．１２　　　　　　　　　　＋／２０　　　　　　　０
．２／０．０４　　　　　　　　　　　　　　　５．１
８　　　　　　　　　　０．７４　　　　　　　　　　
＋／１９．４　　　　　　　０．２／０．１　　　　　
　　　　　　　　　　　０．７０　　　　　　　　　　
５．２２　　　　　　　　　　＋／５５２　　　　　　
　ｐＨ５．５ 　　　　　　　０／０　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　６．９４　　　　　　　　　　−−　　　　
　　　０／０．００２５６　　　　　　　　　　　　　
　６．６３　　　　　　　　　　０．３１　　　　　　
　０／０．００６４　　　　　　　　　　　　　　　６
．３３　　　　　　　　　　０．６１　　　　　　　０
／０．０１６　　　　　　　　　　　　　　　　６．３
４　　　　　　　　　　０．６０　　　　　　　０／０
．０４　　　　　　　　　　　　　　　　　６．２４　
　　　　　　　　　０．７０　　　　　　　０／０．１
　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．２４　　　
　　　　　　　０．７０　　　　　　　０．２／０　　
　　　　　　　　　　　　　　　　６．１７　　　　　
　　　　　０．７７　　　　　　　０．２／０．００２
５６　　　　　　　　　　　　６．１５　　　　　　　
　　　０．７９　　　　　　　０．２／０．００６４　
　　　　　　　　　　　　６．０６　　　　　　　　　
　０．８８　　　　　　　０．２／０．０１６　　　　
　　　　　　　　　　６．０７　　　　　　　　　　０
．８７　　　　　　　０．２／０．０４　　　　　　　
　　　　　　　　６．０７　　　　　　　　　　０．８
７　　　　　　　０．２／０．１　　　　　　　　　　
　　　　　　６．３２　　　　　　　　　　０．６２ 　　表５から、適当な条件下において、ニシンと安息香
酸間の相乗作用活性が種々のｐＨ条件で観察されること
がわかる。ｐＨ５．５で相乗作用応答が観察できなかっ
たのは多分解離してない形が活性な抗微生物形であるの
で、安息香酸の解離してない形が低濃度であったためで
ある。

【００３６】同様にｐ−ヒドロキシ安息香酸のメチルエ
ステル（メチルパラベン）を、ニシンとの組合せにおい
てＬ．モノサイトゲネスに対する抗微生物作用に対して
試験した。この実験は実施例Ｉに概述した方法に従って
行った。

【００３７】この実験の結果を表６に示す。

【００３８】

【表８】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　表　　６ニシンのメチルパラベンとの
組合せにおいてのＬ．モノサイトゲネスに対する活性、
選択したｐＨの１０ｍＭクエン酸塩緩衝液中　　　　　
　　　　　処置 　　ニシンＵ／ｍｌ／メチルパラベン％　　　ｌｏｇ１
０ＣＦＵ／ｍｌ　　　ｌｏｇ１０減少　　　相乗作用／
以上％　　　　　　　　ｐＨ　３．５ 　　　　　　　　０／０　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　６．０６　　　　　　　　　　−−
　　　　　　　　０／０．００２５６　　　　　　　　
　　　　　　　　　５．６９　　　　　　　　　　０．
３７　　　　　　　　０／０．００６４　　　　　　　
　　　　　　　　　　　６．１１　　　　　　　　　−
０．０６　　　　　　　　０／０．０１６　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　５．４２　　　　　　　　
　　０．６４　　　　　　　　０／０．０４　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　５．３５　　　　　　
　　　　０．７１　　　　　　　　０／０．１　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　３．９４　　　　
　　　　　　２．１２　　　　　　　　０．２／０　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．１２　　
　　　　　　　　０．９３　　　　　　　　０．２／０
．００２５６　　　　　　　　　　　　　　　５．１９
　　　　　　　　　　０．８６　　　　　　　　０．２
／０．００６４　　　　　　　　　　　　　　　　５．
２２　　　　　　　　　　０．８３　　　　　　　　０
．２／０．０１６　　　　　　　　　　　　　　　　　
５．０１　　　　　　　　　　１．０５　　　　　　　
　０．２／０．０４　　　　　　　　　　　　　　　　
　　４．９４　　　　　　　　　　１．１２　　　　　
　　　０．２／０．１　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　３．０４　　　　　　　　　　３．０１　　　
　　　　　ｐＨ４．５ 　　　　　　　　０／０　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　６．０６　　　　　　　　　　−−
　　　　　　　　０／０．００２５６　　　　　　　　
　　　　　　　　　６．１６　　　　　　　　　−０．
１０　　　　　　　　０／０．００６４　　　　　　　
　　　　　　　　　　　６．１４　　　　　　　　　−
０．０８　　　　　　　　０／０．０１６　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　６．２０　　　　　　　　
　−０．１４　　　　　　　　０／０．０４　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　６．１４　　　　　　
　　　−０．０８　　　　　　　　０／０．１　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　６．０３　　　　
　　　　　　０．０３　　　　　　　　０．２／０　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．９５　　
　　　　　　　　０．１１　　　　　　　　０．２／０
．００２５６　　　　　　　　　　　　　　　５．９２
　　　　　　　　　　０．１４　　　　　　　　　＋／
２７．３　　　　　　　　０．２／０．００６４　　　
　　　　　　　　　　　　　６．００　　　　　　　　
　　０．０６　　　　　　　　０．２／０．０１６　　
　　　　　　　　　　　　　　　６．１８　　　　　　
　　　−０．１２　　　　　　　　０．２／０．０４　
　　　　　　　　　　　　　　　　　６．２８　　　　
　　　　　−０．２２　　　　　　　　０．２／０．１
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．８４　　
　　　　　　　　０．２２　　　　　　　　　＋／５７
．１　　　　　　　　ｐＨ５．５ 　　　　　　　　０／０　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　６．３７　　　　　　　　　　−−
　　　　　　　　０／０．００２５６　　　　　　　　
　　　　　　　　　６．２７　　　　　　　　　　０．
１０　　　　　　　　０／０．００６４　　　　　　　
　　　　　　　　　　　６．３７　　　　　　　　　　
０．００　　　　　　　　０／０．０１６　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　６．６５　　　　　　　　
　−０．２８　　　　　　　　０／０．０４　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　６．２８　　　　　　
　　　　０．０９　　　　　　　　０／０．１　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　６．５０　　　　
　　　　　−０．１３　　　　　　　　０．２／０　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．１６　　
　　　　　　　　０．２１　　　　　　　　０．２／０
．００２５６　　　　　　　　　　　　　　　６．２８
　　　　　　　　　　０．０９　　　　　　　　０．２
／０．００６４　　　　　　　　　　　　　　　　６．
２７　　　　　　　　　　０．１０　　　　　　　　０
．２／０．０１６　　　　　　　　　　　　　　　　　
６．２２　　　　　　　　　　０．１５　　　　　　　
　０．２／０．０４　　　　　　　　　　　　　　　　
　　６．０５　　　　　　　　　　０．３２　　　　　
　　　　＋／６．７　　　　　　　　０．２／０．１　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．２４　　　
　　　　　　　１．１３　　　　　　　　　＋／４３８ 　　この実験では各ｐＨ値において相乗作用が観察され
た。早期の実験において、相乗作用はｐＨ４．５及び５
．５で観察されたが、３．５で観察されなかった。ｐＨ
３．５で相乗作用が観察されなかったのは、ｐＨ３．５
での相乗作用の大きさが比較的小さいから、多分通常の
実験のバラツキに入ってしまったためである。

【００３９】特別な相乗作用剤が有効であるｐＨ範囲は
考慮する環境に依存する。斯くして特別な相乗作用剤が
緩衝剤系の特別なｐＨにおいて活性を示すけれど、異な
るｐＨ範囲がある食品系において最適なことがある。こ
の理由のために、ランチバイオチック／相乗作用剤系を
処置する特別な環境で用いる場合には、ある量の日常的
実験が最適なｐＨ範囲を決定するのに必要であろう。

【００４０】本発明の特徴及び態様は以下の通りである
： １．グラム陽性バクテリアの、生育が望ましくない環境
でその生長を禁止する際に、ランチオニン・バクテリオ
シン及びこれに対する相乗作用剤の相乗的に有効な組合
せ物を該環境に施用することを含んでなる、但し該相乗
作用剤がアミノ酸、炭素数１〜８の脂肪族モノ及びジカ
ルボン酸或いはその適当なアルカリ金属又はアルカリ土
類金属塩、フェノール系抗酸化剤抗微生物剤、安息香酸
或いはその適当なアルカリ金属又はアルカリ土類金属塩
、及びカルボキシレート又は改変カルボキシレート食品
ゴムの群から選択される、該バクテリアの生長を禁止す
る方法。

【００４１】２．アミノ酸がグリシン、ロイシン、リシ
ン又はアスパラギン酸であり、有機酸が乳酸、プロピオ
ン酸、アスコルビン酸、イソアスコルビン酸、酢酸、リ
ンゴ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、シュウ酸、又
はフマル酸であり、フェノール系抗酸化剤抗微生物剤が
ｔｅｒｔ−ブチルヒドロキシアニソール、ｐ−ヒドロキ
シ安息香酸の炭素数１〜７の脂肪族エステル、ｔｅｒｔ
−ブチルハイドロキノン又はブチル化ヒドロキシトルエ
ンであり、安息香酸の塩が安息香酸ナトリウムであり、
そして食品ゴムがアルギネート、グアゴム、アラビアゴ
ム、キサンタンゴム、キトサン、メチルセルロース、プ
ロピレングリコールアルギネート及びカルボキシメチル
セルロースである上記１の方法。

【００４２】３．ランチオニンがニシン、スブチリン、
ペプ５、エピデルミン、ガリデルミン、シンナマイシン
、ロ０９−０１９８、デュラマイシン及びアンコベニン
である上記１の方法。

【００４３】４．アミノ酸がリシン又はアスパラギン酸
である上記２の方法。

【００４４】５．フェノール系抗酸化剤抗微生物剤がｐ
−ヒドロキシ安息香酸のメチルエステルである上記２の
方法。

【００４５】６．食品ゴムがプロピレングリコールアル
ギネート、グアゴム又はアルギン酸ナトリウムである上
記２の方法。

【００４６】７．有機酸がプロピオン酸である上記１の
方法。

【００４７】８．バクテリアがリステリア・モノサイト
ゲネス種由来である上記１の方法。 ９．ランチオニン・バクテリオシンを処置する環境の０
．１〜２０００　ＩＵ／ｇの量で導入し、そして相乗作
用剤の量が環境の重量％に関して ａ）アミノ酸０．００１〜５％、 ｂ）脂肪族モノ及びジカルボン酸０．００１〜２５％、
ｃ）フエノール系抗酸化剤抗微生物剤０．０００１〜２
％、 ｄ）安息香酸、その塩及びエステル０．００１〜２％、
及び ｅ）食品ゴム０．００１〜５０％、 である上記１の方法。

【００４８】１０．ランチオニン・バクテリオシンを５
０〜５００　ＩＵ／ｇの量で導入し、そして相乗作用剤
が保護すべき環境の重量％に関して、 ａ）アミノ酸０．０３〜０．１％、 ｂ）脂肪族モノ及びジカルボン酸０．０１〜１％、ｃ）
フェノール系抗酸化剤抗微生物剤０．００５〜０．０２
％、 ｄ）安息香酸、その塩及びエステル０．０３〜０．１％
、及び ｅ）食品ゴム０．０２〜２．５％、 である上記９の方法。

【００４９】１１．リステリア・モノサイトゲネスの生
長が望ましくない環境においてその生長を禁止する際に
、ニシン及びこれに対する相乗作用剤の相乗的に有効な
組合せ物を該環境に施用することを含んでなる、但し該
相乗作用剤がアミノ酸、炭素数１〜８の脂肪族モノ及び
ジカルボン酸或いはその適当なアルカリ金属又はアルカ
リ土類金属塩、フェノール系抗酸化剤抗微生物剤、安息
香酸或いはその適当なアルカリ金属又はアルカリ土類金
属塩、及びカルボキシレート又は改変カルボキシレート
食品ゴムの群から選択される、該バクテリアの生長を禁
止する方法。

【００５０】１２．アミノ酸がグリシン又はアスパラギ
ン酸である上記１１の方法。

【００５１】１３．ニシンを処置する環境の０．１〜２
０００　ＩＵ／ｇの量で導入し、そしてアミノ酸を０．
００１〜５重量％の量で導入する上記１１の方法。

【００５２】１４．ニシンを５０〜５００　ＩＵ／ｇの
量で導入し、そしてアミノ酸が０．０３〜０．１重量％
の量である上記１３の方法。

【００５３】１５．脂肪族モノ又はジ−カルボン酸が乳
酸、プロピオン酸、酢酸、リンゴ酸、酒石酸、コハク酸
、マレイン酸、シュウ酸又はフマル酸である上記１０の
方法。

【００５４】１６．ニシンを処置する環境の０．１〜２
０００　ＩＵ／ｇの量で導入し、そしてモノ又はジ−カ
ルボン酸を０．００１〜２５重量％の量で導入する上記
１５の方法。

【００５５】１７．ニシンを５０〜５００　ＩＵ／ｇの
量で導入し、そしてモノ及びジ−カルボン酸を０．０１
〜１重量％の量で導入する上記１６の方法。

【００５６】１８．安息香酸のアルカリ金属塩が安息香
酸ナトリウムである上記１０の方法。

【００５７】１９．ニシンを処置する環境の０．１〜２
０００　ＩＵ／ｇの量で導入し、そして安息香酸ナトリ
ウムを０．００１〜２重量％の量で導入する上記１８の
方法。

【００５８】２０．ニシンを５０〜５００　ＩＵ／ｇの
量で導入し、そして安息香酸ナトリウムを０．０３〜０
．１重量％の量で導入する上記１９の方法。

【００５９】２１．フェノール系抗酸化剤抗微生物剤が
ｐ−ヒドロキシ安息香酸の炭素数１〜７のエステル、ｔ
ｅｒｔ−ブチルハイドロキノン又はブチル化ヒドロキシ
トルエンである上記１０の方法。

【００６０】２２．ニシンを処置する環境の０．１〜２
０００　ＩＵ／ｇの量で導入し、そしてフェノール系抗
酸化剤抗微生物剤を０．００１〜２重量％の量で導入す
る上記２１の方法。

【００６１】２３．ニシンを５０〜５００　ＩＵ／ｇの
量で導入し、そしてフェノール系抗酸化剤抗微生物剤を
０．００５〜０．０２重量％の量で導入する上記２２の
方法。２４．フェノール系抗酸化剤抗微生物剤がヒドロ
キシ安息香酸のメチルエステルである上記２２の方法。

【００６２】２５．食品ゴムがアルギネート、グアゴム
、アラビヤゴム、キサンタンゴム、キトサン、メチルセ
ルロース、アルギン又はカルボキシメチルセルロースで
ある上記２０の方法。

【００６３】２６．ニシンを処置する環境の０．１〜２
０００　ＩＵ／ｇの量で導入し、そして食品ゴムを０．
００１〜５０重量％の量で導入する上記２５の方法。

【００６４】２７．ニシンを５０〜５００　ＩＵ／ｇの
量で導入し、そして食品ゴムを０．０２〜２．５重量％
の量で導入する上記２６の方法。

【００６５】２８．食品ゴムがプロピレングリコールア
ルギネート、グアゴム、又はアルギンである上記２７の
方法。

【００６６】２９．ランチオニン・バクテリオシン及び
これに対するアミノ酸、炭素数１〜８の脂肪族モノ及び
ジカルボン酸或いはその適当なアルカリ金属又はアルカ
リ土類金属塩、フェノール系抗酸化剤抗微生物剤、安息
香酸或いはその適当なアルカリ金属又はアルカリ土類金
属塩、及びカルボキシレート又は改変カルボキシレート
食品ゴムの群から選択される相乗作用剤の相乗作用的に
有効なグラム陽性バクテリア禁止組成物を含む消化しう
る物質を含んでなる人間又は他の動物による消化に適し
た固体又は液体製品。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　グラム陽性バクテリアの、生育が望ま
   しくない環境でその生長を禁止する際に、ランチオニン
   ・バクテリオシン及びこれに対する相乗作用剤の相乗的
   に有効な組合せ物を該環境に施用することを含んでなる
   、但し該相乗作用剤がアミノ酸、炭素数１〜８の脂肪族
   モノ及びジカルボン酸或いはその適当なアルカリ金属又
   はアルカリ土類金属塩、フェノール系抗酸化剤抗微生物
   剤、安息香酸或いはその適当なアルカリ金属又はアルカ
   リ土類金属塩、及びカルボキシレート又は改変カルボキ
   シレート食品ゴムの群から選択される、該バクテリアの
   生長を禁止する方法。
2. 【請求項２】　　リステリア・モノサイトゲネスの生長
   が望ましくない環境においてその生長を禁止する際に、
   ニシン及びこれに対する相乗作用剤の相乗的に有効な組
   合せ物を該環境に施用することを含んでなる、但し該相
   乗作用剤がアミノ酸、炭素数１〜８の脂肪族モノ及びジ
   カルボン酸或いはその適当なアルカリ金属又はアルカリ
   土類金属塩、フェノール系抗酸化剤抗微生物剤、安息香
   酸或いはその適当なアルカリ金属又はアルカリ土類金属
   塩、及びカルボキシレート又は改変カルボキシレート食
   品ゴムの群から選択される、該バクテリアの生長を禁止
   する方法。
3. 【請求項３】　　ランチオン・バクテリオシン及びこれ
   に対するアミノ酸、炭素数１〜８の脂肪族モノ及びジカ
   ルボン酸或いはその適当なアルカリ金属又はアルカリ土
   類金属塩、フェノール系抗酸化剤抗微生物剤、安息香酸
   或いはその適当なアルカリ金属又はアルカリ土類金属塩
   、及びカルボキシレート又は改変カルボキシレート食品
   ゴムの群から選択される相乗作用剤の相乗的に有効なグ
   ラム陽性バクテリア禁止組成物を含む消化しうる物質を
   含んでなる人間又は他の動物による消化に適した固体又
   は液体製品。